專利名稱：：紅景天苷防治骨質(zhì)疏松的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及紅景天植物的有效成分在防治骨質(zhì)疏松中的新用途。
背景技術(shù)：
：骨質(zhì)疏松是一種以骨量減少和骨微結(jié)構(gòu)的破壞為特征，導(dǎo)致骨脆性增加和易于發(fā)生骨折的代謝性骨病。隨著全球人口的老齡化，骨質(zhì)疏松在全世界常見病、多發(fā)病中的位置逐漸上升至第7位，患病人數(shù)超過2億，其中5060歲發(fā)病率為21%，6070歲發(fā)病率為58%，70歲以上幾乎是100%,尤其是絕經(jīng)后婦女的發(fā)病率更高。目前我國已有骨質(zhì)疏松患者約9000萬人。在骨的形成過程中，以清除受損碎片，形成骨洞為主要作用的破骨細(xì)胞(osteoclasts,ocs)和以沉積鈣質(zhì)，填充骨洞為主要作用的成骨細(xì)胞(osteoblasts,obs)相互協(xié)調(diào)，使骨質(zhì)的形成與溶解處于一種動態(tài)平衡，維持骨質(zhì)的不斷更新。當(dāng)此動態(tài)平衡被打破，骨溶解超過骨形成時，即導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。因此，任何能夠直接或間接作用于成骨細(xì)胞和/或破骨細(xì)胞，有助于保持其動態(tài)平衡的物質(zhì)，均可能具有防治骨質(zhì)疏松的作用。目前常用的治療骨質(zhì)疏松癥方案有兩種針對破骨細(xì)胞控制骨質(zhì)的損失；增強(qiáng)成骨細(xì)胞沉積鈣質(zhì)填充骨洞的作用。大量臨床病例證明，單純通過抑制骨吸收而保留的骨質(zhì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能彌補(bǔ)骨質(zhì)疏松過程中的骨量丟失，因此，通過改善骨質(zhì)形成的代謝，增強(qiáng)成骨細(xì)胞的作用，最終達(dá)到恢復(fù)患者骨水平為目的的治療方案日益受到人們的重視。大量研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，骨成形蛋白BMP-2(bonemorphogeneticprotin-2,BMP-2)可增加成骨細(xì)胞分化標(biāo)志堿性磷酸酶、I型膠原和骨鈣蛋白等基因的表達(dá)，促進(jìn)軟骨和骨的形成。進(jìn)一步的研究還表明，不表達(dá)bmp-2的成骨細(xì)胞不具備分化能力，但若對這種細(xì)胞加入外源性的重組BMP-2蛋白或?qū)mp-2基因的cDNA導(dǎo)入這種細(xì)胞后，可促進(jìn)它的分化，表明bmp-2基因的表達(dá)對于成骨細(xì)胞是必不可少的。1999年，Mundy等報道，他們利用轉(zhuǎn)基因鼠成骨細(xì)胞建立了一種可篩選促BMP-2表達(dá)的活性物質(zhì)的模型，并用此模型篩選促成骨細(xì)胞分化的活性物質(zhì)，證明lovastatin、simvastatin等藥物具有促成骨細(xì)胞分化作用(Science286:1946-1949，1999)。隨后，很多研究者利用其它方法，也發(fā)現(xiàn)Statins類藥物可促進(jìn)bmp-2mRNA和蛋白的表達(dá)。高山紅景天是景天科紅景天屬的多年生草本植物，分布于俄羅斯西伯利亞及我國東北等高緯度寒冷地區(qū)，具有類似中醫(yī)扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)身的"適應(yīng)原樣"的作用。紅景天苷(salidroside，C14H2()07)是高山紅景天的主要成分之一。目前紅景天苷的來源可以是天然提取，亦可人工合成?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，紅景天對人體免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及代謝系統(tǒng)具有良好的調(diào)理作用，主要功能有抗疲勞、強(qiáng)心、抗炎、抑制血糖升高、抗氧化和抗微波輻射等作用。但是，本發(fā)明所涉及紅景天有效成分紅景天苷在抗骨質(zhì)疏松方面的作用與功效，迄今為止，尚未見有相關(guān)的報道。本發(fā)明的目的是提供紅景天有效成分在抗骨質(zhì)疏松方面的新用途，具體而言，是提供紅景天苷在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明采用兩步樹脂法工藝(專利公開號CN1880326A)制備了紅景天苷，進(jìn)行了系列生物學(xué)實驗研究，為開拓紅景天苷防治骨質(zhì)疏松的新用途提供了依據(jù)。生物學(xué)實驗研究結(jié)果表明1.采用促骨成形蛋白bmp-2表達(dá)的抗骨質(zhì)疏松藥物篩選模型，能夠顯著上調(diào)bmp-2的表達(dá)效應(yīng)。2.釆用紅景天苷處理成骨細(xì)胞，能夠顯著上調(diào)成骨細(xì)胞中bmp-2的mRNA水平。3.采用紅景天苷處理成骨細(xì)胞能夠顯著上調(diào)成骨細(xì)胞中BMP-2蛋白水平。4.體外藥理實驗結(jié)果證明，紅景天苷能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，上調(diào)堿性磷酸酶活性和促進(jìn)膠原合成，顯著增加成骨性的骨形成。發(fā)明效果本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果在于，通過系統(tǒng)生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)并證明，紅景天苷能上調(diào)人成骨細(xì)胞中bmp-2基因的mRNA表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶活性和膠原合成，增加成骨性的骨形成，有望將其開發(fā)成為防治骨質(zhì)疏松疾病的藥物。-圖1:含小鼠bmp-2基因啟動子的轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pYJ2的構(gòu)建圖2:紅景天苷上調(diào)模型中bmp-2表達(dá)效應(yīng)其中縱坐標(biāo)一bmp-2表達(dá)效應(yīng)上調(diào)率(％)橫坐標(biāo)一紅景天苷濃度(/xg/ml)圖3:紅景天苷上調(diào)成骨細(xì)胞中bmp-2的mRNA水平其中1—空白對照2—紅景天苷(2jug/ml)作用24小時3—Marker圖4:紅景天苷上調(diào)成骨細(xì)胞中BMP-2蛋白水平其中縱坐標(biāo)一BMP-2蛋白上調(diào)率(％)橫坐標(biāo)一A-空白對照B-紅景天苷(1/xg/ml)作用24小時C-紅景天苷(1/ig/ml)作用48小時實施方式以下所列實施例，僅為幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。<實施例1〉紅景天苷的制備取市售紅景天初提取物500克，加水5000ml溶解，加熱至3(TC，攪拌保溫2.5小時。過濾得到澄清濾液。濾液調(diào)節(jié)pH至3，常溫下流過HZ—816吸附樹脂(上海華震科技有限公司)柱，然后通入30%的乙醇1200ml，收集流出液。流出液濃縮至糖漿狀，加入HZ—816吸附樹脂混合均勻并烘干。按照烘干的吸附樹脂已裝柱的吸附樹脂=1:6的比例，將烘干的樹脂加入已填充了HZ—816吸附樹脂的層析柱，常溫下通入15%的乙醇溶液進(jìn)行層析。收集層析液，濃縮至干。加入乙醇溶解，加熱至50'C，趁熱過濾。濃縮濾液，冷卻至0。C，析出結(jié)晶，濾液回收套用。紅景天苷結(jié)晶用乙醇清洗后，6(TC真空干燥，得到紅景天苷白色粉末，經(jīng)HPLC測定，純度為97.2%。<實施例2〉紅景天苷對模型中bmp-2表達(dá)效應(yīng)的影響實驗方法:采用一種促骨成形蛋白bmp-2表達(dá)的新型抗骨質(zhì)疏松藥物篩選模型(專利公開號CN1441060A)，通過模型構(gòu)建、細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染和熒光檢測等步驟，觀察紅景天苷對模型中bmp-2表達(dá)效應(yīng)的影響。操作如下模型構(gòu)建取含小鼠bmp-2基因啟動子區(qū)的氯霉素乙?；笀蟾尜|(zhì)粒pCAT4.5X(來自MelissaB.Rogers,UniversityofSouthFlorida),用Xbal和Xhol雙酶切后，取帶啟動子區(qū)片段-3365至-1658bp與用Xbal和Xhol雙酶切后純化的質(zhì)粒pSK(美國Stratagene公司)以3:1(摩爾比)的比例進(jìn)行粘性末端連接，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞，挑取克隆，鑒定后得到重組質(zhì)粒PYJ1。然后用pSK酶切位點中的SacI和Xhol將PYJ1中的啟動子區(qū)切出并克隆到不含啟動子的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒pGL3-Basic(美國Promega公司)得到PYJ2，完成了啟動子與報告基因的相連，從而完成PYJ2熒光素酶檢測模型的構(gòu)建(圖l)。細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染采用LipofectAMINE2000Reagent轉(zhuǎn)染試劑盒(Invitrogen公司)來完成。操作如下.-1)將100Ml/孔適量濃度的MC3T3E1(小鼠顱骨細(xì)胞)細(xì)胞在96孔無菌塑料培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)8小時；2)用25/xl/孔無血清無雙抗DMEM培養(yǎng)基稀釋適量PYJ2質(zhì)粒DNA于無菌離心管中；3)在另一個無菌離心管中用25/xl/孔無血清無雙抗DMEM培養(yǎng)基稀釋0.5m1/孑LLF2000Reagent;4)在5分鐘之內(nèi)，將上述兩管合并混勻，室溫下再孵育20分鐘；5)將混合后的轉(zhuǎn)染懸液加到上述96孔板內(nèi)，每孔50/d;6)充分混勻后將96孔板置于37'C二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時后，進(jìn)行熒光檢測或加入適量濃度的紅景天苷作用細(xì)胞48小時后再進(jìn)行熒光檢測。熒光檢測細(xì)胞熒光素酶表達(dá)活性的測定，采用熒光檢測試劑盒(LuciferaseAssaySystem)。操作步驟如下1)棄去96孔板中的培養(yǎng)基，注意不要刮掉孔底貼壁的細(xì)胞；2)用200/d/孔的PBS(pH7.0)輕輕漂洗細(xì)胞后，完全棄去PBS;3)加入25;ul/孔的1xPLB(細(xì)胞裂解液)，室溫下振搖15分鐘，使細(xì)胞完全裂解；4)將裂解液完全吸出到熒光分析用96孔白板相應(yīng)孔內(nèi)，注意將細(xì)胞裂解液徹底轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移前將細(xì)胞裂解液吹吸均勻。5)加入70Ml/孔的分析試劑LARlI于分析用白板內(nèi)后，立即(5分鐘內(nèi))將分析用白板置于Galaxy分光光度計內(nèi)，讀數(shù)并記錄。實驗結(jié)果紅景天苷在0.15.0/xg/ml范圍內(nèi)劑量依賴性上調(diào)模型中bmp-2的表達(dá)效應(yīng)，在0.625;iig/ml處上調(diào)率達(dá)22。/()左右，于2.5/xg/ml達(dá)到最佳效果，上調(diào)率達(dá)26%左右(圖2)。<實施例3〉紅景天苷上調(diào)人成骨細(xì)胞中bmp-2的mRNA水平實驗方法接種MG63細(xì)胞(人成骨樣細(xì)胞)于6孔板，約1"06個/孔，待細(xì)胞貼壁后，換無血清DMEM，同時加入紅景天苷(2pg/ml)作用24小時后，使用TRIZOL(—種常用的RNA提取試劑，購自Invitrogen公司)提取總RNA。進(jìn)而采用人bmp-2的cDNA序列引物進(jìn)行RT-PCR，選擇持家基因3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參。最后將RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，檢測目的條帶。具體操作如下1.總RNA的提取1)加入1ml/每孔(6孔板)的TRIZOL溶解細(xì)胞；2)細(xì)胞裂解液在153(TC孵育5分鐘，以使核蛋白體完全分解；3)每1mlTRIZOL加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振搖15秒，再在30。C下孵育23分鐘；4)在2~8'C下以不超過12，OOOg的離心力高速冷凍離心15分鐘。離心后混合物分成三層下層紅色的苯酚-氯仿層，中間層，上層無色的水樣層，RNA存在于水樣層當(dāng)中；5)將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入每lmlTRIZOL對應(yīng)的0.5ml異丙醇沉淀RNA;6)將混合的樣品在15-30。C孵育10分鐘，并在28。C下以不超過12，000g的離心力高速冷凍離心IO分鐘。RNA沉淀形成一膠片狀沉淀附著于管壁和管底；7)棄上清后用75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，每1ml的TRIZOL至少加1ml的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2~8。C下以不超過7，500g的離心力高速冷凍離心5分鐘；8)簡單干燥RNA沉淀(空氣干燥或真空干燥510分鐘)；9)用移液管尖分幾次移取100(al不含RNase的水溶解RNA，并在5560'C孵育IO分鐘；10)分裝后-70'C保存?zhèn)溆谩?.引物的設(shè)計人bmp-2的cDNA片段擴(kuò)增引物，引物1:5'-GGTCCTGAGCGAGTTCGA-3'引物2:3'-ACACTACGCCACCTGACG-5'GAPDH的擴(kuò)增引物引物l:5'-GGGCTCTCCAGAACATCATC-3'引物2:3'-ACGGGAGTTGCTGGTGAAAC-5'3.RT-PCR根據(jù)兩步法RT-PCR試劑盒使用說明，以總RNA為模板、OigodT2o為引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。(l)cDNA的合成1)混合1pd引物(50gMOigo(dT)20)、4/xlRNA模板、2/il10mMdNTPMix、5jidDEPC處理水，總體積12/d。2)65。C5分鐘使RNA、primer變性，取出置于冰上。3)混搖5xcDNASynthesisBuffer5秒備用。4)冰上配制如下混合液，并輕輕振搖(1個反應(yīng)體系)4jul5xcDNASynthesisBuffer、l/d0.1MDTT、RNaseOUTTM(40U稱1/^1DEPC-處理水、1AdThermoScriptTMRT(l5U/jul)。5)取8Ml上述混合液于2)內(nèi)已經(jīng)冰浴的EP管。6)輕輕混勻后于50。C孵育30-60分鐘。7)在85"C孵育5分鐘以終止反應(yīng)。8)力B1MlRNaseH并于37。C孵育20分鐘。9)將上述產(chǎn)物分裝后置于-20'C保存，或進(jìn)行隨后的PCR。(2)以cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)體系(50/J)cDNA模板4.0jLd10|nMBMP-2引物11.5pi10BMP-2引物21.5pi10mMdNTP1.0/xl50mMMg2+1.0piplatinum@TaqDNA酶(lU//xl)1.0/dlOxPCRBuffer5.0piddH2033.0^擴(kuò)增條件94°C94°C58°C72°C72°C4°C5mm1min40sec50sec10min可長久保存30個循環(huán)擴(kuò)增到IO個循環(huán)后立即暫停擴(kuò)增，取出PCR管置于冰上，每管加入內(nèi)參GAPDH的擴(kuò)增引物各0.5/xl/管，混勻后再置于擴(kuò)增儀內(nèi)繼續(xù)擴(kuò)增。(3)瓊脂糖凝膠電泳將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與DNA電泳上樣緩沖液按5:1比例混合，在含0.5/ig/mlEB的1%瓊脂糖凝膠上電泳(恒壓100V，l小時)。紫外燈下觀察電泳結(jié)果。實驗結(jié)果實驗設(shè)計的bmp-2的cDNA序列片斷為500bp，于500bp處，紅景天苷處理的樣品較空白對照的條帶顯著，表明紅景天苷能顯著上調(diào)人成骨細(xì)胞中bmp-2的mRNA水平(圖3)。<實施例4>紅景天苷上調(diào)人成骨細(xì)胞中BMP2蛋白水平實驗方法接種1.(^107個MG63細(xì)胞于6孔板12小時待細(xì)胞貼壁后，換為無血清DMEM，同時加入1/xg/ml紅景天苷分別作用24小時、48小時。用適量0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)溶液消化收集細(xì)胞，用冷的PBS洗滌細(xì)胞3次，800rpm，5分鐘離心。多聚甲醛4%(配制時65'C水浴，不斷搖動，直到溶解，兩周內(nèi)使用)2ml室溫固定細(xì)胞，40分鐘后，800rpm，5分鐘離心，PBS2ml重懸細(xì)胞，再次800rpm，5分鐘離心。每個樣品分出部分細(xì)胞用作無一抗陰性對照后，加入山羊抗人BMP-2的多克隆抗體1:40稀釋，飽和劑量(100~200/tl)加入，冰上放置40分鐘，800rpm，5分鐘離心，用冷PBS2ml重懸細(xì)胞，再次800rpm，5分鐘離心，如此洗滌2次，洗去未結(jié)合的一抗。加入HTC(異硫氰酸熒光素)標(biāo)記的二抗(l:IO()稀釋)，冰上避光放置40分鐘后，800rpm，5分鐘離心，去上清，PBS洗滌2次，洗去未結(jié)合的二抗。加入PBS0.5ml重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測，每管計數(shù)10000個細(xì)胞。按下式計算BMP-2的表達(dá)值上調(diào)率上調(diào)率=(實驗組平均熒光強(qiáng)度一無一抗陰性對照組平均熒光強(qiáng)度)/空白對照組平均熒光強(qiáng)度xiooy。。實驗結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)是靈敏度較高的檢測蛋白表達(dá)水平的一種方法，實驗發(fā)現(xiàn)，1/ig/ml紅景天苷作用24和48小時后，MG63細(xì)胞內(nèi)BMP-2的表達(dá)值上調(diào)率均明顯高于空白對照組(圖4)，均高于20%，說明紅景天苷可上調(diào)MG63細(xì)胞BMP-2蛋白的表達(dá)。<實施例5〉紅景天苷對人成骨細(xì)胞MG63增殖、堿性磷酸酶活性和膠原合成的促進(jìn)作用實驗方法MG63細(xì)胞培養(yǎng)于含10。/。胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，傳代后進(jìn)行下列試驗。MTT試驗測定細(xì)胞增殖活力將細(xì)胞懸浮在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度為3X10"個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100/U，于37t:，C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24小時后，換含不同濃度紅景天苷的DMEM培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)72小時，在培養(yǎng)結(jié)束前4小時，每孔加入20/ilMTT(5mg/ml)，培養(yǎng)結(jié)束后，棄上清液，每孔加入150/xlDMSO，搖振使紫色結(jié)晶顆粒完全溶解，于570nm處測吸收值(OD570)。堿性磷酸酶的活性測定將細(xì)胞懸浮在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度為lxl()S個/ml，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔lml，培養(yǎng)24小時，細(xì)胞貼壁后，換含不同濃度紅景天苷的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。紅景天苷作用6天后，用PBS洗潘細(xì)胞3次，加入5Ommol/L的二乙醇胺200/xl及2.5mmol/L的對硝基苯酚磷酸二鈉lOO]itl，37。C反應(yīng)30分鐘后，用0.3mol/L的NaOH100/xl終止反應(yīng)，取150/il加入96孔板，于405nm處測其吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線為不同濃10度的對硝基苯酚溶液在405nm處的吸收值與濃度所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線。3H-proline(311-脯氨酸)慘入試驗將細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基懸浮，調(diào)整細(xì)胞濃度為3xl(/個/ml，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100]Ul，培養(yǎng)24小時后，換含不同濃度紅景天苷和10。/。胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時，并于結(jié)束培養(yǎng)前12小時，每孔加入1/1d的3H-proline，培養(yǎng)結(jié)束時，棄上清液，用0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞，使其脫壁。用自動細(xì)胞收集器收集細(xì)胞于玻璃纖維素濾紙上。用液體閃爍計數(shù)儀測定其放射性。統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示，兩組均數(shù)比較采用兩樣本t檢驗，PO.05為差別具有顯著意義，P<0.01為差別有非常顯著意義。實驗結(jié)果1.紅景天苷對成骨細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果見表l。表1紅景天苷對成骨細(xì)胞增殖的影響(n=6，X±SD)濃度(mol/L)OD值(570nm)空白對照組1.025±0.015紅景天苷組10-81.254±0.012**紅景天苷組l(T71.313±0.019**紅景天苷組IO-61.389±0.072**與空白對照組比較**P<0.01在骨代謝過程中，成骨細(xì)胞主要參與骨質(zhì)的形成。由表l可見紅景天苷在10-8l(^mol/L濃度下培養(yǎng)72小時，對人成骨細(xì)胞的增殖具有顯著的促進(jìn)作用，說明該化合物可通過增加成骨細(xì)胞的數(shù)目促進(jìn)骨形成。2.紅景天苷對成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響，結(jié)果見表2。表2紅景天苷對成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響(n=6,X±SD)濃度(mol/L)堿性磷酸酶活性(nmol/孔)空白對照組70.5±2.7紅景天苷組10-872.8±3.1紅景天苷組10-782.1±4.0**紅景天苷組l(T691.5±4.3**與空白對照組比較**P<0.01堿性磷酸酶是參與骨代謝的重要蛋白質(zhì)，通過分解磷酸脂的無機(jī)磷，增加其局部濃度，促使類骨質(zhì)迅速鈣化。由表2可見，紅景天苷在10—710—Smol/L濃度下，培養(yǎng)6天能顯著促進(jìn)人成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性，說明該化合物可以通過增加堿性磷酸酶的活性，促進(jìn)成骨細(xì)胞的成骨作用。3.紅景天苷對成骨細(xì)胞膠原合成的影響，結(jié)果見表3。表3紅景天苷對成骨細(xì)胞膠原合成的影響(n=6,X±SD)濃度(mol/L)3H-脯氨酸摻入(cpm)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與空白對照組比較**P<0.01膠原是骨細(xì)胞外最豐富的基質(zhì)蛋白，在維持纖維連接組織的結(jié)構(gòu)及功能上具有重要作用。由表3可見，紅景天苷在10—8~1CT6moI/L濃度下，作用48小時對人成骨細(xì)胞的骨膠原合成具有顯著的促進(jìn)作用，說明該化合物可以促進(jìn)骨形成過程中骨基質(zhì)的形成。權(quán)利要求1、紅景天苷在制備防治骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。2、含紅景天苷為活性成分的藥物組合物在制備防治骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及紅景天植物的有效成分在防治骨質(zhì)疏松中的新用途，實驗研究表明，所說化合物在一種促骨成形蛋白bmp-2表達(dá)的抗骨質(zhì)疏松藥物篩選模型中，能夠顯著上調(diào)bmp-2的表達(dá)效應(yīng)；上調(diào)人成骨細(xì)胞中bmp-2基因的mRNA表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平；明顯促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶活性和膠原合成，增加成骨性的骨形成，從而具有制備防治骨質(zhì)疏松藥物的應(yīng)用前景。文檔編號A61P19/10GK101543502SQ200910136168公開日2009年9月30日申請日期2009年4月30日優(yōu)先權(quán)日2009年4月30日發(fā)明者何琪揚(yáng),司書毅,張月琴,李曉眠,李電東,毛根祥,真王,鄧洪斌申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所