專利名稱：：秦皮甲素眼用凝膠及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種秦皮甲素眼用凝膠及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：秦皮為木犀科植物苦櫪白蠟樹(Fraxi皿srhynchophy1laHance)、白蠟樹(FraxinuschinensisRoxb.)、尖口十白蠟樹(FraxinusszaboanaLingelsh.)或宿柱白蠟樹(FraxinusstylosaLingelsh.)的干燥枝皮或干皮。秦皮中含秦皮甲素(C15H1609)。秦皮甲素別名馬栗樹皮苷、七葉亭苷，具有抗炎鎮(zhèn)痛的功效，用于治療傳染性肝炎、急性膽道感染、鉛中毒、清熱解毒、胸悶嘔惡、月市熱咳嗽、月中瘤瘡毒胎動不安等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種秦皮甲素眼用凝膠及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供的秦皮甲素眼用凝膠，是用如下原料制備得到的4.8-5.2質(zhì)量份秦皮甲素、35-45質(zhì)量份硼酸、380-420質(zhì)量份羥丙基甲基纖維素、180-220質(zhì)量份海藻酸鈉、23-27質(zhì)量份富馬酸二甲酯和49300-49350質(zhì)量份水。所述秦皮甲素眼用凝膠，具體可為用如下原料制備得到的5質(zhì)量份秦皮甲素、40質(zhì)量份硼酸、400質(zhì)量份羥丙基甲基纖維素、200質(zhì)量份海藻酸鈉、25質(zhì)量份富馬酸二甲酯和49330質(zhì)量份水。所述的秦皮甲素眼用凝膠的制備方法如下將所述秦皮甲素用水溶解，過濾后收集濾液；將所述硼酸、所述羥丙基甲基纖維素、所述海藻酸鈉、所述富馬酸二甲酯用水溶解，滅菌后得到無菌基質(zhì)；將所述濾液和所述無菌基質(zhì)混合，加入水，得到秦皮甲素眼用凝膠。所述濾液可采用0.22iim微孔濾膜過濾。制備所述無菌基質(zhì)時的滅菌條件可為12rC、104kPa、20min。所述秦皮甲素的制備方法具體包括如下步驟(1)將秦皮進行醇提，得到粗提液；(2)將步驟(1)的粗提液與乙酸乙酯混合，分層后棄乙酸乙酯層，得到萃取液；(3)將步驟(2)的萃取液進行羥丙基葡聚糖凝膠柱層析，用水洗脫，收集秦皮甲素溶液和秦皮甲素_秦皮苷混合液；(4)將步驟(3)的秦皮甲素-秦皮苷混合液進行羥丙基葡聚糖凝膠柱層析，用乙醇水溶液洗脫，收集秦皮甲素溶液；(5)將步驟(3)和步驟(4)的秦皮甲素溶液進行濃縮結(jié)晶，收集晶體；(6)用甲醇將步驟(5)的晶體進行重結(jié)晶，收集晶體；(7)將步驟(6)的晶體干燥后得到秦皮甲素。步驟(1)中，所述醇提可為將秦皮用95%(質(zhì)量百分含量)乙醇水溶液65-75t:提取1.5-2.5小時；所述秦皮和所述95%乙醇水溶液的配比為lg秦皮5-7mL95%乙醇水溶液；所述醇提優(yōu)選為將秦皮粉末用95%乙醇水溶液7(TC提取2小時；所述秦皮和所述95%乙醇水溶液的配比為lg秦皮6mL95%乙醇水溶液。步驟(1)中，進行所述醇提后，可55°C、0.lMPa蒸發(fā)，蒸發(fā)后體積為蒸發(fā)前體積的1/23-1/20，得到所述粗提液。步驟(2)中，所述粗提液和所述乙酸乙酯可等體積混合。步驟(3)中，可用蒸餾水洗脫，流速為3.5mL/min。步驟(4)中，可用20%(質(zhì)量百分含量)乙醇水溶液洗脫，流速為3.5mL/min。步驟(3)和步驟(4)中，所述羥丙基葡聚糖凝膠柱具體可為羥丙基葡聚糖凝膠S印hadexLH_20。步驟(5)中，可將所述秦皮甲素溶液55°C、0.lMPa減壓濃縮，0-4t:析晶。步驟(6)中，可在55t:水浴中將步驟(5)的晶體用甲醇溶解，過濾收集濾液，0_4°C析晶。本發(fā)明還保護一種治療眼部炎癥的藥物，它的活性成分為以上任一所述的秦皮甲素眼用凝膠。本發(fā)明通過處方篩選和制劑技術(shù)，將秦皮甲素生產(chǎn)成為眼用凝膠制劑，用于治療眼部炎癥。本發(fā)明提供的秦皮甲素的提取方法，可以使產(chǎn)品的純度達到99.4%。本發(fā)明得到的秦皮甲素眼用凝膠用于治療眼部炎癥，為首次提出，本品舒適度高，療效確切。具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。秦皮購于亳州市百全藥業(yè)有限責任公司；硼酸購于上?；鹁圪Q(mào)易有限公司；羥丙基甲基纖維素購于上海神恩實業(yè)發(fā)展有限公司；海藻酸鈉購于青島明月海藻集團有限公司；富馬酸二甲酯購于上海歐樂化工有限公司。實施例1、秦皮甲素的制備1、醇提取500g秦皮粗粉，加入95X(質(zhì)量百分含量)的乙醇3000ml，70。C提取2小時，過濾后得到粗提濾液。利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將粗提濾液在55t:、0.lMPa的條件下減壓除乙醇至無醇味，得到約140ml粗提液。2、萃取向粗提液中加入等體積的乙酸乙酯，保留水層、棄乙酸乙酯層，得萃取液。3、層析采用羥丙基葡聚糖凝膠柱層析，步驟如下(1)預(yù)處理羥丙基葡聚糖凝膠S印hadexLH-20(購于上海源葉生物技術(shù)有限公司)，加乙醇，浸泡12小時，攪拌除去氣泡后，倒入層析柱中，關(guān)閉活塞使羥丙基葡聚糖凝膠自然沉降，當沉降高出10cm時，打開活塞用乙醇洗脫，洗至洗脫液透明，換蒸餾水洗脫至無醇味，放出柱內(nèi)多余的蒸餾水，待上樣。層析柱直徑3cm，膠床高38cm。(2)柱分離將步驟2的萃取液加入到預(yù)處理后的羥丙基葡聚糖凝膠層析柱上；以蒸餾水洗脫，流速3.5ml/min;以紫外燈檢測，層析柱從下至上呈現(xiàn)藍綠色熒光(秦皮甲素_秦皮苷混合液)、亮藍色熒光(秦皮甲素溶液)、暗綠色熒光(秦皮素溶液)，分別收集呈現(xiàn)藍綠色熒光的洗脫液和亮藍色熒光的洗脫液；得到340ml秦皮甲素_秦皮苷混合液，670ml秦皮甲素溶液。4、再層析將秦皮甲素-秦皮苷混合液濃縮至200ml，重新上預(yù)處理后的羥丙基葡聚糖凝膠層析柱；用20%(質(zhì)量百分含量)乙醇洗脫分離，流速3.5ml/min;紫外燈檢測，收集亮藍色熒光的洗脫液(秦皮甲素溶液)，得到520ml秦皮甲素溶液。5、析晶合并步驟3和步驟4得到的秦皮甲素溶液，55t:、0.lMPa減壓濃縮至200ml，0_4°C析晶，過濾收集晶體。6、再結(jié)晶在55°C水浴中緩慢向晶體中加無水甲醇，邊加邊攪拌，直至晶體不再減少，過濾收集溶液，o-4t:析晶，過濾收集晶體。7、干燥將晶體IO(TC常壓下干燥，得到158mg秦皮甲素單體。8、純度檢測(1)供試品制備避光操作，精密稱取步驟7制備得到的秦皮甲素單體(樣品)，每100iig樣品加入lml水，得到溶液甲。(2)對照品制備避光操作，精密稱取干燥恒重的秦皮甲素標準品(購于中國藥品生物制品檢定所)，每100iig標準品加入lml水，得到溶液乙。(3)分別檢測溶液甲和溶液乙。檢測方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.1%磷酸溶液(12:88)為流動相；檢測波長為334nm;理論板數(shù)按秦皮甲素計算不低于8000。分別記錄樣品和標準品的色譜圖。外標法計算峰面積，即為秦皮甲素的含量。樣品相對于標準品的峰面積比即為樣品的純度。檢測結(jié)果表明樣品的純度為99.4%。實施例2、秦皮甲素眼用凝膠的制備1、稱取50mg實施例1制備的秦皮甲素，用200ml水溶解，溶液經(jīng)過O.22um微孔濾膜過濾，收集濾液。2、稱取400mg硼酸、4g羥丙基甲基纖維素、2g海藻酸鈉、250mg富馬酸二甲酯，用250ml水溶解，得基質(zhì)；基質(zhì)在12rC、104kPa壓力下滅菌20min，得到無菌基質(zhì)；3、將步驟1的濾液和步驟2的無菌基質(zhì)混合，加水至500g，混勻，得到秦皮甲素眼用凝膠。將秦皮甲素眼用凝膠用鋁管灌裝，5g/支。上述步驟均在無菌條件下操作，所使用的器皿和鋁管事先都進行無菌處理。實施例3、秦皮甲素眼用凝膠對眼部炎癥的療效—、制作堿燒傷模型兔模型采用日本大耳白家兔(遼寧醫(yī)學院實驗動物中心，合格證號遼實動質(zhì)證字038號)，體重為2.53.5Kg，雌雄兼用，健康無眼病。用1%地卡因表面麻醉；將直徑為8mm的6濾紙片(浸有0.5mol/LNaOH溶液)置于角膜表面中央；lmin后取下濾紙片；用滅菌生理鹽水連續(xù)沖洗角膜2min;得到堿燒傷模型兔模型。二、秦皮甲素眼用凝膠對眼部炎癥的療效將堿燒傷模型兔模型隨機均分成3組，每組10只，分別進行給藥，具體如下第一組(空白對照組)滴加生理鹽水，每日四次，每次一滴，滴入患眼；第二組(陽性對照組)滴加氧氟沙星滴眼液(滄州光明藥業(yè)有限公司)，每日四次，每次一滴，滴入患眼；第三組(治療組)滴加實施例2制備的秦皮甲素眼用凝膠，每日四次，每次一滴，滴入患眼。連續(xù)給藥2周，觀察供試品對堿燒傷造成的炎癥和水腫的緩解能力，計算角膜上皮愈合率，以評價各供試品的治療效果。計算角膜上皮愈合率采用熒光染色方法用20%熒光素鈉無菌溶液一滴，滴入兔結(jié)膜囊內(nèi)，使其被動閉眼5min，然后稍停片刻，如果眼內(nèi)仍有較多的染料，可用生理鹽水溶液沖洗除去之，分別于傷后0、1、2、3、5、7、10、14天進行裂隙燈檢查，熒光素染色照相，照片經(jīng)計算機圖象分析系統(tǒng)處理，計算其角膜上皮愈合率。。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>角膜上皮損傷面積(著色面積)見表l。角膜上皮細胞愈合率(％)見表2。表1角膜上皮損傷面積(mm2，X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>[OO73]表2角膜上皮細胞愈合率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實驗結(jié)果表明，陽性對照組和治療組都能有效緩解炎癥，促進創(chuàng)面愈合，治療組的效果最好。實施例4、秦皮甲素眼用凝膠的眼部舒適度和利用度考察1、稱取50mg實施例1制備的秦皮甲素，用200ml水溶解，溶液經(jīng)過O.22um微孔濾膜過濾，收集濾液。2、稱取400mg硼酸、羥丙基甲基纖維素(用量見表3)、海藻酸鈉(用量見表4)、250mg富馬酸二甲酯，用250ml水溶解，得基質(zhì)；基質(zhì)在121°C、104kPa壓力下滅菌20min，得到無菌基質(zhì)；3、將步驟1的濾液和步驟2的無菌基質(zhì)混合，加水至500g，混勻，得到秦皮甲素眼用凝膠。表3四種樣品中羥丙基甲基纖維素和海藻酸鈉的添加量。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>考察四種樣本的舒適度。舒適度評定標準(給藥后15秒內(nèi)眨眼次數(shù))0-4次++++;4-6次+++;6-8次++;8次以上+。結(jié)果見表4。表4四種樣本的舒適度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>其中樣本2舒適度最好。權(quán)利要求一種秦皮甲素眼用凝膠，是用如下原料制備得到的4.8-5.2質(zhì)量份秦皮甲素、35-45質(zhì)量份硼酸、380-420質(zhì)量份羥丙基甲基纖維素、180-220質(zhì)量份海藻酸鈉、23-27質(zhì)量份富馬酸二甲酯和49300-49350質(zhì)量份水。2.如權(quán)利要求1所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于是用如下原料制備得到的5質(zhì)量份秦皮甲素、40質(zhì)量份硼酸、400質(zhì)量份羥丙基甲基纖維素、200質(zhì)量份海藻酸鈉、25質(zhì)量份富馬酸二甲酯和49330質(zhì)量份水。3.如權(quán)利要求1或2所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于是用如下方法制備的將所述秦皮甲素用水溶解，過濾后收集濾液；將所述硼酸、所述羥丙基甲基纖維素、所述海藻酸鈉、所述富馬酸二甲酯用水溶解，滅菌后得到無菌基質(zhì)；將所述濾液和所述無菌基質(zhì)混合，加入水，得到秦皮甲素眼用凝膠。4.如權(quán)利要求3所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于所述濾液采用0.22iim微孔濾膜過濾；制備所述無菌基質(zhì)時的滅菌條件為12rC、104kPa、20min。5.如權(quán)利要求1至4中任一所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于所述秦皮甲素的制備方法包括如下步驟(1)將秦皮進行醇提，得到粗提液；(2)將步驟(1)的粗提液與乙酸乙酯混合，分層后棄乙酸乙酯層，得到萃取液；(3)將步驟(2)的萃取液進行羥丙基葡聚糖凝膠柱層析，用水洗脫，收集秦皮甲素溶液和秦皮甲素-秦皮苷混合液；(4)將步驟(3)的秦皮甲素-秦皮苷混合液進行羥丙基葡聚糖凝膠柱層析，用乙醇水溶液洗脫，收集秦皮甲素溶液；(5)將步驟(3)和步驟(4)的秦皮甲素溶液進行濃縮結(jié)晶，收集晶體；(6)用甲醇將步驟(5)的晶體進行重結(jié)晶，收集晶體；(7)將步驟(6)的晶體干燥后得到秦皮甲素。6.如權(quán)利要求5所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于步驟(1)中，所述醇提為將秦皮用95%(質(zhì)量百分含量)乙醇水溶液65-75t:提取1.5-2.5小時；所述秦皮和所述95%乙醇水溶液的配比為lg秦皮5-7mL95%乙醇水溶液；所述醇提優(yōu)選為將秦皮粉末用95%乙醇水溶液7(TC提取2小時；所述秦皮和所述95%乙醇水溶液的配比為lg秦皮6mL95%乙醇水溶液。7.如權(quán)利要求5或6所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于步驟(1)中，進行所述醇提后，55t:、0.lMPa蒸發(fā)，蒸發(fā)后體積為蒸發(fā)前體積的1/23-1/20，得到所述粗提液。8.如權(quán)利要求5至7中任一所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于步驟(2)中，所述粗提液和所述乙酸乙酯等體積混合；步驟(5)中，將所述秦皮甲素溶液55t:、0.lMPa減壓濃縮，0-4t:析晶；步驟(6)中，55t:水浴中將步驟(5)的晶體用甲醇溶解，過濾收集濾液，0-4"析晶。9.如權(quán)利要求5至8中任一所述的秦皮甲素眼用凝膠，其特征在于步驟(3)中，用蒸餾水洗脫，流速為3.5mL/min;步驟(4)中，用20%(質(zhì)量百分含量)乙醇水溶液洗脫，流速為3.5mL/min;步驟(3)和步驟(4)中，所述羥丙基葡聚糖凝膠柱為羥丙基葡聚糖凝膠S印hadexLH_20。10.—種治療眼部炎癥的藥物，它的活性成分為權(quán)利要求1或9中任一所述的秦皮甲素眼用凝膠。全文摘要本發(fā)明公開了一種秦皮甲素眼用凝膠及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供的秦皮甲素眼用凝膠，是用如下原料制備得到的4.8-5.2質(zhì)量份秦皮甲素、35-45質(zhì)量份硼酸、380-420質(zhì)量份羥丙基甲基纖維素、180-220質(zhì)量份海藻酸鈉、23-27質(zhì)量份富馬酸二甲酯、49300-49350質(zhì)量份水。本發(fā)明通過處方篩選和制劑技術(shù)，將秦皮甲素生產(chǎn)成為眼用凝膠制劑，用于治療眼部炎癥。本發(fā)明提供的秦皮甲素的提取方法，可以使產(chǎn)品的純度達到99.4％。本發(fā)明得到的秦皮甲素眼用凝膠用于治療眼部炎癥，為首次提出，本品舒適度高，療效確切。文檔編號A61K9/00GK101716133SQ200910242109公開日2010年6月2日申請日期2009年12月8日優(yōu)先權(quán)日2009年12月8日發(fā)明者于洪儒申請人:于洪儒