專利名稱：：奧硝唑藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及奧硝唑藥物組合物及其制備方法，尤其是奧硝唑注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：人體表面以及人體與外界相通的腔道粘膜表面寄生著為數(shù)眾多的正常菌群，其中厭氧菌所占比例較大。他們?cè)谀承┣闆r下可成為條件致病菌(如解剖屏障的機(jī)械損傷、正常菌群失調(diào)等)。由厭氧菌感染引起的感染涉及臨床各科及人體各部位。厭氧菌感染有如下幾個(gè)特點(diǎn)一是感染多發(fā)生在粘膜或其他鄰近部位，也可能侵犯遠(yuǎn)隔器官。例如，口咽粘膜的厭氧菌在一定條件下引起口炎，結(jié)腸直腸粘膜的厭氧菌在一定條件下引起結(jié)腸直腸粘膜膿腫，陰道粘膜的厭氧菌在一定條件下可引起陰道炎、會(huì)陰陰道膿腫?？谘收衬さ膮捬蹙梢郧址干嘞?、頜下、咬肌、口頰、腮腺、側(cè)咽或咽后間隙引起感染，甚至可以通過耳咽管引起中耳炎，進(jìn)一步通過上鼓室隱窩和入口擴(kuò)展到乳突，引起乳突炎，或入腦引起腦膜炎、腦膿腫?？谘收衬さ膮捬蹙部梢匀敕我鸱文撃[，膿胸。二是厭氧菌的感染多為慢性感染。三是厭氧菌的感染多為內(nèi)源性感染即感染是由宿主自身的菌群引起的。四是多為混合感染，即由多種病原菌引起。臨床上的各種感染都可能與厭氧菌感染有關(guān)。厭氧菌中最常見的病菌是革蘭氏陰性厭氧桿菌_脆弱類桿菌，其次是梭菌和厭氧球菌。滴蟲是一種極微小有鞭毛的原蟲生物。常寄生在陰道或口腔內(nèi)。有研究者研究了陰道毛滴蟲與宿主細(xì)胞的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)蟲體黏附、吞噬離體和在體兩性宿主細(xì)胞現(xiàn)象相似。蟲體嗜好寄生于陰道上部，因該處上皮表面有柱狀細(xì)胞，富有PAS陰性黏原顆粒，微絨毛有利蟲體黏附與吞食。蟲體可釋放水解酶進(jìn)入被黏附的上皮細(xì)胞內(nèi)。表明該蟲子體具有一定的侵襲力，直接損傷泌尿道上皮。滴蟲不僅發(fā)現(xiàn)在泌道系統(tǒng)，還常發(fā)現(xiàn)在口腔中。口腔滴蟲感染與口腔疾病有密切關(guān)系。滴蟲對(duì)人身體有危害是不可忽視的，所以治療是非常重要的。1955年nakamura發(fā)現(xiàn)了氮霉素(Azomycin，2-Nitro-inidazole，石肖基咪唑)，1956年Horis確證它有殺蟲活性而用于急性阿米巴和肝阿米巴的治療、滴蟲和腸梨形鞭毛蟲的感染。1959年Cosart和Julou合成了以5-硝咪唑?yàn)榛竟羌艿募紫踹騕1_(2_羥乙基)-2-甲基-5-硝基米唑]，1978年WHO確立了甲硝唑?yàn)榭箙捬蹙幕竞褪走x藥物，至此5-硝基咪唑類藥物的臨床地位被確定了下來，一系列的衍生化合物被開發(fā)出來。其中在構(gòu)效與甲硝唑結(jié)構(gòu)密切關(guān)系最緊的是替硝唑、奧硝唑。通常人們也將甲硝唑稱為第一代5-硝基咪唑類藥、替硝唑?yàn)榈诙?-硝基咪唑類藥、奧硝唑?yàn)榈谌?-硝基咪唑類藥。最早在瑞士Roche公司生產(chǎn)奧硝唑并收載于1991年版捷克藥典。奧硝唑化學(xué)名稱為a-氯甲基_2-甲基_5_硝基咪唑_1_乙醇，分子式C7^。CIN303，分子量219.6;其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>甲硝唑、替硝唑和奧硝唑三種化合物具有相同的母核2-甲基-5-硝基咪唑，正是由于母核上的硝基對(duì)于易感的細(xì)胞在無氧或少氧環(huán)境中的較低的氧化還原電位下，被電子傳遞蛋白質(zhì)還原成氨基而具細(xì)胞毒作用，抑制其DNA的合成并使已合成的DNA降解，破壞其雙螺旋結(jié)構(gòu)或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制，使細(xì)胞死亡。專屬厭氧菌，如擬桿菌屬、梭形桿菌屬、梭狀芽胞桿菌屬、部分真桿菌屬以及消化球菌和消化鏈球菌，原蟲如毛滴蟲、阿米巴原蟲、賈第氏鞭毛蟲、疥蟲等都是對(duì)2-甲基-5-硝基咪唑這類化合物敏感生物。由于l位取代基的不同，使得三種化合物在活性上、副作用上有所不同，從大量的文獻(xiàn)上顯示奧硝唑是活性最強(qiáng)、副作用最小的2-甲基-5-硝基咪唑類化合物。奧硝唑的治療厭氧菌感染的有效率明顯高于甲硝唑。研究者認(rèn)為奧硝唑抗厭氧菌譜廣，抗菌效力強(qiáng)，副作用小。奧硝唑進(jìn)入易感的微生物細(xì)胞后，在無氧或少氧環(huán)境和較低的氧化還原電位下，其硝基易被電子傳遞蛋白還原成具細(xì)胞毒作用的氨基，抑制細(xì)胞DNA的合成，并使已合成的DNA降解，破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制，從而使病原體細(xì)胞死亡。臨床上奧硝唑通常用于預(yù)防術(shù)后厭氧菌感染；治療婦科、外科及口腔科與厭氧菌感染有關(guān)的急性感染；治療重癥阿米巴痢疾或阿米巴肝膿腫等。奧硝唑口服制劑由于服用需經(jīng)胃腸道，不僅具有首過效應(yīng)而且2-甲基-5-硝基咪唑類藥物的不良反應(yīng)主要為胃腸道反應(yīng)。注射液直接進(jìn)入血液中，起效快，這是不爭(zhēng)的事實(shí)。對(duì)于臨床急病和重病，注射液能很快減輕或控制疾病。因此奧硝唑藥品宜采用注射劑。由于奧硝唑水溶性較差(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-(X-454)-2003Z)，制備成注射液(如小容量注射劑)存在較大困難。但實(shí)驗(yàn)表明奧硝唑在酸性(如在pH2.0以下)條件下，具有較好的水溶性，通過100°C、30分鐘滅菌，可制得奧硝唑注射液。然而pH過低的注射劑，對(duì)人體有剌激作用，在靜脈滴注過程中易使患者產(chǎn)生疼痛感，且長期使用易得靜脈炎。而且由于100°C、30分鐘滅菌安全性較差(如我國近些年來發(fā)生的一連串藥品安全事故)，現(xiàn)行注射劑無菌滅菌最好采用115t:、30分鐘。實(shí)驗(yàn)表明上述奧硝唑注射液在115t:、30分鐘滅菌，其含量下降且有關(guān)物質(zhì)難于滿足藥用注射劑質(zhì)量要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種靜脈滴注用的奧硝唑藥物組合物及其制備方法，該方法工藝較簡單，制得的產(chǎn)品在115°C、30分鐘滅菌，含量及有關(guān)物質(zhì)均能滿足藥用注射劑質(zhì)量要求。本發(fā)明提供的技術(shù)方案是奧硝唑藥物組合物，每100毫升奧硝唑組合物含有5g的奧硝唑、35-60ml的1，2-丙二醇和使奧硝唑藥物組合物滿足總量的注射用水，pH值為2.5-4.5。每100毫升奧硝唑藥物組合物還含有5-25mg乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)。含有使奧硝唑藥物組合物pH值為2.5-4.5的鹽酸。本發(fā)明還提供了奧硝唑藥物組合物的制備方法奧硝唑藥物組合物的制備方法，在1，2_丙二醇中加入奧硝唑，溫度控制在456(TC，攪拌至完全溶解；再加入濃度為40-70mg/100ml的乙二胺四乙酸二鈉水溶液；然后用針用活性炭吸附后，微孔濾膜過濾脫碳，補(bǔ)注射用水并調(diào)節(jié)pH值至2.5-4.5，得到奧硝唑藥物組合物；其中每100毫升奧硝唑藥物組合物含有5g的奧硝唑、35-60ml的1，2_丙二醇、5-25mg乙二胺四乙酸二鈉。本發(fā)明建議用鹽酸調(diào)節(jié)pH值。本發(fā)明所用乙二胺四乙酸二鈉水溶液由下法得到20mg乙二胺四乙酸二鈉加入9(TC的30-45ml注射用水中溶解，然后冷卻至4560°C。建議用法用量本發(fā)明可制成O.25g:5ml或0.5g:10ml小容量注射劑。靜脈滴注，應(yīng)用前，首先須將本品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，然后再靜脈滴注，滴注時(shí)間為60分鐘左右。對(duì)于成人，須將本品加入100ml或250ml或500ml臨床常用輸液(如5%葡萄糖、10%葡萄糖、0.9%氯化鈉注射液，O.5g以下/100m1、0.5g以上/250-500ml)中。然后再靜脈滴注:1.預(yù)防術(shù)后厭氧菌感染術(shù)前1次靜脈滴注1.Og。2.治療婦科、外科及口腔科與厭氧菌感染有關(guān)的急性感染時(shí)，首劑靜脈滴注0.51.Og，以后每12小時(shí)靜滴0.5g，共510日。兒童按每12小時(shí)10mg/kg劑量靜脈滴注。無論成人或JL童，一旦病情許可，均應(yīng)盡早改為口服治療。3.治療重癥阿米巴痢疾或阿米巴肝膿腫首劑靜脈滴注0.51.Og，然后每12小時(shí)靜滴0.5g，共36天；兒童劑量按每日2030mg/kg體重劑量靜脈滴注。申請(qǐng)人:意外發(fā)現(xiàn)，丙二醇不但能做奧硝唑的溶媒，還使奧硝唑穩(wěn)定性增加。本發(fā)明提供的制備方法工藝簡單，在115°C、30分鐘滅菌，含量及有關(guān)物質(zhì)均能滿足藥用注射劑質(zhì)量要求，制得的產(chǎn)品穩(wěn)定性和安全性好。而且本發(fā)明在靜脈滴注過程中對(duì)人體無剌激作用，減少或消除患者疼痛感，且長期使用也不會(huì)導(dǎo)致患者產(chǎn)生靜脈炎。申請(qǐng)人:還發(fā)現(xiàn)，在加入丙二醇的基礎(chǔ)上再加入乙二胺四乙酸二鈉，可以使制得的產(chǎn)品質(zhì)量更好。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:本發(fā)明奧硝唑注射液及其制備奧硝唑250g1，2-丙二醇0.1M鹽酸適量注射用水加至_共制成1000支制備工藝1)將安瓿洗滌滅菌后備用2)先加入處方量的一半的1，2-丙二醇，再加入奧硝唑，然后再加入余下的1，2_丙二醇?？刂茰囟葹?56(TC，攪拌至完全溶解。3)按上溶液體積加入0.1%(g/mL)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附10_15分鐘后，用O.45iim微孔濾膜加壓過濾脫碳，攪拌均勻，補(bǔ)注射用水至總處方量的90^左右，以鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.O，測(cè)定中間體含量，根據(jù)測(cè)定值補(bǔ)注射用水至含量100%。5)再次檢測(cè)pH值、含量，合格后，用0.22iim微孔濾膜精濾；6)灌封、115。C熱壓滅菌30min。7)質(zhì)檢驗(yàn)。實(shí)施例2:本發(fā)明奧硝唑注射液及其制備奧硝唑250g1，2-丙二醇2LEDTA-2Nalg0.1M鹽酸適量注射用水加至5L_共制成1000支制備工藝1)將安瓿洗滌滅菌后備用2):先加入處方量的一半的1，2-丙二醇，再加入奧硝唑，然后再加入余下的1，2_丙二醇?？刂茰囟葹?56(TC，攪拌至完全溶解。3)稱取處方量的乙二胺四乙酸二鈉，加入9(TC約1.2升的注射用水中，EDTA-2Na迅速溶解，再加入約0.9升的室溫注射用水，使EDTA-2Na水溶液的溫度在5(TC左右，將此EDTA-2Na水溶液倒入奧硝唑丙二醇溶液中，攪拌。4)按上溶液體積加入0.1%(g/mL)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附10_15分鐘后，用0.45iim微孔濾膜加壓過濾脫碳，攪拌均勻，以鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，測(cè)定中間體含量，根據(jù)測(cè)定值補(bǔ)注射用水至含量100%。5)再次檢測(cè)pH值、含量，合格后，用0.22iim微孔濾膜精濾。6)灌封、115。C熱壓滅菌30min。7)質(zhì)量檢驗(yàn)。比較例1:奧硝唑注射液及其制備奧硝唑250g0.1M鹽酸至pH2.0注射用水加至5L_共制成1000支制備工藝1)將安瓿洗滌滅菌后備用2)稱取處方量奧硝唑，加2.5L注射用水，控制溫度為456(TC，加入700毫升0.1M鹽酸，攪拌至完全溶解。3)按上溶液體積加入0.1%(g/mL)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附10-15分鐘后，用0.45ym微孔濾膜加壓過濾脫碳，攪拌均勻，補(bǔ)注射用水至總處方量的90%左右，以鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.O，測(cè)定中間體含量，根據(jù)測(cè)定值補(bǔ)注射用水至含量100%。5)再次檢測(cè)pH值、含量，合格后，用0.22m微孔濾膜精濾；6)灌封、115。C熱壓滅菌30min。7)質(zhì)量檢驗(yàn)。比較例2:本發(fā)明奧硝唑注射液及其制備奧硝唑250gEDTA-2Nalg0.1M鹽酸適量注射用水加至5L共制成1000支制備工藝1)將安瓿洗滌滅菌后備用2)加2.5L注射用水，控制溫度為4560°C，加入700毫升0.1M鹽酸，攪拌至完全溶解。3)稱取處方量的乙二胺四乙酸二鈉，加入上述已溶解的奧硝唑溶液中。5)按上溶液體積加入0.1%(g/mL)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附10_15分鐘后，用0.45ym微孔濾膜加壓過濾脫碳，攪拌均勻，補(bǔ)注射用水至總處方量的90%左右，以鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.O，測(cè)定中間體含量，根據(jù)測(cè)定值補(bǔ)注射用水至含量100%。5)再次檢測(cè)pH值、含量，合格后，用0.22iim微孔濾膜精濾；6)灌封、115。C熱壓滅菌30min。7)質(zhì)量檢驗(yàn)。質(zhì)量穩(wěn)定性評(píng)價(jià)有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法取本品適量，加流動(dòng)相稀釋制成每lml中含500yg的供試品溶液與每lml中含5iig的對(duì)照品溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件(檢測(cè)波長為310nm)進(jìn)行測(cè)定。取對(duì)照溶液20ii1注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的1020%;再取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20iU，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，供試品溶液的色譜圖中各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液的主峰面積(1.0%)。含量測(cè)定方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.2)為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長為317nm，理論塔板數(shù)按奧硝唑計(jì)算應(yīng)不低于2500，奧硝唑與相鄰的雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。精密量取lml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20iU注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積；另取奧硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每lml中含50iig的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。按以上方法，對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2進(jìn)行質(zhì)量考查。—、有關(guān)物質(zhì)及含量檢測(cè)對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2的0天有關(guān)物質(zhì)及含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1。表1:實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)論；實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2有關(guān)物質(zhì)均小于規(guī)定的1.0%。但實(shí)施例1/實(shí)施例2有關(guān)物質(zhì)明顯小于比較例1或比較例2;說明在115°C、30分鐘滅菌條件下，本發(fā)明具有更好的穩(wěn)定性。而實(shí)施例2相對(duì)實(shí)施例1更為顯著，提示在丙二醇的奧硝唑溶液中加入EDTA-2Na后得到的奧硝唑注射液具有更好的安全性。二、影響因素試驗(yàn)將實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2得到的奧硝唑注射液樣品，用影響因素試驗(yàn)方法比較最終的穩(wěn)定性。即分別暴露在光照(4500LX士500LX)、高溫(60°C士5tO，于5天、10天取樣檢測(cè)穩(wěn)定性的重點(diǎn)考察項(xiàng)目的各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果見下表2和表3。表2:光照穩(wěn)定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果表明，在強(qiáng)光照射條件下10天，與0天比較實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1、比較例2含量分別下降2%、1.81%、5.05%、4.19%，有關(guān)物質(zhì)分別增加了0.10%、0.01%、0.44%、0.39%。由此可知，實(shí)施例1、實(shí)施例2含量略有下降，有關(guān)物質(zhì)略有增加，但變化不大。比較例1、比較例2含量和有關(guān)物質(zhì)變化較大；而且有關(guān)物質(zhì)均超過1%，會(huì)影響臨床用藥安全性和有效性。表3高溫穩(wěn)定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果表明，在高溫條件下IO天，與O天比較實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1、比較例2含量分別下降1.99%、1.82%、5.85%、4.65%，有關(guān)物質(zhì)分別增加了0.12%、0.03%、0.5%、0.45%。由此可知，實(shí)施例1、實(shí)施例2含量略有下降，有關(guān)物質(zhì)略有增加，但變化不大。比較例1、比較例2含量和有關(guān)物質(zhì)變化較大；而且有關(guān)物質(zhì)均超過1%，會(huì)影響臨床用藥安全性和有效性。三.長期穩(wěn)定性試驗(yàn)將實(shí)施例1、實(shí)施例2、比較例1和比較例2得到的奧硝唑注射液樣品，置干燥器中，在干燥器中下部裝有飽和的亞硝酸鈉溶液，置恒溫干燥箱中，溫度控制在25±2°C，即得條件為溫度25±2°C，相對(duì)濕度60±10%，在此條件下放置，每3個(gè)月取樣一次，在試驗(yàn)的0、3、6、9、12個(gè)月末取樣檢測(cè)重點(diǎn)考察項(xiàng)目。表4奧硝唑注射液長期試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>目的通過剌激性、溶血及過敏等與局部、全身給藥相關(guān)的特殊安全性試驗(yàn)為臨床研究提供安全性參考信息。結(jié)果在一定試驗(yàn)條件下奧硝唑注射液對(duì)家兔靜脈血管無明顯剌激性、對(duì)紅細(xì)胞未引起溶血和凝集反應(yīng)、全身給藥對(duì)豚鼠未產(chǎn)生過敏反應(yīng)?！⒃囼?yàn)藥物和材料1.受試藥物(1)供試品奧硝唑注射液(實(shí)施例2)，規(guī)格5ml:0.25g，批號(hào)20080601，由湖北天藥藥業(yè)股份有限公司提供，臨用前用氯化鈉注射液配制成所需濃度。(2)陰性對(duì)照品氯化鈉注射液，100mL/瓶，批號(hào)080626-1，武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限公司提供。(3)陽性對(duì)照品人血白蛋白，批號(hào)20080219，由武漢瑞德生物制品有限責(zé)任公司提供。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)成年健康白色家兔，雌雄兼用，體重2.0-2.5kg，由武漢生物制品研究所提供。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2008-0003。(2)豚鼠，雌雄兼用，體重250-350g，由武漢生物制品研究所提供。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2008-0003。二、實(shí)驗(yàn)室條件溫度18-22t:，濕度55-70%，家兔單籠飼養(yǎng)，動(dòng)物使用自動(dòng)飲水器，給予固體飼料，豚鼠6只一籠，每天定時(shí)喂養(yǎng)。所有籠具均定時(shí)更換、清洗、消毒。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室合格證號(hào)SYXK(鄂)2008-0009。三、試驗(yàn)方法與結(jié)果1.血管剌激性實(shí)驗(yàn)取上述家兔3只，采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。供試品組從左耳緣緩慢靜脈注射濃度為5mg/ml，5mL/kg，對(duì)照組從右耳緣等速等量注射氯化鈉注射液。每天給藥一次，連續(xù)5天。每天給藥前以及給藥后1、6h及最后一次給藥后24h、48h，肉眼觀察給藥部位血管有無血栓形成、紅腫瘀血等變化。觀察期結(jié)束后則處死動(dòng)物，迅速取其注射局部耳組織(從給藥部位至近心端2-3cm處取下)，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，常規(guī)制片，HE染色，光鏡下觀察血管及周圍組織病理形態(tài)學(xué)改變。并附病理照片。結(jié)果肉眼觀察，各組家兔耳緣靜脈注射局部給藥期間未見明顯紅、腫、瘀血等癥狀。供試品組與對(duì)照組比較未見明顯差別。結(jié)果見表5。表5血管剌激性實(shí)驗(yàn)肉眼觀察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注無血栓(-)、小血栓1-4咖(+)、中血栓5-14咖(++)、大血栓15咖以上(+++)、無炎癥變化(-)、輕度炎癥3cm范圍(+)、中度炎癥范圍1/3耳殼(++)、強(qiáng)度炎癥范圍1/2耳殼-全耳(+++);組織學(xué)觀察供試品對(duì)家兔血管無明顯剌激性。2.過敏試驗(yàn)取體重250-350g健康豚鼠40只，隨機(jī)分為4組(供試品高低劑量組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組)每組10只。連續(xù)3次，隔日腹腔注射供試品(濃度30mg/m1、2.5mg/ml)、氯化鈉注射液和10%白蛋白0.5mL/只進(jìn)行致敏。在末次注射后第12日靜脈注射供試品溶液、氯化鈉注射液和10%白蛋白各lmL/只進(jìn)行激發(fā)，在靜脈注射后立刻至30分鐘，按表6描述癥狀詳細(xì)觀察每只豚鼠的反應(yīng)，癥狀的出現(xiàn)及消失時(shí)間，最長觀察3小時(shí)。并按表7的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)過敏反應(yīng)發(fā)生程度。計(jì)算過敏反應(yīng)發(fā)生率。根據(jù)反應(yīng)發(fā)生率和過敏反應(yīng)癥狀進(jìn)行綜合判斷。陰性對(duì)照組豚鼠不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。陽性對(duì)照組豚鼠應(yīng)全部出現(xiàn)過敏反應(yīng)。結(jié)果見表8，陰性對(duì)照液及奧硝唑注射液高低劑量組靜脈給藥后30分鐘內(nèi)每組各10只豚鼠均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)，10%白蛋白靜脈給藥后l分鐘內(nèi)IO只豚鼠全部出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、呼吸困難及痙攣等癥狀，10只動(dòng)物在1-3分鐘內(nèi)全部死亡。表6過敏反應(yīng)癥狀<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表8奧硝唑注射液過敏試驗(yàn)結(jié)果(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結(jié)果表明在上述試驗(yàn)條件下，奧硝唑注射液全身過敏試驗(yàn)未見明顯過敏反應(yīng)。3.溶血試驗(yàn)(1)2%紅血球混懸液的制備取兔血20毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白原、使成脫纖血液，加約10倍量的氯化鈉注射液，搖勻、離心，除去上清液，沉淀的紅血球再用氯化鈉注射液如法洗滌2-3次，至上清液不呈紅色為止。將所得紅血球用氯化鈉注射液稀釋成2%的混懸液，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天使用，用時(shí)搖勻。(2)試驗(yàn)方法取試管7支，按表9配比量依次加入2%紅血球混懸液和氯化鈉注射液，混勻后，于37±0.5t:恒溫箱放置半小時(shí)，然后1-5管分別加入不同體積的供試品原液(濃度為50mg/ml)，第6管為陰性對(duì)照管加入氯化鈉注射液，第7管為陽性對(duì)照加入蒸餾水，搖勻后，置37±0.5t:恒溫箱中。開始每隔15分鐘觀察一次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀察一次，連續(xù)觀察3小時(shí)，如溶液呈透明紅色，即表示溶血。如溶液中有棕紅色絮狀沉淀，表示有紅細(xì)胞凝集作用。表9奧硝唑注射液溶血試驗(yàn)配比量(mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(3)試驗(yàn)結(jié)果7號(hào)管在加入蒸餾水后不久，溶液即出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，而加入供試品原液的各管(1-5管)和6號(hào)氯化鈉注射液管溶液在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)均未呈透明紅色，也未出現(xiàn)棕紅色絮狀沉淀，表明奧硝唑注射液對(duì)家兔血紅細(xì)胞未引起溶血和凝集反應(yīng)，結(jié)果見表10。表10奧硝唑注射液溶血試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；_不溶血、也不發(fā)生凝集結(jié)果表明在上述試驗(yàn)條件下，奧硝唑注射液未引起溶血和凝集反應(yīng)。四、結(jié)論1、本發(fā)明在濃度為5mg/ml時(shí)對(duì)家兔靜脈血管無明顯剌激性。2、本發(fā)明在濃度為30mg/ml、2.5mg/ml時(shí)均未引起豚鼠過敏反應(yīng)。3、本發(fā)明在濃度為50mg/ml(原液)未對(duì)家兔紅細(xì)胞引起溶血和凝集反應(yīng)。權(quán)利要求奧硝唑藥物組合物，每100毫升奧硝唑組合物含有5g的奧硝唑、35-60ml的1，2-丙二醇和使奧硝唑藥物組合物滿足總量的注射用水，pH值為2.5-4.5。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于每100毫升奧硝唑注射液還含有5-25mg乙二胺四乙酸二鈉。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的奧硝唑藥物組合物，其特征在于含有使奧硝唑藥物組合物pH值為2.5-4.5的鹽酸。4.奧硝唑藥物組合物的制備方法，在1，2-丙二醇中加入奧硝唑，溫度控制在456(TC，攪拌至完全溶解；再加入濃度為40-70mg/100ml的乙二胺四乙酸二鈉水溶液；然后用針用活性炭吸附后，微孔濾膜過濾脫碳，補(bǔ)注射用水并調(diào)節(jié)PH值至2.5-4.5，得到奧硝唑藥物組合物；其中每100毫升奧硝唑藥物組合物含有5g的奧硝唑、35-60ml的1，2_丙二醇、5-25mg乙二胺四乙酸二鈉。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于用鹽酸調(diào)節(jié)pH值。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所用乙二胺四乙酸二鈉水溶液由下法得到20mg乙二胺四乙酸二鈉加入9(TC的30-45ml注射用水中溶解，然后冷卻至4560°C。全文摘要奧硝唑藥物組合物，每100毫升奧硝唑組合物含有5g的奧硝唑、35-60ml的1，2-丙二醇和使奧硝唑藥物組合物滿足總量的注射用水，pH值為2.5-4.5。本發(fā)明可制成5ml∶0.25g或10ml∶0.5g小容量注射劑。本發(fā)明還提供了奧硝唑藥物組合物的制備方法在1，2-丙二醇中加入奧硝唑，溫度控制在45～60℃，攪拌至完全溶解；再加入濃度為40-70mg/100ml的乙二胺四乙酸二鈉水溶液；然后用針用活性炭吸附后，微孔濾膜過濾脫碳，補(bǔ)注射用水并調(diào)節(jié)pH值至2.5-4.5，得到奧硝唑藥物組合物。本發(fā)明提供的該方法工藝較簡單，制得的產(chǎn)品穩(wěn)定性好。文檔編號(hào)A61P33/00GK101697969SQ20091027261公開日2010年4月28日申請(qǐng)日期2009年11月3日優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日發(fā)明者熊昕,程雪霽,陳喜生,雷文杲申請(qǐng)人:雷紹青;陳喜生;熊昕