專利名稱：：石參在制備治療Ⅱ型糖尿病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及石參的第二藥物用途。
背景技術(shù)：
：蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.是多年生直立亞灌木植物，常野生于山坡、灌木叢邊和路邊草叢，主要分布于廣東、廣西、海南、福建、臺(tái)灣，花序形狀似貓尾巴。長穗貓尾射富含黃酮苷，具有較高的藥膳價(jià)值，可全草入藥，主用根部，在中藥領(lǐng)域稱為石參，性味甘、淡，微寒，歸肺、胃經(jīng)，有清熱化痰，涼血止血、清熱解毒、滲濕的功效，對(duì)咳嗽、月市痛、吐血、咳血、尿血、脫肛、子宮下垂、月中毒、胃炎及十二指腸潰瘍均有一定療效。尚未有研究顯示石參有治療糖尿病的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供石參在制藥中的新用途。石參的新用途是在制備治療II型糖尿病藥物中的應(yīng)用，所述石參為蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的全草或根。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)石參具有降低血糖和血脂水平的作用，對(duì)糖尿病尤其是早期II型糖尿病和葡萄糖耐量異常有很好的療效，可用于制備治療II型糖尿病的藥物。為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的用途，本發(fā)明還提供以下幾種具有治療II型糖尿病作用的石參提取物石參水提物，用水煎煮或回流提取石參藥材得到。所述石參水提物的具體制備方法如下取干燥石參，加8體積倍水煎2小時(shí)，取上清，過濾，濾液在6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)；或者，用8體積倍的水回流提取2次，每次1.5小時(shí)，取濾液在6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。石參乙酸乙酯提取物，用乙酸乙酯回流提取石參藥材得到。所述石參乙酸乙酯提取物的具體制備方法如下取干燥石參，用6體積倍的乙酸乙酯回流提取2次，每次2小時(shí)；濾過，減壓回收乙酸乙酯后，在7(TC下真空干燥。石參醇提物，用90%乙醇回流提取石參藥材得到。所述石參醇提物的具體制備方法如下取干燥石參，用6體積倍的90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)；濾過，減壓回收乙醇后，在7(TC下真空干燥。石參混合提取物，依次用乙酸乙酯、90%乙醇和水回流提取石參藥材得到。所述石參混合提取物的具體制備方法如下(1)取干燥石參，用乙酸乙酯回流提取2次，每次2小時(shí)，分取濾渣和濾液；取濾液減壓回收乙酸乙酯，得稠膏；(2)步驟(1)所得濾渣用90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，分取濾渣和濾液；取濾液減壓回收乙醇，得稠膏；(3)步驟(2)所得濾渣用8體積倍的水回流提取2次，每次1.5小時(shí)，取濾液6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得稠膏；(4)將各步驟所得稠膏在7(TC下真空干燥后合并。本發(fā)明所述治療II型糖尿病的藥物由上述四種石參提取物中的一種和藥學(xué)上可接受的輔料組成，具體劑型可以是各種常規(guī)口服制劑，如，片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸劑、口服液等。為了更好地理解本發(fā)明，下面將通過藥效試驗(yàn)進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)效果。1、實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出生5-6周的C57BL/6J小鼠，體重1622g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；(2)實(shí)驗(yàn)材料市售石參，按《中國常用中草藥》和《中國常用中草藥彩色圖譜》對(duì)照鑒定為豆科植物貓尾草屬貓尾草的干燥根；鏈尿佐菌素(STZ)粉末齊U，美國SIGMA-ALDRICH公司，規(guī)格lg/瓶，生產(chǎn)批號(hào)87K1403,-20。C保存。二甲雙胍，美國SIGMA-ALDRICH公司，規(guī)格5g/瓶，生產(chǎn)批號(hào)S43023-078，_20°C保存。2、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果(1)II型糖尿病動(dòng)物模型的構(gòu)建用高脂飼料喂飼C57BL/6J小鼠2周后加鏈脲佐菌素(Str印tozotozin，STZ)100mg/kg誘發(fā)II型糖尿病。(2)石參藥材的處理A.取500g干燥石參藥材，用4L水煎2小時(shí)(加蓋)，取上清，IOO目過濾，得3L煎液，6(TC負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至75ml，得石參水煎液，5t:保存。B.取藥材300g，加6倍量的乙酸乙酯，回流提取2次，每次2h，濾過，藥渣保留。濾液減壓回收乙酸乙酯成稠膏狀，7(TC真空干燥，得到乙酸乙酯提取物。加蒸餾水至25ml，制成乙酸乙酯提取物混懸液。藥渣揮去乙酸乙酯后，加6倍量的90%乙醇，回流提取2次，每次2h，濾過，，藥渣保留。濾液減壓回收乙醇成稠膏狀，7(TC真空干燥，得到乙醇提取物。加蒸餾水溶解至65ml，得到乙醇提取液。藥渣揮去乙醇后，加8倍量的水，回流提取煮2次，每次1.5h，，濾過，藥渣棄去。濾液濃縮至稠膏狀，7(TC真空干燥，得到水提取物。加蒸餾水溶解至85ml，得水提取液。(3)糖耐量實(shí)驗(yàn)①石參水煎液對(duì)II型糖尿病小鼠糖耐量的影響取11型糖尿病小鼠46只，隨機(jī)分為5組，按以下分組情況處理高劑量組10只，按18g生藥/kg體重給予石參水煎液，(每天灌胃給藥l次)；中劑量組9只，按9g生藥/kg體重給予石參水煎液；(每天灌胃給藥1次)；低劑量組9只，按3g生藥/kg體重給予石參水煎液；(每天灌胃給藥1次)；低劑量+二甲雙胍組8只，按200mg/Kg體重和3g生藥/kg體重給予二甲雙胍和石參水煎液；(每天灌胃給藥1次)；陽性對(duì)照組10只，按500mg/Kg體重給予二甲雙胍，(每天灌胃給藥1次)。連續(xù)給藥處理14天后，第15天，按0.lml/10g體重灌胃20%葡萄糖，尾靜脈采血分別測定30min，60min和120min血糖。另取10只C57BL/6J小鼠，不給予任何藥物處理，作為陰性對(duì)照。結(jié)果如表1所示，陰性對(duì)照組中的模型小鼠血糖水平在給予葡萄糖后30min血糖水平達(dá)到高峰，盡管此后血糖水平開始下降，但是120min后血糖水平仍然很高。石參水煎液高、中、低劑量組與陰性對(duì)照比較，60min和120min后血糖水平均有不同程度的降低，并且在120min末，處理組和陽性對(duì)照組比較血糖接近正常水平。其中，石參水煎液中劑量組與其他處理組比較，血糖下降程度更接近陽性對(duì)照組水平。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注:*P<0.05，**P<0.Olvs陰性對(duì)照②石參不同溶劑提取物對(duì)II型糖尿病小鼠糖耐量的影響取II型糖尿病小鼠28只，隨機(jī)分為4組，每組7只，按以下分組情況處理乙酸乙酯提取物組按18g生藥/kg體重給予乙酸乙酯提取物混懸液，(每天給藥l次)；乙醇提取物組按18g生藥/kg體重給予乙醇提取液，(每天給藥1次)；水提取物組按18g生藥/kg體重給予水提取液，(每天給藥1次)；陽性對(duì)照組按1500mg/kg體重給予消渴丸，(每天給藥1次)。連續(xù)給藥處理14天后，第15天，按0.lml/10g體重灌胃20%葡萄糖，尾靜脈采血分別測定30min，60min和120min血糖。另取7只C57BL/6J小鼠，不給予任何藥物處理，作為陰性對(duì)照。結(jié)果如表2所示，石參不同溶劑處理組與陰性對(duì)照組比較，60min和120min后血糖水平均有不同程度的降低；并且在120min末，乙酸乙酯提取物組、乙醇提取物組和陽性對(duì)照組比較，血糖更接近正常水平。乙酸乙酯處理組、乙醇處理組和陰性對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注:*P<0.05，**P<0.Olvs陰性對(duì)照(4)胰島素水平測定①石參水煎液對(duì)II型糖尿病小鼠胰島素水平的影響取11型糖尿病小鼠35只，隨機(jī)分為5組，按以下分組情況處理高劑量組8只，按18g生藥/kg體重給予石參水煎液，(每天給藥1次)；中劑量組8只，按9g生藥/kg體重給予石參水煎液；(每天給藥1次)；低劑量組7只，按3g生藥/kg體重給予石參水煎液；(每天給藥1次)；低劑量+二甲雙胍組7只，按200mg/Kg體重和3g生藥/kg體重給予二甲雙胍和石參水煎液；(每天給藥1次)；陽性對(duì)照組8只，按200mg/Kg體重給予二甲雙胍，(每天給藥1次)。給藥處理21天，在小鼠眼眶后靜脈叢采血約0.5ml到1.5mlEppendof管，加入EDTA混勻(抗凝)，置于冰上(2小時(shí)內(nèi)離心處理)。5t:下5000Xg離心10分鐘，獲得血清用來測定胰島素。利用ALPCO鼠胰島素EIA試劑盒測血清胰島素。另取10只C57BL/6J小鼠，不給予任何藥物處理，作為陰性對(duì)照。結(jié)果如圖1所示，模型小鼠用石參水煎液處理3周后，與陰性對(duì)照組比較，Insulin水平有明顯的升高。②石參不同溶劑提取物對(duì)II型糖尿病小鼠胰島素水平的影響取II型糖尿病小鼠35只，隨機(jī)分為4組，按以下分組情況處理乙酸乙酯提取物組按18g生藥/kg體重給予乙酸乙酯提取物混懸液，(每天給藥l次)；乙醇提取物組按18g生藥/kg體重給予乙醇提取液，(每天給藥1次)；水提取物組按18g生藥/kg體重給予水提取液，(每天給藥1次)；陽性對(duì)照組按1500mg/kg體重給予消渴丸，(每天給藥1次)。給藥處理21天，在小鼠眼眶后靜脈叢采血約0.5ml到1.5mlEppendof管，加入EDTA混勻(抗凝)，置于冰上(2小時(shí)內(nèi)離心處理)。5t:下5000Xg離心10分鐘，獲得血清用來測定胰島素。利用ALPCO鼠胰島素EIA試劑盒測血清胰島素。另取10只C57BL/6J小鼠，不給予任何藥物處理，作為陰性對(duì)照。結(jié)果如圖2所示，石參梯度提取物處理3周后，與陰性對(duì)照組比較，乙醇提取物組與水提取物組的Insulin水平略有下降幅度，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)小鼠急性毒性預(yù)實(shí)驗(yàn)取30只NIH小鼠，體重29.3±1.0g，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只。分別以最大濃度6.667g藥材/ml按0.lml/10g灌胃給藥1次、0.lml/10g灌胃給藥2次(間隔2h)及0.17ml/10g灌胃給藥1次，持續(xù)觀察1W包括動(dòng)物的皮膚和毛色、飲食、行為及反應(yīng)、運(yùn)動(dòng)、眼鼻分泌物、大小便、死亡等情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以最大濃度6.67g藥材/ml和按133.4g藥材/kg給藥，小鼠不出現(xiàn)死亡和可見的中毒表現(xiàn)，此時(shí)，小鼠的日用劑量相當(dāng)于臨床成人日用劑量(0.8g藥材/kg)的166倍以上，故石參水提物的安全性較高。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以水、乙酸乙酯或乙醇為提取溶劑提取石參所得的提取物均能有效降低II型糖尿病小鼠的血糖和血脂水平，明顯改善糖耐量，說明石參對(duì)治療II型糖尿病有較好的療效，可用于制備治療糖尿病的藥物。圖1是石參水煎液對(duì)II型糖尿病小鼠胰島素水平影響的柱形圖，其中M為陰性對(duì)照，E為高劑量組，曰為中劑量組，ED為低劑量組，^為低劑量+二甲雙胍組，目為陽性對(duì)照，*P<0.05，**P<0.Olvs陰性對(duì)照。圖2是不同溶劑提取石參的提取物對(duì)II型糖尿病小鼠胰島素水平影響的柱形圖，其中函為陰性對(duì)照組，四為乙酸乙酯提取物組，曰為乙醇提取物組，cn)為水提物組，目為陽性對(duì)照組。具體實(shí)施例方式例1石參片劑的制備取500g干燥石參藥材，加8倍量水煎煮2小時(shí)，濾過，濾液于6(TC減壓濃縮至相對(duì)密度為1.151.20g/ml的清膏，噴霧干燥，得浸膏粉；取干浸膏粉，加入1.6倍量淀粉及0.4倍量糊精，混勻，以95%乙醇潤濕制軟材，過16目篩制粒，6(TC干燥，16目篩整粒，加入1%硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即得。每片相當(dāng)于原藥材3.5g，每次口服3片，每日3次。該例所用石參藥材是蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的全草。例2石參膠囊劑的制備(1)取300g干燥石參藥材，加6倍量的乙酸乙酯，回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，藥渣保留。濾液減壓回收乙酸乙酯成稠膏狀，7(TC真空干燥，得到乙酸乙酯提取物；(2)步驟(1)所得藥渣揮去乙酸乙酯后，加6倍量的90%乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，藥渣保留。濾液減壓回收乙醇成稠膏狀，7(TC真空干燥，得到乙醇提取物；(3)步驟(2)所得藥渣揮去乙醇后，加8倍量的水，回流提取煮2次，每次1.5小時(shí)，濾過，藥渣棄去。濾液濃縮至稠膏狀，7(TC真空干燥，得到水提取物；(4)將所得乙酸乙酯提取物、乙醇提取物及水提取物的干浸膏混合，粉碎，過80目篩；加入浸膏粉量10%的微晶纖維素，混勻，以90%乙醇潤濕制軟材，過40目篩制粒，6(TC干燥，40目篩整粒，分裝于O號(hào)膠囊中，即得。每粒相當(dāng)于原藥材3g，每次口服3粒，每日3次。該例所用石參藥材是蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的豐艮。例3石參滴丸劑的制備取300g干燥石參藥材，加6倍量的乙酸乙酯，回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液于6(TC減壓回收乙酸乙酯成稠膏狀，7(TC真空干燥，得到干浸膏；取石參干浸膏，粉碎，加入3倍量的PEG6000，在8(TC下加熱攪拌使其與藥物充分溶散后，用內(nèi)徑為3.5mm，外徑為5.5mm的滴頭以5060滴/min的滴速滴入二甲基硅油冷凝液(510°C)中，收集滴丸，除去表面的二甲基硅油，即得。每丸相當(dāng)于原藥材0.8g，每次口服10粒，每日3次。該例所用石參藥材是蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的全草。例4石參口服液的制備取500g干燥石參藥材，加8倍量的水煎煮2小時(shí)，濾過，濾液于6(TC減壓濃縮，得濃縮液約為500ml，加乙醇使乙醇含量為60%，攪拌均勻，靜置24h，過濾，濾液于6(TC減壓回收乙醇至無醇味，加入蔗糖100g、尼泊金乙酯0.3g，混勻，加水至1000ml，過濾，灌封，流通蒸氣滅菌，即得。每毫升相當(dāng)于原藥材0.5g，每次口服1520ml，每日3次。該例所用石參藥材是蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的*艮。例5石參顆粒劑的制備取300g干燥石參藥材，加6倍量的90%乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，過濾，濾液于6(TC減壓濃縮至相對(duì)密度為1.35g/ml的清膏，加入3倍量蔗糖粉，混勻，過20目篩制粒，6(TC干燥，20目篩整粒，分裝，即得。每克相當(dāng)于原藥材4g，每次口服3g，每日3次。該例所用石參藥材是蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的*艮。8權(quán)利要求石參在制備治療II型糖尿病藥物中的應(yīng)用，所述石參為蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的全草或根。2.—種石參提取物，該提取物是用水煎煮或回流提取石參得到的水提物。3.權(quán)利要求2所述提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成取干燥石參，加8體積倍水煎2小時(shí)，取上清，過濾，濾液在6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)；或者，用8體積倍的水回流提取2次，每次1.5小時(shí)，取濾液在6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。4.一種石參提取物，該提取物是用乙酸乙酯回流提取石參得到的乙酸乙酯提取物。5.權(quán)利要求4所述提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成取干燥石參，用6體積倍的乙酸乙酯回流提取2次，每次2小時(shí)；濾過，減壓回收乙酸乙酯后，在7(TC下真空干燥。6.—種石參提取物，該提取物是用90%乙醇回流提取石參得到醇提物。7.權(quán)利要求6所述提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成取干燥石參，用6體積倍的90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)；濾過，減壓回收乙醇后，在7(TC下真空干燥。8.—種石參提取物，該提取物是依次用乙酸乙酯、90%乙醇和水回流提取石參藥材得到的混合提取物。9.權(quán)利要求8所述提取物的制備方法，該方法由以下步驟組成(1)取干燥石參，用乙酸乙酯回流提取2次，每次2小時(shí)，分取濾渣和濾液；取濾液減壓回收乙酸乙酯，得稠膏；(2)步驟(1)所得濾渣用90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，分取濾渣和濾液；取濾液減壓回收乙醇，得稠膏；(3)步驟(2)所得濾渣用8體積倍的水回流提取2次，每次1.5小時(shí)，取濾液在6(TC下負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得稠膏；(4)將各步驟所得稠膏，在7(TC下真空干燥后合并。10.—種用于治療II型糖尿病的藥物，該藥物由權(quán)利要求2、4、6或8所述的石參提取物與藥學(xué)上可接受的輔料組成。全文摘要本發(fā)明提供了石參(蝶形花科貍尾豆屬長穗貓尾射Urariacrinita(Linn.)Desv.exDC.的全草或根)在制藥中的新用途，即用于制備治療II型糖尿病藥物。所述藥物由石參提取物和藥學(xué)上可接受的輔料組成，其中所述的石參提取物是用水煎煮或回流提取石參得到的水提物，或者是用乙酸乙酯回流提取石參得到的乙酸乙酯提取物，或者是用90％乙醇回流提取得到醇提物，或者是依次用乙酸乙酯、90％乙醇和水回流提取石參藥材得到的混合提取物。文檔編號(hào)A61K36/48GK101703566SQ200910194139公開日2010年5月12日申請(qǐng)日期2009年11月26日優(yōu)先權(quán)日2009年11月26日發(fā)明者丘玉昌,劉中秋,劉曉萍,孔煥育,龐建新,張嘉杰,曹瑩,王廣發(fā),王杞妹申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)