專利名稱：生物活性物質神經(jīng)酸鈣的分離提取純化生產(chǎn)工藝及其在治療老年癡呆癥中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及天然藥物領域，具體涉及生物活性物質神經(jīng)酸鈣的分離提取純化生產(chǎn) 工藝及其在治療老年癡呆癥中的用途。
背景技術：
老年癡呆癥，又稱阿爾茨海默病(Alzheimer，s disease, AD)是發(fā)生在老年期 及老年前期的一種原發(fā)性退行性腦病，指的是一種持續(xù)性高級神經(jīng)功能活動障礙，即在 沒有意識障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分析判斷、視覺空間辨認、情緒等方面的障礙。其特 征性病理變化為大腦皮層萎縮，并伴有β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，β-AP)沉積，神經(jīng) 原纖維纏結(neurofibrillary tangles, NFT)，大量記憶性神經(jīng)元數(shù)目減少，以及老年斑 (senileplaque,SP)的形成。目前尚無特效治療或逆轉疾病進展的治療藥物。也是四大常 見的神經(jīng)退行性疾病之一(其它三種為亨廷頓氏病、盧伽雷氏癥、帕金森氏病)。老齡化趨 勢讓老年性癡呆患者數(shù)量增多隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展，越來越多的老人變得年輕而又充滿了 活力。但是請不要忘記在不久的將來，我國將進入老齡社會。同時伴隨著一個不可忽視的 問題——老年癡呆癥的發(fā)病率在逐年增高。癡呆已不是老年人的“專利”四五十歲就癡呆 的人，數(shù)量也在逐年增加，老年癡呆逐步呈現(xiàn)年輕化趨勢，血管性因素在發(fā)病中所起的作用 也日益突出。事實上，老年癡呆在中年就開始有癥狀和反應，如果不提早發(fā)現(xiàn)和治療，等發(fā) 展嚴重了就無法治愈了。以目前的醫(yī)學技術，人的中樞神經(jīng)纖維一旦因為意外或疾病感染而損壞，就無法 修復。我們對于神經(jīng)酸及神經(jīng)酸鈣在神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面的應用研究成果，使預防中樞神經(jīng) 纖維損壞及有效提高記憶性神經(jīng)元活性的研究工作邁進了一步。我們的神經(jīng)系統(tǒng)控制著整 個身體。神經(jīng)纖維猶如一條條電線，電線表面斷斷續(xù)續(xù)有些部分由絕緣體包繞著。神經(jīng)纖 維表面的絕緣體部分稱為髓鞘，未包繞的部分稱為郎飛結，電流沿著髓鞘從一個郎飛結快 速地"跳"到另一個郎飛結，人體內的信號就是由這些電流，讓大腦和人體各部分在一瞬 間能夠互相"溝通"。髓鞘可說是讓電流"跳"得更快的跳板。如果沒有髓鞘，電流在神 經(jīng)纖維上小步小步地跳，信號就會流動得很慢，變得越來越弱，甚至消失掉。體內信號流動 得慢，人就會變得遲鈍從而形成癡呆。如果把神經(jīng)纖維想像成一個身體，髓鞘就像是一個一 層層包裹著神經(jīng)纖維的的保護衣，沒有髓鞘保護的神經(jīng)纖維像一個沒穿衣服的人那樣飽受 風吹雨打，神經(jīng)纖維會疼痛，甚至壞死。研究發(fā)現(xiàn)，那些患上神經(jīng)退行性疾病的人，其中一種 是老年癡呆癥病患者，患有這種疾病的人，包繞大腦和脊椎內神經(jīng)的髓鞘被破壞，記憶性神 經(jīng)元細胞數(shù)目減少，影響到有關神經(jīng)的功能，譬如在沒有意識障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分 析判斷、視覺空間辨認、情緒等方面的障礙。研究發(fā)現(xiàn)，患老年癡呆癥的病人，出現(xiàn)了上述 癥狀，其中一個步驟，就必須讓髓鞘再生，提高記憶性神經(jīng)元細胞數(shù)目。我們對于神經(jīng)酸及 神經(jīng)酸鈣在神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面的應用研究成果，使髓鞘發(fā)育和再生成為了可能，這個研究 成果的臨床試驗有效地找出了治療老年癡呆癥的方法。要為神經(jīng)纖維做保護衣，首先要有布料，這布料就是髓鞘質，而神經(jīng)酸(NA)又主要是以鞘糖脂(NA占48% )和鞘磷脂(NA占 35% )存在于髓鞘中，這么一來，神經(jīng)酸鈣就通過形成髓鞘包扎著神經(jīng)纖維，形成了神經(jīng)纖 維的的保護衣。患老年癡呆癥的病人，通過神經(jīng)酸及神經(jīng)酸鈣對神經(jīng)纖維的保護，從而增強 了神經(jīng)訊息的傳輸；通過對髓鞘內腦細胞膜功能的調節(jié)，可增強信息在腦細胞間連接傳遞， 提高鈣離子的作用，有利于穩(wěn)定神經(jīng)系統(tǒng)及促進記憶性神經(jīng)元細胞活性，起到改善大腦，增 強記憶，改善思維、分析判斷、視覺空間辨認等方面的能力。神經(jīng)酸鈣(calcium nervonate)是一種長鏈的單不飽和脂肪酸鈣鹽，化學名 z-15-二十四碳烯酸鈣，分子式C48H9tlO4Ca,結構簡式[CH3 (CH2) 7CH = CH(CH2) 13C00]2Ca，分 子量771.3，熔點；133-135 。神經(jīng)酸鈣是大腦發(fā)育、維持的必須營養(yǎng)物，是髓鞘的重要組 成成分之一，對保護神經(jīng)纖維及神經(jīng)信息的傳輸起著重要作用，對提高腦神經(jīng)細胞的活性， 防止記憶性神經(jīng)元細胞數(shù)目減少有很大作用。神經(jīng)酸鈣是神經(jīng)細胞膜的重要組成部分，對 神經(jīng)介質和受體起著重要的調節(jié)作用，對腦神經(jīng)系統(tǒng)和發(fā)育生長，腦細胞間的連接形成均 有明顯的作用，而腦神經(jīng)細胞膜在信息傳遞和信息加工中起著十分重要的作用，腦神經(jīng)細 胞通過其膜上的離子通道和受體來完成信息傳遞和信息加工，通過神經(jīng)酸及神經(jīng)酸鈣對髓 鞘功能的調節(jié)，可增強腦神經(jīng)細胞間的信息傳遞和信息加工能力，從而提高鈣離子的作用， 有利于穩(wěn)定神經(jīng)系統(tǒng)及促進記憶性神經(jīng)元細胞活性的恢復，起到改善大腦，增強記憶，改善 思維、分析判斷、視覺空間辨認等方面的能力。發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)酸鈣對提高正常 小鼠的記憶能力(跳臺實驗；避暗實驗；水迷宮實驗)，提高東莨菪堿致癡呆小鼠模型的學 習記憶能力，提高酒精致癡呆小鼠模型學習記憶能力，從而表明了神經(jīng)酸韓對老年癡呆癥 具有良好的治療作用，另外，對屬于癡呆早期表現(xiàn)的輕度認知損害，記憶力減退和健忘等也 具有相同的治療作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供的一種生物活性物質神經(jīng)酸鈣的提取，純化工藝流程及其在 治療老年癡呆癥中的用途。本發(fā)明的另一目的是提供含有生物活性物質神經(jīng)酸鈣，其衍生物和藥學上可接收 的載體混合，制成的各種劑型，在治療老年癡呆癥中的用途。神經(jīng)酸鈣可以進行衍生化，例 如用酸，使上述化合物上的鈣被氫取代，或與其它化合物反應，使鈣被其它基團所取代；混 合制成的各種劑型，包括固體制劑，如膠囊片劑顆粒制劑等，液體制劑如口服液注射劑，滴 劑等。本發(fā)明生物活性物質神經(jīng)酸鈣及其衍生物的日劑量可以是200mg-600mg/60KG體重， 可以分一次或多次使用。超臨界流體萃取法(SFE)超臨界流體萃取法是利用超臨界狀態(tài)下的流體為萃取 劑，從液體或固體中萃取中藥材中的有效成分并進行分離的方法。CO2因其本身無毒、無腐 蝕、臨界條件適中(7.488Mpa，304. 15K)的特點，成為超臨界流體萃取法最為常用的超臨界 流體(SF)。在超臨界流體萃取過程中使用夾帶劑，即萃取時加入具有良好溶解性能的溶劑， 如乙醇、丙酮等，不僅改善和維持萃取選擇性，而且提高難揮發(fā)溶質的溶解度。應用超臨界 CO2萃取的優(yōu)點是a.操作范圍廣，便于調節(jié)。最常用的操作范圍是壓力8 30Mpa，溫度 35-8012 ；b.選擇性好，可通過控制壓力和溫度，改變超臨界CO2的密度，從而改變其對物質 的溶解能力，有針對性地萃取中草藥中某些成分；c.操作溫度低，在接近室溫(31.0612)條件下萃取，尤適宜于熱敏性成分的提取。萃取過程密閉、連續(xù)進行，排除了遇空氣氧化和見 光反應的可能性，使萃取物穩(wěn)定；d.從萃取到分離可一步完成。萃取后CO2不殘留于萃出 物；e. C02價廉易得，可循環(huán)使用。將粉碎的油果，使用夾帶劑，直接用CO2超臨界設備，在溫度80°C -120°C及壓力 18-27MPa的條件下萃取，制得神經(jīng)酸甘油酯；將神經(jīng)酸甘油酯與氫氧化鈣發(fā)生皂化反應生 成以神經(jīng)酸鈣鹽為主要化合物的混合物；然后經(jīng)過重結晶，金屬鹽沉淀，高速離心分離，干 燥，制得神經(jīng)酸鈣。通過利用本發(fā)明提供的工藝流程，來實現(xiàn)生產(chǎn)神經(jīng)酸鈣，可以達到不污 染環(huán)境，生物活性物質神經(jīng)酸鈣純度高，回收率高，成本低等優(yōu)點，具有明顯的市場競爭優(yōu) 勢，能夠基本滿足目前國內外市場對該產(chǎn)品的要求，必將產(chǎn)生廣泛的經(jīng)濟效益和社會效益.下面將結合具體實施實例及實驗，對本發(fā)明作進一步說明。實施實例1 生物活性物質神經(jīng)酸鈣的提取，純化生產(chǎn)工藝流程實施實例將300KG粉碎的油果，使用正己烷做夾帶劑，用CO2超臨界設備，在溫度90°C及壓 力27MPa的條件下萃取，制得粗神經(jīng)酸甘油酯130KG左右。用10%的氫氧化鈣乙醇溶液充 分反應，然后在室溫下結晶生產(chǎn)神經(jīng)酸鈣粗品，然后加入60KG正己烷，加熱溶解完全，然后 讓其溶液在溫度-10°C的冷庫中充分沉淀，然后高速離心分離，結晶，干燥，制得15. 8KG純 度為96. 8%的神經(jīng)酸鈣。神經(jīng)酸鈣(calcium nervonate)是一種長鏈的單不飽和脂肪酸鈣鹽，化學名 z-15-二十四碳烯酸鈣，分子式C48H9tlO4Ca,結構簡式[CH3 (CH2) 7CH = CH(CH2) 13C00]2Ca，分 子量771. 3，熔點:133-135°Co實施實例2 神經(jīng)酸鈣對提高正常小鼠的記憶能力實驗(跳臺實驗；避暗實驗；7jC 迷宮實驗)。1.實驗動物來源昆明種小白鼠，體重18_22g，由上海醫(yī)科大學動物房提供。2.實驗劑量設計樣品推薦量為每天200g/10KG，本實驗設高，中，低三個劑量組， 分別是推薦量的5，10,20倍，即將100g/KG，200g/KG，400g/KG，對照組飲用蒸餾水。3.實驗方法與結果3.1.跳臺試驗各劑量組與對照組組小白鼠連續(xù)給樣四周，末次給樣后次日開始訓練，將小白鼠 放入反應箱內適應3分鐘，然后立即通以36V的交流電，小白鼠受到電擊，其正常反應是跳 回平臺，以躲避傷害性刺激，多數(shù)小白鼠可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回 平臺。如此訓練5-8分鐘，記錄5分鐘內錯誤次數(shù)，以此作為學習成績，24小時或48小時后 重作試驗，記錄受電擊動物3分鐘內的錯誤總數(shù)，同時計算動物出現(xiàn)錯誤反應的頻率。記錄 數(shù)據(jù)見表1。
權利要求
生物活性物質神經(jīng)酸鈣在治療老年癡呆癥中的用途。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種藥物組合物，其特征在于其中含有治療有效量的生物活 性物質神經(jīng)酸鈣和藥學上可接收的載體混合，制成的各種劑型。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種藥物組合物，其特征在于其中含有治療有效量的生物活 性物質神經(jīng)酸鈣及其衍生物和藥學上可接收的載體混合，制成的各種劑型。
4.根據(jù)權利要求1所述的生物活性物質神經(jīng)酸鈣的分離提取純化生產(chǎn)工藝，其特征 是將粉碎的油果首先使用夾帶劑，通過CO2超臨界萃取法，控制溫度在80°C -120°C及壓力 18-27MPa的條件下，萃取制得甘油酯形式存在的神經(jīng)酸衍生物，然后加入氫氧化鈣經(jīng)皂化 反應，生成鈣鹽，采用多種分離純化方法，結晶，干燥，制得純度為96%以上的神經(jīng)酸鈣產(chǎn)品·
5.根據(jù)權利要求3所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于所述的夾帶劑為乙醇或正己烷。
6.根據(jù)權利要求3所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于所述的分離純化方法包括重結晶，金 屬鹽沉淀的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物活性物質神經(jīng)酸鈣(calcium nervonate)的分離提取，純化工藝流程。該工藝流程是將粉碎的油果，使用夾帶劑，直接用CO2超臨界設備萃取，制得神經(jīng)酸衍生物粗品，然后加入氫氧化鈣經(jīng)皂化反應，分離，純化，結晶，干燥，制得純度極高的神經(jīng)酸鈣產(chǎn)品.本工藝流程具有工藝簡單，不污染環(huán)境，操作溫度低，有效成份神經(jīng)酸鈣純度高，得率高，成本低等優(yōu)點，具有明顯的市場競爭優(yōu)勢，鑒于此，本工藝流程已被杭州薩韋坦生物科技有限公司工業(yè)化生產(chǎn)所采用；本發(fā)明的生物活性物質神經(jīng)酸鈣可與藥學上適用的載體混合，制成各種劑型，用于治療老年癡呆癥。
文檔編號A61K31/201GK101991564SQ200910101699
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月18日 優(yōu)先權日2009年8月18日
發(fā)明者王建林, 王建民, 胡曉凱, 金偉娟 申請人:杭州薩韋坦生物科技有限公司