專利名稱：一種武夷山巖茶提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明具體的涉及一種武夷山巖茶提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
武夷山巖茶(Wuyi Mountain Rock Tea)歷史悠久，早在二世紀(jì)初即開始種植，武 夷山巖茶(Wuyi Mountain Rock Tea)具有綠茶之清香，紅茶之甘醇，以武夷山巖茶為原料 制成的名茶是茶中之極品，其品種很多，如大紅袍、烏龍茶、鐵觀音、白雞冠、水金龜?shù)让琛?以“大紅袍”(camellia, sinensiscv. dahongpao)最為名貴，享“茶中之王”之譽(yù)。大紅袍生 長在武夷山風(fēng)景區(qū)內(nèi)九龍窠的半山崖上，那里群山環(huán)抱，重巒疊嶂，幽澗清水長流，常年云 霧彌漫。武夷山地屬“丹霞地形”，由砂、礫凝結(jié)而成，土質(zhì)疏松、土壤呈酸性(PH值為4-6)， 兩旁巖壁矗立，日照不長，溫度適宜，終年有涓涓細(xì)泉滋潤茶樹，由枯葉、苔醉等植物腐爛形 成的有機(jī)物，使土地肥沃而無污染。由于生長環(huán)境得天獨(dú)厚，武夷山巖茶(Wuyi Mountain Rock Tea)成茶具有獨(dú)到的品質(zhì)和品味，其滋味醇厚，飲后回甘快、余味長，香氣不論高低都 持久濃厚，茶冷仍幽香飄逸，且其含有多種化學(xué)元素，藥理性質(zhì)特別顯著?！按蠹t袍”作為“茶中之王”，目前市場上常見的有價(jià)格昂貴的不同包裝等級(jí)的原茶 產(chǎn)品，但是關(guān)于其進(jìn)一步深加工、功效成分的提取分離、提取物在保健品、飲品、食品、醫(yī)藥、 化妝品等方面的應(yīng)用還尚未見報(bào)道。另外，在加工包裝“大紅袍”等原茶產(chǎn)品過程中，一部 分老葉子、殘次葉常被作為廢棄葉剔除，而這些殘次葉、老葉中也含有一定量的功效成分如 茶多酚黃酮等，將其棄之，造成了很大的浪費(fèi)。因此，利用武夷山巖茶“大紅袍”等的下腳料對(duì)其功效成分茶多酚進(jìn)行提取分離， 并對(duì)其功效性進(jìn)行進(jìn)一步的研究，開發(fā)食用方便、功效性更好的巖茶提取物保健品(如茶 飲料)等將具有廣闊的市場前景，且充分利用了武夷巖茶原料，減少浪費(fèi)，提高經(jīng)濟(jì)效益。茶多酚是茶之“靈魂”，研究證明，茶多酚可以清除活性氧自由基、抗氧化、抗衰老、 降血壓、降血脂、防輻射、防癌治癌等作用，是一類安全、無毒、多功能的天然抗氧化劑。但是，茶多酚的主要成分兒茶素的性質(zhì)非?；顫?，在空氣和酸性條件下很容易被 氧化，導(dǎo)致其抗氧化能力降低。而且從結(jié)構(gòu)看，其既有疏水性的苯環(huán)，又有親水性的羥基，所 以該分子既有親水性又有親脂性，但是其在水相和油相中的溶解度都不高，導(dǎo)致其生物活 性得不到充分的發(fā)揮，影響其在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用。但是，至今尚未見從天然植物巖茶，如“大紅袍”烏龍茶等中直接提取分離含有糖 苷的茶多酚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了一種與現(xiàn)有的茶葉提取物完全不同的武夷 山巖茶提取物，本發(fā)明的武夷山巖茶提取物性質(zhì)穩(wěn)定、水溶性好，并且與現(xiàn)有的茶多酚苷元 相比，性質(zhì)更穩(wěn)定，活性更高。本發(fā)明中，所述的武夷山巖茶提取物(WTDF)的原料為武夷巖茶，包括武夷山大紅袍、烏龍茶、鐵觀音、白雞冠、水金龜?shù)让?；還有以茶樹生長環(huán)境命名的，如不見天、金鑰匙 等；以茶樹形狀命名的，如醉海棠、醉洞賓、釣金龜、鳳尾草、玉麒麟、一枝香等；有以茶葉樹 形命名的，如瓜子樹、金錢、竹絲、金柳條、倒葉柳等；以茶樹發(fā)芽遲早命名的，如迎春柳，不 知春等；以茶香型命名的，如肉桂、石乳香、白麝香等。因此本發(fā)明涉及一種武夷山巖茶提取物(WTDF)的制備方法，其包含下列步驟(1)將武夷山巖茶用乙醇水溶液提?。?2)將步驟(1)提取所得物質(zhì)用大孔樹脂柱進(jìn)行分離，收集用硅膠薄層層析法檢 測時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0.16 0.45的餾分；即可。其中，所述的武夷山巖茶較佳的為武夷山大紅袍、烏龍茶、鐵觀音、白雞冠、水金 龜、不見天、金鑰匙、醉海棠、醉洞賓、釣金龜、鳳尾草、玉麒麟、一枝香、瓜子樹、金錢、竹絲、 金柳條、倒葉柳、迎春柳、不知春、肉桂、石乳香和白麝香中的一種或多種，優(yōu)選武夷山大紅 袍。步驟(1)中，所述的武夷山巖茶可以是武夷山巖茶的下腳料，其較佳的為粉碎后 使用，粉碎后的粒徑較佳的為20 100目；所述的乙醇水溶液的體積濃度較佳的為30% 90%，更佳的為50% 70%，武夷山巖茶與乙醇水溶液的料液比較佳的為Ig 5ml Ig IOml ；所述的提取的溫度較佳的為40 70°C，提取的方法較佳的為旋轉(zhuǎn)提取，提取時(shí) 間較佳的為1 3小時(shí)。步驟(1)中，較佳的還包含下列步驟將提取所得的提取液過濾，收集濾液，脫色， 過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過濾，得濾液，即可。步驟O)中，所述的大孔樹脂較佳的為DlOl和/或D201大孔樹脂，上柱原料的重 量與大孔樹脂的重量比較佳的為1 1.5 1 1。大孔樹脂分離的步驟較佳的為先用蒸餾水進(jìn)行淋洗，再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度 洗脫，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 l,Rf 值為0. 16 0. 45的餾分；其中，乙醇水溶液的梯度范圍較佳的為體積濃度30% 90%，更 佳的為50% 70%。步驟O)中，較佳的還包含下列步驟將大孔樹脂分離得到的餾分濃縮，依次用二 氯甲烷和正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，干燥，即可。本發(fā)明中，所述的武夷山巖茶提取物(WTDF)的制備方法較佳的還包含下列步驟 (3)將上述步驟( 所得的物質(zhì)進(jìn)行硅膠柱層析分離，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展 開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0.44，Rf值為0.27和Rf值為 0. 16的三個(gè)餾分中的一個(gè)或多個(gè)餾分。其中，在所述的硅膠柱層析分離中，上柱物質(zhì)與硅膠的質(zhì)量比較佳的為2 100； 硅膠的目數(shù)較佳的為100目 300目；所述硅膠柱層析的步驟較佳的為用二氯甲烷、 甲醇和水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，梯度較佳的為二氯甲烷、甲醇和水的體積比為 20 3 1 — 15 3 1 — 10 3 1 — 6 4 1 ；每個(gè)梯度所用的混合溶劑的用量 較佳的為150 250ml，以8ml分段收集各餾分，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯 甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0.44，Rf值為0.27和Rf值為0. 16的三個(gè) 餾分中的一個(gè)或多個(gè)餾分。
步驟(3)中，較佳的還包含下列步驟將各餾分的溶液濃縮，干燥，即可。最佳的，所述的武夷山巖茶提取物的制備方法包含下列步驟以武夷山巖茶為原 料，粉碎至20 100目，以1 5 10(g/ml)的料液比，加入體積濃度為50% 70%的乙 醇水溶液，40 70°C旋轉(zhuǎn)提取1 3小時(shí)，過濾，收集濾液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇， 離心，過濾，濾液過DlOl型大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水淋洗，再以體積濃度為30 % 90 % 的乙醇水溶液依次梯度洗脫，分別收集洗脫液，每餾分為150ml，分別做硅膠薄層層析分析， 合并相同餾分，取第11 25餾分，即收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷甲 醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0. 16 0. 45的餾分，濃縮，依次用二氯甲烷和正丁 醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，粉末提取物通過硅膠柱層析 分離，依次用體積比例20 :3:1 —15:3:1 —10:3:1 —6:4: 1的二氯甲烷、 甲醇和水的混合洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度所用的混合溶劑為150ml 250ml，分別 收集洗脫液，每餾分8ml，以硅膠薄層層析法檢測，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為 8:3: 1，合并Rf值為0.44的7-18餾分，其為DF-3組；合并Rf值為0.27的餾分19-39 餾分，其為DF-2組；合并Rf值為0. 16的45-81餾分，其為DF-I組，將各餾分濃縮，真空干 燥，得干燥粉末，即可。上述制備方法中的各優(yōu)選條件可按本領(lǐng)域知識(shí)進(jìn)行任意組合，即得本發(fā)明的各優(yōu) 選實(shí)例。本發(fā)明進(jìn)一步涉及由上述制備方法制得的武夷山巖茶提取物。本發(fā)明還涉及上述武夷巖茶提取物在制備清除DPPH自由基、抑制α -葡萄糖苷 酶、抑制乙酰膽堿酯酶或抑制酪氨酸酶等的食品、飲品、保健食品、藥物或化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及上述武夷巖茶提取物在制備具有抗氧化、抗衰老、降血糖、改善記憶 和美白中的一種或多種功能的食品、飲品、保健食品、藥物或化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明中，通過以下方法對(duì)優(yōu)選的武夷巖茶的提取物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下1. DF-I提取物的紅外光譜分析(1)糖類物質(zhì)O-H鍵伸縮振動(dòng)糖類物質(zhì)的O-H鍵伸縮振動(dòng)在3800 3200cm_區(qū)為有許多小肩峰組成的強(qiáng)寬峰， 這是由于分子中的羥基形成多種方式的氫鍵所致。多糖類化合物如纖維素二聚體的羥基峰 在3400cnT附近，多聚體的羥基峰在3347 33McnT。樣品在3353. 7cm-處有強(qiáng)而寬的峰，推斷可能為糖類物質(zhì)的0_H鍵伸縮振動(dòng)。(2)糖類物質(zhì)C-O伸縮振動(dòng)糖類物質(zhì)在1200 1030cm_C-0伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的吸收帶。樣品在1145. 5cmM080cmM035. 6cnT處有三個(gè)吸收峰，推斷該多聚體為糖苷類物質(zhì)。(3)糖苷類型解析吡喃糖苷在1100 IOlOcnT出現(xiàn)3個(gè)強(qiáng)峰，而呋喃糖則出現(xiàn)2個(gè)強(qiáng)峰。樣品在1090cnT、1035. 5cm\ IOlOcnT出現(xiàn)3個(gè)吸收峰，提示該糖苷為吡喃糖苷。而 對(duì)照品(綠茶多酚)則在1100 IOlOcnT出現(xiàn)6個(gè)峰，提示該對(duì)照品沒有吡喃糖苷。(4)吡喃糖α和β異構(gòu)體的解析吡喃糖為α異構(gòu)體在766 士 IOcnT有吡喃環(huán)擴(kuò)張運(yùn)動(dòng)特征峰，在844士8011-有C1-H彎曲振動(dòng)特征峰。樣品在767. 5cm_和850cm_有吸收峰，判斷該吡喃糖為α異構(gòu)體。2. DF-I提取物的旋光度的測定樣品的比旋光度[α] ？=-150·6。，而對(duì)照品的比旋光度[α] ο=-204.6°，兩者的差值為52. 5°，推斷本樣品是含葡萄糖配基的糖苷物質(zhì)，因?yàn)槠咸烟堑谋刃舛?[α^2=+52.5。，配基葡萄糖與苷元產(chǎn)生消旋作用使糖苷物質(zhì)的旋光度發(fā)生改變，即左旋 204.6°與右旋52. 5°產(chǎn)生消旋作用使糖苷物質(zhì)的旋光度變?yōu)樽笮?50. 6°。3. DF-I、DF-2和DF_3提取物的硅膠薄層層析通過對(duì)各樣品進(jìn)行水解，以葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、巖藻糖、半乳 糖、葡萄糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)單糖，將樣品和標(biāo)準(zhǔn)糖進(jìn)行硅膠薄層層析分析，結(jié)果表明，本樣品中 含有葡萄糖。4. DF-I、DF-2和DF-3的液相-質(zhì)譜分析(1) EGCG 糖苷(代號(hào) DF-1)質(zhì)譜中有459和623正離子峰，EGCG的質(zhì)量數(shù)為458，EGCG的分子上連接一個(gè)葡 萄糖，其質(zhì)量數(shù)為458+180-18 = 620，證明樣品中含有EGCG茶多酚糖苷類物質(zhì)。(2) ECG 糖苷(代號(hào) DF-2)質(zhì)譜中有441負(fù)離子峰和605負(fù)離子峰，ECG的質(zhì)量數(shù)為442，ECG的分子上連接 一個(gè)葡萄糖，其質(zhì)量數(shù)為442+180-18 = 604，證明樣品中含有ECG茶多酚糖苷類物質(zhì)。(3) EGC 糖苷(代號(hào) DF-3)質(zhì)譜中有305負(fù)離子峰和630負(fù)離子峰，EGC的質(zhì)量數(shù)為306，EGC的分子上連接 上兩個(gè)葡萄糖，306+180-18+180-18 = 630，證明樣品中含有EGC糖甙類物質(zhì)。除特殊說明外，本發(fā)明涉及的原料和試劑均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于(1)本發(fā)明可以利用武夷山巖茶如大紅袍等以及其殘次品來提取活性功效成分， 即武夷巖茶提取物(WTDF)，充分利用了寶貴的武夷巖茶資源。(2)本發(fā)明的武夷山巖茶如大紅袍等的提取物(WTDF)中含有茶多酚兒茶素與糖 基相結(jié)合的糖苷，與現(xiàn)有的茶多酚提取物相比，其活性、穩(wěn)定性和水溶性大大提高。并且，本 發(fā)明的巖茶提取物與從綠茶和白茶中提取的茶多酚苷元的活性相比，要高出30% 50%。(3)本發(fā)明的武夷山巖茶如大紅袍等的提取物(WTDF)為開發(fā)高效的具有抗氧化、 降血糖、改善記憶力的食品、飲品、保健品、藥品和具有美白功效的化妝品提供了新的途徑。
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。以下涉及到Rf值的實(shí)施例中，Rf值的測定條件均為展開劑系統(tǒng)為二氯甲烷甲 醇水的體積比為8 3 1。實(shí)施例1稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為80%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為80%的乙醇水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 次用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)有一部分多酚糖苷，含量在20%左右。實(shí)施例2稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為70%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為70%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 此用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中多酚糖苷的含量為50%左右。實(shí)施例3稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為50%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為50%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 次用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中多酚糖苷的含量為50%左右。實(shí)施例4稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為30%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為30%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 此用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中多酚糖苷的含量為低于20%。實(shí)施例5稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為80%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為80%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依次 用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物。經(jīng)鑒定，所 得活性物質(zhì)有一部分糖苷，含量在20%左右。將正丁醇萃取物進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯 甲烷、甲醇和水的體積比為20 3 1,15 3 1,10 3 1,6 4 1梯度150ml 250ml依次洗脫，分段收集各餾分，根據(jù)薄層層析結(jié)果，合并餾分7-18，Rf值為0. 44 ；合并 19-39餾分，Rf值為0. 27 ；合并45-81的餾分，Rf值為0. 16。將各餾分濃縮，真空干燥，得 干燥粉末。實(shí)施例6稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為70%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為70%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 此用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中糖苷的含量為50%左右。將正丁醇萃取物進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷、甲醇和水的體積比為20 3 1,15 3 1,10 3 1,6 4 1梯度150ml 250ml依次洗脫，分段收集各餾分，根據(jù)薄層層析結(jié)果，合并餾分7-18，Rf值為0. 44 ；合并 19-39餾分，Rf值為0. 27 ；合并45-81的餾分，Rf值為0. 16。將各餾分濃縮，真空干燥，得 干燥粉末。實(shí)施例7稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為50%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為50%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層 層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 次用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中糖苷的含量為50%左右。將正丁醇萃取物進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷、甲醇和水的體積比為20 3 1,15 3 1,10 3 1,6 4 1梯度150ml 250ml依次洗脫，分段收集各餾分，根據(jù)薄層層析結(jié)果，合并餾分7-18，Rf值為0. 44 ；合并 19-39餾分，Rf值為0. 27 ；合并45-81的餾分，Rf值為0. 16。將各餾分濃縮，真空干燥，得 干燥粉末。實(shí)施例8稱取巖茶大紅袍lOOOg，粉碎，20 100目，加入體積濃度為30%的乙醇水溶液 6000ml，65 °C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾得到提取液，濾渣繼續(xù)用6000ml體積濃度為30%的乙醇 水溶液，65°C旋轉(zhuǎn)提取2h，過濾，合并兩次提取液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，取濾液過大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水3000ml淋洗，再以體積濃度為30^^50^^70%, 90%的乙醇水溶液各2500ml依次洗脫，分別收集洗脫液，每流份為150ml，分別做硅膠薄層層析分析，合并相同流份，取第11 25流份，其Rf值為0. 16 0. 45，濃縮至一定的量，依 次用二氯甲烷、正丁醇萃取，取正丁醇相，濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，經(jīng)鑒定， 所得活性物質(zhì)中糖苷的含量為低于20%。將正丁醇萃取物進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯甲 烷、甲醇和水的體積比為20 3 1,15 3 1,10 3 1,6 4 1梯度150ml 250ml依次洗脫，分段收集各餾分，根據(jù)薄層層析結(jié)果，合并餾分7-18，Rf值為0. 44 ；合并 19-39餾分，Rf值為0. 27 ；合并45-81的餾分，Rf值為0. 16。將各餾分濃縮，真空干燥，得 干燥粉末。效果實(shí)施例本發(fā)明的武夷巖茶提取物具有抗氧化、降血糖、改善記憶力和美白的功效，以下通 過DPPH自由基清除率試驗(yàn)、α-葡萄糖苷酶活性抑制率試驗(yàn)、乙酰膽堿酯酶活性抑制率試 驗(yàn)和酪氨酸酶活性抑制率試驗(yàn)，說明本發(fā)明提取物的功效性。采用分光光度法測定提取物清除DPPH自由基、抑制α -葡萄糖苷酶活性和乙酰膽 堿酯酶活性的功效，并與商品綠茶和白茶所得茶多酚提取物進(jìn)行功效對(duì)比，結(jié)果見表1 表1功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于包含下列步驟(1)將武夷山巖茶用乙醇水溶液提??；(2)將步驟(1)提取所得物質(zhì)用大孔樹脂柱進(jìn)行分離，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)， 展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0.16 0.45的餾分，即可。
2.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于所述的武夷山巖 茶原料包括武夷山大紅袍、烏龍茶、鐵觀音、白雞冠、水金龜、不見天、金鑰匙、醉海棠、醉洞 賓、釣金龜、鳳尾草、玉麒麟、一枝香、瓜子樹、金錢、竹絲、金柳條、倒葉柳、迎春柳、不知春、 肉桂、石乳香和白麝香中的一種或多種。
3.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟(1)中，所述 的武夷山巖茶為粉碎后使用，粉碎后的粒徑為20 100目；所述的乙醇水溶液的體積濃度 為30 90 ；所述的武夷山巖茶與乙醇水溶液的料液比為5g Iml IOg Iml ；所述的提 取的溫度為40 70°C，提取的方法為旋轉(zhuǎn)提取，提取時(shí)間為1 3小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟(1)中還包 含下列步驟將提取所得的提取液過濾，收集濾液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過 濾，得濾液，即可。
5.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟O)中， 所述的大孔樹脂為DlOl和/或D201大孔樹脂，上柱原料的重量與大孔樹脂的重量比為 1 1. 5 1 1。
6.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于大孔樹脂分離的 步驟為先用蒸餾水進(jìn)行淋洗，再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集用硅膠薄層層析法檢測 時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 l，Rf值為0.16 0.45的餾分；其中， 乙醇水溶液的梯度范圍為體積濃度30% 90%。
7.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟O)中還包 含下列步驟將大孔樹脂分離得到的餾分濃縮，依次用二氯甲烷和正丁醇萃取，取正丁醇 相，濃縮，干燥，即可。
8.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于所述的制備方法 還包含步驟(3)將步驟( 所得的物質(zhì)進(jìn)行硅膠柱層析分離，收集用硅膠薄層層析法檢測 時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0.44，Rf值為0.27和Rf值 為0. 16的三個(gè)餾分中的一個(gè)或多個(gè)餾分。
9.如權(quán)利要求8所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟(3)中，在所 述的硅膠柱層析分離中，上柱物質(zhì)與硅膠的質(zhì)量比為2 100;硅膠的目數(shù)為100目 300 目；所述硅膠柱層析的步驟為用二氯甲烷、甲醇和水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，梯度為二 氯甲烷、甲醇和水的體積比為20 :3:1 —15:3:1 —10:3:1 —6:4: 1 ；每個(gè) 梯度所用的混合溶劑的用量為150 250ml，以8ml分段收集各餾分，收集用硅膠薄層層析 法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，Rf值為0. 44，Rf值為0. 27 和Rf值為0. 16的三個(gè)餾分中的一個(gè)或多個(gè)餾分。
10.如權(quán)利要求8所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于步驟(3)中還包 含下列步驟將各餾分的溶液濃縮，干燥，即可。
11.如權(quán)利要求1所述的武夷山巖茶提取物的制備方法，其特征在于所述的武夷山巖茶提取物的制備方法包含下列步驟以武夷山巖茶為原料，粉碎至20 100目，以 Ig 5ml IOml的料液比，加入體積濃度為50% 70%的乙醇水溶液，40 70°C旋轉(zhuǎn) 提取1 3小時(shí)，過濾，收集濾液，脫色，過濾，濾液濃縮至無乙醇，離心，過濾，濾液過DlOl 型大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水淋洗，再以體積濃度為30% 90%的乙醇水溶液依次梯 度洗脫，分別收集洗脫液，每餾分為150ml，分別做硅膠薄層層析分析，合并相同餾分，取第 11 25餾分，即收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為 8:3: l，Rf值為0. 16 0.45的餾分，濃縮，依次用二氯甲烷和正丁醇萃取，取正丁醇相， 濃縮，真空干燥，得到干燥的粉狀提取物，粉末提取物通過硅膠柱層析分離，依次用體積比 例20 3 1 — 15 3 1 — 10 3 1 — 6:4: 1的二氯甲烷、甲醇和水的混合洗 脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度所用的混合溶劑為150ml 250ml，分別收集洗脫液，每餾分 8ml，以硅膠薄層層析法檢測，展開劑二氯甲烷甲醇水的體積比為8 3 1，合并Rf值 為0. 44的7-18餾分，其為DF-3組；合并Rf值為0. 27的餾分19-39餾分，其為DF-2組；合 并Rf值為0. 16的45-81餾分，其為DF-I組，將各餾分濃縮，真空干燥，得干燥粉末，即可。
12.如權(quán)利要求1 11任一項(xiàng)所述的制備方法制得的武夷山巖茶提取物。
13.如權(quán)利要求12所述的武夷山巖茶提取物在制備清除DPPH自由基、抑制α-葡萄糖 苷酶、抑制乙酰膽堿酯酶或抑制酪氨酸酶的食品、飲品、保健食品、藥物或化妝品中的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求12所述的武夷山巖茶提取物在制備具有抗氧化、抗衰老、降血糖、改善 記憶和美白中的一種或多種功能的食品、飲品、保健食品、藥物或化妝品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種武夷山巖茶提取物的制備方法，其包含下列步驟(1)將武夷山巖茶用乙醇水溶液提??；(2)將步驟(1)提取所得物質(zhì)用大孔樹脂柱進(jìn)行分離，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷∶甲醇∶水的體積比為8∶3∶1，Rf值為0.16～0.45的餾分，即可。其還可包含下列步驟將步驟(2)所得的物質(zhì)進(jìn)行硅膠柱層析分離，收集用硅膠薄層層析法檢測時(shí)，展開劑二氯甲烷∶甲醇∶水的體積比8∶3∶1，Rf值0.44，Rf值0.27和Rf值0.16的三個(gè)餾分中的一個(gè)或多個(gè)餾分。本發(fā)明還涉及上述提取物及其應(yīng)用。本發(fā)明的武夷山巖茶提取物性質(zhì)穩(wěn)定、水溶性好，并且與現(xiàn)有的茶多酚苷元相比性質(zhì)更穩(wěn)定，活性更高。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102047997SQ20091019863
公開日2011年5月11日 申請日期2009年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月10日
發(fā)明者劉桂云, 駱峰, 駱濱 申請人:上海市新文達(dá)生物科技有限公司