專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種抗病毒提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種抗病毒提取物及其制備方法，具體涉及一種經(jīng)典中藥復(fù)方"翹荷湯"的提取物及其制備方法，以及該提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：流行性感冒病毒，簡(jiǎn)稱(chēng)流感病毒，是一種造成人類(lèi)及動(dòng)物患流行性感冒的RNA病毒，在分類(lèi)學(xué)上，流感病毒屬于正黏液病毒科，它會(huì)造成急性上呼吸道感染，并借由空氣迅速的傳播，在世界各地常會(huì)有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力較弱的老人或小孩及一些免疫失調(diào)的病人會(huì)弓I起較嚴(yán)重的癥狀，如肺炎或是心肺衰竭等。中醫(yī)藥治療流感具備顯著優(yōu)勢(shì)，從傳統(tǒng)方劑的現(xiàn)代藥理廣泛篩選中，翹荷湯具備顯著的抗流感效果。翹荷湯來(lái)源于《溫病條辨》(清代著名溫病四大名家"之一的吳鞠通所著著)巻一。主要組分為薄荷4.5克、連翹4.5克、生甘草3克、黑梔皮4.5克、桔梗9克、綠豆皮6克；主要功用為清上宣肺。主治燥氣化火、清竅不利、耳鳴目赤、齦脹咽痛。傳統(tǒng)上主要治療當(dāng)以輕清宣透清解上焦燥熱為主。是主要治療咽炎類(lèi)為主的方劑?！端拇ㄖ嗅t(yī)》2002，20(12):46發(fā)表了《翹荷湯治療小兒外感高熱154例》秦亮著，文獻(xiàn)中表明翹荷梔豉湯治療小兒外感發(fā)熱154例，總有效率達(dá)94.8%，療效滿(mǎn)意?？梢?jiàn)該方劑對(duì)治療外感發(fā)熱有明顯的效果。傳統(tǒng)上，該方劑的制備工藝及服用方法"上藥以水400毫升，煮取200毫升，頓服之。日服二劑，甚者日三服"。可見(jiàn)，傳統(tǒng)上其工藝粗糙，且服用、攜帶不方便，服用量大，也不適宜加工成其他劑型。復(fù)方中薄荷主要為薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等為主的萜類(lèi)成分；連翹中主要含連翹苷等為主的揮發(fā)油成分；甘草主要含甘草黃酮及甘草皂苷類(lèi)成分；桔梗也主要含桔梗皂苷類(lèi)成分；原復(fù)方制備工藝通過(guò)直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷類(lèi)等，而對(duì)脂溶性成分難以提出來(lái)，使薄荷及連翹等大部分有效成分的揮發(fā)性成分損失。因此，傳統(tǒng)工藝對(duì)有效成分的保留很不合理，有必要進(jìn)行深入研究，對(duì)其工藝進(jìn)行革新。有關(guān)該方劑的現(xiàn)代制備及相關(guān)工藝研究均為空白，在臨床應(yīng)用中，《四川中醫(yī)》2002，20(12):46發(fā)表的《翹荷湯治療小兒外感高熱154例》中，一方面作者對(duì)古方"翹荷湯"做了適當(dāng)調(diào)整，如增加了大黃，同時(shí)，也均是傳統(tǒng)水提方法，因此，對(duì)于該方劑的新的制備工藝等研究均是空白，限制了該方劑的擴(kuò)大應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種抗病毒提取物。本發(fā)明的進(jìn)一步目的在于提供該抗病毒提取物的制備方法。解決直接水提方法的揮發(fā)性有效成分損失大的問(wèn)題，有效地富集了各藥材的主要成分。3本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供該提取物在制備預(yù)防和/或治療痔流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準(zhǔn)備藥材；通過(guò)超臨界制備工藝富集總黃酮、總皂苷、總萜類(lèi)成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比總黃酮含量大于6%，皂苷含量大于15%，連翹苷含量大于0.3%，總揮發(fā)油含量大于2%。上述抗病毒提取物的制備方法，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準(zhǔn)備藥材；并包括下述方法步驟1)藥材烘干，干燥溫度為50°C±l(TC，干燥時(shí)間34h;2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進(jìn)超臨界萃取罐中，加入夾帶劑，萃取條件一級(jí)減壓分離壓力為510Mpa，溫度為4060°C，流量1520L/h的條件下進(jìn)行萃取34h;二級(jí)減壓分離壓力為510Mpa，溫度為3550°C;4)提取物進(jìn)行脫水，干燥。即得"翹荷湯"提取物。進(jìn)一步的，所述的步驟2)中粗粉粉碎粒度在60200目之間。更進(jìn)一步的，所述的夾帶劑選自甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑；夾帶劑與粗粉質(zhì)量比為250:100。試驗(yàn)實(shí)施例l是各提取物的主成分含量分析，表明本發(fā)明所述的提取物，是指采用超臨界制備方法，按傳統(tǒng)藥物復(fù)方組成比例進(jìn)行制備而成，以黃酮類(lèi)、皂苷、萜類(lèi)成分為主要組分的提取物。本發(fā)明的原理是，復(fù)方中薄荷主要為薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等為主的萜類(lèi)成分；連翹中主要含連翹苷等為主的揮發(fā)油成分；甘草主要含甘草黃酮及甘草皂苷類(lèi)成分；桔梗也主要含桔梗皂苷類(lèi)成分；原復(fù)方制備工藝通過(guò)直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷類(lèi)等，而對(duì)脂溶性成分難以提出來(lái)，使薄荷及連翹等大部分有效成分的揮發(fā)性成分損失。因此，本發(fā)明通過(guò)超臨界制備工藝，有效地富集了各藥材的主要成分，體現(xiàn)了該復(fù)方的綜合物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)，提取物很容易加成工各種劑型，同時(shí)使其實(shí)用性大大提高，改變了原方劑直接水提的單一用藥的限制，擴(kuò)大了其使用范圍。試驗(yàn)實(shí)施例2是提取物的抗炎實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)超臨界所制備的提取物，和原水提方劑進(jìn)行比較，對(duì)抗炎、鎮(zhèn)痛效果，均優(yōu)于原方劑，表明提取物具有顯著的抗炎作用。實(shí)施例3是提取物的抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究，表明提取物均有顯著抑制肺病變程度，顯示均有較好的抗流感病毒效果。擴(kuò)大了原方劑的治療作用。根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)目的，本發(fā)明所述的提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒中藥物的應(yīng)用，包括上述藥物的組合物均可以進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。例如，一種藥物組合物可以是總黃酮提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成；還可以是將總黃酮提取物、其它中藥提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成。上述藥物組合物可進(jìn)一步按照常規(guī)制劑方法配制成可供給藥的形式，包括經(jīng)口或胃腸外給藥形式。在可供給藥的形式中，應(yīng)包含治療有效量的預(yù)防及治療流感病毒提取物。所謂"治療有效量"是指在該劑量下，本發(fā)明的提取物能夠改善或減輕疾病癥狀，或能夠抑制或阻斷疾病的發(fā)展?？晒┙o藥的組合物可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、貼劑、凝膠劑、粉劑或液體制劑(如口服或無(wú)菌胃腸外溶液或懸浮液)。這些可供給藥的組合物還可以根據(jù)需要制備成緩控釋制劑或靶向制劑?？诜o藥的形式可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑等，它們可以含有常規(guī)賦形劑如粘合劑像糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；崩解劑如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、羥乙酸淀粉鈉或微晶纖維素或藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑如十二烷基硫酸鈉。液體組合物(如口服液體組合物)可以制備為乳液、糖漿劑或酏劑形式，或者將它們制備為干燥產(chǎn)物形式，在使用前，用水或其它適當(dāng)?shù)娜苊饺芙?。此?lèi)液體制劑可以含有常規(guī)的添加劑，如懸浮劑像山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠、氫化可食用脂肪；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分餾椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常規(guī)的矯味劑或著色劑。胃腸外組合物(如胃腸外給藥組合物)可以含有所述活性化合物和無(wú)菌溶媒，根據(jù)使用的濃度，所述活性化合物可以懸浮于或溶解于該溶媒中。制備胃腸外給藥的溶液時(shí)，可以將本發(fā)明的組合物溶于注射用水中，過(guò)濾除菌，然后灌裝于適當(dāng)?shù)墓苤破炕虬碴持胁⒚芊狻Ｗ詈脤⑤o助劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑溶解于所述溶媒中。為增加穩(wěn)定性，可以將該組合物灌裝于管制瓶中后冷凍并真空去除水分。以基本相同的方法可以制備胃腸外懸浮液，但是所述活性化合物是懸浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通過(guò)過(guò)濾進(jìn)行?？梢詫⑺龌衔锿ㄟ^(guò)暴露于環(huán)氧乙烷中滅菌，然后將其懸浮于無(wú)菌溶媒中。最好該組合物中含有表面活性劑或潤(rùn)濕劑以有助于活性組分的均勻分布。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過(guò)超臨界制備工藝，能有效地富集總黃酮、總皂苷、總萜類(lèi)成分。體現(xiàn)了原復(fù)方的綜合物質(zhì)基礎(chǔ)。主要有效成分顯著高于古方傳統(tǒng)工藝所制備所得的成分，該總黃酮提取物具有明顯的抗流感病毒的作用，其提取物與原湯劑相比，抗炎、抗流感病毒作用更顯著。同時(shí)，提取物很容易加成工各種劑型，可直接應(yīng)用于抗流感病毒藥物的開(kāi)發(fā)。其實(shí)用性大大提高，改變了原方劑直接水提的單一用藥的限制，擴(kuò)大了其使用范圍。具有制備工藝簡(jiǎn)單、提取率高、成本低等特點(diǎn)。以下將結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行較為詳細(xì)的說(shuō)明。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l"翹荷湯"提取物的制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，在溫度為5(TC干燥3h;粉碎藥材，粒度在200目之間。再加入5夾帶劑甲醇0.6公斤，超臨界二氧化碳萃取的分離罐中進(jìn)行萃取，萃取條件一級(jí)減壓分離壓力為5Mpa，溫度為4(TC，流量為1520L/h，萃取34h;二級(jí)減壓分離壓力為5Mpa，溫度為35t:。收集提取物所得為樣品l。該工藝技術(shù)突出優(yōu)點(diǎn)是(l)提取效率高；(2)有效地富集了主要活性成分，特別是對(duì)于萜類(lèi)成分等，得到有效地富集，而原湯劑在直接煎煮基礎(chǔ)上，基本損失了大量的該類(lèi)成分，使主藥連翹，薄荷的應(yīng)用效果，受到限制，且提取物體積小，提高了中藥的內(nèi)在質(zhì)量；(3)充分祛除了其多糖類(lèi)等雜質(zhì)等；(4)減少了產(chǎn)品的吸潮性；(5)去除了大量的無(wú)機(jī)鹽、粘液質(zhì)等，從而增強(qiáng)了產(chǎn)品的穩(wěn)定性；(6)容易制備成外觀(guān)美觀(guān)的各種劑型；(7)工藝成本低。實(shí)施例2"翹荷湯"提取物的制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，在溫度為6(TC干燥3h;藥材粉碎，粒度在60目之間。將干粉放置于提取罐中，加入夾帶劑乙醇15公斤，超臨界二氧化碳萃取的分離罐中進(jìn)行一級(jí)減壓分離壓力為10Mpa，溫度為60°C;二級(jí)減壓分離壓力為10Mpa，溫度為50°C。收集提取物所得為樣品2實(shí)施例3"翹荷湯"按古方記載的傳統(tǒng)方法制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，按傳統(tǒng)制備方法加水，加熱回流提取2次，提取液濃縮成干燥浸膏，作為樣品3。供樣品1，2比較使用。實(shí)施例4片劑(膠囊)劑制備將本發(fā)明制備實(shí)施例中樣品1或樣品2加入淀粉、微結(jié)晶纖維素，乳糖，糊精等輔料的一種或幾種混合物，混勻，制粒，壓片(填膠囊)，即為片劑或膠囊劑。作為治療及預(yù)防流行性感冒藥物。試驗(yàn)實(shí)施例1各提取物的主成分含量分析下列質(zhì)量分析中所用樣品包括按實(shí)施例1的方法制備的樣品1，按實(shí)施例2的方法制備的樣品2，按實(shí)施例3的方法制備的樣品3。各樣品均低溫干燥至提取物，按生藥比折算計(jì)算含量。測(cè)定方法總黃酮以甘草苷為對(duì)照品，紫外分光光度法測(cè)定；揮發(fā)油含量按中國(guó)藥典所規(guī)定的揮發(fā)油測(cè)定方法；皂苷是按中國(guó)藥典中桔梗皂苷的測(cè)定方法，連翹苷是以中國(guó)藥典連翹藥材的高效液相分析方法測(cè)定的。結(jié)果見(jiàn)表1。表1.各樣品的含量測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>可見(jiàn)，樣品l，2中各成分均高于樣品3，有效地富集了各成分的含量。由此可見(jiàn)，與傳統(tǒng)制備工藝比較，該抗病毒提取物，主要有效成分顯著高于古方傳統(tǒng)工藝所制備所得的成分，其成分特征重量比為總黃酮含量大于6%，；皂苷含量大于15%，連翹苷含量大于0.3%，總揮發(fā)油含量大于2%。試驗(yàn)實(shí)施例2提取物的抗炎實(shí)驗(yàn)研究昆明小鼠50只，分為模型組、消炎痛(吲哚美辛)、樣品l、樣品2、樣品3共五組。每組動(dòng)物各10只，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥后于小鼠右耳涂布二甲苯0.02ml/只致炎。間隔3h后頸椎脫臼法處死小鼠，沿耳廓基線(xiàn)剪下雙耳，用直徑8mm打孔器在兩耳同一部位打下耳片并稱(chēng)重。結(jié)果見(jiàn)表2。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、樣品l，2，3對(duì)小鼠耳腫脹度與陰性對(duì)照組有極顯著差異(p〈0.01);說(shuō)明各樣品顯著的抗炎作用，同時(shí)，樣品l和2抗炎效果均強(qiáng)于樣口Q口口do表2.對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(x士s，n=10)組別劑量(g/kg)腫脹度(mg)模型組-8.05±2.12消炎通2.測(cè)03.45±1，60***樣品l0,453.46±1,70***樣品20.454,62±1.12**樣品30.905.08±1.04*與模型組相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001實(shí)施例3提取物的抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究采用A3型流感病毒液(H3N2)感染小鼠為模型，觀(guān)察三種樣品及陽(yáng)性對(duì)照藥(病毒唑)對(duì)感染小鼠肺指數(shù)、肺病變程度的影響，結(jié)果見(jiàn)表3，表明三個(gè)樣品均有顯著抑制肺病變程度，顯示該方劑的三個(gè)樣品均有較好的抗流感病毒效果。表3.對(duì)流感病毒的作用(x±s，n=10)組別劑量(mg/kg)腫脹度(mg)模型組1.35士0.12病毒唑組801.能±1.60**凈羊？JJ160L05±1.70**才羊品2601.02±1.12**樣品360L38±1,04*與模型組相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。權(quán)利要求一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準(zhǔn)備藥材；通過(guò)超臨界制備工藝富集總黃酮、總皂苷、總萜類(lèi)成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比總黃酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，連翹苷含量大于0.3％，總揮發(fā)油含量大于2％。2.權(quán)利要求1所述的提取物的制備方法，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準(zhǔn)備藥材；并包括下述方法步驟1)藥材烘干，干燥溫度為50°C±10°C，干燥時(shí)間34h;2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進(jìn)超臨界萃取罐中，加入夾帶劑，萃取條件一級(jí)減壓分離壓力為510Mpa，溫度為4060。C，流量1520L/h的條件下進(jìn)行萃取34h;二級(jí)減壓分離壓力為510Mpa，溫度為3550°C;4)提取物進(jìn)行脫水，干燥。3.如權(quán)利要求2所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中粗粉粉碎粒度在60200目之間。4.如權(quán)利要求2所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的夾帶劑選自甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑；夾帶劑與粗粉質(zhì)量比為250:100。5.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。6.權(quán)利要求1所述的提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準(zhǔn)備藥材；通過(guò)下述方法步驟制備得到1)藥材烘干，干燥溫度為50℃±10℃，干燥時(shí)間3～4h；2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進(jìn)超臨界萃取罐中，加入夾帶劑乙醇或甲醇，萃取條件一級(jí)減壓分離壓力為5～10Mpa，溫度為40～60℃，流量15～20L/h的條件下進(jìn)行萃取3～4h；二級(jí)減壓分離壓力為5～10Mpa，溫度為35～50℃；4)提取物進(jìn)行脫水，干燥。通過(guò)該超臨界制備工藝，能有效地富集總黃酮、總皂苷、總萜類(lèi)成分。該抗病毒提取物，其成分特征重量比總黃酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，連翹苷含量大于0.3％，總揮發(fā)油含量大于2％。具有抗炎、抗流感病毒作用更顯著，制備工藝簡(jiǎn)單，提取率高，成本低等特點(diǎn)。文檔編號(hào)A61P31/16GK101690755SQ20091019022公開(kāi)日2010年4月7日申請(qǐng)日期2009年9月25日優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日發(fā)明者嚴(yán)啟新,李勇,李姿,高媛申請(qǐng)人:深圳海王藥業(yè)有限公司