專利名稱：膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子及制備方法，即將水不
溶性的可德蘭多糖用氯乙酸進(jìn)行親水改性，再用膽固醇與羧甲基可德蘭交聯(lián)形成膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖偶合物，以及該聚合物多糖作為抗腫瘤藥物載體包載藥物的制備方法及其在動(dòng)物體內(nèi)的作用。
背景技術(shù)：
藥物傳遞系統(tǒng)(drug delivery system, DDS)是國內(nèi)外醫(yī)藥領(lǐng)域的重要研究方向，特別是與抗癌藥物組成的納米控緩釋系統(tǒng)，運(yùn)用特殊的載體將藥物轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的納米粒子，其突出優(yōu)點(diǎn)是納米微粒體積小，可在血液中自由運(yùn)行，具有穿過靶組織內(nèi)皮細(xì)胞的能力，可越過許多生物屏障到達(dá)病灶部位，可被腫瘤細(xì)胞攝取進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將所包含的藥物在細(xì)胞和/或亞細(xì)胞水平釋放，在降低副作用的同時(shí)大大提高了藥物療效，還可提高難溶性藥物的溶解性，增加藥物與胃腸道液體的有效接觸面積，有利于提高藥物利用率。
作為藥物載體，基于天然高分子材料制備自聚集納米粒子得到更加廣泛的關(guān)注。多糖是自然界比較豐富的天然高分子聚合物，許多多糖還具有抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性，因此對(duì)多糖及其衍生物進(jìn)行修飾形成兩親性接枝共聚物在醫(yī)藥和生物技術(shù)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。如殼聚糖、葡聚糖、普魯蘭，可德蘭多糖等，其生物相容性好、毒性低，并具有納米粒載體表面的修飾功能，能明顯延長藥物在體內(nèi)的保留時(shí)間，避免吞噬細(xì)胞的吞噬，增加藥物療效。其中可德蘭多糖(Curdlan)是糞產(chǎn)堿桿菌通過發(fā)酵產(chǎn)生的一種細(xì)菌性多糖，由1， 3-P連接的D-葡萄糖單元構(gòu)成的線性多糖，它有潛在的抑制艾滋病病毒感染、抗腫瘤活性、抗凝血活性，并且在體外和體內(nèi)低毒。由于可德蘭在溫度升高到一定程度時(shí)有形成彈性凝膠的作用，并且它有強(qiáng)大的生物學(xué)活性，因此它常常被用作食品添加劑，具有良好的生物相容性，體內(nèi)可降解，是一種良好的藥物載體材料?？傻绿m不溶于水，這樣限制了它的生物學(xué)應(yīng)
用。羧甲基取代是提高許多多糖功能特性的方法，可德蘭的羧甲基衍生物有良好的水溶性和生物活性。研究表明，羧甲基可德蘭有抗腫瘤活性，盡管它的這種抗腫瘤作用機(jī)制還不完全清楚(Sasaki T，et al :Cancer Res， 1978,38 :379-384)。羧甲基可德蘭也許不是直接作用于腫瘤細(xì)胞，文獻(xiàn)(0hya Y， et al :Carbohydr Polym， 1994， 23 :47-54)報(bào)道了胞壁酰二肽類似物(GADP)羧甲基可德蘭偶聯(lián)物的免疫增強(qiáng)活性，表明這種免疫增強(qiáng)活性不僅僅是使GADP具有了聚合物的特征，而且是因?yàn)镚ADP和具有免疫活性的多糖——可德蘭的雜化引起的。 目前，對(duì)可德蘭衍生物進(jìn)行修飾的研究比較少，主要有磺酰脲修飾的羧甲基可德蘭(Na K， et al :J Control Release, 2000， 69 :225-236);脫氧膽酸修飾的羧甲基可德蘭(Gao F P， et al :Carbohydr Poly， 2008， 71 :606-613)等等。膽固醇具有良好的生物相容性，有潛在的與細(xì)胞表面的膽固醇受體結(jié)合的作用(Yeagle PL， Biochimie， 1991， 73 :1303-1310)，且有很強(qiáng)的促進(jìn)膽固醇偶合物自聚集的作用(Yusa S，et al :Langmuir， 1998，14 :6059-6067)。但是，迄今為止，膽固醇與羧甲基可德蘭多糖偶合物，通過透析加探頭超聲法制備納米粒子作為抗腫瘤藥物載體的研究尚未見任何文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子及制備方法。本發(fā)明是一種新型，價(jià)廉易得，可大規(guī)模生產(chǎn)的納米載體，并可提高納米載體的靶向性，降低抗腫瘤藥物的毒副作用，克服現(xiàn)有藥物載體的一些不足。 本發(fā)明提供的一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子，它是以膽固醇、羧甲基可德蘭多糖為原料，羧甲基可德蘭的羧基經(jīng)1- (3_ 二甲氨基丙基)_3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHC1)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)首先活化再與膽固醇反應(yīng)合成，摩爾配比羧甲
基可德蘭多糖膽固醇edc : nhs = i : o. 2 o. 5 : i : o. 5，具體步驟 以異丙醇溶劑為可德蘭多糖與氯乙酸反應(yīng)，反應(yīng)液在乙醚中沉淀，洗滌，干燥得到羧甲基可德蘭多糖；羧甲基可德蘭多糖在無水二甲基亞砜中用1- (3- 二甲氨基丙基)_3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHC1)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化，再與膽固醇反應(yīng)，產(chǎn)物在丙酮中沉淀，四氫呋喃洗滌，水中溶解，透析，凍干；最后生理鹽水中透析，超聲，經(jīng)微孔濾膜過濾，即得自聚集納米粒子。 所述的膽固醇(疏水基團(tuán))可以用膽酸、脫氧膽酸、5P-去羥基膽酸、亞油酸、亞麻酸、硬脂酸、十六酸、磺酰脲衍生物等替換。 所述的可德蘭多糖分子量范圍為8， 000 2， 000， 000。 本發(fā)明提供的一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子的制備方法包括的步
驟 1)將可德蘭多糖與異丙醇混合，室溫下攪拌30min，然后加入30%氫氧化鈉，至堿性，室溫下攪拌90min得到均一溶液，然后加入氯乙酸，在50 6(TC下反應(yīng)5h ;反應(yīng)液倒入乙醚中使產(chǎn)物沉淀；沉淀分別用甲醇_乙酸(7 : 3， v/v)，甲醇-水(4 : 1， V/V)，甲醇，丙酮洗滌，干燥得羧甲基可德蘭多糖，可德蘭多糖與氯乙酸的摩爾比(l : 0.75);
2)羧甲基可德蘭多糖通過水浴超聲溶于無水二甲基亞砜中，加入l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edc HC1)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化劑進(jìn)行活化反應(yīng)，室溫下攪拌30min ; 3)將溶有膽固醇的四氫呋喃溶液加入到羧甲基可德蘭多糖溶液中，繼續(xù)在45t:下反應(yīng)48h，將反應(yīng)混合物倒入丙酮中沉淀，過濾并收集沉淀，分別用水-四氫呋喃(1 : 5，V/V)和四氫呋喃洗滌幾次，最后將產(chǎn)物溶于水，用蒸餾水透析三天后凍干，得白色絮狀物質(zhì)。 4)將膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖溶于二甲基亞砜-水(1 : 1，V/V)中，于生理鹽水中透析24h，然后用探頭超聲儀40W超聲2min，超聲也采用脈沖工作方式，超聲重復(fù)兩次，經(jīng)微孔濾膜過濾，即得膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子。
本發(fā)明提供的一種包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子，它是以膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子為載體，用硫酸銨梯度法包載抗腫瘤藥物，載藥納米粒子的粒徑為290 510nm。 所述的抗腫瘤藥物與膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子的質(zhì)量比為1 5 : 5。所述的包載藥物為表阿霉素、阿霉素、柔紅霉素、全反式維甲酸、紫杉醇、甲氨蝶呤、喜樹堿等。 本發(fā)明提供的包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子載藥納米粒子的制備方法包括的步驟 1)將膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖分散于O. 15mol/L的硫酸銨溶液，于37t:、50rpm的條件下振蕩24h，用探頭超聲儀40W超聲2min，然后置于透析袋中，在生理鹽水中透析4h，即得空白膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子。 2)將抗腫瘤藥物與載體材料按比例混合，避光下放置24h，采用超濾法(5000rpm，10mim)除去游離的藥物，收集超濾管上層，冷凍干燥即得載藥納米粒子。
所述的透析袋的截留分子量為8 12kDa。
所述的超濾法中的超濾管的截留分子量為10kDa。 本發(fā)明公開了一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖的合成及其自聚集納米粒的制備方法，以該復(fù)合物為載體的載藥納米粒的制備以及該載藥納米粒在動(dòng)物體內(nèi)的作用。首先通過對(duì)可德蘭進(jìn)行羧甲基化增強(qiáng)其水溶性，然后用膽固醇對(duì)其進(jìn)行疏水改性，以得到一種兩親性的聚合物，以有利于納米粒子的制備及疏水藥物的包載。以表阿霉素為模型藥物采用硫酸銨梯度法制備載藥納米粒子，并通過對(duì)大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)載藥納米粒子的作用。結(jié)果表明，用硫酸銨梯度梯度法制備載藥納米粒子方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，載藥率高，易于工業(yè)化生產(chǎn)，且載藥納米粒子能大大延長藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，并能明顯改變藥物在不同臟器的分布，達(dá)到降低毒副作用、延長體內(nèi)循環(huán)時(shí)間、提高藥物的生物利用率的作用。 本發(fā)明所述的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子形態(tài)呈球形，粒徑呈單峰分布。本載體由膽固醇與羧甲基可德蘭多糖經(jīng)化學(xué)結(jié)合而成，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，能夠包載雙親性和疏水性的抗腫瘤藥物，延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，對(duì)藥物有緩慢釋放的作用，從而實(shí)現(xiàn)藥物緩釋、降低藥物毒副作用；該材料具有良好的生物相容性、可降解性和無免疫原性，而且各種原料廉價(jià)易得，制備工藝簡(jiǎn)單方便、條件溫和，是一種較好的抗腫瘤藥物的載體材料。


圖1為羧甲基可德蘭的^-NMR譜圖。 圖2為膽固醇偶聯(lián)的羧甲基可德蘭的力-NMR譜圖。 圖3為空白膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子的透射電鏡照片。
圖4為空白膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子的粒徑分布圖。
圖5為包載表阿霉素的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子的透射電鏡照片。 圖6為包載表阿霉素的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子在大鼠體內(nèi)的藥物釋放圖。 圖7為包載表阿霉素的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子在大鼠體內(nèi)的組織分布圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :羧甲基可德蘭(CMC)的化學(xué)合成
將分子量為81， 000的可德蘭多糖3g加入到80mL異丙醇中，室溫下攪拌30min，然 后加入8mL 30X氫氧化鈉至上述反應(yīng)液中，室溫下繼續(xù)攪拌90min。將3.6g氯乙酸加入上 述反應(yīng)液中，混合物繼續(xù)在50 6(TC攪拌5h，產(chǎn)物過濾收集，并分別用甲醇-乙酸(7 : 3， v/V)混合溶劑，甲醇-水(4 : 1， v/v)混合溶劑，甲醇，丙酮洗滌，除去未反應(yīng)完全的氯乙 酸，最后將沉淀溶于水，用蒸餾水透析三天，低壓凍干，得到白色粉末。核磁法和電位滴定法 測(cè)得羧甲基的取代度為75%。 羧甲基可德蘭的氫核磁光譜CH-NMR)見圖1 (溶劑氖代重水D20);與可德蘭多 糖相比，在S 4. 5ppm出現(xiàn)羧甲基的質(zhì)子信號(hào)峰，表明羧甲基連接于可德蘭上。
實(shí)施例2 :膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖偶合物(CCMC)的合成
將O. 8g蓬松的羧甲基可德蘭(CMC)(羧基含量3mmoL)通過水浴超聲溶于40mL無 水二甲基亞砜(DMSO)，加入0. 57g(3,L)碳二亞胺(EDC)和0. 17g(l. 5mmoL)N-羥基琥珀 酰亞胺(NHS)室溫下攪拌30min。然后將溶有0. 35g(0. 9mmoL)膽固醇的四氫呋喃溶液10mL 加入到上述羧甲基可德蘭多糖溶液中，繼續(xù)在45t:下反應(yīng)，48h后將反應(yīng)混合物倒入200mL 丙酮中沉淀，過濾并收集沉淀，分別用水-四氫呋喃(1 : 5，V/V)、四氫呋喃洗滌3次，最后 將產(chǎn)物溶于水，用蒸餾水透析三天后凍干，得白色絮狀物質(zhì)，即為膽固醇基-羧甲基可德蘭 多糖偶合物。高效液相法測(cè)得膽固醇的取代度為3. 5%。 所得的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖的氫核磁光譜CH-NMR)見圖1 (溶劑氖代二 甲基亞砜:氖代重水，DMS0-d6/D20，5/l， v/v);與羧甲基可德蘭相比在S 0. 99 3. 15卯m 處出現(xiàn)膽固醇的特征峰，表明膽固醇是通過化學(xué)鍵連接在羧甲基可德蘭上。
實(shí)施例3 :包載表阿霉素的CCMC納米粒子的制備 將膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖溶于二甲基亞砜-水(1 : 1，V/V)中，于生理鹽 水中透析24h，然后用探頭超聲儀40W超聲2min，超聲也采用脈沖工作方式，超聲重復(fù)兩次， 經(jīng)微孔濾膜過濾，即得CCMC自聚集納米粒子。CCMC自聚集納米粒子形態(tài)呈均勻的球形，見 圖3 ;粒徑呈單峰分布，見圖4。 將20mg膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖分散于8mL硫酸銨溶液(0. 15mol/L)中， 于37°C、50rpm的條件下振蕩24h，用探頭超聲儀40W超聲2min，然后置于透析袋中，在生理 鹽水中透析4h，即得空白膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子，調(diào)整溶液濃度為 2. Omg/mL。將20mg表阿霉素溶解于10mL生理鹽水中，將藥物/材料溶液按0. 3 : 1的體 積比混合，避光下室溫放置24h，采用超濾法除去游離的藥物，收集超濾管上層。將沉淀重新 分散，可得到載藥納米懸液。取200iiL納米懸液于lOmL容量瓶中，加入匿SO使納米粒溶 解，在熒光分光光度計(jì)在Aem 589nm測(cè)定吸收度。根據(jù)表阿霉素在匿SO中的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出 表阿霉素濃度，并計(jì)算出載藥量和包封率。CCMC納米粒子的載藥量可以達(dá)到39. 6%，最高 包封率達(dá)73.8%。載藥納米粒子呈均勻的球形，見圖5。 實(shí)施例4 :包載表阿霉素的CCMC納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布 采用Wister大鼠，通過尾靜脈注射游離藥物和載藥納米粒子，用高效液相法或熒
光檢測(cè)法分析藥物在大鼠血液中的代謝情況，以及在大鼠不同臟器中的分布情況，評(píng)價(jià)載
體材料的優(yōu)缺點(diǎn)。 具體實(shí)施步驟 將成年雄性Wister大鼠12只(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供)隨機(jī)分為兩組，通過尾靜脈注射，按10mg/kg的藥物劑量分別注射游離表阿霉素和包載表阿霉素的 CCMC納米粒子。給藥后分別在第2，5， 10， 15，30min， 1，2，4，8， 12， 24， 36， 48， 96， 168h通過外 眼眶取血，每次O. 3 0. 5mL，加至含20ii L肝素的2mL E卯endorf管中，離心分離血漿。然 后加入氯仿-甲醇(4 : 1)萃取液1.0mL，渦旋振蕩2min，置于高速離心機(jī)中，4。C，10000r/ min離心10min，將有機(jī)層全部轉(zhuǎn)移至另一離心管中，重復(fù)提取兩次，合并有機(jī)相，于37t:下 氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 ii L色譜甲醇溶解，取20 ii L進(jìn)高效液相檢測(cè)。通過血藥濃度標(biāo)準(zhǔn)曲 線計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度。結(jié)果見圖6。結(jié)果表明包載表阿霉素的CCMC納米粒子在體內(nèi) 的作用時(shí)間更長且呈現(xiàn)較高的藥物濃度，能起到長循環(huán)和緩釋作用。 將成年雌性Wister大鼠24只(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供)隨機(jī)分 為兩組，每組設(shè)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)有3只大鼠。通過尾靜脈注射，按8mg/kg的藥物 劑量分別注射游離表阿霉素和包載表阿霉素的CCMC納米粒子。給藥后分別在第30min，8， 24和72h處死大鼠，收集心、肝、脾、肺和腎等臟器，生理鹽水清洗并用濾紙擦干，分別稱取 一定量臟器于lmL PBS(pH7.4)中勻漿，然后加入氯仿_甲醇(4 : 1)萃取液1. OmL，渦旋 振蕩2min，置于高速離心機(jī)中，4t:， 10000r/min離心10min，將有機(jī)層全部轉(zhuǎn)移至另一離心 管中，重復(fù)提取兩次，合并有機(jī)相，于37t:下氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)觢OOiiL色譜甲醇溶解，用熒 光分光光度計(jì)在AM 589nm下檢測(cè)。通過組織臟器熒光濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的藥物 濃度。結(jié)果見圖7。結(jié)果表明包載表阿霉素的CCMC納米粒子能顯著改變藥物在體內(nèi)的分 布，大大降低藥物在心臟和腎臟中的分布，提高藥物在肝臟中的分布，從而顯著降低了藥物 對(duì)心臟的毒副作用并減少了腎小球?qū)λ幬锏倪^濾作用，從而表明了膽固醇基-羧甲基可德 蘭多糖自聚集納米粒子是一種有效的藥物載體，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。
8
權(quán)利要求
一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子，其特征在于它是以膽固醇、羧甲基可德蘭多糖為原料，羧甲基可德蘭的羧基經(jīng)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)首先活化再與膽固醇反應(yīng)合成，摩爾配比羧甲基可德蘭多糖∶膽固醇∶EDC∶NHS＝1∶0.2～0.5∶1∶0.5，具體步驟以異丙醇溶劑為可德蘭多糖與氯乙酸反應(yīng)，反應(yīng)液在乙醚中沉淀，洗滌，干燥得到羧甲基可德蘭多糖；羧甲基可德蘭多糖在無水二甲基亞砜中用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化，再與膽固醇反應(yīng)，產(chǎn)物在丙酮中沉淀，四氫呋喃洗滌，水中溶解，透析，凍干；最后生理鹽水中透析，超聲，經(jīng)微孔濾膜過濾，即得自聚集納米粒子。
2. 按照權(quán)利要求1所述的膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖納米粒子，其特征在于所述的 膽固醇用膽酸、5 13 -去羥基膽酸、亞油酸、亞麻酸、硬脂酸、十六酸或磺酰脲衍生物替換。
3. 按照權(quán)利要求l所述的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子，其特征在于所述的 可德蘭多糖分子量范圍為8， 000 2， 000， 000。
4.一種權(quán)利要求l所述的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子的制備方法，其特征在 于包括的步驟1) 將可德蘭多糖與異丙醇混合，室溫下攪拌30min，然后加入30%氫氧化鈉至堿性，室 溫下攪拌90min得到均一溶液，然后加入氯乙酸，在50 6(TC下反應(yīng)5h ;反應(yīng)液倒入乙醚 中使產(chǎn)物沉淀；沉淀分別用甲醇_乙酸(7 : 3， v/v)，甲醇-水(4 : 1， V/V)，甲醇，丙酮洗 滌，干燥得羧甲基可德蘭多糖，可德蘭多糖與氯乙酸的摩爾比(l : 0.75);2) 羧甲基可德蘭多糖通過水浴超聲溶于無水二甲基亞砜中，加入1- (3- 二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edc HC1)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化劑進(jìn)行活化反 應(yīng)，室溫下攪拌30min ;3) 將溶有膽固醇的四氫呋喃溶液加入到羧甲基可德蘭多糖溶液中，繼續(xù)在45t:下反 應(yīng)48h，將反應(yīng)混合物倒入丙酮中沉淀，過濾并收集沉淀，分別用水-四氫呋喃(1 : 5，V/V) 和四氫呋喃洗滌3-4次，最后將產(chǎn)物溶于水，用蒸餾水透析三天后凍干，得白色絮狀物質(zhì)， 得膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖；4) 將上述制得的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖溶于二甲基亞砜-水(1 : 1，V/V)中，于生理鹽水中透析24h，然后用探頭超聲儀40W超聲2min，超聲也采用脈沖工作方式，超聲 重復(fù)兩次，經(jīng)微孔濾膜過濾，即得膽固醇基_羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子。
5. —種包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子，其特征在于 它是以膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子為載體，用硫酸銨梯度法包載抗腫瘤 藥物，載藥納米粒子的粒徑為290 510nm，所述的抗腫瘤藥物與膽固醇基_羧甲基可德蘭 多糖自聚集納米粒子的質(zhì)量比為1 5 : 5。
6. 按照權(quán)利要求5所述的包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米 粒子，其特征在于所述的包載抗腫瘤藥物為表阿霉素、阿霉素、柔紅霉素、全反式維甲酸、 紫杉醇、甲氨蝶呤、喜樹堿。
7. 按照權(quán)利要求5所述的包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米 粒子，其特征在于所述的包載抗腫瘤藥物為表阿霉素。
8. 按照權(quán)利要求5所述的包載抗腫瘤藥物的膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子載藥納米粒子的制備方法，其特征在于包括的步驟1) 將膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖分散于O. 15mol/L的硫酸銨溶液，于37t:、50rpm的 條件下振蕩24h，用探頭超聲儀40W超聲2min，然后置于透析袋中，在生理鹽水中透析4h，即 得空白膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖自聚集納米粒子；2) 將抗腫瘤藥物與載體材料按比例混合，避光下放置24h，采用超濾法(5000rpm， 10mim)除去游離的藥物，收集超濾管上層，冷凍干燥即得載藥膽固醇基-羧甲基可德蘭多 糖自聚集納米粒子。
9. 按照權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述的透析袋的截留分子量為8 12kDa。
10. 按照權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述的超濾法中的超濾管的截留分 子量為10kDa。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種膽固醇基-羧甲基可德蘭多糖納米粒子及制備方法。它是以膽固醇、羧甲基可德蘭多糖為原料，羧甲基可德蘭的羧基經(jīng)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)首先活化再與膽固醇反應(yīng)合成，摩爾配比羧甲基可德蘭多糖∶膽固醇∶EDC∶NHS＝1∶0.2～0.5∶1∶0.5。本發(fā)明得到兩親性的聚合物，有利于納米粒子的制備及疏水藥物的包載，制備方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，載藥率高，易于工業(yè)化生產(chǎn)，且載藥納米粒子能大大延長藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，并能明顯改變藥物在不同臟器的分布，達(dá)到降低毒副作用、延長體內(nèi)循環(huán)時(shí)間、提高藥物的生物利用率的作用。
文檔編號(hào)A61K47/36GK101721710SQ20091022830
公開日2010年6月9日 申請(qǐng)日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者劉玲蓉, 周志敏, 唐洪波, 張其清, 張彤, 李學(xué)敏, 李磊, 白永剛 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所