專利名稱：：含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物及其制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，特別涉及含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物及其制備和用途。
背景技術(shù)：
：雷公藤甲素(Triptolide)是中藥雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook,f)中分離出的活性最高的環(huán)氧化二萜內(nèi)酯化合物，是雷公藤和雷公藤多苷的主要有效成分之一。雷公藤甲素還存在于雷公藤屬其它兩種植物昆明山海棠(TripterygiumHypoglaucumHutch)和東北雷公藤(TripterygiumregaliiSpragueetTake)中，也是其主要活性成分之一。由于雷公藤甲素的生理活性強(qiáng)，具有顯著的免疫抑制、抗炎、抗腫瘤和抗生育作用，在臨床上主要用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、皮膚病、抗腫瘤、腎炎和器官排斥反應(yīng)等50多個(gè)病種。但同時(shí)它又屬于毒性很強(qiáng)的藥物，LD5。約為0.8mg/kg(小鼠口服)，急性中毒主要表現(xiàn)為肝損傷，長期毒性抑制骨髓、并損害心和腎臟等器官，有較強(qiáng)的致突變作用。雷公藤甲素既是雷公藤屬類藥物中活性最強(qiáng)又是毒性最強(qiáng)成分，其有效劑量與中毒劑量極為相近，臨床用藥很不安全，這大大限制了該類藥物在治療自身免疫系統(tǒng)異常導(dǎo)致的疾病、惡性腫瘤和器官排斥反應(yīng)等多種疾病中的應(yīng)用。研究開發(fā)減少雷公藤甲素的毒性，同時(shí)保持其藥理活性的方法，即減毒持效，對于提高含有雷公藤甲素的藥物臨床應(yīng)用的安全性具有十分重要的意義。鳳尾草系鳳尾蕨科鳳尾草(PterismutifidaPoir.)的干燥全草，又名山雞尾、井欄邊草、鐵腳雞等。廣泛分布在全國各地，主產(chǎn)浙江、江蘇和江西等省。宋立人主編的《現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典》對鳳尾草功效有比較詳細(xì)的總結(jié)味淡、微苦，性寒。歸大腸、胃、肝、腎經(jīng)。功能清熱利濕，涼血止血，消腫解毒。治痢疾，腸炎，肝炎，咽喉炎，泌尿系炎癥，扁桃體炎，癰瘡癤腫，風(fēng)濕等。我們研究發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素及含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍用藥可大大降低含雷公藤甲素的原藥物的毒性，并且基本保持原藥物的免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性。本發(fā)明公開了含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物及其制備方法和用途，該藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物比較，具有免疫抑制、抗炎和抗腫瘤活性相當(dāng)，毒性小的優(yōu)點(diǎn)，可大大提高臨床應(yīng)用的安全性，可作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥使用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物及其制備方法和用途，該藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物比較，具有免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性相當(dāng)，毒性小的優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到提高該類藥物臨床應(yīng)用安全性的目的，可作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥使用。本發(fā)明所指的含雷公藤甲素藥物為雷公藤甲素，雷公藤多甙，雷公藤、昆明山海棠和東北雷公藤。3本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物的重量份組成配比如下藥物組合物(以Ca表示)組成包括雷公藤甲素1份、鳳尾草100-107份；或藥物組合物(以Cb表示)組成包括雷公藤多甙1份、鳳尾草1-105份；或藥物組合物(以Cc表示)組成包括雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份；或藥物組合物(以Cd表示)組成包括昆明山海棠1份、鳳尾草0.01-1000份；或藥物組合物(以Ce表示)組成包括東北雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份。上述藥物組合物的制備方法包括1.制備鳳尾草提取物①取上述藥物組合物中份量的鳳尾草，加6-8倍量的水，或不同濃度乙醇，或純乙醇，加熱回流提取，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，得鳳尾草水總提取物、不同濃度乙醇總提取物、純乙醇總提取物。②將鳳尾草各總提取物分別用適量水制成懸浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，將水相溶液減壓濃縮，干燥，粉碎，得水部位提取物。③將水部位提取物上大孔樹脂，依次用水和95%的乙醇水溶液洗脫，將95%的乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，粉碎，得大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物。2.制備雷公藤、昆明山海棠、東北雷公藤提取物取雷公藤藥材，用4-6倍量的30%-100%乙醇回流提取，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得雷公藤提取物。昆明山海棠、東北雷公藤提取物制法同雷公藤提取物。3.將以上制備的鳳尾草提取物(總提取物、水部位提取物和大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物)分別與雷公藤甲素，雷公藤多甙，雷公藤、昆明山海棠、東北雷公藤提取物按照上述藥物組合物中的比例混合制得相應(yīng)的藥物組合物(Ca-Ce)，或?qū)ⅧP尾草提取物和這些含雷公藤甲素藥物分別做成制劑，采用先后給藥或同時(shí)給藥的藥物組合方式使用。4.將含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物直接藥用，或采用常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑等藥劑學(xué)上可接受的合適劑型使用。含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物與原藥物的毒性，免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性比較的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)參見實(shí)施例16-22。藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物的毒性比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物的毒性大大低于原藥物的毒性，藥物組合物的LD50(半數(shù)致死量)均大于含有原藥物的LD50，有的超過原藥物的3倍，藥物組合物對大鼠肝損傷比原藥物輕，而且動物生長狀況相對良好。藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物的免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物有很好的免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性，其效果與原藥物相當(dāng)。藥理學(xué)對比試驗(yàn)結(jié)果還表明采用含雷公藤甲素的原藥物與鳳尾草先后給藥的藥物組合方式使用與同時(shí)給藥的藥物組合方式使用的減毒效果、免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性相當(dāng)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但應(yīng)理解本發(fā)明的范圍非僅限于這些實(shí)施例的范圍。實(shí)施例1:雷公藤甲素lg鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物①取100g鳳尾草，加6倍量的水，或70%乙醇，或純乙醇，加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(分別以Ea、Eb和Ec表示)。②將鳳尾草總提取物(Ea、Eb和Ec)分別用適量水制成懸浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，將水相溶液減壓濃縮，干燥，粉碎，得水部位提取物(分別以Ed、Ee和Ef表示)。③將水部位提取物(Ed、Ee和Ef)上大孔樹脂(型號LSA-40)，依次用水和95%的乙醇水溶液洗脫，將95%的乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，粉碎，得大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(分別以Eg、Eh和Ei表示)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與lg雷公藤甲素混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例2:雷公藤甲素lmg鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物①取100g鳳尾草，加7倍量的水，或70%乙醇，或純乙醇，加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb禾PEc)。②將鳳尾草總提取物(Ea、Eb和Ec)分別用適量水制成懸浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，將水相溶液減壓濃縮，干燥，粉碎，得水部位提取物(Ed、Ee和Ef)。③將水部位提取物(Ed、Ee和Ef)上大孔樹脂(型號LSA-40)，依次用水和95%的乙醇水溶液洗脫，將95%的乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，粉碎，得大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與lmg雷公藤甲素混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例3:雷公藤甲素lmg鳳尾草10kg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物①取10kg鳳尾草，加8倍量的水，或70%乙醇，或純乙醇，加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb禾PEc)。②將鳳尾草總提取物(Ea、Eb和Ec)分別用適量水制成懸浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，將水相溶液減壓濃縮，干燥，粉碎，得水部位提取物(Ed、Ee和Ef)。③將水部位提取物(Ed、Ee和Ef)上大孔樹脂(型號LSA-40)，依次用水和95%的乙醇水溶液洗脫，將95%的乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，粉碎，得大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與lmg雷公藤甲素混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例4:雷公藤多甙100g鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例1中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與100g雷公藤多甙混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例5:雷公藤多武100mg鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例2中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與100mg雷公藤多甙混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例6:雷公藤多甙l(fā)mg鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例3中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇6洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與lmg雷公藤多甙混合制得藥物組合物。3.將步驟2制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例7:雷公藤100g鳳尾草lg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取lg鳳尾草，按照實(shí)施例1中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備雷公藤提取物取100g雷公藤藥材，用4倍量的30%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例8:雷公藤10g鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例2中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備雷公藤提取物取10g雷公藤藥材，用5倍量的85%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例9:雷公藤10g鳳尾草10kg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取10kg鳳尾草，按照實(shí)施例3中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備雷公藤提取物取10g雷公藤藥材，用6倍量的純乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例10:昆明山海棠100g鳳尾草lg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取lg鳳尾草，按照實(shí)施例1中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備昆明山海棠提取物取100g昆明山海棠藥材，用4倍量的30%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得昆明山海棠提取物。3.將步驟l制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的昆明山海棠提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例11:昆明山海棠10g鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例2中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備昆明山海棠提取物取10g昆明山海棠藥材，用5倍量的85%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得昆明山海棠提取物。3.將步驟l制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的昆明山海棠提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例12:昆明山海棠10g鳳尾草10kg8制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取10kg鳳尾草，按照實(shí)施例3中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備昆明山海棠提取物取10g昆明山海棠藥材，用6倍量的純乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得昆明山海棠提取物。3.將步驟l制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的昆明山海棠提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例13:東北雷公藤100g鳳尾草lg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取lg鳳尾草，按照實(shí)施例1中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備東北雷公藤提取物取100g東北雷公藤藥材，用4倍量的30%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得東北雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的東北雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例14:東北雷公藤10g鳳尾草100g制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取100g鳳尾草，按照實(shí)施例2中方法步驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備東北雷公藤提取物取10g東北雷公藤藥材，用5倍量的85%乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得東北雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的東北雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、9顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例15:東北雷公藤10g鳳尾草10kg制備方法包括1.制備鳳尾草提取物取10kg鳳尾草，按照實(shí)施例3中方法歩驟制得鳳尾草水總提取物、70%乙醇總提取物、純乙醇總提取物(Ea、Eb和Ec)，水部位提取物(Ed、Ee和Ef)，大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物(Eg、Eh和Ei)。2.制備東北雷公藤提取物取10g東北雷公藤藥材，用6倍量的純乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得東北雷公藤提取物。3.將步驟1制得的鳳尾草提取物(Ea-Ei)與步驟2制得的東北雷公藤提取物混合制得藥物組合物。4.將步驟3制得的藥物組合物按常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑，作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥。實(shí)施例16:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物急性毒性比較試驗(yàn)采用改良寇氏法進(jìn)行小鼠口服急性毒性比較試驗(yàn)，結(jié)果(見表l-5)表明，上述藥物組合物的LD50均大于含雷公藤甲素的原藥物的LD50，有的超過原藥物的3倍，而且動物生長狀況相對良好。表l.小鼠口服急性毒性比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2.小鼠口服急性毒性比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3.小鼠口服急性毒性比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表4.小鼠口服急性毒性比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例17:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物對大鼠肝功能的影響對比試驗(yàn)SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，隨機(jī)分成蒸餾水組、含雷公藤甲素的原藥物組、與鳳尾草配伍的藥物組合物組，每組10只。灌胃給藥量以原藥物計(jì)分別為雷公藤甲素0.7mg/kg，雷公藤多甙140mg/kg，雷公藤11g/kg、昆明山海棠22g/kg和東北雷公藤24g/kg。連續(xù)給藥3天，每天兩次，最后一次給藥后禁食，正常飲水，一小時(shí)后，股動脈取血，3500rpm離心5min，取血清，檢測ALT和AST。試驗(yàn)結(jié)果(見表6-10)表明，藥物組合物對大鼠肝損傷比原藥物輕。說明含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍可大大降低原藥物的毒性。表6.對大鼠肝功能的影響比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表8.對大鼠肝功能的影響比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例18:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物的免疫抑制活性比較試驗(yàn)材料和儀器昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22g，上述含雷公藤甲素的原藥物，與鳳尾草配伍的藥物組合物，地塞米松片，RMI-1640培養(yǎng)基，脂多糖(LPS)、刀豆素A(ConA)及MTT，匿SO。(A培養(yǎng)箱，高速低溫離心機(jī)，倒置顯微鏡，自動酶標(biāo)儀。方法取小鼠，雌雄各半，隨機(jī)均分成蒸餾水組、地塞米松組、含雷公藤甲素的原藥物組、與鳳尾草配伍的藥物組合物組，每組10只。以原藥物計(jì)按以下劑量灌胃給藥，地塞米松7.5mg/kg，雷公藤甲素0.2mg/kg，雷公藤多甙40mg/kg，雷公藤3g/kg，昆明山海棠6g/kg，東北雷公藤7g/kg。連續(xù)給藥7天。MTT法測定脾淋巴細(xì)胞增殖小鼠給藥7天后脫頸處死，無菌條件下摘取脾臟，制備成2X106/mL濃度的脾細(xì)胞懸液(經(jīng)臺盼藍(lán)染色，活力>95%)，在96孔板上每孔加100iiL細(xì)胞懸液，分別加入ConA(10iig/ml)和LPS(20yg/ml)各100yL。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)孔。用RMI-1640培養(yǎng)液，置37°C、5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后，每孔加入10yLMTT(5mg/mL)，37。C孵育4h，1000rpm離心10min，棄上清，再每孔加入150iiL二甲基亞砜(DMSO)振蕩。在自動酶標(biāo)儀測OD值(A=492nm)。試驗(yàn)結(jié)果(見表11-15)表明，與蒸餾水組比較，原藥物組和藥物組合物組對T、B淋巴細(xì)胞的增殖有顯著的抑制作用，并且兩者的免疫抑制作用相當(dāng)。表11.對小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表12.對小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表13.對小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表14.對小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例19:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物的抗炎作用比較試驗(yàn)小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)取昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22g，隨機(jī)均分成空白模型組、含雷公藤甲素的原藥物組、與鳳尾草配伍的藥物組合物組，每組10只。以原藥物計(jì)按以下劑量灌胃給藥，雷公藤甲素O.lmg/kg，雷公藤多甙20mg/kg，雷公藤1.6g/kg，昆明山海棠3.lg/kg，東北雷公藤3.5g/kg?？瞻啄Ｐ徒M給2%丙二醇。連續(xù)給藥3天。末次給藥后lh，將20iU二甲苯涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳不涂為對照，l.5h后將小鼠處死，剪下雙耳，用直徑6mm的打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片重量差作為腫脹度，計(jì)算抑制率。試驗(yàn)結(jié)果(見表16-20)表明藥物組合物組與原藥物組對小鼠耳廓腫脹抑制率相當(dāng)，說明二者抗炎效果相當(dāng)。表16.小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表17.小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例20:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用比較試驗(yàn)動物分組與模型制備方法取適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后的雄性SD大鼠，體重180-220g，在乙醚輕度麻醉下于右后足跖部(原發(fā)側(cè))無菌皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑(弗氏完全佐劑CFA制備取無水羊毛脂加熱后，量取4ml，稍冷卻后加液體石蠟6ml，研磨均勻后7(TC高壓滅菌，按每毫升加入8(TC滅活lh的卡介苗10mg制成)O.lml，誘導(dǎo)產(chǎn)生AA佐劑性關(guān)節(jié)炎。接種CFA后9d測量大鼠左后足(繼發(fā)側(cè))腫脹程度，觀察關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)。將出現(xiàn)多發(fā)性關(guān)節(jié)炎癥狀的大鼠隨機(jī)分組模型組、含雷公藤甲素的原藥物組、與鳳尾草配伍的藥物組合物組，每組各10只。給藥方法于接種CFA后第10d開始灌胃給藥，共給藥12d，以原藥物計(jì)按以下劑量灌胃給藥，雷公藤甲素O.lmg/kg，雷公藤多甙20mg/kg，雷公藤1.6g/kg，昆明山海棠3.lg/kg，東北雷公藤3.5g/kg。模型組給2%丙二醇。觀察(1)足跖腫脹度分別在模型復(fù)制日、致炎后第10d、14d、18d、21d(即給藥日、給藥后第4d、8d、lld)用無彈性的軟皮尺測量大鼠左后跖固定部位周徑，計(jì)算各組大鼠足跖腫脹度。腫脹度為模型復(fù)制前后的周徑差。(2):關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI):在致炎后第21d測量一次各組全身關(guān)節(jié)病變程度。全身病變按5級評分法評價(jià)，根據(jù)未注射佐劑的其余3只肢體的病變程度累積計(jì)分，計(jì)算出指數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)如下0分無紅腫；1分小趾關(guān)節(jié)紅腫；2分趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹；3分踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹；4分包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。把各個(gè)關(guān)節(jié)的累積計(jì)分起來，即為每只大鼠關(guān)節(jié)腫脹的指數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果(見表21-25)表明藥物組合物與原藥物對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型左足爪腫脹度和關(guān)節(jié)炎指數(shù)影響相差不大，說明二者治療關(guān)節(jié)炎效果相當(dāng)。表21.對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型的影響藥物模型組雷公藤甲素藥物組合物Ca(以鳳尾草提取物Ea—Ei配制)雷公藤甲素鳳尾草=1:100雷公藤甲素鳳尾草=1:105雷公藤甲素鳳尾草=1:107左足爪腫月長度(mm)l()d1.21.31.2—1.31.0—1.31.1—1.214d5.52.92.9—3.23.0—3.33.3—3.518d8.94.94.8—5.15.1—5.3121d10.25.75.6—5.95.8—6.06.2—6.4關(guān)節(jié)炎指數(shù)3.753.012.99—3.043.06—3.093.08—3.13表22.對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型的影響藥物模荊'組雷公藤多甙藥物組合物Cb(以鳳尾草提取物Ea—Ei配制)雷公藤多甙:鳳尾草=1:1雷公藤多甙鳳尾草=1:103雷公藤多甙鳳尾草=1:105左足爪腫脹度(mm)10d1.21.11.1—1.30.9—1.31.2—1.314d5.53.13.0—3.23.3—3.53.4—3.618d8.95.04.9—5.25.3—5.45.5—5.62d10.26.]6.2—6.36.4—6.66.5—6.7關(guān)節(jié)炎指數(shù)3,753.113.13—3.193.18—3.253.18—3.23表23.對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型的影響藥物模型雷公藥物組合物Cc(以鳳尾草提取物Ea—Ei配制)組.藤雷公藤風(fēng)尾草=1:0.01雷公藤鳳尾草=1:10雷公藤鳳尾草=h1000左足爪腫脹10d1.21.01.1—1.21.0—1.21.2—1.3度(mm)14d5.53.63.7—3.93.8~4.14.0~4.218d8.95.55.5—5.75.7—5.95.8—5.921d10.26.86.8—6.97.0—7.27.2—7.4關(guān)節(jié)炎指數(shù)3.753.153.16—3.193.18—3.263.20—3.28表24.對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型的影響16<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表25.對佐劑性關(guān)節(jié)炎動物模型的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例21:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物體外抗腫瘤活性比較試驗(yàn)采用MTT法測定含有雷公藤甲素的原藥物、與鳳尾草配伍的藥物組合物對以下人腫瘤細(xì)胞體外生長的抑制作用，測定半數(shù)殺傷濃度(IC5。)，雷公藤、昆明山海棠和東北雷公藤的濃度以生藥量計(jì)，藥物組合物的濃度以相應(yīng)的原藥物量計(jì)，陽性對照藥為順鉑(Cisplatin)。人腫瘤細(xì)胞株早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266，胃癌細(xì)胞株MGC-803，肺癌細(xì)胞株A-549，肝癌細(xì)胞株S匪C-7721，宮頸癌細(xì)胞株Hela，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，鼻咽癌細(xì)胞株HNE-1，卵巢癌細(xì)胞株Caov-3，喉癌細(xì)胞株H印-2，結(jié)腸癌細(xì)胞株Col-6，腎癌細(xì)胞株Re-01，前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3，T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat。試驗(yàn)結(jié)果(見表26-30)表明藥物組合物和原藥物對各測試腫瘤細(xì)胞的IC5。相當(dāng)，說明藥物組合物和原藥物對各測試腫瘤細(xì)胞體外生長抑制作用效果相當(dāng)。表26受試藥物對腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)殺傷濃度(IC5。)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表30受試藥物對腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)殺傷濃度(IC5。)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)施例22:藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物體內(nèi)抗腫瘤活性比較比較含雷公藤甲素的原藥物、與鳳尾草配伍的藥物組合物對小鼠S180肉瘤體內(nèi)生長的抑制作用，測定抑瘤率。雷公藤、昆明山海棠和東北雷公藤的濃度以生藥量計(jì)，藥物組合物的濃度以相應(yīng)的原藥物量計(jì)。昆明種小鼠，雌雄各半，體重20g士2g，于每只小鼠右腋皮下接種S180小鼠腫瘤細(xì)胞4X10建立S180小鼠腫瘤移植模型。隨機(jī)分成生理鹽水組、陽性對照組、高中低劑量給藥組，每組各10只。接種24h后開始灌胃給藥，陽性對照組給予依托泊苷(VP-16)4mg/kg，給藥組給予高中低劑量相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)10天。于末次給藥24h后處死動物，稱體重，完整剝離瘤塊，用濾紙吸干后稱重，求抑瘤率。試驗(yàn)結(jié)果(見表31-35)表明藥物組合物和原藥物對小鼠S180肉瘤體內(nèi)生長抑瘤率相當(dāng)，說明藥物組合物和原藥物對小鼠S180肉瘤體內(nèi)生長的抑制作用效果相當(dāng)。表31對小鼠S180肉瘤體內(nèi)生長的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表32對小鼠S180肉瘤體內(nèi)生長的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>權(quán)利要求含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物，其特征在于所指的含雷公藤甲素藥物為雷公藤甲素、雷公藤多甙、雷公藤、昆明山海棠和東北雷公藤中的一種。2.如權(quán)利要求1所述的含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量份的原料藥制成的雷公藤甲素1份、鳳尾草100-107份；或雷公藤多甙1份、鳳尾草1-105份；或雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份；或昆明山海棠1份、鳳尾草0.01-1000份；或東北雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份。3.如權(quán)利要求1和2所述的含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物，其特征在于其制備方法是(1)制備鳳尾草提取物①取上述藥物組合物中份量的鳳尾草，加6-8倍量的水，或不同濃度乙醇，或純乙醇，加熱回流提取，合并提取液，濃縮，干燥，粉碎，得鳳尾草水總提取物、不同濃度乙醇總提取物、純乙醇總提取物；②將鳳尾草各總提取物分別用適量水制成懸浮液后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，將水相溶液減壓濃縮，干燥，粉碎，得水部位提取物；③將水部位提取物上大孔樹脂，依次用水和95%的乙醇水溶液洗脫，將95%的乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，粉碎，得大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物；(2)制備雷公藤、昆明山海棠、東北雷公藤提取物取雷公藤藥材，用4-6倍量的30%-100%乙醇回流提取，提取液減壓回收溶劑，干燥，粉碎，得雷公藤提取物；昆明山海棠、東北雷公藤提取物制法同雷公藤提取物；(3)將以上制備的鳳尾草提取物(總提取物、水部位提取物和大孔樹脂95%的乙醇洗脫提取物)分別與雷公藤甲素，雷公藤多甙，雷公藤、昆明山海棠、東北雷公藤提取物按照上述藥物組合物中的比例混合制得相應(yīng)的藥物組合物，或?qū)ⅧP尾草提取物和這些含雷公藤甲素藥物分別做成制劑，采用先后給藥或同時(shí)給藥的藥物組合方式使用；(4)將含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物直接藥用，或采用常規(guī)方法加入藥用輔料制成片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、軟膏、注射劑或乳劑等藥劑學(xué)上可接受的合適劑型使用。4.如權(quán)利要求l-3所述的含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物，其特征在于其用途是作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥使用，包括作為治療白血病、骨髓瘤、胃癌、肺癌、肝癌、宮頸癌、乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、喉癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、淋巴瘤的藥使用。全文摘要本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，公開了含雷公藤甲素藥物與鳳尾草配伍的藥物組合物及其制備和用途，所指的含雷公藤甲素藥物為雷公藤甲素，雷公藤多甙，雷公藤、昆明山海棠和東北雷公藤。藥物組合物由下述重量份原料藥制成雷公藤甲素1份、鳳尾草100-107份；或雷公藤多甙1份、鳳尾草1-105份；或雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份；或昆明山海棠1份、鳳尾草0.01-1000份；或東北雷公藤1份、鳳尾草0.01-1000份。藥物組合物與含雷公藤甲素的原藥物比較，具有免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤活性相當(dāng)，毒性小的優(yōu)點(diǎn)，提高了用藥安全性，可作為免疫抑制、抗炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤藥使用。文檔編號A61P35/00GK101708193SQ20091011483公開日2010年5月19日申請日期2009年1月15日優(yōu)先權(quán)日2009年1月15日發(fā)明者劉建群,吳繼梅,張維,張銳,李青,洪沁,趙元申請人:江西中醫(yī)學(xué)院