專利名稱：：一種降脂藥物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種具有降脂功效的中藥組合物、制備方法及在制備治療脂肪肝藥物方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，肝病在人類疾病譜中的重要性日益凸顯，脂肪性肝病(簡(jiǎn)稱脂肪肝)已成為臨床常見的慢性病之一。近來一些研究顯示，脂肪肝可以導(dǎo)致胰島素抵抗，可以進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化、甚至肝功能衰竭。脂質(zhì)代謝障礙造成脂質(zhì)儲(chǔ)積，進(jìn)而引起脂質(zhì)過氧化損傷是脂肪肝的發(fā)病機(jī)制。酒精性肝病(ALD)是由于長(zhǎng)期大量飲酒，通過乙醇本身和其衍生物乙醛長(zhǎng)期作用于肝臟，使肝細(xì)胞反復(fù)發(fā)生脂肪變性、壞死和再生所致，包括酒精性脂肪肝(AFL)、酒精性肝炎(AH)、酒精性肝纖維化(ALF)和酒精性肝硬化(AC)[l]。目前ALD在我國(guó)已成為僅此于病毒性肝炎的第二大肝病病因。流行病學(xué)研究表明，成年男性每日飲用超過40克酒精，女性每日飲用超過20克酒精，連續(xù)5年以上即可出現(xiàn)酒精性肝炎。國(guó)外資料顯示，歐美國(guó)家在嗜酒人群中酒精性肝病患病率高達(dá)84%，慢性嗜酒者中約占20%_30%可發(fā)生酒精性肝硬化[2，3]。而ALD早期病變的表現(xiàn)就是酒精性脂肪肝(AFL)。因此，有效地防治AFL的發(fā)展是治療ALD的關(guān)鍵?，F(xiàn)在，國(guó)內(nèi)外治療ALD主要采用戒酒，營(yíng)養(yǎng)支持，藥物治療等方法。實(shí)踐證明，目前缺乏治療AFL的理想藥物，在藥物治療中所用的大多數(shù)化學(xué)合成藥對(duì)ALD短期療效不理想，長(zhǎng)期應(yīng)用又存在潛在肝毒性的問題，故對(duì)ALD的治療尚缺乏理想的藥物。中醫(yī)認(rèn)為ALD的治療思路是以"體虛為本，邪實(shí)為標(biāo)，虛實(shí)互見"為主要病機(jī)特點(diǎn)，治療從"痰濕毒瘀"著手，肝脾腎同治，多采用分期治療、辨證治療和專方專藥的治療方法。目前現(xiàn)代中醫(yī)藥治療上已取得一定的進(jìn)展，且副作用少，因此，研究中藥對(duì)ALD的治療有著廣闊的前景。本發(fā)明的藥物由云芝、三七、銀杏等具有抗氧化損傷作用的中藥制成，具有防治脂肪肝作用。本發(fā)明即以大鼠實(shí)驗(yàn)性脂肪肝模型研究并證實(shí)該藥物具有防治脂肪肝作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種具有降脂功效的藥物。本發(fā)明還提供了上述藥物的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于將這種具有降脂功效的藥物應(yīng)用于制備治療高血脂或脂肪肝的藥物。本發(fā)明是一種具有降脂功效的藥物，其成分包括三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的提取物以及云芝糖肽，三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的藥材原料及云芝糖肽的重量比為i:(i4):(o.52):(i4):(o.52):(o.05o.4)。這種降脂藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體。可與各種藥用輔料配制成醫(yī)學(xué)上可接受的藥物制劑，尤其適于制備成口服制劑，包括各種片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑和口服液。上述這種降脂藥物制備方法包括如下步驟將三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的藥材原料按重量配比(可粉碎或制成飲片)后用水提醇沉法或乙醇提取法提取，提取液濃縮干燥，再按配比與云芝糖肽混合?；蛘?1)將三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的藥材原料按重量配比(可粉碎或制成飲片)后用水提醇沉法或乙醇提取法提取，將提取液在508(TC減壓濃縮至無乙醇味，加水使所得液體中藥材原料的濃度為0.05lkg/L，離心或過濾，取上清液；(2)將步驟(1)所得上清液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附純化，洗脫液減壓濃縮和干燥，再按配比與云芝糖肽混合。減壓濃縮和干燥的優(yōu)選溫度為5080°C。所述大孔吸附樹脂吸附純化的工藝為，將步驟(1)所得液體上柱吸附，用24倍柱床體積純水洗脫雜質(zhì)，再用36倍柱床體積的40%80%乙醇溶液洗脫，洗脫速度為24倍柱床體積/小時(shí)；藥材原料與大孔吸附樹脂的質(zhì)量體積比為l:11:10kg/L。水提醇沉法的工藝優(yōu)選為將藥材原料煎煮后，取煎出液，濃縮后加入乙醇沉淀，將混合液中乙醇的體積濃度調(diào)節(jié)為5080%，取濾液。乙醇提取法優(yōu)選為乙醇滲漉法，其工藝為用體積濃度為50%80%的乙醇溶液對(duì)藥材進(jìn)行滲漉提取，取滲漉液；乙醇溶液與藥材原料的體積質(zhì)量比為618L/kg;滲漉時(shí)間為636小時(shí)。所用的大孔吸附樹脂選自非極性、弱極性或中等極性的大孔吸附樹脂，包括D-101、HPD-100、HPD-400、HPD_450、HPD_600、HPD-700、LSA-IO、AB-8型大孔吸附樹脂。相關(guān)藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的降脂藥物可有效降低血脂，降低非酒精性脂肪肝和酒精性脂肪肝大鼠肝臟指數(shù)，血清ALT活性、TC、TG、MDA、LDL和降低肝勻漿TC、TG、LDL水平，提示其有改善脂質(zhì)代謝和抑制肝細(xì)胞自由基損傷作用。本發(fā)明的降脂藥物可應(yīng)用于制備治療高血脂、脂肪肝或酒精性脂肪肝的藥物。小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物的最大耐受量為20g/kg。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的配方、制備工藝和藥效作用作進(jìn)一步的描述。HPLC檢測(cè)方法為(1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rgl、芍藥苷、丹參酚酸B、葛根素5mg，分別置50ml容量瓶?jī)?nèi)，加入甲醇使其溶解并定容至刻度，混勻，即為人參皂苷Rgl、芍藥苷、丹參酚酸B和葛根素對(duì)照品溶液。(2)混合對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取人參皂苷Rgl、芍藥苷、丹參酚酸B、葛根素5mg，置一50ml容量瓶?jī)?nèi)，加入甲醇使其溶解并定容至刻度，混勻，即為混合對(duì)照品溶液。(3)供試品溶液的制備精密稱取所得提取物50mg，置于100ml容量瓶?jī)?nèi)，加入適量甲醇，超聲30min，放冷至室溫，甲醇定容，用0.45iim微孔濾膜過濾，棄初濾液，取其續(xù)濾液即得。(4)色譜條件色譜柱PhenomerGeminiC18(250X4.6mm，5iim);檢測(cè)波長(zhǎng)203nm;流速lml/min;柱溫30。C;進(jìn)樣量10iiL。流動(dòng)相乙月青(A)-O.2%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫0-25min，A-B(ll:89)，25-60min，A-B(11-30:89-70)。實(shí)施例1按配比取三七2kg、銀杏葉3kg、葛根2kg、丹參3kg、赤芍2kg，粉碎，混合均勻，用168L70%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1617小時(shí)；收集滲漉液并在55t:下減壓濃縮、干燥、粉碎，加云芝糖肽0.2kg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷Rgl0.7%、葛根素0.9%、丹酚酸B1.2%、芍藥苷1.8%。實(shí)施例2按配比取飲片三七2kg、銀杏葉2kg、葛根4kg、丹參2kg和赤芍4kg，混勻，用168L65%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1617小時(shí)；收集滲漉液，于7(TC濃縮至無醇味，加水至140L，離心除去沉淀，取上清液。將所得液體上14LHPD-100型大孔吸附樹脂吸附，42L純水洗除雜質(zhì)，56L50%(體積濃度)乙醇溶液洗脫有效部位，洗脫速度為28L/小時(shí)。收集洗脫液，7(TC下減壓濃縮、干燥，粉碎，加云芝糖肽0.8kg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷Rgll.3%、葛根素1.7%、丹酚酸B3.0%、芍藥苷3.6%。實(shí)施例3按配比取三七2kg、銀杏葉3kg、葛根2kg、丹參3kg、赤芍2kg，粉碎，混合均勻，用168L50%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1617小時(shí)；收集滲漉液，于8(TC濃縮至無醇味，加水至12L，離心除去沉淀，取上清液。將所得液體上12LHPD-700型大孔吸附樹脂吸附，24L純水洗除雜質(zhì)，48L80%(體積濃度)乙醇溶液洗脫有效部位，洗脫速度為24L/小時(shí)。收集洗脫液，7(TC下減壓濃縮、干燥，粉碎，加云芝糖肽0.4kg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷Rgl2.0%、葛根素2.5%、丹酚酸B3.3%、芍藥苷5.3%實(shí)施例4按配比取三七2kg、銀杏葉2kg、葛根4kg、丹參2kg、赤芍4kg，粉碎，用112L55%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1617小時(shí)；收集滲漉液，75t:下減壓濃縮至無醇味，加入純水至體積為280L，離心沉淀后取上清液，上24LHPD-500型大孔吸附樹脂吸附，48L純水洗除雜質(zhì)，42L80%(體積濃度)乙醇溶液洗脫有效部位，洗脫速度為48L/小時(shí)。收集洗脫液，65t:下減壓濃縮、干燥，粉碎，加云芝糖肽0.8kg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷RgJ.3X、葛根素3.4X、丹酚酸B1.5%、芍藥苷7.2%。實(shí)施例5按配比取三七2kg、銀杏葉8kg、葛根lkg、丹參4kg、赤芍lkg，粉碎，混勻，用256L60%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1820小時(shí)；收集滲漉液在65t:下濃縮干燥，粉碎，加云芝糖肽O.lkg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷RgA5X、葛根素0.3X、丹酚酸B51.2%、芍藥苷0.7%。實(shí)施例6按配比取三七2kg、銀杏葉6kg、葛根lkg、丹參8kg、赤芍lkg，粉碎，混勻，用180L75%(體積濃度)乙醇滲漉，滲漉時(shí)間為1718小時(shí)，收集滲漉液在5(TC下減壓濃縮至無乙醇味，加入純水至體積為36L。將所得液體上36LD-101型大孔吸附樹脂吸附，72L純水洗除雜質(zhì)，144L40%(體積濃度)乙醇溶液洗脫有效部位，洗脫速度為72L/小時(shí)。收集洗脫液，65t:下減壓濃縮、干燥，粉碎，加云芝糖肽0.lkg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷RgJ.9X、葛根素1.2X、丹酚酸B8.5%、芍藥苷2.5%。實(shí)施例7按配比取三七2kg、銀杏葉3kg、葛根2kg、丹參3kg、赤芍2kg，粉碎，混勻，加入120L水浸泡1214小時(shí)，煎煮2小時(shí)；再依次加入96L和72L水煎煮兩次，時(shí)間分別為1.5小時(shí)和1小時(shí)；合并煎出液，過濾后取濾液，7(TC下減壓濃縮至6L，加入18L95%(體積濃度)乙醇溶液，4t:下靜置1618小時(shí)，過濾后取濾液，65t:下減壓濃縮，干燥，粉碎，加云芝糖肽O.8kg，混合均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷Rgl0.6%、葛根素0.7%、丹酚酸B1.0%、芍藥苷1.6%。實(shí)施例8按配比取三七2kg、銀杏葉3kg、葛根2kg、丹參3kg、赤芍2kg，粉碎，混勻，加入96L水浸泡1214小時(shí)，煎煮2小時(shí)；再依次加入72L和60L水煎煮兩次，時(shí)間分別為1.5小時(shí)和l小時(shí)；合并煎出液，過濾后取濾液，7(TC下減壓濃縮至6L，加入18L95%(體積濃度)乙醇溶液，室溫下靜置2024小時(shí)，過濾后取濾液，減壓濃縮至無醇味，加水至24L。將所得液體上120LLSA-10型大孔吸附樹脂吸附，36L純水洗除雜質(zhì)，48L60%乙醇溶液洗脫有效部位，洗脫速度為36L/小時(shí)。收集洗脫液，5(TC下減壓濃縮、干燥，粉碎，加云芝糖肽0.2kg，混和均勻，即得。HPLC檢測(cè)其指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為，人參皂苷Rgl2.4%、葛根素3.0%、丹酚酸B4.1%、芍藥苷1.8%。實(shí)施例9稱取實(shí)施例2制備得到的產(chǎn)品lkg，加入淀粉0.4kg，維晶纖維素0.2kg，加入0.8升10%聚乙烯吡咯烷酮水溶液，混合均勻，過16目篩制成濕顆粒，55t:干燥，14目整粒，加入硬脂酸鎂O.06kg，總混，壓片，得到片劑。實(shí)施例10將實(shí)施例1制備得到的產(chǎn)品lkg，加入淀粉0.2kg，維晶纖維素0.3kg，硬脂酸鎂0.06kg，混合均勻，灌裝膠囊。實(shí)施例ll實(shí)施例l藥物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性脂肪肝的作用I.材料和動(dòng)物1、按下法制備脂肪乳(1)膽固醇12.5g研末，加25ml丙二醇以及25ml吐溫-80攪勻。(2)膽酸納2.5g溶解于50ml蒸餾水中。(3)丙基硫氧嘧啶1250mg研末，加于溶解好的膽酸鈉瓶中搖勻。(4)精煉豬油37.5g置燒杯于熱水中充分融化至透明后，加于處理好的膽固醇中攪勻。(5)將溶解在一起的膽酸鈉和丙基硫氧嘧啶加于溶解在一起的膽固醇和精煉豬油中攪勻。(6)最后將上述乳液定容至250ml，冷藏保存。(注在各成份比例及濃度不變條件下，根據(jù)需要配制適當(dāng)容量的脂肪乳。灌胃器為20號(hào)注射器針)。2、動(dòng)物分組80只SD大鼠隨機(jī)分成6組正常對(duì)照組16只、模型組16只、實(shí)施例2藥物300mg/kg12只(大劑量組)、實(shí)施例2藥物150mg/kg12只(中劑量組)、實(shí)施例2藥物75mg/kg12只(小劑量組)、辛伐他汀4mg/kg(陽性對(duì)照組)12只。II.造模及給藥方法每天下午，正常對(duì)照組灌胃(ig)生理鹽水，其他各組ig脂肪乳10ml/kg。每天上午，正常對(duì)照組和模型組ig生理鹽水，陽性對(duì)照組ig辛伐他汀4mg/Kg，大、中、小劑量組分別ig實(shí)施例3藥物300mg/Kg、150mg/Kg、75mg/Kg。給藥的灌胃容量均為10ml/kg。第一次給藥后第四周及此后每隔一周，正常對(duì)照組和模型組各取2只作肝臟病理檢查及血液ALT、AST、TC、TG分析，以判斷是否造模成功。III.檢測(cè)指標(biāo)及方法(1)大鼠一般情況每天觀察大鼠的一般癥狀，包括飲食、行為(自主活動(dòng)、精神狀態(tài))及毛發(fā)變化。(2)血液學(xué)檢測(cè)大鼠于末次給藥后禁食12h，腹主動(dòng)脈取血，3000rpm離心分離血清，按試劑盒說明書測(cè)定TC、TG、ALT、AST、GSH、SOD、MDA、HDL-C、LDL-C活性。(3)肝組織生化檢測(cè)將取自最大肝葉同一部位的肝組織0.5g于冰生理鹽水中漂洗后，置盛有4.5g0.86%冰生理鹽水的10ml離心管中，于冰水浴中10秒/次勻漿，制備10X的勻漿液，離心取上清，按試劑盒說明書測(cè)定肝勻漿TC、TG、ALT、AST、GSH、SOD、MDA、HDL-C、LDL-C活性。(4)肝臟病理學(xué)檢查取各大鼠最大肝葉同一部位的肝組織于10%的福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋、切片、HE染色。按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分分級(jí)輕度脂肪肝，低倍鏡下脂肪變性肝細(xì)胞面積占肝小葉30%-50%。中度脂肪肝，脂肪變性肝細(xì)胞占肝小葉的50%-70%。重度脂肪肝，脂肪變性肝細(xì)胞占肝小葉的70%以上，肝細(xì)胞呈彌漫性脂肪變性，猶如一片脂肪組織，呈"魚網(wǎng)"狀。(5)統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用F檢驗(yàn)，兩兩比較用q檢驗(yàn)；等級(jí)資料以非參數(shù)秩和檢驗(yàn)(H檢驗(yàn))分析。III.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)—般情況觀察及肝臟指數(shù)各組大鼠無異常死亡。與其他組相比，模型組大鼠毛色黃，易被激怒。大劑量組小便呈暗綠色。正常組、陽性對(duì)照組、小劑量組的肝臟指數(shù)顯著小于模型組，但大劑量組顯著大于模型組，具體見表1-1。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型組比較，△P<0.05，*P<0.01[OO91](2)血液生化測(cè)定與模型組比較，大、中、小劑量組血清ALT活性明顯下降，TC、TG含量明顯降低，小劑量組血清AST活性下降(見表1-2)。表l-2藥物對(duì)血清轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇、甘油三酯的影響^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:與模型組比較，^P<0.05，**P<0.01(3)與模型組比較，小劑量組SOD活性明顯提高；中、小劑量組血清GSH活性明顯提高；大、中、小劑量組血清MDA，LDL濃度明顯下降(見表1-3)。表1-3藥物對(duì)血清超過氧化物歧化酶、谷胱苷肽、丙二醛、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的影響(^土s)n血清SOD(U/ml)血清GSH(mg/ml)血清MDA(nmol/ml)血清HDL(mmol/L)血清LDL(mmol/L)正常對(duì)照組12167.736±19.057204.544±38.0206.179±0.608**0.305±0扁**0細(xì)±0.019**模型組11162.018±11.430190.768±38.4948.500±0.7134.170±1.3700.883±0.256**陽性對(duì)照組"147.367±14.826*215.625±33.6926.814±0.904**0.553±0.094**0.129±0.019**大劑量組12162.0"±23.247213.075±14.6607.439±1.15"0.556±0.170**0.144土0.035"中劑量組12161.582±13.912252.758±29.6547.265±0.975**0.532±0.153**0.131±0.032**小劑量組12173.808±10.212*237.876±22.2147.465±0.947**0.535±0.075**0.126±0.022"注與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01(4)肝組織勻漿生化測(cè)定與模型組相比，除中劑量組SOD活性下降外，大、中、小劑量組肝組織勻漿的S0D，GSH活性及MDA含量無明顯差異，見表1-4。表1-4藥物對(duì)肝組織超過氧化物歧化酶、谷胱苷肽、丙二醛的影響(^士s)n肝勻槳SOD(U/mgprot)肝勻漿GSH(U/mgprot)肝勻漿MDA(nmol/mgprot)正常對(duì)照組1273.623±5.150*37.043±3.130*1.662±0.355模型組1180.955±7.45132.846±4.2502.011±0.643陽性對(duì)照組1182.24U10.24334.692±3.4841.915±0.314大劑量組1276.738±4.92833.378±4.0242,277±0.521中劑量組1274.550±5.744*32.402±3,1382.136±0.274小劑量組1276.188±10.06236扁±5細(xì)1.976±0.332注與模型組比較，△P<0.05，*P<0.01(5)與模型組比較，大、中、小劑量組肝勻漿的TC，LDL，HDL的含量均明顯下降，大劑量組肝勻槳TG含量下降。表1-5藥物對(duì)肝組織膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的影響(i±s)9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注:與模型組比較，wp<0.05，Hp<0.01IV.討論脂肪肝是由于脂肪攝入過量和其他影響體內(nèi)脂肪代謝的因素一起造成肝脂質(zhì)代謝障礙，致使肝內(nèi)脂肪過度儲(chǔ)積而形成。甘油三酯和膽固醇是體內(nèi)脂肪的主要存在形式，其水平可以反映肝脂肪病變程度。脂肪代謝過程中產(chǎn)生的自由基可引起組織細(xì)胞氧化損傷，其最終產(chǎn)物為MDA。SOD，GSH是體內(nèi)天然的自由基清除物。因此，S0D、GSH、MDA水平也能反映肝脂肪病變程度。ALT、AST主要存在于肝細(xì)胞中，ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，AST主要存在于肝細(xì)胞漿之線粒體中。肝細(xì)胞損傷時(shí)，ALT首先進(jìn)入血中，肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷、危及線粒體時(shí)，AST也會(huì)進(jìn)入血中，故肝病發(fā)生肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)血清ALT、AST異常升高。本發(fā)明的降脂藥物能顯著降低實(shí)驗(yàn)性脂肪肝大鼠肝臟指數(shù)，血清ALT活性、TC、TG、MDA、LDL和降低肝勻漿TC、LDL水平，提示其有改善脂質(zhì)代謝和抑制肝細(xì)胞自由基損傷作用。實(shí)施例12實(shí)施例2藥物對(duì)大鼠酒精性脂肪肝的作用I.抗酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)方法(1)酒精灌胃給藥致大鼠酒精性脂肪肝模型的建立參照文獻(xiàn)[14]建立酒精性脂肪肝模型。將102只雄性SD大鼠隨機(jī)抽取15只作為正常組，除正常組大鼠給予蒸餾水(10ml/kg)夕卜，其余大鼠均每天口服灌胃56度的二鍋頭(10ml/kg)，連續(xù)19周。模型大鼠于第一周以O(shè).5ml/100g的56度二鍋頭灌胃；從第二周到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，以lml/100g白酒灌胃，一天一次。實(shí)驗(yàn)過程中，飼以普通飼料，自由飲用10%酒精溶液。造模第19周從正常組及模型組中隨機(jī)各抽取6只大鼠，測(cè)定血清ALT、AST、LDL-C、HDL-C、TG、T-CH和肝組織中的TG、T-CH的含量，以確定是否形成酒精性脂肪肝(AFL)的模型。(2)判定模型是否成功的結(jié)果測(cè)定1)血清中TG、T-CH的含量于試驗(yàn)第19周時(shí)，從正常組及模型組中隨機(jī)各抽取6只大鼠，禁食不禁水12h后，乙醚麻醉后，眼眶取血。室溫放置lh左右，放低溫離心機(jī)中3000r/min離心10min，取上清液，即所需血清。測(cè)定血清中TG、T-CH的含量，具體方法及操作按試劑盒說明書進(jìn)行。2)肝組織中TG、T-CH的含量測(cè)定用3%戊巴比妥鈉麻醉，打開腹腔，在相同部位取肝組織，用生理鹽水洗凈血液，濾紙吸干水分，取重約0.lg的肝組織制成10%肝組織勻漿。測(cè)定肝組織中TG、T-CH的含量，具體方法及操作按試劑盒說明書進(jìn)行。(3)大鼠分組及給藥造模成功后，將大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、多烯磷脂酰膽堿(91.2mg/kg)組[15]、受試藥小、中、大劑量組。正常組灌服蒸餾水(10ml/kg)，模型組灌服56度的二鍋頭(10ml/kg)，多烯磷脂酰膽堿組灌服多烯磷脂酰膽堿膠囊，受試藥小劑量組灌以50mg/kg、受試藥中劑量組灌以100mg/kg、受試藥大劑量組分別灌以200mg/kg的實(shí)施例3藥物，每日給藥一次。各組均在模型大鼠治療8周后，測(cè)定血清中ALT、AST、TG、T-CH、LDL-C、HDL-C、MDA、S0D、GSH-px及肝臟指數(shù)與肝組織中的TG、T-CH、MDA含量的影響。(4)給藥8周后大鼠處理結(jié)果測(cè)定1)給藥后大鼠血清中ALT、AST、LDL-C、HDL-C、TG、T-CH的含量測(cè)定另一份全血于室溫放置lh左右后，放入冷凍離心機(jī)中3000r/min離心10min，取上清液，即所需血清。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ALT、AST、LDL-C、HDL-C、TG、T-CH的含量。2)給藥后大鼠血清中MDA、SOD、GSH-px的活性測(cè)定取血清，測(cè)定血清中MDA、SOD、GSH-px的活性，具體方法及操作按試劑盒說明書進(jìn)行。3)給藥后大鼠肝臟指數(shù)及肝組織中TG、T-CH、MDA的含量測(cè)定取出大鼠的整塊肝組織，用生理鹽水洗凈血液，濾紙吸干水分，稱重后，計(jì)算肝臟指數(shù)=肝重/體重。在相同部位取肝組織分成2份，其中一份取重約0.lg的肝組織制成10%肝組織勻漿。測(cè)定肝組織中TG、T-CH、MDA的含量。具體方法及操作按試劑盒說明書進(jìn)行。4)給藥后大鼠組織形態(tài)學(xué)檢查另一份肝組織以10%甲醛溶液固定，常規(guī)制備石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)差(^土S)表示，多組間比較用單因素方差分析，兩組間比較方差齊性用q檢驗(yàn)，方差不齊用Du皿ett'st檢驗(yàn)。采用SPSS軟件包進(jìn)行分析。P<0.05為有顯著性差異。II.試驗(yàn)結(jié)果1.判定模型是否成功的結(jié)果(1)對(duì)大鼠肝組織TG的含量影響與正常組比較，模型組肝組織TG有顯著升高。結(jié)果見表2-1。表2-l給藥后對(duì)大鼠肝組織TG的影響(^土s)組別例數(shù)TG(mg/dl)正常組6227.42±18,9模型組6349.46±98.3A注與正常組比較，A表示P<0.05。(2)對(duì)大鼠血清TG、T-CH的含量影響與正常組比較，模型組血清TG、T-CH有升高的趨勢(shì)，見表2-2。表2-2給藥后對(duì)大鼠血清TG、T-CH的影響(^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.給藥8周后大鼠處理結(jié)果測(cè)定(1)對(duì)血清TG、T-CH、HDL-C、LDL-C的含量影響與正常組比較，模型組TG、T-CH、LDL-C均顯著升高，HDL-C有升高的趨勢(shì)；與模型組比較，多烯磷脂酰膽堿組有降低TG、T-CH、LDL-C的趨勢(shì)；且可顯著降低T-CH;芝參正肝小、中、大三個(gè)劑量的給藥組有降低TG、T-CH、HDL-C、LDL-C的趨勢(shì)，但與模型組比較差異均不明顯。結(jié)果見表2-3。表2-3給藥后對(duì)大鼠血清TG、T-CH、HDL-C、LDL-C的含量影響(^±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與正常組比較，A表示P<0.05;AA表示P<0.01;與模型組比較J表示P<0.05。(2)對(duì)血清ALT、AST的含量影響與正常組比較，模型組血清ALT顯著升高；血清AST有升高的趨勢(shì)；與模型組比較，多烯磷脂酰膽堿組可顯著降低血清ALT，血清AST有下降的趨勢(shì)；小、中、大劑量組顯著降低血清ALT，血清AST有下降的趨勢(shì)，但作用不明顯。結(jié)果見表2-4。表2-4給藥后大鼠血清ALT、AST的含量影響(i士s)組別例數(shù)ALT(IU/L)AST(IU/L)正常組1052.80±5.29110.50±20.10模型組969.22±".94AA126.33±32.16多烯磷脂酰膽堿組849.63±5.24**112.88±12.17小劑量組48.71±12.28"110.29±30.00中劑量組645.33土5.28"111.00±21.94大劑量組942.00土4.09"110.67±24.84注與正常組比較，AA表示P<0.01;與模型組比較，"表示P<0.01。(3)對(duì)血清MDA的活性影響與正常組比較，模型組MDA有升高的趨勢(shì)；與模型組比較，中、大劑量有降低MDA的趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)分析均未顯示有顯著差異。結(jié)果見表2-5。表2-5給藥后大鼠血清MDA的含量影響(^土s)組別例數(shù)MDA(nmol/ml)正常組94.60±1.51模型組6.10±2.29多烯磷脂酰膽堿組87.31±3,12小劑量組76.47±2.40中劑量組64.25±0.44大劑量組84.91±1.38(4)對(duì)血清S0D的活性影響正常組比較，模型組、多烯磷脂酰膽堿組、小、中、大劑量可升高SOD值均無明顯差異結(jié)果見表2-6。表2-6給藥后對(duì)大鼠血清SOD的含量影響(^土s)組別例數(shù)SOD(U/ml)正常組10159.52±7.70模型組9157.85±4.92多烯磷脂酰膽堿組8161.49±7.57小劑量組了■13±3.69中劑量組6159.09±2.51大劑量組9158.92±5.97(5)對(duì)血清GSH-px的活性影響各組間比較GSH-px的活性無明顯差異。結(jié)果見表2-7。表2-7給藥后對(duì)大鼠血清GSH-px的含量影響(^士s)組別例數(shù)GSH-px(U/ml)正常組91769.15±173.71模型組91758.21±123,28多烯磷脂酰膽堿組81445,15±198.92小劑量組71684.86±126.69中劑量組61714.93±154.46大劑量組91826.87±126.69(6)對(duì)肝組織TG、T-CH的含量影響與正常組比較，模型組肝組織TG、T-CH有升高的趨勢(shì)；與模型組比較，多烯磷脂酰膽堿組TG含量明顯下降，小、中劑量組TG、T-CH含量也明顯下降，大劑量組TG、T-CH有降低的趨勢(shì)，但差異并不明顯。結(jié)果見表2-8。表2-8給藥后對(duì)大鼠肝組織TG和T-CH的含量影響(^±s)14組別例數(shù)TG(mg/mgprot)T-CH(mg/mgprot)正常組10232.92±91.29174.58±125.36模型組9314.95±115.95205.83±86.76多烯磷脂酰膽堿組8200.45±80.9"150.69±69.56小劑量組7159.75±41.02**123.88±40.34A中劑量組6156.59±59,73**115.42±41.17*大劑量組9242.08±136.21144.37±89.37(7)對(duì)肝組織MDA的含量影響與正常組比較，模型組肝組織MDA有升高的趨勢(shì)；與模型組比較，多烯磷脂酰膽堿組、小、中、大劑量有降低MDA的趨勢(shì)，但差異并不顯著。結(jié)果見表2-9。注與正常組比較，AA表示P〈0.01;與模型組比較J表示P<0.05;"表示P<0.01。(9)對(duì)肝組織病理形態(tài)的影響組織病理分析表明，模型組與正常組比較，肝臟細(xì)胞脂肪變性明顯；大、中、小劑量組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性明顯減輕(P<0.05，見表2-11)。表2-11給藥后對(duì)大鼠肝細(xì)胞脂肪變性的影響組別<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>與正常組比較，Ap<0.05;與模型組比較7表示P<0.0權(quán)利要求一種降脂藥物，其特征在于，包括三七、銀杏葉、葛根、丹參、赤芍的提取物和云芝糖肽，三七、銀杏葉、葛根、丹參、赤芍的藥材原料和云芝糖肽的重量比為1∶(1～4)∶(0.5～2)∶(1～4)∶(0.5～2)∶(0.05～0.4)。2.權(quán)利要求1所述的降脂藥物，其特征在于，還包括藥學(xué)上可接受的載體。3.權(quán)利要求1或2所述的降脂藥物，其特征在于，其劑型為片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑或粉劑。4.權(quán)利要求1、2或3所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟將三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的藥材原料按重量配比后用水提醇沉法或乙醇提取法提取，提取液濃縮干燥，再按配比與云芝糖肽混合。5.權(quán)利要求1、2或3所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將三七、銀杏葉、葛根、丹參和赤芍的藥材原料按重量配比后用水提醇沉法或乙醇提取法提取，將提取液在508(TC減壓濃縮至無乙醇味道，加水使所得液體中藥材原料的濃度為0.05lkg/L，離心或過濾，取上清液；(2)將步驟(1)所得上清液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附純化，洗脫液濃縮和干燥，再按配比與云芝糖肽混合。6.權(quán)利要求5所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或中等極性的大孔吸附樹脂。7.權(quán)利要求5所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂吸附純化的工藝為，將步驟(1)所得上清液上柱吸附，用24倍柱床體積純水洗脫雜質(zhì)，再用36倍柱床體積的40%80%乙醇溶液洗脫，洗脫速度為24倍柱床體積/小時(shí)；藥材原料與大孔吸附樹脂的質(zhì)量體積比為1:11:10kg/L。8.權(quán)利要求4或5所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，所述水提醇沉法的工藝為將藥材原料煎煮后，取煎出液，濃縮后加入乙醇沉淀，將混合液中乙醇的體積濃度調(diào)節(jié)為5080%，取濾液。9.權(quán)利要求4或5所述一種降脂藥物的制備方法，其特征在于，所述的乙醇提取法為乙醇滲漉法，其工藝為用體積濃度為50%80%的乙醇溶液對(duì)藥材原料進(jìn)行滲漉提取，取滲漉液；乙醇溶液與藥材原料的體積質(zhì)量比為618L/kg;滲漉時(shí)間為636小時(shí)。10.權(quán)利要求1、2或3所述一種降脂藥物在制備治療高血脂、非酒精性脂肪肝或酒精性脂肪肝的藥物方面的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，公開了一種降脂藥物，包括三七、銀杏葉、葛根、丹參、赤芍的提取物和云芝糖肽，三七、銀杏葉、葛根、丹參、赤芍的藥材原料和云芝糖肽的重量比為1∶(1～4)∶(0.5～2)∶(1～4)∶(0.5～2)∶(0.05～0.4)。通過水提醇沉法或乙醇提取法提取制備，或再經(jīng)過大孔樹脂吸附純化。這種藥物可用于制備治療高血脂、脂肪肝或酒精性脂肪肝的藥物。文檔編號(hào)A61P3/06GK101721493SQ200910198759公開日2010年6月9日申請(qǐng)日期2009年11月13日優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日發(fā)明者劉瑤,葉曉平,張華,張雷,茅仁剛,袁萍申請(qǐng)人:上海新康制藥廠;上海師范大學(xué)