專利名稱：一種用于抗hbv病毒的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種用于抗HIV病毒的藥用組合物，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的死亡率較高的一種傳染性疾病。全 球大約有20億人感染過或者正在感染HBV，慢性乙型肝炎患者約有3. 5億人。據(jù)估計(jì)，我國 的慢性無癥狀HBV攜帶者可能超過1. 2億人。世界醫(yī)學(xué)工作者為乙肝的發(fā)病及防治進(jìn)行了 大量的研究。目前，抗HBV的藥物主要為干擾素一 a及核苷類似物，這些藥物對(duì)部分乙肝患 者有顯著效果，如果治療有的放矢，病例選擇得當(dāng)，藥物將發(fā)揮最大治療作用。由于每種抗 病毒藥物均有其副作用，因此，抗病毒藥物聯(lián)合應(yīng)用是治療慢性乙型肝炎的重要方向，可以 是一種免疫調(diào)節(jié)劑和一種核苷類似物的聯(lián)合，也可以是2 3種核苷類似物的聯(lián)合。但迄 今還無公認(rèn)的聯(lián)合療效較好的治療方案，需進(jìn)一步加強(qiáng)研究。近年來，核苷類似物(NA)是發(fā)展最快，品種不斷增加的抗乙型肝炎病毒(HBV)的 藥物。實(shí)驗(yàn)研究和臨床實(shí)踐均表明慢性乙型肝炎患者采用NA治療口服方便，能有效抑制 HBV復(fù)制，使肝功能恢復(fù)，肝組織學(xué)改善，防止或延緩慢性乙型肝炎進(jìn)展為肝硬化、肝功能失 代償、肝細(xì)胞癌。但長期應(yīng)用核苷類似物存在病毒變異和耐藥的問題，后者可能引發(fā)一系列 嚴(yán)重后果。所以預(yù)防耐藥的關(guān)鍵就是要合理應(yīng)用核苷類似物。泰立福韋是一種新型的無環(huán)核苷膦酸類化合物，口服后水解為泰諾福韋，泰諾福 韋被細(xì)胞激酶磷酸化，生成具有藥理活性的代謝產(chǎn)物泰諾福韋二磷酸，后者與5L三磷酸脫 氧腺苷酸競(jìng)爭(zhēng)，參與HIV病毒和HBV病毒DNA的合成，進(jìn)入病毒DNA后由于缺乏3-羥基而 導(dǎo)致DNA延長受阻。泰立福韋具有較強(qiáng)的抗HIV和抗HBV活性，而且細(xì)胞毒性較低，比泰諾 福韋具有更高的生物利用度高。經(jīng)過藥理學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)泰立福韋與其它另外一種或 多種類核苷(酸)抗病毒藥物合用時(shí)，能明顯的提高抗病毒的活性，且能顯著預(yù)防其耐藥性 的形成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物。它是由泰立福韋和另外一種或多種 類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料組合而成。所述的類核 苷(酸)抗病毒藥物包括拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。其中泰立 福韋的單位用量為30-1500mg，優(yōu)選300mg。拉米夫定的單位用量為10_500mg，優(yōu)選lOOmg。 阿德福韋酯的單位用量為l-100mg，優(yōu)選10mg。恩替卡韋的單位用量為50-2500mg，優(yōu)選 500mg。替比夫定的單位用量為60-3000mg，優(yōu)選600mg。恩曲他濱的單位用量為20_1000mg， 優(yōu)選200mg。所述的藥用組合物，可制成口服制劑，包括片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩 解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等，用于乙型病毒肝炎的治療。本發(fā)明通過以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說明本復(fù)方在用于抗乙肝病毒，尤其是對(duì)耐藥菌株 的作用新組方的藥效學(xué)試驗(yàn)細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所用細(xì)胞為YMDD變異HBV DNA轉(zhuǎn)染的HepG22. 2. 15細(xì)胞株。該細(xì)胞含有整合的YMDD變異HBV DNA，在培養(yǎng)過程中，能持續(xù)、穩(wěn)定 地向培養(yǎng)液中分泌HBsAg及HBV DNA。H印G22. 2. 15細(xì)胞在含10%的胎牛血清培養(yǎng)液中生 長到70%培養(yǎng)瓶面積(約3X106細(xì)胞，25cm2培養(yǎng)瓶)時(shí)，改用含2%的胎牛血清培養(yǎng)液， 并開始給予新組方治療(治療組1 (泰立福韋Z^gmr1—拉米夫定Sugmr1)、治療組2 (泰立 福韋ZAugmr1—替比夫定‘Sugmr1)、治療組3 (泰立福韋ZAugmr1—阿德福韋0. SugmF1)、治 療組4 (泰立福韋ZAugmr1—恩替卡韋^ugmr1)，治療組5 (泰立福韋ZAugmr1—恩曲他濱 leugmr1)，治療組6 (泰立福韋24ugmr1+恩曲他濱leugmr、替比夫定48ugmr1)，治療組 7 (泰立福韋ZAugmr1—恩替卡韋^ugmr1—拉米夫定Sugml—1)，治療組8 (泰立福韋？彳呢！^-、 恩替卡韋40ugml_1+阿德福韋0. SugmF1)，總培養(yǎng)液量5ml/25cm2)，并應(yīng)用相同的細(xì)胞不含 藥物同期培養(yǎng)作對(duì)照(對(duì)照組)，每2d換培養(yǎng)液一次。治療組補(bǔ)充新的相同濃度的新組方， 并治療10d。細(xì)胞上清液收集后，進(jìn)行HBV病毒學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。HBsAg的ELISA定量監(jiān)測(cè)應(yīng)用美國Abbott公司提供的試劑盒定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液 中HBsAg的量。HBVDNA定量檢測(cè)應(yīng)用美國Chiron公司提供的試劑盒，應(yīng)用分支鏈DNA法(bDNA)， 定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中HBV DNA含量。細(xì)胞生長及毒性監(jiān)測(cè)在治療期間及治療結(jié)束時(shí)，每日觀察細(xì)胞形態(tài)。在收集細(xì)胞 時(shí).先用胰蛋白酶處理，并用Trypan藍(lán)染色計(jì)數(shù)。細(xì)胞毒性應(yīng)用熒光分光光度法測(cè)定總細(xì) 胞DNA量來反映。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理定量檢測(cè)的HBsAg、HBV DNA結(jié)果，在對(duì)照組及治療組應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)新組方對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中HBsAg的抑制作用結(jié)果見表1。表1表明，在各 治療組，細(xì)胞培養(yǎng)液中的HBsAg，在治療的第2天起，開始下降，至治療結(jié)束時(shí)(第10天)， HBsAg明顯降低。而在對(duì)照組，Ifep G22. 2. 15細(xì)胞培養(yǎng)液中的HBsAg隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)展， 穩(wěn)定、持續(xù)地分泌，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，治療組與對(duì)照組從第六天開始，差異有顯著性(P < 005. n = 6)。表1對(duì)HBsAg抗原的抑制作用(ugml—1) 新組方對(duì)細(xì)胞外HBVDNA的抑制作用結(jié)果見表2。表2表明，在新組方治療第2天 起，細(xì)胞外HBVDNA即開始下降，在治療過程中及治療結(jié)束時(shí)，細(xì)胞外HBV DNA明顯下降。而 在對(duì)照組，細(xì)胞外HBV DNA,隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)展，持續(xù)、穩(wěn)定地分泌表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，從治療第4天起，差異有顯著性.而在治療結(jié)束時(shí)(第10天)，差異有高度顯著性(P<0.01， n = 6)。表2對(duì)HBV-DNA的抑制作用(Pgmr1) 2)新組方的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。在治療過程中，對(duì)照組及治療的細(xì)胞形態(tài)，每日用相差顯微鏡觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的 變化。治療完成時(shí)，應(yīng)用Trypan藍(lán)染色計(jì)數(shù)，兩組的細(xì)胞總數(shù)，二者之間差異無顯著性(P > 005, n = 6)應(yīng)用熒光分光光度法，測(cè)定細(xì)胞總DNA。在對(duì)照組及治療組之間，細(xì)胞總DNA 量，差異無顯著性(P > 0. 05, n = 6)。結(jié)果表明在新組方治療過程及治療完成時(shí)，與對(duì)照 組相比，新組方對(duì)H印G22. 2. 15細(xì)胞的形態(tài)、分裂與生長及細(xì)胞DNA的合成無明顯的影響， 在該實(shí)驗(yàn)藥物濃度下，新組方細(xì)胞毒性作用不明顯。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1復(fù)方泰立福韋拉米夫定片處方 制備方法將泰立福韋、拉米夫定分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；將微晶纖 維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。實(shí)施例2 復(fù)方泰立福韋拉米夫定膠囊劑
處方 制備方法將泰立福韋、拉米夫定、預(yù)膠化淀粉分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，加 入滑石粉，分裝，即得。實(shí)施例3 復(fù)方泰立福韋替比夫定咀嚼片劑處方 制備方法將泰立福韋等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；加入2% PVP-k30乙醇溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味劑、 助流劑混合均勻，壓片，即得。實(shí)施例4 復(fù)方泰立福韋阿德福韋酯分散片劑處方
6 制備方法將泰立福韋、阿德福韋酯等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備 用；加入75%乙醇溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味 劑、助流劑、崩解劑等混合均勻，壓片，即得。實(shí)施例5 復(fù)方泰立福韋恩替卡韋口腔崩解片處方 制備方法取以上各原輔料，均過100目篩，備用。取恩替卡韋，按照等量遞加法與微粉硅膠、 部分預(yù)膠化淀粉、泰立福韋混合均勻后，再加入等量其他輔料混合均勻，采用粉末直接壓片法進(jìn)行壓片，即得。實(shí)施例6 復(fù)方泰立福韋恩曲他濱片處方 制備方法將泰立福韋、恩曲他濱分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；將微晶纖 維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。實(shí)施例7 復(fù)方泰立福韋膠囊劑處方 制備方法將泰立福韋、恩替卡韋、拉米夫定分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備 用；將微晶纖維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。
權(quán)利要求
本發(fā)明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物，其特征在于它是由泰立福韋和另外一種或多種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料組合而成。
2.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于所述的類核苷(酸)抗病毒藥物包括 拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。
3.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于泰立福韋的單位用量為30-1500mg，優(yōu) 選 300mgo
4.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于拉米夫定的單位用量為10-500mg，優(yōu)選 IOOmg0
5.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于阿德福韋酯的單位用量為1-lOOmg，優(yōu) 選 10mg。
6.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于恩替卡韋的單位用量為50-2500mg，優(yōu) 選 500mgo
7.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于替比夫定的單位用量為60-3000mg，優(yōu) 選 600mgo
8.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于恩曲他濱的單位用量為20-1000mg，優(yōu) 選 200mgo
9.權(quán)利要求1所述的藥用組合物，其特征在于，可制成口服制劑，包括片劑、膠囊、分散 片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。
10.權(quán)利要求1所述的復(fù)方藥用組合物可用于乙型病毒肝炎的治療。
全文摘要
本發(fā)明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物，它是由泰立福韋和另外一種或多種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學(xué)上可接受的輔料組合而成。其中類核苷(酸)抗病毒藥物包括拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。此種組合物可制成口服制劑用于乙型病毒肝炎的治療，包括片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。
文檔編號(hào)A61K31/522GK101849952SQ20091008123
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2009年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月30日
發(fā)明者李寶齊, 王曉丹 申請(qǐng)人:北京利樂生制藥科技有限公司