專利名稱：新化合物結(jié)構(gòu)及制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新化合物、含有該新化合物的藥物組合物及其制備方法以及該新化合 物在制備抗腫瘤藥物和治療腫瘤中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是目前威脅人類健康的三大“殺手”之一。據(jù)統(tǒng)計，自2003年以來全世 界每年癌癥發(fā)病為1600萬人，死亡為1000萬人。中國每年癌癥發(fā)病為160萬人，死亡為 100萬人，而且每年還在不斷增加，癌癥防治任重道遠。目前，癌癥治療的手段主要是化療、 放療、手術(shù)和生物方法治療?；熍c放療在殺死腫瘤細胞的同時也損傷正常細胞，嚴重影響 患者的生存和生活質(zhì)量。因此，尋找高效低毒的腫瘤治療藥物，成為當前腫瘤防治領(lǐng)域的重 中之重。上世紀七十年代始研究人員對豆科槐屬植物苦參(Sophora flavescens Alt.)、 苦豆子(Sophora alopecuroides L.)等進行了系統(tǒng)研究，從中發(fā)現(xiàn)了苦參堿、氧化苦參堿、 槐果堿、槐定堿等含喹喏里西啶結(jié)構(gòu)的生物堿化合物?；倍▔A(sophoridine)為苦參堿的 一種立體異構(gòu)體，其基本結(jié)構(gòu)是由3價氮原子形成稠合的哌啶環(huán)，分子量為248，分子式為 C15H24N2O 具有抗炎、抗菌、保護心肌、正性肌力、抗腫瘤、抗病毒作用(參見余建強等.槐 定堿、氧化槐定堿的藥理學(xué)研究進展，寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，27(1) :78-80;李雪梅等，槐 定的抗癌作用，中國藥理學(xué)報，1987，8 (2) 153-158 ；中國專利申請93100881. 6和中國專利 申請03137058. 6等)；氧化槐定堿也被報道有治療惡性腫瘤的作用(參見中國專利申請 200510064670. 0 和中國專利申請 200610013607. 9 等)。雖然槐定堿具有抗腫瘤作用，但其有一定的神經(jīng)系統(tǒng)毒性。為了發(fā)現(xiàn)藥效強，毒性 低的新型抗腫瘤藥物，對已有療效的抗腫瘤藥物進行結(jié)構(gòu)修飾或改造，是一條簡便快捷的 途徑。天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的修飾或改造，是通過化學(xué)和生物學(xué)等方法對活性天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進 行衍生化、轉(zhuǎn)化和活性測定比較等研究，確定其結(jié)構(gòu)中的活性和毒性部位；使經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造 后的新化合物毒性降低，活性和生物利用度提高，在臨床應(yīng)用中更加安全有效。因此，本發(fā) 明人嘗試以槐定堿為起始原料，經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾，創(chuàng)制出毒性低活性強的新型抗腫瘤藥，由此 完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供槐定生物堿(sophoridine)經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾得到 的全新結(jié)構(gòu)的式(I)化合物 及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形 式，以及它們的溶劑化物；式中R1、R2> R3和R4的定義見下文。該化合物具有細胞增殖抑制 以及直接殺傷癌細胞等抗腫瘤活性，可用于治療腫瘤和制備抗腫瘤藥物。因此，本發(fā)明的一個方面是提供具有所述式(I)結(jié)構(gòu)的一類新化合物。本發(fā)明的另一方面是提供所述式(I)化合物的制備方法。本發(fā)明的再一個方面是提供含有所述式(I)化合物的藥物組合物和藥用制劑。本發(fā)明的又一個方面是提供所述式(I)化合物在制備用于治療和/或預(yù)防腫瘤的 藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一個方面是提供式(I)化合物作為體外抑制細胞增殖的低分子生物 探針的應(yīng)用。本發(fā)明的又一個方面是提供治療和/或預(yù)防哺乳動物腫瘤的方法，包括將治療或 預(yù)防有效量的本發(fā)明式(I)化合物給予需要此治療或預(yù)防的哺乳動物。在上述本發(fā)明的式(I)化合物中R1 選自 H、0H、SH，或者 C1-Cltl 烷基、C2-Cltl 鏈烯基、C2-Cltl 炔基、C3-C8 環(huán)烷基或 C4-C12 環(huán)烷基烷基，或者C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基，其中每個C1-Cltl烷基、C3-C6環(huán)烷基、C4-C12環(huán) 烷基烷基、C6-Cltl芳基和C4-Cltl雜環(huán)基任選被1、2或3個獨立選自下列的取代基取代=C1-C6 烷基、C3-C6 環(huán)烷基、鹵素、C1-C4 鹵代烷基、CN、OR5、SH、S(O)nR5, COR5、NR6COR5、N(COR5)2, NR6CONR7R5,NR6CO2R5, CONR7R5, C1-C6烷硫基^1-C6烷基亞硫酰基以及C1-C6烷基磺?；?，而其 中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C10烷基、C (0) C3-C8環(huán)烷基、C1-Cltl烷基、C2-Cltl鏈烯基和C2-Cltl炔基；R2 選自=0、= S、H、OH、SH,或者 C1-C10 烷基、C2-C10 鏈烯基、C2-C10 炔基、C3-C8 環(huán) 烷基或C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基、N02、鹵素、CNaC1-C4鹵代烷基、NR8R9、 NR6COR9, NR6CO2R9, COR9、OR9、CONR8R9, CON (OR1。) R9、CO2R9 或 S (0)nR9，其中每個 C1-C10 烷基、 C3-C6環(huán)烷基、C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基和C4-Cltl雜環(huán)基任選被1、2或3個獨立選自下 列的取代基取代 ^1-C4 燒基、N02、鹵素、CN、NR8N9、NR6C0R9、NR6C02R9、C0R9、0R9、C0NR8R9、C02R9、 CON (OR10) R9或S (0) nR9，而其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C10烷基、C (0) C3-C8環(huán)烷基、C1-Cltl烷基、C2-Cltl鏈烯基和C2-Cltl炔基；R3不存在(R3不存在時，所連氮為叔氮)或者選自O(shè)H、SH或為N-氧化物，其中的 OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (O)Q-Cltl烷基、C(O)C3-C8 環(huán)烷基、C1-Cltl烷基、C2-Cltl鏈烯和C2-Cltl炔基；R4為0_、OR10或SH，當R4為0_時，該0_與式(I)中的N+形成內(nèi)鹽；并且ORiq(當 Rltl為H時)和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C「C1(I烷基、 C (0) C3-C8環(huán)烷基、C1-Cltl烷基、C2-Cltl鏈烯基和C2-Cltl炔基；R5和R7各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C3-Cltl環(huán)烷基、C4-C16環(huán)烷基烷基，但是S(O) nR5中的R5不能為H;R6選自氫或C1-C4烷基；R8、R9選自H ；以及C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；R10選自H、C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基；以及η 為 0、1 或 2。本發(fā)明包括式(1)化合物的所有藥學(xué)上可接受的鹽。所述“藥學(xué)上可接受的鹽”是 指在藥學(xué)上無毒的酸加成鹽和堿加成鹽。這些鹽可以按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法，使用可商購 的試劑制備。所述酸加成鹽為式(1)化合物與合適的無機酸或者有機酸形成的鹽，包括例 如氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、乙 酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、對甲苯磺 酸鹽、甲磺酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、甲苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、 蘋果酸鹽、雙羥萘酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、和乳糖酸鹽等。所述堿加成鹽為 式(1)化合物與合適的無機堿或者有機堿形成的鹽，包括例如與堿金屬、堿土金屬、季銨陽 離子形成的鹽，如鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、四甲基季銨鹽、四乙基季銨鹽等；胺鹽，包括 與氨(NH3)、伯胺、仲胺或叔胺形成的鹽，如甲胺鹽、二甲胺鹽、三甲胺鹽、三乙胺鹽、乙胺鹽寸。本發(fā)明也包括式(1)化合物的所有溶劑化物形式，尤其是水合物。溶劑化物對化 合物的生理活性或毒性沒有明顯影響，因此起藥理學(xué)同等作用。溶劑化物可以以化學(xué)計算 量形成，或可以由外來的溶劑或兩者相結(jié)合形成。一種類型的溶劑化物是水合物，一些水合 形式包括半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等。一些本發(fā)明的式(I)化合物以立體異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明包括式(I)化合物的 所有立體異構(gòu)形式，包括對映體和非對映體，以及立體異構(gòu)體的混合物。制備和分離立體異 構(gòu)體的方法在本領(lǐng)域是已知的。本發(fā)明還包括式(I)化合物的前體藥物形式。在本發(fā)明化合物的一個實施方案中，R1選自H、OH、SH,或者C1-C6烷基、C2-C6鏈烯 基、C2-C6炔基、C3-C6環(huán)烷基或C4-C8環(huán)烷基烷基，或者C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基，其中每個 C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-Cltl芳基和C4-Cltl雜環(huán)基任選被1或2個獨 立選自下列的取代基取代c「c6烷基、C3-C6環(huán)烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基、CN、OR5、SH、S (0) nR5、C0R5,NR6C0R5, N (COR5) 2、NR6CONR7R5、NR6CO2R5, CONR7R5, C1-C6 烷硫基、C1-C6 烷基亞硫?；?以及C1-C6烷基磺酰基，而其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯 或醚C (0) C1-C6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基和C2-C6炔基；
R2選自=0、= S、H、0H、SH，或者CrQ烷基、C2_C6鏈烯基、C2_C6炔基、C3_C6環(huán)烷基或 c4-c8環(huán)烷基烷基、C6-C1Q芳基或C4-C1Q雜環(huán)基、N02、鹵素、CNXi-C；鹵代烷基、NR8R9、NR6C0R9、 NR6C02R9、COR9、OR9、C0NR8R9、CON (OR10) R9、C02R9 或 S (0) nR9，其中每個 CrQ 烷基、c3-c6 環(huán)烷基 或c4-c8環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基或C4-C1(l雜環(huán)基任選被1或2個獨立選自下列的取代基取 代c「c4 烷基、no2、鹵素、CN、nr8n9、nr6cor9、nr6co2r9、cor9、or9、conr8r9、co2r9、con (or10) r9 或s (0) nR9，而其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) crc6烷基、c (o) c3-c6環(huán)烷基、crc6烷基、c2-c6鏈烯基和c2-c6炔基；R3不存在(R3不存在時，所連氮為叔氮)或者選自O(shè)H、SH或為N-氧化物，其中的 0H和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚{(OKi-Ce烷基、c(o)c3-c6 環(huán)烷基、crc6烷基、c2-c6鏈烯和c2-c6炔基；R4選自0_、OR10或SH ；當R4為0_時，該0_與式(I)中的N+形成內(nèi)鹽；并且OR10 (當 R1(l為H時)和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) CrC6烷基、 c (0) c3-c6環(huán)烷基、crc6烷基、c2-c6鏈烯基和c2-c6炔基；R5和R7各自獨立地選自H、CrC6烷基、C3_C6環(huán)烷基、C4_C8環(huán)烷基烷基，但是S (0) nR5中的R5不能為H;R6選自H或CrC4烷基；R8、R9選自H ；以及CrC4烷基或C3_C6環(huán)烷基；R10選自H、CrC4烷基、C3_C6環(huán)烷基、C6_C1(1芳基或C4_C1(1雜環(huán)基；n 為 0、1 或 2。在本發(fā)明化合物的另一個實施方案中，R1 為 C「C6 烷基，優(yōu)選 _CH3，-CH2CH3，_CH2CH2CH3，更優(yōu)選 _CH3 ;C2_C6 鏈烯基，優(yōu)選 _CH =CH2, -CH = CHCH3, -CH2CH = CH2,更優(yōu)選-CH = CH2 ；c2-c6 炔基，優(yōu)選-c = CH, -CH2C = CH, 更優(yōu)選-C = CH ；R2 為 CrQ 烷基，優(yōu)選-CH3，-CH2CH3，-CH2CH2CH3，更優(yōu)選-CH2CH3 ;C2-C6 鏈 烯基，優(yōu)選-CH = CH2, -CH = CHCH3, -CH2CH = CH2,更優(yōu)選-CH = CHCH3 ;C2_C6 炔基，優(yōu) 選-C三CH, -CH2C = CH,更優(yōu)選_CH2C = CH ；R3為OH和R4為(T或0H，且其中的OH任選被 選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) CrC6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、CfC；烷基、C2-C6鏈 烯和C2-C6炔基。 本發(fā)明化合物的另一個實施方案中，R1為C6-C1(1芳基或C4-C1(1雜環(huán)基，優(yōu)選苯基或吡啶基；R2為0H且任選被選自下列 的取代基取代形成酯或醚^(OKfC；烷基、c(o)c3-c6環(huán)烷基、&-(；烷基、c2-c6鏈烯和c2-c6 炔基；R3為0H和R4為0_或0H且其中的0H任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) crc6 烷基、c (o) c3-c6 環(huán)烷基、crc6 烷基、c2-c6 鏈烯和 c2-c6 炔基；R2 為=0、= s、crc6 烷 基、c2-c6鏈烯或c2-c6炔基。在本發(fā)明化合物的另一個實施方案中，R1為0H或SH，它們各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C(0) C「C6烷基、C (0) c3-c6環(huán)烷基、C「C6烷基、c2-c6鏈烯和c2-c6炔基；R3為0H或SH以及R4為 0_、0H或SH，其中的0H或SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) crc6 烷基、c (o) c3-c6 環(huán)烷基、crc6 烷基、c2-c6 鏈烯和 c2-c6 炔基；R2 為=0、= s、crc6 烷 基、c2-c6鏈烯或c2-c6炔基。
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在本發(fā)明化合物的另一個實施方案中，R1 為 0H 或 SH ;R2 為=0 或=S，R3 為 0H 或 SH, R4 為 0H 或 SH。在本發(fā)明化合物的一個實施方案中，R1和R3為羥基，R2為羰基以及R4為0_，其結(jié)構(gòu) 式名稱為(1R，3aS, 7R，10aR, 10bR)-1-(3-羧丙基)_2，7- 二羥基 _3_ 氧-十氫-1H，4H-吡 啶并[3，2，l-ij][l，b]萘啶-7-鹽，在本申請中又將其稱作“化合物1”。在本發(fā)明化合物的一個實施方案中，R1和R3為羥基，R2為羰基以及R4為0_，為其 水合物晶體，即化合物1水合物晶體，具有下式結(jié)構(gòu) 下面所列的是本申請中使用的用于描述本發(fā)明化合物的術(shù)語的定義。除非另有說明，術(shù)語“烷基”包括直鏈的和支鏈的烷基，術(shù)語“q,烷基”是指具有 1-10個碳原子的烷基，可以是，但不限于，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基，叔丁 基、正戊基、異戊基、叔戊基、新戊基、正己基或異己基、叔己基等，優(yōu)選cv6烷基，尤其是Ci_4 烷基，特別是甲基。除非另有說明，術(shù)語“鏈烯基”包括直鏈的和支鏈的鏈烯基。術(shù)語“C2_1(l鏈烯基”是 指具有2-10個碳原子和1個或2個雙鍵的鏈烯基，可以是，但是不限于，乙烯基、烯丙基、丙 烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、2-丁烯基、戊烯基、異戊烯基、己烯基等，優(yōu)選C2_6鏈烯 基，尤其是C2_4鏈烯基，特別是乙烯基。除非另有說明，術(shù)語“炔基”包括直鏈的和支鏈的炔基。術(shù)語“C2_1(l炔基”是指具 有2-10個碳原子和1或2個叁鍵的炔基，可以是，但是不限于，乙炔基、炔丙基、丁炔基、異 丁炔基、戊炔基、異戊炔基、己炔基等，優(yōu)選C2_6炔基，尤其是C2_4炔基，特別是乙炔基。除非另有說明，術(shù)語“環(huán)烷基”是指飽和環(huán)烴基。術(shù)語“C3_1(l環(huán)烷基”是指具有2-10 個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)飽和環(huán)系，可以是，但是不限于，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán) 庚基等，優(yōu)選c3_6環(huán)烷基，尤其是c5_6環(huán)烷基。除非另有說明，術(shù)語“環(huán)烷基烷基”是指通過烷基連接于環(huán)烷基上的取代基。術(shù)語“芳基”是指包含至少一個不飽和芳香環(huán)的單環(huán)或者雙環(huán)烴環(huán)系。術(shù)語“C6_1(l 芳基”的例子有苯基、萘基、1，2，3,4-四氫萘基等，優(yōu)選苯基。除非另有說明，術(shù)語“雜環(huán)基”是指包含至少一個獨立選自N、0或S的雜原子的單 環(huán)或雙環(huán)飽和、不飽和或芳香環(huán)系。這些環(huán)的例子包括但不限于噻吩基、吡啶基、噻唑基、異 噻唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、咪唑基、嗝唑基、異嗝唑基、p惡二唑基、批唑基、四唑基、噻 二唑基、吡嗪基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并嗝唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃 基、苯并噻吩基、苯并三唑基、噴哚基、二氫吲哚基、異吲哚基、喹啉基、噠嗪基、嘧啶基、咪唑 并吡啶基、惡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、吡啶基、咪唑并噠嗪基、惡唑并噠嗪基、噻唑并噠 嗪基、咪唑烷基、咪唑啉基、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡咯烷基、吡咯啉基、四氫吡喃基、硫代嗎啉基、氮雜環(huán)丁烷基等。除非另有說明，術(shù)語“鹵素”可以是氟、氯、溴或碘。除非另有說明，術(shù)語“鹵代烷基”是指上面所定義的烷基被一個或多個鹵素取代。合成方法本發(fā)明式(I)化合物可以通過采用本領(lǐng)域已知的各種方法來制備，包括下面反應(yīng) 路線和在具體實施方式
部分中描述的那些。化合物(IA)的制備,例如可參見 Journal of the Royal Netherlands Chemical Society，103，11，1984，328-332 ;J 0 C 61，1，1996，368-371，包括下面反應(yīng)路線中的那些。反應(yīng)路線I
(IA)在上述反應(yīng)路線中，R = CmH2m+1，其中m= 1-10 ；還原劑可選自例如金屬或含金屬或 含金屬類還原劑(Zn、Fe、Mg、Sn、NaBH4、LiAlH4等)或非金屬還原劑(C、CO、H2S03、H2S、CO、 吐等)等；X=鹵素(F，CI, Br, I)；有機溶劑可以選自例如二氯甲烷、三氯甲烷、二甲醚，石 油醚、乙醚、苯(甲苯)、甲醇、乙醇等；所述堿可選自例如NaH、CH3CH20Na，CH30Na等；低溫可 為-20°C至-10°C ；R1基團同上述式(I)化合物中的定義，但不為H、0H、SH?；衔?IB)的制備例如可參見1、 Shishido, Yuji ；Kibayashi, Chihiro Enantiogenic Total Syntheses of (-)-Indolizidines(Bicyclic Gephyrotoxins)205A,207A,209B, and 235Bvia the Intramo lecular Diels—Alder Reaction of a Chiral N—Acylnitroso Compound 1992, Journal of Organic Chemistry, 57(10), pp.2876-2883 ；2, Aoyagi, Sakae ；Shishido, Yuji ；Kibayashi, Chihiro TOTAL SYNTHESIS OF(-)-NUPHARAMINE AND(+)-3-EPINUPHARAMINE VIA ASYMMETRIC NITR0S0 DIELS-ALDER REACTI0N1991, Tetrahedron Letters, 32 (34), pp. 4325-4328，包括下面反應(yīng)路線中的那些。反應(yīng)路線II 上述反應(yīng)中保護基R11為羥基保護基團，選自例如R2C0等；R12為羧基保護基團， 選自例如0R2，鹵素等；R2基團同上述式⑴化合物中的定義，但不為=0、= S、H、0H、SH;強 堿可選NaH，醇鈉等；所述酸可選自無機酸例如HC1、H2S04等或有機酸例如HC00H，CH3C00H 等；所述低溫為-10°C至-90°C，例如-78°C ；所述無水有機溶劑選自例如二氯甲烷、三氯甲 烷、無水乙醚、石油醚、苯(甲苯)、無水乙醇、甲醇等?；衔?IC)的制備例如可參見1. Kaimova, S, U. ；Israilov, I， V ；Yunusov, M.S. ；Yunusov, S. Yu. ； CHNCA8 ； ChemistryofNaturalCompound ；English ； 16 ；2 ；1980 ； 177-180.2、Birch, Alan M. ；Kenny, Peter ff. ；Oikonomakos, Nikos G. ；Otterbein, Ludovic ；Schofield, Paul ；ffhittamore, Paul R. 0. ；ffhalley, Dave P.Development of potent, orally active 1一substituted一3，4一dihydro_2_quinolone glycogen phosphorylase inhibitors2007, Bioorganic Medicinal Chemistry Letters,17(2), pp. 394-399，包括下面反應(yīng)路線中的那些。反應(yīng)路線III 上述反應(yīng)中，所述還原劑可選自金屬或含金屬類還原劑(例如Zn、Fe、Mg、Sn、 NaBH4、LiAlH4、Pd/C等)或非金屬還原劑(例如C、CO、H2S03、H2S、CO、H2等)等；R1基團同 上述式(I)化合物中的定義，但不為H、OH、SH;R2基團同上述式(I)化合物中的定義，但不 為=0、= S、H、0H、SH ；所述強堿選自例如NaH，醇鈉等；所述酸可選自無機酸例如HC1、H2S04 等或有機酸例如HCOOH，CH3COOH等；所述無水有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、無水乙醚、 石油醚、二甲醚、苯(甲苯)、甲醇、無水乙醇等無水有機溶劑；所述低溫為-10°C至-90°c 度，例如-55°C。本發(fā)明還提供一種制備式中R1和R3為羥基、R2為羰基、R4為0_的本發(fā)明式⑴化 合物，化合物1 [即化合物(1R，3aS, 7R，10aR, 10bR)-1-(3-羧丙基)-2，7- 二羥基_3_氧-十 氧-1H，4H-吡啶并[3,2,1-ij] [l，b]萘啶-7-鹽]的方法，其特征在于在30-80°C溫度下， 使下式槐定堿與氧化劑反應(yīng)8-12小時 所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為30-80°C，尤其優(yōu)選40-60°C，特別是50°C。
所述反應(yīng)中的氧化劑可以是過氧化物氧化劑例如過氧化氫、過氧化鈉、過氧化鉀、 過氧化鋰、過氧化鎂、過氧化鈣等；或高氯酸及高氯酸鹽；或氯酸及氯酸鹽；或高錳酸及高 錳酸鹽；或碘酸及碘酸鹽；及高碘酸鹽；及重鉻酸鹽等氧化劑；優(yōu)選過氧化氫、過氧化鈉、過 氧化鉀；或高氯酸；或氯酸；或高錳酸；或碘酸；或高碘酸；或重鉻酸；特別優(yōu)選過氧化氫。所述反應(yīng)的時間優(yōu)選為6-20小時，尤其優(yōu)選7-12，特別是8小時。所述反應(yīng)中，槐定堿與氧化劑的比例為1 3-9，優(yōu)選1 5-8，特別優(yōu)選1 6_7， 特別是1 7。將反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)減壓蒸發(fā)至最小體積，放于干燥箱中繼續(xù)反應(yīng)，反應(yīng) 后的產(chǎn)物用適量有機溶劑，例如甲醇、無水乙醇、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷等或 其混合物洗滌，過濾，得到白色固體狀目標化合物粗品。將得到的化合物粗品用有機溶劑例如甲醇、無水乙醇、丙酮、四氫呋喃等或其混合 物，優(yōu)選甲醇_丙酮混合物，重結(jié)晶，得白色、類白色晶體狀目標化合物化合物1。本發(fā)明還提供制備式中R1和R3為羥基、R2為羰基、R4為0_的本發(fā)明式⑴化合 物化合物1 [即化合物(1札3沾，71 ，10沾，1(^10-1-(3-羧丙基)-2，7-二羥基-3-氧-十 氫-1H，4H-吡啶并[3，2，1-ij] [1，b]萘啶-7-鹽]三水合物單晶的方法將所得化合物1 溶于較大極性溶劑例如水、乙醇、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜等或其混合體系中， 加入適量非極性有機溶劑例如苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚等，靜置，溫度控制在 溶劑沸點以下，例如5-10°C，單晶培養(yǎng)時間約2周。經(jīng)過所述單晶培養(yǎng)所得晶體，通過單晶X-射線衍射，獲得以下晶系、空間群、晶 胞參數(shù)和晶胞體積等參數(shù)該晶體為三斜晶系，空間群為P 1，晶胞參數(shù)a = 6. 4102 (1)， b = 7. 6395(1)，c = 10. 9102(2) A, a = 94. 160(1)。，3 = 105. 922(1)。，Y = 109.464(1)。，晶胞體積V = 444.99(1)人3，晶胞內(nèi)分子數(shù)Z = 1。本發(fā)明還提供藥物組合物，它含有所述本發(fā)明的式(I)化合物和藥學(xué)上可接受的 載體或賦形劑。本發(fā)明藥物組合物可施用于哺乳動物(如人)，可以口服、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、 肌肉內(nèi)或皮下)、局部等方式施用。本發(fā)明藥物組合物可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，通過將本發(fā)明式(I)化 合物與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合來制備。所述藥學(xué)上可接受的載體包括常規(guī)惰性固體或液體載體或賦形劑，包括常規(guī)的稀 釋劑、填充劑(例如乳糖、聚乙二醇等)，粘合劑(例如淀粉、纖維素、明膠、聚乙烯基吡咯 烷酮等)，崩解劑(例如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素等)，潤滑劑(例如滑石粉、 硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、固體聚乙二醇、等)，濕潤劑(例如丙二醇、乙醇等)，穩(wěn)定劑(例如 EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙酰胺等)等等，上述輔 料可以使常用劑量，以常用的配比與本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化 物混合。各藥用輔料之間的配比可以根據(jù)需要做適當?shù)恼{(diào)節(jié)。所述藥物組合物可以配制為用于口服給藥的固體劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、 顆粒劑和糖丸等。在這些固體劑型中，本發(fā)明式(1)化合物可以與至少一種常規(guī)惰性載體 或賦形劑混合，所述惰性載體或賦形劑包括但不限于填充劑，粘合劑，崩解劑，潤滑劑等。
固體劑型如片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用常規(guī)的包衣技術(shù)用例如腸溶衣和 其它本領(lǐng)域公知的殼材料包衣。并且，這種組合物中活性化合物的釋放可以緩釋、控釋的方 式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放。必要時，活性化合物也可采用本領(lǐng)域已知的方法用常規(guī) 賦形劑形成微膠囊形式。所述藥物組合物也可以配制為用于口服給藥的液體劑型，包括乳液、溶液、懸浮 液、糖漿或酊劑等。除了本發(fā)明式(I)化合物作為活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中 常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑、乳化劑和懸浮劑等，例如，乙醇、異丙醇、 多元醇(例如甘油、丙二醇、1，3_ 丁二醇等)、油類，例如棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、 蓖麻油和芝麻油等，吐溫類、司盤類、聚乙二醇類、瓊脂等，或這些物質(zhì)的混合物等。所述藥物組合物可以配制為用于腸胃外注射的劑型，包括水溶液、含水或非水溶 液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌凍干粉 劑。所述藥物組合物可以配制為用于局部給藥的劑型，包括栓劑、軟膏劑、散劑、貼劑、 噴霧劑和吸入劑。本發(fā)明式(I)化合物可在無菌條件下與相應(yīng)劑型用生理上可接受的載體 或賦形劑(或推進劑)及任何適宜的添加劑一起混合。除了上述常規(guī)惰性載體、賦形劑或惰性稀釋劑外，本發(fā)明藥物組合物或藥物制劑 也可包含各種適宜的添加劑，例如潤濕劑、甜味劑、矯味劑、香料、防腐劑、緩沖劑等。本發(fā)明式(I)化合物和本發(fā)明藥物組合物可用于制備用于預(yù)防和/或治療疾病的 藥物，所述疾病包括腫瘤，特別是惡性腫瘤，例如乳腺癌、肺癌、宮頸癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、 鼻咽癌、肺癌、舌癌、食道癌、腸癌、肉瘤、淋巴癌等。再一方面，本發(fā)明還涉及治療和/或預(yù)防哺乳動物腫瘤的方法，包括將治療或預(yù) 防有效量的本發(fā)明式(I)化合物給予需要此治療或預(yù)防的哺乳動物。術(shù)語“治療或預(yù)防有效量”指的是足能夠在哺乳動物(如人)體內(nèi)引起獸醫(yī)或臨 床醫(yī)師所認可的生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)所需要的活性化合物的量。普通的獸醫(yī)和臨床醫(yī)師可容 易地確定治療或預(yù)防指定疾病所需的本發(fā)明式(I)化合物的有效量。一般，每天2-20mg/ kg患者體重，優(yōu)選每天6-12mg/kg患者體重。具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑，患者的年齡、性 別、體重和健康狀況，以及被治療的特定狀況和疾病的嚴重程度等因素，這些都是熟練醫(yī)師 技能范圍之內(nèi)的。在本文中使用的術(shù)語“哺乳動物”包括但不限于貓、狗、兔、山羊、綿羊、大 鼠、小鼠和人等，特別優(yōu)選人。本發(fā)明式(I)化合物可以單獨施用，或者與其他藥學(xué)上可接受的治療劑聯(lián)用，特 別是與其它抗腫瘤藥物組合使用。所述治療劑包括但不限于細胞毒藥物如破壞DNA結(jié)構(gòu) 和功能的藥物氮芥、環(huán)磷酰胺、順鉬、卡鉬及奧沙利鉬；影響核酸生物合成藥物5-氟尿嘧 啶、卡培他濱、雷替曲塞、阿糖胞苷、吉西他濱、甲氨碟呤、培美曲塞、羥基脲及6-巰嘌呤；干 擾轉(zhuǎn)錄過程抑制RNA合成的藥物如阿霉素、柔紅霉素、表柔比星及吡柔比星；作用于DNA復(fù) 制拓撲異構(gòu)酶抑制劑如羥喜樹堿、伊立替康及拓撲替康；影響蛋白質(zhì)合成和功能的藥物如 長春新堿、長春地辛、長春瑞濱、紫杉醇及多西紫杉醇。影響激素平衡藥物如托瑞米芬、依西 美坦、來曲唑及比卡魯胺。其他類抗腫瘤藥物如包括生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，干擾素、胸腺肽、白細 胞介素等調(diào)節(jié)機體免疫功能的藥物，細胞分化誘導(dǎo)劑維甲酸、亞砷酸等，及近年來出現(xiàn)的作 用于腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的不同環(huán)節(jié)和新靶點新型的抗腫瘤藥物，單克隆抗體、血管生成抑制劑、表皮生長因子受體拮抗劑等。聯(lián)用的治療劑可與本發(fā)明式(I)化合物，以單一制劑形式 或以不同制劑的形式，同時或順序施用。本發(fā)明式(I)化合物還可作為體外抑制細胞增殖的低分子生物探針用作生命科 學(xué)研究，作為探針應(yīng)用時，式(I)化合物可溶于甲醇、水或含水甲醇中，也可溶于二甲基亞 砜的含水溶液中加以應(yīng)用。


圖1為化合物1三水合物分子立體結(jié)構(gòu)橢球圖。圖2為化合物1三水合物分子晶胞堆積圖。圖3為化合物1的紫外吸收光譜圖。圖4為化合物1的紅外吸收光譜圖。圖5為化合物1的iHNMR譜圖。圖6為化合物1的13CWR譜圖。圖7為化合物1三水合物的絕對構(gòu)型圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例進一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于舉例說明本發(fā)明，而不構(gòu) 成對本發(fā)明范圍的限制。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件。所采用的原料為可商 購得的或者可以很容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已知文獻方法制得的。除非另有說明，百 分比為重量百分比。第一部分化合物制備實施例實施例1 (1R, 3aS，7R，10aR, 10bR) (3_ 羧丙基)_2，7_ 二羥基 _3_ 氧-十氫-1H， 4H-吡啶并[3,2,1-ij] [1，b]萘啶-7-鹽(化合物1)的制備 稱取30. 0g槐定堿(寧夏鹽池紫荊花藥業(yè)有限公司，批號90080418，純度 ≥95%。)至250ml圓底燒瓶中，加入84ml雙氧水(過氧化氫質(zhì)量分數(shù)≥30%，天津市江 天化工技術(shù)有限公司，20070302)，在50°C的恒溫水浴中反應(yīng)8小時。反應(yīng)物經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)至最小體積，置于干燥箱中繼續(xù)反應(yīng)2周。將反應(yīng)產(chǎn)物用少量無水乙醇洗滌，去除無水 乙醇可溶物后，得到的類白色固體16. 3g，收率為54. 3%。將得到的白色固體用甲醇-丙酮 (1 2-3)溶媒系統(tǒng)反復(fù)重結(jié)晶處理后，得白色或類白色化合物1晶體?；衔?結(jié)構(gòu)確證實驗數(shù)據(jù)如下。a.紫外吸收光譜(BECKMAN，DU800，紫外/可見分光光度計，貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司):UVAmax(H20)nm(log e )210(2. 60)；b.紅外吸收光譜(Bruker500紅外光譜儀，布魯克光譜儀器公司)IR v(KBr, cm—1) :3408，2966，2941，2872，1635，957 ；c.質(zhì)譜(TRACE DSQ, Thermof innigan 公司)ESI-MS m/z ( % ) :311[M-H]_, 623 [2M-H] 313 [M+H] +，625 [2M+H] + ；d. 核磁共振譜(Bruker 400M,布魯克光譜儀器公司):1HNMR400MHz (D20) 8 (ppm) 3. 55 (1H, td, J = 3，9Hz)、3. 24 (1H, dd, J = 4，10Hz)、1. 60 (1H, m)和 2. 36 (1H, m)、1. 74 (1H, m)和 1. 98 (1H, m)、3. 55 (1H, dd, J = 4，10Hz)、3. 24 (1H, td, J = 3，10Hz)和 4. 02(lH，td，J = 3，10Hz)、1. 98(lH，m)和 2. 36(lH，m)、1. 74(2H，td，J = 4，10Hz)、3. 03 (1H, td, J = 3，9Hz)、3. 77 (2H, td, J = 3，10Hz)、1. 60 (1H, m)和 1. 98 (1H, m)、1. 60 (1H, m)和 1. 98 (1H, m)、2. 36 (2H, t, J = 7Hz)；e. 13C核磁共振譜(Bruker 300M，布魯克光譜儀器公司，D20為溶劑)具有以下特 征峰(ppm) 19. 3,21. 3,21. 8,21. 9,23. 4,31. 3,31. 6,35. 6,37. 4,56. 4,64. 7,68. 8,68. 9, 164. 8，180. 9 ；f.元素分析分子式C15H24N205；分子量312理論值:C%57. 69% H% 7. 69% N% 8. 97%實測值:C%57. 42% H% 9. 35% N% 8. 91%實施例2 (1R，3aS，7R，lOaR, lObR) (3_ 羧丙基)~2,7~ 二羥基 _3_ 氧-十氫 _1H， 4H-吡啶并[3,2,1-ij] [1，b]萘啶-7-鹽(化合物1)三水合物單晶制備
(H20)3取實施例1化合物10mg，將其充分溶解于5ml水(雙蒸水，實驗室自制)中(超 聲)，溶液達飽和狀態(tài)，經(jīng)過濾后成為培養(yǎng)單晶使用溶液。將培養(yǎng)瓶中抽真空，然后通氮氣，用注射器加入上述溶液，然后再用注射器沿器壁 加入5ml丙酮(分析純，天津市化學(xué)試劑有限公司，批號200801203)，于無機械震蕩處靜 置，溫度5-10°C，培養(yǎng)時間約2周，得化合物1的無色透明狀單晶體。所得單晶(0. 10X0. 10X0. 40mm晶體)經(jīng)MAC DIP-2030K X-射線衍射儀(日 本MAC公司)測定，確定該晶體屬三斜晶系，空間群為P 1，晶胞參數(shù)a = 6.4102(1)， b = 7. 6395 (1)，c = 10. 9102 (2) A, a = 94. 160 (1) °，3 = 105. 922 (1) °，Y = 109.464(1)。，晶胞體積V = 444.99(1)人3，晶胞內(nèi)分子數(shù)Z = 1。在微機上用直接法(shelxs-97)解析該晶體結(jié)構(gòu)，從E圖上獲得全部25個非氫 原子位置，使用最小二乘法修正結(jié)構(gòu)參數(shù)和判別原子種類，使用幾何計算法和差值Fourier 法獲得全部氫原子位置，最終可靠因子R1 = 0. 032，wR2 = 0. 085，S = 1. 080。最總確定不對稱單位化學(xué)計量式為C15H24N205 3H20，計算單個分子的分子量為366. 41，計算晶體密度 1.367g/cm3。晶態(tài)下分子排列屬第一類(P1)空間群，故樣品應(yīng)具有旋光活性，根據(jù)計算得 到Flack系數(shù)為0.2(2)。結(jié)果表明化合物1為喹喏里西啶類酸堿兩性生物堿。該化合物分子(圖7)骨架 由3個六元環(huán)A、B、C稠合而成，其中B、C環(huán)均呈椅式構(gòu)象，A環(huán)呈半椅式構(gòu)象，環(huán)A/B為反 式稠合，A/C，B/C均為順式稠合。計算各環(huán)間二面角值分別為A/B 9. 3°，A/C 112. 7°，B/ C:116.0°。三個結(jié)晶水位置無序造成溫度因子偏高。晶態(tài)下分子內(nèi)不存在氫鍵聯(lián)系，但分 子間存在氫鍵聯(lián)系:05-0lw 2. 603 A , 02-03 (x，y，z_l) 2. 533 人，0lw_04 (x, y+1，z) 2. 800A, 0lw-02w(x+l, y，z) :2. 771 A,02w-03w :2. 778 人，2. 843 人。晶態(tài)分子以氫鍵作用力和范 德華力維系其在空間的穩(wěn)定排序。第二部分本發(fā)明化合物抗腫瘤活性的測試實施例通過體內(nèi)、體外抗腫瘤實驗證實本發(fā)明化合物的藥理活性。所用試劑二甲基亞砜(DMS0)批號080602(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公 司)、生理鹽水，南京小營制藥廠，批號2008052505、動物IRM-2純系小鼠((SCXK (津)2008-0012))、昆明種小鼠 (STXK (京)2008-0012)、C57BL/6 小鼠(STXK (京)2008-0012)。細胞人肺腺癌細胞A549 (由天津醫(yī)科大學(xué)提供，取對數(shù)生長期細胞)；淋巴瘤(從 IRM-2純種小鼠自發(fā)淋巴瘤傳5代接種)；乳腺癌和Lewis肺癌(由天津醫(yī)科大學(xué)提供，本 實驗室傳6代接種)；宮頸癌U14、肉瘤S■、肝癌H22 (由天津醫(yī)藥科學(xué)研究所提供，本實驗室 傳12代接種)。培養(yǎng)基RPMI_1640培養(yǎng)基(上海強肯儀器有限公司)。試藥化合物1 (本實驗室提供，批號20080512)、5_氟尿嘧啶(5_Fu) (5_Fu粉由 中國天津太河制藥有限公司提供，批號為080223)、順鉬粉劑(DDP)，山東齊魯制藥廠產(chǎn)品， 批號:081015。統(tǒng)計軟件SPSS13. 0。一.體外抗腫瘤與輻射增敏實驗本實驗采用MTT檢測方法。抑制A549細胞增殖能力為指標。用酶標儀在570nm波 長處測定吸光度(0D)值，并按下列公式計算其抑制率。以IC5(I軟件1. 00版本計算試藥對 人肺腺癌A549細胞的IC5(1值。抑制率計算公式抑制率(％)=[(對照組0D值-實驗組0D值)/對照組0D 值]X100%。試藥對人肺腺癌細胞株的抑制作用結(jié)果以而士S表示。計算50%細胞殺傷 時藥物濃度(IC5(1)，IC5(1采用加權(quán)直線回歸法處理。本發(fā)明采用MTT法測試了本發(fā)明化合物1及其與輻射聯(lián)用對人肺腺癌A549細胞株 的抗腫瘤活性，實驗證實，本發(fā)明化合物對人肺腺癌A549腫瘤細胞有增殖抑制和輻射增敏作 用，因此本發(fā)明化合物可直接或與輻射治療聯(lián)用用作細胞增殖抑制劑或腫瘤細胞殺傷劑。二.體內(nèi)抗腫瘤實驗選取淋巴瘤、乳腺癌、Lewis肺癌并利用IRM_2純系小鼠進行體內(nèi)的抗腫瘤實驗研 究，實驗設(shè)定空白對照組、及低、中、高三種濃度的化合物1，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種濃度的化合 物1對三種癌細胞與空白對照組相比均具有較好的抗腫瘤作用。與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。選取宮頸癌U14、肉瘤S■、肝癌H22并利用昆明種小鼠進行體內(nèi)的抗腫瘤實驗研究， 實驗設(shè)定空白對照組、陽性對照順鉬組、及低、中、高三種濃度的化合物1組，實驗重復(fù)三 次，研究結(jié)果均發(fā)現(xiàn)化合物1不僅對腫瘤有較好的抑制作用，同時和陽性對照藥順鉬相比 能夠顯著增強試驗小鼠的免疫功能。與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義?？鼓[瘤轉(zhuǎn)移實驗利用接種Lewis肺癌瘤株的C57BL/6小鼠進行體內(nèi)的抗腫瘤轉(zhuǎn)移 實驗，實驗設(shè)定空白對照組、陽性對照5-FU組、及化合物1的低、中、高三種濃度組。實驗結(jié) 果實驗重復(fù)三次，化合物1的三個劑量組均有明顯抑制肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)，抑制率均大于60%。 與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)。三.抗腫瘤活性的測試結(jié)果1-1體外抗腫瘤活性的測試被測樣品溶液的制備測試樣品為上述實施例1中分離精制的化合物1純品。準 確稱取適量樣品，用DMS0配置所需濃度的溶液，供活性測試。細胞系及細胞的繼代培養(yǎng)活性測試采用人肺腺癌A549細胞，細胞均用含有10% 胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，在37°C通入5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼代培養(yǎng)。細胞增殖抑制活性測試方法(MTT法)本發(fā)明采用MTT法，測試評價了被檢測樣品對癌細胞增殖的抑制活性。活細胞 線粒體中脫氫酶能夠代謝還原黃色的溴化3-(4，5_ 二甲基噻唑)-2，5_ 二苯基四氮唑為 藍紫色的不溶于水的formazan，formazan的多少可通過酶標儀測定其吸收度求得。由于 formazan的量與活細胞成正比，所以可根據(jù)吸收度求出活細胞的數(shù)目，從而了解藥物抑制 或殺傷腫瘤細胞的能力。活性測試時，取對數(shù)生長期的人肺腺癌A549細胞，經(jīng)0. 02%的EDTA消化，加入含有 10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，制成細胞懸液，均勻接種于96孔微量培養(yǎng)板中(細胞 個數(shù)為2X 104個/孔)，將接種后的細胞置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。給藥組分 別加入10-1000 y g/ml等7個濃度的化合物化合物1，對照組加入相應(yīng)的培養(yǎng)液，檢測樣品 用DMS0溶解，RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋，加藥后仍將細胞置于37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培 養(yǎng)72h。每孔加2mg/ml MTT 50 yl (四甲基偶氮唑Sigma)，再置于37°C繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去上 清液，加DMS0 150 u 1，于恒溫震蕩器震蕩3min，待藍色結(jié)晶體完全溶解，用酶標儀在570nm 波長處測定吸光度(0D)值，按照抑制率(％)=[(對照組0D值-實驗組0D值)/對照組 0D值]X 100%計算每個濃度下的細胞增殖抑制率。化合物1對人肺腺癌細胞株的抑制作 用結(jié)果以而士S表示。計算50%細胞殺傷時藥物濃度(IC5(1)，IC50采用加權(quán)直線回歸法處 理。結(jié)果見表1。表1化合物1對人肺腺癌細胞A549細胞的細胞毒實驗結(jié)果 結(jié)果表明，化合物1對體外培養(yǎng)的人肺腺癌A549細胞有一定的細胞毒作用，其IC5(1 為 209. 6ii g/ml。1-2化合物1聯(lián)合輻射處理對腫瘤細胞抑制作用的測試細胞株的培養(yǎng)和化合物1的配制(同1-1體外抗腫瘤活性的測試)。采用MTT法測定化合物1孵育A549細胞72h后再予輻射對其增值的抑制率，A549細 胞按3X 103個/孔接種于2塊96孔板，培養(yǎng)24h，加入含化合物1濃度分別是0、50、100、 130、160、180、200、220、250、270、300 u g/ml 的培養(yǎng)液，100 u 1/ 孔，每種濃度 8 個復(fù)孔。繼 續(xù)培養(yǎng)72h，隨機取其中一塊96孔板，予、射線照射6Gy，再培養(yǎng)72h，常規(guī)MTT法測0D57(I。 計算細胞抑制率=[對照組吸光值0D —實驗組吸光值0D]/對照組吸光值0DX 100%計算 每個濃度下的細胞增殖抑制率?；衔?及其與輻射處理聯(lián)合對人肺腺癌細胞株的抑制作 用結(jié)果以而士S表示。計算50%細胞殺傷時藥物濃度(IC5(1)，IC5(1采用加權(quán)直線回歸法處 理。結(jié)果見表2。照射137Cs y源(加拿大產(chǎn)，CAMMA-CELL40)，照射劑量為lGy，劑量率0. 87Gy/min?；衔?聯(lián)合輻射處理對A549細胞的抑制作用當化合物1濃度為50、100、130、 160,180,200 u g/ml時，與輻射處理聯(lián)合的殺傷作用大于化合物1單一作用(P < 0. 05)?；?合物1濃度為220、250、270、300ii g/ml時，化合物1對細胞的直接殺傷作用明顯，因此兩組 細胞的抑制率相近。表2化合物1作用72h+輻射作用72h對A549細胞的抑制作用(而士 S)
21 2、體內(nèi)抗腫瘤實驗的測試2-1.抑制淋巴瘤、乳腺癌、Lewis肺癌的實驗研究瘤株淋巴瘤(從IRM-2純種小鼠自發(fā)淋巴瘤傳5代接種)、乳腺癌、Lewis肺癌 (由天津醫(yī)科大學(xué)提供，本實驗室傳6代接種)動物本研究所自行繁殖IRM-2純系小鼠，雌雄兼用，體重22_30g。藥物的配制取化合物1配制濃度為50mg/kg，100mg/kg, 150mg/kg，溶劑為注射用 水。方法接種選擇腫瘤生長旺盛且無潰破，健康情況良好的荷瘤鼠，脫白處死，剖取腫瘤 將腫瘤切成2mm左右的小塊，在動物左側(cè)腹股溝處皮下接種。分組給藥接種后次日將動物隨機分組，設(shè)對照組和給藥組，對照組給予生理鹽 水，給藥組給予3個不同劑量的化合物1水溶液，每日一次，腹腔注射，每次0. 5ml，連續(xù)給藥 10天。觀察指標停藥后24小時處死動物，稱體重，解剖剝離瘤塊，秤瘤重。抑瘤率=(1-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)*100%結(jié)果如下表3-5所示表3化合物1對淋巴瘤的抑制作用 2-2.抑制肉瘤S·、宮頸癌U14、肝癌H22的實驗研究瘤株肉瘤S18Q、宮頸癌U14、肝癌H22 (由天津醫(yī)藥科學(xué)研究所提供，本實驗室傳12 代接種)。動物昆明種小鼠，體重(20士2g)，雌雄各半，購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物研究所。移植將小鼠在正常條件下喂養(yǎng)3天，稱重后(原始體重)，在無菌條件下抽取接 種7天后的小鼠宮頸癌U14、肉瘤S18(1、肝癌H22腹水瘤瘤液，用生理鹽水稀釋成(1 2)的液 體充分混合，將腫瘤細胞懸液用新鮮配制的0. 2%臺盼藍染色，混勻后按白細胞計數(shù)方法計 數(shù)。染藍色者為死細胞，不染色者為活細胞，按如下公式計算細胞濃度和細胞存活率。細胞 濃度=4大方格內(nèi)活細胞數(shù)/4 X IO4X稀釋倍數(shù)=細胞數(shù)/ml細胞存活率=活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))X 100%
接種U14，S180, H22 腫瘤計數(shù)分別為 4. 5-7. 5 X IO7 個 /ml，4. 2-5. 7 X IO7 個 /ml， 4. 1-5. 8X IO7個/ml，細胞存活率均大于95%，用0. 25ml注射器以0. 2ml/只接種于小鼠的 右前肢下。動物分組腫瘤接種后，將70只小鼠隨機分成5組空白對照組，給藥組(化合物 1高、中、低劑量組)，陽性對照組(順鉬組)，每組14只，各組同時接種腫瘤24h后開始給藥。給藥劑量與給藥途徑空白對照組給予生理鹽水(0. 3ml/dX IOd)，化合物1的高、 中、低劑量組(50，100，150mg/kg/gX10d)，陽性對照組順鉬(4mg/kg/2dX IOd)。樣品臨用 前用水配制，ip給藥。檢測指標及方法一般情況每日觀察小鼠的自主活動，精神狀態(tài)，毛發(fā)，呼吸，飲食，糞便性狀及對 外刺激的反應(yīng)。實體瘤抑瘤率和體重增長的測定移植瘤株24小時后小鼠給藥，連續(xù)給藥10天， 于第11天脫頸椎處死小鼠，稱取體重(處死體重)，剖取腫瘤，精密稱重，求取腫瘤均值，然 后按下述公式計算用藥后腫瘤抑制率。腫瘤抑制率=(1-治療組平均瘤重/對照組平均瘤重)X 100%體重增長=處死體重-原始體重-瘤重肝、脾和胸腺指數(shù)的測定采用稱重法及剝離腫瘤后的小鼠，再剖取出肝、脾和胸 腺，用天平稱取肝重、脾重和胸腺重，并按如下公式計算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。脾指數(shù)=脾重/處死體重胸腺指數(shù)=胸腺重/處死體重實驗結(jié)果表明1.化合物1對U14荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響結(jié)果。實驗表明，化合物l(50_150mg)對U14小鼠腫瘤具有非常顯著的抑制作用(P < 0. 01)，并存在一定的劑量依賴關(guān)系，雖然陽性對照藥順鉬抑瘤效果優(yōu)于化合物1，但荷 瘤小鼠的體重、肝重及免疫指標(脾指數(shù)和胸腺指數(shù))明顯下降，與空白對照組差異極其顯 著(P < 0. 001)，而組的體重、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)等指標較空白對照組也有所提高，提示化 合物1不僅有抗腫瘤的作用可能還有一定的改善荷瘤動物免疫機能的作用。具體見下表6 和7所示。表6化合物1對U14荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響 注與空白對照組比較*P < 0. 01表7化合物1對U14荷瘤小鼠各臟器的影響 注與空白對照組比較< 0. 012.化合物1對S18tl荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響結(jié)果。實驗表明，化合物l(50-150mg/kg)對S18tl小鼠腫瘤具有非常顯著的抑制作用(P <0. 001)，雖然陽性對照藥順鉬抑瘤效果優(yōu)于化合物1，但荷瘤小鼠的體重、肝重及免疫指 標(脾指數(shù)和胸腺指數(shù))明顯下降，與空白對照組差異極其顯著(P <0.001)，而奧賽博的 這些指標與空白對照組相比相差無幾。具體見下表8和9所示。表8化合物1對S18tl荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響 注與空白對照組比較< 0. 001表9化合物1對S18tl荷瘤小鼠各臟器的影響 注與空白對照組比較< 0. 0013.化合物1對H22荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響結(jié)果。實驗表明，化合物l(50_150mg)對H22小鼠腫瘤具有非常顯著的抑制作用(P <0. 001)，雖然陽性對照藥順鉬抑瘤效果優(yōu)于化合物1，但荷瘤小鼠的體重、肝重及免疫指 標(脾指數(shù)和胸腺指數(shù))明顯下降，與空白對照組差異極其顯著(p<0. 001)，而組的體重、 脾指數(shù)和胸腺指數(shù)等指標較空白對照組也有所提高，提示化合物1不僅有抗腫瘤的作用可 能還有一定的改善荷瘤動物免疫機能的作用。具體見下表10和11所示。表10化合物1對H22荷瘤小鼠的抑瘤率及體重的影響 注與空白對照組比較< 0. 001表11化合物1對H22荷瘤小鼠各臟器的影響 注與空白對照組比較< 0. 0012-3.化合物1體內(nèi)抗轉(zhuǎn)移實驗瘤株=Lewis肺癌瘤株(天津醫(yī)藥科學(xué)研究所，本實驗室傳6代接種)。動物C57BL/6小鼠，體重(20士2g)，雌雄各半，購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研 究所。實驗方法Lewis腫瘤小鼠，在無菌條件下取瘤塊，勻漿液放入無菌小瓶內(nèi)，生理鹽 水調(diào)整濃度，0. 2ml/只鼠接種于C57BL/6小鼠液部皮下，去接種后的實驗小鼠50只，隨機分 為5組，空白對照組給予生理鹽水；陽性對照組給予5-氟尿嘧啶20mg/kg ；化合物1的三 個劑量組(50mg/kg, 100mg/kg, 150mg/kg)。以上各組小鼠均ip給藥，每日1次，14天后脫 頸處死。解剖取出小鼠完整肺，用Bouin式液固定24h，然后放入無水乙醇，漂洗至黃色褪 去，轉(zhuǎn)移灶成白色小點，用顯微鏡觀察轉(zhuǎn)移灶數(shù)，計算轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移率=(1-給藥組平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)/對照組平均轉(zhuǎn)移灶數(shù))*100%。試驗結(jié)果實驗重復(fù)三次，化合物1的三個劑量組均有明顯抑制肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)，抑制 率均大于60%。與空白對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.01)。見下表12所示。表12化合物1體內(nèi)抗轉(zhuǎn)移作用 注與空白對照組比較*P < 0. 05第三部分藥物制劑實施例(1)片劑取IOOOg化合物1，加入1160g淀粉、40g硬脂酸鎂、1400g羧甲基纖維素、400g微晶纖維素以及適量乙醇(體積百分比含量為50% )、充分攪拌混合制成濕粒， 60-70°C干燥3-4小時，壓制成片.片劑規(guī)格片重0. 4g，每片含化合物10. lg。(2)膠囊取IOOOg化合物1，加入1400g羧甲基纖維素以及1600g微晶纖維素，充 分攪拌混合制成濕顆粒，在60-70°C干燥3-4小時，然后填充到空膠囊殼中.膠囊規(guī)格粒 重0. 4g，每粒含化合物10. Igo(3) 口服液取2000g化合物1，加入單糖漿20L至純化水中共計100L，攪拌溶解， 分裝入口服液瓶，滅菌。口服液規(guī)格10ml/瓶，每瓶含化合物10. 2g。(4)顆粒劑取3000g化合物1，加入300g硬脂酸鎂、10500g羧甲基纖維素、12000g 微晶纖維素以及4200g蔗糖粉與糊精(3 1)混合物，充分攪拌混合，用12-14目篩制成顆 粒。60-70°C干燥3-4小時。顆粒劑規(guī)格每袋顆粒劑重量4g，每克顆粒含化合物10. lg。(5)滴丸劑取2000g化合物1，加入3000g助溶劑聚乙二醇，加熱熔融溫度為 900C，使原料和輔料充分混溶，滴制成丸。規(guī)格每丸重0. 025g,每袋20丸，每丸含化合物 10.OlOg0(6)注射液取2500g化合物1以及2500g葡糖糖，加入注射用水至50L，攪拌溶解， 滴加體積比1 1的鹽酸水溶液，調(diào)節(jié)PH值至4.0，再加入活性炭，再攪拌煮沸30-50分鐘， 過濾除去活性炭，再用0. 22 μ m濾膜過濾除菌，得澄明無菌液，裝入注射劑用瓶中，于115°C 下熱壓滅菌30分鐘，灌封，注射劑規(guī)格5ml/支，每支含化合物10. 25g。(7)凍干粉針取1500g化合物1以及1250g甘露醇，加入注射用水至25L，攪拌 溶解，滴加體積比1 1的鹽酸水溶液，調(diào)節(jié)PH值至6.0，再加入針劑用活性炭，室溫攪拌 20-50分鐘，過濾除去活性炭，再用0. 22 μ m濾膜過濾除菌，得澄明無菌液，灌入5ml管制瓶 中，放入真空冷凍干燥器中進行冷凍干燥，凍干粉針規(guī)格5ml/支，每支含化合物10. 3g。(8)緩釋片劑取IOOOg化合物1，加入IOOOg聚乙烯吡咯烷酮、40g硬脂酸鎂、 ISOOg羥甲基纖維素、加入160g助溶劑聚乙二醇，充分攪拌混合干法制粒，壓制成片。緩釋 片規(guī)格片重0. 4g，每片含化合物10. Igo申請人:已對本發(fā)明作了完整詳細的說明。本文中所引用的所有出版物均通過援引 將其全文或相關(guān)部分引入本文。顯而易見，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明的精神和范圍的情況下對本發(fā)明 作出許多修飾、修改和改變。這些修飾、修改和改變均應(yīng)包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
下式(I)所示的化合物及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式，以及它們的溶劑化物，式中R1選自H、OH、SH，或者C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C8環(huán)烷基或C4-C12環(huán)烷基烷基，或者C6-C10芳基或C4-C10雜環(huán)基，其中每個C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基和C4-C10雜環(huán)基任選被1、2或3個獨立選自下列的取代基取代C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基、CN、OR5、SH、S(O)nR5、COR5、NR6COR5、N(COR5)2、NR6CONR7R5、NR6CO2R5、CONR7R5、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基亞硫?；约癈1-C6烷基磺酰基；其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8環(huán)烷基、C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基和C2-C10炔基，R2選自＝O、＝S、H、OH 、SH，或者C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C8環(huán)烷基或C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基或C4-C10雜環(huán)基、NO2、鹵素、CN、C1-C4鹵代烷基、NR8R9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CON(OR10)R9、CO2R9或S(O)nR9，其中每個C1-C10烷基、C3-C6環(huán)烷基、C4-C12環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基和C4-C10雜環(huán)基任選被1、2或3個獨立選自下列的取代基取代C1-C4烷基、NO2、鹵素、CN、NR8N9、NR6COR9、NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CO2R9、CON(OR10)R9或S(O)nR9；而其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8環(huán)烷基、C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基和C2-C10炔基；R3不存在(R3不存在時，所連氮為叔氮)或者選自O(shè)H、SH或為N-氧化物，其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8環(huán)烷基、C1-C10烷基、C2-C10鏈烯和C2-C10炔基；R4選自O(shè)-、OR10或SH，當R4為O-時，該O-與式(I)中的N+形成內(nèi)鹽；并且OR10(當R10為H時)和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C(O)C1-C10烷基、C(O)C3-C8環(huán)烷基、C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基和C2-C10炔基；R5和R7各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C3-C10環(huán)烷基、C4-C16環(huán)烷基烷基，但是S(O)nR5中的R5不能為H；R6選自H或C1-C4烷基；R8、R9選自H；以及C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；R10選自H、C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、C6-C10芳基或C4-C10雜環(huán)基；以及n為0、1或2。F2009101363779C0000011.tif
2.權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其中R1選自H、0H、SH，或者C1-C6烷基、C2-C6鏈烯 基、C2-C6炔基、C3-C6環(huán)烷基或C4-C8環(huán)烷基烷基，或者C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基，其中每個 C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基或C4-C8環(huán)烷基烷基、C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基任選被1或2個獨立選自下列的取代基取代=C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基、CN、OR5、SH、S (0) nR5、C0R5,NR6C0R5, N (COR5) 2、NR6CONR7R5、NR6CO2R5, CONR7R5, C1-C6 烷硫基、C1-C6 烷基亞硫酰基 以及C1-C6烷基磺?；渲械腛H和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯 或醚C (0) C1-C6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基和C2-C6炔基；R2選自=0、= S、H、OH、SH,或者C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C3-C6環(huán)烷基或 C4-C8環(huán)烷基烷基、C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基、N02、鹵素、CN、CfC4鹵代烷基、NR8R9、NR6COR9、 NR6CO2R9、COR9、OR9、CONR8R9、CON (OR10) R9、CO2R9 或 S (0) nR9，其中每個 C1-C6 烷基、C3-C6 環(huán)烷基 或C4-C8環(huán)烷基烷基、C6-C10芳基或C4-Cltl雜環(huán)基任選被1或2個獨立選自下列的取代基取 代C「C4 烷基、N02、鹵素、CN、NR8N9, NR6COR9, NR6CO2R9, COR9, OR9、CONR8R9, CO2R9, CON (OR10) R9 或S (0) nR9，而其中的OH和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基和C2-C6炔基；R3不存在(R3不存在時，所連氮為叔氮)或者選自0H、SH或為N-氧化物，其中的OH和 SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚=C(O)C1-C6烷基、C (O)C3-C6環(huán)烷 基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯和C2-C6炔基；R4選自0_、ORltl或SH;當R4為0_時，該0_與式(I)中的N+形成內(nèi)鹽；并且ORltl(當R1。為H時)和SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基和C2-C6炔基；R5和R7各自獨立地選自IC1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C4-C8環(huán)烷基烷基，但是S (O)nR5中 的R5不能為H ；R6選自氫或C1-C4烷基；R8、R9選自H ；以及C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；R10選自H、C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基、C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基；以及η為0、1或2 ；及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
3.權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其中R1 為 C1-C6 烷基，優(yōu)選-CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3,更優(yōu)選-CH3 ；C2-C6 鏈烯基，優(yōu)選-CH = CH2, -CH = CHCH3, -CH2CH = CH2,更優(yōu)選-CH = CH2 ；C2-C6 炔基，優(yōu)選-C = CH, -CH2C = CH, 更優(yōu)選-C = CH ；R2 為 C1-C6 烷基，優(yōu)選-CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3,更優(yōu)選-CH2CH3 ；C2-C6 鏈烯基，優(yōu)選-CH = CH2, -CH = CHCH3, -CH2CH = CH2,更優(yōu)選-CH = CHCH3 ；C2-C6 炔基，優(yōu) 選-C三CH, -CH2C = CH,更優(yōu)選-CH2C = CH ；R3為OH和R4為(Γ或0Η，且其中的OH任選被 選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C6烷基、C (0) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈 烯和C2-C6炔基；及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
4.權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其中R1為C6-Cltl芳基或C4-Cltl雜環(huán)基，優(yōu)選苯基或吡啶基；R2為OH且任選被選自下列的取 代基取代形成酯或醚=C(O)C1-C6烷基、C(O)C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯和C2-C6炔 基；R3為OH和R4為0_或OH且其中的OH任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0)C1-C6烷基、C (O) C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯和C2-C6炔基；及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
5.權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其中R1為OH或SH，它們各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C6烷 基、C (O)C3-C6環(huán)烷基、C「C6烷基、C2-C6鏈烯和C2-C6炔基；R3為OH或SH以及R4為0_、0H或 SH，其中的OH或SH各自獨立地任選被選自下列的取代基取代形成酯或醚C (0) C1-C6烷基、 C (0) C3-C6 環(huán)烷基、C1-C6 烷基、C2-C6 鏈烯和 C2-C6 炔基；R2 為=0、= S、C1-C6 烷基、C2-C6 鏈 烯或C2-C6炔基；及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
6.權(quán)利要求1所述的式⑴化合物，其中R1為OH或SH;R2為=0或=S ;R3為OH或 SH以及R4為OH或SH ；及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
7.權(quán)利要求1所述的式(I)化合物，其中R1和R3為羥基，R2為羰基，R4為0_，即化合物 1 (1R，3aS，7R，IOaR, IObR)-1-(3-羧丙基)_2，7- 二羥基 _3_ 氧-十氫-1H，4H-吡啶并[3， 2，Ι-ij] [1，b]萘啶-7-鹽，具有下式結(jié)構(gòu) 化合物1及其立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物形式， 以及它們的溶劑化物。
8.權(quán)利要求7所述的式(I)化合物，為其水合物晶體，具有下式結(jié)構(gòu)
9.權(quán)利要求7所述化合物的制備方法，其特征在于在30-8(TC、優(yōu)選40-6(TC溫度下， 使下式槐定堿與氧化劑反應(yīng)6-20、優(yōu)選7-12小時
10.權(quán)利要求9所述的方法，其中所述氧化劑選自過氧化物氧化劑例如過氧化氫、過氧 化鈉、過氧化鉀、過氧化鋰、過氧化鎂和過氧化鈣，高氯酸及高氯酸鹽，氯酸及氯酸鹽，高錳 酸及高錳酸鹽，碘酸及碘酸鹽，高碘酸鹽及重鉻酸鹽氧化劑；優(yōu)選過氧化氫、過氧化鈉、過氧 化鉀、高氯酸、氯酸、高錳酸、碘酸、高碘酸和重鉻酸；特別優(yōu)選過氧化氫。
11.化合物(1^3&5，71 ，1(^1 ，1(^10-1-(3-羧丙基)-2，7-二羥基-3-氧-十氫-1!1， 4H-吡啶并[3，2，l-ij][l，b]萘啶-7-鹽三水合物單晶的制備方法，包括將權(quán)利要求7的化合物溶于選自水、乙醇、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜或其混 合體系的較大極性溶劑中，加入適量選自苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚的非極性 有機溶劑，靜置培養(yǎng)約2周，溫度控制在溶劑沸點以下。
12.藥物組合物，含有權(quán)利要求1-8之任一項的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 溶劑化物和可任選的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
13.權(quán)利要求12的藥物組合物，還含有其它抗腫瘤藥物。
14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述其它抗腫瘤藥物選自細胞毒藥物如破壞DNA結(jié) 構(gòu)和功能的藥物氮芥、環(huán)磷酰胺、順鉬、卡鉬及奧沙利鉬；影響核酸生物合成藥物5-氟尿嘧 啶、卡培他濱、雷替曲塞、阿糖胞苷、吉西他濱、甲氨碟呤、培美曲塞、羥基脲及6-巰嘌呤；干 擾轉(zhuǎn)錄過程抑制RNA合成的藥物如阿霉素、柔紅霉素、表柔比星及吡柔比星；作用于DNA復(fù) 制拓撲異構(gòu)酶抑制劑如羥喜樹堿、伊立替康及拓撲替康；影響蛋白質(zhì)合成和功能的藥物如 長春新堿、長春地辛、長春瑞濱、紫杉醇及多西紫杉醇；影響激素平衡藥物如托瑞米芬、依 西美坦、來曲唑及比卡魯胺；調(diào)節(jié)機體免疫功能的藥物，包括生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，干擾素、胸 腺肽、白細胞介素等；細胞分化誘導(dǎo)劑維甲酸、亞砷酸等，及作用于腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的不同 環(huán)節(jié)和新靶點新型的抗腫瘤藥物，單克隆抗體、血管生成抑制劑、表皮生長因子受體拮抗劑寸。
15.權(quán)利要求1-8之任一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或權(quán)利要求12 的藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物方面的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求15的應(yīng)用，其中所述腫瘤為乳腺癌、鼻咽癌、肺癌、舌癌、食道癌、胃癌、腸 癌、肝癌、宮頸癌、肉瘤、淋巴癌。
17.權(quán)利要求15或16的應(yīng)用，其中所述藥物與其它抗腫瘤藥物聯(lián)合使用。
18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述其它抗腫瘤藥物選自細胞毒藥物如破壞DNA結(jié)構(gòu)和 功能的藥物氮芥、環(huán)磷酰胺、順鉬、卡鉬及奧沙利鉬；影響核酸生物合成藥物5-氟尿嘧啶、 卡培他濱、雷替曲塞、阿糖胞苷、吉西他濱、甲氨碟呤、培美曲塞、羥基脲及6-巰嘌呤；干擾 轉(zhuǎn)錄過程抑制RNA合成的藥物如阿霉素、柔紅霉素、表柔比星及吡柔比星；作用于DNA復(fù)制 拓撲異構(gòu)酶抑制劑如羥喜樹堿、伊立替康及拓撲替康；影響蛋白質(zhì)合成和功能的藥物如長 春新堿、長春地辛、長春瑞濱、紫杉醇及多西紫杉醇；影響激素平衡藥物如托瑞米芬、依西美坦、來曲唑及比卡魯胺；調(diào)節(jié)機體免疫功能的藥物，包括生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，干擾素、胸腺肽、 白細胞介素等；細胞分化誘導(dǎo)劑維甲酸、亞砷酸等，及作用于腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的不同環(huán)節(jié)和 新靶點新型的抗腫瘤藥物，單克隆抗體、血管生成抑制劑、表皮生長因子受體拮抗劑等。
19.藥物制劑，含有權(quán)利要求1-8之任一項的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶 劑化物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
20.權(quán)利要求19所述的藥物制劑，為片劑、膠囊、口服液、顆粒劑、滴丸劑、注射劑、凍干 粉針和緩釋片劑。
21.權(quán)利要求1-8之任一項的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物作為體 外抑制細胞增殖的低分子生物探針的應(yīng)用。
22.治療和/或預(yù)防哺乳動物腫瘤的方法，包括將治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求1-8之 任一項的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物給予需要此治療或預(yù)防的哺乳 動物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有式(I)結(jié)構(gòu)的一類新化合物及其制備方法、式中R1、R2、R3和R4的定義見說明書。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物和藥物制劑及其制備方法以及該化合物在制備抗腫瘤藥物和治療腫瘤中的應(yīng)用。
文檔編號A61P35/00GK101885726SQ20091013637
公開日2010年11月17日 申請日期2009年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月12日
發(fā)明者劉培勛, 徐陽, 李欣孺, 洪閣, 禹潔, 陳毓杰, 馬世堂, 龍偉 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所