專利名稱：具有ccr5受體拮抗劑活性的用于治療hiv和炎癥的被咪唑并吡啶取代的托烷衍生物的制作方法
本申請(qǐng)是針對(duì)申請(qǐng)日為2004年9月28日、中國申請(qǐng)?zhí)枮?00480028683.6(國際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/IB2004/003153)、發(fā)明名稱為“具有CCR5受體拮抗劑活性的用于治療HIV和炎癥的被咪唑并吡啶取代的托烷衍生物”的發(fā)明申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
本發(fā)明涉及托烷衍生物、其制法、含有該托烷衍生物的組合物以及它們的用途。
更特別的是，本發(fā)明涉及8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷衍生物在治療多種疾病上的用途，所述疾病包括涉及調(diào)節(jié)(尤其是拮抗)趨化因子受體CCR5的疾病。因此，本發(fā)明的化合物可用于治療HIV，例如HIV-1，及遺傳相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染(及所導(dǎo)致的獲得性免疫缺陷綜合征，AIDS)，以及炎性疾病。
術(shù)語“趨化因子”是“趨化性細(xì)胞因子”的縮寫。趨化因子包括一大家族的蛋白質(zhì)，它們具有共同的重要結(jié)構(gòu)特征并具有吸引白細(xì)胞的能力。趨化因子作為白細(xì)胞的趨化因子，在吸引白細(xì)胞至體內(nèi)各組織的過程中起必不可少的作用，該過程對(duì)于炎癥及身體對(duì)感染的響應(yīng)均是必要的。由于趨化因子及其受體是炎癥及感染性疾病的病理生理學(xué)中樞，因此能調(diào)節(jié)(優(yōu)選拮抗)趨化因子及其受體的活性的藥劑適用于所述炎癥及感染性疾病的治療性處理。
趨化因子受體CCR5對(duì)炎癥及感染性疾病的治療尤其重要。CCR5是趨化因子的受體，特別是命名為MIP-α及MIP-β的巨噬細(xì)胞炎性蛋白(MIP)和經(jīng)由活化作用調(diào)節(jié)并由正常T細(xì)胞表達(dá)且分泌的蛋白質(zhì)(RANTES)的受體。
現(xiàn)在，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一類化合物，其為CCR5受體的強(qiáng)效且具選擇性的調(diào)節(jié)劑，尤其是拮抗劑。
根據(jù)本發(fā)明的第一種方面，提供如下所示的式(I)化合物
或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，其中 R1是C1-C6烷基；及 R2是C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基，其中烷基任選被CF3取代。
術(shù)語“烷基”作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分包括直鏈及支鏈基團(tuán)。烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基及叔丁基。術(shù)語“C3-C7環(huán)烷基”表示環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R1是C1-C4烷基。
在另一實(shí)施方案中，R1是甲基。
在另一實(shí)施方案中，R2是任選被CF3取代的C1-C4烷基。
在另一實(shí)施方案中，R2是環(huán)丙基或環(huán)丁基。
在另一實(shí)施方案中，R2是甲基、乙基或異丙基。
可以理解的是，本發(fā)明涵蓋了上文所述的本發(fā)明實(shí)施方案的全部組合，只要其符合式(I)化合物的定義。
本發(fā)明的化合物包括式(I)化合物及其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物(其中衍生物包括復(fù)合物、前藥、經(jīng)同位素標(biāo)記的化合物，以及它們的鹽與溶劑化物)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物是式(I)化合物及其可藥用的鹽與溶劑化物，特別是式(I)化合物。可理解的是，上述的本發(fā)明化合物包括其多晶型物及異構(gòu)體。
式(I)化合物的可藥用的鹽包括其酸加成鹽及堿鹽。
適宜的酸加成鹽由形成無毒鹽的酸類形成。實(shí)例包括醋酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、羥基苯甲酰基苯甲酸鹽(hibenzate)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲硫酸鹽、萘甲酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸一氫鹽/磷酸二氫鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、灑石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟醋酸鹽。
適宜的堿鹽由形成無毒鹽的堿類形成。實(shí)例包括鋁鹽、精氨酸鹽、芐星鹽(benzathine)、鈣鹽、膽堿鹽、二乙胺鹽、二乙醇胺鹽(diolamine)、甘氨酸鹽、賴氨酸鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、乙醇胺鹽(olamine)、鉀鹽、鈉鹽、氨基丁三醇鹽及鋅鹽。
對(duì)于適宜鹽的綜述，參見Stahl與Wermuth所著的“Handbook ofPharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use”(Wiley-VCH，Weinheim，德國，2002)。
式(I)化合物的可藥用鹽可由下列三種方法中的一種或一種以上的方法制備 (i)使式(I)化合物與所需的酸反應(yīng)； (ii)從式(I)化合物的適宜前體中除去對(duì)酸或堿不穩(wěn)定的保護(hù)基，或使用所需酸使適宜的環(huán)狀前體(例如內(nèi)酯或內(nèi)酰胺)開環(huán)； (iii)與適宜的酸反應(yīng)或利用適宜的離子交換柱，將式(I)化合物的一種鹽轉(zhuǎn)化為另一種鹽。
上述三種方法通常于溶液中進(jìn)行。鹽可從溶液中沉淀出，過濾收集或蒸發(fā)溶劑而予以收集。該鹽的離子化程度處于完全離子化至幾乎不離子化之間。
本發(fā)明化合物可存在未溶劑化形式與溶劑化形式兩種。本文所用的術(shù)語“溶劑化物”用于說明這樣一種復(fù)合物分子，其包括本發(fā)明的化合物及一種或一種以上的可藥用的溶劑分子，例如乙醇。當(dāng)該溶劑是水時(shí)，使用術(shù)語“水合物”。
復(fù)合物包括包合物，即，藥物-主體分子包含體復(fù)合物，與上述溶劑化物不同的是，此包含體復(fù)合物中的藥物與主體分子呈化學(xué)計(jì)量或非化學(xué)計(jì)量。復(fù)合物還包括含有兩種或兩種以上有機(jī)和/或無機(jī)組分的藥物的復(fù)合物，其中所述組分可呈化學(xué)計(jì)量或非化學(xué)計(jì)量。所得的復(fù)合物可以是離子化的、部分離子化的或非離子化的。對(duì)于這類復(fù)合物的綜述，參見Haleblian所著的J.Pharm.Sci.，64(8)，1269-1288(1975年8月)。
本發(fā)明的化合物具有結(jié)晶出一種以上形式的能力，即稱為多晶現(xiàn)象的特征，這類多晶型物全部涵括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)響應(yīng)溫度或壓力或這兩者的改變時(shí)，通常會(huì)發(fā)生多晶現(xiàn)象，亦可由于結(jié)晶過程的變化導(dǎo)致多晶現(xiàn)象。多晶型物可根據(jù)各種物理特征而加以區(qū)別，通常利用化合物的x-射線衍射圖、溶解行為及熔點(diǎn)來區(qū)分多晶型物。
式(I)化合物的某些衍生物本身具有極低或無藥理活性，當(dāng)施用于體內(nèi)或體表時(shí)，可被轉(zhuǎn)化為具有所需活性的式(I)化合物，例如利用水解裂解。這類衍生物稱為“前藥”。前藥應(yīng)用的進(jìn)一步資料可參照下列文獻(xiàn)“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及W.Stella)；及“Bioreversible Carriers in Drug Design”，Pergamon出版社，1987(E.B.Roche編輯，美國藥學(xué)協(xié)會(huì))。
例如，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知作為“前藥基團(tuán)”的某些基團(tuán)，例如H.Bundgaard所著的“Design of Prodrugs”(Elsevier，1985)中公開的基團(tuán)，置換式(I)化合物中存在的適當(dāng)官能團(tuán)，可制備本發(fā)明的前藥。
由于式(I)化合物含有仲氨基官能團(tuán)(-NHR，其中R≠H)，因此本發(fā)明的前藥實(shí)例包括它的酰胺，例如以(C1-C10)烷?；脫Q氫原子來產(chǎn)生。
上述實(shí)例的其它置換基團(tuán)的實(shí)例以及本發(fā)明的其它前藥類型的實(shí)例可參見上述文獻(xiàn)。
此外，某些式(I)化合物本身可作為其它式(I)化合物的前藥。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括式(I)化合物的代謝物，即，施用該藥物后在體內(nèi)形成的化合物。本發(fā)明的代謝物的部分實(shí)例包括 (i)當(dāng)式(I)化合物含甲基時(shí)，其代謝物為羥甲基衍生物(-CH3→-CH2OH)； (ii)當(dāng)式(I)化合物含有叔氨基時(shí)，其代謝物為仲氨基衍生物(-NR1R2→-NHR1或-NHR2)； (iii)當(dāng)式(I)化合物含有仲氨基時(shí)，其代謝物為伯氨基衍生物(-NHR1→-NH2)； (iv)當(dāng)式(I)化合物含有苯基時(shí)，其代謝物為苯酚衍生物(-Ph→-PhOH)； (v)當(dāng)式(I)化合物含有酰氨基時(shí)，其代謝物為羧酸衍生物(-CONH2→COOH)。
式(I)化合物可含有一個(gè)或一個(gè)以上的其它不對(duì)稱碳原子，故存在兩種或兩種以上的立體異構(gòu)體。式(I)化合物的托烷環(huán)可以以內(nèi)向(endo-)或外向(exo-)構(gòu)型進(jìn)行咪唑取代，故可能得到幾何順式/反式(Z/E)異構(gòu)體。例如，當(dāng)化合物含有酮基時(shí)，可發(fā)生互變異構(gòu)現(xiàn)象。由此推知，單一化合物可呈現(xiàn)一種以上的異構(gòu)現(xiàn)象。
式(I)化合物的全部立體異構(gòu)體都涵括在本發(fā)明范圍內(nèi)，包括所有的旋光異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體及互變異構(gòu)形式，以及呈現(xiàn)至少一種異構(gòu)現(xiàn)象的化合物，以及一種或一種以上這些形式的混合物。本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括酸加成鹽或堿鹽，其中抗衡離子有旋光活性(例如D-乳酸鹽或L-賴氨酸)，或者是外消旋的(例如DL-酒石酸鹽或DL-精氨酸)。
優(yōu)選托烷環(huán)以內(nèi)向構(gòu)型進(jìn)行咪唑取代。
可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)分離內(nèi)向/外向異構(gòu)體，例如色譜法及分步結(jié)晶法。
制備/分離個(gè)別對(duì)映異構(gòu)體的常規(guī)技術(shù)包括由適宜的旋光活性前體進(jìn)行手性合成，或者將外消旋物(或者鹽或衍生物的外消旋物)拆分，例如使用手性高壓液相色譜法(HPLC)。
或者，外消旋物(或外消旋前體)可與適宜的旋光活性化合物(例如醇)反應(yīng)；或者，當(dāng)式(I)化合物含有酸性基團(tuán)或堿性基團(tuán)時(shí)，使該外消旋物與諸如酒石酸或1-苯基乙胺的酸或堿反應(yīng)。所得的非對(duì)映異構(gòu)混合物可利用色譜法和/或分步結(jié)晶法分離，并且利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，將該非對(duì)映異構(gòu)體之一或兩者轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的純對(duì)映異構(gòu)體。
利用色譜法，通常是HPLC，在不對(duì)稱樹脂上進(jìn)行，流動(dòng)相由烴、通常是庚烷或已烷組成，其中含有0至50％、通常2至20％異丙醇以及0至5％烷基胺、通常是0.1％二乙胺，可制得富含對(duì)映異構(gòu)形式的本發(fā)明的手性化合物(或其手性前體)。濃縮洗脫液，得到富含對(duì)映異構(gòu)形式的混合物。
立體異構(gòu)體的混合物可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)予以分離，例如，參見E.L.Eliel所著的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley出版，紐約，1994)。
本發(fā)明還包括所有可藥用的經(jīng)同位素標(biāo)記的式(I)化合物，其中一個(gè)或一個(gè)以上的原子被置換為具有相同原子序、但原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與天然常見的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子。
適宜摻入本發(fā)明化合物的同位素的實(shí)例包括下列原子的同位素氫原子，例如2H及3H；碳原子，例如11C、13C及14C；氯原子，例如36Cl；氟原子，例如18F；碘原子，123I及125I；氮原子，例如13N及15N；氧原子，例如15O、17O及18O；磷原子，例如32P；以及硫原子，例如35S。
某些經(jīng)同位素標(biāo)記的式(I)化合物，例如摻入放射活性同位素的那些，適用于藥物和/或底物的組織分布研究。就摻入容易度及現(xiàn)有檢測(cè)手段而言，放射活性同位素氚(即3H)與碳-14(即14C)特別適用于此目的。
用較重的同位素(例如氘，即2H)取代，可以提供由于代謝穩(wěn)定性較大所產(chǎn)生的某些治療優(yōu)點(diǎn)，例如，體內(nèi)半衰期增加或劑量需求降低，故在一些情況下，優(yōu)選采用較重的同位素。
用正電子發(fā)射同位素(例如11C、18F、15O及13N)取代，可用于正電子發(fā)射斷層掃描(PET)研究來檢測(cè)底物受體的占有率。
通常可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，或通過類似于下文實(shí)施例與制備例中所述的方法，采用適宜的經(jīng)同位素標(biāo)記的試劑代替原先使用的未標(biāo)記試劑，制備經(jīng)同位素標(biāo)記的式(I)化合物。
本發(fā)明的可藥用溶劑化物包括其中用于結(jié)晶的溶劑被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
優(yōu)選的式(I)化合物包括實(shí)施例1-8的化合物，及其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物。
在一般制法及流程圖中，遵循下列條件除非另有指明，R1及R2如上定義；Z是OH或羧酸活化基團(tuán)，例如氯或1H-咪唑-1-基；EsGp是酯形成基團(tuán)，例如C1-6烷基；Pg是氨基保護(hù)基，例如boc；ArLg是適于芳族親核取代的離去基，例如Jerry March所著的“Advanced OrganicChemistry”(第4版，Wiley Interscience，1992，第652頁，引入本文作為參考)中公開的那些，例如有F、Cl、Br、OMe或OEt；boc是叔丁氧羰基；DMF是N，N-二甲基甲酰胺；DCM是二氯甲烷；THF是四氫呋喃；Lg是適于脂族親核取代的離去基，例如Jerry March(出處同前，第352頁，引入本文作為參考)中公開的那些，包括Cl、Br、I及磺酸酯類(例如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯及三氟甲磺酸酯)；WSCDI是1-(3-二甲基胺丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；DCC是N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺；HOAT是1-羥基-7-氮雜苯并三唑；HOBt是1-羥基苯并三唑水合物；HBTU是O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽。
根據(jù)第一種制法(A)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)的羧酸/胺偶合條件下，使式(II)化合物
與式(III)化合物反應(yīng)
該偶合反應(yīng)方便地在下文流程

圖1步驟(i)所述的條件下進(jìn)行。
根據(jù)第二種制法(B)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)的羧酸/胺偶合條件下，使式(XVI)化合物
與式(V)化合物反應(yīng)。

該偶合反應(yīng)方便地在下文流程圖1a步驟(i)所述的條件下進(jìn)行。
根據(jù)第三種制法(C)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)條件下，利用式(XX)的胺，
使式(XIX)的醛被還原胺化。

該還原胺化反應(yīng)方便地在下文流程圖1步驟(g)所述的條件下進(jìn)行。
根據(jù)第四種制法(D)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)條件下，利用式(XX)的胺，使式(XXI)的腈被還原胺化。

該還原胺化反應(yīng)方便地在下文流程圖1步驟(g)所述的條件下進(jìn)行。
根據(jù)第五種制法(E)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)烷基化條件下，利用式(XXII)化合物，
使式(XX)的胺被烷基化。在下列條件下，可方便地進(jìn)行該烷基化反應(yīng)在適宜的溶劑如鹵代烷(例如DCM)、醇(例如乙醇)或醚(例如THF)中進(jìn)行；任選有諸如胺類(例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺)的堿存在；且溫度為環(huán)境溫度至升高溫度(例如回流溫度)。
根據(jù)另一種制法(F)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)還原條件下，使式(XXIII)的烯酰胺被不對(duì)稱還原。

在下列條件下，可方便地進(jìn)行該不對(duì)稱還原反應(yīng)存在有過渡金屬(例如Rh、Ru、Pd、Pt、Ir或Ti)(例如0.001-0.1摩爾當(dāng)量)；手性配體，例如BINAP(2，2-雙(二苯膦基)-1，1’-聯(lián)萘)、tol-BINAP(2，2-雙(二對(duì)甲苯膦基)-1，1’-聯(lián)萘)、Du-PHOS(1，2-雙(2，5-二甲基磷

基(phospholano))苯)或Penn-Phos(P，P’-1，2-苯撐雙(內(nèi)向-2，5-二甲基-7-磷雜二環(huán)[2，2，1]庚烷))(例如0.001-0.2摩爾當(dāng)量)；氫原子供體，例如氫分子、苯基硅烷、2-丙醇或甲酸銨；于諸如醇(例如甲醇、乙醇或2-丙醇)、腈(例如乙腈)、酯(例如乙酸乙酯)、醚(例如THF)或甲苯的溶劑中進(jìn)行；溫度為0℃至回流溫度；且任選在升高壓力下。
根據(jù)另一種制法(G)，式(I)化合物的制備是在常規(guī)條件下，式(II)的胺或其金屬鹽(即去質(zhì)子型)與式(XXIV)的酯反應(yīng)。
R1CO2EsGp (XXIV) 在下列條件下，可方便地進(jìn)行上述反應(yīng)存在有過量的堿，諸如胺(例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺)；任選的催化劑；于適宜的溶劑如鹵代烷(例如DCM)、醚(例如THF)、酯(例如乙酸乙酯)或甲苯中；有或無水存在作為助溶劑?；蛘?，該反應(yīng)在酶-催化劑的存在下、在適宜的溶劑如鹵代烷(例如DCM)、醚(例如THF)、酯(例如乙酸乙酯)或甲苯中進(jìn)行，有或無水存在作為助溶劑。
本文隨后附上流程圖，其進(jìn)一步說明制備式(I)化合物及其相關(guān)中間體的一般方法。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將可理解，流程圖中說明式(I)化合物及其相關(guān)中間體的制備的某些操作可能不適用于某些可能的取代基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員更可理解，可能有必要或希望采用異于流程圖所描述的順序來進(jìn)行轉(zhuǎn)化，或者對(duì)一種或一種以上的轉(zhuǎn)化反應(yīng)進(jìn)行變通，以得到所需的式(I)化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員亦可理解，如下文流程圖所示，在式(I)化合物合成的任一階段，可能有必要或希望保護(hù)分子內(nèi)的一個(gè)或一個(gè)以上的敏感基團(tuán)，以避免不希望的副反應(yīng)。具體而言，有必要或希望保護(hù)氨基。制備式(I)化合物所使用的保護(hù)基可以以常規(guī)方式使用。例如，參見Theodora W.Green與Peter G.M.Wuts所著的“Protective Groups in OrganicSynthesis”，(第3版，John Wiley and Sons，1999)，特別是第7章第494-653頁(“氨基的保護(hù)”)，該文獻(xiàn)引入本文作為參考，該文獻(xiàn)還描述了除去這類基團(tuán)的方法。
氨基保護(hù)基團(tuán)boc、芐氧羰基、甲氧羰基、芐基及乙酰基特別適用于式(I)化合物及其相關(guān)中間體的制備。
流程圖1
具體參照流程圖1，其中描述的轉(zhuǎn)化反應(yīng)可根據(jù)下列步驟達(dá)成 (a)利用式(XIV)的胺取代式(XV)的硝基吡啶上的離去基，該反應(yīng)方便地在下列條件下進(jìn)行存在有諸如胺(例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺)或堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉或碳酸鉀)的堿；于溶劑如醇(例如甲醇或乙醇)、腈(例如乙腈)或酰胺(例如DMF)中；且溫度為環(huán)境溫度至升高溫度(例如至多約120℃)。
(b)將式(XIII)的氨基-硝基吡啶予以還原及原位環(huán)化，可制備式(XII)的咪唑并吡啶，該反應(yīng)方便地在下列條件下進(jìn)行有還原劑(例如鐵粉)的存在，于諸如羧酸(例如乙酸)的溶劑中進(jìn)行，且溫度為環(huán)境溫度到至多約120℃。通過添加醋酸酐和在升高溫度(例如約140℃)下，可方便地進(jìn)行中間體氨基-氨基吡啶的環(huán)化反應(yīng)。
(c)通過催化氫化，可方便地進(jìn)行式(XII)的咪唑并吡啶向式(XI)的咪唑并哌啶的還原，其中催化氫化在適宜催化劑、例如過渡金屬催化劑如鉑(氧化鉑)或鈀(例如氫氧化鈀或披鈀炭)催化劑的存在下，于諸如醇(例如甲醇或乙醇)或羧酸(例如乙酸)的溶劑中進(jìn)行，溫度為環(huán)境溫度至升高溫度(例如至多約80℃)；壓力為升高壓力，例如150至500kPa氫氣(例如400kPa氫氣)。
(d)通過與氯甲酸烷基酯(例如氯甲酸甲酯)反應(yīng)，使式(XI)的咪唑并哌啶被保護(hù)。該反應(yīng)方便地在諸如鹵代烷(例如DCM)或醚(例如THF)的溶劑中采用堿、例如胺(例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺)于室溫下進(jìn)行。
(e)步驟(c)與(d)的另一種選擇為，用氯甲酸烷基酯(例如氯甲酸甲酯)及胺堿(例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺)處理式(XII)的咪唑并吡啶，制得季化中間體，它在常規(guī)條件下被還原?？煞奖愕卦谥T如醚(例如THF)或鹵代烷(例如DCM)的溶劑存在下于環(huán)境溫度將氯甲酸甲酯加入式(XII)的咪唑并吡啶中，制得季化中間體，隨后于降溫條件下(例如約-70℃)添加堿金屬鹵化物(例如氫硼化鋰)使之還原。通過催化氫化，將制得的中間體進(jìn)一步還原，其中催化氫化在適宜催化劑、例如過渡金屬催化劑如鈀催化劑(例如氫氧化鈀或披鈀炭)的存在下在諸如醇(如甲醇或乙醇)或羧酸(例如乙酸)的溶劑中進(jìn)行，溫度為環(huán)境溫度至升高溫度(例如至多約80℃)。
(f)當(dāng)保護(hù)基是乙?；Ｗo(hù)基或類似基團(tuán)時(shí)，利用諸如堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉或氫氧化鉀)的堿或諸如無機(jī)酸(例如HCl)的酸于升高溫度如60-100℃下處理，可方便地除去該保護(hù)基。
(g)通過用式(VIII)的胺適式(IX)的醛還原胺化，制備式(VII)化合物。該反應(yīng)方便地在諸如有機(jī)酸(例如乙酸)的酸的存在下、在溶劑如醚(例如THF)或鹵代烷(例如DCM)中采用堿金屬氫化物還原劑如三乙酰氧基硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉于環(huán)境溫度下進(jìn)行。
(h)當(dāng)步驟(d)的保護(hù)通過甲氧羰基提供時(shí)，通過用堿如堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉或氫氧化鉀)在諸如含水醇類(例如H2O/丙-2-醇)的溶劑中于升高溫度(例如100℃)下處理，可方便地除去甲氧羰基。
(i)酸/胺偶合反應(yīng)可方便地如下進(jìn)行采用式(VI)的胺及式(V)的?；?；過量的酸接受者，例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺；諸如鹵代烷(例如DCM)或醚(例如THF)的溶劑；于環(huán)境溫度。
或者，酸/胺偶合反應(yīng)可如下進(jìn)行采用被諸如WSCDI或DCC和HOBT或HOAt的試劑活化的式(V)的酸；過量的酸接受者，例如三乙胺或N-乙基-N，N-二異丙胺；諸如鹵代烷(例如DCM)或醚(例如THF)的溶劑；及環(huán)境溫度。
(j)當(dāng)保護(hù)基是boc保護(hù)基時(shí)，在酸、例如無機(jī)酸(例如無水HCl)或三氟乙酸的存在下，在適宜溶劑如酯(例如乙酸乙酯)、鹵代烷(例如DCM)或醚(例如THF)中，于0℃至環(huán)境溫度下，方便地除去該保護(hù)基。
(k)在上述步驟(i)所述的條件下，使用式(II)的胺及式(III)的酸或?；龋奖愕剡M(jìn)行酸/胺偶合反應(yīng)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將可以理解，為了提供所需的式(I)化合物，可以以不同于流程圖1所述順序進(jìn)行一種或一種以上的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，或者可加以變通。
在流程圖1的一種變通方法中，以不同順序進(jìn)行步驟(h)至(k)，制備式(I)化合物，如下述流程圖1a所示。
流程圖1a
式(XX)化合物具有類似于式(I)化合物或其相關(guān)中間體的結(jié)構(gòu)，可按照類似方法制備。
式(III)、(V)、(IX)、(XV)、(XIX)、(XXI)、(XXII)及(XXIII)的化合物是已知的化合物，或者可利用常規(guī)化學(xué)方法來制備；例如，參見WO01/90106(尤其是第5-19頁)，該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
式(I)化合物與其可藥用的鹽、溶劑化物及衍生物是有用的，因?yàn)樗鼈儗?duì)于動(dòng)物、包括人具有藥理活性。更具體而言，它們可用于治療涉及調(diào)節(jié)CCR5受體的紊亂。特別感興趣的疾病類型包括HIV、與HIV遺傳相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、AIDS和炎性疾病。
本發(fā)明的化合物可用于治療呼吸性疾病，包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、支氣管炎、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、囊性纖維化、哮喘、氣腫、鼻炎及慢性鼻竇炎。
其它可治療的疾病是由在不同器官中運(yùn)輸?shù)腡細(xì)胞引發(fā)、侵襲或以任何其它方式相關(guān)聯(lián)的那些。可以預(yù)期，本發(fā)明的化合物可用于治療這類疾病，尤其是(但不限于)與CCR5或CCR5趨化因子的關(guān)系已經(jīng)建立的病癥，更特別是(但不限于)多發(fā)性硬化癥；關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡及幼年型關(guān)節(jié)炎；以及移植物排斥，尤其是但不限于實(shí)體器官移植物，例如心臟、肺、肝臟、腎臟及胰臟移植物(例如腎臟與肺臟的同種異體移植物)。其它已經(jīng)建立與CCR5或CCR5趨化因子的類似關(guān)系的疾病包括但不限于炎性腸病，包括節(jié)段性回腸炎及潰瘍性結(jié)腸炎；子宮內(nèi)膜異位；I型糖尿??；腎病，例如腎小球疾病(例如腎小球腎炎)；纖維變性，例如肝、肺及腎臟的纖維變性；慢性胰腺炎；炎性肺??；腦炎，例如HIV腦炎；慢性心力衰竭；缺血性心臟病；牛皮癬；中風(fēng)；肥胖癥；中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病，例如AIDS相關(guān)性癡呆及阿爾茨海默氏病；貧血癥；再狹窄；動(dòng)脈粥樣硬化斑塊；特應(yīng)性皮炎；慢性胰腺炎；癌癥，例如非霍奇金淋巴瘤、卡波西肉瘤、黑素瘤及乳腺癌；疼痛，例如傷害性疼痛及神經(jīng)性疼痛(例如外周神經(jīng)性疼痛)；以及由手術(shù)、感染、損傷或其它外傷性損傷所產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)。
涉及調(diào)節(jié)CCR5受體的感染性疾病包括急性與慢性乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)的感染；腺鼠疫、敗血性鼠疫和肺鼠疫；痘病毒感染，例如天花；弓形體感染；分枝桿菌感染；錐蟲感染如查加斯??；肺炎；及隱孢子蟲病。
有關(guān)趨化因子與趨化因子受體阻斷劑的可能應(yīng)用的近期綜述，參見Cascieri，M.A.與Springer，M.S.所著的“The chemokine/chemokinereceptor familypotential and progress for therapeutic intervention”，Curr.Opin.Chem.Biol.，4(4)，420-7(2000年8月)。
因此，本發(fā)明的另一方面提供了用作藥物的式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療涉及調(diào)節(jié)CCR5受體的疾病。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療HIV、與HIV遺傳相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、AIDS或炎性疾病。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療呼吸性疾病，包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、支氣管炎、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、囊性纖維化、哮喘、氣腫、鼻炎或慢性鼻竇炎。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或移植物排斥。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療炎性腸?。蛔訉m內(nèi)膜異位；I型糖尿??；腎??；纖維變性；慢性胰腺炎；炎性肺??；腦炎；慢性心力衰竭；缺血性心臟??；牛皮癬；中風(fēng)；肥胖癥；中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾??；貧血癥；再狹窄；動(dòng)脈粥樣硬化斑塊；特應(yīng)性皮炎；慢性胰腺炎；癌癥；疼痛；以及由手術(shù)、感染、損傷或其它外傷性損傷所產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，用于治療HBV、HCV、鼠疫、痘病毒感染、弓形體病、分枝桿菌感染、錐蟲感染、肺炎或隱孢子蟲病。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療涉及調(diào)節(jié)CCR5受體的疾病。
本發(fā)明的另一方面提供了治療哺乳動(dòng)物的疾病的方法，其中所述疾病涉及調(diào)節(jié)CCR5受體，該方法包括用有效量的式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物治療該哺乳動(dòng)物。
本發(fā)明的化合物可以以晶狀或無定形產(chǎn)品施用。例如，它們可通過諸如沉淀、結(jié)晶、冷凍干燥、噴霧干燥或蒸發(fā)干燥等方法以固態(tài)栓塞物、粉狀物或膜片物形式獲得?？墒┯梦⒉ɑ蛏漕l干燥達(dá)到此目的。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)施用，或者與一種或一種以上本發(fā)明化合物組合施用或與一種或一種以上其它藥物組合施用(或者它們的任何一種組合)。一般而言，這些化合物以含有一種或多種可藥用賦形劑的制劑形式施用。術(shù)語“賦形劑”用于說明除本發(fā)明化合物以外的任何成分。賦形劑的選擇很大程度上取決于諸如具體施用方式、賦形劑對(duì)溶解度與穩(wěn)定性的影響以及劑型性質(zhì)等因素。
適于傳送本發(fā)明化合物的藥物組合物及其制備方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。這類組合物及其制備方法可參見例如“Remington’sPharmaceutical Sciences”，第19版(Mack出版公司，1995)。
本發(fā)明的化合物可經(jīng)口施用。經(jīng)口施用可包括吞咽，由此化合物進(jìn)入胃腸道；或者可采用含服或舌下施用，由此化合物由口腔直接進(jìn)入血流。
適宜經(jīng)口施用的制劑包括固體制劑如片劑、含有顆粒、液體或粉末的膠囊、錠劑(包括填充液體者)、咀嚼劑、多顆粒及納米粒、凝膠、固體溶液、脂質(zhì)體、膜劑(包括粘膜粘附劑)、丸制(ovules)、噴霧劑及液體制劑。
液體制劑包括混懸劑、溶液、糖漿劑及酏劑。這類制劑可用作軟或硬膠囊的填充物，其通常包含載體，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素或適宜的油以及一種或一種以上的乳化劑和/或懸浮劑。液體制劑還可將固體(例如來自小藥囊)重構(gòu)來制備。
本發(fā)明的化合物還可用于快速溶解、快速崩解劑型，例如Liang與Chen的“Expert Opinion in Therapeutic Patents”(11(6)，981-986，2001)中公開的那些。
對(duì)于片劑，根據(jù)劑量，藥物可占該劑型的0.1重量％至80重量％，更通常是1重量％至60重量％，例如5重量％至50重量％。除藥物以外，片劑通常含有崩解劑。崩解劑的實(shí)例包括淀粉羥乙酸鈉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、微晶纖維素、低級(jí)烷基取代的羥丙基纖維素、淀粉、預(yù)膠化淀粉及海藻酸鈉。一般而言，崩解劑占該劑型的0.1重量％至25重量％，更通常是0.5重量％至20重量％，例如1重量％至15重量％。
粘合劑通常用來使片劑制劑具有粘附性質(zhì)。適宜的粘合劑包括微晶纖維素、明膠、糖、聚乙二醇、天然及合成膠質(zhì)、聚乙烯吡咯烷酮、預(yù)膠化淀粉、羥丙基纖維素及羥丙基甲基纖維素。片劑還可含有稀釋劑，例如乳糖(一水合物、經(jīng)噴霧干燥的一水合物、無水乳糖等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纖維素、淀粉、碳酸鈣及磷酸氫鈣二水合物。
片劑還任選包含表面活性劑，例如月桂硫酸鈉及聚山梨酯80；以及助流劑，例如二氧化硅及滑石粉。當(dāng)含有這些物質(zhì)時(shí)，表面活性劑占片劑的0.2重量％至5重量％；助流劑占片劑的0.2重量％至1重量％。
片劑通常還含有潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酰醇富馬酸鈉以及硬脂酸鎂與月桂硫酸鈉的混合物。潤滑劑通常占片劑的0.25重量％至10重量％，優(yōu)選0.5重量％至3重量％。
其它可能的成分包括抗氧化劑、者色劑、矯味劑、防腐劑及掩味劑。
示例的片劑含有至多約80％藥物、約10重量％至約90重量％粘合劑、約0重量％至約85重量％稀釋劑、約1重量％至約10重量％崩解劑以及約0.25重量％至約10重量％潤滑劑。
片劑混合物可直接壓片或利用滾筒壓片。或者，片劑混合物或混合物的一部分可以在壓片之前進(jìn)行濕法、干法或熔融制粒、熔融凝固或擠出。最終制劑可包含一層或多層，可以是包衣或未包衣的；甚至可以被包于膠囊內(nèi)。
片劑的配制在H.Lieberman與L.Lachman所著的下列文獻(xiàn)中有探討“Pharmaceutical Dosage FormsTablets”，第1卷，Marcel Dekker，N.Y.，N.Y.，1980(ISBN 0-8247-6918-X)。
經(jīng)口施用的固體制劑可配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、緩釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放及程序釋放(programmed release)。
適用于本發(fā)明目的的釋放改變制劑在美國專利6,106,864中有描述。其它適宜的藥物釋放技術(shù)，例如高能量分散劑及滲透與包衣顆粒，詳見Verma等人的“Pharmaceutical Technology On-line”，25(2)，1-14(2001)。WO00/35298中描述了利用咀嚼膠達(dá)到控釋。
本發(fā)明的化合物還可直接施用于血流、肌肉或體內(nèi)器官中。適于胃腸道外施用的方式包括靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)及皮下。適于胃腸道外施用的裝置包括針頭(包括顯微針)注射器、無針頭注射器及灌流器。
胃腸道外制劑通常是水溶液，其可含有賦形劑如鹽、碳水化合物及緩動(dòng)劑(優(yōu)選pH為3至9)，但對(duì)于某些用，更適宜將它們配制成滅菌的非水溶液，或者配制成與適宜溶媒(如滅菌無熱原的水)一起使用的干燥形式。
胃腸道外制劑于滅菌條件下的制備，例如利用冷凍干燥法，可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)制藥技術(shù)容易地完成。
使用適當(dāng)?shù)闹苿┘夹g(shù)，例如加入增溶劑，可增加在制備胃腸道外溶液中所用的本發(fā)明化合物的溶解性。
經(jīng)胃腸道外施用的制劑可配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、續(xù)釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放及程序釋放。本發(fā)明的化合物可配制成固體、半固體或觸變液體，用作提供改變的化合物釋放的植入儲(chǔ)庫施用。這類制劑的實(shí)例包括涂藥支架及PGLA微球。
本發(fā)明的化合物還可局部施用于皮膚或粘膜，即，經(jīng)皮或透皮施用。用于此目的的典型制劑包括凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、霜?jiǎng)?、軟膏、撒粉、敷?dressing)、泡沫、膜、皮膚貼片、糯米紙囊劑、植入劑、海綿、纖維、繃帶及微乳液。還可使用脂質(zhì)體。典型載體包括醇、水、礦物油、液體石臘、白凡士林、甘油、聚乙二醇及丙二醇。可以加入滲透促進(jìn)劑，例如參見Finnin與Morgan的J.Pharm.Sci.，88(10)，955-958(1999年10月)。
局部施用的其它方式包括通過電穿孔法、離子導(dǎo)入法、聲透入法(phonophoresis)、超聲透入法(sonophoresis)以及顯微針頭或無針頭(例如PowderjectTM、BiojectTM等)注射法傳送藥物。
局部施用的制劑可配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、緩釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放及程序釋放。
本發(fā)明的化合物還可經(jīng)鼻內(nèi)或利用吸入法施用，通常以來自干燥粉末吸入器的以干燥粉末形式(單獨(dú)以例如與乳糖的干燥混合物形式使用，或者作為混合組分顆粒、例如與磷脂如磷脂酰膽堿混合的形式使用)施用，或者作為來自加壓容器、泵、噴霧器、霧化器(優(yōu)選是采用電流體動(dòng)力而產(chǎn)生細(xì)霧的霧化器)或制霧器(nebuliser)的氣溶膠噴霧施用，使用或不使用適宜的拋射劑，例如1，1，1，2-四氟乙烷或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷。對(duì)于鼻內(nèi)施用，該粉末可含有生物粘附劑，例如殼聚糖或環(huán)糊精。
加壓容器、泵、噴霧器、霧化器或制霧器包含本發(fā)明化合物的溶液或混懸液，其包含例如乙醇(任選乙醇水溶液)或者其它適于分散、增溶化合物或延長其釋放的替換試劑；作為溶劑的拋射劑；及任選的表面活性劑，例如脫山梨醇三油酸酯、油酸或低聚乳酸。
使用干燥粉末或混懸制劑之前，將藥物產(chǎn)品微粒化至適于經(jīng)吸入傳送的大小(通常小于5微米)。這可通過任意適宜的粉碎方法來完成，例如螺旋氣流粉碎機(jī)、流化床氣流粉碎機(jī)、可形成納米粒的超臨界流體處理、高壓均質(zhì)化或噴霧干燥。
吸入器或吹入器中使用的膠囊(例如由明膠或HPMC制成)、泡罩及藥筒可配制成含有如下成分的粉末混合物的形式本發(fā)明的化合物、適宜的粉末基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)及性能修飾劑(例如+/-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸鎂)。乳糖可以是無水或一水合物的形式，優(yōu)選后者。其它適宜的賦形劑包括葡聚糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖及海藻糖。
適宜用于采用電流體動(dòng)力產(chǎn)生細(xì)霧的霧化器的溶液制劑含有每噴1μg至20mg的本發(fā)明化合物，噴出體積為1μl至100μl。典型制劑可含有本發(fā)明的化合物、丙二醇、滅菌水、乙醇及氯化鈉。可用來代替丙二醇的替代溶劑包括甘油及聚乙二醇。
適宜的矯味劑(例如薄荷腦及左旋薄荷腦)或甜味劑(例如糖精或糖精鈉)可添加至用于經(jīng)吸入/鼻內(nèi)施用的本發(fā)明制劑中。
經(jīng)吸入/鼻內(nèi)施用的制劑可采用例如聚(DL-乳酸-共乙醇酸)(PGLA)配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、緩釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放及程序釋放。
當(dāng)為干燥粉末吸入器和氣溶膠時(shí)，劑量單位由傳送計(jì)量劑量的閥決定。本發(fā)明的劑量單位通常設(shè)計(jì)成施用含有1μg至10mg本發(fā)明化合物的計(jì)量劑量或“噴射量”。每日總劑量通常為1μg至200mg，可以以單一劑量施用，或更經(jīng)常作為一天的分開劑量施用。
本發(fā)明的化合物可經(jīng)直腸或陰道施用，例如以栓劑、陰道栓或灌腸劑的形式施用?？煽芍浅Ｒ?guī)的栓劑基質(zhì)，但可以酌情使用其它各種可選擇的基質(zhì)。
經(jīng)直腸/陰道施用的制劑配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、緩釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放及程序釋放。
本發(fā)明的化合物還可直接施用于眼或耳，通常以在等張、pH經(jīng)調(diào)節(jié)的滅菌鹽水中的微?；鞈乙夯蛉芤旱牡蝿┬问绞┯谩＿m于眼或耳施用的其它制劑包括軟膏、可生物降解的植入劑(例如可吸收的凝膠海綿、膠原)及不可生物降解的植入劑(例如硅氧烷)、糯米紙囊劑、鏡片以及微?；蚰遗菹到y(tǒng)，例如非離子表面活性劑囊泡(niosomes)或脂質(zhì)體。聚合物，例如交聯(lián)聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明質(zhì)酸、纖維質(zhì)聚合物如羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或甲基纖維素，或者雜多糖聚合物如結(jié)冷膠(gelan gum)，可與防腐劑如苯扎氯銨一起并用。這類制劑還可利用離子導(dǎo)入轉(zhuǎn)運(yùn)。
經(jīng)眼/耳施用的制劑可配制成速釋和/或釋放改變的形式。釋放改變的制劑包括延遲釋放、緩釋、脈沖釋放、控釋、靶向釋放或程序釋放。
為了改善本發(fā)明化合物用于前述任意一種施用方式的溶解性、溶出速率、掩味性、生物利用度和/或穩(wěn)定性，它們可以與可溶的大分子實(shí)體(例如環(huán)糊精及其適宜的衍生物或者含聚乙二醇的聚合物)組合。
例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)藥物-環(huán)糊精復(fù)合物通?？捎糜诖蠖鄶?shù)劑型及施用途徑?？墒褂冒头前瑥?fù)合物兩者。作為與藥物直接絡(luò)合的一種可選方式，環(huán)糊精可用作輔助添加劑，即，作為載體、稀釋劑或助溶劑。最常用于此目的的是α-、β-及γ-環(huán)糊精，其示例可參見國際專利申請(qǐng)WO91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148。
由于可能希望將本發(fā)明化合物與其它治療劑組合施用，例如為了治療具體的疾病或病癥，故將兩種或兩種以上的藥物組合物(至少其中一種含有本發(fā)明的化合物)方便地組合成適于組合物共同施用的藥盒形式也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
因此，本發(fā)明的藥盒包含兩種或兩種以上的分開的藥物組合物，其中至少一種含有本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，并且包含分別容納所述組合物的工具，例如容器、分開的小瓶或分隔式鋁箔包裝。這類藥盒的實(shí)例為常用于包裝片劑、膠囊等的泡罩包裝。
本發(fā)明的藥盒特別適于施用不同劑型，例如，經(jīng)口劑型及胃腸道外劑型；用于以不同給藥間隔施用單獨(dú)的組合物；或用于單獨(dú)組合物各自劑量遞增。為了有助于順應(yīng)性，藥盒通常包括用藥指導(dǎo)，且可能提供所謂的“記憶輔助”。
若欲施用于體重約65至70kg的患者，本發(fā)明化合物的每日總劑量通常為1至10,000mg，例如10至1,000mg，例如25至500mg，這當(dāng)然取決于患者的施用模式、年齡、病癥及體重，且無論如何將由醫(yī)生作出最終決定。每日總劑量可以以單次或分開劑量施用。
因此，本發(fā)明的另一方面提供如下定義的藥物組合物，其含有式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，以及一種或一種以上的可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。
與現(xiàn)有技術(shù)中的化合物相比，式(I)化合物及其可藥用的鹽、溶劑化物及衍生物具有下列優(yōu)點(diǎn)選擇性更高，開始作用更快，更強(qiáng)效，吸收更好，更穩(wěn)定，更能耐代謝，“食物影響”降低，安全性改善，或者具有其它更想要的性質(zhì)(例如溶解性或吸濕性)。
尤其是本發(fā)明化合物對(duì)HERG鉀通道的抑制活性降低。已經(jīng)確定心肌動(dòng)作電位持續(xù)時(shí)間的延長(QT延長)是由于對(duì)HERG鉀通道的作用所致(Expert Opinion of Pharmacotherapy，2，第947-973頁，2000)。已知QT延長有可能產(chǎn)生尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過速(TdP)的致命性心律失常。通過提供表現(xiàn)出對(duì)HERG鉀通道的抑制活性進(jìn)一步降低且具有相當(dāng)或改善的藥物動(dòng)力學(xué)的化合物，本發(fā)明提供了這樣的化合物，它是一種在治療上有效的CCR5拮抗劑且心臟安全性進(jìn)一步改善。
式(I)化合物及其可藥用的鹽、溶劑化物及衍生物可以單獨(dú)施用，或者作為組合療法的一部分。因此，在本發(fā)明范圍之內(nèi)涵蓋了這樣的實(shí)施方案除了本發(fā)明的化合物外，還共同施用一種或多種其它治療劑，以及還包含所述一種或多種其它治療劑的組合物。這種多藥物方案，通常稱為組合療法，可用于治療及預(yù)防涉及由CCR5趨化因子受體調(diào)節(jié)作用介導(dǎo)的或與之有關(guān)的任意疾病或病癥，特別是人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染。在需要治療的患者或處于患病危險(xiǎn)的患者中，使用這樣的組合療法來治療與預(yù)防人類免疫缺陷病毒(HIV)及相關(guān)致病性逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染及增殖尤其恰當(dāng)。文獻(xiàn)早已熟知的是，這類逆轉(zhuǎn)錄病毒病原體能在相對(duì)較短時(shí)間內(nèi)演變?yōu)閷?duì)任何已經(jīng)給予所述患者的單一療法有抗性的病毒株。HIV的推薦療法是稱為“高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法”或HAART的組合藥物療法。HAART組合三種或三種以上的HIV藥物。因此，本發(fā)明的治療方法及藥物組合物可以以單一療法的形式使用本發(fā)明的化合物，但還可以以組合療法的形式使用所述的方法和組合物，其中一種或一種以上的本發(fā)明的化合物與一種或一種以上的其它治療劑(例如下文詳述的那些)組合而共同施用。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合包括使用式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物以及一種或一種以上的其它治療劑進(jìn)行的治療，其中所述的其它治療劑選自HIV蛋白酶抑制劑(PIs)，包括但不限于茚地那韋、利托那韋、沙奎那韋、奈非那韋、洛匹那韋、安潑那韋、阿扎那韋(atazanavir)、替拉那韋、AG1859及TMC114；非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)，包括但不限于奈韋拉平，地拉韋啶，卡普韋林，依法韋侖，5-{[3，5-二乙基-1-(2-羥乙基)-1H-吡唑-4-基]氧基}間苯二腈或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，5-{[3-環(huán)丙基-1-(2-羥乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}間苯二腈或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，GW-8248，GW-5634及TMC125；核苷/核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)，包括但不限于齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、阿德福韋二匹伏酯、替諾福韋、恩曲他濱及阿洛夫定；其它CCR5拮抗劑，包括但不限于N-{(1S)-3-[3-(3-異丙基-5-甲基-4H-1，2，4-三唑-4-基)-外向-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-4，4-二氟環(huán)己烷甲酰胺或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，3-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸乙酯或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，Sch D，ONO4128，GW873140，AMD-887及CMPD-167；抑制gp120與CD4相互作用的藥劑，包括但不限于BMS806、BMS-488043、5-{(1S)-2-[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙氧基}-4-甲氧基-吡啶-2-甲酸甲酰胺，及4-{(1S)-2[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙氧基}-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺；其它抑制HIV進(jìn)入靶細(xì)胞的藥劑，包括但不限于enfuviritide、T1249、PRO 542及PRO 140；整合酶抑制劑，包括但不陷于L-870,810；以及RNaseH抑制劑。
在本發(fā)明范圍之內(nèi)，還包括式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物與一種或一種以上的其它治療劑的組合，所述的其它治療劑獨(dú)立地選自增殖抑制劑，例如羥基脲；免疫調(diào)節(jié)劑，例如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激生長因子(例如沙格司亭)，速激肽受體調(diào)節(jié)劑(例如NK1拮抗劑)，以及各種形式的干擾素或干擾素衍生物；其它趨化因子受體激動(dòng)劑/拮抗劑，例如CXCR4拮抗劑(例如AMD-070)；本質(zhì)上抑制、破壞或減少病毒轉(zhuǎn)錄或RNA復(fù)制的藥劑，例如tat(反式激活因子)或nef(負(fù)調(diào)節(jié)因子)抑制劑；本質(zhì)上抑制、破壞或減少除逆轉(zhuǎn)錄酶以外的由病毒表達(dá)的一種或一種以上的蛋白質(zhì)的翻譯(包括但不限于一種或一種以上蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)或拮抗)的藥劑，例如Tat或Nef；影響(尤其是下調(diào))CCR5受體表達(dá)的藥劑；誘使CCR5受體內(nèi)化的趨化因子，例如MIP-1α、MIP-1β、RANTES及其衍生物；以及經(jīng)不同機(jī)制來抑制病毒感染或改善感染HIV的個(gè)體的病癥或結(jié)果的其它藥劑。
影響(尤其是下調(diào))CCR5受體表達(dá)的藥劑包括免疫抑制劑，例如鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，如他克莫司及環(huán)孢素A；類因醇類；干擾細(xì)胞因子生產(chǎn)或發(fā)出信號(hào)的藥劑，例如Janus激酶(JAK)抑制劑，如JAK-3抑制劑，包括3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈及其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物；細(xì)胞因子抗體，例如抑制白介素-2(IL-2)受體的抗體，包括巴利昔單抗及達(dá)珠單抗；以及干擾細(xì)胞活化或細(xì)胞周期的藥劑，例如雷帕霉素。
在本發(fā)明范圍之內(nèi)，還包括式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物與一種或一種以上的其它治療劑的組合，所述的其它治療劑降低本發(fā)明化合物的代謝速率，由此使患者的藥物接觸增加。以這種方式增加藥物接觸稱為補(bǔ)強(qiáng)作用(boosting)。補(bǔ)強(qiáng)作用有如下益處增加本發(fā)明化合物的功效或減少達(dá)到與非補(bǔ)強(qiáng)劑量相同的功效所需的劑量。本發(fā)明化合物的代謝包括由P450(CYP450)酶、尤其是CYP3A4進(jìn)行的氧化過程，以及由UDP葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶與硫酸化酶(sulphating enzyme)進(jìn)行的結(jié)合反應(yīng)。因此，在可用于增加患者對(duì)本發(fā)明化合物的接觸的藥劑中，包括能夠作為至少一種細(xì)胞色素P450(CYP450)酶同工型的抑制劑的那些。能夠被有益抑制的CYP450同工型包括但不限于CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19及CYP3A4?？捎糜谝种艭YP3A4的適宜藥劑包括但不限于利托那韋、沙奎那韋或酮康唑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，如上所述的組合藥物療法可包括兩種或兩種以上的具有相同或不同作用機(jī)制的化合物。因此，僅作為說明，組合可包括本發(fā)明的化合物與下列藥劑的組合一種或一種以上的NRTIs；一種或多種NRTIs和PI；一種或一種以上的NRTIs與其它CCR5拮抗劑；PI；PI與NNRTI；NNRTI；以此類推。
除了治療功效的要求外(這使得使用除本發(fā)明化合物以外的治療劑成為必需)，還有其它原因迫使或強(qiáng)力推薦使用本發(fā)明化合物與其它治療劑的組合，例如在治療基本的或潛在的CCR5趨化因子受體調(diào)節(jié)的疾病或病癥直接導(dǎo)致的或間接與之相關(guān)的疾病或病癥。例如，當(dāng)基本的CCR5趨化因子受體調(diào)節(jié)的疾病或病癥是HIV感染及增殖時(shí)，有必要或至少是希望治療丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、機(jī)會(huì)感染(包括細(xì)菌及真菌感染)、贅生物及其它由于所治療患者的免疫缺陷狀態(tài)所致的病癥。例如為了提供免疫刺激或治療伴隨初期及建立期(fundamental)HIV感染出現(xiàn)的疼痛及炎癥，其它治療劑可以與本發(fā)明的化合物一起使用。
因此，用于與式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物組合的治療劑還包括用于治療肝炎的干擾素類、聚乙二醇化干擾素(例如聚乙二醇化干擾素α-2a及聚乙二醇化干擾素α-2b)、拉米夫定、利巴韋林及恩曲他濱；抗真菌劑，例如氟康唑、膦氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑；抗菌劑，例如阿奇毒素及克拉霉素；用于治療AIDS相關(guān)性卡波西肉瘤的干擾素類、柔紅霉素、阿霉素及紫杉醇；以及治療巨細(xì)胞病毒(CMV)視網(wǎng)膜炎的西多福韋、西多福韋、膦甲酸、更昔洛韋及纈更昔洛韋。
適用于本發(fā)明的其它組合包括式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物與下列藥劑的組合CCR1拮抗劑(例如BX-471)；β腎上腺素受體激動(dòng)劑，例如沙美特羅；皮質(zhì)類固醇激動(dòng)劑，例如丙酸氟替卡松；LTD4拮抗劑，例如孟魯司特；毒蕈堿拮抗劑，例如噻托溴銨；PDE4抑制劑，例如西洛司特或羅氟司特；COX-2抑制劑，例如塞來考昔、伐地考昔或羅非考昔；α-2-δ配體，例如加巴噴丁或普加巴林；β-干擾素，例如REBIF；TNF受體調(diào)節(jié)劑如TNF-α抑制劑(例如阿達(dá)木單抗)，HMG CoA還原酶抑制劑如他汀類化合物，例如阿托伐他汀；或免疫抑制劑，例如環(huán)孢素(cyclosporin)或大環(huán)內(nèi)酯類如他克莫司。
在上述組合中，就劑型而言，式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物以及其它治療劑可分別施用或彼此聯(lián)合施用；就施用時(shí)間而言，可同時(shí)或依次施用。因此，一種組分藥劑可以在施用另一組分藥劑之前、同時(shí)或之后施用。
因此，本發(fā)明的另一方面提供了藥物組合物，其包含式(I)化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物或衍生物，以及一種或多種其它治療劑。
可以理解，本文所提及的治療包括治愈性、緩解性或預(yù)防性的治療。
通過下列實(shí)施例及制劑，進(jìn)一步說明本發(fā)明，其中使用一下縮寫 h＝小時(shí)； min＝分鐘； LRMS＝低分辨率質(zhì)譜； HRMS＝高分辨率質(zhì)譜； APCI+＝大氣壓化學(xué)電離； ESI+＝電霧離子化法； NMR＝核磁共振； tlc＝薄層色譜法； Me＝甲基。
實(shí)施例1 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-乙?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
室溫下，將乙酰氯(18μl，0.26mmol)加入胺N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(94mg，0.21mmol)在二氯甲烷(5ml)中的攪拌溶液中，隨后添加N，N-二異丙基乙胺(45μl，0.26mmol)。15小時(shí)后，用二氯甲烷(5ml)與水(5ml)稀釋反應(yīng)混合物，然后使其通過相分離柱。向溶液中通入氮?dú)饬魇褂袡C(jī)組分濃縮，使用Mega Bond Elutflash Si柱(10g，Varian)純化所得混合物，用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水(95∶5∶0.5，按體積計(jì))洗脫，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(80mg，79％)。
LRMS(電霧法)m/z[M+Na+]504，[MH+]482 實(shí)測(cè)值C，63.35；H，7.32；N，13.59。C27H36N5FO2.0.5CH2Cl2計(jì)算值C，63.03；H，7.12；N，13.36。
[α]D-21.7°(2.12mg/ml MeOH溶液) 實(shí)施例2-3 這些實(shí)施例是根據(jù)上述實(shí)施例1所述方法而制備，其中使用N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺及相應(yīng)式(V)化合物。LRMS全部采用電霧離子化法。


LRMSm/z[MH+]522 實(shí)測(cè)值C，67.01；H，7.74；N，12.94. C30H40FN5O2.0.1H2O計(jì)算值C， 66.77；H，7.84；N，12.93％. [α]D-20.9°(2.04mg/ml MeOH溶液)

LRMSm/z[MH+]508 實(shí)測(cè)值C，66.53；H，7.59；N，13.23. C29H38FN5O2.0.1H2O計(jì)算值C， 66.26；H，7.67；N，13.32％. [α]D-20.5°(2.38mg/ml MeOH溶液) 實(shí)施例4 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
將三乙胺(7.0ml，50.0mmol)加入N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(19.9g，45.3mmol)在四氫呋喃(500ml)中的攪拌溶液中，隨后滴加異丁酰氯(5.3ml，50.mmol)。1小時(shí)后，滴加第二份異丁酰氯(0.5ml，5.0mmol)。0.5小時(shí)后，使反應(yīng)混合物濃縮至約300ml，加入乙酸乙酯(200ml)。以10％K2CO3水溶液(200ml；重量/體積)洗滌反應(yīng)混合物。分離水相，以乙酸乙酯(100ml)萃取。將有機(jī)組分合并，以鹽水(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮，直到獲得正要開始形成泡沫的流動(dòng)性油。將殘余物溶于乙酸乙酯(100ml)中，加熱至90℃。將水(0.5ml)加入該熱溶液中，使混合物緩慢冷卻至室溫。過濾收集沉淀物，以乙酸乙酯(50ml)洗滌，減壓干燥，制得白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(20.9g，90％)。
LRMSm/z[MH+]510 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.29-7.35(1H，m)，7.12-7.14(1H，m)，7.05-7.07(1H，m)，6.92-6.97(1H，m)，5.13-5.17(1H，m)，4.52-4.63(1H，m)，4.43-4.44(2H，m)，3.78-3.89(2H，m)，3.31-3.40(2H，m)，2.90-3.06(1H，m)，2.77-2.84and 2.69-2.75(2H，2xm)，2.39-2.51(2H，m)，2.36 and 2.35(3H，2xs)，2.20-2.30(2H，m)，2.03-2.13(2H，m)，1.95(3H，s)，1.84-1.90(2H，m)，1.55-1.65(4H，m)，1.08-1.11和1.04-1.06(6H，2xm).旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。
實(shí)測(cè)值C，66.94；H，7.92；N，13.47.C29H40FN5O2.0.5H2O. 計(jì)算值C，67.16；H，7.97；N，13.50. [α]D-23.4°(1.64mg/ml MeOH溶液) 實(shí)施例5-7 這些實(shí)施例是根據(jù)上述實(shí)施例1所述方法而制備，其中使用N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺及相應(yīng)式(V)化合物。除了實(shí)施例6使用大氣壓化學(xué)電離法以外，其它LRMS全部采用電霧法。


LRMSm/z 496[MH+] 實(shí)測(cè)值C，67.47；H，7.75；N，14.06. C28H38FN5O2.0.15H2O計(jì)算值 C，67.49；H，7.75；N，14.05％. [α]D-21.5°(2.00mg/ml MeOH溶液) NMR數(shù)據(jù)如下

LRMS 532[M+Na+]，510[MH+] 實(shí)測(cè)值C，65.69；H，7.97；N，13.06. C29H40FN5O2.0.1H2O計(jì)算值C， 66.01；H，8.02；N，13.27％. [α]D-25.5°(2.14mg/ml MeOH溶液)

LRMS(電霧法)546[M+Na+]， 524[MH+] 實(shí)測(cè)值C，65.50；H，7.93；N，12.45. C30H42FN5O2.0.15H2O計(jì)算值 C，65.43；H，8.24；N，12.72％. [α]D-28.2°(2.06mg/ml MeOH溶液) 實(shí)施例5的NMR數(shù)據(jù) N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-5-丙?；?4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.31-7.37(1H，m)，7.14-7.16(1H，d)，7.06-7.10(1H，m)，6.94-6.99(1H，m)，5.14-5.21(1H，m)，4.56-4.63(1H，m)，4.40和4.45(2H，2×s)，3.81-3.89(1H，m)，3.75-3.80(1H，m)，3.33-3.41(2H，m)，2.78-2.86(1H，m)，2.70-2.76(1H，m)，2.40-2.54(4H，m)，2.37和2.38(3H，2×s)，2.23-2.30(2H，m)，2.07-2.14(2H，m)，1.98(3H，s)，1.86-1.93(2H，m)，1.57-1.67(4H，m)，1.07-1.17(3H，m).旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。
實(shí)施例8 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-5-(3，3，3-三氟-丙酰基)-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
將O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(65mg，1.71mmol)及三乙胺(47μl，3.41mmol)加入3，3，3-三氟丙酸(15μl，1.71mmol)在二氯甲烷(2ml)中的攪拌溶液中，隨后加入胺N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(50mg，1.14mmol)。使反應(yīng)混合物于30℃加熱15小時(shí)，通過向溶液中通入氮?dú)饬鬟M(jìn)行濃縮，利用制備型HPLC純化[PhenomenexC1815×10厘米，10微米柱，20ml/分鐘流速，225nm檢測(cè)波長，流動(dòng)相梯度為95∶5至5∶95的A∶B(A0.1％二乙胺于水中；BMeCN)]，制得膠狀的標(biāo)題化合物(20mg)。
LRMS(電霧法)550[MH+] HRMS(電霧法)。實(shí)測(cè)值550.2800。C28H36N5F4O2(MH+)，計(jì)算值550.2800。
實(shí)施例9 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽
向回流狀態(tài)下的N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(300mg，0.59mmol)于四氫呋喃(2ml)中的溶液中滴加富馬酸(68mg，0.59mmol)于熱乙醇(2ml)中的溶液。48小時(shí)后，加入四氫呋喃(2ml)，再經(jīng)48小時(shí)后，過濾收集結(jié)晶，以四氫呋喃(2ml)洗滌，風(fēng)干，制得白色粉末的標(biāo)題化合物(110mg，30％)。
實(shí)測(cè)值C，62.04；H，7.26；N，10.70。C33H44FN5O6.0.75H2O 計(jì)算值C，62.00；H，7.17；N，10.96。
實(shí)施例10 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
將N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(264.4g，0.60mol)加入丙-2-醇(2.67升)，然后加入碳酸鉀(92.7g，0.67mol)，使所得產(chǎn)物冷卻至15℃。然后歷經(jīng)10分鐘添加異丁酰氯(97.8g，0.91mol)，維持低于25℃的溫度，攪拌10分鐘后，完成反應(yīng)。隨后加入于水(2.40升)中的碳酸鉀(267.2g)，分開所得的兩相。以乙酸乙酯(2.67升)萃取水層，以飽和氯化鈉水溶液(1.32升)及水(800ml)洗滌所合并的有機(jī)相，然后真空濃縮。以乙酸乙酯(1.07升)稀釋殘余物，再次真空濃縮。重復(fù)上述的再次稀釋及濃縮步驟并以乙酸乙醋處理所得的殘余物，直到總體積達(dá)到1.07升。冷卻至0-5℃，攪拌2小時(shí)，過濾，以冰冷的乙酸乙酯(2x130ml)洗滌。然后使固體產(chǎn)物于50℃真空烘箱中干燥，制得標(biāo)題化合物(269.8g，0.53mol，88.0％)。
實(shí)施例11 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽
將N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺(554.0g，1.08mol)加入丙-2-醇(13.85升)，然后加入富馬酸(126.2g，1.09mol)，使所得產(chǎn)物溫?zé)嶂粱亓鞑嚢?0分鐘。于此溫度下，過濾澄清該溶液，然后真空濃縮，直到根據(jù)起始物N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺計(jì)算溶劑體積為4ml/g。使其冷卻至0-5℃，攪拌2小時(shí)，過濾并以冰冷的丙-2-醇(2×550ml)洗滌。然后使固體產(chǎn)物于50℃真空烘箱中干燥，制得標(biāo)題化合物(495.9g，0.79mol，72.9％)。
實(shí)施例12 根據(jù)上述制備實(shí)施例9的富馬酸鹽的方法，制備N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁酰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺的(D)-酒石酸鹽，其中使用N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺與D-酒石酸。PXRD峰數(shù)據(jù)提供于下文。
制備例1 8-芐基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-酮
將2，5-二甲氧基四氫呋喃(50g，378mmol)于鹽酸(0.025N，160ml)中的溶液，于0℃冷卻至16小時(shí)。加入鹽酸芐胺(65g，453mmol)、氧代丙二酸(55g，377mmol)及醋酸鈉水溶液(300ml，0.69M)，反應(yīng)物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物于50℃另外加熱90分鐘，然后冰浴冷卻，使用2N氫氧化鈉溶液堿化至pH12。分層，以乙酸乙酯洗滌水相(3x 300ml)。所合并的有機(jī)萃取物用水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并減壓蒸發(fā)。減壓下(126°/3mmHg)，蒸餾殘留的棕色油，制得灰白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(37.81g)。
LRMSm/z 216.3(MH+)。
制備例2 3-氧代-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
在室溫和269kPa的氫氣壓為下，使8-芐基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-3-酮(15.0g，69.7mmol)、二碳酸二叔丁酯(18.2g，83.4mmol)及披氫氧化鈀的炭(20％重量/重量，3.0g)于乙酸乙酯(165ml)中的混合物攪拌4小時(shí)。使該混合物通過

過濾，減壓除去溶劑。通過硅膠柱色譜法純化殘余物，使用己烷∶乙醚(100∶0至50∶50)的洗脫梯度，制得標(biāo)題化合物(16.2g)，為無色油，靜置結(jié)晶。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.48(9H，s)，1.60-1.68(2H，m)，2.00-2.11(2H，m)，2.26-2.34(2H，m)，2.48-2.82(2H，m)，4.35-4.58(2H，m)ppm。
制備例3 3-(芐基氨基)-內(nèi)向-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
室溫下，使3-氧代-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(10.0g，44.4mmol)、芐胺(4.85ml，49.7mmol)與三乙酰氧基硼氫化鈉(14.11g，66.6mmol)的溶液于冰醋酸∶二氯甲烷(1∶9體積/體積，290ml)混合物中攪拌16小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯(200ml)中，以飽和碳酸鈉水溶液(50ml)及水(50ml)洗滌。使該有機(jī)溶液干燥(MgSO4)，過濾并減壓蒸發(fā)。利用硅膠柱色譜法純化殘余物，使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水(98∶2∶0.25)的洗脫液，制得白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(7.00g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.42-1.48(11H，m)，1.52-1.61(2H，m)，1.85-2.19(5H，m)，2.95-3.03(1H，m)，3.74(2H，s)，4.03-4.23(2H，m)，7.20-7.26(1H，m)，7.26-7.32(4H，m)ppm。
制備例4 3-內(nèi)向-氨基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
使3-(芐基氨基)-內(nèi)向-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(7.00g，22.1mmol)、甲酸銨(7.00g，111mmol)與披氫氧化鈀的碳(20％重量/重量，0.7g)于乙醇(200ml)中的混合物于50℃加熱，直到氣體停止釋出。使冷卻的混合物通過

過濾，減壓蒸發(fā)濾液。利用硅膠柱色譜法純化殘余物，其中使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水(98∶2∶0.25至95∶5∶0.5)的洗脫梯度，制得無色油狀的標(biāo)題化合物(4.70g)。
LRMSm/z 227.2(MH+) 制備例5 3-內(nèi)向-[(3-硝基-4-吡啶基)氨基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
將3-氨基-內(nèi)向-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(3.0g，13.2mmol)、4-乙氧基-3-硝基吡啶.鹽酸鹽(2.7g，13.2mmol)及N-乙基-N，N-二異丙胺(1.89g，14.6mmol)溶于1-甲基-2-吡咯烷酮(5ml)中，于120℃加熱18小時(shí)。以乙酸乙酯(150ml)稀釋冷卻的反應(yīng)混合物，使用水(3×50ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)及鹽水(30ml)洗滌。使有機(jī)層干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)除去溶劑。以二乙醚研制殘余物并過濾，制得黃色固態(tài)的標(biāo)題化合物(1.5g)。
LRMSm/z 349(MH+) 制備例6 1-內(nèi)向-(8-乙?；?8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶
將3-內(nèi)向-[(3-硝基-4-吡啶基)氨基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(4.40g，12.6mmol)及鐵粉(2.11g，37.8mmol)溶于冰醋酸(50ml)中，將混合物于60℃加熱2小時(shí)。然后加入醋酸酐(8ml)，使混合物于140℃加熱18小時(shí)，使冷卻的反應(yīng)混合物通過

墊過濾，減壓除去溶劑。使殘余物在二氯甲烷(200ml)與水(200ml)之間分配，使用2N氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)混合物pH為9。使混合物再次通過

墊過濾，分離有機(jī)相。使用二氯甲烷(100ml)萃取水層，使所合并的有機(jī)萃取物干燥(MgSO4)。減壓蒸發(fā)溶劑，以乙酸乙酯研制殘余物，過濾并干燥(MgSO4)，制得白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(3.27g)。
LRMSm/z 285(MH+)。
制備例7 1-內(nèi)向-(8-乙?；?8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶
將芐基溴(1.78g，10.4mmol)加入1-內(nèi)向-(8-乙?；?8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶(2.47g，8.7mmol)于乙醇(20ml)中的溶液中，混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物冷卻至-70℃，于十分鐘內(nèi)滴加硼氫化鈉(0.33g，8.7mmol)。于-70℃歷經(jīng)1小時(shí)后，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?40℃，然后再次冷卻至-70℃并再次加入硼氫化鈉(0.33g，8.7mmol)。于-70℃又歷經(jīng)1小時(shí)后，加入水(10ml)并使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝亍p壓蒸發(fā)乙醇，使用二氯甲烷(3×25ml)萃取水性殘余物。使所合并的有機(jī)萃取物干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用乙酸乙酯∶甲醇∶二乙胺的溶劑梯度(按體積計(jì)，100∶0∶2變換至98∶2∶2，然后變換至95∶5∶2)洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的級(jí)分，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(2.23g)。
LRMSm/z 379(MH+) 制備例8 1-內(nèi)向-(8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶
將1-內(nèi)向-(8-乙酰基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶(2.23g，5.89mmol)溶于6N鹽酸水溶液(30ml)，回流加熱18小時(shí)。通過添加2N氫氧化鈉水溶液，將冷卻后的反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)pH為10，使用二氯甲烷萃取(2×50ml)。使所合并的有機(jī)萃取物干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶二乙胺的溶劑梯度(按體積計(jì)，100∶0∶0.5變換至93∶7∶1)洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的級(jí)分，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(1.47g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+337。
制備例9 1-(S)-1-(3-氟苯基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯
將二異丁基氫化鋁(1M二氯甲烷溶液，39ml，39mmol)冷卻至-78℃，然后滴加至-78℃的(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(WO0039125，第60頁，制備例12)(5.4g，18.2mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中。使反應(yīng)物于-78℃攪拌30分鐘，然后加入甲醇(50ml，預(yù)冷至-78℃)。使反應(yīng)物攪拌30分鐘，然后加入2N鹽酸(250ml)。使此雙相混合物溫?zé)嶂潦覝兀謱?，使有機(jī)層干燥(MgSO4)，過濾并減壓蒸發(fā)，制得標(biāo)題化合物(4.8g)，為澄清無色的油。
LRMSm/z 268.1(MH+) 制備例10 (1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基氨基甲酸叔丁酯
在室溫和氮?dú)庀?，將醋?0.39g，6.4mmol)加入1-內(nèi)向-(8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶(2.16g，6.4mmol)與(1S)-1-(3-氟苯基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯(2.06g，7.7mmol)溶于二氯甲烷(25ml)中的攪拌溶液中。然后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.63g，7.7mmol)，將反應(yīng)物在室溫放置2小時(shí)。使反應(yīng)混合物于飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)與二氯甲烷(50ml)之間分配。移去有機(jī)相，水相用二氯甲烷(50ml)洗滌。使所合并的有機(jī)相干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水的溶劑梯度(按體積計(jì)，99∶1∶0.1變換至96∶4∶0.4)洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的級(jí)分，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(2.56g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+588 制備例11 (1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基氨基甲酸叔丁酯
將(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-芐基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基氨基甲酸叔丁酯(2.55g，4.34mmol)、甲酸銨(2.73g，43.4mmol)及披氫氧化鈀的碳(20％重量/重量，0.25g)于乙醇(35ml)中的混合物加熱至60℃。1小時(shí)后加入另外的甲酸銨(0.63g，10.1mmol)，繼續(xù)于60℃另外加熱2小時(shí)。然后使冷卻的反應(yīng)混合物通過

過濾，減壓蒸發(fā)濾液。使殘余物在二氯甲烷(100ml)與飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)之間分配，分離有機(jī)相并以水(30ml)洗滌。使有機(jī)層干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水的溶劑梯度(按體積計(jì)，99∶1∶0.1變換至93∶7∶1)洗脫，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(1.50g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+498。
制備例12 1-內(nèi)向-(8-{(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(3-氟苯基)丙基}-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯
在室溫和氮?dú)庀?，將氯代甲酸甲?0.167g，1.76mmol)加入(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基氨基甲酸叔丁酯(0.80g，1.60mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中。使反應(yīng)物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，然后以飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)洗滌。分離有機(jī)相，再次以二氯甲烷萃取水相(2×10ml)。使所合并的二氯甲烷萃取物干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水的溶劑混合物(99∶1∶0.1變換至93∶7∶1)洗脫，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.84g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+556 制備例13 1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-氨基-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯.三鹽酸鹽
于0℃，使氯化氫氣體通入1-內(nèi)向-(8-{(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(3-氟苯基)丙基}-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯(0.83g，1.50mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液中，直到該溶液飽和。然后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶劑，使殘余物懸浮于二氯甲烷(10ml)中。重復(fù)該操作三次，制得白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(0.82g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+456。
制備例14 1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯
在氮?dú)夂褪覝叵拢瑢⒁阴Ｂ?0.062g，0.79mmol)加入1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-氨基-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯.三鹽酸鹽(0.409g，0.72mmol)及三乙胺(0.33g，3.25mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中的溶液中，使反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。然后該溶液以水(10ml)、1N氫氧化鈉溶液(10ml)及鹽水(10ml)洗滌。分離有機(jī)相，干燥(MgSO4)，減壓蒸發(fā)溶劑。利用快速硅膠柱色譜法純化殘余物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水的溶劑梯度(以體積計(jì)，99∶1∶0.1變換至97∶3∶0.3)洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的級(jí)分，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.24g)。
LRMS(電霧法)m/z[M+H]+498。
制備例15 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
向1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯(13.27g，26.7mmol)于丙-2-醇(80ml)中的攪拌溶液中加入2M氫氧化鈉水溶液(120ml)，使混合物回流加熱48小時(shí)。冷卻至室溫后，以乙酸乙酯(2×200ml)萃取該混合物。使所合并的有機(jī)組分以鹽水(150ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓濃縮。利用快速柱色譜法純化粗制產(chǎn)物混合物，其是使用二氯甲烷∶甲醇∶濃氨水(90∶10∶1，然后變換至80∶201，按體積計(jì))洗脫，制得白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(8.54g，73％)。
LRMS(大氣壓化學(xué)電離法)m/z[MH+]440。
制備例16 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺
將1-內(nèi)向-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯.(L)-酒石酸鹽(WO03/084954，實(shí)施例46)(898g，1.39mol)加入二氯甲烷(4.5升)與水(4.5升)中。然后加入氫氧化鈉水溶液(10M，450ml)，使所得混合物攪拌15分鐘。分離兩相，以另外的二氯甲烷(2.25升)萃取水層。然后濃縮所合并的有機(jī)相，使所得的油溶于丙-2-醇(4.5升)中。然后加入氫氧化鈉水溶液(2M，6.93升，13.9mol)，使此兩相混合物回流加熱65小時(shí)。冷卻至室溫后，分離相，以乙酸乙酯(4.5升)萃取水層。然后用飽和氯化鈉水溶液(4.5升)洗滌所合并的有機(jī)相，真空濃縮。以乙酸乙酯(9升)稀釋殘余物，再次真空濃縮。最后，加入另外的乙酸乙酯(4.5升)，使所得漿狀物于0-5℃攪拌1小時(shí)，過濾，以冰冷的乙酸乙酯洗滌(2×450ml)。然后使固體產(chǎn)物于40℃真空烘箱中干燥，制得標(biāo)題化合物(547.2g，1.24mol，89.8％)。此標(biāo)題化合物的LRMS數(shù)據(jù)與制備例15的標(biāo)題化合物相同。
生物學(xué)數(shù)據(jù) 式(I)化合物及其可藥用的鹽、溶劑化物及衍生物調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的能力通過本領(lǐng)域已知的方法加以證實(shí)，例如采用按照Combadiere等人的J.Leukoc.Biol.，60，147-52(1996)中所述的操作進(jìn)行的CCR5結(jié)合分析；和/或采用如同一作者所描述的細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)員分析法。表達(dá)所研究受體的細(xì)胞系包括天然表達(dá)該受體的那些，例如PM-1，或者IL-2刺激的外周血淋巴細(xì)胞(PBL)，或者工程化以表達(dá)重組受體的細(xì)胞，例如CHO、300.19、L1.2或HEK-293。
當(dāng)采用Combadiere等人(出處同上)的CCR5結(jié)合分析法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，實(shí)施例4的化合物的IC50值為7.5nM(MIP-1α)、7.3nM(MIP-1β)及6.7nM(RANTES)。
當(dāng)采用Combadiere等人的CCR5結(jié)合分析法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，實(shí)施例5的化合物的IC50值為2.7nM(MIP-1α)、2.4nM (MIP-1β)及1.9nM(RANTES)。
當(dāng)采用Combadiere等人(出處同上)的細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)員分析法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，全部實(shí)施例的化合物為IC50值低于100nM(MIP-1β)的強(qiáng)效拮抗劑。
采用gp160誘導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞融合分析法(用于測(cè)試化合物對(duì)抗HIV-1融合的IC50值)，進(jìn)一步證實(shí)式(I)化合物及其可藥用的鹽、溶劑化物及衍生物的藥理活性。gp160誘導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞融合分析法使用HeLa P4細(xì)胞系和CHO-Tat10細(xì)胞系。
HeLa P4細(xì)胞系表達(dá)CCR5與CD4，且已經(jīng)被HIV-1LTR-β-半乳糖苷酶基因轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)此細(xì)胞系的培養(yǎng)基是Dulbecco改良的eagle’s培養(yǎng)基(D-MEM)(不含L-谷氨酰胺)，其含有10％胎牛血清(FCS)、2mM L-谷氨酰胺青霉素/鏈霉素(Pen/Strep)；100U/ml青霉素+10mg/ml鏈霉素)及1μg/ml嘌羅霉素。
CHO細(xì)胞系是源自CHO JRR17.1細(xì)胞系的Tat(轉(zhuǎn)錄反式激活蛋白)表達(dá)的無性系，該CHO JRR17.1細(xì)胞系已經(jīng)被pTat puro質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)此細(xì)胞系的培養(yǎng)基是最初由Roswell Park Memorial Institute開發(fā)的用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物的豐富培養(yǎng)基RPMI1640(不含L-谷氨酰胺)，其含有10％FCS、2mM L-谷氨酰胺、0.5mg/ml潮霉素B及12μg/ml嘌羅霉素。CHO JRR177.1細(xì)胞系表達(dá)gp160(JRFL)，是由于其能與CCR5/CD4表達(dá)細(xì)胞系融合而被選擇出來的無性系。
一旦細(xì)胞融合，CHO細(xì)胞中存在的Tat能反式激活HeLa細(xì)胞中存在的HIV-1長末端重復(fù)序列(LTR)，導(dǎo)致β-半乳糖苷酶的表達(dá)。然后采用Fluor AceTM β-半乳糖苷酶報(bào)告子分析試劑盒(Bio-Rad，目錄號(hào)170-3150)測(cè)定表達(dá)。該試劑盒是采用4-甲基傘形酮吡喃半乳糖苷(MUG)作為底物來測(cè)定β-半乳糖苷酶表達(dá)的定量熒光分析法。β-半乳糖苷酶水解熒光生成性底物，釋放處熒光分子4-甲基傘形酮(4MU)。然后在熒光計(jì)上測(cè)定4-甲基傘形酮的熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長為460nm。
抑制細(xì)胞融合的化合物引起信號(hào)減弱，隨著在適宜溶劑中的增溶和在培養(yǎng)基中的稀釋，使用每種化合物的劑量-響應(yīng)曲線來計(jì)算IC50值。
根據(jù)上述方法，本發(fā)明的所有實(shí)施例化合物的IC50值均低于10nM。實(shí)施例1及實(shí)施例5的化合物的IC50值分別為130及120pM。
粉末X-射線衍射(PXRD)數(shù)據(jù) PXRD圖全部由Bruker D5000粉末衍射器采集，2-θ角范圍2-55°，步長0.02°。樣品旋轉(zhuǎn)，同時(shí)用經(jīng)石墨單色器(λ＝0.15405nm)濾過的銅K-α1X-射線(波長＝1.5046埃)照射樣品，其中石墨單色器配有于40kV/40mA操作的X-射線管。在每批樣品采集數(shù)據(jù)前后，用標(biāo)準(zhǔn)石英樣品校準(zhǔn)衍射計(jì)。
實(shí)施例10、11及12的PXRD圖的主峰(2-θ角單位為°)說明于下表。
表1N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺的PXRD峰數(shù)據(jù) 表2N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁酰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽的PXRD峰數(shù)據(jù) 表3N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.(D)-酒石酸鹽的PXRD峰數(shù)據(jù) 針對(duì)N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽的PXRD圖模擬(包括2-θ角、d間距及相對(duì)強(qiáng)度)由該化合物的單晶結(jié)構(gòu)、采用Accelrys Materials StudioTM的“Reflex Powder Diffraction”模塊(2.2版)計(jì)算而得。相關(guān)的模擬參數(shù)為 波長＝1.540562埃(Cu Kα) 偏振因子＝0.5 Pseudo-Voigt圖(U＝0.01，V＝-0.001，W＝0.002) N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽的模擬化PXRD圖的主峰(2-θ角單位為°)示于表4。
表4N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽的模擬化PXRD峰數(shù)據(jù) 差示掃描量熱法(DSC)數(shù)據(jù) 所有DSC均由Perkin Elmer PYRIS Diamond DSC采集，該儀器配備有自動(dòng)采樣器和氮?dú)鈿饬?。將樣品置于有孔與蓋子的50μl鋁盤內(nèi)，由10℃至300℃加熱，速率為20℃/分鐘。
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺 樣品重3.016mg 吸熱峰118℃-熔解 N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁酰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.富馬酸鹽 樣品重2.905mg 吸熱峰219℃-熔解 吸熱事件發(fā)生于228℃ 放熱事件發(fā)生于246℃ N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺.(D)-酒石酸鹽 樣品重2.979mg 吸熱峰217℃-熔解
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物與一種或多種其它治療劑的組合，
其中
R1是C1-C6烷基；及
R2是C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基，其中該烷基任選被CF3取代。
2.如權(quán)利要求1的組合，其中在式(I)化合物中R1是C1-C4烷基。
3.如權(quán)利要求2的組合，其中在式(I)化合物中R1是甲基。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合，其中在式(I)化合物中R2是任選被CF3取代的C1-C4烷基。
5.如權(quán)利要求4的組合，其中在式(I)化合物中R2是環(huán)丙基或環(huán)丁基。
6.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合，其中在式(I)化合物中R2是環(huán)丙基或環(huán)丁基。
7.如權(quán)利要求1的組合，其中式(I)化合物選自
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-乙酰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-環(huán)丁烷羰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-環(huán)丙烷羰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-5-丙?；?4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-丁酰基-2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-5-(2，2-二甲基-丙?；?-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(2-甲基-5-(3，3，3-三氟-丙酰基)-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺；
或它們可藥用的鹽或溶劑化物。
8.如權(quán)利要求1的組合，其中式(I)為
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺富馬酸鹽。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的組合，其中所述一種或多種其它治療劑選自治療HIV的那些治療劑。
10.如權(quán)利要求9的組合，其中所述一種或多種其它治療劑選自HIV蛋白酶抑制劑、非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、核苷/核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、其它CCR5拮抗劑、抑制gp 120與CD4相互作用的藥物、其它抑制HIV進(jìn)入靶細(xì)胞的藥物、整合酶抑制劑以及RNaseH抑制劑。
11.如權(quán)利要求10的組合，其中所述一種或多種其它治療劑選自非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和核苷/核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
12.如權(quán)利要求11的組合，其中式(I)化合物與替諾福韋和恩曲他濱組合。
13.如權(quán)利要求12的組合，其中式(I)為
N-{(1S)-3-[3-內(nèi)向-(5-異丁?；?2-甲基-4，5，6，7-四氫-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺富馬酸鹽。
14.權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)定義的組合在制備用于治療HIV的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中R1及R2如說明書所定義。本發(fā)明的化合物是趨化因子受體CCR5的調(diào)節(jié)劑，特別是拮抗劑。CCR5受體調(diào)節(jié)劑可用于治療多種炎性疾病及病癥，以及治療HIV和遺傳相關(guān)的逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染。
文檔編號(hào)A61K31/439GK101632664SQ20091014618
公開日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2004年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月3日
發(fā)明者P·A·斯圖普勒 申請(qǐng)人:輝瑞大藥廠