專利名稱：一種具有免疫增強(qiáng)作用的補(bǔ)骨脂提取物及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言是一種中草藥提取物，主要涉及含有補(bǔ) 骨脂總苷的補(bǔ)骨脂提取物，以及在制備升高白細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，在全球范圍內(nèi)，中草藥都有一定的市場(chǎng)，隨著人們對(duì)健康要求認(rèn) 識(shí)水平的增高以及人口的老齡化，亞健康狀態(tài)化，人們更加渴望回歸自然， 利用純天然程度高的藥物治療、預(yù)防一些化學(xué)合成藥物所不能解決得問題， 因此天然植物藥的應(yīng)用超出它原來民族傳統(tǒng)文化的背景。從天然藥物中尋求 副作用小、且物美價(jià)廉的藥物成為世界各國(guó)醫(yī)藥企業(yè)所追逐的目標(biāo)。歐共體 對(duì)草藥進(jìn)行了統(tǒng)一立法，加拿大和澳大利亞等國(guó)草藥地位已經(jīng)合法化，美國(guó) 政府也已起草了植物藥管理辦法，開始接受天然藥物的復(fù)方混合制劑作為治 療藥，這些為中藥作為治療藥進(jìn)入國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)提供了良好的國(guó)際環(huán)境。另
一方面，隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程的加快，特別是我國(guó)正式加入WTO，中 國(guó)醫(yī)藥市場(chǎng)融入國(guó)際醫(yī)藥大市場(chǎng)的廣度和深度將進(jìn)一步加劇。面臨強(qiáng)大跨國(guó) 醫(yī)藥集團(tuán)的激烈競(jìng)爭(zhēng)以及日本、韓國(guó)、印度、泰國(guó)等亞洲國(guó)家傳統(tǒng)醫(yī)藥產(chǎn)品 和德國(guó)、法國(guó)等歐洲國(guó)家植物藥的巨大沖擊，我國(guó)傳統(tǒng)中藥產(chǎn)生的眾多產(chǎn)品 由于尚不能符合國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)的標(biāo)準(zhǔn)和要求而被拒之門外。
中藥補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂(PsoraleacorylifoliaL)果實(shí)，性溫，味 辛，具補(bǔ)腎助陽(yáng)之功效。主治腎虛冷瀉，小便頻數(shù)，陽(yáng)萎，腰膝冷痛，虛寒 喘咳，外用治白癜風(fēng)?，F(xiàn)代研究表明，補(bǔ)骨脂具有擴(kuò)張血管，增加心肌收縮 力，抗菌，雌性激素樣作用，治療白癜風(fēng)等生理活性。補(bǔ)骨脂含有多種活性 成分，以補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷為代表的苷類是其重要的活性成分之一，目 前尚沒有以補(bǔ)骨脂總苷為主要成分的藥物面世。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種補(bǔ)骨脂總苷提取物，主要含有重量百分比為 40-50%的補(bǔ)骨脂苷和40-50%的異補(bǔ)骨脂苷， 補(bǔ)骨脂苷結(jié)構(gòu)式<formula>formula see original document page 4</formula>
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的補(bǔ)骨脂總苷提取物在制備升高白細(xì)胞 的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的補(bǔ)骨脂總苷提取物，與制劑允許的敷料或賦形劑制備成任 何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，也可配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。 所述藥物的制劑形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑或膠丸。所述藥物的給藥 方式包括口服給藥或注射給藥。
本發(fā)明首次得到了一種成分明確，療效顯著的補(bǔ)骨脂總苷提取物，該補(bǔ)
骨脂總苷提取物中補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的含量均可達(dá)到40%以上，藥理實(shí) 驗(yàn)證明，該補(bǔ)骨脂總苷以及其含有的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷均能對(duì)抗環(huán)磷酰 胺所致的白細(xì)胞降低，具有顯著的免疫增強(qiáng)作用。


圖l補(bǔ)骨脂總苷色譜圖。
圖2補(bǔ)骨脂苷氫譜。
圖3補(bǔ)骨脂苷碳譜。
圖4補(bǔ)骨脂苷DEPT譜。
圖5異補(bǔ)骨脂苷氫譜。
圖6異補(bǔ)骨脂苷碳譜。
圖7異補(bǔ)骨脂苷DEPT譜。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明結(jié)合附圖和實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例一
取補(bǔ)骨脂lkg， 5(TC千燥6小時(shí)，加10倍量水微沸狀態(tài)加熱回流提取2 次，每次2小時(shí)，提取液過濾，減壓濃縮，醇沉，調(diào)節(jié)醇濃度至70%，取上 清液，濃縮至無醇后加乙酸乙酯萃取3遍，分離水層，上大孔樹脂，用水沖 洗至無糖(molish反應(yīng))，棄去，繼續(xù)用70%乙醇水溶液洗脫。收集洗脫 液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得補(bǔ)骨脂總苷。經(jīng)液相分析，含有兩個(gè) 主要成分，含量分別為40-50%，參見圖l，圖中l(wèi)為異補(bǔ)骨脂苷，2為補(bǔ)骨 脂苷。將分離得到異補(bǔ)骨脂苷和補(bǔ)骨脂苷，分別做氫譜，碳譜，DEPT譜，參 見圖2-圖7，可以確認(rèn)l為異補(bǔ)骨脂苷，2為補(bǔ)骨脂苷。
實(shí)施例二 補(bǔ)骨脂總苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響
1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康目疾煅a(bǔ)骨脂總苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞降低的影響。
2. 實(shí)驗(yàn)材料
2. l藥品與試劑阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號(hào)0311101; 注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)7063021;白 細(xì)胞稀釋液冰醋酸2ml， ln/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。
2.2實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，1000|dl、 lOOial微量移液器。 2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，雌雄對(duì)半，體重18-22g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 動(dòng)物中心提供。
3. 方法與步驟
3. l取健康18-22glCR小鼠，在本實(shí)驗(yàn)室條件下詞養(yǎng)2天后，隨機(jī)分
組
正常對(duì)照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g《g";
實(shí)驗(yàn)組低、高劑量組(生藥量2g'Kg"、 4g'Kg");
每組10只。各組小鼠連續(xù)給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。 3.3第8天(注射環(huán)磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取
20|11血液，立即轉(zhuǎn)入380pl白細(xì)胞稀釋液，輕輕搖動(dòng)1 2分鐘，充分混勻后計(jì)數(shù)。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射環(huán)磷酰胺后第五天，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為 (3.33±0.98) xio6/ml，較正常組(7.24±1.62) xio6/ml明顯降低，差異有顯著 意義(尸<0.01)。低劑量組與高劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(4.05±0.80) xio6/ml、 (4.29±1.37) xl06/ml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(/><0.05， /><0,05)。陽(yáng)性對(duì)照組(阿膠組)白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(4.05±0.83) xl06/ml，較模型 組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。 一
表l補(bǔ)骨脂總苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響(Y士l "=10) ^ , 劑量 白細(xì)胞計(jì)數(shù)
(g.Kg") (xl06/ml)
注與正常組比較><0.05，》<0.01; 與模型組比較A尸〈0.05， AAP<0.01。 5.結(jié)論
補(bǔ)骨脂總苷低、高劑量均能對(duì)抗環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞降低。
實(shí)施例三 補(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響
1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康目疾煅a(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞降低的影響。
2. 實(shí)驗(yàn)材料
2. 1藥品與試劑
阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號(hào)0311101; 注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)
07063021;
白細(xì)胞稀釋液冰醋酸2ml，P/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。 2.2實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，100(^1、 微量移液器。
2. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
ICR小鼠，雌雄對(duì)半，體重18-22g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。
3. 方法與步驟
3.1取健康18-22glCR小鼠，在本實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)2天后，隨機(jī)分組: 正常對(duì)照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g《g";
實(shí)驗(yàn)組低、高劑量組(O.lg'Kg'1、 0.3g'Kg"); 每組10只。各組小鼠連續(xù)給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。
低劑量組 2 4.05±0.80A
高劑量組 4 4.29±1.37A
組 1.5 4.05±0.83A
組 一 3.33士0.98"
組 一 7.24±1.62
膠型常
阿模正3.3第8天(注射環(huán)磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取 20^1血液，立即轉(zhuǎn)入380iil白細(xì)胞稀釋液，輕輕搖動(dòng)1 2分鐘，充分混勻后 計(jì)數(shù)。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射環(huán)磷酰胺后第五天，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為
(3.33±0.98) xl06/ml，較正常組(7.24±1.62) xl06/ml明顯降低，差異有顯著
意義(/><0.01)。低劑量組與高劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(3.82±0.66) xio6/ml、
(3.99±1.12) xio6/ml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05， P<
0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組(阿膠組)白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(4.05±0.83)xl06/ml，較模型組
明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。
表2補(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響(丁士^ n=10)
》 劑量 白細(xì)胞計(jì)數(shù)
一 (g'Kg") (xl06/ml)
低劑量組 0.1 3.82±0.66"
高劑量組 0.3 3.99士1.12"
阿膠組 1.5 4.05士0.83"
模型組 一 3.33±0.98*
正常組 一 7.24±1.62
注與正常組比較'尸<0.05， "P<0.01; 與模型組比較A尸〈0.05， AA/><0.01。 5.結(jié)論
補(bǔ)骨脂苷低、高劑量均能對(duì)抗環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞降低。
實(shí)施例四異補(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響
1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康目疾飚愌a(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞降低的影響。
2. 實(shí)驗(yàn)材料
2. l藥品與試劑阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號(hào)0311101;
注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)07063021; 白細(xì)胞稀釋液冰醋酸2ml，l。/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。
2.2實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，100(^1、 10(Hil微量移液器。
2. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
ICR小鼠，雌雄對(duì)半，體重18-22g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。
3. 方法與步驟3. l取健康18-22glCR小鼠，在本實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)2天后，隨機(jī)分
組
正常對(duì)照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g'Kg";
實(shí)驗(yàn)組低、高劑量組(O.lg'Kg"、 0.3g'Kg"); 每組10只。各組小鼠連續(xù)給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。 3.3第8天(注射環(huán)磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取
20iul血液，立即轉(zhuǎn)入38(^1白細(xì)胞稀釋液，輕輕搖動(dòng)1 2分鐘，充分混勻后計(jì)數(shù)。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射環(huán)磷酰胺后第五天，模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為 (3.33±0.98) xl06/ml，較正常組(7.24±1.62) xl06/ml明顯降低，差異有顯著
意義(尸<0.01)。低劑量組與高劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(4.01土1.02) xl06/ml、 (3.89±0.65) xl0Vml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(戶<0，05,戶<
0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組(阿膠組)白細(xì)胞計(jì)數(shù)為(4.05±0.83) xl06/ml，較模型
組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。 —
表3異補(bǔ)骨脂苷對(duì)環(huán)磷酰胺所致正常小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低的影響(丁士s, "=10)
^ Si 白細(xì)胞計(jì)數(shù)
(g.Kg") (xl06/ml)
低劑量組 0.1 4.01±1.02￡
高劑量組 0.3 3.89±0.65"
阿膠組 1.5 4.05±0.83"
模型組 一 3.33±0.98*
正常組 一 7.24±1.62
注與正常組比較*戶<0.05， "P<0.01; 與模型組比較^<0.05， AAP<0.01。 5.結(jié)論
異補(bǔ)骨脂苷低、高劑量均能對(duì)抗環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞降低。 實(shí)施例五 滴丸的制備
取補(bǔ)骨脂總苷0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后 移至滴丸滴灌中，藥液滴至6 8"C液體石蠟中，除油，制得滴丸300粒。 實(shí)施例六凍干粉針劑的制備取降香油1.5g,加入到13ml飽和的羥丙基(3-環(huán)糊精中，攪拌溶解，濾 過，濾液低溫干燥得降香油和羥丙基P-環(huán)糊精的包合物粉末。除上述降香油 合羥丙基!3-環(huán)糊精的包合物粉末外，再取補(bǔ)骨脂總苷0.5g、甘露醇5.5g、依 地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝350支，即 得。
實(shí)施例七片劑的制備
取補(bǔ)骨脂總苷100克，與微晶纖維素混合均勻，加3%聚維酮乙醇溶液制 軟材，過18目篩制顆粒，6(TC干燥1小時(shí)，整粒，加入滑石粉適量，混勻， 壓片，即得。
實(shí)施例八膠囊的制備
取補(bǔ)骨脂苷與花生油按2: 18的比例(重量比)水溶式不銹鋼攪拌灌 中，同時(shí)加入適量明膠和甘油混合，放出再用膠體磨磨漿，磨出的混合液攪 拌，制成藥液；將甘油與蒸餾水在40-5(TC溫度下攪拌混溶，再將甘油液溫至 80-90°C，取明膠加入其中混合攪拌，直至全部溶化成膠液，然后在6(TC溫度 下使膠液靜置4小時(shí)，用制板機(jī)制成膠板供制丸工序使用；將上述制成的藥 液和膠板送入壓丸機(jī)制丸，然后在22-25-C溫度下吹風(fēng)4小時(shí)作滾筒定型，又 在25-30。C溫度下吹風(fēng)干燥16-20小時(shí)，檢選合格膠丸，用95%乙醇清洗，在 25-3(TC下吹風(fēng)干燥4小時(shí)，即得。
實(shí)施例九 注射液的制備
取異補(bǔ)骨脂苷100克(同實(shí)施例七)用40。C注射用水溶解，加入適量藥 用載體等滲劑，調(diào)節(jié)溶液的pH值為7.0-8.0，加注射用水至全量，用超濾器超 濾除熱源，測(cè)定pH值后，用膜過濾，分裝后，高壓滅菌，檢驗(yàn)、包裝，即 得。
權(quán)利要求
1.一種補(bǔ)骨脂總苷提取物，其特征在于提取物含有重量百分比為40-50％的補(bǔ)骨脂苷和40-50％的異補(bǔ)骨脂苷。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種補(bǔ)骨脂總苷提取物在制備升高白細(xì)胞的藥 物中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種補(bǔ)骨脂總苷提取物的應(yīng)用，其特征在于 所制備的藥物還含有制劑允許的藥物賦形劑或敷料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種補(bǔ)骨脂總苷提取物的應(yīng)用，其特征在于所述藥物的制劑形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑或膠丸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種補(bǔ)骨脂總苷提取物的應(yīng)用，其特征在于所述藥物的給藥方式包括口服給藥或注射給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種補(bǔ)骨脂總苷提取物，主要含有40-50％的補(bǔ)骨脂苷和40-50％的異補(bǔ)骨脂苷。所述的補(bǔ)骨脂總苷提取物，與藥劑學(xué)允許的敷料或賦形劑制備成任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，也可配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。藥理實(shí)驗(yàn)證明，該補(bǔ)骨脂總苷以及其含有的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷均能對(duì)抗環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞降低，具有顯著的免疫增強(qiáng)作用，可在制備升高白細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P37/00GK101554399SQ200910098768
公開日2009年10月14日 申請(qǐng)日期2009年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月14日
發(fā)明者斌 吳, 瞿海斌, 程翼宇 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)