專利名稱：：三味檀香活性提取物及其提取方法和醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藏藥炮制、提取、制劑領(lǐng)域；具體而言，本發(fā)明涉及三味檀香活性提取物及其提取方法和醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，簡稱冠狀動脈性心臟病或冠心病，有時又被稱為冠狀動脈病或缺。只由于冠狀動脈粥樣硬化使管腔狹窄或阻塞導致心肌缺血、缺氧而引起的心臟病。由于90%以上的缺血性心臟病是由于冠狀動脈粥樣硬化引起的，因此WHO公布兩者為同義詞。冠心病是中國目前主要的健康殺手之一。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，每年每105例死亡患者中就有42例患者死于冠心病。治療冠心病的藥物有硝酸酯類、e-受體阻斷劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、心肌代謝改善、前列腺素類、動脈擴張藥、中草藥。主要是從降低心肌耗氧量，使心肌血流量重新分配，增加對心肌缺血區(qū)供血，改善心肌的代謝，通過直接與間接途徑對缺血心肌發(fā)揮保護作用，冠脈血管擴張，增加冠脈流量，改善血液流變性和抗凝作用等方面入手的。藏藥是民族醫(yī)藥中的瑰i，它植根于雪域高原，有近2500多年的歷史，擁有獨特的理論體系和雄厚的應用基礎，但其推廣開發(fā)受到限制。為了使藏藥走向全國、走向世界，應在發(fā)掘整理的同時大力加強藏藥現(xiàn)代化的研究，將具有獨特療效的傳統(tǒng)藏藥用現(xiàn)代藥學的方法加以驗證，對藏藥藥理作用、化學成分進行研究，闡釋藏藥治病的機理，充分分析和研究世界主流醫(yī)藥市場對天然藥物(包括藏藥)制劑的要求和標準，將療效確切的藏藥開發(fā)成以制劑的形式一藏成藥，按現(xiàn)代醫(yī)藥標準推向市場，成為符合國際規(guī)范并且為主流市場樂于接受的治療性和保健性的天然綠色藥品，將其良好的功效與世人共享。三味檀香散是由檀香、肉豆蔻、廣棗三味組成，藏藥名贊旦松湯，具有清熱、祛風、養(yǎng)心之功效，是藏醫(yī)治療心熱病的常用方。心熱病在《秘訣醫(yī)典》中又分為心熱增盛與心熱回旋兩種，心熱增盛主要是神志不清、心中有扭擰感、胸背疼痛等癥狀，此病癥與現(xiàn)代醫(yī)學的心絞痛有相似之處。臨床經(jīng)驗證明民族醫(yī)藥如藏藥在醫(yī)治心血管疾病方面有悠久的歷史，由于沒有經(jīng)過科學深入的研究，產(chǎn)品質(zhì)量不能很好的控制，導致其療效也是不能充分的發(fā)揮。目前有關(guān)三味檀香的相關(guān)報道有以下二類1、三味檀香湯散肉豆蔻、廣棗、檀香三味藥材按1:1:1的比例混合，粉碎成粗粉，過篩，混勻，即得。為傳統(tǒng)藏藥方劑，制劑手段簡單，質(zhì)量監(jiān)控和有效成分不清。2、三味檀香顆粒肉豆蔻、廣棗、檀香三味藥材，粉碎成粗粉，加水浸泡，用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，另器收集，藥渣加水煎煮三次，第一次3小時，第二、三次各2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.251.30(50°C)的清膏，加入乙醇使含醇量達60%，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.301.35(50°C)的稠膏，加入蔗糖，制成顆粒，干燥，噴入上述揮發(fā)油，混勻，即得。制劑手段簡單，提取工藝簡單，沒有得到有效成分集中的提取物，并且有效成分不清，有效成分含量不清，質(zhì)量監(jiān)控手段不完善。本發(fā)明人長期對傳統(tǒng)藏藥"三位檀香湯散"進行了深度研究和開發(fā)，通過活性跟蹤篩選，發(fā)現(xiàn)了"三位檀香湯散"中的有效成分為其中的廣棗總黃酮、廣棗總酚酸、肉豆蔻總木脂素、肉豆蔻總酚酸、檀香揮發(fā)油和肉豆蔻揮發(fā)油，并通過研究發(fā)現(xiàn)了，各種活性提取物聯(lián)合使用具有協(xié)同增效作用。通過創(chuàng)新性的提取工藝研究，發(fā)現(xiàn)了廣棗總黃酮、廣棗總酚酸、肉豆蔻總木脂素、肉豆蔻總酚酸、檀香揮發(fā)油和肉豆蔻揮發(fā)油的高效、低成本的制備工藝，使有效成分的含量最優(yōu)達到80%以上。并通過組合物的現(xiàn)代劑型(混懸劑、片劑、顆粒劑、膠囊、丸劑、滴丸劑、凝膠劑等)和藥理學研究，發(fā)現(xiàn)了其組合物可以在治療清熱解毒、抑菌消炎、解痙止痛、降壓減肥、抑癌防癌、提神醒腦、明目益思、止渴生津、去膩醒酒、健胃強身、護膚美容以及活血脈、抗衰老、降血脂、降膽固醇、降甘油三月旨、改善血液粘稠度和微循環(huán)、擴張血管、清除自由基、增強人體免疫力等藥物和食品中得到廣泛應用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一組肉豆蔻，廣率，檀香的提取物。本發(fā)明的提取物含有以下藥物活性成分，廣棗總黃酮、廣棗總酚酸、肉豆蔻總木脂素、肉豆蔻總酚酸、檀香揮發(fā)油和肉豆蔻揮發(fā)油。本發(fā)明的提取物采用對肉豆蔻，廣棗，檀香三味藥材同時或分別加工提取得到。本發(fā)明的提取物，其中1)廣棗總黃酮總含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為山柰酚、槲皮素、楊梅素、山柰酚-5-0-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-0-鼠李糖苷和楊梅素-3-0-鼠李糖苷等。2)廣棗總酚酸總含量為5%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為原兒茶酸、沒食子酸、鞣花酸、3、3'-二甲氧基鞣花酸、檸檬酸和對苯二酚等。3)肉豆蔻總木脂素總含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為去氫二異丁香酚、愈創(chuàng)木素、3-(3，4-二甲氧基)丙-1,2_二醇等。4)肉豆蔻總酚酸總含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為反式一3，4一二甲氧基肉桂酸、鄰苯二甲酸、3—羥基一4一甲氧基一苯甲酸。5)檀香揮發(fā)油總含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，主要含a—檀香烯，a—佛手烯，Epi—e—檀香烯，e—檀香烯，a—姜黃烯等。6)肉豆蔻揮發(fā)油含量為1%_100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，主要含有0-蒎烯(e-pinene)、a-蒎烯(a-pinene)、Y-松油烯(Y-terpinene)、香檜烯(sabinene)、肉豆蔻醚等。三味檀香活性提取物及其組合物的含量測定方法，其特征為利用HPLC法測定三味檀香活性提取物中的原兒茶酸含量，利用GC-MS測定三味檀香活性提取物中的檀香和肉豆蔻揮發(fā)油的含量。本發(fā)明的提取物，采用以下方法制備肉豆蔻活性成分的提取步驟l、肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油。步驟2、步驟1所得肉豆蔻霜用乙醇冷浸提取，提取液減壓回收乙醇，含水提取物上HPD100型大孔樹脂；先后用90%乙醇與60%乙醇洗脫，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素，肉豆蔻總酚酸和肉豆蔻總木脂素為肉豆蔻活性成分。歩驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油。肉豆蔻總酚酸，肉豆蔻總木脂素和肉豆蔻揮發(fā)油為肉豆蔻活性成分。廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，乙醇提取，回收乙醇，所得水層調(diào)pH到酸性，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗活性成分，內(nèi)含廣棗總酚酸和廣棗總黃酮。檀香活性成分的提取取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油，檀香揮發(fā)油為檀香活性成分。肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。本發(fā)明的提取物，優(yōu)選的采用以下方法制備肉豆蔻活性成分的提取步驟l、取肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油。歩驟2、歩驟1所得霜用5倍量的70%乙醇提冷浸過夜，70%的乙醇提取液減壓回收乙醇，提取液蒸至無醇味；含水提取物加入適量水，上HPD100型大孔樹脂；然后先后用90%乙醇與60%乙醇沖洗，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素。步驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油。廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，加70%乙醇提取3次，回收乙醇，所得水層用1MHC1調(diào)pH，使pH<l，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗總酚酸和廣棗總黃酮。檀香活性成分的提取取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油。肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。本發(fā)明還包括含有本發(fā)明的提取物的藥物組合物。所述組合物可以是本發(fā)明化合物和藥物可接受的載體混合制備成的藥物制劑。這些制劑包括通用的藥物劑型如片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑，混懸液等。本發(fā)明的藥物組合物在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每次1-20劑，如l-20袋或?；蚱?，每劑lmg-1000mg。本發(fā)明的提取物是經(jīng)過系統(tǒng)地活性篩選得到的，具體實驗內(nèi)容如下1、提取的組分及各處方組合情況1.1第一次篩藥提取組分及組合情況l.l.l第一次篩藥所提取的各組分情況，見表l表l.提取組分情況分組提取組分檀香(T)TlT2T3T4肉豆蔻(R)RlR2R3R4廣麥(G)Gl其中T1的提取方法如下取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油，即得T1。其中T2的提取方法如下取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用水煎煮，即得T2。其中T3的提取方法如下取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用70%煎煮，即得T3。其中T4的提取方法如下取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用95°/。煎煮，即得T4。其中Rl的提取方法如下取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油，即得R1。其中R2的提取方法如下取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用水煎煮，即得R2。其中R3的提取方法如下取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用7(F。煎煮，即得R3。其中R4的提取方法如下取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，后藥渣用95%煎煮，即得R4。其中Gl的提取方法如下取廣棗粉碎，加70%乙醇提取3次，回收乙醇，所得水層用1MHCl調(diào)pH,使pH<l，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗總酚酸和廣棗總黃酮。1.1.2第一次篩藥各處方的組合情況，見表2表2.處方組合情況組合分組組合情況ATl、T2、T3、T4;Rl;Gl;PVP(<4%);e-羥丙基環(huán)糊精(10%);VC(O.2%)BTl、T2、T3、T4;R2、R3、R4;Gl;PVP(<4%):e-羥丙基環(huán)糊精(10%);VC(O.2%)CT2、T3、T4;Rl、R2、R3、R4;Gl;PVP(<4%);羥丙基環(huán)糊精(10%);VC(O.2%)DTl;R2、R3、R4;Gl;PVP(<4%);e_羥丙基環(huán)糊精(10%);VC(O.2%)ETl、T2、T3、T4;Rl、R2、R3、R4;Gl;PVP(<4%);P-羥丙基環(huán)糊精(10%);VC(O.2)STS三味檀香湯散水體物F三味藥材粉碎后水提物1.1.3藥物配置方法取肉豆蔻與檀香T1(或T1)與R1(或R1)(按原藥材l:1的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，先加羥丙基-日-環(huán)糊精(加約相當于原三味檀香藥材10%)研磨w[7]，加水約5ml研至揮發(fā)油味淡；再按照處方組合加入檀香、肉豆蔻、廣棗的提取的浸膏(均按原藥材l:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再加聚乙烯吡咯垸酮K30(小于配置終溶劑的4%)〔8][9]、維生素C(加約相當于原三味檀香藥材0.2%)，加水適量研磨，加水至終溶劑，得混懸劑。1.2第二次篩藥提取組分及組合情況111.2.1第二次篩藥所提取的各組分情況，見表11.2.2第二次篩藥處方組合情況，見表3。表3.處方組合情況組合分組組合情況A"Tl;R3;Gl;PVP(<4%);VC(O.2)B')Tl;Rl、R2、R3、R4;Gl;PVP(〈錢)；VC(O.2%)F三味藥材粉碎后水提物STS三味檀香湯散水體物1.2.3藥物配置方法取肉豆蔻與檀香T1與R1(或R1)(按原藥材l:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，先加羥丙基-e-環(huán)糊精(加約相當于原三味檀香藥材10%)研磨，加水約5ml研至揮發(fā)油味淡；再按照處方組合加入檀香、肉豆蔻、廣棗的提取的浸膏(均按原藥材l:1:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置終溶劑的4%)、維生素C(加約相當于原三味檀香藥材0.2%)，加水適量研磨，加水至終溶劑，得混懸劑。1.3第三次篩藥提取組分及組合情況1.3.l第三次篩藥所提取的各組分情況，見表l1.3.2第三次篩藥處方組合情況，見表4。表4.處方組合情況組合分組組合情況A。0Tl;Rl;Gl;PVP(<4%);VC(O.2%)F三味藥材粉碎后水提物1.3.3藥物配置方法取肉豆蔻與檀香T1與R1(按原藥材l:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，按照處方組合加入檀香、肉豆蔻、廣棗的提取的浸膏(均按原藥材l:1:1的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再加聚乙烯吡咯垸酮K30(小于配置終溶劑的4%)、維生素C(加約相當于原三味檀香藥材0.2%)，加水適量研磨，加水至終溶劑，得混懸劑。1.4第四次篩藥提取組分及組合情況1.4.1第四次篩藥各味藥組分提取流程圖及所含化學成分見圖肉豆蔻提取物制備見圖1。R5得2.722g,出膏率為0.199。％R6得7.264g，出膏率為0.531%3)肉豆蔻揮發(fā)油的提取取222.5g肉豆蔻油，放入1L圓底燒瓶中，再加入250mL蒸餾水，加熱，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油；得揮發(fā)油(Rl)24g，產(chǎn)率為3.66%。c.所提肉豆蔻各組分所含化學成分肉豆蔻揮發(fā)油(Rl):揮發(fā)油在肉豆蔻中含量較大約5%-15%，揮發(fā)油中含有的主要成分蒎烯(e-pinene)、a-蒎烯(a-pinene)、Y-松油烯(Y-terpinene)、香檜烯(sabinene)、擰檬烯(limonene)、冰片烯(bomylene)、P-水序烯(3-phellandrene)、a-水序烯(a-phellandrene)、松油-4-烯醇(terpinen-4-ol)、黃樟醚(safrole)、甲基丁香酚(methyleugenol)、肉豆蔻醚(myristicin)、欖香月旨素(elemicin)、d-莰烯(d-camphene)、肉豆蔻酸(myristicacid)、P-香口十烯(e-myrcene)、對傘花烴(戶cymene)、異松油烯(terpinolen)、2-皆烯(2-carene)、3-皆烯(3-carene)、3_側(cè)柏烯(3-thujene)、丁香酚(eugenol)、a-庫比烯(a-cubebene)等。肉豆蔻60%醇提物(R5)主要含酚酸類物質(zhì)，90%醇提物(R6)主要含木脂素類成分。廣棗提取物制備見圖2。樣品Gl產(chǎn)率為1.14%b.廣棗乙酸乙酯層(Gl)主要含黃酮類及有機酸類成分，如山柰酚、槲皮素、楊梅素、山柰酚-5-0-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-0-鼠李糖苷和楊梅素-3-0-鼠李糖苷；原兒茶酸、沒食子酸、鞣花酸、3、3'-二甲氧基鞣花酸、檸檬酸和對苯二酚。檀香提取物制備見圖3。b.樣品T1產(chǎn)率為2.525%c.檀香揮發(fā)油(T1)主要含a—檀香烯，a—佛手烯，Epi—e—檀香烯，P—檀香烯，a—姜黃烯，橙花叔醇，喇叭醇，a—檀香醇，a—沒藥醇，反式一a一佛手醇，E—順式一印i一e—檀香醇，e-檀香醇，荷葉醇，澳白檀醇等。1.4.2第四次篩藥所提取的各組分情況，見表l，由于改變了提取步驟，增加了R5、R6。131.4.3第四次篩藥處方組合情況，見表5。表5.處方組合情況組合分組組合情況Tl;Rl、R5、R6;Gl;PVP(<4%);VC(O.2%)三味藥材粉碎后水提物復方丹參滴丸1.4.4藥物配置方法取肉豆蔻與檀香T1與R1(按原藥材l:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再取R5、R6、Gl(均按原藥材l:1:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再加聚乙烯吡咯垸酮K30(小于配置終溶劑的4%)、維生素C(加約相當于原三味檀香藥材0.2%)，加水適量研磨，加水至終溶劑，得混懸劑。2.1垂體后葉素致心肌缺血實驗2.1.1篩藥實驗方法垂體后葉素(Pit)致大鼠急性心肌缺血法是研究抗心肌缺血藥物的一個重要而經(jīng)典的動物模型。文獻["]指出Pit引起心電圖變化分為兩期，靜脈注射Pit后20s內(nèi)為第一期，可引起T'波抬高；20s至數(shù)分鐘內(nèi)，以T波低平或倒置為主要表現(xiàn)并可引起心律減慢等作用，凡能抑制第一期或第二期心電圖變化的藥物對此模型有效。根據(jù)實驗的在篩藥過程中，所篩選的三味檀香活性提取物具有改善垂體后葉素所致大鼠心電圖T波變化。2.1.2最優(yōu)活性群的選擇A(T1、T2、T3、T4;Rl;Gl)、B(Tl、T2、T3、T4;R2、R3、R4;Gl)、C(T2、T3、T4;Rl、R2、R3、R4;Gl)、D(Tl;R2、R3、R4;Gl)組對抗垂體后葉素所致大鼠心電圖T波的變化不明顯，表明A、B、C、D組沒提出活性提取物；E(Tl、T2、T3、T4;Rl、R2、R3、R4;Gl;)、F組(三味藥材粉碎后水提物)具有對抗垂體后葉素所致大鼠心電圖T波的變化的作用，E組中所含提取物較多，需進一歩調(diào)整。A"(Tl;R3;Gl)、B"(Tl;Rl、R2、R3、R4;Gl)組具有對抗垂體后葉素所致大鼠心電圖T波的變化的作用，B"結(jié)果較優(yōu)，因此對B"進一步進行調(diào)整。Aan(Tl;Rl;Gl)組有致大鼠心率失常的現(xiàn)象，因此其中SD均比較大。對組分組合進一歩調(diào)整。FFDPA'""是在甜面三次實驗的基礎上組合出的活性提取物。A°°°組分中提取物均少于E、B"，并具有對抗垂體后葉素所致大鼠心電圖T波的變化的作用，從提取與制劑制備工藝、藥效學等綜合因素考慮我們定A"""最優(yōu)活性提取物(如表6所示)。表6.A"。"組對垂體后葉素所致心肌缺血大鼠心電圖T波變化率的影響(歹土SD，n=10)分組各時間點心電圖T波變化率25'30'40'50'60'90'組FDPA"""高A'"'"中A"""低1.037±1.0080.493±0.4480.356±0.281*0.450±0.7200.701±0.7730.823±0.2250.326±0.230"0.216±0.221"0.533±0.4850.474±0.4490.572±0.3020.200±0.174**0.364±0.2330.362±0.3030.294±0.252*0.510±0.2640.312±0.3580.250±0.166*0.396±0.2340.533±0.2090.577士0.3290.316±0.226*0.278±0.181**0.346±0.274*0.355±0.1700.556±0.2100.378±0.2040.318±0.261*0.337±0.268*0.579±0.236*P<0.05，，<0.01與模型組比較3本發(fā)明最優(yōu)提取物A"""抗心肌缺血藥效學驗證實驗3.1A'""'小鼠氣管夾閉實驗經(jīng)實驗證明，三味檀香活性提取物能顯著延長小鼠常壓缺氧條件下的存活時間，增加心臟對缺氧狀態(tài)下的耐受性，因此三味檀香活性提取物對小鼠心肌具有一定得保護作用3.2A'""'異丙腎上腺素所致心肌缺血實驗心肌代謝以有氧代謝為主，故其代謝率可以氧消耗為代表。在整體動物，心肌耗氧量的決定因素是心率、收縮力、心室壁張力、室內(nèi)壓、直徑與室壁厚度[:'8]。而異丙腎上腺素使心率加快，傳導加速，心肌收縮力增強，心輸出量增加^，三味檀香活性提取物能改善由異丙腎上腺素所致大鼠心電T波變化，說明三味檀香活性提取物能夠降低心肌耗氧量。3.3A"""三味檀香活性提取物對麻醉犬血流動力學實驗影響3.4A'""'三味檀香活性提取物對結(jié)扎犬血藥效學研究心外膜心電圖可靈敏地反映心肌缺血程度、范圍和動態(tài)過程并可同時監(jiān)測藥物的作用，但消化道給藥時藥物出現(xiàn)作用較晚，三味檀香活性提取物有明顯減輕缺血程度的作用；心肌酶含量為心肌損傷的重要標志，特別是CK和LDH目前是臨床診斷心肌缺血和心肌梗死的主要參考指標，本實驗對血清酶活性和心肌梗死范圍進行了測定，說明三味活性提取物對心肌缺血造成的損傷有明顯的改善作用。A'""'三味檀香有效提取物對垂體后葉素所致大鼠心電圖T波變化的影響根據(jù)隨機、雙盲的原則，將大鼠分組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M，給予飲用水溶液，給藥容積為1ml/100g;三味檀香湯散組，臨用前用水煎煮，作為陽性組(相當于原藥材lg.kg-1);三味檀香混懸劑組(相當于原藥材1g*kg—')。按上述劑量連續(xù)給藥10天，每天1次，給藥容積1ml/100g，于第10天給藥后1小時，將大鼠用10°/。水合氯醛(0.4g*kg—')腹腔注射麻醉，背位固定，用RM6240CD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)經(jīng)針型電極與大鼠肢體相連，采集標II導聯(lián)心電圖，記錄給藥前每組每只大鼠標n導聯(lián)心電圖T波高度(iiv)作為給藥前對照(0s)，經(jīng)舌靜脈注射垂體后葉素(劑量為0.6U.kg—'，5秒注完)，記錄注射垂體后葉素后25秒、30秒、40秒、60秒各時間點大鼠心電圖中T波高度變化率(AT=(注射垂體后葉素后各時間點T波值一注射前T波值)/注射垂體后葉素后各時間點T波值)。結(jié)果見表7。表7三味檀香混懸劑對垂體后葉素所致大鼠心電圖T波變化的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>湯散0.281*0.221**0.2330.166*0.181**與空白組比，*P<0.05，**P〈0.01A三味擅香有效提取物對結(jié)扎犬心外膜心電圖的影響動物分組及給藥健康犬，分組，每組6只，分別為空白對照組(給予蒸餾水)；三味檀香混懸劑(相當于原藥材0.6g*kg—'，)；三味檀香湯散(相當于原藥材0.3g*kg—'，用STS表示)。各組給藥前用蒸餾水配制，給藥途徑均為十二指腸給藥，給藥容積均為2mlkg—'。受試動物戊巴比妥鈉(30mg'kg—')靜脈麻醉后，箭突下約3cm處沿腹白線開口，分離十二指腸，以備給藥。分離氣管，連接人工呼吸機(頻率18次'mirf'，潮氣量每次200ml)，于左4-5肋間開胸，于距迷走神經(jīng)2cm處打開心包，做心包床，取5號縫合線，穿在冠狀動脈左前降支(LAD)中下l/3處，把心外膜心電圖交換盒上的電極片縫合在左心室表面。待受試動物各項指標均穩(wěn)定時，用穿入LAD中下1/3處的線進行結(jié)扎。15min后記錄30個點的左心室表面心電圖(積出ST段變化情況)，記錄完畢后，十二指腸給藥，給藥后15分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘、180分鐘記錄心外膜心電圖(積出30個點ST段變化情況)，結(jié)果見表8表8三味檀香混懸劑對結(jié)扎犬心外膜心電圖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與空白組比較AP<0.05，AAP〈0.01;組內(nèi)與給藥前比較*P<0.05，**P〈0.01A'""'對心電圖的影響本試驗主要是選擇部分冠心病治療藥物及三味檀香混懸劑，給予大鼠，考察對三味檀香混懸劑對垂體后葉素所致大鼠心電圖T波的影響情況，考察了空白組，復方丹參滴丸組，三味檀香混懸制劑在給藥0秒、20秒、200秒時的T波變化圖譜。圖譜l-3為空白組，圖譜4-6為復方丹參滴丸組，圖譜7-9為硝酸甘油組，圖譜10-12為三味檀香混懸制劑組。從試驗結(jié)果可以看出，三味檀香混懸劑能夠?qū)褂纱贵w后葉素所致大鼠心電圖T波的變化；能夠改善冠脈結(jié)扎犬心電圖ST變化的作用；通過由垂體后葉素所致模型圖譜的比較，發(fā)現(xiàn)三味檀香混懸劑具有擴張冠脈的作用，其他保護心肌缺血的機制則需要進一步研究。4三味檀香活性提取物制備工藝確定本實驗通過現(xiàn)代藥理實驗方法驗證A,具有改善心肌供氧、心肌做功等情況。實驗發(fā)現(xiàn)，A"""對麻醉犬的HR和MAP無明顯影響""、其中LVSP與dp/dt,降低，表明A'""'能夠降低心肌收縮力，減少心肌耗氧量，但給藥后CO有所增加，而MAP不變，這種情況下可能是通過擴張血管降低TPVR而造成的[41];而LVEDP與-dp/dU、升高，表明心肌前負荷增加，增加了左心室的順應性。HR、MAP不變及LVSP下降得情況下CBF有顯著增加，這可能是A,具有明顯擴張冠脈血管作用，這一點有待在以后實驗中進一歩研究。實驗中發(fā)現(xiàn)，An""對心臟血流動力學影響有劑量依賴性。A"'"'中與同劑量的STS比較無顯著差異，也說明完全提取了STS的活性群，而A"""的質(zhì)量更易可控，選定該提取物為本發(fā)明最優(yōu)提取物。5A'""'三味檀香活性提取物中有效成分的化學研究和成分分離利用現(xiàn)代提取分離技術(shù)，從有效提取物中分離得到了各有效成分，并測定了它們的含量，發(fā)現(xiàn)1)廣棗總黃酮提取物總黃酮含量為1%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為山柰酚、槲皮素、楊梅素、山柰酚-5-0-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷和楊梅素-3-0-鼠李糖苷等。2)廣棗總酚酸提取物總酚酸含量為5%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為原兒茶酸、沒食子酸、鞣花酸、3、3'-二甲氧基鞣花酸、檸檬酸和對苯二酚等。3)肉豆蔻總木脂素提取物總木脂素含量為1%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為去氫二異丁香酚、愈創(chuàng)木素、3-(3,4-二甲氧基)丙-1,2-二醇等。4)肉豆蔻總酚酸提取物總酚酸含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為反式一3，4一二甲氧基肉桂酸、鄰苯二甲酸、3—羥基一4一甲氧基一苯甲酸。5)檀香揮發(fā)油提取物總萜類含量為1%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，主要含Q—檀香烯，a—佛手烯，Epi—e—檀香烯，P—檀香烯，a一姜黃烯等。6)肉豆蔻揮發(fā)油提取物總萜類含量為1%-100%，優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，主要含有蒎烯(e-pinene)、a-蒎烯(a-pinene)、Y-松油烯(Y-terpinene)、香檜烯(sabinene)、肉豆蔻醚等。本發(fā)明的A'""'三味檀香活性提取物具有清熱解毒、抑菌消炎、解痙止痛、降壓減肥、抑癌防癌、提神醒腦、明目益思、止渴生津、去膩醒酒、健胃強身、護膚美容以及活血脈、抗衰老、降血脂、降膽固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循環(huán)、擴張血管、清除自由基、增強人體免疫力等生物活性，可以應用于制造藥物和食品。本發(fā)明的A"""三味檀香活性提取物的組合物具有同樣的藥物作用，其特征為含有三味檀香活性提取物中任何一種提取物的藥物組合物。也可以制成混懸劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、凝膠劑等藥物制劑。圖1肉豆蔻活性成分的提取路線圖圖2廣棗活性成分的提取路線圖圖3擅香活性成分的提取路線圖圖4心電圖具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。實施例1:A'"'"提取物制備肉豆蔻活性成分的提取歩驟l、取肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油。歩驟2、歩驟1所得霜用5倍量的70%乙醇提冷浸過夜，70%的乙醇提取液減壓回收乙醇，提取液蒸至無醇味；含水提取物加入適量水，上HPD100型大孔樹脂；然后先后用90%乙醇與60%乙醇沖洗，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素。步驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油。廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，加70%乙醇提取3次，回收乙醇，所得水層用1MHCl調(diào)pH，使pH<l，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗總酚酸和廣棗總黃酮。檀香活性成分的提取-取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油。肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。實施例2藥物組合物的制備所得肉豆蔻與檀香揮發(fā)油(按原藥材1:1的比例取樣，根據(jù)提取率折算)先加e-羥丙基環(huán)糊精(加約相當于原三味檀香藥材10%)研磨，加水約5ml研至揮發(fā)油味淡；再加入肉豆蔻90%與60%浸膏、廣棗提取的浸膏(均按原藥材l:l的比例取樣，根據(jù)提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置終溶劑的4%)、維生素C(加約相當于原三味檀香藥材0.2%)，加水適量研磨，加水至終溶劑，得混懸劑。權(quán)利要求1、一種肉豆蔻，廣棗，檀香的提取物，其特征在于，其中藥物活性成分為廣棗總黃酮、廣棗總酚酸、肉豆蔻總木脂素、肉豆蔻總酚酸、檀香揮發(fā)油和肉豆蔻揮發(fā)油，其中1)廣棗總黃酮總含量為1％-100％，2)廣棗總酚酸總含量為5％-100％，3)肉豆蔻總木脂素總含量為1％-100％，4)肉豆蔻總酚酸總含量為1％-100％，5)檀香揮發(fā)油總含量為1％-100％，6)肉豆蔻揮發(fā)油含量為1％-100％。2、權(quán)利要求l的提取物，其特征在于，其中1)廣棗總黃酮總含量為50%以上，具體成分為山柰酚、槲皮素、楊梅素、山柰酚-5-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-0-鼠李糖苷和楊梅素-3-0-鼠李糖苷等；2)廣冬總酚酸總含量為50%以上，具體成分為原兒茶酸、沒食子酸、鞣花酸、3、3'-二甲氧基鞣花酸、擰檬酸和對苯二酚等；3)肉豆蔻總木脂素總含量為50%以上，具體成分為去氫二異丁香酚、愈創(chuàng)木素、3-(3，4-二甲氧基)丙-1,2-二醇等；4)肉豆蔻總酚酸總含量為50%以上，具體成分為反式一3，4一二甲氧基肉桂酸、鄰苯二甲酸、3—羥基一4一甲氧基一苯甲酸；5)檀香揮發(fā)油總含量為50%以上，具體成分為a—檀香烯，a—佛手烯，Epi—0—檀香烯，e—檀香烯，a—姜黃烯等；6)肉豆蔻揮發(fā)油含量為50%以上，具體成分為P-蒎烯、a-蒎烯、Y-松油烯、香檜烯、肉豆蔻醚等。3、權(quán)利要求2的提取物，其特征在于，其中1)廣棗總黃酮總含量為1%-100%,優(yōu)化為50%以上，最優(yōu)為80%以上，具體成分為山柰酚、槲皮素、楊梅素、山柰酚-5-0-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-0-鼠李糖苷和楊梅素-3-0-鼠李糖苷等；3)肉豆蔻總木脂素總含量為80%以上，4)肉豆蔻總酚酸總含量為80%以上，5)檀香揮發(fā)油總含量為80%以上，6)肉豆蔻揮發(fā)油含量為80%以上。4、權(quán)利要求l的提取物，其特征在于，采用以下方法制備肉豆蔻活性成分的提取歩驟l、肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油；歩驟2、歩驟1所得肉豆蔻霜用乙醇冷浸提取，提取液減壓回收乙醇，含水提取物上HPD100型大孔樹脂；先后用90%乙醇與60%乙醇洗脫，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素，肉豆蔻總酚酸和肉豆蔻總木脂素為肉豆蔻活性成分；歩驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油；肉豆蔻總酚酸，肉豆蔻總木脂素和肉豆蔻揮發(fā)油為肉豆蔻活性成分；廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，乙醇提取，回收乙醇，所得水層調(diào)pH到酸性，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗活性成分，內(nèi)含廣棗總酚酸和廣棗總黃酮；檀香活性成分的提取取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油，檀香揮發(fā)油為檀香活性成分；肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。5、權(quán)利要求l的提取物，其特征在于，采用以下方法制備肉豆蔻活性成分的提取步驟l、取肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油；歩驟2、歩驟1所得霜用5倍量的70%乙醇提冷浸過夜，70%的乙醇提取液減壓回收乙醇，提取液蒸至無醇味；含水提取物加入適量水，上HPD100型大孔樹脂；然后先后用90%乙醇與60%乙醇沖洗，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素；步驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油；廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，加70%乙醇提取3次，回收乙醇，所得水層用1MHCl調(diào)pH,使PH<1，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗總酚酸和廣棗總黃酮；檀香活性成分的提取取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油；肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。6、含有權(quán)利要求1的提取物的藥物組合物。7、權(quán)利要求5的組合物，其特征在于，選自片劑，膠囊，顆粒，口服液，注射劑或混懸液。8、權(quán)利要求1的提取物的含量測定方法，其特征在于，其中利用HPLC法測定提取物中的原兒茶酸含量，利用GC-MS測定提取物中的檀香和肉豆蔻揮發(fā)油的含9、權(quán)利要求1的提取物在制備具有清熱解毒、抑菌消炎、解痙止痛、降壓減肥、抑癌防癌、提神醒腦、明目益思、止渴生津、去膩醒酒、健胃強身、護膚美容以及活血脈、抗衰老、降血脂、降膽固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循環(huán)、擴張血管、清除自由基、增強人體免疫力的藥物和食品中的應用。10、權(quán)利要求1的提取物的制備方法，其特征在于，采用以下方法制備肉豆蔻活性成分的提取步驟l、取肉豆蔻生藥材，用制霜機制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油；歩驟2、歩驟1所得霜用5倍量的70%乙醇提冷浸過夜，70%的乙醇提取液減壓回收乙醇，提取液蒸至無醇味；含水提取物加入適量水，上HPD100型大孔樹脂；然后先后用90%乙醇與60%乙醇沖洗，所得60%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總酚酸，所得90%乙醇沖洗液濃縮即為肉豆蔻總木脂素；歩驟3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得肉豆蔻揮發(fā)油；廣棗活性成分的提取取廣棗粉碎，加70%乙醇提取3次，回收乙醇，所得水層用1MHCl調(diào)pH，使pH<l，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，得廣棗總酚酸和廣棗總黃酮；檀香活性成分的提取取檀香粉碎，用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，得檀香揮發(fā)油；肉豆蔻，廣棗，檀香的三種活性成分混合后即為本發(fā)明的三位檀香藥物活性提取物。全文摘要本發(fā)明涉及三味檀香活性提取物及其提取方法和醫(yī)藥用途，本發(fā)明的提取物含有以下藥物活性成分，廣棗總黃酮、廣棗總酚酸、肉豆蔻總木脂素、肉豆蔻總酚酸、檀香揮發(fā)油和肉豆蔻揮發(fā)油。文檔編號A61K36/22GK101637484SQ20091016990公開日2010年2月3日申請日期2009年9月8日優(yōu)先權(quán)日2009年9月8日發(fā)明者蕾張,成徐,梅楊,格日力,王金輝,申旭霽,魏玉海申請人:青海大學