專利名稱：：一種植物提取物用于制備治療輕型酒精性肝病藥物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥品領(lǐng)域，具體涉及藏茵陳提取物在制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
：藏茵陳為獐牙菜屬川西獐牙菜(SwertiamussotiiFranch);抱莖獐牙菜(S.franchetianaH.Smkh);花錨屬植物橢圓葉花錨(HaleniaellipticD.Don)的干燥全草。藏茵陳為藏醫(yī)預(yù)防和治療各種肝炎、肝纖維化、脂肪肝等疾病的名貴藥材。植物化學(xué)研究，藏茵陳植物中含有裂環(huán)烯醚萜苷類，黃酮及其苷類，口山酮及其苷類，三萜類等多種成分。其中裂環(huán)烯醚萜苷類成分獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷具有保肝降酶，抗炎，促進(jìn)肝修復(fù)，抗肝纖維化等藥理作用；芒果苷具有保肝利膽、抗腫瘤、利尿作用；異荮菜苷具有明顯的保肝作用。酒精性肝病(alcoholicliverdisease,ALD)是由于長期大量飲酒(嗜酒)所致的肝臟疾病，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌等。由于乙醇進(jìn)人肝細(xì)胞后，經(jīng)過一系列酶的作用即被氧化為乙醛，因此過量飲酒會使大量乙醛對肝細(xì)胞產(chǎn)生明顯的毒性作用，從而直接或者間接導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死、以及纖維化，嚴(yán)重時還可發(fā)展為肝硬化。當(dāng)前因大量飲酒引起的酒精性肝病在逐年增多，據(jù)報道，嗜酒者中約2/3可發(fā)展為酒精性肝病。但目前臨床治療ALD除戒酒、對癥治療外，尚缺乏有效的藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供藏茵陳提取物的一種新用途，特別是在用于制備治療輕型酒精性肝病藥物的新用途。本發(fā)明的所述的藏茵陳提取物可分為乙醇提取物、水提取物、堿水提取物，各提取物的具體制備方法分別為1、乙醇提取物取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的85%乙醇回流提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過；濾液減壓濃縮成相對密度為1.18L20(6(TC)的清膏，即得。2、水提取物取藏茵陳1120g，切碎，以IO倍量的純化水提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04~1.06(60°C)，加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時；上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。3、堿水提取物取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的0.2%NaOH溶液提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.041.06(60°C)，加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時；上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。本發(fā)明制得的藏茵陳提取物以藏茵陳質(zhì)量計，大鼠按4.0g生藥/kg給予藏茵陳提取物，試驗(yàn)結(jié)果表明藏茵陳對酒精引起的輕型酒精性肝損傷模型有治療作用，可以促進(jìn)酒精引起的大鼠輕型酒精性肝損傷的逆轉(zhuǎn)。.:，本發(fā)明制得的藏茵陳提取物能夠降低輕型酒精性肝損傷大鼠的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)含量，改善肝組織病變。本發(fā)明的效果是采用提取物對大鼠灌服白酒的方法造成輕型酒精性肝損傷模型來驗(yàn)證的。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l藏茵陳乙醇提取物的制備取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的85%乙醇回流提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮成相對密度為1.181.20(60°C)的清膏，即得。實(shí)施例2藏茵陳水提取物的制備取藏茵陳1120g，切碎，以IO倍量的純化水提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04~1.06(60°C),加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%,靜置24小時，上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。4實(shí)施例3藏茵陳堿水提取物的制備取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的0.2。/。NaOH溶液提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04~1.06(6(TC)，加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時。上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。實(shí)施例4藏茵陳乙醇提取物治療大鼠輕型酒精性肝損傷的試驗(yàn)釆用實(shí)施例1的提取物進(jìn)行試驗(yàn)。大鼠正常飼養(yǎng)2d，隨機(jī)分成正常對照組、酒精模型組(1:1稀釋的56。白酒)、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg)、抱莖獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg)、花錨提取物組(4.0g生藥/kg)，每組12只。聯(lián)苯雙酯陽性對照組lg聯(lián)苯雙酯+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，各給藥組均以1.0ml/100g(體重)灌胃藏茵陳提取物+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，正常對照組灌胃給予等容積蒸餾水，酒精模型組ig蒸餾水+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，共10d。末次給酒后禁食24h，眼眶取血，分離血清。用ALT/AST測試盒測定ALT、AST，結(jié)果詳見表1。而后頸椎脫臼處死大鼠，立即破腹取肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，取肝臟左葉相同部位，用10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，HE染色，作病理檢查。結(jié)果普通光鏡檢査正常對照組肝細(xì)胞切片具有正常的多邊形細(xì)胞形狀和結(jié)構(gòu)，胞漿豐富，細(xì)胞核圓形，肝小葉類圓形；酒精組病理切片見肝細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞內(nèi)可見數(shù)量較多而不等、大小不一的脂肪滴，細(xì)胞核由于脂肪滴的擠壓而偏向細(xì)胞邊緣，肝小葉中央呈現(xiàn)片狀或點(diǎn)狀壞死；酒精加藏茵陳提取物組切片見肝細(xì)胞有腫脹現(xiàn)象，亦有脂肪滴，但腫脹程度及脂肪滴空泡程度明顯比酒精組輕，肝細(xì)胞脂肪變較輕，脂肪滴小，偶然也可見到少量的肝小葉中央點(diǎn)狀壞死。電鏡檢查觀察正常對照組切片中，肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含豐富的細(xì)胞器和包含物，核膜清晰而規(guī)則，核仁大而明顯，電子密度均勻，線粒體形狀正常，胞質(zhì)內(nèi)無脂肪滴沉積，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布規(guī)律；酒精組肝細(xì)胞切片，體積腫大，細(xì)胞核邊緣不規(guī)則，核仁不顯，線粒體明顯腫脹，，其粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，出現(xiàn)斷裂，胞質(zhì)內(nèi)可見到多量大小不一的脂肪滴沉積；酒精加藏茵陳提取物組肝細(xì)胞較規(guī)則，細(xì)胞核仁清晰，有少量的線粒體出現(xiàn)腫脹變形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯的擴(kuò)張和斷裂，少見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪滴沉積。表1藏茵陳醇提取物對大鼠56%乙醇誘導(dǎo)大鼠肝損傷血清轉(zhuǎn)氨酶的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01與模型對照組比較AP0.05，AAP〈.0.01實(shí)施例5藏茵陳水提取物治療大鼠輕型酒精性肝損傷的試驗(yàn)采用實(shí)施例2的提取物進(jìn)行試驗(yàn)。大鼠正常飼養(yǎng)2d，隨機(jī)分成正常對照組、酒精模型組(1:1稀釋的56。白酒)、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg)、抱莖獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg)、花錨提取物組(4.0g生藥/kg)，每組12只，聯(lián)苯雙酯陽性對照組ig聯(lián)苯雙酯+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，各給藥組均以1.0ml/100g(體重)灌胃藏茵陳提取鉤+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，正常對照組灌胃給予等容積蒸餾水，酒精模型組ig蒸餾水十14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，共10d。末次給酒后禁食24h，眼眶取血，分離血清。用ALT/AST測試盒測定ALT、AST,結(jié)果詳見表2。而后頸椎脫臼處死大鼠，立即破腹取肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，取肝臟左葉相同部位，用10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，HE染色，作病理檢査。結(jié)果普通光鏡檢査正常對照組肝細(xì)胞切片具有正常的多邊形細(xì)胞形狀和結(jié)構(gòu)，胞漿豐富，細(xì)胞核圓形，肝小葉類圓形；酒精組病理切片見肝細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞內(nèi)可見數(shù)量較多而不等、大小不一的脂肪滴,細(xì)胞核由于脂肪滴的擠壓而偏向細(xì)胞邊緣，肝小葉中央呈現(xiàn)片狀或點(diǎn)狀壞死；酒精加藏茵陳提取物組切片見肝細(xì)胞有腫脹現(xiàn)象，亦有脂肪滴，但腫脹程度及脂肪滴空泡程度明顯比酒精組輕，肝細(xì)胞脂肪變較輕，脂肪滴小，偶然也可見到少量的肝小葉中央點(diǎn)狀壞死。電鏡檢查觀察正常對照組切片中，肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含豐富的細(xì)胞器和包含物，核膜清晰而規(guī)則，核仁大而明顯，電子密度均勻，線粒體形狀正常，胞質(zhì)內(nèi)無脂肪滴沉積，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布規(guī)律；酒精組肝細(xì)胞切片，體積腫大，細(xì)胞核邊緣不規(guī)則，核仁不顯，線粒體明顯腫脹，其粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，出現(xiàn)斷裂，胞質(zhì)內(nèi)可見到多量大小不一的脂肪滴沉積；酒精加藏茵陳提取物組肝細(xì)胞較規(guī)則，細(xì)胞核仁清晰，有少量的線粒體出現(xiàn)腫脹變形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯的擴(kuò)張和斷裂,少見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪滴沉積。表2藏茵陳水提取物對大鼠56%乙醇誘導(dǎo)大鼠肝損傷血清轉(zhuǎn)氨酶的影響組別動物只數(shù)劑量(g生藥/kg)ALT(U/L)AST(U/L)空白對照組12-46.0±12.1176.5±33.6模型對照組12-71.8±22.5*'247.8±60.2*花錨組124.051.8±21.3A188.7±66.4A抱莖獐芽菜組124.053.5±13.4A186.8±35.4A川西獰芽菜組124.045.3士11.0"172.3士43.7"聯(lián)苯雙酯組12100mg/kg41.9士13.4"173.5士47,5"與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01與模型對照k比較AP0.05，AAP0.01實(shí)施例6藏茵陳堿水提取物治療大鼠輕型酒精性肝損傷的試驗(yàn)采用實(shí)施例3的提取物進(jìn)行試驗(yàn)。大鼠正常飼養(yǎng)2d，隨機(jī)分成正常對照組、酒精模型組(1:1稀釋的56°白酒)、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(100mg/kg)、川西獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg)、抱莖獐芽菜提取物組(4.0g生藥/kg、花錨提取物組(4.0g生藥/kg)，每組12只。聯(lián)苯雙酯陽性對照組ig聯(lián)苯雙酯+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，各給藥組均以1.0ml/100g(體重)灌胃藏茵陳提取物+14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，正常對照組灌胃給予等容積蒸餾水，酒精模型組ig蒸餾水十14ml/kgl:l稀釋的56°白酒，共10d。末次給酒后禁食24h，眼眶取血，分離血清。用ALT/AST測試盒測定ALT、AST，結(jié)果詳見3。而后頸椎脫臼處死大鼠，立即破腹取肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，取肝臟左葉相同部位，用10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，HE染色，作病理檢查。結(jié)果普通光鏡檢查正常對照組肝細(xì)胞切片具有正常的多邊形細(xì)胞形狀和結(jié)構(gòu)，胞漿豐富，細(xì)胞核圓形，肝小葉類圓形；酒精組病理切片見肝細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞內(nèi)可見數(shù)量較多而不等、大小不一的脂肪滴,細(xì)胞核由于脂肪滴的擠壓而偏向細(xì)胞邊緣，肝小葉中央呈現(xiàn)片狀或點(diǎn)狀壞死；酒精加藏茵陳提取物組切片見肝細(xì)胞有腫脹現(xiàn)象，亦有脂肪滴，但腫脹程度及脂肪滴空泡程度明顯比酒精組輕，肝細(xì)胞脂肪變較輕，脂肪滴??；偶然也可見到少量的肝小葉中央點(diǎn)狀壞死。電鏡檢查觀察正常對照組切片中，肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含豐富的細(xì)胞器和包含物,核膜清晰而規(guī)則，核仁大而明顯，電子密度均勻，線粒體形狀正常，胞質(zhì)內(nèi)無脂肪滴沉積，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布規(guī)律；酒精組肝細(xì)胞切片，體積腫大，細(xì)胞核邊緣不7規(guī)則，核仁不顯，線粒體明顯腫脹，其粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，出現(xiàn)斷裂，胞質(zhì)內(nèi)可見到多量大小不一的脂肪滴沉積；酒精加藏茵陳提取物組肝細(xì)胞較規(guī)則，細(xì)胞核仁清晰，有少量的線粒體出現(xiàn)腫脹變形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見明顯的擴(kuò)張和斷裂，少見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪滴沉積。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01與模型對照組比較AP0.05,AAP0.01以上試驗(yàn)表明，本發(fā)明的藏茵陳(分別為川西獐芽菜、抱莖獐芽菜、花錨)醇提取物、水提取物、堿水提取物均具有確切的治療輕型酒精性肝損傷的作用，由于目前在臨床上還沒有明確的治療輕型酒精性肝病的藥品，則開發(fā)本品具有一定的臨床價值。權(quán)利要求1、藏茵陳提取物在制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途。2、一種如權(quán)利要求I所述的藏茵陳提取物在用于制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途，其特征在于所述藏茵陳提取物包括乙醇提取物、水提取物和堿水提取物。3、如權(quán)利要求1或2所述的藏茵陳提取物在用于制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途，其特征在于所述藏茵陳乙醇提取物是取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的純化水提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04~1.06(60°C)，加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時；上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。4、如權(quán)利要求1或2所述的藏茵陳提取物在用于制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途，其特征在于所述藏茵陳水提取物是取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的純化水提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04~1.06〔6(TC),加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時；上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。"5、如權(quán)利要求1或2所述的藏茵陳提取物在用于制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途，其特征在于所述藏茵陳堿水提取物是取藏茵陳1120g，切碎，以10倍量的0.2。/。NaOH溶液提取三次，每次3小時，合并提取液，濾過，濃縮到相對密度為1.04-1.06(6(TC)，加入乙醇，調(diào)節(jié)乙醇濃度為85%，靜置24小時；上述乙醇溶液，過濾，濾液回收乙醇繼續(xù)濃縮成清膏，即得。全文摘要本發(fā)明提供了藏茵陳提取物在制備治療輕型酒精性肝病藥物中的新用途，該提取物包括乙醇提取物、水提取物及堿水提取物；以藏茵陳質(zhì)量計，大鼠按4.0g生藥/kg給予藏茵陳提取物，試驗(yàn)證明藏茵陳對酒精引起的輕型酒精性肝損傷模型有治療作用，可以促進(jìn)酒精引起的大鼠輕型酒精性肝損傷的逆轉(zhuǎn)。文檔編號A61K36/51GK101653475SQ20091016762公開日2010年2月24日申請日期2009年9月14日優(yōu)先權(quán)日2009年9月14日發(fā)明者浩張,黃紹淵申請人:成都力思特制藥股份有限公司