專利名稱：：一種前列金丹膠囊的分析方法一種前列金丹膠囊的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種前列金丹膠囊的分析方法。
背景技術(shù)：
：前列金丹膠囊解毒利濕，通淋化瘀。用于慢性前列腺炎屬濕熱挾瘀證，癥見小便頻急、尿后余瀝、尿后滴白、尿道澀痛、少腹疼痛、會陰不適、腰骶疼痛、陰囊潮濕、睪丸疼痛。前列金丹膠囊的處方是丹參594.4克赤芍208.5克澤蘭104.7克杉t仁69.8克紅花69.8克延胡索69.8克金銀花35克敗醬草69.8克茯苓35克澤瀉35克大棗35克王不留行173.6克前列金丹膠囊為硬膠囊，內(nèi)容物為黃棕色至棕色粉末；氣微腥，味微苦。臨床前動物試驗(yàn)研究結(jié)果提示該產(chǎn)品可抑制角叉菜膠致大鼠足跖部的炎性反應(yīng)和疼痛反應(yīng)，抑制棉球致大鼠肉芽腫。前列金丹膠囊的制法為以上十二味，延胡索粉碎成細(xì)粉。丹參、桃仁、紅花、金銀花、澤蘭加6倍量乙醇回流提取2小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.24(60°C)的清膏，備用；藥渣與赤芍、王不留行、敗醬草、澤瀉、茯苓、大棗加水煎煮兩次，第一次加10倍量水煎煮2小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20(60°C)的清膏，與上述清膏合并，加入延胡索細(xì)粉，混勻，減壓干燥，粉碎，加淀粉調(diào)整總量至350克，制粒，裝入膠囊，制成1000粒，即得。本發(fā)明涉及的藥材和輔料包括1.丹參本品為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖。春秋二季采挖，除去泥沙，干燥。.本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部57頁丹參項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。2.赤芍本品為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。春、秋二季采挖，除去根莖、須根及泥沙，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部125頁赤芍項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。3.澤蘭本品唇形科植物地瓜兒苗Lyc叩uslucidusTurcz.及毛葉地瓜兒苗LycopuslucidusTurcz.var.hirtusRegel的干燥地上部分。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部第183頁澤蘭項(xiàng)下的各項(xiàng)規(guī)定4.桃仁本品為薔薇科植物桃Prunuspersica(L.)Batsch的干燥成熟種子，果實(shí)成熟后采收，除去果肉及核殼，取出種子，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部226頁桃仁項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。5.紅花本品為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的干燥花。夏季花由黃變紅時采摘，陰干或曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部119頁紅花項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。6.延胡索本品為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖。夏初莖葉枯萎時采挖，除去須根，洗凈，置沸水中煮至恰無白心時，取出，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部第108頁延胡索項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。7.金銀花本品為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開放前采收，干燥。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部177頁金銀花下有關(guān)規(guī)定。8.敗醬草本品為敗醬科植物黃花敗醬PatriniascabiosaefoliaFisch或白花敗醬Patriniavillosajuss的干燥全草。夏季化開前采挖，曬至半干，扎成束，陰干。本品應(yīng)符合《中國藥典》1977年版敗醬草項(xiàng)下的各項(xiàng)規(guī)定。9.茯苓本品為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部193頁茯苓項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。10.澤瀉本品為澤瀉科植物澤瀉Alismaorientalis(Sam.)Juz印.的干燥塊莖。冬季莖葉開始枯萎時采挖，洗凈，干燥，除去須根及粗皮。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部184頁澤瀉項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。11.大棗本品為十字花科植物菘藍(lán)IsatisindigoticaFort.的干燥葉。夏秋二季分23次采收，除去雜質(zhì)，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部第17頁大棗項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。12.王不留行本品為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccariasegelalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子。夏季芒種前后，割取全株曬干，打下種子，取凈雜質(zhì)，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版一部40頁王不留行項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。13.淀粉本品應(yīng)符合《中國藥典》2000年版二部780頁淀粉項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。中藥復(fù)方藥物的檢測，經(jīng)常復(fù)雜而不夠穩(wěn)定的分析方法，檢測費(fèi)時、費(fèi)力、費(fèi)錢，基于這些問題，也需要能夠提供一種或者一類簡便快捷的分析方法來確定藥品的真?zhèn)?。同時對于生產(chǎn)車間藥品成品的檢驗(yàn)，也需要確立其分析方法，來保證藥品的質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種前列金丹膠囊的分析方法。本發(fā)明前列金丹膠囊的分析方法簡便易行，方便快捷，能迅速簡練地鑒別藥品的真?zhèn)?，是一種適于基層和藥物檢測機(jī)構(gòu)推廣的分析方法。通過本發(fā)明分析方法的實(shí)施，能夠?qū)σ酝幤返蔫b定方法給予修訂，提高藥品質(zhì)量控制的特異性。具體而言，本發(fā)明的前列金丹膠囊的分析方法，采用以下方法取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加70%乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10微升、對照品溶液4微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:i:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加氨水8毫升濕潤，密塞，放置30分鐘，再加入乙醇50毫升，時時振搖，密塞，放置6小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，置氨蒸氣中飽和15分鐘，再以石油醚(60一90。C)-醋酸乙酯(20:17)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，力口70%乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置4小時，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液與對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展開，取出，晾干后噴二硝基苯肼試液，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:i:0.5)展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在100。c加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法還可以進(jìn)一步以下色譜方法分析色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(80:20)為流動相；檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮nA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對照品15毫克，置25毫升棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2毫升，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，每1毫升中含丹參酮IIA48微克，即得；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取1克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超聲提取20分鐘(250W，40kHz)，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，即得。上述分析方法中所述每粒前列金丹膠囊含丹參以丹參酮IIA計(jì)，不少于0.36毫克。以上對于當(dāng)前前列金丹膠囊的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的修訂，本發(fā)明中為了描述清晰，對其摸索過程進(jìn)行了簡要說明鑒別l原兒茶醛的鑒別參考原標(biāo)準(zhǔn)，對制劑中的原兒茶醛進(jìn)行鑒別。樣品制備如下取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，力Q70%乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置4小時，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液與對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，放置10分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；但是色帶較深，影響陽性結(jié)果的判斷。改進(jìn)的分析方法方法，改變流程和顯色系統(tǒng)。具體方法如下取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加70%乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置4小時，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液與對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展開，取出，晾干后噴二硝基苯肼試液，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陽性結(jié)果明顯、清晰?？瞻兹芤旱闹苽涫前刺幏街兴幬侗壤?，自配不含丹參的群藥，按制備工藝制成空白制劑，再按正文供試品溶液制備方法制成空白溶液。結(jié)果表明，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾。鑒別2芍藥苷的鑒別參考原標(biāo)準(zhǔn)，對制劑中的芍藥苷進(jìn)行鑒別。樣品制備如下取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陽性結(jié)果明顯、清晰?？瞻兹芤旱闹苽涫前刺幏街兴幬侗壤?，自配不含赤芍的群藥，按制備工藝制成空白制劑，再按正文供試品溶液制備方法制成空白溶液。結(jié)果表明，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾。鑒別3延胡索乙素的鑒別參考原標(biāo)準(zhǔn)，對制劑中的延胡索乙素進(jìn)行鑒別。樣品制備如下取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加8毫升氨水濕潤，密塞，放置30分鐘，再加入乙醇50亳升，時時振搖，密塞，放置6小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一的硅膠G薄層板上，置氨蒸氣中飽和15分鐘，再以石油醚-醋酸乙酯(20:17)展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陽性結(jié)果明顯、清晰?？瞻兹芤旱闹苽涫前刺幏街兴幬侗壤耘洳缓雍鞯娜核?，按制備工藝制成空白制劑，再按正文供試品溶液制備方法制成空白溶液。結(jié)果表明，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾。鑒別4澤蘭的特征鑒別參考文獻(xiàn)，對澤蘭進(jìn)行鑒別。樣品制備如下取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加甲10醇水浴回流提取，濾液濃縮，作為供試品溶液。另取澤蘭對照藥材0.5克，同法制備對照藥材溶液。取供試品溶液與對照藥材溶液分別點(diǎn)硅膠G板，以石油醚(60_90°C)—乙醇(8:10)展開，紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中色帶較深，無法對其進(jìn)行結(jié)果判定。根據(jù)文獻(xiàn)查閱，澤蘭中含有熊果酸，對制劑中的熊果酸進(jìn)行鑒別。樣品制備如下取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加丙酮水浴回流提取，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸Ａ砣⌒芄釋φ掌?，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。取供試品液與對照品液分別點(diǎn)硅膠G板，以環(huán)己烷一氯仿一醋酸乙酉旨-—甲酸(20:5:8:0.1)展開涼干后噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜色帶深，在與對照品相應(yīng)的位置上的斑點(diǎn)有干擾。改變樣品制備方法，取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加乙醚回流提取，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庾鳛楣┰嚻啡芤?。取新制備的樣品與對照品分別點(diǎn)硅膠G板，以環(huán)己烷一氯仿一醋酸乙酯一甲酸(20:5:8:0.1)展開涼干后噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜在與對照品相應(yīng)的位置上的斑點(diǎn)還有干擾，故放棄鑒別澤蘭與熊果酸。鑒別5桃仁的鑒別參考中國藥典2000年版一部160頁苦杏仁鑒別方法對制劑中的苦杏仁苷進(jìn)行鑒別。結(jié)果樣品色譜，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，沒有明顯的對應(yīng)斑點(diǎn)。加大樣品的點(diǎn)樣量，陽性結(jié)果依然不明顯，因而放棄。參考文獻(xiàn)，改變樣品的制備方法取本品的內(nèi)容物2克，加甲醇超聲提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，乙醚提取，乙醚液揮干，殘?jiān)蛹状既芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸Ｌ胰蕦φ账幉娜芤旱闹苽涮胰仕幉乃逯?，濾過，濾液加乙醇使含醇量達(dá)70%，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)芙?，乙醚提取，乙醚液揮干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛閷φ账幉娜芤?。取兩份溶液，點(diǎn)硅膠G板后以石油醚(60-卯'C)一氯仿一甲醇(10:3:2.5)展開，用10%的硫酸乙醇顯色，結(jié)果陽性結(jié)果不明顯，因而放棄。鑒別6紅花的鑒別參照中國藥典2000年版一部119頁紅花鑒別項(xiàng)下方法對制劑中的紅花進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果提示，供試品色譜中未見與對照藥材相應(yīng)位置的紅色素斑點(diǎn)。參考文獻(xiàn)，樣品液制備取本品的內(nèi)容物2克，加乙醚超聲處理，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，點(diǎn)樣。同法制備對照藥材溶液。取兩份溶液，點(diǎn)硅膠G板后以苯一冰醋酸一甲醇(35:1:1)展開，用10%硫酸乙醇顯色，結(jié)果陽性結(jié)果不明顯，因而放棄。鑒別7金銀花的鑒別參照中國藥典2000年版一部177頁金銀花鑒別項(xiàng)下方法對制劑中的綠原酸進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果提示，供試品色譜中未見與綠原酸相應(yīng)位置的對應(yīng)斑點(diǎn)。參考文獻(xiàn)，樣品液制備取本品的內(nèi)容物2克，加乙醚超聲處理，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓c(diǎn)樣。同法制備對照藥材溶液。取兩份溶液，點(diǎn)硅膠G板后以苯一醋酸乙酯(3:1)展開，用茴香醛一硫酸的乙醇溶液顯色，結(jié)果陽性結(jié)果不明顯，因而放棄。鑒別8茯苓的鑒別參考文獻(xiàn)，對茯苓的脂溶性成分進(jìn)行研究。樣品液的制備取本品的內(nèi)容物2克，加甲醇超聲提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀谷芙?，用乙醚提取，揮干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。同法制成對照藥材溶液。取兩份溶液，點(diǎn)于硅膠G板上，分別以石油醚(60-9(TC)—丙酮一醋酸乙酯(84:15:1)與環(huán)己垸一醋酸乙酯(9:1)展開，晾干后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，沒有對應(yīng)的斑點(diǎn)，陽性結(jié)果不明顯，因而放棄。鑒別9澤瀉的鑒別參考文獻(xiàn)，樣品液制備取本品的內(nèi)容物2克，加乙醚超聲處理，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，點(diǎn)樣。同法制備對照藥材溶液。取兩份溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(24::8:1)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱數(shù)分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，無對應(yīng)的斑點(diǎn)。又采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:2:0.7)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-30%硫酸(9:11)液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果陽性結(jié)果依然不明顯，因而放棄。鑒別io大棗的鑒別參照中國藥典2000年版一部17頁大棗鑒別方法對制劑中的齊敦果酸進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果提示，結(jié)果供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)?？赡苁且?yàn)辇R墩果酸為脂溶性成分，水煎煮未能提取出來，無法對其進(jìn)行鑒別，，因而放棄。鑒別ll王不留行的鑒別參照中國藥典2000年版一部40頁王不留行鑒別方法對制劑中的王不留行進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，結(jié)果供試品色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上無對應(yīng)的斑點(diǎn)，因而放棄。本發(fā)明采用快速簡便的一種或多種薄層色譜法或者液相色譜法，能夠各自獨(dú)立或者組合起來進(jìn)行前列金丹膠囊劑的分析檢測，為該類藥物的安全和有效的使用提供了有力保障。圖1參酮IIA在0.275微克1.375微克范圍內(nèi)線性關(guān)系圖具體實(shí)施方式下面實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但所述實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。以下實(shí)施例均取10個批號的前列金丹膠囊劑，批號分別為030803、030804、030805、030901、030902、030903、030904、041210、041211、041212。實(shí)施例1-前列金丹膠囊的常規(guī)檢測檢査本品為膠囊劑，應(yīng)符合中國藥典2000年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。根據(jù)藥典規(guī)定，對本品十批樣品的水分，裝量差異、崩解時限、微生物限度進(jìn)行了檢査，水分不超過9.0%，裝量差異、崩解時限、微生物限度均在合格范圍。試驗(yàn)及結(jié)果如下。水分取本品內(nèi)容物，照水分測定法(中國藥典2000年版一部附錄KH)測定，結(jié)見表l。由結(jié)果可知，本品符合中國藥典2000年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下關(guān)規(guī)定，水分含量小于9.0%。裝量差異取供試品10粒，分別精密稱定重量，傾出內(nèi)容物(不得損失囊殼)，硬膠囊囊殼用小刷拭凈，分別精密稱定囊殼重量，求出每粒內(nèi)容物的裝量，結(jié)果見表2，符合中國藥典2000年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下的規(guī)定。崩解時限照崩解時限檢査法(中國藥典2000年版一部附錄XEA)檢査，符合中國藥典的規(guī)定，結(jié)果見表2。.微生物限度照微生物限度檢査法(中國藥典2000年版一部附錄XinC)檢査，符合中國藥典的規(guī)定。測定結(jié)果見表2。表l十批樣品檢測結(jié)果表水分(不得過9.0%)裝量差異崩解時限(分鐘)微生物限度0308035.9〈±10%16符合規(guī)定0308046.8〈±10%19符合規(guī)定030805〈土10%17符合規(guī)定0309016.6〈±10%20符合規(guī)定0309025.0〈±10%18符合規(guī)定0309036.9〈±10%15符合規(guī)定0309045.7〈±10%17符合規(guī)定0412106.2〈±10%16符合規(guī)定0412115.7〈土10%19符合規(guī)定0412125.3〈±10%18符合規(guī)定上述試驗(yàn)表明，本品的水分含量、裝量差異、崩解時限和微生物限度均符合要求。重金屬及砷鹽檢查1、重金屬檢査照中國藥典2000年版一部附錄LXE(附錄第50頁)重金屬檢查方法二操作(1)標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備精密稱取在105'C干燥恒重的硝酸鉛0.1603克，置IOOO毫升量瓶中，加硝酸5毫升，水50毫升，溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液。臨用前，精密量取前貯備液10毫升，置100毫升量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(每1毫升相當(dāng)于10微克的鉛)(2)供試檢液制備取坩堝1只，精密稱取本品內(nèi)容物1克，電爐上緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸1.0毫升，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5毫升，蒸干，放冷，馬弗爐中50060(TC熾灼使完全灰化，放冷加鹽酸2毫升，置水浴上蒸干后加水15毫升，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2毫升，微熱溶解后，濾去殘?jiān)肐O毫升水洗，濾液移置納氏比色管中，加水稀釋至25毫升即得。(3)比色供試檢液、陽性對照液、空白對照液的3支納氏比色管中分別加硫化鈉試劑1滴，混合，放置5~10分鐘，搖勻比色，檢液顏色低于陽性對照液(<10ppm)。結(jié)果見表3，結(jié)果表明，十批樣品重金屬含量均小于10ppm，故未列入正文。2、砷鹽檢査照中國藥典2000年版一部附錄IXF.砷鹽檢査法第一法(古蔡氏法)(1)標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制備稱取三氧化二砷0.130克，置1000毫升量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5毫升溶解后，用適量稀硫酸中和，再加稀硫酸10毫升，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10毫升，置1000毫升量瓶中，加稀硫酸10毫升，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每l毫升相當(dāng)于l微克的砷)。(2)供試檢液制備取坩堝1只，精密稱取本品內(nèi)容物1克，電爐上緩緩熾灼至完全炭化，加硝酸5毫升溫潤，電爐上再熾灼，將坩堝置馬弗爐上再熾灼，將坩堝置馬弗爐中在50060(TC完全炭化成灰色粉末，放冷，加3毫升鹽酸，水浴上加熱溶解，作為供試檢液。(3)砷斑制備將供試檢液、陽性對照液，空白液分別移置測砷器中，再分別加碘化鉀試液5毫升，酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加無砷鋅粒2克，254(TC放置，取出溴化汞試紙，觀察砷斑顏色，結(jié)果溶液砷斑顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)砷顏色(<2ppm)。結(jié)果見表2。結(jié)果表明，十批樣品砷鹽含量均小于2，故未列入正文。表2重金屬、砷鹽檢査試驗(yàn)結(jié)果表批號重金屬(ppm)石申鹽(ppm)030803<10<2030804<10<2030805<10<2030901<10<2030902<10<2030903<10<2030904<10<2041210<10<2041211<10<2041212<10<2實(shí)施例2-前列金丹膠囊的色譜檢測1含量測定丹參為本制劑中的君藥，《中國藥典》2000年版丹參藥材項(xiàng)下對丹參中丹參酮IIA的含量進(jìn)行測定。原制劑中亦對制劑中的丹參酮IIA的含量進(jìn)行測定。因此本制劑測定丹參酮IIA的含量，以控制制劑的質(zhì)量。1測定條件測定條件的考察:色譜條件島津LC-2010高效液相色譜儀，色譜柱為島津ODS柱(4.6X150mm，5pm)，流速為1.0毫升/min。(1)檢測波長的選擇對丹參酮IIA對照品溶液作光譜圖測定，在270nm左右處有一吸收峰，參照藥典以及原標(biāo)準(zhǔn)，確定檢測波長為270nm。(2)流動相的選擇參照藥典以及原標(biāo)準(zhǔn)分別以甲醇一水(80:20)與甲醇一水(75:25)為流動相分別進(jìn)樣測定。試驗(yàn)結(jié)果表明，以甲醇一水(80:20)為流動相時，樣品分離度較好，出峰時間比甲醇一水(75:25)早，因此選定甲醇一水(80:20)為流動相2方法學(xué)考察①提取方法的選擇參考原標(biāo)準(zhǔn)、藥典及文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)以下樣品的處理方法，對樣品中的丹參酮IIA進(jìn)行提取方法的選擇。取030803批樣品內(nèi)容物5克，研細(xì)，備用。方法1:取本品內(nèi)容物細(xì)粉1克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，搖勻，浸泡放置12小時，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得。方法2:取本品內(nèi)容物細(xì)粉1克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，搖勻，超聲處理20分鐘(250W，40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得。方法3:取本品內(nèi)容物細(xì)粉l克，精密稱定，精密加甲醇25毫升，稱定重量，回流提取20分鐘，放冷，稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得。分別取三份樣品液10pl進(jìn)樣測定，結(jié)果見下表。表3提取方法的選擇結(jié)果表提取方法方法l方法2方法3丹參酮IIA含量(A/g)394312394488393947試驗(yàn)結(jié)果表明，三種方法的提取效率基本相當(dāng)，但以方法2(超聲提取)最為節(jié)省時間，操作最簡單，因此選擇用甲醇超聲提取的方法對丹參酮IIA進(jìn)行提取。(A為樣品峰面積，g為取樣量)②提取時間的選擇試驗(yàn)中考査了不同超聲時間對樣品中丹參酮IIA提取率的影響，取20030803批樣品內(nèi)容物5克，研細(xì)，取1克三份，精密稱定，分別加入甲醇20毫升，分別超聲處理(250W,50kHz)10、20、30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過微孔濾膜(0.45pm)測定，結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，超聲20分鐘丹參酮IIA已基本提取完全，因此確定樣品超聲提取20分鐘。最終確定樣品的處理方法為取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取1克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超聲提取20分鐘(250W，40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得。3對照品來源丹參酮IIA對照品購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用(批號110766-200314)。4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取丹參酮IIA對照品13.75毫克，置50毫升棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取l、2、3、4、5毫升，置10毫升量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；分別吸取上述對照品溶液各10微升進(jìn)樣，測定峰面積，以丹參酮IIA量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程得y=707603x-515.1，r=1.00。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>結(jié)果表明丹參酮IIA在0.275微克L375微克范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。具體內(nèi)容見說明書附圖15精密度試驗(yàn)取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1毫升含61微克的溶液，作為對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，見表6。表6精密度試驗(yàn)測定結(jié)果表序號12345峰面積(A)390902389023387279390239388084結(jié)果表明，峰面積平均峰面積為389105.4，RSD=0.38%,表明儀器的精密度良好。6穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品(批號030803)，按正文中含量測定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每隔一定時間進(jìn)樣一次，測定峰面積，考察樣品穩(wěn)定性，結(jié)果見表7。表7穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果表進(jìn)樣時間(h)01248峰面積(A)408522404072404302403320401023測定結(jié)果表明峰面積平均值為404247.8，RSD=0.67%，表明供試品溶液在8小時穩(wěn)定。7重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品(批號030803)5份，按正文含量測定項(xiàng)下方法制備樣品，并測定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表8。表8重現(xiàn)性試驗(yàn)測定結(jié)果表序號123451.401.411.441.411.41測定結(jié)果表明，樣品的平均值為1.414毫克/克，RSD=1.07%,試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。188加樣回收試驗(yàn)取本品5份(批號030803)，已知含量1.414毫克/克，每份0.5克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，精密加入丹參酮IIA對照品溶液(0.1251毫克/毫升)5毫升，加入甲醇15毫升，超聲處理20分鐘(250W,40kHz)，放冷，加甲醇至刻度，搖勾，過微孔濾膜(0.45nm)，測定峰面積，計(jì)算，結(jié)果見表9。表9回收率試驗(yàn)測定結(jié)果表序號取樣量(克)樣品含量慮克)對照品加入量(毫克)實(shí)測總量(毫克)回收率(%)RSD%10.50170.70940.62551.321597.8620.50120.70870.62551.309596.0530.50050.70770.62551.331199.6697.7561.4240.50410,71280.62551.318796.8750.50220.71010.62551.325298.349空白試驗(yàn)按處方比例，不加丹參藥材，制得缺丹參藥材的模擬制劑，精密稱定重量，按正文中含量測定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品，測定，在丹參酮IIA峰位處無吸收。見附頁。10含量測定取本品的中試樣品，按正文中含量測定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品，測定，按正文含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，測定其丹參酮IU含量，結(jié)果見表IO。表10含量測定結(jié)果表批次Xi(毫克/粒)X2(毫克/粒)T(毫克/粒)0308030.4930.5010.500308040.4090.4150.410308050.5760.5790.58030卯10.4130.4160.410309020.4960.4960.500309030.5720.5740.57190309040.6540.6550.650412100.4760.4830.480412110.4980.5050.500412120.5230.5160.52根據(jù)十批樣品含量測定結(jié)果，規(guī)定本品每粒含丹參以丹參酮IIA(C19H1803)計(jì)，不得少于5.0毫克。丹參酮IIA(C19H1803)轉(zhuǎn)移率按30%計(jì)(工藝研究表明，丹參酮HA轉(zhuǎn)移率為3135。/。，均大于30%，結(jié)合工業(yè)大生產(chǎn)考慮，丹參酮IIA轉(zhuǎn)移率定為30%)，則成品丹參酮IIA的含量最低限度應(yīng)是(藥材含量乂藥材量乂轉(zhuǎn)移率+成品數(shù))0.20%X594.4克乂30%+1000粒=0.36毫克/粒。故定每粒制劑含丹參酮IIA不得少于O.36毫克。權(quán)利要求1.一種前列金丹膠囊的分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加70％乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10微升、對照品溶液4微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。3.根據(jù)權(quán)利要求3所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加氨水8毫升濕潤，密塞，放置30分鐘，再加入乙醇50亳升，時時振搖，密塞，放置6小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?毫升使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對照品，加氯仿制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，置氨蒸氣中飽和15分鐘，再以石油醚(60一90。C)-醋酸乙酯(20:17)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析上述方法還可以進(jìn)一步分析取本品內(nèi)容物l克，研細(xì)，加70%乙醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置4小時，濾過，濾液蒸至近干，加稀鹽酸15毫升使溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次20毫升，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液，吸取供試品溶液與對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)展開，取出，晾干后噴二硝基苯肼試液，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.根據(jù)權(quán)利要求l所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每l毫升含l毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述分析方法，其特征在于采用以下方法分析取本品內(nèi)容物1克，研細(xì)，加正丁醇50毫升，超聲處理15分鐘，放置1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?毫升使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(4:1:0.5)展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述分析方法，其特征在于采用以下色譜方法分析色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(80:20)為流動相；檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮IIA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取丹參酮IIA對照品15毫克，置25毫升棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2毫升，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，每1毫升中含丹參酮IIA48微克，即得；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取1克，精密稱定，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇20毫升，超聲提取20分鐘(250W，40kHz)，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45微米)濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，即得。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述分析方法，其特征在于所述每粒前列金丹膠囊含丹參以丹參酮IIA計(jì)，不少于0.36毫克。全文摘要本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體公開了一種前列金丹膠囊的分析方法，通過本發(fā)明的實(shí)施，可以保證前列金丹膠囊產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性和檢測的重現(xiàn)性。文檔編號A61K36/884GK101658599SQ20091016258公開日2010年3月3日申請日期2009年8月4日優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日發(fā)明者楊文龍申請人:楊文龍