專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，尤其涉及一種制備治療糖尿病微血管病變、 特別是糖尿病性視網(wǎng)膜病變的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
糖尿病是世界各國(guó)日益關(guān)注的公共健康問(wèn)題。流行病學(xué)調(diào)査顯示，糖尿病已成為繼腫瘤 、心腦血管系統(tǒng)疾病之后我國(guó)第二次衛(wèi)生革命的重要非傳染性慢性病的四大對(duì)象之一。在糖 尿病人數(shù)不斷增多，壽命延長(zhǎng)的基礎(chǔ)上，糖尿病的治療卻出現(xiàn)了死亡率下降，而失明率逐漸 升高的矛盾現(xiàn)象。糖尿病性視網(wǎng)膜病變是導(dǎo)致糖尿病患者失明的最主要、最嚴(yán)重、且治療最 為棘手的并發(fā)癥，糖尿病性視網(wǎng)膜病變已成為世界性致盲的主要原因之一。因此，糖尿病性 視網(wǎng)膜病變已被列為糖尿病三級(jí)預(yù)防(延緩和/或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥)之重點(diǎn)。目前眼科界 公認(rèn)視網(wǎng)膜光凝是用于增殖前期、增殖期糖尿病性視網(wǎng)膜病變一種有效的治療方法，但若糖 尿病性視網(wǎng)膜病變患者已出現(xiàn)視力下降、特別是黃斑水腫所致時(shí)，視網(wǎng)膜光凝治療提高視力 的可能性很小，還會(huì)出現(xiàn)如光凝斑進(jìn)行性擴(kuò)大、視網(wǎng)膜下新生血管、視野缺損等并發(fā)癥。基 于糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病率高而治療不理想的現(xiàn)狀，故積極探索糖尿病性視網(wǎng)膜病變的有 效治療措施已成為當(dāng)今世界征服糖尿病并發(fā)癥的一個(gè)巨大挑戰(zhàn)、國(guó)內(nèi)外醫(yī)務(wù)工作者面臨的一 項(xiàng)緊急課題，也是本世紀(jì)的醫(yī)學(xué)界研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)課題之一。
目前治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的中藥主要分為兩類1、辨證論治，其優(yōu)點(diǎn)是個(gè)體化治 療，但不簡(jiǎn)便、不易推廣，要求病人經(jīng)常到醫(yī)院找有經(jīng)驗(yàn)的中醫(yī)眼科醫(yī)師就診；2、專方治 療，如明目地黃丸等，上述治療多從補(bǔ)益肝腎、活血化瘀，或養(yǎng)陰活血等治法論治，其藥物 味數(shù)多在十味以上，且不是專門針對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變。治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的西藥 有導(dǎo)生明(奧地利依比威大藥廠生產(chǎn))等。
雖然中醫(yī)藥在治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變方面已取得可喜的苗頭，但是要推廣中醫(yī)藥在防 治糖尿病性視網(wǎng)膜病變方面的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用，特別是讓中藥走向世界，需要闡明中醫(yī)藥治療糖 尿病性視網(wǎng)膜病變的主要有效成分。由于中藥復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，在體內(nèi)的代謝途徑尚不完 全清楚，國(guó)內(nèi)外最新相關(guān)研究資料顯示，對(duì)于大多數(shù)口服中藥復(fù)方，研究其主要有效成分時(shí) 必需考慮其化學(xué)成分在胃腸道及體內(nèi)組織器官中的變化，特別要重視進(jìn)入體內(nèi)的化學(xué)成分對(duì) 藥效的貢獻(xiàn)，即從體內(nèi)分子水平上對(duì)中藥藥效的合理解釋已成為大勢(shì)所趨，并有可能導(dǎo)致新
3活性成分化合物的發(fā)現(xiàn)。因此，若要闡明中醫(yī)藥治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的主要有效成分， 須首先建立該中藥復(fù)方和各單味中藥的含藥血清高效液相色譜和/或高效毛細(xì)管電泳指紋圖 譜，以此作為參照標(biāo)準(zhǔn)，再在相同的條件下，測(cè)定含藥血清的指紋圖譜。通過(guò)比較中藥復(fù)方 、各單味藥、含藥血清和空白血清的指紋圖譜，考察該中藥復(fù)方在體內(nèi)的代謝情況(成分種 類和含量的變化情況)，分析該中藥復(fù)方體內(nèi)外成分差異，確定血清中的移行成分。通過(guò)比 較中藥復(fù)方、含藥血清和空白血清的指紋圖譜，從宏觀上識(shí)別這些物質(zhì)，并考察藥物在體內(nèi) 的代謝情況，才能為后續(xù)的活性篩選提供盡可能多的物質(zhì)信息。同時(shí)，由于含藥血清中的化 學(xué)成分與含藥血清的藥理效應(yīng)密切相關(guān)，因而中藥血清藥物化學(xué)與中藥血清藥理學(xué)協(xié)同研究 ，有助于研究的開(kāi)展和深入。所以，當(dāng)中藥復(fù)方的藥物組成在十味或十味以上時(shí)，要完成其 主要有效成分的研究幾乎不可能完成，故中藥復(fù)方的組分過(guò)多不利于今后中藥成藥的開(kāi)發(fā)， 不利于對(duì)中藥進(jìn)一步深入研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥組合物及其制備方法、尤其是提供一種制備治療糖尿病性 視網(wǎng)膜病變的中藥組合物及其制備方法。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明的中藥組合物是由下列中藥組成地黃、丹參、人參、葛根，水余量。
進(jìn)一步本發(fā)明的中藥組合物重量份是地黃20-100份、丹參20-100份、人參5-50份、葛 根20 — 100份，水余量。
最優(yōu)選本發(fā)明的中藥組合物重量份是地黃40份、丹參40份、人參20份、葛根40份，水 余量。
本發(fā)明主要有效成分可溶于沸水中，綜合考慮組合物中藥物有效成分的性質(zhì)以及本方在 臨床使用時(shí)的制備工藝，故設(shè)計(jì)了以水為溶媒的提取工藝路線。制備工藝流程如下
(1) 、取地黃、丹參、人參、葛根混合；
(2) 、將上述混合物加8倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；
(3) 、將上述濾渣再加6倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；
(4) 、將上述兩次濾液合并得中藥組合物溶液；
(5) 、可以將上述兩次濾液合并后濃縮至相對(duì)密度為l:l，制得浸膏；
(6) 、還可以將上述浸膏置于噴霧干燥器中噴干，制得無(wú)糖顆粒。 本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤(rùn)滑
劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如丸劑、散劑、片劑、 膠囊劑、口服液等。糖尿病屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)"消渴"之范疇。中醫(yī)古代醫(yī)籍對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變雖無(wú)明確的記 載，但古代醫(yī)家已認(rèn)識(shí)到消渴導(dǎo)致眼部并發(fā)癥多發(fā)生于消渴的中、后期，如明代醫(yī)家戴思恭 提出"三消久之，神血既虧，或目無(wú)所見(jiàn)"。糖尿病性視網(wǎng)膜病變是糖尿病最主要、最常 見(jiàn)的一種微血管并發(fā)癥，其病因病機(jī)與糖尿病既有相同之處，又因其多發(fā)于糖尿病的中、后 期，"久病之傷、窮必及腎"，故多責(zé)之于腎虛；然肝腎同源，同居下焦，消渴日久，終致 肝腎俱虛?，F(xiàn)代對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變辨證論治規(guī)律的研究結(jié)果也顯示從臟腑辨證角度而 言，糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展與腎虛的關(guān)系最為密切、肝虛次之；從氣血陰陽(yáng)辨證角 度而言，隨糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展，其中醫(yī)病證逐漸從陰虛一氣陰兩虛一陰陽(yáng)兩虛 演變，并且患者全身的瘀血表現(xiàn)也隨之加重；從而得出腎虛是糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)生的基 礎(chǔ)，肝腎虛損、目竅失養(yǎng)是導(dǎo)致糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展的基本病機(jī)，因虛致瘀、目竅 閉阻是糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要病機(jī)，本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜是糖尿病性視 網(wǎng)膜病變其證候特點(diǎn)的結(jié)論。其實(shí)，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有消渴發(fā)病與血瘀有關(guān)的記載， 如《靈書《五變篇》"……血脈不行，轉(zhuǎn)而為熱，熱則消肌膚，故為消癉"。清代王清任 在《血證論《發(fā)渴》篇中明確指出"瘀血發(fā)渴者，以津之生，其根在腎，……有瘀血?jiǎng)t氣 為血阻，不得上升，水津因不能隨氣上布"。因此，本發(fā)明以補(bǔ)益肝腎、益氣活血為主要治 則，最后確定由地黃、丹參、人參、葛根四味中藥組成，并結(jié)合藥理學(xué)進(jìn)行藥物篩選，其療 效顯著。
本發(fā)明藥物選擇地黃、丹參、人參、葛根進(jìn)行組合。將這些藥物組合使得各藥物功效產(chǎn) 生協(xié)同作用，從而能夠有效治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變。其中選用地黃是因?yàn)榈攸S性味甘、微 溫，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)腎陰、益精明目之功，達(dá)到補(bǔ)虛治本之目的。選用丹參、人參、 葛根，是因?yàn)榈⑿晕犊?、微寒，歸心、心包、肝經(jīng)，具有涼血活血祛瘀、養(yǎng)血安神之功， 達(dá)到消目中之瘀血而不傷正之目的；人參味甘、微苦、微溫。歸脾、肺經(jīng)，具有大補(bǔ)元?dú)狻?補(bǔ)益脾肺、生津止渴之功，與丹參配伍達(dá)到益氣活血之功；由于"血如象舟，津如象水，水 津充沛，舟為能行"(周學(xué)?！蹲x書隨筆》)，故用葛根以生津、使津生而脈絡(luò)和，且葛 根能升陽(yáng)開(kāi)竅、升達(dá)目竅而明目之目的。諸藥合用，不僅補(bǔ)其肝腎之不足，益氣養(yǎng)血升津， 以治其本；而且能行血分之瘀滯、通目中之經(jīng)絡(luò)、開(kāi)玄府而明目，活血而不傷血，祛瘀而又 生新，達(dá)到標(biāo)本兼治之目的，對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變療效顯著。
綜上所述，通過(guò)中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究，現(xiàn)代藥理學(xué)藥物篩選，結(jié)合大量臨床實(shí)踐和動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ，本發(fā)明的中藥組合物在防治糖尿病性視網(wǎng)膜病變具有明顯功效，在保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)元、提 高視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞活力等方面具有明顯的效果，并且它有利于中藥有效成分及藥效機(jī)理的深
5入研究。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:本發(fā)明中藥溶液的制備。取地黃20克、丹參20克、人參5克、葛根20克混合， 將上述混合物加8倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述濾渣再加6倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述兩次濾液合并得中藥組合物溶液。
實(shí)施例2:本發(fā)明中藥浸膏的制備。取地黃40克、丹參40克、人參20克、葛根40克混合 ，將上述混合物加8倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述濾渣再加6倍水量煎煮 1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述兩次濾液合并得中藥組合物溶液；將上述兩次濾液合
并后濃縮至相對(duì)密度為l:l，制得浸膏。
實(shí)施例3:本發(fā)明中藥無(wú)糖顆粒的制備。取地黃100克、丹參100克、人參50克、葛根 IOO克混合，將上述混合物加8倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述濾渣再加6
倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；將上述兩次濾液合并得中藥組合物溶液；將上述
兩次濾液合并后濃縮至相對(duì)密度為l:l，制得浸膏；將上述浸膏置于噴霧干燥器中噴干，制 得無(wú)糖顆粒。
實(shí)施例4:本發(fā)明藥物對(duì)鏈脲佐菌素(str印tozotocin，STZ)所致大鼠糖尿病的視網(wǎng)膜 病變的防治作用
1. 試驗(yàn)材料
選本發(fā)明藥物無(wú)糖顆粒制劑，生藥含量4.05g/g (每克本發(fā)明藥物無(wú)糖顆粒制劑由本發(fā) 明中藥組合物原料生藥4.05克制得)；降糖靈為陽(yáng)性對(duì)照I、 II組用藥，由江蘇省金壇市制 藥廠生產(chǎn)。導(dǎo)升明為陽(yáng)性對(duì)照II組用藥，由奧地利依比威大藥廠生產(chǎn)。鏈脲佐菌素( streptozotocin， STZ) 由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)
2. 試驗(yàn)方法
(1) 造模方法取Sprague—Dawley (SD)大鼠160只，體重125g 150g，雌雄兼用，由 成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。以50mg/kg體重劑量STZ行左下腹皮下注射制作糖尿病大 鼠模型。造模后48小時(shí)，于禁食12小時(shí)后取尾靜脈血測(cè)定血糖，將空腹血糖濃度》
11. lmmol/L者納入糖尿病大鼠。
(2) 試驗(yàn)分組隨機(jī)選20只大鼠作為正常對(duì)照組，余下動(dòng)物參與造模，將造模成功的 糖尿病大鼠隨機(jī)分為6組陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照I組、陽(yáng)性對(duì)照II組、中藥低、中、高劑 量組。
(3) 給藥方法各實(shí)驗(yàn)組灌胃藥物均用0.5%羧甲基纖維素溶解為混懸液，每日一次(早上8點(diǎn))，持續(xù)6個(gè)月。
正常對(duì)照組20只，自由攝食飲水，不加任何處理。
陰性對(duì)照組20只，與中藥組等容的0.5%羧甲基纖維素溶液灌胃。
陽(yáng)性對(duì)照I組20只，相當(dāng)于成人劑量10倍的降糖靈混懸液(16.67mg/kg.d)。
陽(yáng)性對(duì)照II組20只，相當(dāng)于成人劑量10倍的降糖靈(16.67mg/kg.d)和導(dǎo)升明( 166. 67mg/kg. d)混懸液。
中藥低劑量組20只，相當(dāng)于臨床用藥量劑量5倍的補(bǔ)腎活血中藥(即生藥5.84g/kg.d )，再加相當(dāng)于成人劑量10倍的降糖靈混懸液。
中藥中劑量組20只，相當(dāng)于臨床用藥量劑量10倍的補(bǔ)腎活血中藥(即生藥 11.67g/kg.d)，再加相當(dāng)于成人劑量10倍的降糖靈混懸液。
中藥高劑量組20只，相當(dāng)于臨床用藥量劑量15倍的補(bǔ)腎活血中藥(即生藥 17.51g/kg.d)，再加相當(dāng)于成人劑量10倍的降糖靈混懸液。
(4)指標(biāo)檢測(cè)在用藥觀察6個(gè)月后，各組隨機(jī)取10只大鼠，以脊椎脫臼法處死，迅速摘 出眼球，制作免疫組化染色和尼氏(Nissl)染色病理切片進(jìn)行觀察，應(yīng)用圖形分析系統(tǒng)對(duì) 其進(jìn)行半定量測(cè)定。
觀察及測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表l、表2、表3和表4。
3.試驗(yàn)結(jié)果
由表l、表2、表3和表4結(jié)果分析得出
(1) 與正常對(duì)照組比較，陰性對(duì)照組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein, MBP)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子一3 (neurotrophic-3， NT-3)、神經(jīng)元的突觸素I (Syn I )的陽(yáng)性染色以及神經(jīng)元的Nissl小體平均灰度值均較正常對(duì)照組明顯降低，說(shuō)明在糖尿病 病程6個(gè)月時(shí)，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜已經(jīng)出現(xiàn)病理改變。
(2) 與陰性對(duì)照組比較，中藥各劑量組視網(wǎng)膜中MBP、 NT-3、 Synl的陽(yáng)性染色以及神經(jīng) 元的Nissl小體平均灰度值均明顯有增高，尤以中藥高劑量組明顯；與陽(yáng)性對(duì)照I組比較，
中藥高劑量組視網(wǎng)膜MBP陽(yáng)性染色以及Ni ss 1小體平均灰度值明顯高于陽(yáng)性對(duì)照I組明顯增高 ，中藥中、高劑量組NT-3陽(yáng)性染色明顯高于陽(yáng)性對(duì)照I組明顯增高，說(shuō)明本發(fā)明的藥物組分 不僅對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變具有明顯的治療作用，而且優(yōu)于單純控制血糖的治療方法。
(3) 與陽(yáng)性對(duì)照II組比較，中藥中劑量組和中藥低劑量組的MBP、 NT-3、 Syn I的陽(yáng)性 染色以及神經(jīng)元的Nissl小體平均灰度值陽(yáng)性對(duì)照II組均無(wú)明顯差異，并且中藥高劑量組視 網(wǎng)膜MBP的陽(yáng)性染色明顯高于陽(yáng)性對(duì)照II組，說(shuō)明本發(fā)明的藥物組分對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的
7治療作用不僅與導(dǎo)升明無(wú)差異，而且在改善MBP指標(biāo)上還優(yōu)于導(dǎo)升明, 表l 各組大鼠視網(wǎng)膜MBP測(cè)定結(jié)果比較 a±Sr0
組
別
標(biāo)本數(shù) MBP平均灰度
正常對(duì)照組 陰性對(duì)照組 陽(yáng)性對(duì)照I組 陽(yáng)性對(duì)照II組
中藥低劑量組 中藥中劑量組 中藥高劑量組
10 10 10 10 10 10 10
107. 38±7. 54
81. 47±3. 69 94. 14±5. 52
96. 71±4. 96
95. 31±5. 03
97. 01 ±4. 46
104. 89±8. 06
注與正常對(duì)照組比較AP〈0.05，
P〈0. 01:
與陰性對(duì)照組比較Ap〈0.05， AAp〈0.01;
與陽(yáng)性對(duì)照I組比較AP〈0.05，眾 〈0.01:
與陽(yáng)性對(duì)照II組比較*P〈0.05， "^^P〈0.01,
(以下各表同)
表2各組大鼠視網(wǎng)膜NT-3測(cè)定結(jié)果比較 〔^
組 另'J標(biāo)本數(shù)NT-3平均灰度
正常對(duì)照組10105. 62±10. 21
陰性對(duì)照組1083. 48±8. 08AA
陽(yáng)性對(duì)照I組1091. 57±7. 65AAA
陽(yáng)性對(duì)照II組1098. 88±11. 87"
中藥低劑量組1098. 20±5. 82"
中藥中劑量組10101. 09±4. 39AAAA
中藥高劑量組10104. 86±7. 73****表3各組大鼠視網(wǎng)膜SynI的檢測(cè)結(jié)果 ^±Sr0
組別標(biāo)本數(shù)平均灰度值
正常對(duì)照組10104. 76±3. 56
陰性對(duì)照組1089. 16±6. 24A
陽(yáng)性對(duì)照I組1099. 92±6. 2C)AA
陽(yáng)性對(duì)照II組10102. 01±8. 84"
中藥低劑量組10102. 73±7. 20"
中藥中劑量組10103. 06±8. 05"
中藥高劑量組10103. 82±3. 33"
表4 各組大鼠視網(wǎng)膜Nissl小體的檢測(cè)結(jié)果〔X土SD)
組另'J標(biāo)本數(shù)平均灰度值
正常對(duì)照組 10 113. 80 ±9. 40
陰性對(duì)照組 10 98. 54±6. 95AA
陽(yáng)性對(duì)照I組 10 105. 11 ±4. 40AA
陽(yáng)性對(duì)照II組 10 108. 17±5.85AA
中藥低劑量組 10 108. 86±6. 81AA
中藥中劑量組 10 110. 85±11. 43AA
中藥高劑量組 10 112. 75±6. 98
實(shí)施例5 :本發(fā)明對(duì)高糖狀態(tài)下純化培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞活力的影響
1. 試驗(yàn)材料選本發(fā)明藥物無(wú)糖顆粒制劑，生藥含量4.05g/g。
2. 試驗(yàn)方法
(1)血清制備將體重120 150g的SD大鼠20只，雌雄兼用(由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)隨機(jī)分為2組，即中藥組與空白對(duì)照組。中藥組給予本發(fā)明的藥物組分，其給 藥劑量為相當(dāng)于臨床用藥量劑量10倍的本發(fā)明藥物組分(即生藥11.67g/kg'd)，連續(xù)灌胃 7天；空白對(duì)照組給予等容量的蒸餾水。在末次給藥后lh (l小時(shí))腹主動(dòng)脈采血、分離血清 ，血清經(jīng)56。C、 30min滅活、0. 22 y m微孔濾膜過(guò)濾除菌、分裝，一20。C保存?zhèn)溆?，中藥組與 空白對(duì)照組所制備的血清分別在本試驗(yàn)中稱為中藥含藥血清、空白血清。
(2) 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的純化培養(yǎng) 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglion cells, RGCs)的純化培養(yǎng)是用新生SD大鼠、以抗體
聯(lián)合兩步純化法培養(yǎng)。
(3) 實(shí)驗(yàn)分組將上述血清加入Neurobasal培養(yǎng)基(Gibco公司產(chǎn)，美國(guó))制備不同培養(yǎng)液。
正常對(duì)照組20%空白血清的Neurobasal液
正常中藥干預(yù)組20%中藥含藥血清的Neurobasal液
穩(wěn)定高糖組20。/?？瞻籽宓?0mmol/L葡萄糖Neurobasal液
穩(wěn)定高糖中藥干預(yù)組20。/。中藥血清的50mmol/L葡萄糖Neurobasal液
糖波動(dòng)組正常對(duì)照組與穩(wěn)定高糖組培養(yǎng)基交替培養(yǎng)，每12h交替一次
糖波動(dòng)中藥干預(yù)組正常中藥干預(yù)組與穩(wěn)定高糖中藥干預(yù)組培養(yǎng)基交替培養(yǎng)，每12h交
替一次組。
其中，穩(wěn)定高糖組、穩(wěn)定高糖中藥干預(yù)組，糖波動(dòng)組、糖波動(dòng)中藥干預(yù)組；分別在試驗(yàn) 干預(yù)24h、 48h及72h后，檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞外液的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出量，以此來(lái)衡量所培養(yǎng)細(xì)胞的活力。
(4) RGCs LDH漏出量檢測(cè)采用LDH試劑盒(南京建成生物工程公司產(chǎn))測(cè)定RGCs的每 孔收集培養(yǎng)基上清夜50yL，迅速加入LDH檢測(cè)試劑，490型酶標(biāo)儀440 nm檢測(cè)吸光度(0D) 值的變化，最后得出LDH漏出量(單位U/L)
3.試驗(yàn)結(jié)果
糖波動(dòng)組的LDH量在72h較正常對(duì)照組增加(P<0.05)，并且糖波動(dòng)組的LDH量在各時(shí)間 段均較穩(wěn)定高糖組增加(P<0.05)，說(shuō)明在糖波動(dòng)情況下RGCs的活力明顯降低，并且糖波 動(dòng)對(duì)RGCs活力的降低作用較穩(wěn)定高糖明顯；穩(wěn)定高糖中藥干預(yù)組的LDH量在72h較穩(wěn)定高糖組 減少(P<0.05);糖波動(dòng)中藥干預(yù)組的LDH量在48h和72h均較糖波動(dòng)組減少(P<0.05)， 說(shuō)明本發(fā)明的藥物組分對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者存在的穩(wěn)定高糖以及糖波動(dòng)這兩種情況下 RGCs均有保護(hù)作用，也說(shuō)明了本發(fā)明的藥物組分對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變具有有效的治療作用觀察結(jié)果見(jiàn)表5、表6和表7。
表5正常、穩(wěn)定高糖及糖波動(dòng)條件下RGCs的LDH漏出量比較(n=8)
72 h
2155. 75±340. 44 3) 1982. 14±219. 03工)3) 2299. 60±88. 35 " 2) 3)
組另J 24 h 48 h
正常對(duì)照組 1628. 10±122. 10 1484. 13±127. 55
穩(wěn)定高糖組 1349. 17±215. 501) 1220. 24± 124. 531)
糖波動(dòng)組 1580. 58± 138. 002) 1398. 80± 148. 772)
注1)在同一時(shí)間段與正常對(duì)照組比較P〈0.05;
2) 同時(shí)段穩(wěn)定高糖組與糖波動(dòng)組比較P〈0.05;
3) 同組內(nèi)與前一時(shí)間段比較P〈0.05
表6中藥含藥血清對(duì)穩(wěn)定高糖條件下RGCs的LDH漏出量的比較(n=8) 組另U 24 h 48 h 72 h
穩(wěn)定高糖組 1349. 17±215. 50 1220. 24± 124. 53 1982. 14±219. 032)
穩(wěn)定高糖中藥干預(yù)組1322. 31±166. 47 1121. 03± 121. 46 1797. 62± 146. 40" 2) 注1)在同一時(shí)間段與穩(wěn)定高糖組比較P〈0.05; 2)同組內(nèi)與前一時(shí)間段比較P〈0.05
表7中藥含藥血清對(duì)糖波動(dòng)條件下RGCs的LDH漏出量的影響(n=8) 組另U 24 h 48 h 72 h
糖波動(dòng)組 1580. 58± 138. 00 1398. 80± 148. 77 2299. 60±88. 352)
糖波動(dòng)中藥干預(yù)組1464. 88±144. 89 1259. 92±87. 741) 1940. 40± 155. 471) 2) 注1)在同一時(shí)間段與糖波動(dòng)組比較P〈0.05; 2)同組內(nèi)與前一時(shí)間段比較P〈0.0權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，包括中藥及余量水，其特征在于該中藥主要是由下列重量份的原料藥組成地黃20-100份、丹參20-100份、人參5-50份、葛根20-100份。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于所述原料藥的重 量份是地黃40份、丹參40份、人參20份、葛根40份。
3.根據(jù)權(quán)利要求l所述中藥組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1) 、取地黃、丹參、人參、葛根混合；(2) 、將上述混合物加8倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；(3) 、將上述濾渣再加6倍水量煎煮1 1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液待用；(4) 、將上述兩次濾液合并得中藥組合物溶液；(5) 、可以將上述兩次濾液合并后濃縮至相對(duì)密度為l:l，制成浸膏；(6) 、還可以將上述浸膏置于噴霧干燥器中噴干，得到無(wú)糖顆粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征是在制備治療糖尿 病性視網(wǎng)膜病變的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥組合物及其制備方法、尤其是提供一種制備治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的中藥組合物及其制備方法。它主要是由地黃、丹參、人參、葛根組成。它可以制成任何一種常用劑型。本發(fā)明防治糖尿病性視網(wǎng)膜病變具有明顯功效，在保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)元、提高視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞活力等方面具有明顯的效果。
文檔編號(hào)A61K36/804GK101658588SQ200910308470
公開(kāi)日2010年3月3日 申請(qǐng)日期2009年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月19日
發(fā)明者梅 張, 王明芳, 謝學(xué)軍 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)