專利名稱：：一種預(yù)防和治療甲型h1n1流感的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及臨床上用于預(yù)防和治療甲型H1N1流感的領(lǐng)域。特別是涉及忍冬感冒中藥制劑(忍冬感冒顆粒)用于預(yù)防和治療甲型H1N1流感的新用途。
背景技術(shù)：
：甲型H1N1流感，又稱為A(H1N1)型流感，舊稱人感染豬流感。H1N1甲型豬流感病毒毒株引起的(該毒株包含有豬流感、禽流感和人流感三種流感病毒的基因片斷)傳染性疾病，是一種新型豬流感病毒，可以人傳染人。中國衛(wèi)生部明確將其納入乙類傳染病。世衛(wèi)組織表明這種新型病毒到目前為止只是使人患病，還沒有發(fā)現(xiàn)豬被感染的病例。其臨床早期表現(xiàn)與人類流行性感冒相似，但甲型H1N1流感能夠繼發(fā)嚴(yán)重肺炎，腎功能衰竭和呼吸衰竭等并發(fā)癥，導(dǎo)致死亡，與普通流感有區(qū)別。目前防治甲型H1N1流感的手段主要是使用神經(jīng)氨酸酶抑制劑(達(dá)菲，磷酸奧司他韋)治療，它對甲型(H1N1)病毒可能有抑制作用，但也可能引起嚴(yán)重的副作用。預(yù)防則以注射甲型H1N1流感疫苗為主，目前我國已經(jīng)研制出了針對于甲型H1N1流感的疫苗，并在北京等地開始規(guī)模性接種，但在全國普及該疫苗尚需時日，且該疫苗還尚十分不成熟?，F(xiàn)在市場上的用于預(yù)防和治療季節(jié)性流感的藥物，對甲型H1N1流感并無確切效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明解決的的目的是提供忍冬感冒中藥制劑用于預(yù)防和治療甲型H1N1流感的新用途本發(fā)明藥物組合物(忍冬感冒中藥制劑)的原料藥組成及配比如下(按重量份)板藍(lán)根150-210重量份忍冬藤150-210重量份山豆根65-115重量份重樓65-115重量份魚腥草240-310重量份綿馬貫眾110-160重量份青蒿65-115重量份白芷65-115重量份。本藥物組合物的制備方法取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮l-3次，每次煎煮l-3小時(或熱回流提取3-6小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.05-1.15(40-60°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為50-70%，攪勻，冷藏24-72小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.20-1.40(45-60°C)，取浸膏，經(jīng)過常規(guī)工序直接或間接加入藥學(xué)上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，如片劑、口服液、膠囊、顆粒劑、注射劑等。下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1忍冬感冒顆?？沽鞲胁《局昊钚缘暮Y選研究1.試驗(yàn)?zāi)康暮Y選出忍冬感冒中藥制劑(忍冬感冒顆粒)對流感病毒株有較強(qiáng)抑制或殺滅的病毒株。2.材料流感病毒株流感病毒、副流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒3型、呼吸道合胞病毒、流感病毒FM1株、流感病毒PR8株。雞胚10日齡雞胚。陽性對照藥。病毒唑(利巴韋林)針劑溶液，濃度100mg/ml。1%雞紅細(xì)胞取自健康公雞，經(jīng)無菌生理鹽水洗滌3次，配制成濃度為1%。忍冬感冒顆粒亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供。批號090801，規(guī)格12g/包。3.方法3.1忍冬感冒顆粒供試品的制備忍冬感冒顆粒用熱蒸餾水溶解配制成100mg/ml的溶液，放冷后，用濾液過濾2次，取續(xù)濾液即得。3.2藥物對雞胚的毒性測定選取選取io日齡雞胚，每組io個雞胚，各供試品用無菌生理鹽水按i:i、i:io:稀釋后，分別按尿囊腔接種法注入0.2ml，設(shè)生理鹽水對照組，石蠟封口后移入37t:溫箱中培養(yǎng)，每日在檢卵燈下觀察雞胚情況，觀察3d(72h)內(nèi)雞胚存活情況。3.3流感病毒的傳代及病毒半數(shù)感染量(EID5。)的測定將各凍存流感病毒適當(dāng)稀釋后接種雞胚尿囊腔，37t:溫箱中溫育3d(72h)，取雞胚尿囊液(含流感病毒)用無菌生理鹽水(預(yù)冷)作10—^10—8倍連續(xù)稀釋。每個稀釋度分別尿囊腔內(nèi)接種6個10日齡雞胚，每胚O.lml，24h內(nèi)死亡者棄去，置4t:冰箱過夜，48h取出。取雞胚尿囊液，做血凝試驗(yàn)，記錄結(jié)果，計算病毒的EID5。。3.4藥物抗流感病毒試驗(yàn)藥物抗流感病毒試驗(yàn)分為如下2組(1)同途徑治療組先于尿囊腔接種病毒液O.lml，濃度為20EIDs。(下同)，置雞胚37t:溫箱lh，然后取出，每胚尿囊腔再注射藥物0.2ml。(2)同途徑預(yù)防組先于尿囊腔注射藥物0.2ml，濃度為20EID5。，置雞胚37。C溫箱lh，然后取出，每胚尿囊腔再接種病毒液O.lml。同時，將生理鹽水(陰性對照)和病毒唑(陽性對照，濃度2.25mg/ml)代替藥物，按以上方法分別進(jìn)行操作。每組實(shí)驗(yàn)均接種6個雞胚，37t:溫箱中溫育3d(72h)，fC過夜后收獲尿囊液，進(jìn)行血凝實(shí)驗(yàn)。3.5血凝效價的測定在大孔塑料板內(nèi)，將收獲的各胚尿囊液用生理鹽水作i:i，i:2，i:4，i:8，i:16，i:32，i:64，i:128連續(xù)稀釋，用1%雞紅細(xì)胞進(jìn)行血球凝集試驗(yàn)，每孔加入lX的雞紅細(xì)胞懸液50ia，搖勻，靜置45min后觀察。根據(jù)血細(xì)胞凝集程度的不同來進(jìn)行判斷，以"++"為終點(diǎn)，即觀察到紅細(xì)胞在孔底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊，以此為標(biāo)準(zhǔn)測定血凝滴度。判斷結(jié)果時如果藥物實(shí)驗(yàn)組血凝滴度為生理鹽水對照組的4倍或4倍以下，即說明藥物對病毒增殖有抑制作用，且效價下降越多則抗病毒效果越佳。4.結(jié)果4.1藥物對雞胚的毒性測定用無菌生理鹽水按l:l，l:IO稀釋的供試品對雞胚均無明顯的毒性作用。4.2藥物抗流感病毒試驗(yàn)將每組實(shí)驗(yàn)6個雞胚所得滴度計算其幾何平均數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)中測得生理鹽水對照組的血凝滴度為1:128，若實(shí)驗(yàn)組血凝滴度分別低于1:32，則說明藥物有抗流感病毒活性。由表1可知，忍冬感冒顆粒對本實(shí)驗(yàn)所采用的流感病毒均具有抗流感病毒的作用。表1忍冬感冒顆?？沽鞲胁《局昊钚缘暮Y選研究流感病毒株同途徑治療組的血凝滴度同途徑預(yù)防組的血凝滴度流感病毒1:1001:60副流感病毒1:110h75乙型流感病毒1:100h70腺病毒3型1:1201:100呼吸道合胞病毒1:1051:80流感病毒FM1株1:901:15流感病毒P肪株1:901:20病毒唑?qū)φ?:801:20生理鹽水對照1:1201:1205.結(jié)論由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，忍冬感冒顆粒對多種流感病毒均具有抗病毒作用，尤其是對流感病毒FM1株、流感病毒PR8株的抗病毒的作用最強(qiáng)。忍冬感冒顆?？沽鞲胁《镜念A(yù)防作用優(yōu)于治療作用。本實(shí)驗(yàn)提示忍冬感冒顆粒具有很強(qiáng)的抗甲型H1N1型病毒作用，可用于甲型H1N1流感的預(yù)防和治療。實(shí)驗(yàn)例2忍冬感冒顆粒對FM1、PR8流感病毒小鼠肺炎的治療作用1.試驗(yàn)?zāi)康脑u價忍冬感冒中藥制劑(忍冬感冒顆粒)對甲型H1N1流感病毒感染小鼠的預(yù)防與治療作用。2.試驗(yàn)材料2.1受試藥品忍冬感冒顆粒亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供。批號090801，規(guī)格12g/包。儲存條件室溫通風(fēng)干燥處。2.2陽性對照藥達(dá)菲(磷酸奧司他韋膠囊)，瑞士巴塞爾豪夫邁*羅氏有限公司產(chǎn)品，上海羅氏制藥有限公司分裝，批號B1162，分裝批號SH0033。2.3劑量設(shè)計忍冬感冒顆粒成人用量為12g/次，3次/日，小鼠試驗(yàn)用量分別為13.2g/kg/日、6.6g/kg/日、3.3g/kg/日(分別相當(dāng)于人臨床用藥量的2倍、等倍和1/2倍)，試驗(yàn)時按等容不等濃O.2ml/10g灌胃給藥。達(dá)菲臨床用量為150mg/60kg，換算成小鼠等效劑量為27.5mg/kg。均在同等情況下灌胃給藥。2.4動物ICR小鼠(SPF/VAF級)，體重14±lg，雌雄不限。由北京維通利華試驗(yàn)動物技術(shù)有限公司購買，許可證編號0155422。2.5病毒株甲型H1N1流感病毒鼠肺適應(yīng)株(FM/l/47株和PR/8/34株)，購自中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制研究所，由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所ABSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室傳代，-8(TC保存?zhèn)溆谩?.方法及結(jié)果3.1治療給藥對流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的作用取小鼠按體重等級隨機(jī)分為6組，分別為正常對照組、模型對照組、達(dá)菲對照組、忍冬感冒顆粒大、中、小三個劑量組，每組10只。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD5。流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染，每只35ul。感染當(dāng)天開始給藥，每次按O.2ml/10g體重灌胃，每天l次，連續(xù)4天，正常對照組和模型對照組在同等條件下蒸餾水灌胃。第5天稱重后解剖，稱肺重計算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。結(jié)果采用組間比較t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表2、3。肺指數(shù)/%=肺濕重(g)/體重(g)X100%病毒對照組肺重-實(shí)驗(yàn)組肺重肺指數(shù)抑制率/%=病毒對照組肺重-正常對照組肺表2忍冬感冒顆粒對FM1株流感病毒小鼠肺炎的治療作用X100%<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與正常組比較##P<0.01;與模型對照組比較，**P<0.01表3忍冬感冒顆粒對PR8株流感病毒小鼠肺炎的治療作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與正常組比較##P<0.01;與模型對照組比較，*P<0.05表2、表3結(jié)果顯示采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8二株病毒感染正常小鼠對照組比較有顯著性差異(P<0.01);感染當(dāng)天開始給予忍冬感冒顆粒治療，4天后三個劑量組肺指數(shù)均有不同程度降低，其中小劑量組與模型對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。3.2治療給藥對流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的死亡保護(hù)作用取小鼠按體重等級隨機(jī)分為6組，分別為正常對照組、模型對照組、達(dá)菲對照組、忍冬感冒顆粒大、中、小三個劑量組，每組10只。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD5。流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染，每只35ul。感染當(dāng)天開始給藥，每次按0.2ml/10g體重灌胃，每天1次，連續(xù)4天，正常對照組和模型對照組在同等條件下蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)觀察感染后14天內(nèi)動物的死亡情況，計算死亡率、死亡保護(hù)率、平均存活天數(shù)和生命延長率。結(jié)果采用組間比較卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表4、5。病毒對照組死亡率-實(shí)驗(yàn)組死亡率死亡保護(hù)率/%=病毒對照組死亡率X100%注與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01表4結(jié)果顯示采用甲型H1N1流感病毒\FM1株病毒感染正常小鼠14天后，動物死亡率為60%，平均存活天數(shù)為8.35天；感染當(dāng)天治療性給予忍冬感冒顆粒4天，中、小二個劑量組動物的死亡數(shù)明顯減少，死亡率分別為40%、35%，死亡保護(hù)率分別為33.33%和41.67%，其中小劑量組與模型對照組比較有顯著性差異(P<0.05);三個劑量組均可延長動物平均存活天數(shù)，分別為9.35天、10.05天、9.85天，其中中劑量組存活天數(shù)增加，與模型對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。表5治療給藥對PR8株流感病毒正常小鼠肺炎的死亡保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01表5結(jié)果顯示采用甲型H1N1流感病毒PR8株病毒感染正常小鼠14天后，動物死亡率為45%，平均存活天數(shù)為10.05天；感染當(dāng)天治療性給予忍冬感冒顆粒4天，三個劑量組動物的死亡數(shù)明顯降低，死亡率分別為10%、15%、20%，死亡保護(hù)率分別為78.78%、66.67%和55.56%，其中大劑量組和中劑量組與模型對照組比較均有顯著性差異(P<0.05);三個劑量組動物平均存活天數(shù)分別為10.40天、10.35天、10.35天，與模型對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。4.結(jié)論(1)采用甲型H1N1流感病毒FM1株和PR8株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型后，感染當(dāng)天給予忍冬感冒顆粒，連續(xù)4天，小劑量組對小鼠肺部炎癥有明顯治療作用。(2)采用甲型H1N1流感病毒FM1株感染正常小鼠造成肺炎模型后，感染當(dāng)天給予忍冬感冒顆粒，連續(xù)4天，感染后14天，觀察到中、小劑量組可降低小鼠死亡數(shù)、延長感染小鼠存活天數(shù)，具有死亡保護(hù)作用。(3)采用甲型H1N1流感病毒PR8株感染正常小鼠造成肺炎模型后，感染當(dāng)天給予忍冬感冒顆粒，連續(xù)4天，感染后14天，觀察到大劑量和中劑量組可明顯降低小鼠的死亡數(shù)，延長感染小鼠存活天數(shù)，具有死亡保護(hù)作用。下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:顆粒劑板藍(lán)根180g忍冬藤180g山豆根90g重樓90g魚腥草270g綿馬貫眾135g青蒿90g白芷90g取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時(或熱回流提取3-4小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.08-1.10(50°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60%，攪勻，冷藏24小時，取上清液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.30-1.35(50°C)的浸膏，取浸膏1份，加蔗糖2-4份及糊精1_2份，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，分裝，即得。功能主治清熱解毒，用于甲型H1N1流感。用法用量沖服，一次12袋，一日3次。實(shí)施例2:片劑板藍(lán)根190g忍冬藤190g山豆根100g重樓100g魚腥草250g綿馬貫眾150g青蒿100g白芷100g取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時(或熱回流提取3-4小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.08-1.10(50°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60%，攪勻，冷藏48小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.20-1.35(50°C)的浸膏，取浸膏加入適量的淀粉和糊精，常規(guī)制粒，干燥，制成顆粒，加入適量的硬脂酸鎂，壓片，包裝，即得。清熱解毒，用于甲型HINI流感。實(shí)施例3:膠囊劑板藍(lán)根165g忍冬藤165g山豆根105g重樓105g魚腥草250g綿馬貫眾120g青蒿100g白芷80g取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時(或熱回流提取3-4小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.08-1.10(50°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60%，攪勻，冷藏24小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度1.20-1.35(50°C)的浸膏，取浸膏加適量淀粉及糊精，混勻，制成顆粒，干燥，整粒，按常規(guī)制成膠囊，包裝，即得。清熱解毒，用于甲型H1N1流感。實(shí)施例4:口服液板藍(lán)根170g忍冬藤170g山豆根80g重樓80g魚腥草290g綿馬貫眾145g青蒿70g白芷70g取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時(或熱回流提取3-4小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.08-1.10(50°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60%，攪勻，冷藏24-48小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，加水至900ml，攪勻，冷藏24-48小時，濾過，加0.25%尼泊金乙酯，攪勻，濾過，加新制蒸餾水至1000ml，經(jīng)常規(guī)制成口服液每支裝10ml，熱壓滅菌，檢漏，質(zhì)檢，包裝，即得。清熱解毒，用于甲型H1N1流感。實(shí)施例5:注射液板藍(lán)根180g忍冬藤180g山豆根90g重樓90g魚腥草270g綿馬貫眾135g青蒿90g白芷90g取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時(或熱回流提取3-4小時)，合并煎液，濾過，煎液濃縮至相對密度為1.08-1.10(50°C)的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60-70%，攪勻，冷藏24-48小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，加注射用水至900ml，攪勻，冷藏24小時，濾過，加注射用水加至1OOOml，調(diào)pH值為5.5-7.5，灌裝，115t:45分鐘滅菌，檢漏，質(zhì)檢，印字，包裝，即得。清熱解毒，用于甲型H1N1流感。權(quán)利要求一種中藥組合物在預(yù)防和治療甲型H1N1流感中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的板藍(lán)根150-210重量份忍冬藤150-210重量份山豆根65-115重量份重樓65-115重量份魚腥草240-310重量份綿馬貫眾110-160重量份青蒿65-115重量份白芷65-115重量份。1.一種中藥組合物在預(yù)防和治療甲型H1N1流感中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的忍冬藤150-210重量份重樓65-115重量份綿馬貫眾110-160重量份白芷65-115重量份。2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的板藍(lán)根180重量份忍冬藤180重量份山豆根90重量份重樓90重量份魚腥草270重量份綿馬貫眾135重量份青蒿90重量份白芷90重量份。3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的板藍(lán)根190重量份忍冬藤190重量份山豆根100重量份重樓100重量份魚腥草250重量份綿馬貫眾150重量份青蒿100重量份白芷100重量份。4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的板藍(lán)根165重量份忍冬藤165重量份山豆根105重量份重樓105重量份魚腥草250重量份綿馬貫眾120重量份青蒿100重量份白芷80重量份。5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物是由下述原料藥制成的板藍(lán)根170重量份山豆根80重量份魚腥草290重量份青蒿70重量份6.如權(quán)利要求1-5任-忍冬藤170重量份重樓80重量份綿馬貫眾145重量份白芷70重量份。-所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下方法制成取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮1-3次，每次煎煮1-3小時；或熱回流提取3-6小時，合并煎液，濾過，煎液濃縮至45-6(TC相對密度為1.05-`1.15的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為50-70%，攪勻，冷藏24-72小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至45-6(TC相對密度1.15-1.40的浸膏，取浸膏，經(jīng)過常規(guī)工序直接或間接加入藥學(xué)上接受的賦型劑制成片劑、口服液、膠囊、顆粒劑、注射劑中的任一種。7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下方法制成取以上八味，去除雜質(zhì)和非藥用部分，加水煎煮兩次，每次煎煮2小時；或熱回流提取3-4小時，合并煎液，濾過，煎液濃縮至5(TC相對密度為1.08-1.10的清膏，待冷至室溫，加乙醇使含醇量為60%，攪勻，冷藏24小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至5(TC相對密度1.20-1.35的浸膏，取浸膏加適量糖粉及糊精，混勻，制成顆粒，干燥，制成1000g，分裝，即得顆粒劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種預(yù)防和治療H1N1病毒性感冒的中藥組合物及其制備方法。該組合物主要由板藍(lán)根、忍冬藤、山豆根、重樓、魚腥草、綿馬貫眾、青蒿、白芷組成。文檔編號A61P31/00GK101695536SQ20091021072公開日2010年4月21日申請日期2009年11月6日優(yōu)先權(quán)日2009年11月6日發(fā)明者任武賢,禹玉洪,許振江申請人:亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;