專利名稱：：關(guān)附甲素凍干乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種關(guān)附甲素凍干乳劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：關(guān)附甲素(Guan-FuBaseA，GFA)是從毛茛科植物黃花烏頭(Aconitumcorea皿m(levl.)R即aics塊根關(guān)白附中提取的叔胺類二萜生物堿。臨床前藥理研究表明，鹽酸關(guān)附甲素注射液可對抗高鈣、結(jié)扎冠狀動脈及硝酸烏頭堿誘發(fā)的室性心動過速和心室顫動。鹽酸關(guān)附甲素是將難溶性關(guān)附甲素游離堿與鹽酸反應(yīng)成鹽，成鹽后雖然可以大大增加關(guān)附甲素的水溶性，但是藥物的藥理活性下降，給藥劑量大(目前臨床用藥劑量為140mg)，人體內(nèi)半衰期很短(T1/2n2.6±1.2ml/min)，體內(nèi)代謝加快，療效發(fā)揮受到限制，部分患者出現(xiàn)口唇麻木感的副作用。微粒給藥系統(tǒng)近年來成為國內(nèi)外一個重要的研究熱點，是給藥系統(tǒng)中發(fā)展較快的領(lǐng)域。這是由于微粒給藥系統(tǒng)有助于提高難溶性藥物的溶解度及生物利用度；改善藥物的穩(wěn)定性；具有靶向性；具有明顯的緩釋作用；降低給藥部位剌激性等。微粒給藥系統(tǒng)主要包括脂質(zhì)體、納米粒、乳劑、微囊、微球等。其中，乳劑是最易工業(yè)化大生產(chǎn)的劑型。目前，國內(nèi)外未見有關(guān)關(guān)附甲素凍干乳劑的報道，亦無本發(fā)明涉及的處方工藝下制備的乳劑其粒徑對關(guān)附甲素體內(nèi)動力學行為的影響。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種在體內(nèi)具有最優(yōu)動力學行為的粒徑的關(guān)附甲素凍干乳制劑本發(fā)明的另一目的是提供一種關(guān)附甲素凍干乳劑的制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到關(guān)附甲素凍干乳劑，是一種將藥物溶于油中，再在水中乳化分散成300400nm的微粒，冷凍干燥成穩(wěn)定的凍干粉，在給藥前加入注射用水復溶后靜脈給藥的制劑。它是以關(guān)附甲素為活性成分，再加上藥學上常用的注射用油、乳化劑、附加劑、凍干保護劑而成，其中凍干乳制劑各組分的重』l份含量t為關(guān)附甲素0.02--0.14份注射用油0.01--2份乳化劑0.01--0.6份附加劑0.0010.05份凍干保護劑0.05--l份。凍干乳制劑中優(yōu)選含有以下重量^關(guān)附甲素0.05--0.1份注射用油0.03--l份乳化劑0.10.4份4附加劑0.0010.01份凍干保護劑0.20.8份。其中，所述注射用油選自包括大豆油、亞麻子油、茶油、紅花油、棉子油、玉米油、花生油、蓖麻油、魚油、鮮油、蛙魚油、金槍魚油或鱗魚油、中鏈甘油三酯、甘油單酯、甘油二酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕擱酸異丙酯、聚烴氧基氫化蓖麻油、長鏈或中鏈脂肪酸或脂肪酸醇中的一種或幾種的混合物。乳化劑為選自包括白蛋白、膽固醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯脂肪醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸醋油酯、單硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰膽堿中的一種或幾種的混合物。凍干保護劑為選自包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、右旋糖酐和聚乙烯咄咯烷酮中的一種或幾種的混合物。附加劑為選自包括穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑和抗氧化劑中的一種或幾種。穩(wěn)定劑為選自包括油酸鈉、膽酸、脫氧膽酸及其鈉鹽中的一種或幾種的混合物。pH調(diào)節(jié)劑選自包括鹽酸、氫氧化鈉、醋酸鈉、醋酸、磷酸鹽或檸檬酸中的一種或幾種的混合物。等滲調(diào)節(jié)劑為甘油。抗氧化劑為選自包括無水亞硫酸鈉、維生素C、a_生育酚、a-醋酸生育酚、氫醌、L-半胱氨酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣二鈉中的一種或多種的混合物?！N制備權(quán)利關(guān)附甲素凍干乳劑的方法，包括如下步驟1)將關(guān)附甲素溶于注射用油中，作為油相；2)乳化劑、附加劑和凍干保護劑溶于注射用水中；3)將油相加入水相中，以800010000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，以一級閥10001500bar、二級閥150300bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；其中高壓均質(zhì)后的乳液的粒徑需達到150250nm;4)乳液過濾滅菌后，在-40-15"預(yù)凍612小時，再以0.11°C/min速度升溫冷凍干燥1024小時。本發(fā)明涉及的凍干乳劑復溶成液體乳劑后，粒徑可控制在300400nm之間，實驗驗證在該粒徑范圍內(nèi)，乳劑復溶液在體內(nèi)具有最優(yōu)動力學行為最大的血藥濃度曲線下面積，最長的平均駐留時間。與鹽酸關(guān)附甲素注射液相比，本發(fā)明涉及的關(guān)附甲素凍干乳劑具有如下有益效果1.將關(guān)附甲素制成乳劑可以有效解決難溶性藥物的靜脈注射問題；2.關(guān)附甲素凍干乳劑中藥物是以原型游離堿的形式存在，藥理活性高，充分發(fā)揮藥物的治療作用；3.乳劑可以延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，增大血藥濃度-時間曲線下面積(AUC)，延長平均駐留時間(MRT)，達到"長循環(huán)"效果的同時提高療效；4.乳劑可以減慢藥物在體內(nèi)的代謝，增加原型藥物在體內(nèi)的劑量，提高療效；5.乳劑中藥物需先從油相釋放入水相，再從水相釋放入血，所以具有"緩釋"作用，延長起效時間；6.乳劑具有心臟靶向作用，可以增加心肌藥物分布，達到"靶向"治療的效果；7.由于乳劑可以達到靶向的作用，所以可以減小非病變器官(非靶器官)的藥量，降低毒副作用；8.由于乳劑具有"長循環(huán)"、"緩釋"及"靶向"等作用，所以可以降低給藥劑量，節(jié)約資源和成本。9.與鹽酸關(guān)附甲素注射液相比，一半劑量即可實現(xiàn)1.36倍AUC、1.59倍MRT，以及相當?shù)目剐穆墒СＫ幮?。圖1是血漿中藥物濃度_時間曲線圖。具體實施方式實施例1:將0.05份關(guān)附甲素溶于0.8份注射用大豆油中，作為油相；0.2份大豆磷脂、0.001份維生素C、0.125份甘油和0.25份甘露醇溶于注射用水中；將油相加入水相中，8000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，一級閥1000bar、二級閥150bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；過濾滅菌后，-2(TC預(yù)凍8小時后，以0.5°C/min速度升溫冷凍干燥12小時，即得。其復溶成液體乳劑后粒徑在300400nm之間。實施例2:將0.07份關(guān)附甲素溶于l份注射用中鏈脂肪酸中，作為油相；0.12份大豆磷脂、0.2份泊洛沙姆F-68，0.005份L-半胱氨酸和0.5份葡萄糖溶于注射用水中；將油相加入水相中10000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，一級閥1500bar、二級閥300bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；過濾滅菌后，-4(TC預(yù)凍12小時后，以0.3°C/min速度升溫冷凍干燥24小時，即得。其復溶成液體乳劑后粒徑在300400nm之間。實施例3:將0.1份關(guān)附甲素溶于0.5份注射用大豆油和0.5份中鏈脂肪酸的混合油中，作為油相；0.1份卵磷脂、0.15份泊洛沙姆F-68，0.01份無水亞硫酸鈉、0.12份甘油和0.3份山梨醇溶于注射用水中；將油相加入水相中9000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，一級閥1300bar、二級閥200bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；過濾滅菌后，-3(rC預(yù)凍10小時后，以0.15°C/min速度升溫冷凍干燥20小時，即得。其復溶成液體乳劑后粒徑在300400nm之間。實施例4:不同粒徑關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液對體內(nèi)動力學行為的影響小鼠尾靜脈分別注射不同粒徑關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液10.5mg/kg，于給藥后不同時間點取血，分離血漿，生物樣品處理，采用液-質(zhì)聯(lián)用分別測定不同時間點血漿中藥物濃度，結(jié)果表1。除粒徑在300-400nm的乳劑為本發(fā)明實施例2涉及的關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液，其余粒徑的乳劑為本發(fā)明以外處方和工藝制備的關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液。關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液粒徑為200300nm的處方和制備方法如下將0.07份關(guān)附甲素溶于O.l份注射用大豆油中，作為油相；0.12份大豆磷脂和0.25份甘露醇溶于注射用水中；將油相加入水相中，12000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，一級閥2000bar、二級閥350bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；過濾滅菌后，_701:預(yù)凍24小時后，冷凍干燥36小時，即得凍干乳6劑。加入注射用水后分散為粒徑200300nm的乳劑復溶液。關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液粒徑為400500nm的處方和制備方法如下將0.07份關(guān)附甲素溶于2份注射用大豆油中，作為油相；1.2份大豆磷脂和0.5份甘露醇溶于注射用水中；將油相加入水相中，7000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，一級閥900bar、二級閥100bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；過濾滅菌后，-l(TC預(yù)凍6小時后，冷凍干燥8小時，即得凍干乳劑。加入注射用水后分散為粒徑400500nm的乳劑復溶液?？梢?，粒徑在300-400nm之間乳劑復溶液在體內(nèi)具有最優(yōu)動力學行為最大的血藥濃度曲線下面積(AUC)，最長的平均駐留時間(MRT)。說明與本發(fā)明以外處方和工藝制備的關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液相比，本發(fā)明涉及的關(guān)附甲素凍干乳劑具有最好的增效、長效作用。表1小鼠尾靜脈注射不同粒徑關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液后體內(nèi)動力學行為結(jié)果凍<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例5:藥動學實驗小鼠尾靜脈分別注射鹽酸關(guān)附甲素注射液21mg/kg、關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液(粒徑300-400nm，實施例2制備的凍干乳劑加入注射用水復溶即得)10.5mg/kg，于給藥后不同時間點取血，分離血漿，生物樣品處理，采用液-質(zhì)聯(lián)用分別測定不同時間點血漿中藥物濃度，結(jié)果見圖1和表2。可見，與鹽酸關(guān)附甲素注射液相比，即使給予一半劑量的關(guān)附甲素乳劑，AUC仍大于鹽酸關(guān)附甲素注射液(1.36倍)，且MRT延長(1.59倍)，說明關(guān)附甲素乳劑具有一定增效、長效作用。表2非房室模型擬合結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例6:藥效學試驗大鼠尾靜脈分別注射生理鹽水(模型組)、鹽酸關(guān)附甲素注射液(陽性藥)、關(guān)附甲素凍干乳劑復溶液(粒徑300-400nm，實施例2制備的凍干乳劑加入注射用水復溶即得)，給藥后立即由股靜脈恒速輸入烏頭堿溶液，記錄發(fā)生室早(VP)、室速(VT)、室顫(VF)時的時間以及烏頭堿的用量，觀察受試藥對烏頭堿所致大鼠心律失常的影響。試驗結(jié)果表明，與模型組比較，受試藥乳劑高、中劑量以及陽性藥可極顯著延長大鼠室早、室速、室顫時間(P<0.01)，對大鼠室早、室速、室顫時所需烏頭堿量極顯著增多(P<0.01);乳劑低劑量可極顯著延長大鼠室早、室速時間(P〈0.01)，可顯著延長大鼠室顫時間(P<0.05)，對大鼠室早、室速時所需烏頭堿量極顯著增多(P〈0.01)，對大鼠室顫時所需烏頭堿量顯著增多(P<0.05)。與陽性藥比較，乳劑高劑量可極顯著延長大鼠室早、室速、室顫時間(P<0.01)，大鼠室早、室速、室顫時所需烏頭堿量極顯著增多(P<0.01);乳劑中劑量對大鼠室早、室速出現(xiàn)時間無顯著性差異，可顯著延長大鼠室顫時間(P<0.05)。對大鼠室早、室速時所需烏頭堿量無顯著性影響，對室顫時烏頭堿用量極顯著增多(P<0.01);乳劑低劑量對大鼠室早、室速時間縮短極顯著(P〈0.01)，對大鼠室顫無顯著性影響，對大鼠室早、室速時所需烏頭堿量減少極顯著(P<0.01)，對室顫時所需烏頭堿量無顯著性影B向。可見，關(guān)附甲素乳劑7mg/kg劑量與鹽酸關(guān)附甲素14mg/kg藥效相當。其他實施例的關(guān)附甲素凍干乳劑也具有類似效果。表3關(guān)附甲素凍干乳劑對烏頭堿所致大鼠室早(VP)、室速(VT)、室顫(VF)出現(xiàn)時間的影響(n=8j±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.Ol，與模型組比較；AP<0.05，AAP<0.Ol，與陽性藥比較表4關(guān)附甲素凍干乳劑對烏頭堿所致大鼠室早(VP)、室速(VT)、室顫(VF)時烏頭堿用量的影響(n=8，；±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.Ol，與模型組比較；AP<0.05，AAP<0.Ol，與陽性藥比較。權(quán)利要求一種關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于它是以關(guān)附甲素為活性成分，再加上藥學上常用的注射用油、乳化劑、附加劑、凍干保護劑而成，其中凍干乳制劑各組分的重量份含量為關(guān)附甲素0.02～0.14份注射用油0.01～2份乳化劑0.01～0.6份附加劑0.001～0.05份凍干保護劑0.05～1份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于凍干乳制劑含有以下重量分的組分關(guān)附甲素0.050.l份注射用油0.031份乳化劑0.10.4份附加劑0.0010.01份凍干保護劑0.20.8份。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于所述注射用油選自大豆油、亞麻子油、茶油、紅花油、棉子油、玉米油、花生油、蓖麻油、魚油、鮮油、蛙魚油、金槍魚油或鱗魚油、中鏈甘油三酯、甘油單酯、甘油二酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕擱酸異丙酯、聚烴氧基氫化蓖麻油、長鏈或中鏈脂肪酸或脂肪酸醇中的一種或幾種。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于所述乳化劑為選自白蛋白、膽固醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯脂肪醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸醋油酯、單硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺或磷脂酰膽堿中的一種或幾種。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于所述凍干保護劑選自葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、右旋糖酐或聚乙烯咄咯烷酮中的一種或幾種。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于所述附加劑選自穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑或抗氧化劑中的一種或幾種。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于所述穩(wěn)定劑選自油酸鈉、膽酸、脫氧膽酸或脫氧膽酸鈉鹽中的一種或幾種；所述PH調(diào)節(jié)劑選自鹽酸、氫氧化鈉、醋酸鈉、醋酸、磷酸鹽或檸檬酸中的一種或幾種；所述等滲調(diào)節(jié)劑為甘油；所述抗氧化劑選自無水亞硫酸鈉、維生素C、a-生育酚、a-醋酸生育酚、氫醌、L-半胱氨酸、乙二胺四乙酸二鈉或乙二胺四乙酸鈣二鈉中的一種或幾種。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的關(guān)附甲素凍干乳劑，其特征在于關(guān)附甲素凍干乳劑復溶成液體乳劑后，乳液粒徑在300400nm之間。9.一種制備權(quán)利要求1所述的關(guān)附甲素凍干乳劑的方法，其特征在于包括如下步驟1)將關(guān)附甲素溶于注射用油中，作為油相；2)乳化劑、附加劑和凍干保護劑溶于注射用水中；3)將油相加入水相中，以800010000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，以一級閥10001500bar、二級閥150300bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；4)乳液過濾滅菌后，在-40-15t:預(yù)凍612小時，再冷凍干燥1024小時。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的關(guān)附甲素凍干乳劑的方法，其特征在于所述高壓均質(zhì)后的乳液的粒徑為150250nm。全文摘要本發(fā)明公開了一種關(guān)附甲素凍干乳劑及其制備方法。關(guān)附甲素凍干乳劑是以關(guān)附甲素為活性成分，加上藥學上常用的注射用油、乳化劑、附加劑、凍干保護劑的凍干乳制劑，其加入注射用水后分散成粒徑在300～400nm之間的乳劑復溶液，與鹽酸關(guān)附甲素注射液相比，一半劑量即可實現(xiàn)1.36倍AUC、1.59倍MRT，以及相當?shù)目剐穆墒СＫ幮?。文檔編號A61K31/439GK101716150SQ200910264208公開日2010年6月2日申請日期2009年12月31日優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日發(fā)明者劉沙,劉靜涵,朱家壁,楊春華,汪豪,熊非,顧寧申請人:劉靜涵;熊非;楊春華;汪豪