專利名稱：螠蟶貝殼提取物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種提取物的制備方法，特別是一種螆蟶貝殼提取物的制備方法，該
提取物具有抑菌活性、抗氧化活性和誘導植物抗性的作用，可作為添加劑用于制備治療和 預防清除體內過氧化物的藥物、食品防腐劑、作為皮膚表淺傷口的抑菌消炎藥物和誘導植 物抗性的生物農藥。
背景技術：
貝殼含有大量的碳酰，可用來燒制石灰。貝殼灰替代石灰用于生產蒸壓加氣混凝 土砌塊，具有較好的社會效益和經濟效益。貝殼也是重要的中藥材，可治療各種疾病。如鮑 的貝殼用于眼疾，寶貝的貝殼明目解毒，烏賊的內殼用于治療外傷、癲癇、心臟病和胃病，并 用來止血，文蛤的殼能治療慢性氣管炎、淋巴結核、胃及十二指腸潰瘍，紅螺殼用于治療胃 痛；以牡蠣貝殼為原料制備碳酸鈣的工藝日益引起人們的重視，該種碳酸鈣具有一定的生 物活性，富含多種對人體有益的微量元素，如Zn、Mg、P、Fe、K、Cu等，易于被人體吸收；利用 廢棄扇貝殼制備新型的吸附材料，貝殼開發(fā)利用的前景是相當廣闊的，不僅可以向食用、藥 用方向轉化，而且可向化工、飼料、農藥、化妝品方向轉化。 鎰蟶(Sinonovacula constricta Iamarck)俗名蟶子、青子、竹蚶、海蟶，隸屬于 軟體動物門(Mollusca)、瓣鰓綱(LameUibranchia)、真瓣鰓目(Eulamellibranchia)、蟶科 (Pharellidae)，為中國和日本所特有，也是中國沿海養(yǎng)殖的重要貝類之一。目前對螆蟶貝 殼化學成分的研究并不多，對其提取物活性的研究則更少。在藥品、生物農藥、食品保鮮劑、 防腐劑及化妝品等方面還沒有對其進行加工利用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種方法簡單、好操作、易控制、成本低的螆蟶貝殼提取物
的制備方法，以便制得具有良好抑菌、抗氧化和植物誘抗活性的產品，用于作為藥品、生物
農藥、食品保鮮劑、防腐劑及化妝品等產品的添加劑，克服現(xiàn)有技術的不足。 本發(fā)明的螆蟶貝殼提取物的制備方法，由如下步驟組成 a、選取新鮮的螆蟶貝殼去肉； b、利用機械破碎方式對a步驟所述的貝殼進行破碎，形成貝殼粉末，其貝殼粉末 的目數(shù)控制在50目 120目之間； c、用生理鹽水提取貝殼粉末，貝殼粉末與生理鹽水的配比為每千克貝殼粉末加 入2升生理鹽水；分三次提取，第一次提取時間為一天，然后利用抽濾裝置過濾收集濾液； 第二次提取時間為兩天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；第三次提取時間為三天，利用抽濾裝 置過濾收集濾液； d、把c步驟中三次提取的濾液混合得生理鹽水提取液，再對生理鹽水提取液進行 冷凍干燥，得螆蟶貝殼的生理鹽水提取物。 本發(fā)明的方法制備的螆蟶貝殼提取物的制備方法，工藝步驟非常簡單，好操作，容易控制，成本低，原料來源廣闊，為藥品、生物農藥、食品保鮮劑、防腐劑及化妝品等產品提 供了一種較好的添加劑。
具體實施例方式
本發(fā)明的工藝步驟如下
a、選取新鮮的螆蟶貝殼去肉； b、選用機械式破碎設備對a步驟所述的貝殼進行破碎，形成貝殼粉末，其貝殼粉 末的目數(shù)控制在50目或60目或70目或80目或90目或IOO目或IIO目或120目，即在50 目 120目之間均可； c、用濃度為0.9X的生理鹽水提取貝殼粉末，貝殼粉末與生理鹽水的配比為每 千克貝殼粉末加入2升生理鹽水；分三次提取，第一次提取時間為一天，然后利用抽濾裝置 過濾收集濾液；第二次提取時間為兩天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；第三次提取時間為 三天，利用抽濾裝置過濾收集濾液； d、把c步驟中三次提取的濾液混合得生理鹽水提取液，再對生理鹽水提取液進行 冷凍干燥，得粉末狀的螆蟶貝殼生理鹽水提取物。 本發(fā)明的提取物可作為藥品、生物農藥、食品保鮮劑、防腐劑及化妝品等產品的添 加劑。 為了對本發(fā)明的提取物進行檢測，將30g的螆蟶貝殼按上述方法制取提取物，并 將提取物溶于lOOmL水中用于檢測其活性。 濾紙片法檢測組織提取液的抑菌活性大腸桿菌Escherichia coli(EC)、變形 桿菌Proteus vulgaris (PV)、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus (SA)、產氣桿菌 Enterobacter aerogenes (EA)禾口枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis (BS)用牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基，乳酸菌Lactobacterium delbruckii (LD)用MRS培養(yǎng)基。釀酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae(SC)用YPD培養(yǎng)基。以上各種菌分別接種于相應的液體培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)24h 作指示菌。分別用移液槍取指示菌液lOOii L于相應的固體培養(yǎng)基，用無菌三角涂棒涂抹均 勻，然后將平板分成六個區(qū)，每個區(qū)分別放入一張濾紙片，再分別用移液槍移取貝殼提取物 樣品10iiL滴入濾紙片中央，置于37t:培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每個處理做3次重復，陽性對照為 75%酒精，陰性對照為無菌水。三天后觀察指示菌的生長情況，測定抑菌圈的直徑大小。結 果該提取物對指示菌基本都具備抑菌作用(乳酸菌除外)，尤其對酵母菌、枯草芽孢桿菌、 金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果非常顯著，因此用這種螆蟶貝殼提取物開發(fā)食品添 加劑可因其抑菌活性而延長產品的保藏時間，還可直接開發(fā)成食品保鮮防腐劑。由于該提 取物對金黃色葡萄球菌作用明顯，因此可以作為治療皮膚表淺創(chuàng)傷的藥物或應用于化妝品 的添加劑。 超氧陰離子自由基(02—)清除作用的測定取鄰苯三酚O. lmL于試管中，加入pH 8. 2的Tris-HCl緩沖溶液5mL，加入螆蟶貝殼提取物的溶液0. 25mL，迅速混勻。在25。C反 應15min。使用lcm比色皿，以蒸餾水做空白對照，在320nm處時測吸光度At，并測定本底 扣除水解液自身的干擾。提取物溶液對超氧陰離子自由基清除率的計算公式如下清除率 S(%) = Ao-(Ai-Aj)/AoX100X。式中，Ao為試劑空白的吸光度值為樣液的吸光度值； A,.為樣液本底的吸光度值。雖然超氧陰離子自由基(02—)不能直接誘導生物和食品體系中的脂類氧化，但它會在金屬離子催化下發(fā)生Fenton反應產生有高活性的 0H，因此常用樣 品對超氧陰離子自由基(02—)的清除能力來反映其抗氧化活性。試劑空白時的吸光度值Ao 為0.862，經清除率公式S(X) = Ao-(Ai-Aj)/AoX100計算超氧陰離子自由基清除率。結 果螆蟶貝殼提取物溶液的超氧陰離子自由基清除率56. 30% 。因此可用作抗氧化藥物的制 備或食品抗氧化添加劑。羥自由基('0H)清除作用的測定取9mmol/L的FeS04 lmL、9mmol/L的水楊酸-乙 醇溶液lmL、樣品酶解液lmL，最后加入8. 8mmol/L的H202 lmL啟動反應。在37。C反應30分 鐘。以水為參比，用可見光分光光度計在510nm下測各個提取液吸光度值。提取物對羥自 由基的清除效果用清除率表示，按下式計算
SA = [ (Ac-As) / (Ac-Ao) ] X 100 % 式中，Ac為對照組0D值；As為樣品組0D值；A。為空白組0D值。
羥基自由基(*0H)是一種能夠激發(fā)油脂過氧化反應的較強的氧化劑，被認為是體 內最活躍的活性氧自由基，輻射損傷等物理、化學因子都會促進其形成，是造成生物有機體 過氧化損傷的主要因素。羥自由基可介導許多病理變化，如引發(fā)不飽和脂肪酸的脂質過氧 化反應，并損傷生物膜的功能和結構，因此羥自由基的清除對于生物體具有重要意義。H202 和Fe2+混合發(fā)生Fenton反應，生成具有很高反應活性的*0H，能被水楊酸有效的捕捉，并生 成有色物質；但若加入具有清除作用的物質，便會與水楊酸競爭，從而使有色產物生成量減 少。 對照組0D值Ac 1. 053，空白組0D值AoO. 018。 經公式SA = [ (Ac-As)/ (Ac-Ao)]X100X算出羥自由基清除率SX，該樣品清除羥自由基(*0H)的清除率為60%， 因此可用作抗氧化藥物的制備或食品抗氧化添加劑。 大豆子葉法測定植物誘抗活性將發(fā)芽大豆，放入洗凈的解剖盤當中澆水浸沒，放 入光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天澆水培養(yǎng)4-5天待大豆長出兩片真葉后即可進行活性測定。在無 菌條件下，將剛剛長出真葉的大豆子葉剪下，用8%次氯酸鈉溶液滅菌5分鐘，再用無菌水 沖洗。用刀片削去子葉外表皮厚約lmm，直徑約6mm的傷口 ，用無菌水浸泡清洗，約30秒后 取出，濾紙拭干后放入鋪有濕濾紙培養(yǎng)皿中，每皿IO片子葉作為一個處理。每組樣液一個 處理，每個處理做一次重復，對照組用無菌水。使用微量移液器取配置好的螆蟶貝殼提取液 每10 ii L加在一個傷口上。處理后的子葉在28°C黑暗的溫箱中培養(yǎng)24小時后，將每皿中的 子葉轉移到一個盛有l(wèi)OmL雙蒸水的試管中，充分振蕩，用紫外分光光度計在286nm處測定 0D值。結果該螆蟶貝殼提取物的溶液處理的樣品OD值明顯高于陽性對照(殼寡糖)，因此 植物誘抗活性顯著，可應用于生物農藥的開發(fā)。 根據(jù)上述的檢測可知，本發(fā)明的提取物具有抗氧化、抑菌和植物誘抗等多種顯著 生物活性；原料來源豐富，價格低廉，制備方法簡便；螆蟶是中國沿海養(yǎng)殖的重要貝類良種 之一，而螆蟶的組織加工后，其殼往往被廢棄，因此來源豐富且可增強廢物利用，減少環(huán)境 污染。
權利要求
一種螠蟶貝殼提取物的制備方法，其特征在于由如下步驟組成a、選取新鮮的螠蟶貝殼去肉；b、利用機械破碎方式對a步驟所述的貝殼進行破碎，形成貝殼粉末，其貝殼粉末的目數(shù)控制在50目～120目之間；c、用生理鹽水提取貝殼粉末，貝殼粉末與生理鹽水的配比為每千克貝殼粉末加入2升生理鹽水；分三次提取，第一次提取時間為一天，然后利用抽濾裝置過濾收集濾液；第二次提取時間為兩天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；第三次提取時間為三天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；d、把c步驟中三次提取的濾液混合得生理鹽水提取液，再對生理鹽水提取液進行冷凍干燥，得螠蟶貝殼的生理鹽水提取物。
全文摘要
一種螠蟶貝殼提取物的制備方法，步驟如下選取新鮮的螠蟶貝殼去肉；利用機械破碎方式對貝殼進行破碎，形成貝殼粉末，其貝殼粉末的目數(shù)控制在50目～120目之間；用生理鹽水提取貝殼粉末，貝殼粉末與生理鹽水的配比為每千克貝殼粉末加入2升生理鹽水；分三次提取，第一次提取時間為一天，然后利用抽濾裝置過濾收集濾液；第二次提取時間為兩天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；第三次提取時間為三天，利用抽濾裝置過濾收集濾液；三次提取的濾液混合得生理鹽水提取液，再對生理鹽水提取液進行冷凍干燥，得螠蟶貝殼的生理鹽水提取物。具有工藝步驟簡單、好操作、容易控制、成本低、原料來源廣闊的優(yōu)點。
文檔編號A61P31/02GK101716189SQ20091024896
公開日2010年6月2日 申請日期2009年12月29日 優(yōu)先權日2009年12月29日
發(fā)明者張付云 申請人:大連水產學院