專利名稱：環(huán)六肽抗菌化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是從土壤放線菌發(fā)酵液中提取分離的一類
yanglingmycinso
背景技術(shù)：
從微生物次生代謝物中篩選生物活性物質(zhì)是新藥研究與開發(fā)的一個重要途徑。截 止目前為止，已經(jīng)明確結(jié)構(gòu)的微生物次級代謝產(chǎn)物超過50000多個，其中具有明確生物活 性的化合物22000多個。自Wakesman從灰鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離到鏈霉素以后，土壤放線 菌就成為抗生素的最主要來源，其所產(chǎn)生的抗生素數(shù)量占所有微生物活性代謝物的47%。Yanglingmycins i 由^> 畠自 K M ^ ± ^ Φ W Streptomyces alboflavus No. 313代謝產(chǎn)生的一類新型環(huán)六肽抗菌化合物，主要包括yanglingmycin A，B和C三個組 分。其氨基酸組成包括纈氨酸和其它非常見氨基酸，如2-甲氨基丙酸、哌嗪-3-羧酸以及 6_氯-3α-羥基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3_并]B引哚_2_羧酸等。目前已發(fā)現(xiàn)的 與此結(jié)構(gòu)類似的環(huán)六肽抗生素還有himastatin和chloptosin，但后二者均是兩個環(huán)六肽 形成的二聚體，同時在氨基酸組成上也存在差異。Yanglingmycins 對蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯草桿菌(B. subtilis)， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methicil lin-resistantStaphtlococcus aureus)等多種革蘭氏陽性細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins。采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振等波譜技術(shù)，確定了本發(fā)明所涉及化合物的化學(xué)結(jié) 構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式如下所示。 Yanglingmycin A由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸和三分子哌嗪-3-羧酸共計四種氨基酸組成，各 氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。Yanglingmycin B由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，80-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸、2，3，4，5_四氫噠嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧 酸共計四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。Yanglingmycin C由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸、4-羥基-6-甲氧基_1，2，3，4-四氫噠嗪-3-羧 酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是Yanglingmycins對蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯 草桿菌(B. subtilis)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等多種革蘭氏陽性 細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，尤其是對重要的抗性菌，如耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcusaureus, MRSA)具有很好的抑制活性。
具體實施例方式通過下述實施例有助于理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。實施例一Yanglingmycin A的分離及結(jié)構(gòu)鑒定Streptomyces albofIavus 發(fā)酵液(50L)經(jīng) 200 目篩網(wǎng)過濾后，用草酸調(diào) pH 3.5， 靜置、過濾，加NaOH調(diào)濾液至中性，用2kg HPD-400大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附過夜。將吸附 好的大孔吸附樹脂裝入層析柱中，先用去離子水洗脫5000mL，洗脫液棄去。再用水甲醇 =7 3,6 4,5 5,4 6 (V/V)及純甲醇五種洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，每種洗脫液洗脫 5000mL，收集水甲醇=4 6 (V/V)洗脫的餾分，減壓濃縮至50mL。濃縮液經(jīng)0. 45 μ m濾 膜過濾后用制備液相色譜純化，得到y(tǒng)anglingmycin A 6. 3g。
采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振波譜技術(shù)鑒定yanglingmycin A的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其主要 物理常數(shù)如下YanglingmycinA，無色微晶，熔點(diǎn):208 210°C，[o^(cl. 0，-120°，MeOH)，UVw 218nm, IR :3425，1638，1534，1444，1406，1073，660CHT1。HR-ESI-MS :m/z 757. 3460[M+H]+， (C35H5tlNltlO7Cl,計算值757. 3552)，結(jié)合1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)，確定化合物的分子式為 C35H49N1q07C1。Yanglingmycin A 的核磁波譜數(shù)據(jù)見表 1。實施例二Yanglingmycins 的抑菌活性采用微量稀釋法測定yanglingmycin A對蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯草 桿菌(B. subtilis)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，大腸桿菌(Escherichia coil)，綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methici llin-resistantStaphylococcus aureus, MRSA)等六種供試細(xì)菌的抑菌活性，耐甲氧西林 金黃色葡萄球菌由南京醫(yī)科大學(xué)提供，其余菌種購自中國普通微生物菌種保藏中心。以接種環(huán)自培養(yǎng)平皿上挑取4 5個相同形態(tài)的供試菌菌落，接入 Mueller-Hinton肉湯中，35°C培養(yǎng)至輕度混濁后(約3 5h)轉(zhuǎn)入0. 9%生理鹽水中，調(diào)整 到麥?zhǔn)蠞岫葹?. 5 (使其在650nm波長下吸光度為0. 020，此時相當(dāng)于1. 5 X IO8CFU · mL—1)， 再用Mueller-Hinton肉湯稀釋200倍，其接種量則相當(dāng)于7. 5X IO5CFU · mL—1。將稀釋好 的接種液轉(zhuǎn)入96孔板中，每孔加液量100 μ L，再分別加入無菌水配制的不同濃度待測藥液 100 μ L，每板另設(shè)不加任何藥劑的空白對照和加藥不接菌對照，實驗中每個處理設(shè)三次重 復(fù)。氨芐青霉素為陽性對照藥劑。將處理好的96孔板置培養(yǎng)箱中，35°C培養(yǎng)20h，650nm測 定透光率，記錄不同藥劑對供試細(xì)菌的MIC值。以透光率大于85%為抑制生長的標(biāo)準(zhǔn)，MIC 為抑制生長的最低濃度。實驗結(jié)果見表2。Yanglingmycin A對蠟狀芽孢桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌以及耐甲氧西林的 金黃色葡萄球菌均具有很強(qiáng)的抑制作用，其活性明顯優(yōu)于對照藥劑氨芐青霉素，但對革蘭 氏陰性菌無明顯活性。表1 Yanglingmycin A 的核磁波譜數(shù)據(jù)(CD3OD, 500MHz)
表2 Yanglingmycin A對六種供試細(xì)菌的抑菌活性
權(quán)利要求
一類新的環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins，其結(jié)構(gòu)式如下所示F2009101279942C0000011.tif
2.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinA由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯-3α -羥 基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3_并]吲哚_2_羧酸和三分子哌嗪_3_羧酸共計四種 氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。
3.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinB由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、 6-氯-3 α-羥基-1，2，3，3 α，8，8 α-六氫吡咯[2，3_并]吲哚_2_羧酸、2，3，4，5-四氫噠 嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。
4.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinC由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、 6-氯-3 α-羥基-1，2，3，3 α，8，8 α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚_2_羧酸、4_羥基_6_甲氧 基-1，2，3，4-四氫噠嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計四種氨基酸組成，各氨基酸的 構(gòu)型為L-型或D-型。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物用作抗菌藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins，屬藥物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及的化合物其結(jié)構(gòu)式如下所示，其氨基酸組成包括纈氨酸和其它非常見氨基酸，如2-甲氨基丙酸、哌嗪-3-羧酸以及6-氯-3α-羥基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸等，各氨基酸的構(gòu)型為L-型或D-型。本發(fā)明涉及的化合物對蠟狀芽孢桿菌，枯草桿菌，金黃色葡萄球菌以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌等多種革蘭氏陽性細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用。
文檔編號A61K38/12GK101845081SQ20091012799
公開日2010年9月29日 申請日期2009年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月24日
發(fā)明者吳文君, 姬志勤, 郭正彥 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所