專利名稱：：培美曲塞硫脲鹽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及培美曲塞硫脲鹽及其制備方法。
背景技術(shù)：
：培美曲塞二鈉是禮來(lái)(EliLily)公司開(kāi)發(fā)的用于治療惡性胸膜間皮瘤和非小細(xì)胞肺癌的二線新藥，商品名為Alimta，結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>Alimta是一種抗葉酸代謝的抗腫瘤藥物，它通過(guò)干擾細(xì)胞復(fù)制過(guò)程中葉酸依賴性代謝過(guò)程而發(fā)揮作用。體外試驗(yàn)顯示，該藥物可以抑制胸苷酸合成酶、二氫葉酸還原酶、甘氨酸核糖核苷甲?；D(zhuǎn)移酶等葉酸依賴性酶。這些酶參與胸腺嘧啶核苷和嘌呤核苷的生物合成，當(dāng)其中一種或一種以上的酶被阻斷時(shí)，癌細(xì)胞就不能生長(zhǎng)繁殖。在當(dāng)前已被批準(zhǔn)的葉酸拮抗劑中，除Alimta外均不能實(shí)現(xiàn)以三種不同的酶作為耙，因此Alimta較其他葉酸拮抗劑作用時(shí)間長(zhǎng)。2004年2月5日，Alimta被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)正式批準(zhǔn)為與順鉑聯(lián)合用于治療不能手術(shù)的惡性胸膜間皮瘤的一線藥物。Alimta早先已被FDA指定為治療此適應(yīng)癥的罕見(jiàn)病用藥，它也是得到FDA批準(zhǔn)的第一種治療此癥的藥物。目前，培美曲塞的主要?jiǎng)┬蜑槎c鹽，美國(guó)專利US5344932公開(kāi)了培美曲塞及其藥用鹽化合物。US6013828公開(kāi)了制備培美曲塞二鈉鹽的方法。CN03138056.5公開(kāi)了使用培美曲塞或其鈉鹽與二價(jià)金屬離子的氧化物或氯化物反應(yīng)制備培美曲塞二價(jià)金屬離子鹽，培美曲塞與有機(jī)胺或無(wú)機(jī)氨反應(yīng)制備培美曲塞銨鹽化合物的方法，但使用的有機(jī)胺未提及硫脲。現(xiàn)有的作為臨床藥物的培美曲塞鹽存在穩(wěn)定性差、制備過(guò)程復(fù)雜、收率低等缺點(diǎn)，因此開(kāi)發(fā)新的穩(wěn)定性良好，制備工藝簡(jiǎn)單且臨床用藥效果好的培美曲塞鹽具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種培美曲塞硫脲鹽，其具有式(I)所示的結(jié)構(gòu)，化學(xué)名稱N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氫-4-氧代-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸'硫脲鹽。進(jìn)一步地，所述培美曲塞硫脲鹽含有010個(gè)結(jié)晶水分子；更優(yōu)選地，其含有16個(gè)結(jié)晶水分子。本發(fā)明另一目的在于提供制備培美曲塞硫脲鹽的方法，所述方法是以培美曲塞和硫脲為原料，在水、或有機(jī)溶劑、或水/有機(jī)溶劑混合液中進(jìn)行反應(yīng)，然后從該含有培美曲塞硫脲鹽的反應(yīng)溶液中分離得到培美曲塞硫脲鹽。進(jìn)一步地，所述有機(jī)溶劑可以為在反應(yīng)條件不影響原料和產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的任何一種有機(jī)溶劑。應(yīng)理解，只要能夠不使所述培美曲塞及其硫脲鹽在反應(yīng)過(guò)程中發(fā)生結(jié)構(gòu)變化且不影響反應(yīng)的任何有機(jī)溶劑都是可用的。更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為醇、醚、S旨，例如甲醇、乙醇或乙酸乙酯。進(jìn)一步地，原料培美曲塞和硫脲的摩爾比例為i:120，更優(yōu)選為i:5。進(jìn)一步地，步驟(3)所得的培美曲塞硫脲鹽為不含結(jié)晶水的培美曲塞硫脲鹽或含有110個(gè)結(jié)晶水的水合培美曲塞硫脲鹽。本發(fā)明的再一目的是提供一種藥物組合物，其含有有效量的培美曲塞硫脲鹽化合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。進(jìn)一步地，所述有效量為所述化合物占藥物組合物的0.01-99.99%;更進(jìn)一步地，所述有效量為所述化合物占藥物組合物的0.01-85%;更特別地，所述有效量為所述化合物占藥物組合物的0.1-60%。所述藥物組合物可以施用于個(gè)體，作為一種葉酸拮抗劑，或者作為治療性胸膜間皮瘤或非小細(xì)胞肺癌的藥物。通常，可將所述化合物或組合物配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中。配制好的藥物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括但并不限于肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下給藥。所述藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于生理鹽水、緩沖液、葡萄糖溶液、注射用水、氯化鈉、甘露醇、乙醇及其組合。本發(fā)明的藥物組合物可以制成針劑形式，其中包括但不限于無(wú)菌溶液型注射液，注射用無(wú)菌粉末。此外，也可制備成其他給藥途徑的藥物組合物。本發(fā)明的培美曲塞硫脲鹽是一種很好的水溶性培美曲塞胺鹽類化合物，與其他形式的培美曲塞相比，它具有穩(wěn)定性好，易于制備的優(yōu)點(diǎn)，為培美曲塞的劑型研究提供了新的選擇。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是作為對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1培美曲塞硫脲鹽的制備工藝1在100ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入去離子水25ml，硫脲鹽0.668g(8.78mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓蒸餾析出固體，加入甲醇，至大部分產(chǎn)物析出，過(guò)濾，真空干燥，得2.26g，收率76.4%。元素分析C:49.90(理論值49.79%)，H:5.49(理論值5.57%)，N:19.53(理論值19.36%)。紅外光譜(KBr壓片)特征吸收峰(cm—"及其歸屬3330(C-NH2，-NH，-OH)，3046(C6H4，苯環(huán)碳?xì)渖炜s振動(dòng))，2929(-CH2-)，2510(-NH3，)，1648(C=0)，1500，1392(C6H4，苯環(huán)骨架振動(dòng))。力核磁共振圖譜(DMSO-de)，化學(xué)位移S(ppm)及質(zhì)子數(shù)的歸屬8.03(s，br，1H，Ph-CO-NH)，7.90(d，2H，C6H4)，7.32(d，2H，C6H4)，6.26(s，1H，CH)，6.05(s，2H，NH2)，4.45(m，1H，CH)，2.82(t，2H，CH2)，2.76(t，2H，CH2)，2.40(m，2H，CH2)，2.21(t，2H，CH2)。實(shí)施例2培美曲塞硫脲鹽的制備工藝2在100ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入無(wú)水甲醇60ml，攪拌溶解，加入硫脲0.445g(5.85mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)0.5小時(shí)，過(guò)濾，用甲醇和水洗滌，真空干燥，得1.64g，收率55.3%。實(shí)施例3培美曲塞硫脲鹽的制備工藝3在100ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入無(wú)水乙醇60ml，攪拌溶解，加入硫脲2.23g(29.27mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，過(guò)濾，用乙醇和水洗滌，真空干燥，得1.90g，收率64.2%。實(shí)施例4培美曲塞硫脲鹽的制備工藝4在250ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入乙酸乙酯100ml，攪拌，加入硫脲0.668g(8.78mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，過(guò)濾，用乙醇洗滌，真空干燥，得1.37g，收率46.3%。實(shí)施例5培美曲塞硫脲鹽的制備工藝5在100ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入去離子水25ml、甲醇25ml，攪拌，加入硫脲8.9g(117mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓蒸餾析出固體。加入甲醇，至大部分產(chǎn)物析出，過(guò)濾，真空干燥，得4.74g，收率80.2%。實(shí)施例6培美曲塞硫脲鹽的制備工藝6在100ml反應(yīng)瓶中，投入培美曲塞2.50g(5.85mmo1)，加入去離子水25ml、乙醇25ml，加入硫脲0.668g(8.78mmo1)，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)5小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓蒸餾析出固體。加入乙醇，至產(chǎn)物析出，過(guò)濾，真空干燥，得2.34g，收率78.9%。實(shí)施例7含有培美曲塞硫脲鹽的藥物組合物—種注射用的培美曲塞硫脲鹽的藥物組合物，具體配方見(jiàn)表l。表1物料名稱物料量培美曲塞硫脲鹽5()0mg氯化鈉50mg水5m將上述物料量的培美曲塞硫脲鹽和氯化鈉溶解于5ml注射用水中，注入棕色安瓿瓶中充氮密封。實(shí)施例8含有培美曲塞硫脲鹽的藥物組合物—種注射用的培美曲塞硫脲鹽的藥物組合物，具體配方見(jiàn)表2。表2物料名稱^^^^^^培美曲塞硫脲鹽SO()mg甘露醇50nig水5ml將上述物料量的培美曲塞硫脲鹽和甘露醇溶解于5ml注射用水中置于西林瓶?jī)?nèi)，于-e(TC預(yù)凍4小時(shí)后抽真空干燥至水份在35%后充氮密封。實(shí)施例9培美曲塞硫脲鹽的藥理活性試驗(yàn)1)細(xì)胞培養(yǎng)將A549細(xì)胞系在含10X胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。待細(xì)胞長(zhǎng)至80%融合時(shí)，用等體積的0.25X胰蛋白酶和依地酸二鈉(EDTANa2)消化細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液備用。2)培美曲塞硫脲鹽對(duì)肺癌細(xì)胞增殖活性的影響肺癌細(xì)胞與牛血清白蛋白(BSA)共同孵育24h后，細(xì)胞活性與正常對(duì)照組相近。而與纖連蛋白(FN)蛋白共培養(yǎng)后，其增殖活性明顯增強(qiáng)，與正常對(duì)照組相比差異非常顯著(P<0.01)。加入不同濃度培美曲塞硫脲鹽干預(yù)24h后可見(jiàn)，40nmol/L和80nmol/L兩個(gè)高濃度組的細(xì)胞活性明顯低于FN組(P<0.01)，但20nmol/L低濃度組未能表現(xiàn)出類似的抑制效應(yīng)。相反在BSA對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，所有濃度的培美曲塞硫脲鹽干預(yù)的BSA組活性明顯低于FN組(P<0.01)，見(jiàn)表3。表3培美曲塞硫脲鹽對(duì)肺癌增殖活性影響(n=12，x±s)組』FN預(yù)處理BSA預(yù)處理丄C1fp力JnU1.130土0.0201,123上0.031FN預(yù)處理6.857±0.0172BSA預(yù)處理-1,286±0,019<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>a.預(yù)處理組與正常對(duì)照組比較，P<0.01;b.培美曲塞硫脲鹽個(gè)劑量組與預(yù)處理組比較，P<0.01;c.BSA預(yù)處理組與FN預(yù)處理組比較，P<0.01。3)對(duì)肺癌細(xì)胞黏附作用的影響從倒置顯微鏡下可以觀察到，肺癌細(xì)胞對(duì)FN板有較強(qiáng)的黏附性。最早在10min時(shí)便有細(xì)胞粘壁，并隨時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞附壁并伸展的數(shù)量逐漸增多。與相同時(shí)間點(diǎn)的FN組相比，經(jīng)培美曲塞硫脲鹽預(yù)處理的癌細(xì)胞，其粘壁數(shù)量明顯減少(P<0.01)，并且時(shí)間顯著推遲。此外，培美曲塞硫脲鹽的劑量對(duì)細(xì)胞粘附作用的大小呈正相關(guān)(以12h為例，r=0.8557)，即劑量愈高，抑制效果愈顯著。見(jiàn)表4。表4培美曲塞硫脲鹽對(duì)肺癌細(xì)胞黏附作用影響(n=12，x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>〔)8土1352士94)對(duì)肺癌細(xì)胞遷移能力的影響基于黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取8h作為考察點(diǎn)。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，F(xiàn)N組穿膜細(xì)胞數(shù)為(125士16)個(gè)，顯著高于BSA組的(45士7)個(gè)(P〈0.01)。同樣使用含F(xiàn)N的Matrigel，在20、40和80nmol/L濃度培美曲塞硫脲鹽預(yù)處理組，肺癌細(xì)胞穿膜數(shù)分別為(58±5)個(gè)、(46±3)個(gè)、(17±4)個(gè)，均明顯低于FN組，有著顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。并且這種對(duì)遷移運(yùn)動(dòng)的阻斷作用與濃度成正相關(guān)(r=0.852)，劑量越大則作用越強(qiáng)。實(shí)施例10培美曲塞硫脲鹽的穩(wěn)定性試驗(yàn)1)制備樣品根據(jù)培美曲塞硫脲鹽易溶于水的性質(zhì)，制備培美曲塞硫脲鹽水針劑(處方l，見(jiàn)實(shí)施例7);參照國(guó)外已上市的培美曲塞二鈉鹽劑型，制備培美曲塞硫脲鹽凍干粉針(處方2，見(jiàn)實(shí)施例8);同樣參照國(guó)外已上市的培美曲塞二鈉鹽的處方，制備培美曲塞二鈉鹽凍干粉針(處方3，作為對(duì)照)。具體制劑組分及影響因素的考察結(jié)果見(jiàn)表5:表5培美曲塞鹽制劑樣品及成分組成成分處方1處方2處方3培美曲塞硫脲鹽(g)500500一7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>取處方l、處方2、處方3按市售包裝，置于恒溫4(TC±2°C，相對(duì)濕度75%±5%條件下，放置6個(gè)月，并于第0、1、2、3、6個(gè)月取樣分析，結(jié)果見(jiàn)表7。表7注射用培美曲塞硫脲鹽加速試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)論采用本發(fā)明所制備的培美曲塞硫脲鹽注射液樣品(處方l)、培美曲塞硫脲鹽凍干粉針樣品(處方2)在相同條件下進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果顯示本發(fā)明的培美曲塞硫脲鹽熱穩(wěn)定性與國(guó)外上市的處方3樣品一致，注射液雜質(zhì)均無(wú)明顯變化，可見(jiàn)本發(fā)明的培美曲塞硫脲鹽具有良好的穩(wěn)定性。權(quán)利要求培美曲塞硫脲鹽，其特征在于，具有式(1)所示的結(jié)構(gòu)，2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培美曲塞硫脲鹽，其特征在于，含有010個(gè)結(jié)晶水分子。3.—種制備如權(quán)利要求1或2所述的培美曲塞硫脲鹽的方法，其特征在于，所述方法是以培美曲塞和硫脲為原料，在水、或有機(jī)溶劑、或水/有機(jī)溶劑混合液中進(jìn)行反應(yīng)，然后從該含有培美曲塞硫脲鹽的反應(yīng)溶液中分離得到培美曲塞硫脲鹽。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇或乙酸乙酯。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，培美曲塞和硫脲鹽的摩爾比例為i:i20。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，培美曲塞和硫脲鹽的摩爾比例為1!5。7.—種藥物組合物，其特征在于，含有有效量的權(quán)利要求1或2的培美曲塞硫脲鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了培美曲塞硫脲鹽及其制備方法，以及含有培美曲塞硫脲鹽的藥物組合物。培美曲塞硫脲鹽是由培美曲塞與硫脲在水和/或有機(jī)溶劑中反應(yīng)生成，制備工藝簡(jiǎn)單，收率高，穩(wěn)定性好。文檔編號(hào)A61P35/00GK101691371SQ20091019009公開(kāi)日2010年4月7日申請(qǐng)日期2009年9月16日優(yōu)先權(quán)日2009年9月16日發(fā)明者劉碧秀,吳筱昆,唐田,朱丹,李勇,王彥青,陳萍,黃傳貴申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司