專利名稱：改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物納米材料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用，公開了一種具有主動(dòng)靶向腫瘤
細(xì)胞能力的改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
抗腫瘤藥物的主動(dòng)靶向性和低毒副作用對(duì)疾病的臨床治療十分重要，而作為藥物 的載體，如何最大程度發(fā)揮藥物藥效，減少用藥次數(shù)與劑量，提高藥物的利用率及其療效， 是其中一個(gè)十分關(guān)鍵的問題。研究認(rèn)為理想的抗腫瘤藥物載藥系統(tǒng)能將抗腫瘤藥物選擇性 蓄積于體內(nèi)癌變部位，降低藥物對(duì)正常組織的毒副作用，提高藥物的生物利用度，從而提高 藥效，這是當(dāng)前抗腫瘤藥物研發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。 殼聚糖是唯一一種天然存在的親水陽離子可生物降解多糖，其分解產(chǎn)物是可被人 體完全吸收的氨基糖，具有良好的生物相容性。殼聚糖分子中富含游離的氨基和羥基，既可 以和抗腫瘤藥物以酰鍵或酰胺鍵偶連，也可以與腫瘤細(xì)胞表面特異表達(dá)的受體或配體進(jìn)行 連接。但現(xiàn)有的以殼聚糖為基礎(chǔ)的納米微球有易離解，控釋性能不好，載藥量和藥物包封率 不高，靶向性不強(qiáng)等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有的以殼聚糖為基礎(chǔ)的納米微球的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的旨在提供一種粒徑 小、藥物包封率高、載藥量大、靶向生物分子偶聯(lián)效率高、制備條件溫和、靶向性強(qiáng)的改性殼 聚糖靶向載藥納米微球。 本發(fā)明另一 目的旨在提供上述靶向載藥納米微球的制備方法。
具體通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的 本發(fā)明首先提供了一種改性殼聚糖耙向載藥納米微球，是先將殼聚糖改性為羧甲 基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交 聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學(xué)修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面， 得到改性殼聚糖耙向載藥納米微球。
生物交聯(lián)劑常用如碳二亞胺等。 優(yōu)選地，所述羧甲基殼聚糖(CMCS)通過以下方法制備將5-15g殼聚糖(CS)溶解 于50-150ml異丙醇溶液中，在攪拌條件下加入質(zhì)量濃度為50 %的NaOH溶液20-100ml，讓 殼聚糖在堿性條件下膨脹，在O-l(TC下存放6-18h使其堿化完全；在30-5(TC下，將2-10g 固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出羧甲基殼聚糖粗成品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液pH至7.0， 然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜質(zhì)，干燥，得到白色粉狀羧甲基殼聚 糖。 優(yōu)選地，所述靶向性生物分子是為能與腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體分子結(jié)合的生 物分子，如轉(zhuǎn)鐵蛋白或葉酸等。優(yōu)選地，所述改性殼聚糖耙向載藥納米微球的平均粒徑為80-160nm。
4
本發(fā)明還提供了上述改性殼聚糖靶向載藥納米微球的制備方法，是將羧甲基殼聚 糖(CMCS)、碳二亞胺(EDAC)和藥物加入醋酸緩沖溶液，反應(yīng)完全后，離心收集，干燥，制得 納米載藥微球；再在其表面通過化學(xué)修飾的方法與具靶向作用的生物分子結(jié)合。需要根據(jù) 不同的藥物類型調(diào)整各組分的加入比例。 本發(fā)明以阿霉素(ADR)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)為典型，提供了兩種載藥納米微球 優(yōu)選的制備方法。 —種轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球(Tf-ADR/CMCS)，是由以下方 法制備的 (1)羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球(ADR/CMCS)的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按(1. 0-5. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 2-0. 8)
的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和阿霉素，攪拌反應(yīng)5-40min，離心收集載藥微球，干 燥，制得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球； (2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。
所述用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾又優(yōu)選使用如下的方法 將l-3mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶解于l-3ml水中， 制得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液；將l-10mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶解在l-3ml，30mmol/L， pH 5. 0的醋酸鈉溶液中，將20-120 ii g的高碘酸鈉與其混合，冰浴下反應(yīng)20-160min ;在 50-100 iU，O. lmol/L的碳二亞胺存在下，將氧化后的轉(zhuǎn)鐵蛋白80-100 y g加入l_2ml的羧 甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液中，反應(yīng)10-60min，得到轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載 阿霉素納米微球。 —種轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球(Tf-5-Fu/CMCS)，是由 以下方法制備的 (1)羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球(Tf-5-Fu/CMCS)的制備 在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按(1. 0-7. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 5-2. 5)
的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和5-氟尿嘧啶，攪拌反應(yīng)5-60min，離心收集，干燥， 制備出羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球； (2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。
所述用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾又優(yōu)選使用如下的方法 將2-4mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載5_氟尿嘧啶納米微球溶解于2_5ml 水中，制得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液；將2-12mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶解在 2-5ml，30mmol/L， pH 5. 0的醋酸鈉溶液中，然后加入10-140 y g的高碘酸鈉，冰浴下反應(yīng) 10-150min ;在60-120 yl， 0. lmol/L碳二亞胺存在下，將90-120 y g氧化后的轉(zhuǎn)鐵蛋白加入 到l-3ml的羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液中，反應(yīng)5-50min，得到轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向 羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球。 本發(fā)明的基本技術(shù)原理為是采用改性的羧甲基殼聚糖為藥物運(yùn)輸載體來制備納 米載藥微球；將靶向性生物分子修飾在載藥微球的表面，利用靶向性生物分子和腫瘤細(xì)胞 表面高度表達(dá)的受體分子間特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)載藥納米微球的主動(dòng)靶向作用。將殼聚糖選 擇性的改性成羧甲基殼聚糖，增加殼聚糖上的活性羧基，提高納米微球的載藥量、藥物包封 率和靶向生物分子偶聯(lián)效率。以抗腫瘤藥物為模型藥物，采用羧甲基殼聚糖為藥物運(yùn)輸載
5體制備載藥納米微球，將靶向生物分子修飾在載藥納米微球表面，有助于提高載藥納米藥 物的"主動(dòng)"靶向作用。 相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果 本發(fā)明將殼聚糖上的活性羥基進(jìn)行選擇性改性生成羧甲基殼聚糖，采用生物交聯(lián) 劑將藥物(如ADR、5-Fu)上的活性氨基和CMCS上的活性羧基交聯(lián)生成載藥納米微球；并通 過化學(xué)修飾方法將具有靶向作用的生物分子(如轉(zhuǎn)鐵蛋白)連接在載藥微球的表面，從而 實(shí)現(xiàn)載藥微球的主動(dòng)靶向性能。CMCS靶向載藥微球的平均粒徑約為100-150nm，具有載藥 量大、藥物包封率高、靶向生物分子偶聯(lián)效率高等特點(diǎn)，有助于提高藥物的靶向性，實(shí)現(xiàn)藥 物緩釋和具有較強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)。 體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的靶向載藥納米微球能明顯延緩藥物的釋放，具有 良好的緩釋效果。本發(fā)明的載藥納米微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的殺傷率在量效和時(shí)效上明顯比同劑 量的單獨(dú)藥物的殺傷率高，載藥微球表面修飾上靶向生物分子后能進(jìn)一步增強(qiáng)載藥納米藥 物的靶向殺傷性。


圖1為本發(fā)明所制備的ADR/CMCS納米微球的原子力顯微鏡圖片，顆粒的平均粒徑 為110nm。 圖2為ADR/CMCS納米微球體外釋放曲線，溶出介質(zhì)分別為模擬胃液(pH 4. 0醋酸 緩沖液)、模擬體液(PH7. 4磷酸鹽緩沖液)。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ADR/CMCS載藥微球能 明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 圖3為Tf-ADR/CMCS納米微球?qū)θ撕砟[瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制圖，與單獨(dú)ADR相比，載 藥納米微球修飾上靶向性生物分子后對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率在量效上有了明顯的提高。
圖4為本發(fā)明所制得的5-Fu/CMCS納米微球的原子力顯微鏡圖片，微球平均粒徑 為100nm。 圖5為5-Fu/CMCS納米微球體外釋放曲線，溶出介質(zhì)分別為模擬胃液(pH 4. 0醋 酸緩沖液)、模擬體液(PH7. 4磷酸鹽緩沖液)。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明5-Fu/CMCS納米微 球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 圖6為Tf-5-Fu/CMCS納米微球?qū)θ撕砟[瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制圖，與單獨(dú)5_Fu相比， 載藥納米微球修飾上靶向生物分子后對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率在量效上有了明顯的提高。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)方式并不局限 于此。 實(shí)施例1 :Tf-ADR/CMCS納米微球的制備方法和應(yīng)用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將5g殼聚糖(CS)溶解于50ml異丙醇溶液中， 在攪拌條件下加入質(zhì)量濃度為50%的NaOH溶液20ml，使殼聚糖在堿性條件下膨脹，在0°C 下存放6h使其堿化完全；在3(TC下，將2g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗成 品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液pH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質(zhì)，干燥，得到白色粉狀CMCS。
(2) ADR/CMCS納米微球的制備在pH 4. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按 1.0 : 0.5 : 0. 2的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和ADR，攪拌反應(yīng)lOmin，離心收集， 干燥，制得ADR/CMCS納米微球。納米微球的平均粒徑為110nm(圖1)，平均載藥量為35%， 平均藥物包封率為55%。 (3) Tf-ADR/CMCS納米微球的制備將lmgADR/CMCS納米微球溶解于lml水中，制 備ADR/CMCS納米微球溶液；將lmg轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)溶解在lml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將20 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應(yīng)20min ;在50 iU，O. lmol/ L碳二亞胺存在下，將80 ii g氧化后的Tf和lml ADR/CMCS納米微球溶液反應(yīng)10min，制得 Tf-ADR/CMCS納米微球。 (4)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的體外釋藥特性采用動(dòng)力學(xué)透析法 進(jìn)行體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，觀察載藥納米微球的體外釋藥特性。設(shè)定溫度為37±0. 5t:，將載藥 納米微球裝入透析袋中封嚴(yán)，放在恒溫箱中進(jìn)行透析。溶出介質(zhì)分別為模擬胃液(PH 4.0 醋酸緩沖液)、模擬體液(PH 7.4磷酸鹽緩沖液)，間隔一小時(shí)取出5ml透析液，測(cè)定透析 量，同時(shí)補(bǔ)充新鮮的介質(zhì)。采用熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定不同時(shí)間ADR的釋放量，繪制載藥納米微 球的體外釋放曲線。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果(如圖2)表明，當(dāng)釋藥時(shí)間達(dá)到5天時(shí)還有40% ADR未釋放到溶液中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。
(5)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制作用。MTT法測(cè)定上述靶向載藥納米微球?qū)θ撕砟[瘤細(xì)胞的殺傷率，結(jié)果表明靶向載藥 微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的殺傷率在量效和時(shí)效上明顯比同劑量的單獨(dú)ADR抗腫瘤藥物的殺傷率 高，載藥納米微球表面修飾上Tf后能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷率(圖3)。
實(shí)施例2 :Tf-ADR/CMCS納米微球的制備方法和應(yīng)用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將15g殼聚糖(CS)溶解于150ml異丙醇溶液 中，在攪拌條件下加入質(zhì)量濃度為50% NaOH溶液lOOml，使殼聚糖在堿性條件 下膨脹，在 l(TC下存放18h使其堿化完全；在5(TC下，將lOg固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS 粗成品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液PH至7. O，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子 雜質(zhì)，干燥，得到白色粉狀CMCS 。 (2) ADR/CMCS納米微球的制備在pH 7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按 5. 0 : 1.5 : 0. 8的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和ADR，攪拌反應(yīng)40min，離心收集， 干燥，制得ADR/CMCS納米微球。載藥納米微球的平均粒徑為1 lOnm，平均載藥量為40% ，平 均藥物包封率為60%。 (3) Tf-ADR/CMCS納米微球的制備將3mgADR/CMCS納米微球溶解于3ml水中，制 備ADR/CMCS納米微球溶液。將10mg轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)溶解在3ml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將120 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應(yīng)160min ;在100 yl， 0. lmol/L碳二亞胺存在下，將lOOii g氧化后的Tf和2ml ADR/CMCS納米微球溶液反應(yīng) 60min，制得Tf-ADR/CMCS納米微球。 (4) Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的體外釋藥特性。體外釋放實(shí)驗(yàn)的方法 同實(shí)施例1。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)釋藥時(shí)間達(dá)到5天時(shí)還有50% ADR未釋放到溶液 中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 (5)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。MTT實(shí)驗(yàn)的方法同實(shí)施例1。與實(shí)施例1的結(jié)果類似，耙向載藥微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的 殺傷率在量效和時(shí)效上明顯比同劑量的單獨(dú)ADR抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球表 面修飾上Tf后能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷率。
實(shí)施例3 :Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備方法和應(yīng)用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將6g殼聚糖(CS)溶解于60ml異丙醇溶液中， 在攪拌條件下加入質(zhì)量濃度為50%的NaOH溶液30ml，讓殼聚糖在堿性條件下膨脹，在2°C 下存放7h使其堿化完全；在35t:下，將6g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗成 品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液PH至7.0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質(zhì)，干燥，得到白色粉狀CMCS。 (2) 5-Fu/CMCS納米微球的制備在pH 4. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按 1. 0 : 0. 5 : 0. 5的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和5-Fu，攪拌反應(yīng)10min，離心收集， 干燥，制得5-Fu/CMCS納米微球。該納米微球的平均粒徑為100nm(圖4)，平均載藥量為 40 % ，平均藥物包封率為60 % 。 (3)Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備將2mg5_Fu/CMCS納米微球溶解于2ml水中， 制備5-Fu/CMCS納米微球溶液。將4mg轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)溶解在2ml醋酸鈉溶液(30mmol/L，pH 5. 0)中，將10 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應(yīng)20min ;在60 iU，O. lmo1/ L碳二亞胺存在下，將90 ii g氧化后的Tf和lml 5-Fu/CMCS納米微球溶液反應(yīng)10min，制得 Tf-5-Fu/CMCS納米微球。 (4)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制作用。體外釋放實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1的步驟。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)釋藥時(shí)間達(dá)到5天 時(shí)還有30% 5-Fu未釋放到溶液中(圖5)，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的 緩釋效果。 (5)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制作用。MTT實(shí)驗(yàn)的方法同實(shí)施例1。結(jié)果表明靶向載藥微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的殺傷率在量效 和時(shí)效上明顯比同劑量的單獨(dú)5-Fu抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球表面修飾上Tf 后能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷率(圖6)。
實(shí)施例4 :Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備方法和應(yīng)用 (1)羧甲基殼聚糖的制備(CMCS):將12g殼聚糖(CS)溶解于130ml異丙醇溶液 中，在攪拌條件下加入質(zhì)量濃度為50 %的NaOH溶液90ml ，讓殼聚糖在堿性條件下膨脹，在 8t:下存放17h使其堿化完全；在45t:下，將8g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗 成品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液PH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質(zhì)，干燥，得到白色粉狀CMCS。 (2) 5-Fu/CMCS納米微球的制備在pH 7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按 7 : 1.5 : 2. 5的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)，攪拌反應(yīng)60min， 離心收集，干燥，制得5-Fu/CMCS納米微球。載藥納米微球的平均粒徑為100nm，平均載藥量 為45 % ，平均藥物包封率為65 % 。 (3) Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備將4mg 5-Fu/CMCS納米微球溶解于5ml水中， 制備5-Fu/CMCS納米微球溶液。將12mg轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)溶解在5ml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將140 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應(yīng)150min ;在120 yl，
80. lmol/L碳二亞胺存在下，將120 ii g氧化后的Tf和3ml 5-Fu/CMCS納米微球溶液反應(yīng) 60min，制得Tf-5-Fu/CMCS納米微球。 (4)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制作用。體外釋放實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1的步驟。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)釋藥時(shí)間達(dá)到5天 時(shí)還有35% 5-Fu未釋放到溶液中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效 果。 (5)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑 制作用。MTT實(shí)驗(yàn)的方法同實(shí)施例1。與實(shí)施例3的結(jié)果類似，耙向載藥微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的 殺傷率在量效和時(shí)效上明顯比同劑量的單獨(dú)5-Fu抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球 表面修飾上Tf后能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷率。 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于是先將殼聚糖改性為羧甲基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學(xué)修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面，得到改性殼聚糖靶向載藥納米微球。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述羧甲基殼 聚糖由以下方法制備將5-15g殼聚糖溶解于50-150ml異丙醇溶液中，在攪拌條件下加 入質(zhì)量濃度為50 %的NaOH溶液20-100ml，使殼聚糖在堿性條件下膨脹，在O-l(TC下存放 6-18h使其堿化完全；在30-5(TC下，將2-10g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出羧甲基殼 聚糖粗成品；利用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液PH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小 分子雜質(zhì)，干燥，得到白色粉狀羧甲基殼聚糖。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述靶向性生 物分子為能與腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體分子結(jié)合的生物分子。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述靶向性生 物分子為轉(zhuǎn)鐵蛋白或葉酸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所 述載藥納米微球的粒徑為80-160nm。
6. 權(quán)利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球的制備方法，其特征在于將羧甲 基殼聚糖、碳二亞胺和藥物加入醋酸緩沖溶液，反應(yīng)完全后，離心收集，干燥，制得納米載藥 微球；再在其表面通過化學(xué)修飾的方法與靶向性生物分子結(jié)合。
7. —種轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球，其特征在于是由以下方法制備的(1) 羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按(1. 0-5. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 2-0. 8)的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和阿霉素，攪拌反應(yīng)5-40min，離心收集載藥微球，干燥，制 得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球；(2) 步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球，其特征在 于步驟(2)所述用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾具體為將l-3mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶解于l-3ml水中，制得羧 甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液；將l-10mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶解在l-3ml，30mmol/L，pH 5. 0的 醋酸鈉溶液中，將20-120 ii g的高碘酸鈉與其混合，冰浴下反應(yīng)20-160min ;在50-100 yl， 0. lmol/L的碳二亞胺存在下，將氧化后的轉(zhuǎn)鐵蛋白80-100 ii g加入l_2ml的羧甲基殼聚糖 載阿霉素納米微球溶液中，反應(yīng)10-60min，得到轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米 微球。
9. 一種轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球，其特征在于是由以下方 法制備的(1)羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質(zhì)下，按(1. 0-7. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 5-2. 5)的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和5-氟尿嘧啶，攪拌反應(yīng)5-60min，離心收集，干燥，制備出羧甲基殼聚糖載5_氟尿嘧啶納米微球；(2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球，其特征在于步驟(2)中所述用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾具體為將2-4mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶解于2-5ml水中，制 得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液；將2-12mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶解在2-5ml，30mmo1/ L， pH 5. O的醋酸鈉溶液中，然后加入10-140 iig的高碘酸鈉，冰浴下反應(yīng)10-150min;在 60-120 iU，O. lmol/L碳二亞胺存在下，將90-120 ii g氧化后的轉(zhuǎn)鐵蛋白加入到l-3ml的羧 甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液中，反應(yīng)5-50min，得到轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向羧甲基殼聚 糖載5-氟尿嘧啶納米微球。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法。本發(fā)明是將殼聚糖改性為羧甲基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學(xué)修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面，得到改性殼聚糖靶向載藥納米微球。該載藥納米微球粒徑小、藥物包封率高、載藥量大、靶向生物分子偶聯(lián)效率高、制備條件溫和、靶向性強(qiáng)、藥物毒副作用低，能提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向作用和緩釋作用，從而增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率。
文檔編號(hào)A61K47/48GK101716145SQ200910213719
公開日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月9日
發(fā)明者張文豪, 楊培慧, 蔡懷鴻, 蔡繼業(yè) 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)