專利名稱：：糖胺聚糖用于修復(fù)糖萼的用途的制作方法^t胺，用于^務(wù)復(fù)^t萼的用途
背景技術(shù)：
：糖萼是一層0.5擲#的皿層，作為tt^管的內(nèi)壁的襯層，它是^^許多疾病的第^it防御線。目前來講，糖萼是一種復(fù)雜的及尚不清楚的結(jié)構(gòu)。最近研究已^明高血糖能改變糖萼的結(jié)構(gòu)，并且并行發(fā)現(xiàn)已經(jīng)表明在高血瞎中所顯示的滲透性的明顯升高可f^l:由于血管對(duì)水的滲透性的升高，而不是對(duì)蛋白質(zhì)滲透性的升高。修復(fù)糖萼功能的完整^^狄糖萼破壞的問題，是一個(gè)涉及一種以Juk管內(nèi)皮滲透，對(duì)幾制的問題。鑒于此，存在揭示有關(guān)這些退行性變化的病因?qū)W因素和機(jī)制的迫切需要，因?yàn)槊闇?zhǔn)這樣的過程將提供進(jìn)一步的途徑，以避免和改善受試者的血管破壞和伴生病理|她管蛋白質(zhì)滲透性升高。在QJM.lOl(7)，513,(2008)Noble等中，描述了在糖尿病和代謝綜合征患者中，動(dòng)脈粥樣硬化綜合征的第一步就是糖萼功能失良。在AaJ.Physiol.Heart.Circ.Physiol.286(5)，H1672(2004)中，作者述^t萼涉及炎癥病'(t^^jk再灌注。Flessner在Perit.Dial.Int.28(1),6,2008中^if了內(nèi)皮糖萼涉及AUi漿到組織間隙的經(jīng)毛細(xì)血管運(yùn)輸，并且因》誠(chéng)萼在透析中是重要的，因?yàn)槊?xì)血管壁代表了對(duì)溶質(zhì)通過組織yyuk漿到到透析液的運(yùn)輸?shù)某跏甲枇ΑｊP(guān)于糖尿病的推定升高的滲透性的機(jī)制并不十分清楚。PerrinRM等在Cel1BiochemBiophys.49(2),65(2007)中才1逸了最近研究已纟錄明高jfe41能改變糖萼的結(jié)構(gòu)，并且滲透性的明顯升高可能是由于血管對(duì)水的滲透性的升高。酶活性變化能產(chǎn)生一些糖蛋白的碳水^^含量的缺陷，其可能^糖尿病微血管病變中的內(nèi)皮細(xì)胞功能失良。Nieuwdorp等在Diabetes55:1127-322006中才說了糖尿病患者1^現(xiàn)出賴血管并發(fā)癥，包桐申經(jīng)病，腎病和視網(wǎng)膜病變，^fej^l出;tjk管并發(fā)癥，主要是心M^iL^腦血管辨。相關(guān)研究已經(jīng)表明在糖尿病中血管壁，相比于非糖尿病，顯示出對(duì)血管破壞的傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素更易感。高血糖被懷疑在血管功能損傷中起重要作用(Nieuwdorp等2006.Diabetes55:480-6;Nieuwdorp等2005.Curr0pinLipidol16:507-11)。OturaiP.S.在ClinicalandExper.PharmacolPhysiol.26，411(1999)中揭示了用LMW和UFH對(duì)于糖尿病大EA管功能失良的治療。該文章認(rèn)為，肝素治療不會(huì)影響糖尿病誘導(dǎo)的血管功能失良(其由白蛋白的升高的經(jīng)毛細(xì)血管漏出率(TERalb)表示)，并且LMWH或UFH治療12周的時(shí)間^rTEIU沒有變化。治療中的用途，用于(^f詠液中的蛋白質(zhì)就，并且似門提供了Sulodexide的用于人類的^濃度范圍，但是W門沒有認(rèn)識(shí)到破壞的原因和破壞的解決方式。iH^卜該文件聚焦于M于糖尿病的破壞。Palazzini和Rubbi在EP0950413中揭示了Sulodexide^t尿病視網(wǎng)膜病變的治療中的用途，給出了Sulodexide在糖尿病患者中斷^細(xì)血管滲透性的有效性。作者僅指出Sulodexide^t尿病患者中的有效性。本發(fā)明中，出人意^h^JW胺^t(GAGs)，以及特別是Sulodexide,具有修復(fù)糖萼完整性的能力。本發(fā)明關(guān)^^胺^t在修復(fù)內(nèi)皮糖萼功能中的用途，并且因jtbi^與該功奇W目關(guān)的病理病情，包括血管病，膿毒性病情，動(dòng)脈粥樣硬化綜合征，炎癥病情和與^jk^"關(guān)的疾病，M^員害，心I/L^L，腦血管事件，糖尿病中的酶^t基化改變，腎損害，諸如潰瘍性結(jié)腸炎病情的腸病，涉*內(nèi)皮代謝活性變4匕的塵肺。發(fā)明人出人意^k^現(xiàn)Sulodexide在修復(fù)糖萼功能或^i^^f皮壞方面有活性。因此，Sulodexide可在所有涉A^萼的病理病情中有用。本發(fā)明能應(yīng)用于目的在于俏JU糖胺,保護(hù)和/或重建糖萼完整性的預(yù)防性和/或治療性干涉，負(fù)fe預(yù)防或改善糖萼擾動(dòng)，所述擾動(dòng)成為病理性升高的血管滲透性的^5出。相應(yīng)地，本發(fā)明的各方面涉;Sj-一種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺聚瞎的混合物，用于修復(fù)具有升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的受錄的糖萼的完整f生，或ia^t萼損傷；-一種藥物組合物，其包^-"種糖胺彩睹，或者兩種或更多糖胺彩瞎的濕合物，用于l務(wù)復(fù)^t萼的完塾l"生；或iS^t萼損傷；^t胺彩瞎，或者一種以上的糖胺聚睹的混合物在制造或制備用于修復(fù)糖萼的完整r封口/或功能；或i^t萼損傷的藥物或藥品中的用途；-一種修復(fù)糖萼的完整f生的方法，包脅予所述受試者治療或預(yù)防有效量的一種糖胺,，或者兩種或更多糖胺的混合物。i!E所用的術(shù)語"糖胺絲"(GAG)指一組多糖，[種具有包^"個(gè)氨絲(例如，N-乙酰-絲e4t)和一個(gè)￡41(例如，半專Ut)或6#醛酸的二糖的重復(fù)單元。^r^l單元可以^iii^it^^化，?；?，磺化(O或N-石i^化)，(sulphonylation)，磷酸化，磷fM匕(phosphonylation)或諸如此類，而#^5。此類^^的禾^可以多棒f匕，并且可以在羥1^團(tuán)或^4團(tuán)上進(jìn)行。典型地，C6羥J^C2^J^可以被石;i^化。說明性的例子包城明質(zhì)酸，軟骨素，6-石;i^軟骨素，4-石;i^軟骨素，確^^素，肝素，輛自素，輛黢角質(zhì)素，以及包括N-乙財(cái)糖(例如N-乙敝中經(jīng)城，N-乙酰葡糖胺，N-乙酰半孝m胺，以及N-乙te^酸)的聚合物，以及諸如此類。糖膝,可從自然來源提Wp純化并且可1iit^i行衍生化(derivatised)?？蛇x擇地，它們可i皮合頗制造或通過ilh^細(xì)菌的被^ii的賴t^物合成。這里所用的術(shù)語"糖胺，"也包4^t胺彩瞎的藥學(xué)可接受的鹽，溶劑^#，水^，以及包#。上述方面伏i^f吏用sulodexide,—種GAGs的天然混^，由從約60°/。到約90%(w/w)的rt，更特別地，快運(yùn)動(dòng)或低襯量lrt級(jí)分(5U土(iduronyl)糖胺^t石;fL^鹽或IGGS)，以;5LA約10%到約40°/。(w/w)的賄^CM素構(gòu)成。優(yōu)艦，sulodexide包含約80%(w/w)財(cái)和約20%(w/w)石_^素?？爝\(yùn)動(dòng)賄成分(IGSS)可以典型M有約7kD的^J'J中襯量。相較于慢運(yùn)動(dòng)或未分級(jí)肝素，IGGS包含相同的二聚成分但有更低量的艾杜糖醛酸(iduronicacid)-2~0-石鹽以及不同量的葡糖胺N-乙i^f匕-葡萄糖搭酸二聚體。i!X所用的Sulodexide也包含sulodexide的藥學(xué)可接受的鹽，溶劑化物，t)c合物，和包*。Sulodexide*&人哺乳動(dòng)物腸粘膜中提取(Radhakrishnamurthy等1978.Atherosclerosis31:217—229;sulodexide的制法^k/^Hf于US3936351，這里將^4^參考引入)。Sulodexide在歐洲以VESSELDUEF⑧的商標(biāo)^A市場(chǎng)。5發(fā)明人因而意識(shí)到，^U糖胺l^t對(duì)糖萼的完塾性的修復(fù)可以斷^iL管蛋白質(zhì)滲透性，并且因此特別財(cái)具有病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的受錄中，是預(yù)防或治療l錄益的。相應(yīng)地，本發(fā)明的進(jìn)一步方面涉及-一種糖胺，或者兩種或更多糖胺，的》'^^，用于斷她管蛋白質(zhì)滲透性；-一種包^種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺彩瞎的混合物的藥物組合物，用于斷詠管蛋白質(zhì)滲透性；老胺，，或者兩種或更多糖胺的^^在制備斷^1管蛋白質(zhì)滲透性的藥物中的用途；-一種制氐受^r血管蛋白質(zhì)滲透性的方法，包4緣予所述受^t"治療或預(yù)防有效量的糖胺,，或者兩種或更多糖胺，的》V^^。-一種藥物組合物，其用于修復(fù)或i^^萼的破壞，包舍治療有效量的一種糖胺彩瞎，或者一種以Jb^胺聚瞎的濕^，以及藥學(xué)可接受的賦形劑。這些方面伏iti^吏用sulodexide作為組合物中的糖胺聚瞎，或者至少兩種糖胺，中的一種。術(shù)語"血管蛋白質(zhì)滲透性"指蛋白質(zhì)通ibk管壁出血管腔的傾向。i!E所用的術(shù)語廣義上講包括蛋白質(zhì)通過^f可血管壁，這些血管壁包括但不限于，毛細(xì)血管和腎的腎小來慮錄障。有利地，上述方面可用于,^Jr有病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的受試者的血管蛋白質(zhì)滲透性，例如在艇例子中，絲蛋白尿(即，尿中排泄不正常的量的血清蛋白質(zhì))或白蛋白尿(即，尿中排泄不正常的量的血漿白蛋白)，包括微量白蛋白#大量白蛋白尿，糖尿病'f&申經(jīng)病，腎病或視網(wǎng)膜病變，動(dòng)脈粥樣硬化，j&^成，胰島素耐受等的患者中If^ii管蛋白質(zhì)滲透性。在M實(shí)施方式中，具有病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的患者，特別地其如jH^L為蛋白M白蛋白尿的患者，可能患有特征為高*的病情或疾病。如本說明書所用，這樣的病情或疾病可特別地包括，但不限于，高血瞎，前驅(qū)糖尿病(已診斷的，例如，空腹血糖受損和/或糖耐量受損)，胰島素耐受，1型糖尿病，2型^t尿病，代謝綜合征，；L諸如此類。相應(yīng)地，本發(fā)明的進(jìn)一步方面涉瓦-一種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺彩睹的混合物，用于為患有特征為高血瞎的病情或疾病的受絲修復(fù)糖萼的完整f生；-一種包^-種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺彩瞎的濕合物的藥物組合物，用于為患有特征為高血瞎的病情或疾病的受M修復(fù)糖萼的完整性；-一種糖胺聚瞎，或者兩種或更多糖胺聚糖的混合物在制造或制備用于為患有高血睹的受試者或患有特征為高血瞎的病情或疾病的患者修復(fù)糖萼的完整f生的藥物或藥品中的應(yīng)用；-一種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺彩瞎的濕合物，用于為患有特征為高jHI的病情或疾病的受絲修復(fù)糖萼功肯沐/或完整f生，其中這些受絲患有前馬^t尿病，胰島素耐受，l型糖尿病，2型糖尿病或代謝綜合征。-一種為患有特征為高血瞎的病情或疾病的受M修復(fù)糖萼的完整性的方法，包^^予所述受試者治療或預(yù)防有效量的一種糖胺彩瞎，或者兩種或更多糖胺絲的^^。據(jù)此，伴隨特征為高錄的疾病中的病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的綜合#并發(fā)癥淑狄善。上述方面優(yōu)ii^^f吏用sulodexide作為組合物中的糖胺彩瞎，或者至少兩種糖胺中的一種。本發(fā)明顯示了高M(jìn)病情升高了白蛋白通ii^養(yǎng)的單層的HUVEC細(xì)胞的滲逸f生，其負(fù)^皮諸如sulodexide的GAGs修復(fù)。值。用sulodexide溫育后，用GAG特異性葡糖胺染色的HUVEC細(xì)胞的增強(qiáng)染色，通it^示內(nèi)M面上GAG的增多摻入證明修復(fù)。相應(yīng)于這些結(jié)果，通過修復(fù)由高j&4t引起的糖專損傷改善血管功能，是GAGs^iL管蛋白質(zhì)滲透性(特別是在高血瞎疾病中)的治療g防中的有前途的新應(yīng)用。這些和進(jìn)一步的方面和具體實(shí)施方式在下列部#權(quán)利要求中描述。附圖簡(jiǎn)述圖1表示^Jt常ii4l^高血瞎下生長(zhǎng)的HUVEC細(xì)胞的滲透性。高血瞎(黑條)相比于正常糖(白條)升高了內(nèi)皮白蛋白滲透性22%(p<0.01)。Y-軸通過單層細(xì)胞的白蛋白％。圖2表示相比于J^條件，員萼抑制劑4-曱基傘形酮和氯酸4崎在下的HUVEC細(xì)胞的白蛋白滲透性升高。Y-軸抑制劑存在下通過單層細(xì)胞的白蛋白的變化%。圖3表示0，06jag/mlsulodexide的最^j^！sulodexide,對(duì)高ii^i秀導(dǎo)的HUVEC層滲透性的升高的修復(fù)具有非常有益的效果。Y-軸相比于正常iolt(normoglycaemic)對(duì)照，白蛋白滲透性的變化％。圖4表示在HUVEC細(xì)胞的sulodexide溫育后，在高ii4l細(xì)胞中糖萼屏障的修復(fù)。Y-軸來自正常^0#對(duì)照的變化%;白條正常錄；^L條高錄。發(fā)明詳述如ii^所用，除非上下文另外清楚^旨明，棘型"一種(a)","—個(gè)(an)"和"該(the)"，"所述"包括^Wt和復(fù)數(shù)指示物。這里所用的術(shù)語"包含(comprising)","包括(comprises)"和"包括(comprisedof)"與"包含(including)","包括(includes)"或"含有(containing)","具有(contains)"同義，并且是包含的或開i文式的，并且不排除其他的，未提到的成傷、，組分或方法步驟。有終端的數(shù)字范圍的^Ji包括各自范圍內(nèi)所有的數(shù)字和分?jǐn)?shù)，以^/斤提到的終端。M所用的術(shù)語"約"，當(dāng)指諸如l^t,量，持續(xù)時(shí)間^i者如此類的可測(cè)值時(shí)，表示包含^^值的+/-10%或更少，伏^^+/-5%或更少，更^^+/-1%或更少，并且依然更^^+/-0.ly?；蚋俚淖兓浚谶@個(gè)范圍內(nèi)這樣的變化lit于在所公開的發(fā)明中進(jìn)行實(shí)施。可以理解#^詞"約"涉及的值其自身"tMt定地，和本說明書中的所有5j證的文件4^以其全文通過？1用納7v^文。除非另外定義，所有本發(fā)明公開中使用的術(shù)語，包括技#科學(xué)術(shù)語，都具有本發(fā)明所^^支術(shù)領(lǐng)域"fit技^A員所4理解的含義。依靠進(jìn)一步的指導(dǎo)，^C語定義^皮包括以^^f^^^^^發(fā)明的^:導(dǎo)。術(shù)語"樣品，，一般指材料，以非純^iL純化的形式，獲得自生物來源。一種生物樣品，通it^體液、組織、細(xì)胞等的采集，取出，活檢，切絲適當(dāng)方法，可以典型^k^其生物來源移除，例如從感興趣的受試者中。本發(fā)明特別有8用的樣品包括來自受試者的全血、血漿，血清和尿液。一種生物樣品可進(jìn)一步處理以制備^^適的衍生物，例如，非限制地，細(xì)M組織^^產(chǎn)物，勻漿物，上清液，級(jí)將。一種樣品可被細(xì)分以分離或富集其部分(諸如例:H^期含有感興趣的分析物的部分)從而用于本發(fā)明的診斷方法。這樣，一種樣品肯yu接用于本發(fā)明的方法，或ft^fM前^^h理，提WM^^'J不同程度。如i^E所用，"糖萼"""^示血管內(nèi)皮細(xì)胞的腔面上的富含多糖的細(xì)l^卜M。糖萼主要包絲白多糖，糖胺緣，糖脂，^Nt蛋白(例如，選擇蛋白，粘附襯等)，其在體內(nèi)與水和多種襯，包括尤其來自循環(huán)i的血漿蛋白，脂質(zhì)和SI4目結(jié)合。本方面"">為患有特定癥狀(例如，升高的血管蛋白質(zhì)滲透性)和病情(例如，高血瞎)(其如發(fā)明人i斤認(rèn)識(shí)的，導(dǎo)致糖萼變性)的受試者的提皿萼完整性的修^復(fù)。這些糖萼變性可例^ifit;咸小的糖萼的^H或尺寸，升高的糖萼滲透性，增多的糖萼脫落物(即，導(dǎo)致糖萼層的厚度減少)，升高的糖萼降解酶活性和/或斷氐的糖萼合成酶活'^^i。糖萼擾動(dòng)可^^患者中去移出來的樣品中進(jìn)^^斷，這些樣品例如，血液，血漿或血清樣品等，包括檢測(cè)所述樣品中的物質(zhì)，尤其是糖萼衍生分子，例如^^l或多,，糖胺,透明質(zhì)烷(hyaluronan)，石爐乙^"f或蛋白多糖；催4嫌萼合成代il^分)lfa謝的酶，諸如，例如，透明質(zhì)酸酶；和/或t誠(chéng)為與糖萼^H^f植另外與其結(jié)合的內(nèi)源,^4外源性(如;ix的)物質(zhì)的存在和/或濃度，并且這樣能提供有關(guān)(全身)糖萼體積或尺寸和/或其分子可及性(molecularaccessibility)的信息。通過例子的方式而沒有P艮制，一^:結(jié)合糖萼的內(nèi)源性凝集素白的分布，如在例如血漿或M品的樣品中所測(cè)定，育y^供有關(guān)糖萼的^減尺寸和/或其襯可及性(molecularaccessibility)的適當(dāng)信息。通過例子的方式而沒有限制，能夠?qū)⑸鲜龅奶禽喾€(wěn)態(tài)的指示物或才射⑩的變化與對(duì)照受錄或受絲們進(jìn)行t嫩，以^bi否出5^性差異，所述差異可f,^4型的提示。上iiiy^l萼才射彌的存在和/或^l可以，#^^同時(shí)地，通it^^頁域已知的測(cè)定技^€#^測(cè)，例如免疫J5D定，酶M疫吸附測(cè)定(ELISA)，放射免疫測(cè)定(RIA)，比色和熒皿活性測(cè)定等。9因此，i!X所教導(dǎo)的糖胺彩瞎治療可以i^一種或更多的此類變性過程，從而^t萼結(jié)構(gòu)和功能，即，修復(fù)糖萼的完整性。這里所關(guān)注的病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性的病情，能特別⑩見為，^aT、P艮于，蛋白#白蛋白尿。蛋白#白蛋白尿能常m用尤其是在隨才;i^M羊品中進(jìn)行的隨機(jī)力氏條測(cè)定法，或通過測(cè)量在24小時(shí)時(shí)間私泉中所排泄的各蛋白量(24小時(shí)排;^瞼)進(jìn)傷慨在隨機(jī)W氏條測(cè)定法中，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)^L^過8mg/dL,更^W^過30mg/dL時(shí)，可以定為蛋白尿。在24小時(shí)排;^^中，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)總量〉150mg/天時(shí)，更^Ab300mg/天，可以定為蛋白尿。在隨機(jī)^^氏條測(cè)定法中，當(dāng)白蛋白^i^過3mg/dL時(shí)，可以定為白蛋白尿。在24小時(shí)排^中，當(dāng)白蛋白總量或值介于30到300mg/天時(shí)，可以定為微量白蛋白尿，并且在〉300mg/天時(shí)可以定為大量白蛋白尿。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及藥物組楊在修復(fù)糖萼完藝f沐/或功能或預(yù)防糖萼破壞中的用途，該藥物組，包舍治療有效量的一種糖胺聚糖，或者兩種或更多糖胺彩瞎的混合物和藥學(xué)可接受的賦形劑，用于斷氐蛋白尿值和/或包括微量白蛋白M大量白蛋白尿的白蛋白尿值。另一方面涉^Jt胺彩睹，或者兩種或更多糖胺彩瞎的混合物，用于修復(fù)具有升高的血管蛋白質(zhì)滲逸f生的受錄的糖萼的完整t沐/或功能，其中這些受財(cái)具有蛋白尿；白蛋白尿，包括微量白蛋白絲大量白蛋白尿；糖尿病性腎?。惶悄虿?f&申經(jīng)??；或糖尿病'f勤見網(wǎng)膜病變。如i!E所述，特征為高j6r^的疾病包括所有其中循環(huán)xiMt的正常生理穩(wěn)態(tài)的擾動(dòng)屬于(即包含在)所述疾病的癥狀，和/或?qū)儆谒黾膊〉牟∫驅(qū)W因素的疾病。受^#高^疾病的診斷，即，生3SiE常iz^與不正常j6i^的區(qū)分，可通過許多臨床^ft中已知的方法進(jìn)行，包括但不限于空腹^1測(cè)試；以及口月ML靜樂MW量微。一種典型的空腹MM測(cè)^^-^1少10-12小時(shí)的空^^1后，測(cè)量受試者血液，血清或血漿中糖的濃度。該測(cè)試中全j6^t濃度的正常范圍(正常ii#(noraoglycaemia))^H^60mg/dL(3.Ommol/L)到110mg/dL(5.6mmol/L)。一種典型的口月W6t量微(OGTT)按下iiit行在一個(gè)整夜空腹期后(如，10-12小時(shí))，受試者喝入包含已知量的糖溶液；在受M者喝糖溶液前抽血，并且在喝^t溶液后每30-60分鐘再次抽血，持續(xù)直至3小時(shí)。75克口月W&t量，中全ii^濃度的正常范圍(正常M(normoglycaemia))是空g介于60mg/dL(3.O咖ol/L)到110mg/dL(5.6咖ol/L);喝完糖溶液1小時(shí)后，低于200mg/dL(10.l咖ol/L);喝完糖溶液2小時(shí)后，低于于140mg/dL(7.1mmol/X)。當(dāng)上述至少一個(gè)和優(yōu)逸兩個(gè)的測(cè)試，或在本領(lǐng)域常用的類似測(cè)試中血瞎?jié)舛雀哂谡Ｑ狗秶?，如，如上述，至少在一種情況下和M兩種或更多情況下，可以定為高血瞎。進(jìn)一步地，例如，在上面的空腹J^^1測(cè)試中，當(dāng)受^中全j64l濃度高于110mg/dL(5.6咖ol/L)但低于126mg/dL(6.4mmol/L)時(shí)，可診斷為空腹jMt受損(IFG)。當(dāng)受^"全jHt濃度高于126mg/dL(6.4mmol/L)時(shí)，可診斷為糖尿病。在上面的OGTT測(cè)試中，當(dāng)喝，溶液2小時(shí)后，受^r全M就高于140mg/dL(7.l咖ol/L)但低于200mg/dL(10.l咖ol/L)時(shí)，可診斷為^t量受損(IGT)。當(dāng)喝，溶液2小時(shí)后，受M全jfa4t濃度高于200mg/dL(10.l咖ol/L)時(shí)，可確診為糖尿病。當(dāng)診斷為IFG和IGT至少之一，并且M診斷為IFG和IGT兩者時(shí)，這種病慘故叫做"前馬E^t尿病"。因此，如這里所用，"特征為高血瞎"的病情或疾病或"高血瞎疾病，，特別地包括高血糖，前馬K^t尿病，胰島素耐受，l型糖尿病，2型糖尿病，代謝綜合征，等等。種'J性的可特別^M^臺(tái)療中受益的糖尿病的現(xiàn)象包括，尤其是，糖尿病lijk管病，例:i^t尿病'l"&申經(jīng)病，腎病和規(guī)網(wǎng)膜病變。本發(fā)明的各方面涉及使用能修復(fù)糖萼的完整性的糖胺聚糖及特別地sulodexide的治療。由itbfe管蛋白質(zhì)滲透性能夠有利地^l^氐，其在顯示病理性升高的血管滲透性(如由于與高jHt有關(guān)的疾病)的受試者中具有特別有用的應(yīng)用。術(shù)語"受試者"或"患者"^i^U旨動(dòng)物，更M^jk動(dòng)物，而更M脊堆動(dòng)物，并且甚至更^i哺乳動(dòng)物特別包括人類和非人類哺乳動(dòng)物，其是治療，，膝或的對(duì)象。術(shù)語"哺乳動(dòng)物"包括分為，如，包括，^R艮于，人類，家養(yǎng)動(dòng)物和耕作動(dòng)物，動(dòng)物園動(dòng)物，體育動(dòng)物，寵物，伙伴動(dòng)物以及動(dòng)物，例如，諸如，小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠，兔，狗，貓，豚鼠，牛，母牛，綿羊，馬，靜靈長(zhǎng)類，如猴和猿的^f可動(dòng)物。特別絲的是人類受絲，包括男姊其所有W類別。本治療特別g予需要其的受試者，該用語包括，將從一種給定病情，例如病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透'^^高*疾病的治療中受益的受M。這樣的受試者可包括，不限于，那些已診斷為具有所述病情的，那些傾向于發(fā)J^斤述病'^K或那些其中所述病情#^#^€免的。術(shù)語"治療"或"處理"包括對(duì)已M疾病的治療性的治療或處理，例如，已A艮的糖萼擾動(dòng)，病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透性或高血瞎疾病的治療或處理，以及預(yù)防性或避免性的措逸，其中目的是為了避免或減少不需要的痛苦的U率，例如為了艦糖萼擾動(dòng)，病理性升高的血管蛋白質(zhì)滲透')til高jMt疾病的傳染和i^艮的枳會(huì)。有益的和期望的臨M果可包括，但不限于，一種或更多癥狀，或一種或更多生物才^i己物的緩和，疾病程度的制氐，疾病病情的穩(wěn)定(即，不惡化)，疾病i^艮的^lil延緩，疾病病情的改善或減輕，等等。"治療"也可表示延M活瓶相較于如果絲受治療的預(yù)絲活期。術(shù)語"預(yù)防有效量"指活性物質(zhì)或藥學(xué)試劑的量，該量能抑制或m受試者的疾病的發(fā)作，如研究者，獸醫(yī)，內(nèi)科醫(yī)生或務(wù)他臨床醫(yī)生所調(diào)查的那樣。it^所用的術(shù)語"治療有效量"，指活性物質(zhì)或藥學(xué)試劑的量，其能引起受絲的生物或藥物反應(yīng)，如研究者，獸醫(yī)，內(nèi)科醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生所調(diào)查的那樣，其可包括尤其是被治療疾病或病癥的癥狀的減輕。用于確定治療^防有效劑量的方法在^4頁g已知的。特別地，itJL所關(guān)注的預(yù)防或治療有效量，育^t糖萼的結(jié)構(gòu)和/或功能，即，對(duì)糖萼完整性，產(chǎn)生可M^的和絲的雌，并且更^^^€^血管蛋白滲透性的升高或iiiiJ血管蛋白滲透性的可測(cè)量的和J^的I^[氐，例如在蛋白M白蛋白^fl^面a可觀測(cè)的升高或?qū)崿F(xiàn)可測(cè)量的和M的斷氐，或甚至達(dá)到將相應(yīng)值回歸至正常生理范圍。在上面討論的受試者和疾病病情中的用于預(yù)防和/或治療性修復(fù)糖萼的糖胺,，^t包紛o在本申請(qǐng)的^k^方描述的sulodexide。為了這里所述的治療的目的，所給予的諸如sulodexide的糖胺,育沐利地，作為藥學(xué)制劑賴&制和給予。該藥物組^7典型地包括，一種或更多種糖胺，，Msulodexide，或其藥學(xué)可接受形式，例如作為活性成分的其加成鹽，溶劑化物，水合物，或其包合物，以及一種或更多種藥學(xué)可接受的栽體/賦形劑。術(shù)語"藥學(xué)可接受的鹽"表示藥學(xué)可接受的酸或堿加成鹽。藥學(xué)可接受的酸M加成M示包括本GAG能形成的，有治療活性的it4酸和無毒堿加成鹽形式。具有堿性的GAG，通朋適當(dāng)?shù)呐灷硭鵬y^形式，能轉(zhuǎn)化成其藥學(xué)可接受的^r口成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚ǎ?，無才7L^例如氬卣酸，如，鹽酸或氬溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；或有機(jī)酸例如，諸如，醋酸，丙酸，羥基醋酸，乳酸，丙酮酸，草酸，丙二酸，琥珀酸(即，丁二酸)，馬來酸，富馬酸，蘋果酸，酒石酸，檸微，曱^^,乙^^，p-甲M^，環(huán)己#^,水楊酸，p-^J^鳩酸，樸酸等等。具有酸f生的GAG，通朋適當(dāng)?shù)挠胁?i4sU^減處理所述酸形式，能轉(zhuǎn)化成其藥學(xué)可接受的翻口成鹽。適當(dāng)?shù)膲A鹽形式包括，例如，銨鹽，堿金屬鹽和鞋金屬鹽，如，鋰，鈉，鉀，鎂，铞鹽等等，有機(jī)堿鹽，例如，節(jié)星青霉素，N-甲基-D"葡糖胺，hydrabamine鹽，以及^J^^例如，iH。，精氨酸，賴氨酸，等等。如i^E所述，"載體"或"賦形劑"包括，<封可或所有的溶劑，稀釋劑，緩沖劑(如，諸如，中#41沖鹽7片或磷酸鹽緩沖鹽水)，增溶劑，膠體，分散介質(zhì)，媒躲，填充劑，^^'J(如，諸如，EDTA或谷胱甘肽)，^iJ^(如，iH口，甘氨酸)，蛋白質(zhì)，崩解劑，津給劑，潤(rùn)滑劑，潤(rùn)濕劑，乳化劑，甜味劑，著色劑，芳射'J，增射'j，增稠劑，起倉(cāng)庫(kù)(d印ot)效應(yīng)的物質(zhì)，包衣劑，抗真菌劑，防腐劑，抗氧劑，張力控制物質(zhì)，吸^J^物質(zhì)，等等。這些介質(zhì)和物質(zhì)的用于藥物活性物質(zhì)的用it^^^頁域y^的。除非在^f可常M^h質(zhì)或物質(zhì)與GAG無法共存的情況，其在治療組合物中的用途可被關(guān)注。配制藥物組合物中使用的說明性的，非限制性的栽體包括，例如，水包油或油包7M(y^劑，適于靜脈內(nèi)(IVH^)的有或沒有有才;i^溶劑的水魁且^7，月旨質(zhì)城含表面活性劑的囊泡，樣沐，農(nóng)^N^^立體，粉末，片劑，膠嚢，栓劑，7JO性混懸劑，氣霧劑，及^fW4^頁域"f^^^Mv員來"^^顯然的栽體。本發(fā)明的藥物組^^i^上可以^S己制成用于<^<可給藥途徑，例如但不限于，口月Ml肺給藥(如，諸如，口月W下或^iUO，鼻內(nèi)給藥(如，諸如，鼻內(nèi)^LA^鼻內(nèi)粘麟用)，腸胃外給藥(如，諸如，皮下，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，M內(nèi)輛骨內(nèi)注射或灌注)，狄或透粘膜(如，諸如，口服，舌下，鼻內(nèi))給藥，局部給藥，直腸，陰iM氣管內(nèi)灌注，等等。以這種方式，本發(fā)明的方法和組合物可iii'J的治療效果可以是，例如，全身的，局部的，組織特異的，等，取決于發(fā)明的給定應(yīng)用的特定需求。^it^，發(fā)明的藥物組^可以^J己制成用于口"峰藥或腸胃外給藥。Sulodexide能可選擇艦過氣霧劑給藥。其通過制備包^i亥^^7的水性氣霧劑，脂質(zhì)體制劑或固體顆粒來完成。可以^^]非水性的(如，^^#^劑)混懸劑。^i^l聲波噴霧器，因?yàn)槠渥钚』幬颺^t^露于剪切(其可導(dǎo)致4t^物的降解)。一種水性氣霧劑被制備，例如，通itS己制一種含有藥物和常規(guī)藥學(xué)可接受的載體科1定劑的水1"生溶液或混懸液。載體^H急定劑由于特定^^物的需求而M型地，包括非離子型表面活性劑(&顯，普朗尼克，或聚乙二醇)，無4^白質(zhì)如血清白蛋白，脫水山梨糖醇酯，油酸，卵磷脂，^J^^例^^氨酸，緩沖劑，鹽，糖，或糖醇。例如，組^可以以l^^t體的形式，包含至少一種合適的表面活性劑，如，磷脂表面活性劑。磷脂的說明性的例子包括二?；柞ヵ８视皖?，例如二-肉豆蔻酰磷酯酰甘油(DPMG)，二棕櫚,酯酰甘油(DPPG)，以及J^^旨酰辨酯酰甘油(DSPG)，二酰基磷酯^a^類，例如二-肉豆蔻自酯^a^(DPMC),J^櫚^酯^s^(DPPC),以及J^^旨酰磷酯酰M(DSPC);二tt磷酯酸類，例如二-肉豆蔻,脂酸(DPMA)，dipahnitoyl磷脂酸(DPPA)，以;5Lr^W旨S5t^脂酸(DSPA);以^L二^L磷酯跣乙醇胺類，例如二-肉豆蔻酰磷酯酰乙醇胺(DPME)，二棕櫚酰磷酯酰乙醇胺(DPPE)以及J^EW旨,酯酰乙醇胺(DSPE)。典型地，水f生制劑中的表面活性劑活性成分的摩爾比將從約10:l到約l:10，更典型駄約5:1到約1:5，但寸爿可表面活性劑的有效量可被用于水性制劑以最佳^^kit應(yīng)所感興趣的特定目標(biāo)。氣霧劑^由等滲溶液制成。當(dāng)以栓劑的形式經(jīng)直腸給藥時(shí)，這些制劑可通過混合本發(fā)明的活性物質(zhì)和適當(dāng)?shù)臒o刺激性賦形劑而制成，這些賦形劑例如可可脂，合成甘油酯或聚乙二醇，其在常溫下是固體，但是在，道腔中液4沐/或融化以釋放藥物。it^貼劑具有為身^R供控釋Sulodexide的額外益處。這樣的劑型肯feii過在合適介質(zhì)中溶解或緣藥物而制成。吸收m劑也能用于提高活性物質(zhì)it^L的通量。該通量的速率能通過提m率控制膜或在聚^^l^或膠中^^活性物質(zhì)，而得到控制。目艮用制劑，目艮用軟骨，粉末，溶液，等等，樣發(fā)明的范圍內(nèi)被關(guān)注。例如，對(duì)于口月峰藥來說，藥物組合物可以配制為丸劑，片劑，漆片劑(lacqueredtablets),包衣(例如，糖包衣)片劑，錠劑，^a劑，硬和軟明膠股嚢，糖錠(troches),糖衣丸，水性，醇1油十錄液，糖漿，#劑，乳劑或混懸劑，貼片劑，等等，包括本領(lǐng)域已知的緩釋制劑和腸溶(gastroresistant)制劑。因?yàn)槠浣o藥的方Y(jié)更，片劑和膠囊劑^^^的。參見，例如，Ansel的"PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems》，第8版，2005，LVAllen,NGPopovich和HCAnsel,Baltimore,Md:LippincottWilliams&Wilkins;《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第18版，1990,Mack出瓶/^司，Easton,Pa，為制劑制劑方面的指南。本發(fā)明的^^7也可通過控釋的方法或遞錄置給藥，其對(duì)^4頁域輛技^Mv員而言是Z/^的，例如，那些在US3845770;3916899;3536809;3598123;和4008719，5674533，5059595，5591767，5120548,5073543，5639476，5354556,及5733566中描述的，這些公開中的^"-個(gè)都通過直接引用納^^文。這些藥物組*能用于提供其中所1"M的一種或更多活性成分的緩慢#^丈或控制#^丈，例如，通過"ft^]羥丙甲基纖維素，雞聚^7M,艦，可滲itM，滲透系統(tǒng)，多層包衣，孩財(cái)立，月旨質(zhì)體，孩姊，等等，或其組合，以提供所需的不同比例的釋i文才莫式。本Z頁域"fit^支^A員么如的^^適的控釋制劑(包4^卩些這里描述的)，可以為了本發(fā)明的藥物組合物的使用而容易地^it擇。因此，適于口服給藥的單一單位劑量形式，例如片劑，膠囊劑，皿嚢劑，小膠嚢劑等等(其適用于控釋)，包4行本發(fā)明中。所有控釋藥物產(chǎn)品有相同的目標(biāo)，即&逸藥物療法超過其非控釋對(duì)應(yīng)產(chǎn)品所能達(dá)到的。理想地，藥物治療中最優(yōu)化設(shè)計(jì)的控釋制劑的使用的特征為最少化的所^JD的藥物成分在最少的時(shí)間內(nèi)治療或控制病情。控辨'J劑的優(yōu)點(diǎn)可包拾1)藥物延長(zhǎng)的活性；2)f^f氐的給藥頻率；以及3)升高的受財(cái)^vt。大多數(shù)控釋制劑被設(shè)計(jì)il^先釋放一定量的藥物以迅逸產(chǎn)生所需治療效果，然后魏和持續(xù)^*^#^跳量的藥物以在一個(gè)很長(zhǎng)的時(shí)間段中維#^水平的治療。為了維持體內(nèi)藥物恒定水平，藥物必須從劑型中以將^fW皮代謝和排泄出體夕卜的藥物量的速率#^?；钚猿煞值目蒯尶杀欢喾N誘導(dǎo)因素就，例如，PH，溫度，酶，水，或其他生理狀態(tài)或^^。本
發(fā)明內(nèi)容中的術(shù)語"控釋成分"或"控#^且分"孚議義為一種^^或一些^^，包括，但不限于，聚#，聚，M，皿，可滲，脂質(zhì)體，孩姊，或類似物，或其組合，其M活性成分的控制銜文。在一個(gè)例子中，非限制性地，口服劑型的制備可以合it^過與一種適量的以粉末形式的活性成分，^fi^也包括磨細(xì)的一種或更多固體栽體，4均勻和密切地〉V^，并將^^制成丸劑，片劑，或膠嚢劑來完成。^'j的但非限制的固體載體包括，磷酸鉤，石W旨酸鎂，滑石粉，糖(如，諸如，葡萄糖，甘鎌，專Ut或蔗糖)，糖醇(如，諸如，甘露醇)，糊精，淀粉，明膠，纖維素，聚乙,比咯烷酮，4緣點(diǎn)蠟以及離子交換樹脂。包含藥物組絲的壓縮片劑可通過將活性物質(zhì)與如上所述的固態(tài)栽體均勻和密切地^給，以提#^"種具有必需的壓縮性的混合物，并且然后在合適的機(jī)器中壓緊混合物至所需的形狀和尺寸來制備。才駭片劑可通錄適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中模制而制得，其中粉末化的活性成分用惰性液^#釋劑潤(rùn)濕。軟明證嚢^r劑的合適載體是，例如，脂肪，蠟，半固體和液體多元醇，天然或硬化油等。通過具體的方式，t種片劑，扁膠嚢，小膠囊，級(jí)嚢可以包含從約10mg到約1000mg的GAG艇sulodexide，更^ii^約25mg到約1000mg的GAGMsulodexide，更^!i^約25mg到約250mg的GAG^itsulodexide。口月峰藥的明皿嚢單位劑量形式，可以用本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法制備(Ebert1977.PharmTech1:44-50)。軟舉!"生明皿嚢具有一種軟的，球形的明膠殼(稍微化f更明皿嚢的厚一些)，其中明膠通過添加Vth油，山梨醇，或類似多元醇的增塑劑塑化。膠囊殼的^JL可以通it^所用明膠的類型以及增塑劑和水的量來改變。軟明膠殼可以包含防腐劑，例如尼泊金甲酯和尼泊金丙酯以及山梨酸，以避克真菌的生長(zhǎng)?；钚晕镔|(zhì)可以被溶解或混懸到，諸如植物或礦物油的液體J^^或載體中，諸如聚乙二醇和丙二醇的雙羥基類，甘油三酯，諸如聚山梨醇酯的表面活性劑或其組合。例如，對(duì)于腸胃外給藥來說，藥物組*可有利地用合適的溶劑，稀釋劑，助溶劑或ll/ft劑等配制成溶液劑，混懸劑或乳劑。^^適的溶劑是，非限制地，水，生理鹽7j^i^絲如乙醇，丙醇，甘油的醇，另外也是諸如葡萄糖，轉(zhuǎn)4緣，蔗糖或甘溶液的糖溶液，或可選擇:t^斤M的^t溶劑的^^?？勺⑸淙芤簞┗驊腋┛蒦^已知技術(shù)配制，使用適當(dāng)?shù)臒o毒的，腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑，例々咁OT,1，3-丁二醇，水，脅絲等^^4內(nèi)溶液，或適當(dāng)?shù)腗或潤(rùn)濕和混懸試劑，例如無菌的，刺激性小的，不揮發(fā)油，包括合成的單甘油g旨或甘油二酯，以^J旨肪酸，包^>'由酸。本發(fā)明的活性成分和其藥學(xué)可接受的鹽也可以是凍干的，并JL^得的凍干粉，可例如用于注射劑或輸注制劑的制造。例如，一個(gè)靜脈使用的栽體的示例性的例子包括10WSP乙醇，40WSP丙二醇或聚乙二醇600和平衡USP注射用水(WFI)的混合物。其他靜脈使用的示例性的載體包括IO仰SP乙醇和USPWFI;USPWFI中的0,01-0.1%三乙醇胺；或USPWFI中的0.01-0.2。/。^^櫚^^脂^s^;以及1-10%的角鯊烯或腸胃外水,物油乳劑。皮下或肌內(nèi)使用的栽體的示例性的例子包括磷g緩沖鹽水(PBS)溶液，WFI中的5%右旋齡5%右旋糖中的0.01-0.1%三乙醇胺或USPWFI中的0.9%t/f^,或10%USP乙醇，40%丙二醇和平衡可接受的諸如5°/。右旋糖或0.9%氯^4內(nèi)的等滲溶液的1到2或1到4》V給物;或USPWFI中的0.0卜0.2%J^櫚fc^M旨^a^和1到10°/。角篁烯或腸胃外水包植物油乳劑。當(dāng)7jo性制劑為優(yōu)選時(shí)，其可包^—種或更多表面活性劑。例如，組合物可以是以膠^^^:體的形式，其包含至少一種合適的表面活性劑，例如，一種磷脂表面活性劑。磷脂的示例性的例子包括二^^磷酯酰甘油類，例如二-肉豆蔻,酯酰甘油(DPMG)J^櫚,酯酰甘油(DPPG),以及J^^旨,酯酰甘油(DSPG),二^4磷酯^s^yl，例如二-肉豆蔻自酯^^(DPMC),^^櫚酰疇酯^喊(DPPC)，以及J^W旨,酯^a喊(DSPC);二酰J^磷酯酸類，例如二-肉豆蔻^M旨酸(DPMA)，dipahnitoyl磷脂酸(DPPA)，以及Ji^^旨酰磷脂酸(DSPA);以及二j^j^磷酯酰乙醇胺類，例如二-肉豆蔻,酯酰乙醇胺(DPME),二棕櫚酰磷酯酰乙醇胺(DPPE)以;S^fS旨跣磷酯酰乙醇胺(DSPE)。典型地，水法制劑中的表面活性劑活性成分的摩爾比將從約10:l到約l:10，更典型itk^J々5:l到約l:5，但^f可表面活性劑的有效量可凈M于水l"生制劑以最佳4^t合所感^^的特定目標(biāo)。^^頁域技^A員將理解上面的說明書是示例性的而非窮盡性的。的確，許多另外的配制技#藥學(xué)可接受的賦形劑和栽體溶^t于那些本領(lǐng)域技術(shù)人員來il^^^的，同樣地，在多種治療方案中^^本i^斤述的特定的組^7的適當(dāng)給藥和治療方案的開發(fā)也是如此。本活性物質(zhì)可單獨(dú)使用或與^^V^4頁域7^療法組^f吏用以修復(fù)糖萼完整性，剮氐血管蛋白質(zhì)滲透性或治療高血瞎病狀的治療相組合("組合療法")。這里所關(guān)注的組合療法可包M予至少一種本發(fā)明的活性物質(zhì)和至少一種務(wù)他藥學(xué)或生物學(xué)活性成分。所迷本發(fā)明活性物質(zhì)和所述藥學(xué)或生物學(xué)活性成分可以翻目同或不同藥物制劑中，同時(shí)或以^f可順序^itki會(huì)藥。所使用的本活性物質(zhì)的劑量或量，^i4^與一種或更多其^Mf施用的活性^^/組合，取決于個(gè)沐情況并且，如常規(guī)的，適應(yīng)^Mf況以iiJ'J最佳效果。因此，W^于所治療疾病的')4^和嚴(yán)重性，并且^:于性別，*，體重，^^狀況，飲食，給藥的方式和時(shí)間，以;s^斤治療的人類或動(dòng)物的個(gè)^^反應(yīng)性，絲于給藥途徑，所^JU的^^的效率，代i射t、定寸沐作用持續(xù)性，取決于治療是否是急'f械慢性或預(yù)防性，或取決于是否在本發(fā)明的藥物以外給予其他活性物質(zhì)。^it^,藥物組合物可以單一或分開的劑量給藥，一天一到四次，或例如每2，7，14，21或28天一次。口月良劑型可方便的以^f立劑量形維出并JUt過藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。在M實(shí)施方式中，制劑可以以，包括從10mg到1000mg每^^立劑量，更^Lit^25到1000mg每^f立劑量或從25到250mg每牟f立劑量或從25到200mg每單位劑量的牟f立劑量形式的GAGs(優(yōu)選sulodexide)，提供。在務(wù)本實(shí)施方式中，^f立劑量可包括約10mg,25mg，50mg,75mg，100mg，125mg,150mg，175mg,200mg,225mg，250mg，275mg，300mg,325mg,350mg，375mg，400mg，425mg,450mg，475mg,500mg，525mg，550mg，575mg,600mg，625mg，650mg，675mg,700mg,725mg,750mg，775mg，800mg，825mg,850mg,875mg,900mg，925mg,950mg，975mg，或1000mgGAGssulodexide)。所述的量可每天一或更多;^y^予^i4A類受試者的受試者。非P艮制地，取決于疾病的種類和嚴(yán)重性，典型日劑量可以從約0.05mg/kg到約100mg/kg體重，更典型;ttk^于約lmg/kg到約20mg/kg體重，這取決于上述因素。對(duì)于在M或更長(zhǎng)時(shí)間的^1給藥，取決于疾病狀況，治療持續(xù)到出現(xiàn)所期望的疾病癥狀的抑制。因此，通過例子的方式，可將約0.5mg/kg，2.Omg/kg，4.Omg/kg,10mg/kg或20mg/kg(或其任意組合)的一種或更多種劑量給予患者。這樣的劑量可間驗(yàn)藥，如，每周或每三周。上述方面和具體實(shí)施方式進(jìn)一步地通過下述非限制性實(shí)施例支持。本實(shí)施例證明石i^^4t胺，及特別地sulodexide修復(fù)培養(yǎng)的高ii^內(nèi)皮細(xì)胞的糖萼屏障性能，從而證實(shí)其斷氐高錄疾病中的病理性升高的血管滲透性的應(yīng)用型。實(shí)施例1從Gibco-BRL獲得M199培養(yǎng)基，L-^t^，抗生素-M菌藥和胰蛋白酶，從FreseniusKabi獲得PBSpH:7.4，并從Biowhittaker獲得胎牛血清(FBS)。下面的^^從Sigma獲得；,內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑(ECGS)。D(+)葡萄糖從Merck獲得。纖維連接蛋白由CentralLaboratoryforBloodtransfusion(CLB)，Amsterdam,荷蘭贈(zèng)予。半滲透的^A物(semi-permeableinserts)12孑L(well)3ijm管孑L購(gòu)自Greiner。HUVEC細(xì)急Amsterdam的AMC的產(chǎn)科獲得的人類卿中分離。簡(jiǎn)單而言，^^樂:MMl用胰蛋白酶溶液前插管并用PBS沖洗。胰蛋白酶溶液于37。C下溫育以從靜樂^l管壁上解離內(nèi)皮細(xì)胞。收IU^蛋白酶溶液，并且用PBS沖洗靜脈。細(xì)g液在1100rpm下離心10分鐘，去除上清液并且細(xì)胞團(tuán)在5mlM199培養(yǎng)基中再懸浮。細(xì)絲37'C下和5%C02中，在補(bǔ)絲20%熱滅活胎牛血清，50yg/ml賄和12.5jag/ml內(nèi)皮細(xì)敲長(zhǎng)添加劑，0.2咖o1/1L-錄m^100U/ml青霉素-G，100U/ml絲黢鏈霉素,25jag/ml兩性霉素B的M199培養(yǎng)基中在10jug/ml纖^i^絲白涂布的細(xì)艦養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)。extentheparan)和石皿角質(zhì)素的底物類似物。細(xì)胞在5謹(jǐn)氯酸鈉和200jam4-甲基鄉(xiāng)酮的M的抑制劑的存在下，培養(yǎng)24小時(shí)，并且評(píng)估內(nèi)皮滲透性。為了測(cè)定滲透性，人類^^脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)在半滲透^X物上培養(yǎng)，并JL^露于正常血糖(5mM)或高血糖(25raM)5天，最后24小時(shí)GAG混合物以高至60jag/ml的^1存在。內(nèi)皮滲透'htii過檢測(cè)FITC才射己的白蛋白通過單層細(xì)胞的#^多來^#。具有HUVEC細(xì)胞的頂室在沒有^!Hi:的1%BSA/RPMI1640培養(yǎng)基中與400pg/ml的FITC才射己的白蛋白-^^顯育。3小時(shí)后底孔中的培養(yǎng)J^皮移除，并且FITC白蛋白襯用在Fluostar中的熒it^譜法測(cè)量。溫育5天后，HUVEC細(xì)胞用》Pf的RPMI1640洗兩次，并且在室溫下在4%多聚曱醛中固定30分鐘。細(xì)#凝集素緩沖液(HBSS中的0.1%BSA)中清洗三次，并且用67jag/ml的FITC-LEA(^4十對(duì)葡糖胺殘留物或殘基)，以及69ug/ml的tritc-bsi(其針對(duì)半享Ut胺殘留物或殘基)，以及10mg/ml的hoechst(其對(duì)細(xì)胞核染色)在室溫下溫育30分鐘。30分鐘后，細(xì)胞用凝集素緩沖液沖洗并用熒微1^^像。^^1統(tǒng)計(jì)分析，雙向不Mt檢驗(yàn)。P<0.05的值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)Ji^的，并且M均值土SE。實(shí)施例2，*的測(cè)定分離的HUVECs在半滲it^上，^i常血糖(5mM)條件下培養(yǎng)5天。5天后，單層細(xì)胞的形M過測(cè)量FITC才朽己的白蛋白通過該單層細(xì)胞的內(nèi)皮#^多來評(píng)估。FITC白蛋白的M滲透性非常低，其表示固相形成。實(shí)施例3正常jfo^高血瞎下單層細(xì)胞的滲透性的測(cè)定HUVECs在高錄(25mM)*下橋養(yǎng)5天，以^H亥餅是否^^響內(nèi)皮滲透性。圖1顯示^JL常j6i^高iMt下生長(zhǎng)的HUVECs的滲透性。正常j64t務(wù)降下生長(zhǎng)的HUVECs的白蛋白穿過率^bt為100%。高J&4I將白蛋白滲透性升高22%(p<0.01)，表示屏障的退化。實(shí)施例4^D糖萼抑制劑后的單層細(xì)lfe^透性的測(cè)定為了測(cè)定糖萼在白蛋白滲透性中的屏障功能，我們?cè)?24小時(shí)內(nèi)，將在正常ii^條件下生長(zhǎng)的HUVECs與糖萼抑制劑氯酸鈉和4-曱基傘形酮一起溫育(圖2)。熒iU6譜顯示，與FITC白蛋白"^j顯育3小時(shí)后，相比于絲糾，，萼抑制劑存在下的白蛋白滲透性升高4倍。由于抑制劑iat了某些GAGs的摻入，并iliiitil樹坎，形成一種不完善的糖萼，這些發(fā)現(xiàn)證明了糖萼對(duì)于帶負(fù)電荷的大分子的屏障功能的重要f生。實(shí)施例5在補(bǔ)充Sulodexide化^后單層細(xì)^9fe^透性的測(cè)定為了修復(fù)高錄引起的滲透性升高，力口入增加量的Sulodexide到模型中以測(cè)定能修復(fù)內(nèi);^萍障功能的最佳劑量。培養(yǎng)的細(xì)g最后的24小時(shí)內(nèi)，與0.06,0.6和6jug/ml劑量的Sulodexide—起溫育。圖3所示的劑量范圍顯示0.06mg/ml的最^j^的sulodexide，對(duì)于高j64t引起的滲透性升高的修復(fù)具有非常有益的^。GAG溫育修復(fù)高jfa4t中的滲透性(122±8財(cái)目對(duì)85士6%;p<0.05)甚至導(dǎo)liS^白蛋白漏出的斷氐。FI丁C-LEA凝集素染色用于測(cè)定HUVECs的糖萼層中的硝黢乙itlf素/透明質(zhì)烷含量。LEA-凝集素，其針對(duì)石^^和透明質(zhì)烷中的葡糖胺殘留物或殘基，顯示在GAG混合溫育后修復(fù)的高血瞎細(xì)胞中葡糖胺染色減弱21%,如在圖4中指明的。增強(qiáng)的染色同與0.06|ag/mlsulodexide"-^^顯育后的修復(fù)的屏障功能有關(guān)。權(quán)利要求1、一種糖胺聚糖或者一種以上的糖胺聚糖的混合物在制備用于修復(fù)糖萼功能或避免糖萼損傷的藥物中的用途。2、H又利要求1所述的用途，M征在于所述^t胺^t是sulodexide。3、^4又利要求2所述的用途，其用于制備可通過口服、腸胃夕卜，鼻內(nèi)，肺部，狄，局部，細(xì)，陰iii^誠(chéng)用從而用于修復(fù)糖萼功肖談教糖萼損傷的藥物。4、如^U'J要求3所述的用途，其用于制備用于修復(fù)具有高血瞎的受M的糖萼的完塾性的藥物。5、一種用于修復(fù)或i^t萼損傷的藥物組合物，其包^^'臺(tái)療有效量的一種糖胺聚瞎，或者一種以上的糖胺彩瞎的濕合物，以及藥學(xué)可接受的賦形劑。6、權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所i^t胺^t是Sulodexide。7、權(quán)利要求5所述的藥物組*,^#*于給藥方歧口服，腸胃夕卜，鼻內(nèi)，肺部，狄，局部，JLM，陰脅藥。8、權(quán)利要求5所述的藥物組^的用途，其用于剮氐蛋白尿值，包括微量白蛋白M大量白蛋白尿的白蛋白^^值。9、權(quán)利要求6所述的藥物組合物的用途，M征在于，所述Sulodexide以從約25mg到1000mg每麥f立劑量的量給藥。全文摘要本發(fā)明涉及糖胺聚糖用于修復(fù)糖萼或避免修復(fù)糖萼的破壞的用途。糖胺聚糖的有效性是針對(duì)所有這樣的病狀，其中糖萼的破壞或該功能可以是諸如血管疾病，膿毒性狀態(tài)，動(dòng)脈粥樣硬化綜合征，炎癥狀態(tài)和涉及缺血的疾病，腹腔功能障礙，心肌梗死，腦血管事件，糖尿病中的酶促糖基化改變，腎損傷，如潰瘍性結(jié)腸炎病的腸病，涉及肺部?jī)?nèi)皮代謝活性改變的塵肺的許多病狀的病因。文檔編號(hào)A61K31/726GK101632686SQ20091014199公開日2010年1月27日申請(qǐng)日期2009年4月2日優(yōu)先權(quán)日2008年4月4日發(fā)明者E·S·G·斯托絲,H·溫科申請(qǐng)人:馬斯特里赫特大學(xué)