專利名稱：一種杏仁功能性混合肽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種杏仁功能性混合肽及其制備方法。
背景技術(shù)：
杏薔薇科落葉喬木植物原產(chǎn)我國，野生種和栽培品種資源都非常豐富。杏仁具有 豐富的營養(yǎng)價值和良好的藥用價值。每IOOg杏仁中含蛋白質(zhì)25g 27g，油脂47g 56g， 碳水化合物及粗纖維含量約占12g 19g，還含有鈣、磷、鐵、硒等多種元素和VE、硫胺素、核 黃素、尼克酸、抗壞血酸等多種維生素。杏仁中富含的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、脂肪及其他成分對人體 有極其重要的作用，長期食用可防癌、抗癌，增強(qiáng)抵抗力，延緩衰老，有益心腦健康。甜杏仁 蛋白含有人體所需的多種氨基酸且含量豐富，是有利于人體氨基酸營養(yǎng)平衡、具有保健作 用的天然干果資源，此外，苦杏仁中特有的具有多種藥理作用的苦杏仁苷含量達(dá)5. 5 %，苦 杏仁苷具有抑制和殺死癌細(xì)胞的作用。目前國內(nèi)外杏制品均以鮮食為主，加工比例不高。大部分杏仁僅限于制作杏仁乳、 杏仁罐頭、焙烤杏仁及杏仁油初加工產(chǎn)品，而榨取油脂后剩余的杏仁粕多用于生產(chǎn)杏仁蛋 白粉等科技含量和產(chǎn)品附加值較低的產(chǎn)品。杏仁蛋白在加工中存在這功能性質(zhì)和生理活性 較差、吸收較差等缺點(diǎn)，因此研發(fā)具有良好功能性質(zhì)和生理活性的杏仁蛋白深加工產(chǎn)品勢 在必行。多肽是由氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的，是二肽到復(fù)雜的線型或環(huán)型結(jié) 構(gòu)的不同肽類的總稱。其中可調(diào)節(jié)生物體生理功能的多肽被稱為功能肽或生物活性肽 (Bioactive ρ印tides)。生物活性肽的吸收機(jī)制優(yōu)于氨基酸，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道中酶作后并 不完全是以游離氨基酸的形式被吸收，而主要是以短肽的形式被吸收，且機(jī)體對短肽的吸 收代謝速度比對游離氨基酸快、耗能低、不易飽和，且肽間吸收無競爭性與抑制性的特點(diǎn)。 因此，功能性短肽的生物效價和營養(yǎng)價值更高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種脫脂杏仁粕提取物(杏仁功能性混合肽)及其制備方法。本發(fā)明所提供的杏仁功能性混合肽是按照包括下述步驟的方法制備得到的1)原料預(yù)處理將脫脂杏仁粕與水混合后，在80°C -90°C的條件下加熱使蛋白變 性，得到杏仁粕漿液；2)酶處理向步驟1)得到的杏仁粕漿液中同時加入中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶，酶 解過程中需不斷攪拌以使酶和底物充分接觸，得到杏仁粕酶解液；3)酶滅活使杏仁粕酶解液中的中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶滅活，離心取上清液， 即為杏仁功能性混合肽原液；4)超濾將步驟3)得到的杏仁功能性混合肽原液通過截留分子量為5000Da的超 濾膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合肽。
其中，步驟1)中所述脫脂杏仁粕與水的質(zhì)量比為1 25-50。所述脫脂杏仁粕在 使用前需經(jīng)過粉碎處理并過60-80目篩，制成杏仁蛋白粉。步驟2)中的中性蛋白酶的加入量為3000_4000U/g蛋白，復(fù)合蛋白酶的加入量為 2000-3000U/g 蛋白。本發(fā)明中所述中性蛋白酶是由枯草芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵提取而得的，屬于一種內(nèi)切 酶，其最適作用PH值為6-8，溫度35-55°C ；如丹麥NOVO公司的NeutraseO. 8L。所述復(fù)合 蛋白酶具體可為N120P復(fù)合蛋白酶，如荷蘭Sierry公司的N120P復(fù)合蛋白酶。所述酶解的條件為酶解溫度50-55°C，酶解時間120-180min，酶解pH值為6_8。步驟幻中可按照下述方法使所述中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶滅活將杏仁粕酶解 液升溫至90-95°C，保持10-20min。上述方法還包括對步驟4)得到的杏仁功能性混合肽進(jìn)行濃縮并干燥的步驟。所 述干燥可采用冷凍干燥或噴霧干燥。本發(fā)明所制備的杏仁功能性混合肽中肽的質(zhì)量百分含量高于75%，灰分含量 (6%，糖含量彡7%，干燥失重彡7%，脂肪彡2%;分子量小于5000D的肽含量彡90%，三 氯乙酸氮溶解指數(shù)>95%。本發(fā)明的再一個目的是提供所述杏仁功能性混合短肽的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的杏仁功能性混合短肽可用于制備抗高血壓活性和/或抗氧化活 性的保健品本發(fā)明以粉狀脫脂杏仁粕為原料，通過酶水解、膜分離等技術(shù)，制備出杏仁功能性 混合短肽。本發(fā)明的方法采用兩種蛋白酶對杏仁粕進(jìn)行同步復(fù)合酶解，使其水解度達(dá)到 20%以上，短肽得率>60%。與杏仁蛋白性相比，本發(fā)明的杏仁功能性混合短肽在等電點(diǎn)和 較高溫度下仍具有良好的溶解性和穩(wěn)定性。并且發(fā)明人通過試驗證明，該杏仁功能性混合 短肽具有多種生物學(xué)功能，如抗高血壓活性和抗氧化活性等，可將其開發(fā)成相關(guān)功能食品 如降壓飲料、活性肽粉等。此外杏仁功能性混合短肽解決了杏仁蛋白本身營養(yǎng)豐富卻不易 被吸收的難題，給人們提供了一種具有較高的營養(yǎng)保健功能且可被人體迅速吸收營養(yǎng)保健品。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材 料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實施例1、杏仁功能性混合短肽的制備本發(fā)明杏仁功能性混合短肽的制備步驟如下原料預(yù)處理一酶解一滅酶一離心一超濾精制一真空濃縮一干燥詳細(xì)步驟為①原料預(yù)處理冷榨脫脂杏仁粕經(jīng)粉碎、過60-80目篩制成杏仁蛋白粉。再對其進(jìn)一步處理杏仁蛋白粉一與水混合(料水質(zhì)量比1 40) — 90°C下水浴攪拌一冷卻②酶解將中性蛋白酶(丹麥NOVO公司，NeutraseO. 8L)和復(fù)合蛋白酶(荷蘭Sherry公司，N120P)分別按3500u/g底物和2500u/g底物蛋白加入反應(yīng)體系中進(jìn)行酶解， 水解溫度50-55°C，水解時間180min，pH6. 5，反應(yīng)過程中不斷攪拌。③酶滅活快速升溫至90-95°C，保持10-20min使酶滅活，4200g離心15_20min， 取上清液即為杏仁功能性混合短肽原液。④超濾精制將所得杏仁功能性混合短肽原液通過截留分子量為5000Da的超濾 膜，去除大分子片段，得到分子量小于5000Da的杏仁功能性混合短肽液。⑤濃縮干燥通過真空濃縮至固形物含量35% -40%，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量計)。總氮的測定采用凱氏定氮法；三氯乙酸氮溶指數(shù)的測定采用Lowry法；脂肪和灰 分的測定采用AOAC法；總糖的測定采用苯酚-硫酸法。測定結(jié)果表明上述方法制備得到的杏仁功能性混合短肽是一種白色或微黃色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量為85%，灰分5 %，糖含量5 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指數(shù)(TCA-NSI)為99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。實施例2、杏仁功能性混合短肽的制備①原料預(yù)處理冷榨脫脂杏仁粕經(jīng)粉碎、過60-80目篩制成杏仁蛋白粉。再對其進(jìn)一步處理杏仁蛋白粉一與水混合(料水質(zhì)量比1 50) — 90°C下水浴攪拌一冷卻②酶解將中性蛋白酶(丹麥NOVO公司，NeutraseO. 8L)和復(fù)合蛋白酶(荷蘭 Sherry公司，N120P)分別按4000u/g底物和3000u/g底物蛋白加入反應(yīng)體系中進(jìn)行酶解， 水解溫度50-55°C，水解時間180min，pH6，反應(yīng)過程中不斷攪拌。③酶滅活快速升溫至90-95°C，保持10-20min使酶滅活，4200g離心15_20min，
取上清液即為杏仁功能性混合短肽原液。④超濾精制將所得杏仁功能性混合短肽原液通過截留分子量為5000Da的超濾 膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合短肽液。⑤濃縮干燥通過真空濃縮至固形物含量35% -40%，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量計)?？偟臏y定采用凱氏定氮法；三氯乙酸氮溶指數(shù)的測定采用Lowry法；脂肪和灰 分的測定采用AOAC法；總糖的測定采用苯酚-硫酸法。測定結(jié)果表明上述方法制備得到的杏仁功能性混合短肽是一種白色或微黃色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量為82%，灰分5 %，糖含量6 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指數(shù)(TCA-NSI)為99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。實施例3、杏仁功能性混合短肽的制備①原料預(yù)處理冷榨脫脂杏仁粕經(jīng)粉碎、過60-80目篩制成杏仁蛋白粉。再對其進(jìn)一步處理杏仁蛋白粉一與水混合(料水質(zhì)量比1 25) — 90°C下水浴攪拌一冷卻②酶解將中性蛋白酶(丹麥NOVO公司，NeutraseO. 8L)和復(fù)合蛋白酶(丹麥NOVO 公司，Protamex)分別按3000u/g底物和2000u/g底物蛋白加入反應(yīng)體系中進(jìn)行酶解，水解 溫度50-55°C，水解時間180min，pH7. 5，反應(yīng)過程中不斷攪拌。③酶滅活快速升溫至90-95°C，保持10-20min使酶滅活，4200g離心15_20min，取上清液即為杏仁功能性混合短肽原液。④超濾精制將所得杏仁功能性混合短肽原液通過截留分子量為5000Da的超濾 膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合短肽液。⑤濃縮干燥通過真空濃縮至固形物含量35% -40%，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量計)?？偟臏y定采用凱氏定氮法；三氯乙酸氮溶指數(shù)的測定采用Lowry法；脂肪和灰 分的測定采用AOAC法；總糖的測定采用苯酚-硫酸法。測定結(jié)果表明上述方法制備得到的杏仁功能性混合短肽是一種白色或微黃色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量為78 %，灰分5 %，糖含量7 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指數(shù)(TCA-NSI)為99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。實施例4、杏仁功能性混合短肽的功能活性實驗①超氧陰離子自由基的清除在一系列的試管中加入離子強(qiáng)度為0.05M，pH為8. 2的Tris-Hcl緩沖液9ml， 再分別加入樣品溶液100μ 1，空白組加入同體積的蒸餾水，再加入0. 045Μ鄰苯三酚(以 0. OlMHCL配制)100 μ 1，震蕩計時三分鐘，加入10%抗壞血酸100 μ 1終止反應(yīng)，立即在 325nm處測吸光值。
Δλ 一 Af
權(quán)利要求
1.一種制備杏仁功能性混合肽的方法，包括下述步驟1)原料預(yù)處理將脫脂杏仁粕與水混合后，在80°c-90°C的條件下加熱使蛋白變性，得 到杏仁粕漿液；2)酶處理向步驟1)得到的杏仁粕漿液中同時加入中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶進(jìn)行酶 解，得到杏仁粕酶解液；3)酶滅活使所述杏仁粕酶解液中的中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶滅活，離心取上清液， 即為杏仁功能性混合肽原液；4)超濾將步驟幻得到的杏仁功能性混合肽原液通過截留分子量為5000Da的超濾 膜，收集超濾液，得到杏仁功能性混合肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中所述脫脂杏仁粕與水的質(zhì)量比 為 1 25-50。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟幻中所述中性蛋白酶的加入量 為3000-4000U/g蛋白；所述復(fù)合蛋白酶的加入量為2000-3000U/g蛋白，所述復(fù)合蛋白酶為 N120P復(fù)合蛋白酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于步驟2、中所述酶解的條件如 下酶解溫度50-55°C，酶解時間120-180min，酶解pH值為6_8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于步驟3)中按照下述方法使所述 中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶滅活將杏仁粕酶解液升溫至90-95°C，保持10-20min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述脫脂杏仁粕在使用前經(jīng)過 粉碎處理并通過60-80目篩。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括對步驟4)得到 的杏仁功能性混合肽進(jìn)行濃縮并干燥的步驟；所述干燥為冷凍干燥或噴霧干燥。
8.權(quán)利要求1-7中任一所述的方法制備得到的杏仁功能性混合肽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的杏仁功能性混合肽，其特征在于所述杏仁功能性混合肽中 肽的質(zhì)量百分含量高于75% ；所述肽中，分子量小于5000D的肽含量彡90%。
10.權(quán)利要求8或9所述的杏仁功能性混合肽在制備抗高血壓保健品和/或抗氧化保 健品和/或清除自由基保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種杏仁功能性混合肽及其制備方法。本發(fā)明所提供的杏仁功能性混合肽是按照包括下述步驟的方法制備得到的1)將脫脂杏仁粕與水混合后，在80℃-90℃的條件下加熱使蛋白變性，得到杏仁粕漿液；2)向杏仁粕漿液中同時加入中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶進(jìn)行酶解，得到杏仁粕酶解液；3)將酶解液升溫至90-95℃，保持10-20min使酶滅活，離心取上清液，即為杏仁功能性混合肽原液；4)將混合肽原液通過截留分子量為5000Da的超濾膜，收集超濾液，得到杏仁功能性混合肽。該杏仁功能性混合短肽在等電點(diǎn)和較高溫度下仍具有良好的溶解性和穩(wěn)定性。試驗證明，該杏仁功能性混合短肽具有多種生物學(xué)功能，可將其開發(fā)成相關(guān)功能食品如降壓飲料、活性肽粉等。
文檔編號A61K38/02GK102086466SQ20091024172
公開日2011年6月8日 申請日期2009年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月2日
發(fā)明者王強(qiáng), 王春艷 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所