專利名稱：：一種抗炎藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，涉及一種抗炎藥物組合物，具體的說(shuō)是由幾種核苷生物堿成分組成的組合物，本發(fā)明還涉及由河蛘肉提耳又該種抗炎藥物組合物的方法。二
背景技術(shù)：
：河姅肉為蚱科動(dòng)物褶文冠蚱、三角帆蛘、圓背角無(wú)齒蛘等蛘類的軟體。味甘性咸寒，具滋陰、清熱、養(yǎng)肝、明目、清渴、涼血等功能，治療肝熱、腎衰、斑滲、痘毒、目赤、燙傷等癥。河碎肉含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分和多種礦物質(zhì)及^t量元素，對(duì)人體有保健功效。據(jù)分析研究，河蛘肉提取物中含有多種人體必需的氨基酸、微量元素和多糖類物質(zhì)。目前已有對(duì)河蛘肉進(jìn)行現(xiàn)代藥理學(xué)研究的報(bào)道，如增強(qiáng)免疫力、鎮(zhèn)痛、抗炎、保肝等，但此類研究對(duì)象為河蛘肉的整體濃縮物，因此很難闡述其有效物質(zhì)成分。隨著河蛘藥學(xué)研究的深入，已明確多糖提取物是河蚌肉的主要藥效成分，河蛘多糖具有調(diào)節(jié)免疫、降血壓、保肝、抗炎、鎮(zhèn)痛等多種功能。當(dāng)前，對(duì)于河蚌多糖的研究開(kāi)發(fā)較多，而針對(duì)河蛘其他成分的醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)較少，尤其未見(jiàn)對(duì)于河蚌嘌呤、嘧哽堿及核苷類小分子的藥用研究及開(kāi)發(fā)?？寡姿幨且淮箢愃幬锏慕y(tǒng)稱，種類繁多，一般可分為甾類抗炎藥和非甾體類抗炎藥。甾類抗炎藥是母核為甾體的藥物，作用機(jī)制為激素調(diào)節(jié)方式。非甾體抗炎藥大都具有解熱鎮(zhèn)痛抗炎和抗風(fēng)濕等共同的藥理作用，作用強(qiáng)度各異，而作用機(jī)制相似，以阿司匹林為代表，又稱為阿司匹林類藥物。噪呤類藥物如別噤呤醇、硫唑噪呤、和6-硫基嘌呤也屬于非甾體抗炎藥。嘧啶類抗炎藥物較多，效果也比較顯著，其中以磺胺嘧啶、比唑并嘧啶和嘧咬基二磷酸酯為代表。核苷是噤呤堿或嗜咬堿和核糖或脫氧核糖鏈接而成的化合物，是遺傳物質(zhì)DNA和RNA的前體物質(zhì)，生物體中含量豐富，核苷類物質(zhì)有無(wú)抗炎活性目前還未有文獻(xiàn)和專利的報(bào)道。三、
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的在于提供一種抗炎藥物組合物，同時(shí)提供由河蚱肉提取該種抗炎藥物組合物的方法。技術(shù)方案一種抗炎藥物組合物，包括按質(zhì)量份計(jì)的下述組分次黃嘌呤5-30份，黃噤呤5-15份，胸腺嘧啶20-40份，尿嘧啶10-15份，尿苷4-10份。優(yōu)選為次黃。票呤26份，黃噪呤12份，胸腺嘧咬28份，尿嘧啶12份，尿芬7份。制備上述抗炎藥物組合物的方法，該方法從中藥河蚱肉中提取分離，步驟為a.耳又河蛘肉藥材，用水或乙醇提取，提取上清液濃縮后得總提取物浸膏；b.總提取物浸膏溶于水中，先用極性弱的石油醚/乙酸乙酯混合溶劑萃取，殘留溶液再用正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取部位，干燥，得核苷生物堿提取部位，即為含量在50%以上的上述抗炎藥物組合物。為了探討河蚌抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找與該中藥功能主治相吻合的有效成分，發(fā)明人進(jìn)行了河蚱化學(xué)成分和抗炎藥理活性的研究。初步藥理篩選研究表明河蛘肉水提醇沉的上清液所得浸膏成分對(duì)二甲苯引起的小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用，同時(shí)明顯抑制小鼠棉球肉芽腫的形成，提示河蚌肉中含有抗炎活性的小分子化學(xué)成分。繼而對(duì)水提醇沉浸膏按成分極性萃取分離，經(jīng)過(guò)石油醚和乙酸乙酯分級(jí)萃取后，再進(jìn)行正丁醇萃取，可得正丁醇萃取部位，該正丁醇萃取部位即為河蛘核苦生物堿的提取部位。該有效分離部位對(duì)二曱苯引起的小鼠兒腫脹有明顯的抑制作用，同時(shí)明顯抑制小鼠棉球肉芽腫的形成，具有明顯的抗炎作用，按生藥計(jì)200g/kg劑量同0.18g/kg水楊酸的抗炎效果相當(dāng)。對(duì)核苷生物堿總部位進(jìn)行成分分離，得到5種主要成分，分別鑒定為黃嘌呤、次黃噪呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶和尿苷。本發(fā)明用5種核苷堿、核苷標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照，HPLC法對(duì)有該效提取部位進(jìn)行了含量測(cè)定。同時(shí)為了確證核苷生物堿就是該部位的抗炎活性物質(zhì)，本發(fā)明依據(jù)含量測(cè)定結(jié)果使用5種化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行復(fù)配制成了核苷生物堿組合物，在相同劑量下，組合物顯示了同核苷生物堿總提取部位相當(dāng)?shù)?甚至稍優(yōu))的抗炎效果，提示5種核苦堿成分即為河蚌肉有效提取部位的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。有益效果本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，提供了一種新型的抗炎藥物組合物的組方，該抗炎藥物組合物由幾種簡(jiǎn)單的核普生物堿成分組合而成，具有顯著的抗炎活性。本發(fā)明同時(shí)公開(kāi)了該藥物組合物的制備方法，除了可以化學(xué)物質(zhì)按比例配伍制成之夕卜，該藥物組合物也可從中藥河蚌肉中提取分離制得。本發(fā)明明確了河蚌抗炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，簡(jiǎn)化河蛘抗炎藥物的物質(zhì)組成，降低了服用劑量，提高藥效。4四圖1是河蛘總核苷生物堿提取物的高效液相圖譜，其中l(wèi)-尿嘧，定(6.4min),2-次黃噤呤(11.7min),3-黃噤呤(13.7min),4-尿苷(14.7min)，5-胸&泉嘧。定(16.4min)。五具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例為本發(fā)明的一些舉例，不應(yīng)視為是對(duì)本發(fā)明的限定。(一)河蛘核普生物堿部位的提取實(shí)施例1取河蚌肉洗凈，絞碎、加三倍量水煎煮提取3次，每次30min,合并收集煎煮液，減壓濃縮至總體積的1/9,加95%乙醇至醇體積百分含量為80°/。，6000rmp離心10min,棄去沉淀收集上清液，減壓濃縮揮去乙醇，得總浸膏部位。總浸膏用適量水溶解，所得溶液用等體積乙酸乙酯/石油醚混合溶劑萃取，剩余溶液再用等體積的正丁醇萃取，得正丁醇萃取液，回收正丁醇，得正丁醇部位浸膏，干燥，即得核苷生物堿總提取部位。實(shí)施例2取河蚌肉洗凈，絞碎、加三倍量水超聲提取3次，每次30min，合并收集煎煮液，減壓濃縮至總體積的1/9，加95%乙醇至醇體積百分含量為80%，6000rmp離心10min,棄去沉淀收集上清液，減壓濃縮揮去乙醇，得總浸膏部位，總浸膏用適量水溶解，所得溶液用等體積乙酸乙酯/石油醚混合溶劑萃取，剩余溶液再用等體積的正丁醇萃耳又，得正丁醇萃耳又液，回收正丁醇，得正丁醇部位浸膏，干燥，即得核苷生物堿總提取部位。實(shí)施例3取河蛘肉洗凈，絞碎、凍干后粉碎，粉末用80%乙醇回流提取，提取液離心取上清，揮去溶劑得醇提浸膏，浸膏用適量水溶解，得總浸膏部位，總浸膏用適量水溶解，所得溶液用等體積乙酸乙酯/石油醚混合溶劑萃取，剩余溶液再用等體積的正丁醇萃耳又，得正丁醇萃取液，回收正丁醇，得正丁醇部位浸膏，干燥，即得核苷生物堿總提取部位。(二)核普生物堿部位的組成分析實(shí)施例41.儀器和試劑Agilent1100液相色譜儀，美國(guó)Agilent/>司；BP211D型電子分析天平，德國(guó)Satrorius公司；雙蒸去離子水，實(shí)驗(yàn)室自制；黃嘌呤、尿嘧啶、尿苷、次黃嘌呤、胸腺嘧啶，購(gòu)自于美國(guó)Sigma公司，純度均大于99.9%。2.色譜條件色譜柱LichrospherC18柱(4.6x250mm,5)nm);流動(dòng)相水；流速lmLmin1;檢測(cè)波長(zhǎng):入254nm;柱溫30°C。3.標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品液的的配制分別稱取次黃噤呤、黃噤呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、尿苷適量，水溶解，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取不同季節(jié)(2-10月)采收的河蚌肉分別按實(shí)施例1水煎煮、實(shí)施例2水超聲和實(shí)施例3的80%醇提方法所制的核苷堿總部位適量，加雙蒸水溶解，離心，取上清液過(guò)O.45pm微孔濾膜，即得供試樣品液。4.總核苷生物堿部位的組成分析取所配制的次黃噪呤、黃噪呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、尿苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣11,進(jìn)行HPLC檢測(cè)，測(cè)定各自的保留時(shí)間。上述不同季節(jié)(2-10月)采收的河蚱肉分別按照實(shí)施例1、2、3所制得的總核苷生物堿提取部位同樣進(jìn)樣，總核香生物堿提取部位同樣進(jìn)樣，其色鐠圖和化合物次黃噤呤、黃嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、尿苷的峰位如圖l所示。用歸一法測(cè)定峰面積分值，測(cè)定各自的質(zhì)量百分含量，按實(shí)施例1-3方法所制核苷生物堿提取部位的核苷堿含量為64.4-84.5°/。，成分組成中含次黃噤呤5.0-30.0%、黃噤呤5.0-15.0%、胸腺嘧啶19.7-40.0%、尿嘧咬9.4-15.0%、尿苷4.0-10.2°/。，其結(jié)果如表1所示。表l河袢肉核苦生物堿提取物中各成分質(zhì)量百分含量采收季節(jié)丄曰TTrt、丄核香生物堿總提取物含量(％)提取萬(wàn)法總含量次黃噪呤黃嘌呤胸腺嘧啶尿嘧啶尿苷水煎煮78.026.812.720.111,27.22月份水超聲81.327.215.022.310.36.580%醇提71.024.310.119.710.86.1水煎煮82.130.08.423.415.05.34月份水超聲84.26.211.728.111.96.680%醇提75.022.58.729.710.14.0水煎煮71.75.95.040.010.710.110月份水超聲72.36.36.838.710.310.280%醇提64.45.07.933.39.48.8(三)核脊堿有效成分的化學(xué)品組合物精密稱量如下化學(xué)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品次黃噪呤260mg，黃噪呤120mg,胸腺嗜咬280mg，尿嘧咬120mg，尿苷70mg，混合均勻，得抗炎藥物組合物1。實(shí)施列6精密稱量如下化學(xué)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品次黃噤呤50mg,黃喋呤50tng,胸腺嘧啶2G0mg，尿嗜咬100mg,尿苦40mg，混合均勻，得抗炎藥物組合物2。實(shí)施列7精密稱量如下化學(xué)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品次黃噪呤3G0mg，黃噪呤150mg，胸腺嗜咬4G0mg,尿嗜咬150mg,尿苷100mg，混合均勻，得抗炎藥物組合物3。(四)抗炎藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)施例81.二曱苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)取實(shí)施例5、6和7所制備的抗炎藥物組合物1、2和3,加水溶解，配制成三組灌胃溶液，給藥劑量均為150mg/kg;取4月份采收按實(shí)施例2方法所制備的核苷生物堿有效提取部位若干，加水溶解，按主要成分含量配制成同組合物1劑量相當(dāng)?shù)墓辔溉芤?。取ICR(美國(guó)癌研所選育)雄性小鼠60只，體重20±2呂，隨機(jī)分為模型組，陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林組(180mg/kg),組合物l、2、3實(shí)驗(yàn)組，核苷生物堿提取物組，每組10只。給藥各組按劑量給藥，空白對(duì)照組組給予生理鹽水。連續(xù)給藥7天，每日1次，末次給藥1小時(shí)后于小鼠右耳涂抹二曱苯30pL,左耳不做任何處理。l小時(shí)后處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用0.7cm打孔器在同一部位打成圓耳片，電子天平即時(shí)稱重，以左、右耳片重量之差作腫脹度計(jì)算。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并計(jì)算抑腫率。結(jié)果如下表2:表2抗炎藥物對(duì)二曱苯致小鼠耳腫脹的影響組別劑量(mg/kg)左耳重(mg)右耳重(mg)肺脹度腫脹度抑制率(％)空白對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照組合物1組合物2組合物3提取物18015015015018010.04±0.579.61±0.679.94±0.629.68±0.429.66±0.369.81±0.8225.38±1.4617.54±1.7217.48±0.7018.45±2.1317.61±1.3819.27±0.9115.34±1.287.93±1.32**7.53±0.70**8.77±1.53**7.83±1.20**9.46±1.09*48.3350.8842.8248.92復(fù)93注同空白對(duì)照組比較，承表示p〈0.05,"表示p〈0.01由上表可得出，各組合物都具有明顯的抗炎活性，且抗炎效果和水楊酸相當(dāng)，組合物1的抗炎效果更為明顯。與核芬生物堿提取物的抗炎效果相比，組合物抗炎效果稍優(yōu)，組合物1在核苦生物堿含量相當(dāng)條件下比取物效甚至更優(yōu)，說(shuō)明核苷生物堿正是河蚱提取物中的抗炎活性成分。2.小鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)取實(shí)施例5、6和7所制備的抗炎藥物組合物1、2和3,加水溶解，配制成三組灌胃溶液，給藥劑量均為150mg/kg;取4月份采收按實(shí)施例2方法所制備的核苦生物堿有效提取部位若干，加水溶解，按主要成分含量配制成同組合物1劑量相當(dāng)?shù)墓辔溉芤骸ＨCR(美國(guó)癌研所選育)雄性小鼠60只，體重20±2g,隨機(jī)分為模型組，陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林組(180mg/kg),組合物低l、2、3實(shí)驗(yàn)組，核苷生物堿提取物組，每組10只。每只小鼠胸部剪一小口，用鑷子將10mg高溫滅菌棉球(青霉素浸泡、烘干)，從切口處植入左側(cè)腋下。自手術(shù)當(dāng)曰起，各給藥組按劑量給藥，模型組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天，末次給藥24小時(shí)后處死，打開(kāi)切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一同:f又出，剔除脂肪組織，在恒溫7(TC烘箱內(nèi)干燥12小時(shí)后，應(yīng)用分析天平稱重，將稱得的重量減去棉球的重量。即得肉芽月中重量。結(jié)果如下表3:表3抗炎藥物對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由上表3可知，河蚱提取物組具有明顯的抑制小鼠棉球肉芽腫效果，組合物1、2、3也具有明顯的抑制小鼠棉球肉芽腫活性。組合物l抗炎活性最強(qiáng)，與河蚱核苦生物堿提取物相比，抗炎效果相當(dāng)。本實(shí)驗(yàn)也同樣能夠說(shuō)明核苷生物堿正是河蛘提取物中的抗炎活性成分。權(quán)利要求1、一種抗炎藥物組合物，其特征在于包括按質(zhì)量份計(jì)的下述組分次黃嘌呤5-30份，黃嘌呤5-15份，胸腺嘧啶20-40份，尿嘧啶10-15份，尿苷4-10份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述抗炎藥物組合物，其特征在于包括按質(zhì)量份計(jì)的下述組分次黃噪呤26份，黃嘌呤12份，胸腺嘧啶28份，尿嘧啶12份，尿苷7份。3、制備權(quán)利要求1所述抗炎藥物組合物的方法，其特征在于從中藥河蛘肉中提取分離，步驟為a.取河蛘肉藥材，用水或乙醇提取，提取上清液濃縮后得總提取物浸膏；b.總提取物浸膏溶于水中，先用極性弱的石油醚/乙酸乙酯混合溶劑萃取，殘留溶液再用正丁醇萃取，濃縮正丁醇萃取部位，干燥，得核苷生物堿提取部位，即為含量不低于5(W的上述抗炎藥物組合物。全文摘要本發(fā)明涉及一種抗炎藥物組合物，包括按質(zhì)量份計(jì)的下述組分次黃嘌呤5-30份，黃嘌呤5-15份，胸腺嘧啶20-40份，尿嘧啶10-15份，尿苷4-10份，該抗炎藥物組合物具有明顯的抑制二甲苯致小鼠耳腫脹和小鼠棉球肉芽腫的活性，本發(fā)明同時(shí)提供從中藥河蚌肉中提取分離該抗炎藥物組合物的方法。文檔編號(hào)A61P29/00GK101596205SQ20091018175公開(kāi)日2009年12月9日申請(qǐng)日期2009年7月23日優(yōu)先權(quán)日2009年7月23日發(fā)明者皓吳,姚靜倩,狄留慶,王令充,燕金申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)