專利名稱：：紫云英子提取物的用途及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然藥物技術(shù)，特別是涉及一種紫云英子提取物的用途及制備方法。
背景技術(shù)：
：腎為五臟之要器，先天之本，其作用是排出人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，將代謝產(chǎn)物中的有用成分重新吸收回體內(nèi)，再把產(chǎn)生的廢物——尿液由輸尿管、膀胱負(fù)責(zé)排出。同時(shí)，腎臟還是體內(nèi)很重要的內(nèi)分泌器官，負(fù)責(zé)制造促進(jìn)造血的促紅素，活性維生素D3，還負(fù)責(zé)體內(nèi)胰島素的分解。一旦腎功能受到損害，廢物在體內(nèi)蓄積，則會(huì)對(duì)身體產(chǎn)生很大的危害。目前我國(guó)腎臟病人已達(dá)9000萬人，其中，尿毒癥患者每年正以5%-10%的速度增長(zhǎng)。據(jù)資料顯示，從2006年以來，慢性腎病已經(jīng)成為繼心腦血管疾病、腫瘤、糖尿病之后的第四大疾病殺手，從全世界的總體情況來看，慢性腎臟病的防治正面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。而在慢性腎臟疾病中，腎病綜合征占了很大的比重[1]。腎病綜合征(n印hroticsyndrome,NS)是腎內(nèi)科的常見癥，多發(fā)癥！很多腎臟疾病臨床上均表現(xiàn)為腎病綜合征[2]，它不是一獨(dú)立性疾病，而是由多種原因，包括慢性腎炎引起的腎小球疾病中的一組臨床癥候群。典型表現(xiàn)為大量蛋白尿、低白蛋白血癥、水腫、高脂血癥。由于低蛋白血癥、高脂血癥和水腫都是大量蛋白尿的后果，因此，診斷的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)以大量蛋白尿?yàn)橹鱗3]。而大量蛋白尿是導(dǎo)致腎功能惡化的重要的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，無論是原發(fā)性還是繼發(fā)性腎病綜合征，如果大量蛋白尿得不到及時(shí)有效的控制，將導(dǎo)致腎組織、特別是腎間質(zhì)的進(jìn)行性纖維化，腎功能進(jìn)行性減退，而逐漸發(fā)展到終末期腎功能衰竭[1]。因此，其治療關(guān)鍵在于減少或消除蛋白尿[2]。在其治療措施方面，腎上腺皮質(zhì)激素是治療腎病綜合征的首選藥物，如潑尼松、潑尼松龍、地塞米松等，但長(zhǎng)期服用該類藥物副作用很多，有時(shí)相當(dāng)嚴(yán)重[3]。同時(shí)，部分患者存在激素依賴、激素抵抗、激素不耐受及反復(fù)發(fā)作等現(xiàn)象["。這一部分患者可試用細(xì)胞毒性藥物，如環(huán)磷酰胺和苯丁酸氮介，但此類藥物同樣毒副作用很大且對(duì)用藥后緩解又重新復(fù)發(fā)者多不主張進(jìn)行第二次用藥，以免中毒[3]。此外，還可選用細(xì)胞免疫抑制劑——環(huán)孢霉素A，但此藥亦有嚴(yán)重的毒副作用，最嚴(yán)重的為肝、腎毒性，其腎毒性發(fā)生率在20%-40%，故不宜長(zhǎng)期用此藥治療腎病綜合征，更不宜輕易將此藥作為首選藥物〔因上述各類藥物存在的局限性及嚴(yán)重的毒副作用，結(jié)合中醫(yī)中藥治療腎病綜合征已逐漸被人們所應(yīng)用，但到目前，仍然沒有一種特異性的廣泛應(yīng)用于腎病綜合征及降低尿蛋白的低毒高效藥物。紫云英(AstragalussinicusLinn.)為豆科黃耆屬植物，分布于長(zhǎng)江流域各省區(qū)，長(zhǎng)于山坡林下，溝邊及草地。藥用部位為全草及種子，具有清熱解毒、明目活血之功能w。紫云英子腎形或菱形，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道含有抗氧化作用的黃酮及其苷類物質(zhì)[5]，三萜苷類物質(zhì)[6]，天門冬氨酸及多糖等物質(zhì)。但迄今為止，未見其現(xiàn)代藥理研究報(bào)告D鑒于目前腎病綜合征臨床用藥的上述不利現(xiàn)狀，本發(fā)明利用阿霉素腎病模型大鼠對(duì)多種天然植物提取物進(jìn)行了藥理實(shí)驗(yàn)研究，觀察這些提取物對(duì)尿蛋白含量的影響，意外發(fā)現(xiàn)紫云英子提取物具有顯著降低尿蛋白，改善腎病綜合癥的藥理作用，效果與潑尼松相當(dāng)，且無毒副作用。本
發(fā)明內(nèi)容國(guó)內(nèi)外未見相關(guān)報(bào)道。袁發(fā)煥。難治性腎病綜合征[J]。重慶醫(yī)學(xué)，2008，37(8):786-788。[2]金萍。腎病綜合癥治療藥物的研究進(jìn)展[J]。國(guó)外醫(yī)學(xué)泌尿系統(tǒng)分冊(cè)，2001，21(4):145-147。[3]腎病綜合征。腎病醫(yī)學(xué)網(wǎng)，http:〃www.shenbing.org。[4]《中國(guó)植物志》，中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì)主編，科學(xué)出版社出版，42(1):199。Yeom，SH;Kim，MK;Kim，HJ;Shim，JG;Lee，JH;Lee,MW.PhenoliccompoundsfromseedsofAstragalussinicusandtheirantioxidativeactivities[J].SaengyakHakhoechi，2003，34(4):344-351.Cui,B;Inoue，J;Takeshita,T;Kinjo，J;Nohara，T;Takeshita，T;Kinjo，J;Nohara，T.TriterpeneglycosidesfromtheseedsofAstragalussinicusL[J].Chemical&Pharmaceuticalbulletin'1992，40(12):3330-3.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種降低尿蛋白，治療腎病綜合征的天然藥物提取物及其制備方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一、一種紫云英子提取物的用途該提取物以三萜、黃酮及它們的苷類物質(zhì)為有效成分，用于降低尿蛋白，治療腎病綜合征。二、一種紫云英子提取物的制備方法，該方法的步驟如下1)紫云英子炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60。/。乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇得提取濃縮液；2)將該提取濃縮液以大孔吸附樹脂柱吸附，依次以6倍量水及7倍量30%乙醇洗柱后，以9倍量70%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收溶劑，在6(TC下真空干燥，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉，就制備成了本發(fā)明的提取物。所述步驟2)中所用大孔吸附樹脂包括非極性、弱極性和中等極性大孔吸附樹脂。三、另一種紫云英子提取物的制備方法，該方法的步驟如下1)紫云英子炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60。/。乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇得提取濃縮液；2)將該提取濃縮液，依次以石油醚、乙酸乙酯等體積萃取，各萃取3次后，以等體積正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收溶劑，在6(TC下真空干燥，于干燥箱巾放置活性碳吸附殘留正丁醇，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉，就制備成了本發(fā)明的提取物。正丁醇萃取物及大孔吸附樹脂70%乙醇洗脫物進(jìn)行顯色反應(yīng)(1)鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，表明含有黃酮類化合物。(2)Molish反應(yīng)陽(yáng)性，表明含有苷類化合物。(3)L-B反應(yīng)陽(yáng)性，表明含有三萜類化合物。上述顯色反應(yīng)結(jié)合文獻(xiàn)可知該紫云英子提取物以黃酮、三葙及它們的苷類物質(zhì)為有效成分。本發(fā)明具有的有益效果是1.紫云英子提取物具有顯著降低尿蛋白，治療腎病綜合征的作用；2.紫云英子提取物無明顯毒副作用。目前臨床上治療腎病綜合征、降低尿蛋多用激素類藥物和免疫抑制藥物，毒副作用大，而紫云英子提取物無明顯毒副作用，可長(zhǎng)期服用。3.工藝合理簡(jiǎn)便，能最大限度保留有效成分，減少給藥劑量。具體實(shí)施例方式下面是本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明并不局限于此。實(shí)施例l:紫云英子2.5kg，炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60。/。乙醇浸泡2h，回5流提取2次，每次2h，用2層醫(yī)用紗布過濾，合并濾液，減壓(-0.08-0.10MPa)回收乙醇后依次以等體積石油醚、乙酸乙酯及正丁醇分別萃取3次，減壓(-0.08-0.10MPa)回收溶劑，在6(TC下真空干燥，于干燥箱中放置活性碳吸附殘留正丁醇，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉保存。實(shí)施例2紫云英子28kg,炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60%乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，用2層醫(yī)用紗布過濾，合并濾液，減壓(-0.08-0.10MPa)回收乙醇后以DIOI大孔吸附樹脂吸附，以6倍量水及7倍量30%乙醇洗柱后，以9倍量70%乙醇洗脫，最后以95%乙醇洗柱，洗脫液減壓(-0.08-0.10MPa)回收溶劑，在6(TC下真空干燥，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉保存。本發(fā)明的相關(guān)研究結(jié)果如下一、實(shí)施例1中各萃取組分對(duì)阿霉素腎病模型大鼠的影響1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，體重350士20g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)SCXK(浙2003-0001)。2、實(shí)驗(yàn)受試樣品及藥品1)紫云英子各萃取組分實(shí)施例1中各萃取組分以水為介質(zhì)超聲混懸灌胃。2)潑尼松片浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0704148，規(guī)格5mg。3)鹽酸阿霉素明治醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070101，規(guī)格10mg。3、動(dòng)物分組及給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(潑尼松)和紫云英子各萃取組分組；潑尼松給藥劑量為15mg/kg，紫云英子各組分組為相當(dāng)于10g生藥材/kg，模型組給予等體積的蒸餾水為10ml/kg。4、實(shí)驗(yàn)方法空白對(duì)照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其他六組尾靜脈注射阿霉素5mg/kg造模，于造模當(dāng)天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)28天，空白對(duì)照組及模型組灌胃給予等量蒸餾水。給藥第28d稱各鼠重量，并將大鼠放置于代謝籠中收集24h尿液測(cè)定尿蛋白含量。5、尿蛋白含量測(cè)定方法考馬斯亮藍(lán)法1)牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取100mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸餾水中，即為l000wg/mL的原液。2)蛋白試劑考馬斯亮藍(lán)G-250的配制稱取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250，溶于50niL90X乙醇中，加入85%(W/V)的磷酸100mL，最后用蒸餾水定容到lOOOmL。3)樣品測(cè)定待測(cè)尿液于4000r/min離心20分鐘，取上清液lml置具塞試管中，加入5ml蛋白試劑，充分混合，放置10分鐘，用lcm光徑比色杯在595nm下比色記錄，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線査得待測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的含量。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值(7)表示，全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行處理。7、實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)各組大鼠尿蛋白含量進(jìn)行比較可以發(fā)現(xiàn)正丁醇萃取物具有與潑尼松相似的降低阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白的作用，與模型組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而其余各組分對(duì)大鼠尿蛋白含量均未見任何影響。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1紫云英子各萃取組份對(duì)阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白量的影響(『10)組別正常模型潑尼松石油醚乙酸乙酯止丁醇水層尿蛋白量均值10.98498.65338.50469.42448.56334.94456.79(mg)SD2.1973.6345.2662.8471.0150.1355.27P0.000.350.140.000.17注P是與模型組相比的概率二、實(shí)施例2中各組分對(duì)阿霉素腎病模型大鼠的影響1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，體重350士20g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)SCXK(浙2003-0001)。2、實(shí)驗(yàn)受試樣品及藥品1)紫云英子各組分:實(shí)施例2中大孔吸附樹脂柱水洗柱部分記為ASA,30%洗柱部分記為ASB，70%洗脫部分記為ASC，95%洗柱部分記為ASD，各部分以水超聲混懸灌胃。2)潑尼松片浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0704148，規(guī)格5mg。3)鹽酸阿霉素明治醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070101，規(guī)格10mg。3、動(dòng)物分組及給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(潑尼松)和紫云英子各組分組；潑尼松給藥劑量為15mg/kg，紫云英子各組分組為相當(dāng)于10g生藥材/kg，模型組給予等體積的蒸餾水為10ml/kg。4、實(shí)驗(yàn)方法空白對(duì)照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其他六組尾靜脈注射阿霉素5mg/kg造模，于造模當(dāng)天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)28天，空白對(duì)照組及模型組灌胃給予等量蒸餾水。給藥第28d稱各鼠重量，并將大鼠放置于代謝籠中收集24h尿液測(cè)定尿蛋白含量(考馬斯亮藍(lán)法)。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值(X)表示，全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行處理。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)各組大鼠尿蛋白含量進(jìn)行比較可以發(fā)現(xiàn)ASC即大孔吸附樹脂70%洗脫物具有與潑尼松相似的降低阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白的作用，與模型組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而其余各組分對(duì)大鼠尿蛋白含量均未見任何影響。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2紫云英子各組份對(duì)阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白量的影響(『10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注P是與模型組相比的概率三、ASC對(duì)阿霉素腎病模型大鼠的影響1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，體重350士20g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)SCXK(浙2003-0001)。2、實(shí)驗(yàn)藥品1)紫云英子提取物ASC。2)潑尼松片浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0704148，規(guī)格5mg。3)鹽酸阿霉素明治醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070101，規(guī)格10mg。3、動(dòng)物分組及給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(潑尼松)和ASC組；潑尼松給藥劑量為15mg/kg，ASC組為相當(dāng)于10g生藥材/kg，模型組給予等體積的蒸餾水為10ml/kg。4、實(shí)驗(yàn)方法空白對(duì)照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其他三組尾靜脈注射阿霉素5mg/kg造模，于造模當(dāng)天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)28天，空白對(duì)照組及模型組灌胃給予等量蒸餾水。給藥第28d稱各鼠重量，并將大鼠放置于代謝籠中收集24h尿液測(cè)定尿蛋白含量(考馬斯亮藍(lán)法)。末次給藥后24h眶后靜脈叢取血，于自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血中總蛋白、肌酐、尿素氮、總膽固醇及甘油三酯，斷頸處死后取腎臟做組織學(xué)檢查。5、腎臟組織學(xué)檢査方法對(duì)腎小管間質(zhì)損傷程度進(jìn)行半定量分析(參照J(rèn)ournalAmericanSocietyofNephrology.1997，8(2):199-207)的方法對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的每份標(biāo)本在低倍鏡下單盲觀察5個(gè)腎小球、腎小管間質(zhì)視野，即每張標(biāo)本低倍鏡下觀察左上、右上、左下、右下、中間5個(gè)視野內(nèi)腎小管、腎間質(zhì)，根據(jù)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、腎小管擴(kuò)張、間質(zhì)纖維化、間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)等四項(xiàng)指標(biāo)對(duì)腎小管、腎間質(zhì)病變進(jìn)行評(píng)分，每一項(xiàng)指標(biāo)根據(jù)病變程度分成輕、中、重三度，分別記l、2、3分計(jì)算其均值。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值表示，全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行處理。7、實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3-5。表3ASC對(duì)阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白量的影響(r^10)組別正常模型潑尼松ASC均值10.75504.77352.04340.18尿蛋白量(mg)SD2.1856.1355.5253.65P0.000.00注-p是與模型組相比的概率比較上表中的數(shù)據(jù)可以進(jìn)一步確定紫云英子提取物具有與潑尼松相似的降低阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白的作用，與模型組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表4血生化數(shù)據(jù)結(jié)果(n二10)組別總蛋白尿素mmoI/L肌酐Crl_imoI/L總膽固醇mmol/L甘油三酯mmol/L正常均值64.185.5155.971.771.11SD4.210.756.670.260.18均值59.3813.19105.378.925.29模型SD3.464.6521.701.592.199均值65.18承11.9387.87承8.034.75SD5.852.249.262.602.28均值64.16求11.6386.14*7.813.99SD4.893.578.941.321.99注*與模型組比較，P〈0.05比較上表中的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)紫云英子提取物可以使阿霉素腎病模型大鼠的血中總蛋白含量基本維持正常，使肌酐Cr及甘油三酯含量得到一定程度的降低。表5病理組織學(xué)檢査(『10)組別細(xì)胞水腫腎小管擴(kuò)張間質(zhì)纖維化炎癥細(xì)胞模型均值2.321.90.641.75SD0.570.520.250.72均值1.56氺1.720.34氺1.48潑尼松SD0,560.920.250.51均值1.53*1.360.36承1.61ASCSD0.460.970.240.85注*與模型組比較，p<0.05比較上表中的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)紫云英子提取物可以使阿霉素腎病模型大鼠的細(xì)胞水腫、腎小管擴(kuò)張及間質(zhì)纖維化等病理現(xiàn)象得到明顯的改善。四、ASC對(duì)切除左腎后阿霉素腎病模型大鼠的影響1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，雄性，體重350士20g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)SCXK(浙2003-0001)。2、實(shí)驗(yàn)受試品及藥品1)紫云英子提取物ASC。2)潑尼松片浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0704148，規(guī)格5mg。3)鹽酸阿霉素明治醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070101，規(guī)格10mg。3、動(dòng)物分組及給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(潑尼松)和ASC組；潑尼松給藥劑量為15mg/kg，ASC組為相當(dāng)于10g生藥材/kg，模型組給予等體積的蒸餾水為10ml/kg。4、實(shí)驗(yàn)方法腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，在無菌條件下，先將30只大鼠行左腎切除術(shù)，術(shù)后隨機(jī)等分成3組，l周后按5mg/kg從其尾靜脈注射鹽酸阿霉素；另對(duì)10只正常對(duì)照組大鼠先行假手術(shù)，l周后尾靜脈注射生理鹽水。于造模當(dāng)天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)35天，空白對(duì)照組及模型組灌胃給予等量蒸餾水。給藥第35d稱各鼠重量，并將大鼠放置于代謝籠中收集24h尿液測(cè)定尿蛋白含量(考馬斯亮藍(lán)法)。末次給藥后24h眶后靜脈叢取血于自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血中總蛋白、肌酐、尿素氮、總膽固醇、甘油三酯，斷頸處死后取腎臟做組織學(xué)檢查(檢査方法同上)。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值(I)表示，全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行處理。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6-8。表6ASC對(duì)切除左腎后阿霉素腎病模型大鼠尿蛋白量的影響(『10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注P是與模型組相比的概率比較上表數(shù)據(jù)可知紫云英子提取物對(duì)切除左腎后阿霉素腎病模型大鼠具有與潑尼松相當(dāng)?shù)慕的虻鞍鬃饔?，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表7血生化數(shù)據(jù)結(jié)果(n二10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>8.781.411.85注*與模型組比較，p〈0.05比較上表數(shù)據(jù)可見紫云英子提取物可以使切除左腎后阿霉素腎病模型大<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>鼠的血中總蛋白含量基本維持正常，使肌酐Cr及甘油三酯含量得到一定程度的降低。表7病理組織學(xué)檢査(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*與模型組比較，P<0.05比較上表中的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)紫云英子提取物可以使切除左腎后阿霉素腎病模型大鼠的細(xì)胞水腫、腎小管擴(kuò)張及間質(zhì)纖維化等病理現(xiàn)象得到明顯的改善。五、提取物對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康ICR小鼠，雌雄各半，體重20士2g，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)SCXK(浙2003-0001)。2、實(shí)驗(yàn)受試品及藥品紫云英子提取物正丁醇萃取物、ASC。3、實(shí)驗(yàn)方法l)預(yù)試驗(yàn)在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)之前，首先做預(yù)試驗(yàn)，以便為正式試驗(yàn)提供依據(jù)。將18只小鼠隨機(jī)分為三組，正丁醇萃取物組、ASC組和空白對(duì)照組。灌胃前禁食不禁水l6h。正丁醇萃取物組以可供灌胃的最大濃度(0.15g/mL)、小鼠灌胃可承受的最大體積(每IOg體重0.4mL)l次灌給正丁醇萃取物；ASC組以可供灌胃的最大濃度(0.15g/mL)、小鼠灌胃可承受的最大體積(每IOg體重0.4mL)1次灌給ASC;給藥后常規(guī)飼養(yǎng),觀察3d?？瞻捉M:灌胃等量蒸餾水,方法同給藥組。結(jié)果小鼠全部存活，因此，無法測(cè)出該復(fù)方制劑的LDs。，提示該提取物毒性很低，是較安全的，故測(cè)定本藥對(duì)小鼠的最大給藥量。2)最大給藥量的測(cè)定將60只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組20只、正丁醇萃取物組20只、ASC組20只，每組雌雄各半。試驗(yàn)前禁食16h，正常飲水。正丁醇萃取物組每只小鼠按0.4mL/10g的劑量灌胃0.15gZmL濃度的正丁醇萃取物混懸液；ASC組每只小鼠按0.4mL/10g的劑量灌胃0.15g/mL濃度的ASC混懸液；空白對(duì)照組灌胃等體積的蒸餾水，每天給藥2次，間隔6h。給藥后，觀察7d，每天稱取其體重并觀察動(dòng)物反應(yīng)。給藥后常規(guī)飼養(yǎng)，自然光照12h，室溫(2024)。C，濕度60%。試驗(yàn)第8天稱取體重后，處死小鼠，解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等主要器官的組織變化。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)一般情況灌胃給藥后兩組小鼠的外觀體征未見異常，活動(dòng)自如，進(jìn)食、飲水、糞便均正常，皮毛光潔，口、鼻、眼及肛門清潔無分泌物。2)體重變化情況灌胃給藥7天，體重增加，正丁醇萃取物組給藥前體重為(20.37士0.51)g，ASC給藥前體重為(20.39士0.54)g，空白對(duì)照組體重為(20.35±0.62)g，第7天體重，正丁醇萃取物組為(24.73±1.31)g，ASC組為(24.64±1.28)g，空白對(duì)照組為(24.36±1.19)g。正丁醇萃取物組和ASC組分別與空白對(duì)照組體重進(jìn)行比較，P〉0.05，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。主要臟器解剖肉眼觀察進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的40只小鼠全部存活，無明顯中毒反應(yīng)。解剖所見胸腔、腹腔未見異常液體，腸管未見脹氣，心、肝、脾、肺、腎、腦等重要臟器未見顏色、形態(tài)異常，沒有出血點(diǎn)或其他病理改變，胃黏膜顏色紅潤(rùn)，無出血點(diǎn)或潰瘍，尸檢無異常。小鼠最大給藥量為12g/kg體重。正丁醇萃取物和ASC給ICR品系小鼠灌胃未測(cè)出LD5。，其最大耐受量均為12g/kg體重，約為臨床患者擬用劑量的240倍，說明該提取物無明顯毒性反應(yīng)，使用安全可靠。權(quán)利要求1、一種紫云英子提取物的用途，其特征在于該提取物以三萜、黃酮及它們的苷類物質(zhì)為有效成分，用于降低尿蛋白，治療腎病綜合征。2、一種紫云英子提取物的制備方法，其特征在于該方法的步驟如下1)紫云英子炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60%乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇得提取濃縮液；2)將該提取濃縮液以大孔吸附樹脂柱吸附，依次以6倍量水及7倍量30%乙醇洗柱后，以9倍量70%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收溶劑，在6(TC下真空干燥，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉，就制備成了本發(fā)明的提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種紫云英子改善腎病綜合征、降低尿蛋白提取物的制備方法，其特征在于所述步驟2)中所用大孔吸附樹脂包括非極性、弱極性和中等極性大孔吸附樹脂。4、一種紫云英子改善腎病綜合征、降低尿蛋白提取物的制備方法，其特征在于該方法的步驟如下1)紫云英子炒焦，粉碎，過10目篩，加6倍量60。/。乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇得提取濃縮液；2)將該提取濃縮液，依次以石油醚、乙酸乙酯等體積萃取，各萃取3次后，以等體積正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收溶劑，在6(TC下真空干燥，于干燥箱中放置活性碳吸附殘留正丁醇，得干浸膏，將干浸膏粉碎成細(xì)粉，就制備成了本發(fā)明的提取物。全文摘要本發(fā)明公開了一種紫云英子提取物的用途及制備方法。它是以紫云英子為原料提取出三萜類、黃酮類及它們的苷類物質(zhì)作為有效成分，用于降低尿蛋白、治療腎病綜合征。將紫云英子經(jīng)乙醇回流提取法提取，減壓回收溶媒，再經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜或正丁醇萃取分離得到三萜類、黃酮類及其苷類物質(zhì)的提取物。紫云英子提取物具有顯著降低尿蛋白，治療腎病綜合征的作用；無明顯毒副作用，可長(zhǎng)期服用；工藝合理簡(jiǎn)便，能最大限度保留有效成分，減少給藥劑量。文檔編號(hào)A61P13/00GK101530458SQ20091009772公開日2009年9月16日申請(qǐng)日期2009年4月16日優(yōu)先權(quán)日2009年4月16日發(fā)明者孫靜蕓,曾永篪,軍李,金圣煊申請(qǐng)人:杭州創(chuàng)新中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究所有限公司