專利名稱：超順磁性碳納米管造影劑的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于磁共振成像技術(shù)，具體地說(shuō)是一種超順磁性碳納米管造影劑的制備和
應(yīng)用。
背景技術(shù)：
磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)是現(xiàn)有醫(yī)學(xué)影像技術(shù)中成像的 最好方法。MRI利用生物體不同組織在外磁場(chǎng)影響下產(chǎn)生不同的共振信號(hào)來(lái)成像，信號(hào)的強(qiáng) 弱取決于組織內(nèi)水的含量和水分子中質(zhì)子的弛豫時(shí)間，具有組織分辨率高、成像參數(shù)多、使 用安全等突出優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤診斷和基礎(chǔ)研究方面有著重要的意義。雖然MRI有以上諸多優(yōu) 點(diǎn)，但是經(jīng)過(guò)大量臨床病例顯示，磁共振成像在良、惡腫瘤組織與正常組織之間，信號(hào)強(qiáng)度 相差不大，達(dá)不到準(zhǔn)確診斷的目的。為了改變病變局部的信號(hào)強(qiáng)度，提高M(jìn)RI診斷的敏感性 和特異性，使良、惡腫瘤組織與正常組織之間，信號(hào)強(qiáng)度差別大，造影效果好，腫瘤組織診斷 準(zhǔn)確，發(fā)明一種高靈敏度和良好生物相容性的磁共振造影劑是十分重要的。
磁共振造影劑是用來(lái)縮短成像時(shí)間、提高成像對(duì)比度和清晰度的一種成像增強(qiáng)對(duì) 比劑，它可以有效地改變病變組織中水質(zhì)子的自旋-自旋弛豫時(shí)間，提高正常與患病部位 的成像對(duì)比度，從而清晰顯示體內(nèi)器官的功能與狀態(tài)。按照物質(zhì)的磁化特性可將造影劑分 為順磁性和超順磁性兩類，超順磁性造影劑的磁距遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于順磁性物質(zhì)，弛豫效能高，可通 過(guò)尺寸選擇或特異性表面分子修飾實(shí)現(xiàn)對(duì)特定組織的靶向，并有獨(dú)特的跨膜機(jī)理，實(shí)現(xiàn)細(xì) 胞內(nèi)分子靶向。造影劑分為陽(yáng)性和陰性兩類陽(yáng)性可縮短1\弛豫時(shí)間，使信號(hào)強(qiáng)度增強(qiáng)；陰 性可縮短T2及T2*弛豫時(shí)間，使信號(hào)強(qiáng)度降低。目前應(yīng)用較多的是超順磁性氧化鐵造影劑 (superparamagnetic iron oxide， SPI0)，該造影劑主要是用縮短組織的T2及T2*弛豫時(shí)間 來(lái)增強(qiáng)健康組織與病變組織之間的對(duì)比。絕大多數(shù)超順磁性氧化鐵造影劑是球形的納米粒 子，粒徑為10 14納米。這種造影劑經(jīng)靜脈給藥后主要被體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞所清除，不 能有效的到達(dá)病變組織以達(dá)到高效的顯影作用。因此合成具有高弛豫效率、對(duì)組織或器官 有靶向性的造影劑是十分重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是發(fā)明一種能夠改變病變局部信號(hào)強(qiáng)度，提高M(jìn)RI診斷的敏感性 和特異性，使良、惡腫瘤組織與正常組織之間，信號(hào)強(qiáng)度差別大，造影效果好，腫瘤組織診斷 準(zhǔn)確，高靈敏度和良好生物相容性的磁共振造影劑。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 超順磁性碳納米管造影劑的制備方法，步驟如下 (1)配制混酸溶液將3倍體積的98%濃硫酸與1體積的濃硝酸混合； (2)制備短碳納米管將微米級(jí)長(zhǎng)度的多壁碳納米管置于混酸中；功率350W超聲
16小時(shí)；二次蒸餾水離心，多次漂洗至中性；干燥得長(zhǎng)度100 300nm的粉末狀短碳納米
管；
(3)制備超順磁性多壁碳納米管將步驟(2)制得的短碳納米管與等質(zhì)量的二茂 鐵置于坩堝中混合均勻；將坩堝密封于不銹鋼鋼瓶中，放入馬弗爐350°C 425t:條件下反 應(yīng)1 2小時(shí)；冷卻至室溫； (4)步驟(3)制得的黑色粉末狀的物質(zhì)用無(wú)水乙醇溶液重復(fù)漂洗，除去未反應(yīng)的 二茂鐵； (5)將步驟(4)所得物質(zhì)真空干燥得粉末狀超順磁性多壁碳納米管； (6)準(zhǔn)確稱取步驟(5)所得超順磁性多壁碳納米管，加入到lwt^聚苯磺酸鈉溶
液中，65t:下攪拌6 12小時(shí)，過(guò)濾、磁性分離得到碳納米管聚苯磺酸鈉復(fù)合物；(7)將
步驟(6)所得復(fù)合物分散到20ml lwt^聚乙酰亞胺溶液中，搖床反應(yīng)3小時(shí)后離心除
去過(guò)量的聚乙酰亞胺，得到具有良好的水溶性的碳納米管聚苯磺酸鈉聚乙酰亞胺復(fù)合物
(MAGCNTs-PSS-PEI); (8)準(zhǔn)確稱取葉酸FA，溶解于二甲亞砜(DMSO)中，加入碳二亞胺(EDC)，搖床反應(yīng) 3 4小時(shí)，將葉酸的羧基活化； (9)將上述羧基活化了的葉酸溶液加入鐵濃度為0. 08 ii M的MAGCNTs-PSS-PEI水 溶液中，搖床反應(yīng)6 12h后離心除去未反應(yīng)的葉酸，用0. 9%的生理鹽水分散，得到靶向磁 共振造影劑，滅菌待用。 超順磁性碳納米管造影劑的應(yīng)用，步驟如下
(1)培養(yǎng)宮頸癌(Hela)細(xì)胞: 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期宮頸癌細(xì)胞，在含10X小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37t: 5% C02飽 和溫度下培養(yǎng)； (2) MAGCNTs-PSS-PEI細(xì)胞毒性測(cè)試 A、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌細(xì)胞，胰酶常規(guī)消化制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，均勻接種細(xì) 胞于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液200 ii L (含5000 6000個(gè)細(xì)胞)，每個(gè)濃度組設(shè)六 個(gè)復(fù)孔，37t: 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)24h使其貼壁并進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；
B、24h后吸出原培養(yǎng)液，每孔加180 ill含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基；加20ul 不同濃度梯度的MAGCNTs-PSS-PEI納米復(fù)合物(每個(gè)濃度組的終濃度分別為100、50、25、 12. 5、6. 25、3. 125 y g/mL)，對(duì)照組只含細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液；C、在37°C 5% C02飽和溫度下連續(xù)孵育20小時(shí)后，每孔加入20 y LMTT溶液繼續(xù) 孵育4小時(shí)后終止培養(yǎng)，棄去上清液，每孔加入150 ii L 二甲亞砜(DMSO)，震蕩10min，使MTT 藍(lán)紫色結(jié)晶完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于540nm處檢測(cè)各孔的吸光值；
D、以未接種細(xì)胞只加培養(yǎng)基孔的吸光值為空白對(duì)照調(diào)零，取六孔平均值，得到細(xì) 胞存活率與樣品濃度的關(guān)系圖； (3)功能化磁性碳納米管造影劑作用于宮頸癌細(xì)胞后T*2信號(hào)強(qiáng)度測(cè)定A、將同濃度的MAGCNTs-PSS-PEI 、 MAGCNTs_PSS-PEI_FA分別加入到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的
Hela細(xì)胞中，在37°C 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)6h ; B、取未經(jīng)任何處理的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela細(xì)胞，作為陰性對(duì)照；6小時(shí)后胰酶消化、 離心成團(tuán)，用0. 5%瓊脂糖均勻分散； C、臨床磁共振診斷儀在1. 5T下分別檢測(cè)其T*2信號(hào)下降強(qiáng)度。
本發(fā)明的要點(diǎn)是
(1)混酸共同作用于多壁碳納米管，連續(xù)超聲將之裁剪成短管。將截?cái)嗟亩啾谔技{ 米管與二茂鐵乙酸混合均勻，高溫作用2小時(shí)后自然冷卻得到粉末狀的超順磁性多壁碳納 米管。 (2)將陰離子高聚物(如聚苯磺酸鈉(PSS)、)和陽(yáng)離子高聚物(如聚乙酰亞胺 (PEI)、聚酰胺胺(PAMAM)、殼聚糖(Chitosan)、聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)等)分別 修飾到超順磁性多壁碳納米管上，得到表面連有氨基在水、生理鹽水中都能均勻分散的功 能化水溶性磁性多壁碳納米管。 (3)將靶向試劑葉酸(FA)的羧基活化與水溶性多壁磁性碳納米管表面的氨基進(jìn) 行酰胺反應(yīng)，從而使葉酸負(fù)載到經(jīng)聚合物包裹的水溶性多壁磁性碳納米管上，制得靶向磁 共振造影劑。 (4)將未連接靶向試劑和連有FA靶向試劑的磁性多壁碳納米管溶液分別加入到 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela等葉酸受體高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中繼續(xù)培養(yǎng)6h后，用醫(yī)用磁共振儀進(jìn)行 掃描檢測(cè)到明顯的T*2信號(hào)下降強(qiáng)度。 本發(fā)明設(shè)計(jì)了經(jīng)聚合物功能化修飾的超順磁性多壁碳納米管作為靶向磁共振造
影劑。首先將多壁碳納米管和二茂鐵混合均勻通過(guò)高溫?zé)岱纸夥ㄖ苽淞顺槾判远啾谔技{
米管，然后采用陰離子高聚物、陽(yáng)離子高聚物層層組裝包裹后，制成表面帶有氨基的水溶性
多壁磁性碳納米管。水溶性的多壁磁性碳納米管與靶向試劑葉酸通過(guò)化學(xué)鍵連接進(jìn)一步功
能化，將其作為一種新型的靶向核磁共振造影劑轉(zhuǎn)染于體外培養(yǎng)的宮頸癌Hela細(xì)胞，顯示
了其增強(qiáng)MRI成像效果。這種超順磁性碳納米管(MAGCNTs)靶向造影劑有很好的弛豫效率，
且磁粒子負(fù)載在一維長(zhǎng)度的多壁碳納米管上增大了其與靶細(xì)胞的接觸面積，更有利于其達(dá)
到特定組織，縮短靶向組織的T2及T2*弛豫時(shí)間來(lái)提高成像的對(duì)比度。 現(xiàn)有技術(shù)納米材料在生物領(lǐng)域方向的研究以零維的納米顆粒為主，碳納米管因其
特殊的一維管狀結(jié)構(gòu)，大的比表面積，較強(qiáng)的吸附能力，管壁易進(jìn)行表面修飾或功能化等特
點(diǎn)，許多有機(jī)或無(wú)機(jī)分子可以共價(jià)或非共價(jià)地結(jié)合于碳納米管的內(nèi)外壁表面，對(duì)碳納米管
進(jìn)行表面修飾或功能化，形成具有良好生物相容性和管壁表面帶有不同功能的官能團(tuán)的多
功能碳納米管，在生物醫(yī)學(xué)方面應(yīng)用有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是 1、造影劑制備方法簡(jiǎn)單，快速、成本低。 2、超順磁性多壁碳納米管具有毒性小、弛豫效率高、耙向成像等特點(diǎn)。
3、具有良好的生物相容性，適合各種于各種生物體系。
4、成像效果好，便于準(zhǔn)確診斷。 本發(fā)明針對(duì)不同的生物體系以超順磁性多壁碳納米管為造影劑，為腫瘤及疾病的 診斷開辟了一種新途徑。


圖1A為未經(jīng)修飾的磁性碳納米管TEM圖；B為經(jīng)陰陽(yáng)離子聚合物修飾后的磁性碳 納米管圖。 圖2為磁性碳納米管在不同溶液中穩(wěn)定性；A為未經(jīng)修飾的磁性碳納米管 分散在蒸餾水中，幾分鐘就聚沉下來(lái)；B為MAGCNTs-PSS-PEI分散在蒸餾水中；C為
6MAGCNTs-PSS-PEI分散在0. 9%的生理鹽水中；D為MAGCNTs-PSS-PEI分散在PBS中；E為 MAGCNTs-PSS-PEI分散在細(xì)胞培養(yǎng)液MEM中；圖中顯示經(jīng)過(guò)數(shù)天后還能均勻分散，保持穩(wěn)定。 圖3為MTT法測(cè)試MAGCNTs_PSS_PE復(fù)合物的生物相容性。從圖中與控制組的比 較中可以明顯看出MAGCNTs-PSS-PE具有良好的生物相容性，適合各種于各種生物體系。
圖4為control Hela cells, MAGCNTs—PSS—PEI、 MAGCNTs—PSS—PEI—FA與Hela cells共同孵育6h后的MRI T 加權(quán)圖像。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
本發(fā)明實(shí)施方式中選用的材料 多壁碳納米管(麗NTs) 、二茂鐵、聚苯磺酸鈉(PSS)、聚乙酰亞胺(PEI)、葉酸(FA)、 二甲亞砜(匿S0)、乙基-(3-二甲基丙基)碳二亞胺(EDC)。
實(shí)施例1 :制備短碳納米管。 將長(zhǎng)度在微米級(jí)的麗NTs置于混酸之中(H2S04與HN03的體積比為3 : 1)，超聲16 小時(shí)。用二次蒸餾水離心多次漂洗直至中性。干燥得到長(zhǎng)度分布在100 300nm之間的粉末 狀的短MWNTs。 實(shí)施例2 :高溫?zé)岱纸夥ㄖ苽涑槾判远啾谔技{米管。 將截短了的麗NTs與二茂鐵等質(zhì)量置于30ml坩堝中混合均勻，密封于不銹鋼鋼瓶
中，將其放入馬弗爐中在350°C 425t:條件下反應(yīng)1 2h，之后冷卻至室溫。將收集到的
黑色粉末狀的樣品用純乙醇溶液重復(fù)漂洗幾次除去過(guò)量的未反應(yīng)的二茂鐵。最后真空干燥
得到粉末狀的磁性碳納米管(MAGCNTs)。 實(shí)施例3 :制備水溶性MAGCNTs復(fù)合物。 制備原理層層組裝。 稱取一定量的MAGCNTs加入到lwt% PSS溶液中，65。C下攪拌6 12h。通過(guò)過(guò)濾、 磁性分離得到MAGCNTs-PSS復(fù)合物。將上述復(fù)合物分散到20ml lwt% PEI溶液中，搖床反 應(yīng)3h后離心除去過(guò)量的PEI，得到MAGCNTs-PSS-PEI復(fù)合物(TEM圖1)。經(jīng)聚合物包裹的 多壁磁性碳納米管具有良好的水溶性，能夠很好的分散在不同的鹽溶液中(圖2)。
實(shí)施例4 :羧基與氨基的酰胺化耦合反應(yīng)制備靶向磁共振造影劑。
稱取3. 5mgFA溶解于DMSO中，加入9. 0 9. 3mgEDAC搖床反應(yīng)3 4h，將FA的 羧基活化。將上述羧基活化了的FA溶液加入鐵濃度為0. 08uM的MAGCNTs-PSS-PEI水溶液 中，搖床反應(yīng)6 12h后離心除去未反應(yīng)的FA，用0. 9%的生理鹽水分散，得到耙向磁共振 造影劑，滅菌待用。 實(shí)施例5 :Hela細(xì)胞的培養(yǎng)及MAGCNTs-PSS-PEI細(xì)胞毒性測(cè)試。 Hela宮頸癌細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。Hela細(xì)胞在含10%小牛血清的
DMEM培養(yǎng)基，37°C 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela，胰酶常規(guī)消化制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，均勻接種細(xì)胞于96
孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液200 ii L (含5000 6000個(gè)細(xì)胞)，每個(gè)濃度組設(shè)六個(gè)復(fù)孔，
37°C 5% (A飽和溫度下培養(yǎng)24h使其貼壁并進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。24h后吸出原培養(yǎng)液，每孔
7加180ul含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，之后加20ul不同濃度梯度的MAGCNTs-PSS-PEI 納米復(fù)合物(每個(gè)濃度組的終濃度分別為100、50、25、12. 5、6. 25、3. 125 y g/mL)，對(duì)照組只 含細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液。接下來(lái)37t: 5% C02飽和溫度下連續(xù)孵育20h后，每孔加入20ii LMTT 溶液繼續(xù)孵育4h后終止培養(yǎng)，棄去上清液，每孔加入150 ii LDMSO，震蕩10min，使MTT藍(lán)紫 色結(jié)晶完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于540nm處檢測(cè)各孔的吸光值(OD值)，并以未接種細(xì) 胞只加培養(yǎng)基孔的吸光值為空白對(duì)照調(diào)零，取六孔平均值，得到細(xì)胞存活率與樣品濃度的 關(guān)系圖3。從圖中可以看出MAGCNTs-PSS-PEI濃度在12. g/mL以下具有良好的生物相容 性，適用于各種生物體系。 實(shí)施例6 :功能化磁性碳納米管造影劑作用于Hela細(xì)胞后T*2信號(hào)下降強(qiáng)度的測(cè) 定 將同濃度的MAGCNTs-PSS-PEI 、 MAGCNTs_PSS-PEI_FA分別加入到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 的Hela細(xì)胞中，在37t: 5 % C02飽和溫度下培養(yǎng)6h。取未經(jīng)任何處理的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 Hela細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。作用6h后胰酶消化、離心成團(tuán)，用0.5X瓊脂糖均勻分散。臨 床磁共振診斷儀在1. 5T下分別檢測(cè)其T*2信號(hào)下降強(qiáng)度。從圖4可以看出，與未經(jīng)任何 處理的Hela細(xì)胞和經(jīng)MAGCNTs-PSS-PEI、 MAGCNTs-PSS-PEI-FA作用的Hela細(xì)胞相比，與 MAGCNTs-PSS-PEI-FA作用的Hela細(xì)胞T*2圖像明顯變黑，呈現(xiàn)出顯著的信號(hào)差異。同時(shí)通 過(guò)T/M即ping序列測(cè)試對(duì)照組Hela細(xì)胞和經(jīng)MAGCNTs-PSS-PEI、MAGCNTs-PSS-PEI-FA作用 的Hela細(xì)胞T/值分為36. 430ms、24. 268ms、 12. 145ms。由此說(shuō)明MAGCNTs可以作為一種 很好靶向磁共振造影劑，用于腫瘤或癌病組織的磁共振成像診斷。 上述實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選例，并不用來(lái)限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則之內(nèi)， 所做的任何修改、變化、變通或替換方案，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種超順磁性碳納米管造影劑的制備方法，步驟如下(1)配制混酸溶液將3倍體積的98％濃硫酸與1體積的濃硝酸混合；(2)制備短碳納米管將微米級(jí)長(zhǎng)度的多壁碳納米管置于混酸中；功率350W超聲16小時(shí)；二次蒸餾水離心，多次漂洗至中性；干燥得長(zhǎng)度100～300nm的粉末狀短碳納米管；(3)制備超順磁性多壁碳納米管將步驟(2)制得的短碳納米管與等質(zhì)量的二茂鐵置于坩堝中混合均勻；將坩堝密封于不銹鋼鋼瓶中，放入馬弗爐350℃～425℃條件下反應(yīng)1～2小時(shí)；冷卻至室溫；(4)步驟(3)制得的黑色粉末狀的物質(zhì)用無(wú)水乙醇溶液重復(fù)漂洗，除去未反應(yīng)的二茂鐵；(5)將步驟(4)所得物質(zhì)真空干燥得粉末狀超順磁性多壁碳納米管；(6)準(zhǔn)確稱取步驟(5)所得超順磁性多壁碳納米管，加入到1wt％聚苯磺酸鈉溶液中，65℃下攪拌6～12小時(shí)，過(guò)濾、磁性分離得到碳納米管聚苯磺酸鈉復(fù)合物；(7)將步驟(6)所得復(fù)合物分散到20ml 1wt％聚乙酰亞胺溶液中，搖床反應(yīng)3小時(shí)后離心除去過(guò)量的聚乙酰亞胺，得到具有良好的水溶性的碳納米管聚苯磺酸鈉聚乙酰亞胺復(fù)合物(MAGCNTs-PSS-PEI)；(8)準(zhǔn)確稱取葉酸FA，溶解于二甲亞砜(DMSO)中，加入碳二亞胺(EDC)，搖床反應(yīng)3～4小時(shí)，將葉酸的羧基活化；(9)將上述羧基活化了的葉酸溶液加入鐵濃度為0.08μM的MAGCNTs-PSS-PEI水溶液中，搖床反應(yīng)6～12h后離心除去未反應(yīng)的葉酸，用0.9％的生理鹽水分散，得到靶向磁共振造影劑，滅菌待用。
2. —種超順磁性碳納米管造影劑的應(yīng)用，步驟如下(1) 培養(yǎng)宮頸癌(Hela)細(xì)胞:選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期宮頸癌細(xì)胞，在含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37t: 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)；(2) MAGCNTs-PSS-PEI細(xì)胞毒性測(cè)試A、 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌細(xì)胞，胰酶常規(guī)消化制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，均勻接種細(xì)胞于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液200 ii L (含5000 6000個(gè)細(xì)胞)，每個(gè)濃度組設(shè)六個(gè)復(fù)孔，37t: 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)24h使其貼壁并進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；B、 24h后吸出原培養(yǎng)液，每孔加180 iil含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基；加20ul不同濃度梯度的MAGCNTs-PSS-PEI納米復(fù)合物(每個(gè)濃度組的終濃度分別為100、50、25、 12. 5、6. 25、3. 125 ii g/mL)，對(duì)照組只含細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液；C、 在37°C 5% C02飽和溫度下連續(xù)孵育20小時(shí)后，每孔加入20 y LMTT溶液繼續(xù)孵育4小時(shí)后終止培養(yǎng)，棄去上清液，每孔加入150iiL二甲亞砜(匿SO)，震蕩10min，使MTT藍(lán)紫色結(jié)晶完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于540nm處檢測(cè)各孔的吸光值；D、 以未接種細(xì)胞只加培養(yǎng)基孔的吸光值為空白對(duì)照調(diào)零，取六孔平均值，得到細(xì)胞存活率與樣品濃度的關(guān)系圖；(3) 功能化磁性碳納米管造影劑作用于宮頸癌細(xì)胞后T 信號(hào)強(qiáng)度測(cè)定A、將同濃度的MAGCNTs-PSS-PEI、 MAGCNTs-PS S-PEI-FA分別加入到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela細(xì)胞中，在37°C 5% C02飽和溫度下培養(yǎng)6h ;B、 取未經(jīng)任何處理的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela細(xì)胞，作為陰性對(duì)照；6小時(shí)后胰酶消化、離心成團(tuán)，用0.5%瓊脂糖均勻分散；C、 臨床磁共振診斷儀在1. 5T下分別檢測(cè)其T*2信號(hào)下降強(qiáng)度。
全文摘要
本發(fā)明屬于磁共振成像技術(shù)，一種超順磁性碳納米管造影劑的制備和應(yīng)用?，F(xiàn)有磁共振成像在良、惡腫瘤組織與正常組織之間，信號(hào)強(qiáng)度相差不大，達(dá)不到準(zhǔn)確診斷的目的。本發(fā)明將多壁碳納米管和二茂鐵混合均勻通過(guò)高溫?zé)岱纸夥ㄖ苽淞顺槾判远啾谔技{米管，然后采用陰離子高聚物、陽(yáng)離子高聚物層層組裝包裹后，制成表面帶有氨基的水溶性多壁磁性碳納米管；與靶向試劑葉酸通過(guò)化學(xué)鍵連接進(jìn)一步功能化，將其作為一種靶向核磁共振造影劑轉(zhuǎn)染于體外培養(yǎng)的宮頸癌Hela細(xì)胞，增強(qiáng)MRI成像效果。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是造影劑制備方法簡(jiǎn)單；毒性小、弛豫效率高；具有良好的生物相容性，適合各種于各種生物體系；成像效果好，便于準(zhǔn)確診斷。
文檔編號(hào)A61K49/06GK101711880SQ20091020041
公開日2010年5月26日 申請(qǐng)日期2009年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月22日
發(fā)明者殷敏, 田忠, 賈能勤 申請(qǐng)人:上海師范大學(xué)