專利名稱：：抑制人hRAD21基因表達(dá)的siRNA和表達(dá)質(zhì)粒及其在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種特異性抑制人hRAD21基因表達(dá)的siRNA及該siRNA的表達(dá)質(zhì)粒和它們?cè)谥苽渲委熁蝾A(yù)防與人hRAD21基因有關(guān)的腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用生物計(jì)算機(jī)信息技術(shù)從GenBank中獲得一組人hRAD21基因序列，并以RNA干擾技術(shù)為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)出一組能誘發(fā)hRAD21RNA干擾的siRNA，通過化學(xué)法合成或質(zhì)粒載體表達(dá)一定量的siRNA,從而特異性抑制人hRAD21基因的表達(dá)。達(dá)到抑制腫瘤的發(fā)生和生長(zhǎng)的目的。該siRNA及其表達(dá)質(zhì)?？捎糜谥苽渲委煻肆Ｃ戈幮院投肆Ｃ敢种苿┠褪艿膼盒阅[瘤的特異性藥物。
背景技術(shù)：
：端粒(telomere)是染色體末端由DNA與調(diào)節(jié)蛋白組成的特殊復(fù)合體，具有防止染色體末端降解、融合而起到保護(hù)染色體完整性、維持細(xì)胞穩(wěn)定性的作用。端粒隨正常細(xì)胞的有絲分裂而逐漸縮短，至一定程度后發(fā)生凋亡，因此端粒被稱為細(xì)胞生命的時(shí)鐘。惡性腫瘤細(xì)胞必須維持一定的端粒長(zhǎng)度才能達(dá)到持續(xù)分裂和生長(zhǎng)的目的。約85%或稍多的癌細(xì)胞依靠端粒酶(Telomerase)來維持端粒長(zhǎng)度和細(xì)胞永生。研究顯示，還有約15%的腫瘤細(xì)胞并不依賴端粒酶來維持端粒長(zhǎng)度，這些細(xì)胞也具有無限分裂的能力，但卻不能檢測(cè)到端粒酶活性。學(xué)術(shù)界將這種端粒維持機(jī)制定義為端粒替代延長(zhǎng)機(jī)制(Alternativelengtheningoftelomeres,ALT),或稱為不依賴端粒酶的生長(zhǎng)旁路。不依賴端粒酶的ALT旁路的腫瘤細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度不一致，其末端重復(fù)序列長(zhǎng)度變化范圍大(從<2kb到>20kb)，而且研究表明ALT的出現(xiàn)與己知癌基因、抑癌基因變異或致癌方式無關(guān)。人類ALT細(xì)胞的另一個(gè)重要特征是存在一種特殊的核蛋白復(fù)合體，稱為ALT相關(guān)的早幼粒細(xì)胞白血病(PML)小體，簡(jiǎn)稱APB小體。APB小體由端粒DNA、端粒結(jié)合蛋白(如TRF1和TRF2)、PML小體以及一系列參與DNA重組與修復(fù)的蛋白組成。研究表明，APB小體僅在ALT細(xì)胞中出現(xiàn)，并為ALT細(xì)胞維持端粒長(zhǎng)度提供了所需的功能分子和場(chǎng)所。惡性腫瘤的ALT旁路是端粒酶研究中的一個(gè)重要的未知問題和領(lǐng)域，是探討惡性腫瘤生物學(xué)特性和永生機(jī)制的重要基礎(chǔ)，也是開展以端粒酶為治療耙點(diǎn)的生物治療前乃至化療前需要了解的問題。端粒酶抑制劑是一類特異性強(qiáng)，毒性小的較理想的新一代抗腫瘤藥物，是最具前景的腫瘤治療方向之一。但是，端粒酶抑制劑對(duì)于端粒酶陰性的人類腫瘤是無效的，并且，研究證實(shí)，應(yīng)用端粒酶抑制劑治療端粒酶陽(yáng)性的腫瘤時(shí)會(huì)使部分端粒酶陽(yáng)性的腫瘤激活A(yù)LT機(jī)制而產(chǎn)生端粒酶抑制劑逃避現(xiàn)象。因此，研究ALT旁路特異性抑制劑是對(duì)于治療端粒酶陰性的惡性腫瘤以及產(chǎn)生端粒酶抑制劑逃避的惡性腫瘤具有重要意義。本說明書的第一個(gè)目的是提供一種用于制備ALT旁路特異性抑制劑的分子靶點(diǎn)，即hRAD21基因和/或蛋白。本發(fā)明所述的hRAD21是指裂殖酵母RAD21基因的人類同源物，也稱為姐妹染色體蛋白1(SCC1)，是姐妹染色單體粘連復(fù)合物(cohesin)的成分之一。目前認(rèn)為其功能是參與真核細(xì)胞有絲分裂過程中新復(fù)制的姐妹染色單體的有效分離以及DNA雙鏈斷裂損傷的重組修復(fù)過程。本發(fā)明通過對(duì)比ALT細(xì)胞系與端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系中的RAD21的mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況，證實(shí)了ALT腫瘤細(xì)胞中hRAD21基因和蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)。本發(fā)明通過雙色免疫熒光共定位技術(shù)證實(shí)了hRAD21蛋白是人類ALT惡性腫瘤細(xì)胞中APB小體的組成成分，從而證實(shí)了hRAD21基因和/或蛋白是參與ALT機(jī)制的重要功能分子。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種特異性抑制hRAD21基因表達(dá)的si脂A。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述siRNA的表達(dá)質(zhì)粒。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供上述siRNA或產(chǎn)生該siRNA的表達(dá)質(zhì)粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容按照實(shí)施例1，本發(fā)明提供了一種用于制備ALT旁路特異性抑制劑的分子靶點(diǎn)，所述的分子靶點(diǎn)是指hRAD21基因和/或蛋白。本發(fā)明提供了一種特異性抑制hRAD21基因表達(dá)的雙鏈DNAoligos序列。所述的雙鏈DNAoligos序列如下所示1#:CACATGGGCTTTTTGGAT3，AGCTATCCAAAAAGCCCATGTGTTCGAGTGTATCTCTTGAATACACTCGAACACATGGGCGG2#:5'GATCCCGCTGATAGCCTTCAGCTACATTCAAGAGATGTAGCTGAAGGCTATCAGCTTTTTGGATTAGCTGAAGGCTATCAGCGG按照實(shí)施例2，本發(fā)明提供了上述的雙鏈DNAoligos序列的制備方法。按照實(shí)施例3，本發(fā)明還提供了上述siRNA的表達(dá)質(zhì)粒的制備方法。所述的質(zhì)粒具有以下基本結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子；hRAD21編碼區(qū)；終止密碼；環(huán)狀雙鏈DNA分子。所述的啟動(dòng)子為真核基因中可啟動(dòng)產(chǎn)生小雙鏈RNA的序列，它是啟動(dòng)下游基因表達(dá)的原件，可以是人的RNA聚合酶III的啟動(dòng)子或人的Hl啟動(dòng)子；所述的終止密碼為采用56個(gè)T作為終止編碼區(qū)合成的終止密碼序列；所述的環(huán)狀雙鏈DNA分子為任何真核質(zhì)粒載體和/或病毒的介于編碼區(qū)和啟動(dòng)子之間的DNA序列，含有質(zhì)粒載體DNA的復(fù)制起始位點(diǎn)，或含有抗生素抗性基因；所述的任何真核質(zhì)粒載體和/或病毒是pLuescriptSk、pcDNA3.0、pcDNA3.1、pMALC-2、Plncx、腺病毒、腺相關(guān)病毒或仙臺(tái)病毒。按照實(shí)施例4，本發(fā)明提供了本發(fā)明所制備的siRNA的表達(dá)質(zhì)粒在治療端粒酶陰性惡性腫瘤中的應(yīng)用。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，所述的實(shí)施例是用于描述本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。圖l:hRAD21基因和蛋白在ALT細(xì)胞中過表達(dá)圖2:ALT細(xì)胞中hRAD21蛋白與TRF2蛋白共定位圖3:ALT細(xì)胞中hRAD21蛋白與PML蛋白共定位圖4:真核表達(dá)質(zhì)粒圖譜(注藍(lán)色字體部分是被BamHI和HindII酶切去除的部分)圖5:實(shí)施例2提供的RNAi耙點(diǎn)對(duì)hRAD21基因，在蛋白水平有明顯knockdown作用圖6:siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后ALT腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，細(xì)胞周期大部分停滯于SG2期實(shí)施例實(shí)施例1:hRAD21基因和/或蛋白是惡性腫瘤細(xì)胞ALT機(jī)制的重要功能分子1.應(yīng)用定量Real-TimePCR技術(shù)證實(shí)hRAD21基因在ALT細(xì)胞中過表達(dá)用TRIZOL—步法提取ALT+細(xì)胞系(ffl(M18、G292、U20S、Saos-2)和端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系(LOVO、HELa、HT29)的總RNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定A260/A280值,取2ugRNA作逆轉(zhuǎn)錄模板。逆轉(zhuǎn)錄體系為25u1，引物為oligo(dT)15用SuperscriptII逆轉(zhuǎn)錄酶(Invitrogen),反應(yīng)按說明書進(jìn)行。選擇ACTB作為校準(zhǔn)基因，驗(yàn)證RAD21基因在幾個(gè)樣品中表達(dá)豐度的變化。ACTB上游引物序列為5'-3'CATGTACGTTGCTATCCAGGC,下游引物序列為:5'-3'CTCCTTAATGTCACGCACGAT;hRAD21上游引物序列為5'-3'GAGCACCAGCAATCTGAATGA，下游引物序列為5'-3'AGGCCCACCCATTGATACATTAT。使用R。Che公司LightCyclerPCR儀(R。Che，型號(hào)PTC-225),試劑為L(zhǎng)ightcycler-faststartDNAmasterSYBRgreenI(R°Che)。20ul實(shí)驗(yàn)體系，llUcDNA模板，鎂離子濃度3mM，引物濃度0.25UM，dNTP200UM。擴(kuò)增程序?yàn)?5。C變性10min;95°C10s，60°C5s，72°C15s，重復(fù)45個(gè)循環(huán)；75。C至95。C繪制溶解曲線。結(jié)果如圖1A所示，ALT細(xì)胞系中的hRAD21的mRNA表達(dá)水平較端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系顯著增高(P<0.01)2.應(yīng)用Westernblot技術(shù)證實(shí)hRAD21蛋白在ALT細(xì)胞中過表達(dá)常規(guī)方法提取ALT+細(xì)胞系(HI0-118、G292、U20S、Saos-2)和端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系(LOVO、HELa、HT29)以及端粒酶陰性人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的總蛋白，分別測(cè)定濃度。取80Pg蛋白加樣，6%SDS-PAGE膠上樣電泳(IIOV，90min)，考馬斯亮藍(lán)染色，轉(zhuǎn)膜電泳(恒壓60V，120mA,8小時(shí)，冰盒中)，脫脂牛奶封閉，一抗(鼠抗hRAD21，1:500)《C過夜雜交，二抗(1:4000)37'C孵育lh，用新配制的發(fā)光試劑檢測(cè)。應(yīng)用/5-actin作為內(nèi)參照。結(jié)果如圖1B、C所示，ALT細(xì)胞系中的hRAD21的蛋白表達(dá)水平較端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系顯著增高(P〈0.01)3.應(yīng)用免疫熒光共定位技術(shù)證實(shí)hRAD21蛋白是ALT細(xì)胞APB小體的組成成分ALT細(xì)胞(GM847,SaOS-2和WI38VA13/2RA)在蓋片上生長(zhǎng)融合到95%100%時(shí)，從孵箱中取出，用預(yù)溫的1XPBS洗3次，每次10分鐘，4%的甲醛室溫固定20—30分鐘，1XPBS洗3次，每次10分鐘，0.2%TritonX—100透化2—5分鐘，1XPBS洗3次，每次10分鐘，5%BSA室溫封閉30分鐘，加兔抗人hRAD21抗體和鼠抗人TRF2或PML抗體4°C過夜，1XPBS洗3次，每次10分鐘，依次FITC或TexasRed標(biāo)記的二抗(用1。/^BSA稀釋)30分鐘，閉光，1XPBS洗3次，每次10分鐘，95%甘油封片。用LeicaMicrosystems熒光顯微鏡觀察并拍照。用PHOTOSHOP軟件進(jìn)行圖像處理。結(jié)果如圖2禾卩圖3所示，ALT細(xì)胞中hRAD21蛋白與TRF2禾卩PML蛋白共定位，證實(shí)hRAD21蛋白是APB小體的組成成分。實(shí)施例2:特異性抑制hRAD21基因表達(dá)的雙鏈DNAoligos序列的制備方法反應(yīng)體系如表1所示表1:雙鏈DNAoligos序列反應(yīng)體系<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>_ddH20_70ul_Total_100ul上述反應(yīng)體系混勻，9(TC溫育4分鐘，7(TC溫育IO分鐘，緩慢冷卻至室溫。實(shí)施例3:hRAD21基因的siRNA的表達(dá)質(zhì)粒的制備所用真核表達(dá)質(zhì)粒圖譜如圖4所示。使用BamHI和HindIII進(jìn)行酶切消化，酶切反應(yīng)體系如表2所示。將該反應(yīng)體系的反應(yīng)物置于37。C，lh。于4'C進(jìn)行12小時(shí)連接反應(yīng)。連接反應(yīng)體系如表3所示。用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。從于37"C培養(yǎng)16小時(shí)的新鮮平板中挑取一個(gè)單菌落，轉(zhuǎn)到一個(gè)含有100mlLB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37'C劇烈振搖培養(yǎng)3小時(shí)(旋轉(zhuǎn)搖床，300轉(zhuǎn)/分)。在無菌條件下將細(xì)菌轉(zhuǎn)移到一個(gè)無菌、一次性使用的、用冰預(yù)冷的50ml聚丙烯管中，在冰上放置IO分鐘，使培養(yǎng)物冷卻至0°C。于4°C,以4000轉(zhuǎn)/分離心IO分鐘，回收細(xì)胞。倒出培養(yǎng)液，將管倒置l分鐘,使最后殘留的痕量培養(yǎng)液流盡。以10ml用冰預(yù)冷的O.lmol/LCaC12重懸每份沉淀，放置于冰浴上。于4。C,以4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，回收細(xì)胞。倒出培養(yǎng)液，將管倒置l分鐘,使最后殘留的痕量培養(yǎng)液流盡。每50ml初始培養(yǎng)物用2ml用冰預(yù)冷的O.lmol/LCaC12重懸每份細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞分裝成小份，放于-7(TC凍存。轉(zhuǎn)化用冷卻的無菌吸頭從每種感受態(tài)細(xì)胞懸液中各取20(^1轉(zhuǎn)移到無菌的微量離心管中，每管加2pl連接液，輕輕旋轉(zhuǎn)以混勻內(nèi)容物，在冰中放置30分鐘。將管放到預(yù)加溫到42。C的循環(huán)水浴中放好的試管架上，恰恰放置90秒，不要搖動(dòng)試管?？焖賹⒐苻D(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻1一2分鐘。每管加800WS。C培養(yǎng)基。用水浴將培養(yǎng)基加溫至37"，然后將管轉(zhuǎn)移到37'C搖床上，溫育45分鐘使細(xì)菌復(fù)蘇。將150pi已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含20mmo1/LMgS04和Amp抗性的SOB瓊脂培養(yǎng)基上。將平板置于室溫直至液體被吸收。倒置平皿，于37'C培養(yǎng)，16小時(shí)。在293T細(xì)胞中，采用WesternBlot的實(shí)驗(yàn)方法，在蛋白水平鑒定目的基因在實(shí)施例2提供的RNAi靶點(diǎn)干擾情況下的敲減效率。轉(zhuǎn)染方法針對(duì)內(nèi)源表達(dá)的蛋白質(zhì)，采用Invitrogen的Lipofectin2000Kit進(jìn)行不同靶點(diǎn)化學(xué)合成siRNA的轉(zhuǎn)染導(dǎo)入，檢測(cè)不同靶點(diǎn)RNAi的敲減效率。結(jié)果如圖5所示，實(shí)施例2提供的RNAi靶點(diǎn)對(duì)hRAD21基因，在蛋白水平有明顯kn"Ckdown作用。每次實(shí)驗(yàn)針對(duì)每個(gè)RNAi靶點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)重復(fù)，并平行設(shè)定轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照RNA干擾的兩組對(duì)照實(shí)驗(yàn)。同時(shí)設(shè)置了陽(yáng)性對(duì)照GAPDH的RNA干擾實(shí)驗(yàn)組,用來監(jiān)測(cè)整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng),轉(zhuǎn)染和RNA干擾實(shí)驗(yàn)體系的效率。表2:酶切反應(yīng)體系<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例4:應(yīng)用實(shí)施例3制備的表達(dá)質(zhì)粒對(duì)ALT腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用常規(guī)方法培養(yǎng)ALT惡性腫瘤細(xì)胞(G292),棄去細(xì)胞液，力Q2mlPBS洗一次。加1ml胰酶消化1-2分鐘。棄去胰酶，加3-4mlDMEM(不含血清)吹打均勻。將細(xì)胞滴加于6孔培養(yǎng)板中(每孔2ml)，培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)胞融合度控制在7080%。配制工作母液在2.5nmol的雙鏈siRNA中加入125pilXUniversalBuffer,得到濃度為20的si頭A母液，工作母液于9(TC保溫2分鐘，自然冷卻至室溫后置于4"C過夜備用。對(duì)于6孔板的每個(gè)孔，用1.34嗎si脂A雙鏈(IOOpmol)。把20M的siRNA雙鏈與23^1DMEM混合。將LipofectAMINE2000試劑輕柔搖勻，取LipofectAMINE2000試劑在另一管中與245^1DMEM混合，在室溫下溫育5分鐘。把稀釋后的siRNA與稀釋后的LipofectAMINE2000進(jìn)行混合，輕輕地顛倒混勻。在室溫下溫育20分鐘，以便形成siRNA與LipofectAMINE2000稀釋液的轉(zhuǎn)染復(fù)合物。把siRNA與LipofectAMINE2000的混合液加入培養(yǎng)細(xì)胞，輕柔前后推搖培養(yǎng)板以混勻液體。然后將培養(yǎng)板送入細(xì)胞培養(yǎng)箱。用常規(guī)方法進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果如圖6所示siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，細(xì)胞周期大部分停滯于SG2期。序列表<110>首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院^20抑制人hRAD21基因表達(dá)的siRNA和表達(dá)質(zhì)粒及其在制藥中的應(yīng)用<160〉8<170>PatentlnVersion2.1<210>1<211>62<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉雙鏈DNAoligos序列一正向鏈序列<400>1gatcccgcccatgtgttcgagtgtattcaagagatacactcgaacacatgggc籠tgg60at62<210>2<211〉62<212>DNA<213>人工序列<220><223>雙鏈DNAoligos序列一反向鏈序列<400>2agctatccaaaaagcccatgtgttcgagtgtatctcttgaatacactcgaacacatgggc60gg"<210>3<211>64<212>DNA<213〉人工序列<220><223>雙鏈DNAoligos序列一正向鏈序列<400>3gatcccgctgatagccttcagctacattcaagagatgtagctgaaggctatcagcttttt60ggat64<210〉4<211>64<212>DNA<213>人工序列<220><223〉雙鏈DNAoligos序列一反向鏈序列<400>43gctetcc3a3犯gctgatsgccttcsgct3C3tctcttga噸t昭ctgaaggct3tca60gcgg64<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉A(chǔ)CTB上游引物序列<■>5catgtacgttgctatccaggc21<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>ACTB下游引物序列<400>6ctccttaatgtcacgcacgat21<210>7<211>21<212>DNA<213〉人工序列<220><223>hRAD21上游引物序列<400>7gagcaccagcaatctgaatga21<210>8<211>23<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉hRAD21下游引物序列<400>8aggcccacccattgatacattat2權(quán)利要求1.靶向人hRAD21基因和/或蛋白的抑制劑在制備用于治療端粒酶陰性惡性腫瘤和/或端粒酶抑制劑耐受的惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的人hRAD21基因和/或蛋白的抑制劑，其特征在于該抑制劑是一種特異性抑制人hRAD21基因表達(dá)的雙鏈DNAoligos序列，其特征在于該雙鏈DNAoligos序列是下列兩種雙鏈DNAoligos序列中的一種或兩種，其堿基序列如下1#5'GATCCCGCCCATGTGTTCGAGTGTATTCAAGAGATACACTCGAACACATGGGCTTTTTGGAT3'AGCTATCCAAAAAGCCCATGTGTTCGAGTGTATCTCTTGAATACACTCGAACACATGGGCGG2#:5'GATCCCGCTGATAGCCTTCAGCTACATTCAAGAGATGTAGCTGAAGGCTATCAGCTTTTTGGATTAGCTGAAGGCTATCAGCGG3.根據(jù)權(quán)利要求l，2所述的人hRAD21基因和/或蛋白的抑制劑，其特征在于該抑制劑是一種可以產(chǎn)生特異性抑制人hRAD21基因表達(dá)的雙鏈DNAoligos序列的RNA干擾質(zhì)粒，其特征在于該質(zhì)粒具有以下基本結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子；hRAD21編碼區(qū)；終止密碼；環(huán)狀雙鏈DNA分子。所述的啟動(dòng)子為真核基因中可啟動(dòng)產(chǎn)生小雙鏈RNA的序列，它是啟動(dòng)下游基因表達(dá)的原件；所述的hRAD21編碼區(qū)為表達(dá)權(quán)利要求1所述的雙鏈DNAoligos序列的編碼區(qū)；所述的終止密碼為采用56個(gè)T作為終止編碼區(qū)合成的終止密碼序列；所述的環(huán)狀雙鏈DNA分子為任何真核質(zhì)粒載體和/或病毒的介于編碼區(qū)和啟動(dòng)子之間的DNA序列，含有質(zhì)粒載體DNA的復(fù)制起始位點(diǎn)，或含有抗生素抗性基因。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)粒，其特征在于啟動(dòng)子可以是人的RNA聚合酶III的啟動(dòng)子或人的HI啟動(dòng)子。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)粒，其特征在于其DNA序列中所述的任何真核質(zhì)粒載體和/或病毒是pLuescriptSk、pcDNA3.0、pcDNA3.1、pMALC-2、Plncx、腺病毒、腺相關(guān)病毒或仙臺(tái)病毒。6.權(quán)利要求2所述的雙鏈DNAoligos序列在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求3、4、5所述的質(zhì)粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種特異性抑制人hRAD21基因表達(dá)的siRNA及該siRNA的表達(dá)質(zhì)粒和它們?cè)谥苽渲委熁蝾A(yù)防與人hRAD21基因有關(guān)的腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用生物計(jì)算機(jī)信息技術(shù)從GenBank中獲得一組人hRAD21基因序列，并以RNA干擾技術(shù)為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)出一組能誘發(fā)hRAD21RNA干擾的siRNA，通過化學(xué)法合成或質(zhì)粒載體表達(dá)一定量的siRNA，從而特異性抑制人hRAD21基因的表達(dá)。達(dá)到抑制腫瘤的發(fā)生和生長(zhǎng)的目的。該siRNA及其表達(dá)質(zhì)?？捎糜谥苽渲委煻肆Ｃ戈幮缘膼盒阅[瘤的特異性藥物。文檔編號(hào)A61K48/00GK101574528SQ20091011975公開日2009年11月11日申請(qǐng)日期2009年3月26日優(yōu)先權(quán)日2009年3月26日發(fā)明者王振軍,博趙申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院