專利名稱：抗癌藥番酯素及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及番酯素技術領域，尤其涉及一種抗癌物質番酯素及其制備方法和應用。
背景技術：
癌癥是危害人類健康的大敵。我國每年新發(fā)癌癥病例約有160萬人，每年死于癌癥的約有130萬人，全國因癌癥而死亡的人數(shù)逐年上升，我國為肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、肺癌等癌癥的高發(fā)區(qū)域，癌癥死亡率居高不下。
目前尚無有效的藥物治愈大多數(shù)癌癥患者?；熕幬飳Π┌Y雖有一定療效，但毒副作用大，中成藥對癌癥的療效普遍較低，如參蓮膠曩對肺、胃癌的癌灶緩解率僅為3.5％，療效均不理想。
番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝(Annona squamosa Linn.)的干燥種子，據文獻記載，其中主要的化學成分有番荔枝內酯類、環(huán)肽類、酰胺類及甾醇類等，其中番荔枝內酯類是主要活性成分。番荔枝種子中含有近100種番荔枝內酯類化合物，其中番荔枝內脂化合物(bullatacin)對人肝癌和肺癌的抑制活性顯著高于化療藥5-氟脲嘧啶(5-Fu)，其體內抗肝癌活性和抗肺癌活性分別是化療藥5-FU的540倍和430倍。
本申請發(fā)明人研究了番荔枝(Annona squamosa Linn)的樹皮、枝葉、種子的抗癌有效物質和化學成分，從中提取出多種抗癌單體化合物(活性成分)，經抗癌實驗研究表明，對人肝癌細胞、人胃癌細胞、人食管癌細胞和動物移植性腫瘤(如S180、H22和Heps)均有顯著的體外和體內抗癌治療效果，并已申請獲得數(shù)項抗癌物質發(fā)明專利證書(專利號分別為ZL02148474.0，ZL02148475.9，ZL03112707.X，ZL 20060085781.4)。在上述研究的基礎上，本發(fā)明人繼續(xù)提取分離、篩選番荔枝(Annona squamosa Linn)種子的抗癌有效化學成分，從中又發(fā)明了一種抗癌有效物質番酯素(bullatacin含量超過50％wt)的提取制備方法。

發(fā)明內容
發(fā)明目的提供一種抗癌物質番酯素(bullatacin含量超過50％wt)及其制備方法和在制備抗癌藥物中的應用。
技術方案抗癌藥番酯素，其番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt。
一種抗癌藥番酯素的制備方法，制備步驟為番荔枝(Annona squamosa Linn.)種子風干后，粉碎成粗粉；取番荔枝粗粉9～11倍質量的乙醇，對番荔枝粗粉熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A；浸膏A先用石油醚萃取，石油醚萃取后的殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并回收得到浸膏B；浸膏B再按浸膏重量∶硅膠重量＝1∶4～1∶6的比例裝硅膠柱，用體積比分別為(19～21)∶1、(9～11)∶1、(8～10)∶1、(7～9)∶1、(6～8)∶1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含番酯素的餾分在體積比為(8～10)∶1的石油醚-乙酸乙酯洗脫液的后5個柱體積，合并洗脫液回收得到浸膏C；浸膏C用體積比為1∶(0.8-1.2)的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶3次得到番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt的晶體，此即為番酯素。
所述重結晶法的方法為將浸膏C溶于5倍體積量的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，石油醚與乙酸乙酯的體積比為1∶(0.8～1.2)，在65-75℃的水浴中充分攪拌使其溶解，室溫放冷后，有黃白色固體析出，棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。
所述乙醇的體積濃度為95％。
番酯素在制備抗腫瘤藥物中應用。
有益效果本發(fā)明提供了一種抗癌物質番酯素(bullatacin含量超過50％wt)及其制備方法和應用，該提取方法效率高，有效成分的含量達到中藥五類新藥原料藥的要求，并且操作簡單，降低了生產成本。
四

圖1是本發(fā)明的重結晶法得到的番脂素中間體液相色譜圖(峰1為Bullatacin，含量為56.61％)； 圖2是番荔枝藥材液相色譜圖(峰1為Bullatacin)； 圖3是Bullatacin對照品液相色譜圖(峰1為Bullatacin)； 圖4柱層析法得到的番酯素中間體液相色譜圖(峰1為Bullatacin，含量為41.18％)。
五具體實施例方式 實施例1番酯素的提取制備方法 番荔枝種子風干后，粉碎成粗粉。取藥材10倍量的95％vt乙醇熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A。浸膏A先用石油醚萃取，殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收得到浸膏B。浸膏B再按浸膏重量硅膠重量(1∶5)裝硅膠柱，分別用石油醚-乙酸乙酯(20∶1、10∶1、9∶1、8∶1、7∶1，體積比)梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含Bullatacin的餾分在石油醚-乙酸乙酯(9∶1，體積比)洗脫液的后5個柱體積，合并，回收得到浸膏C。浸膏C用石油醚-乙酸乙酯(1∶1，體積比)混合溶劑重結晶3次可得到bullatacin含量超過50％wt的番酯素中間體。
重結晶法的具體方法為將富含Bullatacin的浸膏溶于5倍量的石油醚-乙酸乙酯(1∶1，體積比)混合溶劑中，在70℃的水浴中充分攪拌使其溶解。室溫放冷后，有黃白色固體析出。棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。
實施例2番酯素的提取制備方法 一種抗癌藥番酯素的制備方法，制備步驟為番荔枝(Annona squamosa Linn.)種子風干后，粉碎成粗粉；取番荔枝粗粉9倍質量的乙醇，對番荔枝粗粉熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A；浸膏A先用石油醚萃取，石油醚萃取后的殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并回收得到浸膏B；浸膏B再按浸膏重量∶硅膠重量＝1∶4的比例裝硅膠柱，用體積比分別為19∶1、9∶1、8∶1、7∶1、6∶1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含番酯素的餾分在體積比為8∶1的石油醚-乙酸乙酯洗脫液的后5個柱體積，合并洗脫液回收得到浸膏C；浸膏C用體積比為1∶0.8的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶3次得到番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt的晶體，此即為番酯素。重結晶法的方法為將浸膏C溶于5倍體積量的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，石油醚與乙酸乙酯的體積比為1∶0.8，在65℃的水浴中充分攪拌使其溶解，室溫放冷后，有黃白色固體析出，棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。所述乙醇的體積濃度為95％。
實施例3番酯素的提取制備方法 一種抗癌藥番酯素的制備方法，制備步驟為番荔枝(Annona squamosa Linn.)種子風干后，粉碎成粗粉；取番荔枝粗粉11倍質量的乙醇，對番荔枝粗粉熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A；浸膏A先用石油醚萃取，石油醚萃取后的殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并回收得到浸膏B；浸膏B再按浸膏重量∶硅膠重量＝1∶6的比例裝硅膠柱，用體積比分別為21∶1、11∶1、10∶1、9∶1、8∶1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含番酯素的餾分在體積比為10∶1的石油醚-乙酸乙酯洗脫液的后5個柱體積，合并洗脫液回收得到浸膏C；浸膏C用體積比為1∶1.2的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶3次得到番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt的晶體，此即為番酯素。重結晶法的方法為將浸膏C溶于5倍體積量的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，石油醚與乙酸乙酯的體積比為1∶1.2，在75℃的水浴中充分攪拌使其溶解，室溫放冷后，有黃白色固體析出，棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。所述乙醇的體積濃度為95％。
實施例4 第一部分番荔枝藥材和中間體的質量標準研究 1.儀器及色譜條件 儀器高效液相系統(tǒng)為Aglient 1100 HPLC system，包括具有在線脫氣二元泵，自動進樣器，紫外檢測器，KH500DB型超聲波提取器(昆山超聲儀器有限公司)，十萬分之一電子天平(上海天平儀器廠)，自動純水機(Millipore，Bedford，MA，USA)。
色譜條件色譜柱為ODS C18柱Hedra ODS-3(4.6×250mm，5μm)，SB-C18預柱。柱溫25℃，流速1mL/min；流動相甲醇-水(90∶10)；檢測波長220nm。
2.提取條件的優(yōu)化 我們比較了甲醇、95％vt乙醇兩種溶劑的提取效率。結果表明95％vt乙醇的提取率略高于甲醇。但是乙醇的提取物定容時有油狀液滴不溶于甲醇，這將給含量測定帶來很大誤差，所以我們選擇甲醇為質量分析研究的提取溶劑。為了優(yōu)化條件，我們考察了不同提取時間對提取效率的影響。稱取藥材粗粉2份，每份2g，精密稱定，加入20ml甲醇冷浸2小時后按下表操作考察。結果如下 以上實驗結果表明，質量分析研究用提取的最優(yōu)條件為以藥材10倍量的甲醇浸泡2小時后超聲20分鐘。
3.標準曲線及線性范圍 精密稱取Bullatacin對照品10.08mg，定容于10mL容量瓶中。分別精密吸取0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1mL對照品溶液于1mL容量瓶中，甲醇定容。依次進樣10μL，作HPLC分析。以峰面積(Y)為縱坐標，對照品濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y＝6761X+7.6071，r＝0.9998，表明Bullatacin在1.008～10.08μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。
4.精密度試驗 在上述色譜條件下以中間濃度的Bullatacin對照品溶液，在一天內連續(xù)進樣6次，每次10μL，進行HPLC分析，測定峰面積的RSD為0.2％；再以同樣的Bullatacin對照品溶液連續(xù)進樣3天，每天2次，測定峰面積的RSD為2.8％，結果表明精密度良好。

5.重復性試驗 取番荔枝種子粗粉2g，按“7.樣品分析”項下操作，平行制備供試液5份，分別測定，計算各峰面積RSD為1.2％，結果表明測定方法重復性良好。
6.穩(wěn)定性試驗 取番荔枝種子粗粉2g，按“7.樣品分析”項下操作，制備供試液，于1、2、4、8、12、24、48小時內分別測定，計算各峰面積的RSD為2.1％，結果表明供試液在48小時內穩(wěn)定。
7.加樣回收率試驗 稱取已知含量的番荔枝種子2g，精密稱定，分別加入適量的對照品，按“7.樣品分析”項下操作，平行制備供試液5份，0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，以10μL的進樣量進行HPLC分析，記錄各峰面積，計算回收率。結果回收率為95.57％～104.71％，平均回收率為99.90％，回收率RSD為3.7％。
8.樣品分析 8.1取番荔枝藥材2g，精密稱定，加入20mL甲醇浸泡2小時，超聲20分鐘，過濾，濾液回收至干，殘渣加甲醇定容于10mL容量瓶中。用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，以10μL的進樣量進行HPLC分析，重復進樣3次，記錄峰面積，計算藥材中Bullatacin的含量，含量平均值為0.146％。
8.2取重結晶得到的番脂素中間體1mg，精密稱定，甲醇定容于1mL的容量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，以10μL的進樣量進行HPLC分析，重復進樣3次，記錄峰面積，計算中間體中Bullatacin含量，含量平均值為56.61％。
實施例5 一、提取工藝研究 1.提取工藝路線設計 理想的提取溶媒應符合下列條件①能最大限度地提取藥材中的有效成分而不提取或少提取雜質。②性質穩(wěn)定，不與有效成分發(fā)生反應。③廉價易得，或可回收利用。④使用方便，安全。
番荔枝中間體的制備原料是番荔枝中的有效部位——番荔枝內酯。番荔枝內酯一般易溶于甲醇和乙醇。現(xiàn)在常用的提取方法有以甲醇或乙醇為溶媒超聲或熱回流提取。
2.提取溶劑的初步判定 我們比較了95％乙醇和甲醇在超聲和熱回流下的提取效率。稱取番荔枝種子藥材粗粉4份，各約2g，精密稱定，置于50mL圓底燒瓶中，將4份藥材分為A、B兩組。每組中兩份藥材分別加入20mL的95％乙醇和20mL的甲醇。浸泡2小時后，取A組超聲20min，過濾，濾液回收至干。B組于水浴鍋上熱回流提取2小時，過濾，濾液回收至干。然后用甲醇定容于10mL容量瓶中，經微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液10μL進行HPLC分析。實驗結果如下。
從上表中可以看出，95％乙醇的提取效率比甲醇高，故確定95％乙醇為提取溶劑。
3.提取工藝技術參數(shù)的優(yōu)化 我們還考察了不同乙醇濃度和提取時間對提取效率的影響。稱取藥材4份，各約2g，于50mL圓底燒瓶中，分別加入75％vt、85％vt、95％vt、95％vt乙醇各20mL，提取1次，其中一份95％乙醇溶劑提取2小時，其他三份提取3小時，過濾，濾液回收至干。然后用甲醇定容于10mL容量瓶中，經微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液10μL進行HPLC分析。實驗結果如下。
由上表可知，10倍量的95％vt乙醇熱回流提取效率最高?；谝陨辖Y果，我們又比較了95％vt乙醇回流1小時和2小時的提取效率，其結果為回流1小時的有效成分含量0.107％，回流2小時的有效成分含量為0.113％。
綜上所述，我們確定提取工藝為10倍量的95％vt乙醇熱回流提取2小時。
二.純化工藝研究 通過以上方法提取到的番荔枝乙醇提取物，其中的Bullatacin含量很低，達不到中藥五類新藥原料藥的要求(含量應大于50％wt)，需要進一步純化。
番荔枝內酯類成分在乙酸乙酯、氯仿等中等極性溶劑中溶解性很好。故提取得到的乙醇提取物，先用石油醚萃取，以除去脂肪酸等小極性物質。考慮到氯仿對環(huán)境的污染較嚴重，我們選擇乙酸乙酯萃取乙醇提取物中的中等極性物質，此時得到的產品中番荔枝內酯的含量還比較低。
萃取得到的浸膏，我們用普通硅膠柱層析進行粗分。步驟如下以浸膏重量∶硅膠重量(1∶5)裝柱，以石油醚-乙酸乙酯為洗脫液梯度洗脫。從石油醚-乙酸乙酯(20∶1，體積比)開始，洗脫3個柱體積；之后加大極性為石油醚-乙酸乙酯(10∶1，體積比)，洗脫7個柱體積；再加大極性為石油醚-乙酸乙酯(9∶1，體積比)，洗脫10個柱體積；再加大極性為石油醚-乙酸乙酯(8∶1，體積比)，洗脫10個柱體積；再加大極性為石油醚-乙酸乙酯(7∶1，體積比)，洗脫至接近空白。各餾分經薄層色譜檢測，Bullatacin在石油醚-乙酸乙酯(9∶1，體積比)的后5個柱體積中被洗脫出來。
洗脫液濃縮后，富含Bullatacin的餾分呈黃色或淡黃色半固體狀。我們用兩種方法進行純化，以期得到符合中藥五類新藥原料藥要求的Bullatacin中間體。
第一種方法是反復硅膠柱層析。富含Bullatacin的浸膏再以浸膏∶硅膠(1∶5)裝柱，用石油醚-乙酸乙酯(9∶1，體積比)洗脫，在經過3次硅膠柱層析后，得到的產品為淡黃色固體。稱取適量溶于甲醇，微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液10μL進行HPLC分析，按歸一化法計算，Bullatacin含量為41.18％。
第二種方法為重結晶法。具體方法為將富含Bullatacin的浸膏溶于5倍量的石油醚-乙酸乙酯(1∶1，體積比)混合溶劑中，在70℃的水浴中充分攪拌使其溶解。室溫放冷后，有黃白色固體析出。棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。取適量溶于甲醇，微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液10μL進行HPLC分析，按歸一化法計算，Bullatacin含量為56.61％。
比較兩種方法可以發(fā)現(xiàn)，重結晶法操作簡單，成本少，可達到中藥五類新藥原料藥的要求，作為工業(yè)化生產方法具有可操作性。
通過以上實驗確定工藝為取藥材10倍量的95％乙醇熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A。浸膏A先用石油醚萃取，殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收得到浸膏B。浸膏B再按浸膏重量∶硅膠重量(1∶5)裝硅膠柱，分別用石油醚-乙酸乙酯(20∶1、10∶1、9∶1、8∶1、7∶1，體積比)梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含Bullatacin的餾分在石油醚-乙酸乙酯(9∶1，體積比)洗脫液的后5個柱體積，合并，回收得到浸膏C。浸膏C用石油醚-乙酸乙酯(1∶1，體積比)混合溶劑重結晶3次可得到符合中藥五類新藥原料藥的要求的番酯素中間體。
實施例6 樣品為白色固體(石油醚-乙酸乙酯)，mp 77～79℃。ESI-MS m/z645.6[M+Na]+，顯示化合物分子量為622。1H-NMR(CDCl3)δ0.88(3H，t，H-34)，1.43(3H，d，H-37)，2.40(1H，ddt，H-3)，2.53(1H，ddt，H-3)，3.40(1H，m，H-15)，3.85(1H，m，H-4)，3.85(1H，m，H-16)，3.85(1H，m，H-20)，3.85(1H，m，H-24)，3.92(1H，m，H-19)，3.92(1H，m，H-23)，5.06(1H，m，H-36)，7.18(1H，m，H-35)。13C-NMR譜中δ174.56為內酯羰基信號，δ151.73和131.22為雙鍵上兩個碳的信號。1H，13C-NMR數(shù)據與文獻報道基本一致，確定為番酯素主要成分bullatacin。結構如下圖所示，13C-NMR信號歸屬見表1。

番酯素主要成分bullatacin的化學結構 式分子式為C37H66O7 表1化合物bullatacin與文獻13C-NMR譜數(shù)據比較(CDCl3) 實施例7 番酯素對移植性肺癌的抑制作用 1、實驗動物和瘤株 雄性健康C57BL/6小鼠，體重18-22g，鼠齡6-8周，購自本校動物實驗中心；小鼠Lewis肺癌瘤株購自江蘇省腫瘤研究所動物實驗中心。
2、造模與實驗方法 C57BL/6小鼠60只，按比例隨機留10只為陰性對照組，其余50只進行造模。制備Lewis肺癌荷瘤小鼠，剝離生長旺盛期的瘤組織，選取生長良好的腫塊1.5mm3左右，按腫瘤(g)∶生理鹽水(ml)為1∶3比例勻漿，調細胞數(shù)為2×106/ml。選取健康小鼠，在無菌條件下每只小鼠右側腋窩皮下接種0.2ml。整個接種過程須在無菌罩內以無菌操作進行，1h內完成接種。
接種后隨機分為5組，每組10只，分別為腫瘤模型對照組、15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg試驗組、5-fu陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細胞24h后，試驗組腹腔注射番酯素，劑量分別為15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動物均按0.2ml在腹腔注射，連續(xù)給藥10d。末次給藥后次日，進行如下觀察 完整剝離瘤塊，并稱重計算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率＝(對照組腫瘤重量-治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量×100％。
3、實驗結果 番酯素對小鼠移植性肺癌的生長抑制作用不同劑量的番酯素均能顯著抑制小鼠移植性肺癌的生長(P＜0.01)，其抗肺癌活性高于化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)，見表2。


權利要求
1.抗癌藥番酯素，其特征在于其番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt。
2.一種抗癌藥番酯素的制備方法，其特征在于制備步驟為
a.番荔枝(Annona squamosa Linn.)種子風干后，粉碎成粗粉；
b.取番荔枝粗粉9～11倍質量的乙醇，對番荔枝粗粉熱回流提取2小時，提取液回收得到浸膏A；
c.浸膏A先用石油醚萃取，石油醚萃取后的殘留液再用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并回收得到浸膏B；
d.浸膏B再按浸膏重量∶硅膠重量＝1∶4～1∶6的比例裝硅膠柱，用體積比分別為(19～21)∶1、(9～11)∶1、(8～10)∶1、(7～9)∶1、(6～8)∶1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，富含番酯素的餾分在體積比為(8～10)∶1的石油醚-乙酸乙酯洗脫液的后5個柱體積，合并洗脫液回收得到浸膏C；
e.浸膏C用體積比為1∶(0.8-1.2)的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶3次得到番荔枝內脂化合物(bullatacin)含量超過50％wt的晶體，此即為番酯素。
3.根據權利要求1所述的番酯素的制備方法，其特征在于所述重結晶法的方法為將浸膏C溶于5倍體積量的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶劑中，石油醚與乙酸乙酯的體積比為1∶(0.8～1.2)，在65-75℃的水浴中充分攪拌使其溶解，室溫放冷后，有黃白色固體析出，棄去黃色母液，再反復重結晶兩次，即可得到白色固體。
4.根據權利要求1所述的番酯素的制備方法，其特征在于所述乙醇的體積濃度為95％。
5.權利要求1所述番酯素在制備抗腫瘤藥物中應用。
全文摘要
抗癌藥番酯素，其番荔枝內脂化合物含量超過50％wt。一種抗癌藥番酯素的制備方法，制備步驟為番荔枝種子粉碎成粗粉；取乙醇，對番荔枝粗粉熱回流提取，提取液回收得到浸膏A；浸膏A先用石油醚萃取，石油醚萃取后的殘留液再用乙酸乙酯萃取，合并萃取液并回收得到浸膏B；浸膏B再用硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，以薄層色譜跟蹤檢測，合并洗脫液回收得到浸膏C；浸膏C用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑重結晶得到番荔枝內脂化合物含量超過50％wt的晶體。本發(fā)明提供了一種抗癌物質番酯素及其制備方法和應用，該提取方法效率高，有效成分的含量達到中藥五類新藥原料藥的要求，并且操作簡單，降低了生產成本。
文檔編號A61K31/365GK101700261SQ20091023451
公開日2010年5月5日 申請日期2009年11月20日 優(yōu)先權日2009年11月20日
發(fā)明者章永紅 申請人:南京中醫(yī)藥大學