專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療和/或預(yù)防骨關(guān)節(jié)病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，其涉及用于治療和/或預(yù)防急性和/或慢性骨關(guān)節(jié)病的新 藥物組合物。
背景技術(shù)：
骨關(guān)節(jié)炎是最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)炎形式，其特征在于關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨的緩慢退行性 過(guò)程，并伴有邊緣骨贅形成和低程度的炎癥。據(jù)信，慢性形式的骨關(guān)節(jié)炎影響到15%的人 口。其中，四分之一為嚴(yán)重殘疾。大多數(shù)骨關(guān)節(jié)炎病例的原因不明，并被稱(chēng)為“原發(fā)性骨關(guān) 節(jié)炎”。當(dāng)骨關(guān)節(jié)炎的原因已知時(shí)，其被稱(chēng)為“繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎”。繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎由其它疾 病或情形引起?？蓪?dǎo)致繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎的情形包括關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的反復(fù)性損傷或手術(shù)、出生時(shí) 關(guān)節(jié)異常(先天性異常)、痛風(fēng)、糖尿病和其它激素紊亂。其它形式的關(guān)節(jié)炎包括系統(tǒng)性疾 病，例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE) 骨關(guān)節(jié)炎主要涉及髖部、膝部、脊柱和指/趾間關(guān)節(jié)。骨關(guān)節(jié)炎的最常見(jiàn)癥狀是受 影響關(guān)節(jié)在反復(fù)使用后產(chǎn)生疼痛。關(guān)節(jié)疼痛通常在日間的晚些時(shí)候更加嚴(yán)重。受影響關(guān)節(jié) 可發(fā)生腫脹、發(fā)熱以及發(fā)出咯吱聲。關(guān)節(jié)在長(zhǎng)期不活動(dòng)后也會(huì)發(fā)生疼痛和僵硬。在嚴(yán)重的 骨關(guān)節(jié)炎中，軟骨墊的完全喪失導(dǎo)致骨間發(fā)生摩擦，造成靜止時(shí)的疼痛或在有限運(yùn)動(dòng)時(shí)的 疼痛。骨關(guān)節(jié)炎的特征在于在數(shù)年間軟骨發(fā)生緩慢的降解。在正常軟骨中，在基質(zhì)的合 成與降解之間存在微妙的平衡；但是在骨關(guān)節(jié)炎中，軟骨的降解超過(guò)了合成。合成與降解之 間的平衡受年齡影響，并由滑膜和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生的幾種因子(包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、聚 集蛋白聚糖酶(aggrecanase)和基質(zhì)金屬蛋白酶)所調(diào)控。除了水以外，胞外基質(zhì)還含有 蛋白聚糖，其由連接到透明質(zhì)酸所形成之骨架上的糖胺聚糖形成，并包封(entrap)于膠原 框架或纖絲基質(zhì)(fibrillary matrix)中。關(guān)節(jié)軟骨中的一種重要蛋白聚糖是聚集蛋白聚 糖(aggrecan)，其與透明質(zhì)酸結(jié)合并有助于賦予軟骨以可壓縮性和彈性。聚集蛋白聚糖被 聚集蛋白聚糖酶所切割，這導(dǎo)致其降解以及隨后的軟骨侵蝕。軟骨基質(zhì)中聚集蛋白聚糖的 損失是骨關(guān)節(jié)炎(OA)中觀察到的最初病理生理變化之一。由滑膜和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子(尤其是IL-1 0和腫瘤壞死因子a (TNF-a)) 也是軟骨降解中的關(guān)鍵參與者。IL-10在骨關(guān)節(jié)炎的軟骨中自發(fā)地釋放，而在正常軟骨中 則不然。IL-10和TNF-a均刺激其自身產(chǎn)生以及另一些細(xì)胞因子(例如IL-8、IL-6和白 三烯抑制因子)、蛋白酶和前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生。在骨關(guān)節(jié)炎中，炎性細(xì)胞因子IL-1 3 和TNF-a的合成及其受體的表達(dá)均增強(qiáng)。已表明，這兩種細(xì)胞因子在體外均強(qiáng)烈誘導(dǎo)軟骨 的降解。在骨關(guān)節(jié)炎中過(guò)表達(dá)的其它促炎細(xì)胞因子包括IL-6、IL-8、IL-11、IL-17以及白 三烯抑制因子。軟骨所包含的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)被局部產(chǎn)生的基質(zhì)金屬蛋白酶降解。促炎細(xì)胞因 子(包括IL-1 0、TNF- a、IL-17和IL-18)增加基質(zhì)金屬蛋白酶的合成、減少基質(zhì)金屬蛋白 酶抑制因子并降低細(xì)胞外基質(zhì)的合成。
在嘗試對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)之降解的逆轉(zhuǎn)中，軟骨細(xì)胞增加了基質(zhì)組分(包括蛋白聚 糖)的合成。盡管這一活性提高了，但是發(fā)現(xiàn)上部軟骨層中的蛋白聚糖出現(xiàn)凈損失。在骨 關(guān)節(jié)炎滑液中發(fā)現(xiàn)的升高的抗炎細(xì)胞因子包括IL-4、IL-10和IL-13。它們的作用是減少 IL-I β, TNF-α和基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生，并抑制前列腺素的釋放。局部產(chǎn)生的生長(zhǎng)因子 和分化因子(例如胰島素樣生長(zhǎng)因子1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和骨形態(tài)發(fā)生 蛋白)也刺激基質(zhì)的合成。
現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)有的藥 物治療針對(duì)疼痛緩解，包括鎮(zhèn)痛劑(即，對(duì)乙酰氨基酚、環(huán)加氧酶_2特異 性抑制劑、非選擇性非留類(lèi)抗炎藥、曲馬多(tramadol)和阿片樣物質(zhì))。但是，骨關(guān)節(jié)炎的 臨床表現(xiàn)通常為單關(guān)節(jié)型或寡關(guān)節(jié)型，并伴有強(qiáng)度和定位隨時(shí)間的波動(dòng)。因此，考慮局部治 療形式以避免不期望的全身作用是合理的。幾種化合物已被用于關(guān)節(jié)內(nèi)使用(例如糖皮質(zhì) 激素、透明質(zhì)酸)或表面使用(例如辣椒堿、水楊酸甲酯)。然而，例如關(guān)節(jié)內(nèi)施用糖皮質(zhì)激 素的益處僅能維持?jǐn)?shù)天(Barron, Μ. C.，2007，J. Am. Osteopath.，107，ES21-27)。對(duì)多糖所形成之一類(lèi)物質(zhì)的潛在功用的認(rèn)識(shí)在不斷增長(zhǎng)。除了其生物學(xué)活性以 夕卜，一般來(lái)說(shuō)多糖最重要的特性之一是其能夠形成水凝膠。水凝膠的形成可由多種機(jī)制引 發(fā)，并受所參與之單糖類(lèi)型以及取代基團(tuán)之存在和性質(zhì)的強(qiáng)烈影響。多糖凝膠的形成通常 有兩種類(lèi)型氫鍵型和離子鍵型。氫鍵型凝膠典型的有例如瓊脂糖(熱膠凝)和殼聚糖(PH 依賴(lài)型膠凝)，而離子鍵型凝膠典型的有藻酸鹽和角叉藻聚糖。蛋白聚糖是關(guān)節(jié)軟骨中發(fā)現(xiàn)的主要大分子之一。這些分子由核心蛋白質(zhì)和共價(jià)連 接的糖胺聚糖(GAG)鏈組成。GAG是長(zhǎng)的無(wú)支鏈的雜多糖，其由重復(fù)的二糖單元組成，一般 結(jié)構(gòu)為糖醛酸氨基糖(Muronicacid amino sugar) 0軟骨特異性GAG包括4-硫酸軟骨素 (由葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺構(gòu)成，其中4位碳具有SO4)、6_硫酸軟骨素(由葡萄糖 醛酸和N-乙酰半乳糖胺構(gòu)成，其中6位碳具有SO4)和硫酸角質(zhì)素(由半乳糖和N-乙酰葡 萄糖胺構(gòu)成，其中6位碳具有SO4)。這些分子能夠與帶有相反電荷的離子型聚合物(特別是陽(yáng)離子型多糖殼聚糖)形 成水凝膠復(fù)合體?；谶@種相互作用可產(chǎn)生用于軟骨組織工程的新材料。另一種重要的軟 骨GAG是透明質(zhì)酸(由葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺構(gòu)成)。該分子是滑液的主要組分 之一。透明質(zhì)酸分子還存在于軟骨基質(zhì)中，作為蛋白聚糖聚集體的骨架結(jié)構(gòu)。一般地，透明 質(zhì)酸作為細(xì)胞外基質(zhì)的組織者而發(fā)揮主要作用。由于透明質(zhì)酸具有高分子量和凝膠形成能 力，因此純化的透明質(zhì)酸被用作結(jié)構(gòu)性生物材料?？赏ㄟ^(guò)化學(xué)修飾來(lái)廣泛地改變?cè)摲肿拥?性質(zhì)。例如，羧基的部分酯化降低聚合物的水溶性而增加其粘度。大范圍的酯化產(chǎn)生形成 水不溶性膜或可膨脹凝膠的材料。乙基和苯基酯化的透明質(zhì)酸鹽膜表現(xiàn)出優(yōu)異的愈合反應(yīng) 和生物可降解特性。完全酯化的膜在體內(nèi)具有數(shù)月的使用期，而部分酯化形式則顯示在幾 周內(nèi)被降解。透明質(zhì)酸為作為潤(rùn)滑劑和減震器的滑液提供粘彈性。在滑液中，透明質(zhì)酸覆蓋關(guān) 節(jié)軟骨的表面并與膠原纖絲(collagen fibril)和硫酸蛋白聚糖共用軟骨中的深部空間。 它保護(hù)軟骨并阻止蛋白聚糖從軟骨基質(zhì)流失到滑液中，維持正常的軟骨基質(zhì)。在患骨關(guān)節(jié) 炎的膝關(guān)節(jié)滑液中，透明質(zhì)酸、糖胺聚糖和硫酸角質(zhì)素的濃度比正常膝關(guān)節(jié)滑液中要低。此外，使用兔滑膜細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)顯示，促炎細(xì)胞因子IL-10和TNF-a刺激透明質(zhì)酸合成酶的表 達(dá)，其可導(dǎo)致透明質(zhì)酸在炎性條件下發(fā)生片段化。外源透明質(zhì)酸可有利于產(chǎn)生新合成的透 明質(zhì)酸。透明質(zhì)酸及衍生物已被用作骨關(guān)節(jié)炎治療中的治療性輔助物，用以提高關(guān)節(jié)連接 表面的潤(rùn)滑度進(jìn)而減少關(guān)節(jié)疼痛。幾個(gè)體外培養(yǎng)研究也表明，透明質(zhì)酸通過(guò)抑制由纖連蛋 白片段介導(dǎo)之軟骨溶解而具有有益的作用。透明質(zhì)酸還顯示具有抗炎作用，以及對(duì)前列腺 素合成以及蛋白聚糖釋放和降解的抑制作用。在節(jié)肢動(dòng)物外骨骼中發(fā)現(xiàn)的殼聚糖(甲殼素的部分去乙?；苌?是另一種蛋 白聚糖，其為帶有數(shù)目可變、位置隨機(jī)之N-乙酰葡糖胺基團(tuán)的由0 (1-4)連接的D-葡糖胺 殘基組成的線性多糖。因此，它與存在于關(guān)節(jié)軟骨中的多種GAG和透明質(zhì)酸具有某些共同 的特性。根據(jù)來(lái)源和制備方法，殼聚糖的平均分子量可以為約50kDa至約lOOOkDa。市售的 制備物具有程度不同的去乙酰化(從約50%至約90% )。殼聚糖是半結(jié)晶性聚合物，其結(jié) 晶程度是去乙?；潭鹊暮瘮?shù)。結(jié)晶度比甲殼素(即0%去乙?；?和完全去乙酰化(即 100%)殼聚糖都要高。最大結(jié)晶度在中等去乙?；潭葧r(shí)實(shí)現(xiàn)。殼聚糖作為生物材料之潛力大部分源于其陽(yáng)離子特性和高電荷密度。所述電荷密 度使殼聚糖形成不溶性離子復(fù)合體或者帶有多種水溶性陰離子聚合物的復(fù)合團(tuán)聚體。事實(shí)上，殼聚糖寡糖已顯示出具有針對(duì)巨噬細(xì)胞的刺激作用，并且該作用與乙酰 化殘基有關(guān)。此外，殼聚糖及其親本分子(甲殼素)已在體外和體內(nèi)顯示出具有針對(duì)中性 粒細(xì)胞的趨化作用。在體內(nèi)，殼聚糖通過(guò)酶促水解被降解。殼聚糖骨架的機(jī)械性質(zhì)主要取 決于孔徑大小和孔的取向。透明質(zhì)酸(一種糖胺聚糖)被廣泛地用于治療膝部骨關(guān)節(jié)炎。英國(guó)的兩項(xiàng)一般性 調(diào)查顯示，約有15%患有骨關(guān)節(jié)炎的患者接受過(guò)透明質(zhì)酸制備物的關(guān)節(jié)內(nèi)治療。由于它具 有粘彈性，因此可以取代滑液。此外，它還可以減輕對(duì)疼痛的感知。還報(bào)道了有益的分子作 用和細(xì)胞作用。透明質(zhì)酸常常通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)注射來(lái)施用，然而有關(guān)其臨床相關(guān)性的證據(jù)卻存 在矛盾。現(xiàn)有技術(shù)中最近出版了系統(tǒng)性綜述和統(tǒng)合分析(meta-analysis)，其作者得出的結(jié) 論是，關(guān)節(jié)內(nèi)的透明質(zhì)酸充其量具有很小的作用，而具有臨床意義的作用是指疼痛的視覺(jué) 模擬評(píng)分(visualanalogue scale)提高至少15mm(Bellamy等，2006)。這些數(shù)據(jù)成為對(duì)骨 關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)內(nèi)施用透明質(zhì)酸的基礎(chǔ)。有時(shí)，在注射一年后才能觀察到效用，并且在一些 實(shí)驗(yàn)中必須每周進(jìn)行3 5次注射(Barron，M. C.，2007)。a 2-腎上腺素能受體的配體(尤其是激動(dòng)劑)是醫(yī)療實(shí)踐中常被用作抗高血壓物 質(zhì)的藥物，以及在臨床麻醉學(xué)中常被用作全身麻醉、局部麻醉和鎮(zhèn)痛的藥物。它們產(chǎn)生抗焦 慮、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和免除麻醉(anaestheticsparing)的作用以及圍手術(shù)期血液動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定化 作用。負(fù)面神經(jīng)毒性研究表明，它們(主要是可樂(lè)定(clonidine))可通過(guò)全身性和髓周途 徑使用并用于外周神經(jīng)阻斷。在臨床上可用的a 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑中，可樂(lè)定仍被廣 泛應(yīng)用。該物質(zhì)無(wú)神經(jīng)毒性，并且與更有效且更常用的a 2-腎上腺素能受體選擇性激動(dòng)劑 右美托咪定(dexmedetomidine)相比副作用(即，血壓低和鎮(zhèn)靜作用)較少。可樂(lè)定是一 種強(qiáng)效的a 2-腎上腺素能受體部分激動(dòng)劑，其主要用于治療高血壓。該藥物刺激血管運(yùn)動(dòng) 中樞的a 2-腎上腺素能受體，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的交感傳出(sympatheticoutflow)減少。 心輸出量和外周阻力均減少，導(dǎo)致血壓下降。更高的濃度通過(guò)活化血管平滑肌中的突觸后 受體而引起血管收縮。但是，該藥物的顯著優(yōu)點(diǎn)被其副作用(包括口干、鎮(zhèn)靜和眩暈)所抵消。此外，這些化合物在口服施用時(shí)的其它活性(例如抗炎作用)尚無(wú)報(bào)道。除了經(jīng)脊柱施用CI2-腎上腺素能(CI2-腎上腺素受體)激動(dòng)劑具有周知的鎮(zhèn) 痛作用以外，也普遍報(bào)道了其在急性疼痛癥狀中的外周施用。對(duì)于圍手術(shù)期鎮(zhèn)痛技術(shù)來(lái) 說(shuō)，對(duì)外周神經(jīng)區(qū)域(peritroncular nerve block)進(jìn)行局部麻醉時(shí)加入可樂(lè)定可增 加鎮(zhèn)痛作用的效力和持續(xù)時(shí)間(ZOUHER A等，2005 ；Luiz-Cleber P.等，2005 ；Murphy DR "Anon-surgical approach to low back pain"Med. Health R. I.,2000)。此夕卜，關(guān)節(jié)內(nèi) 注射可樂(lè)定以及在用于靜脈內(nèi)區(qū)域性麻醉的局部麻醉液中加入可樂(lè)定也表現(xiàn)出止痛作用 (S. Armand 等，1998 ；Br J Anaesth. 1998 ；Gentili M 等，1996 ；Reuben S 等，1999)。但是， 這些效果僅能持續(xù)數(shù)小時(shí)，而不是數(shù)天或數(shù)周。已知a 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑阻止促炎細(xì)胞因子(例如TNF- a和IL1 3 )的組 織含量增加，并增加抗炎細(xì)胞因子TGF0的組織含量。這顯示在坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎的炎性 神經(jīng)性疼痛模型中，其中經(jīng)由外周神經(jīng)區(qū)域來(lái)局部施用a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防急性或慢性骨關(guān)節(jié)病和急性或慢性骨關(guān)節(jié)癥狀 (尤其是骨關(guān)節(jié)炎)的關(guān)節(jié)內(nèi)藥物組合物，該組合物包含-可能地足量的藥物載體或稀釋劑；-糖胺聚糖；-活化a2-腎上腺素能受體的化合物；-可能地足量的抗炎劑(化合物)(不同于a2激動(dòng)劑)，優(yōu)選地選自留類(lèi)抗炎化 合物(例如，強(qiáng)的松龍、地塞米松、倍他米松(betamethasone)、去炎松(triamcinolone))、 非甾類(lèi)抗炎化合物(例如，布洛芬、雙氯芬酸(diclofenac)、萘普生(naproxen)等)、針對(duì) 病因的抗風(fēng)濕藥物(例如，甲氨蝶呤、來(lái)氟米特(leflunoimde)等)、抗CD20藥劑、抗細(xì)胞 因子藥劑(例如，抗IL1、抗IL6、抗IL-17)、抗TNF藥劑(例如，英夫單抗(infliximab)、依 那西普(etanercerpt)、阿達(dá)木單抗(adalimumab)、利妥昔單抗(rituximab)等)或其混合 物；以及_可能地干細(xì)胞(已分化或未分化的)，優(yōu)選具有抗炎和再生特性的成人間充質(zhì)干 細(xì)胞或(非人)胚胎干細(xì)胞。在本發(fā)明的藥物組合物中，糖胺聚糖作為膜或作為基質(zhì)而存在，優(yōu)選采用糊劑或 凝膠的形式，更優(yōu)選含足量水性溶劑的水凝膠。有利地，與a 2-腎上腺素能受體相互作用的化合物是a 2_腎上腺素能受體激動(dòng) 劑。在本發(fā)明的組合物中，糖胺聚糖與活化a 2-腎上腺素能受體的化合物不共價(jià)連 接或者共價(jià)連接。優(yōu)選地，糖胺聚糖選自低分子量(< 900kDa)或高分子量(> 900kDa)的透明質(zhì)酸。在本發(fā)明的組合物中，透明質(zhì)酸和a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑不共價(jià)連接或者 共價(jià)連接。在本發(fā)明的組合物中，糖胺聚糖選自蛋白聚糖、硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素、透明質(zhì)
7酸(包括其衍生物)、殼聚糖、殼聚糖或甲殼素的衍生物，或其混合物。a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑選自可樂(lè)定、對(duì)氨基可樂(lè)定、噻胺唑啉 (tiamenidine)、5-溴 _6_(2 四氫咪唑-2-基氨基)喹喔啉(5-bromo_6-(2imidaz olidine-2-ylamino) quinoxaline)、右美托咪定、地托咪定(detomidine)、美托咪 定(medetomidine)、羥甲唑啉(oxymetazonline)、替扎尼定(tizanidine)、米伐折醇 (mivazerol)、洛非西定(lofexidine)、甲芐噻嗪(xylazine)、胍法辛(guanfacine)、胍氯 芳(guanclofine)、胍諾沙芐(guanoxabenz)，或者其衍生物或結(jié)構(gòu)類(lèi)似物、a -甲基去甲麻 黃石(alpha—methyinorephedrine)、艾才派碩(azepexole)、H^|卩朵拉日月(indoramin) >6- M 丙基-2-氨基_5，6，7，8-四氫4H-噻唑并[4，5_d]氮雜革二鹽酸鹽(6-allyl-2-amino-5, 6,7,8-tetrahydro4H-thiazolo[4,5_d]azepinediHCl)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的藥物組合物適于治療或預(yù)防急性和慢性骨關(guān)節(jié)病以及炎 性來(lái)源的相關(guān)癥狀(尤其是骨關(guān)節(jié)疼痛、活動(dòng)性或功能喪失)，例如骨關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié) 炎、膝關(guān)節(jié)病、髖關(guān)節(jié)變性病以及其它涉及關(guān)節(jié)的炎性一般病癥，例如自身免疫病(尤其是 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、脊柱關(guān)節(jié)病、風(fēng)濕性多肌痛、強(qiáng)直性脊柱炎、賴(lài)特 爾綜合征(Reiter’s Syndrome)、銀屑病性關(guān)節(jié)病、腸病性關(guān)節(jié)炎(與炎性腸病例如出血性 結(jié)腸炎和克羅恩病(Crohn's disease)有關(guān))、神經(jīng)病性關(guān)節(jié)病、急性風(fēng)濕熱、痛風(fēng)、軟骨鈣
(chondrocalcinosis) >la(calcium hydroxyapatite crystal deposition disease)、萊姆病(Lyme disease)以及所有其它退行性關(guān)節(jié)病。本發(fā)明的另一方面涉及所述藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防上述疾病和/ 或由這些疾病引起的癥狀(疼痛)的藥物中的用途，所述藥物可能地具有可用于治療和/ 或預(yù)防炎性來(lái)源的疾病或癥狀的抗炎作用。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所述組合物采用優(yōu)選的制劑，優(yōu)選為用于將所 述組合物中存在之有效量(治療劑量)的活性化合物遞送至哺乳動(dòng)物對(duì)象(包括人類(lèi)患 者，尤其是在該對(duì)象的膝部、髖部和脊柱)的注射溶液。優(yōu)選地，該注射溶液包含約0. lmg至約100mg/kg體重、優(yōu)選約lmg至約10mg/kg體 重的所述蛋白聚糖和/或糖胺聚糖，優(yōu)選地采用基于蛋白聚糖之水凝膠的形式；并且可包 含約0. lmg至約100mg/kg患者體重、優(yōu)選約0. lmg至約0. 8mg/kg患者體重的活化a 2-腎 上腺素能受體的化合物(抗炎化合物)，優(yōu)選a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，更優(yōu)選約3 u g 至約1500 ii g的所述a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，更加優(yōu)選約30ii g至約500ii g、甚至 50 y g至350 y g、或者約150 y g(的所述a 2_腎上腺素能受體激動(dòng)劑)。所述注射溶液適于經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用(經(jīng)皮注射)給哺乳動(dòng)物對(duì)象(優(yōu)選人類(lèi)患者) 的關(guān)節(jié)內(nèi)。該制劑也適于局部施用(經(jīng)皮注射至哺乳動(dòng)物對(duì)象、優(yōu)選人類(lèi)患者的發(fā)炎關(guān)節(jié)內(nèi) 或附近區(qū)域)，其中局部施用注射涉及表皮、肌肉或任何深部器官。本發(fā)明涉及出人意料的發(fā)現(xiàn)，即對(duì)哺乳動(dòng)物對(duì)象(特別是人類(lèi)患者)經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施 用所述藥物組合物改善了骨關(guān)節(jié)病相關(guān)的癥狀，例如緩解了骨關(guān)節(jié)疼痛、改善了關(guān)節(jié)活動(dòng) 性和/或功能、減少了關(guān)節(jié)中的炎性積液、縮短了第一組分開(kāi)始發(fā)揮治療活性的時(shí)間、延長(zhǎng) 了第一組分的作用持續(xù)時(shí)間以及降低了可能由上述疾病或病癥引起的關(guān)節(jié)退化或其進(jìn)程。本發(fā)明還涉及下述用于治療和/或預(yù)防選自上述疾病或癥狀之病癥的方法向哺乳動(dòng)物對(duì)象(優(yōu)選人類(lèi)患者)施用足夠量的本發(fā)明藥物組合物，其通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)施用(特別 是在哺乳動(dòng)物對(duì)象(優(yōu)選人類(lèi)患者)的膝部、髖部和脊柱中)來(lái)實(shí)現(xiàn)。 關(guān)節(jié)內(nèi)聯(lián)合施用透明質(zhì)酸和α 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑使作用發(fā)生更快、作用 持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)、療效更好或至少是相當(dāng)和/或與透明質(zhì)酸以及施用α 2-腎上腺素能受體激 動(dòng)劑相關(guān)的副作用可能減少。本發(fā)明的組合物和方法還使得可以減少為獲得期望療效所需的施用次數(shù)，并使作 用發(fā)生更快。本發(fā)明的最后一方面涉及藥盒，其包含含有本發(fā)明組合物之組分(載體/稀釋劑、 糖胺聚糖、α 2-腎上腺素能受體化合物、抗炎劑、干細(xì)胞或其組合)的一個(gè)或多個(gè)瓶，以及 向哺乳動(dòng)物對(duì)象(優(yōu)選患有上述骨關(guān)節(jié)病或癥狀(疼痛)的人類(lèi)患者)之發(fā)炎關(guān)節(jié)遞送該 組合物的裝置，以及包含-用于儲(chǔ)存該藥物組合物的儲(chǔ)庫(kù)裝置，-用于分配該藥物組合物的可沿所述儲(chǔ)庫(kù)之縱向軸移動(dòng)的活塞裝置，-用于向所述哺乳動(dòng)物對(duì)象的外周神經(jīng)遞送該藥物組合物的裝配在所述儲(chǔ)庫(kù)裝置 上的中空針。通過(guò)閱讀以下的本發(fā)明詳述以及所附實(shí)施例和附圖，本發(fā)明的這些和其它目的和 特征將會(huì)更加明顯。


圖1顯示在2名膝關(guān)節(jié)病患者中在第0天、第7天和第14天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用3次可 樂(lè)定(150 μ g)和透明質(zhì)酸后的VAS分值(其評(píng)價(jià)疼痛，從0( “完全無(wú)疼痛”)至100 ( “最 大疼痛”))。圖2顯示在2名膝關(guān)節(jié)病患者中在第0天、第7天和第14天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用3次可 樂(lè)定(150 μ g)和透明質(zhì)酸后的WOMAC評(píng)分(其評(píng)價(jià)疼痛和膝部功能，較差情況=96)。圖3顯示在2名膝關(guān)節(jié)病患者中在第0天、第7天和第14天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用3次可 樂(lè)定(150 μ g)和透明質(zhì)酸后的Lequesne評(píng)分(其評(píng)價(jià)膝部的algofunctional分值，較差 情況=24)。圖4顯示在1名髖關(guān)節(jié)變性病患者中在第0天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用1次可樂(lè)定(150 μ g) 和透明質(zhì)酸后的VAS分值(其評(píng)價(jià)疼痛，從0 ( “完全無(wú)疼痛”)至100 ( “最大疼痛”)。圖5顯示在1名髖關(guān)節(jié)變性病患者中在第0天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用1次可樂(lè)定(150 μ g) 和透明質(zhì)酸后的WOMAC分值(其評(píng)價(jià)疼痛和髖部功能)。圖6顯示在1名髖關(guān)節(jié)變性病患者中在第0天經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)施用1次可樂(lè)定(150 μ g) 和透明質(zhì)酸后的Lequesne分值(其評(píng)價(jià)疼痛和髖部功能)。圖7顯示由LPS刺激THl細(xì)胞誘導(dǎo)的通過(guò)不同α 2_腎上腺素能激動(dòng)劑實(shí)現(xiàn)的 IL-I β釋放之百分?jǐn)?shù)。發(fā)明詳述本文使用的術(shù)語(yǔ)“關(guān)節(jié)內(nèi)”是指用本發(fā)明的藥物組合物經(jīng)皮注射關(guān)節(jié)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“局部施用”是指經(jīng)皮注射至發(fā)炎關(guān)節(jié)中或附近區(qū)域。因此，局部 施用注射涉及表皮、真皮、肌肉或任何深部器官。
局部施用的主要優(yōu)勢(shì)是使鎮(zhèn)痛和其它作用選擇性地限制在受損區(qū)域中。此外，局 部施用使得局部濃度水平高，并且?guī)缀鯖](méi)有或沒(méi)有全身性釋散。局部施用和關(guān)節(jié)內(nèi)注射透 明質(zhì)酸是上述病癥的公認(rèn)治療方案。局部施用和關(guān)節(jié)內(nèi)注射a 2-腎上腺素能激動(dòng)劑易于實(shí)現(xiàn)，其與蛋白聚糖聯(lián)用時(shí) 提供了長(zhǎng)效作用。因此，可以顯著地使與侵入性藥物遞送系統(tǒng)之安置有關(guān)的難題以及由全 身性釋放引起之令人困擾的副作用最小化。該治療方案可以改善與健康相關(guān)的生活質(zhì)量、 患者滿(mǎn)意度以及估計(jì)費(fèi)用，尤其在慢性病癥中。優(yōu)選地，所施用的化合物選自糖胺聚糖，例如透明質(zhì)酸或其鹽或者透明質(zhì)酸與脂 族醇、雜環(huán)族醇或脂環(huán)族醇形成的酯，或透明質(zhì)酸的硫酸鹽形式，或含有透明質(zhì)酸之試劑的 組合。基于蛋白聚糖之水凝膠或糖胺聚糖或其衍生物的合適劑量典型地為每天約o. lmg至 約100mg/kg體重或者每天約0. 5mg至約10mg/kg體重，更優(yōu)選為每天約2mg至約8mg (依 體重)，以及合適劑量的a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，a 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑可以是可樂(lè)定、對(duì)氨基可樂(lè) 定、噻胺唑啉、5-溴-6-(2四氫咪唑-2-基氨基)喹喔啉、右美托咪定、地托咪定、美托咪 定、羥甲唑啉、替扎尼定、米伐折醇、洛非西定、甲芐噻嗪、胍法辛、胍氯芳、胍諾沙芐，或其衍 生物或結(jié)構(gòu)類(lèi)似物、a -甲基去甲麻黃堿、艾才派碩、吲哚拉明、6-烯丙基-2-氨基_5，6，7， 8-四氫4H-噻唑并[4，5-d]氮雜革二鹽酸鹽，或選自表1的化合物及其類(lèi)似物。
a 2-腎上腺素能警體激動(dòng)劑的分類(lèi)
胍類(lèi)
胍丁胺(agmatine)
fpftkM^ (betanidine)
雙胍類(lèi)(biguanides)
西咪替丁(cimetidine)
肌酸(creatine)
加貝酯(gabexate)
月瓜乙唆(guanethidine)
(guanfacine)
胍
雙咪硫胍(impromidine)
碘 ~3 節(jié)狐(iodo-3benzylguanidine)
甲基狐(methylguanidine)
米托胍腙(mitoguazone)
亞硝基胍(nitrosoguanidine)
吡那地爾(pinacidil)
氯苯胍(robenidine)
石黃 11 安月瓜(sulfaguanidine)
扎那米韋(zanamivir)
咪嗶類(lèi)
4-(3- 丁氧基-4-甲氧芐基)四氫咪唑-2-酮(4_(3-butoxy-4-methoxybenzyl) imidazolidin-2-one)尿干丨J酸(urocanic acid)氣基-R^P坐幾月安(amino-imidazole carboxamide)安他唑啉(antazoline)生物素(biotine)雙(4-甲基-1-高哌嗪硫代羰基)二硫化物(bis(4-methyl-1-homopiperazinyl thiocarbonyl)disulfide)卡比馬唑(carbimazole)西咪替丁(cimetidine)克霉唑(clotrimazole)肌酸酐(creatinine)達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)右美托咪定益康唑(econazole)依諾昔酮(enoximone)ethymizol依托咪酯(etomidate)法倔唑(fadrozole)氟司必林(fluspirilene)組胺組胺醇(histidinol)咪唑克生(idazoxan)四氫咪嗶類(lèi)咪唑啉(imidazoline)可樂(lè)定妥拉唑林(tolazoline)雙咪硫胍左旋咪唑(levamisole)氯沙坦(losartane)美托咪定咪康唑萘甲唑啉(naphazoline)尼立達(dá)唑(niridazole)硝基咪唑(nitroimidazole)昂丹司瓊(ondansetron)羥甲唑啉酚妥拉明(phentolamine)四米唑(tetramisole)
甲巰咪唑(thiamazole)咪噻芬(trimetaphan)可樂(lè)定的衍牛物 2，6-二甲基可樂(lè)定4-疊氮可樂(lè)定4-羧基可樂(lè)定-甲基3，5-二氯酪氨酸4-羥基可樂(lè)定4-碘代可樂(lè)定烯丙尼定(alinidine)阿可樂(lè)定(apraclonidine)氯乙基可樂(lè)定可樂(lè)定4-異硫氰酸酯可樂(lè)定4-甲基異硫氰酸酯可樂(lè)定受體可樂(lè)定替代物輕基苯乙酉先氨基可樂(lè)定(hydroxyphenacetyl aminoclonidine)N，N’-二甲基可樂(lè)定本發(fā)明中使用的活性化合物是已知的。含有透明質(zhì)酸的藥物制備物以及可樂(lè)定和 其它α2腎上腺素能受體激動(dòng)劑均有市售。所述化合物可以按照已知方式來(lái)制備，尤其是 按照現(xiàn)有技術(shù)中所述的方法來(lái)制備。本文使用的術(shù)語(yǔ)“可樂(lè)定”是指Ν-(2，6_二氯苯基)_4，5-二羥基-IH-咪唑-2-胺， 并包括其可藥用鹽，例如與無(wú)機(jī)酸(例如氫鹵酸)或有機(jī)酸(例如低級(jí)脂族一元羧酸或二 元羧酸(如乙酸、富馬酸或酒石酸)所成的鹽，或者與芳族羧酸(例如水楊酸))所成的鹽 也是適用的?？蓸?lè)定以治療有效量來(lái)施用。本發(fā)明還包括使用α 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑來(lái) 制備用于將治療劑量的所述激動(dòng)劑經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)注射遞送至關(guān)節(jié)或其鄰近區(qū)域的注射制劑，其 中所述溶液包含約3μ g至約1500 μ g的所述α 2_腎上腺素能受體激動(dòng)劑。優(yōu)選地，所述 制劑包含約30 μ g至約500 μ g的所述α 2_腎上腺素能受體激動(dòng)劑。更優(yōu)選地，所述溶液 包含約50 μ g至約350 μ g的所述α 2_腎上腺素能受體激動(dòng)劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案 中，α 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑是可樂(lè)定。可樂(lè)定的實(shí)際濃度可依據(jù)所治療之疼痛綜合癥 的性質(zhì)和程度、施用藥物是為治療目的還是預(yù)防目的而有所變化。由于α 2-受體激動(dòng)劑具有抗炎性質(zhì)、抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL_1 β以及增 加抗炎細(xì)胞因子(例如TGFii)，因此α 2-受體激動(dòng)劑的注射式施用可應(yīng)用于骨關(guān)節(jié)炎性病 癥以及涉及骨關(guān)節(jié)炎性病癥的疾病(例如前述疾病)中。根據(jù)本發(fā)明的方法和制劑，在患有骨關(guān)節(jié)疼痛的人病例和動(dòng)物模型中注射透明質(zhì) 酸和α 2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑形式的組合物得到持久的疼痛緩解。該方法是安全的， 無(wú)主要的藥物副作用，并且可用于急性和慢性治療和/或預(yù)防而不必使用過(guò)于侵入性的技 術(shù)。所述組合物中可摻入用于抑制微生物(例如細(xì)菌、酵母和霉菌)之生長(zhǎng)的有效量藥物載體或輔料(例如防腐劑)?？墒褂萌魏吾槍?duì)產(chǎn)品微生物污染的常規(guī)防腐劑，只要其 是可藥用的并且不與可樂(lè)定發(fā)生反應(yīng)即可。優(yōu)選的防腐劑是抗微生物的芳族醇(例如苯甲 醇、苯氧乙醇、苯乙醇等)和對(duì)羥基苯甲酸酯(常稱(chēng)為“尼泊金酯(paraben)化合物”，例如 對(duì)羥苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯等)及其混合物但并不僅限于此。特別優(yōu)選苯甲醇和苯
氧乙醇。任選地，可包括麻醉劑例如利多卡因(lidocaine)等。對(duì)于本發(fā)明的施用來(lái)說(shuō)，可 包含緩解神經(jīng)性疼痛的活性量化合物連同固體或液體藥物制劑形式的常規(guī)藥物賦形劑和/ 或添加劑。液體制備物(例如通過(guò)溶解或分散化合物來(lái)制備的活性成分之溶液、混懸液或乳 液)可包含載體(例如鹽水、右旋葡萄糖水溶液、甘油或乙醇)中的常用稀釋劑(例如水、 油)和/或助懸劑(例如聚乙二醇)以及可選的藥物輔料，以形成溶液或混懸液等。還可 加入另外的添加劑，例如防腐劑、調(diào)味劑等。
實(shí)施例實(shí)施例1 對(duì)4名具有膝關(guān)節(jié)積液(knee effusion)之膝關(guān)節(jié)病患者的受損膝蓋 實(shí)施1次關(guān)節(jié)內(nèi)注射(約20mg透明質(zhì)酸和約150 u g可樂(lè)定)。在之后的第7天和第14天 分別進(jìn)行第二次和第三次關(guān)節(jié)內(nèi)注射。每次注射前，取出關(guān)節(jié)內(nèi)的液體并進(jìn)行測(cè)量。分別 在基線(第0天)、關(guān)節(jié)內(nèi)注射后48 72小時(shí)、下一次注射(第7天和第14天)之前和第 21天時(shí)對(duì)疼痛和活動(dòng)性進(jìn)行評(píng)估。評(píng)估項(xiàng)目包括患者記錄疼痛強(qiáng)度(0 =無(wú)疼痛，100 =無(wú) 法忍受的疼痛)所填寫(xiě)的0 100mm視覺(jué)模擬評(píng)分、記錄疼痛和活動(dòng)性的W0MAC評(píng)分(較 差可能分值=96)和algofunctional評(píng)分(Lequesne指數(shù)，較差分值=24)。如圖1、2和3所示，關(guān)節(jié)內(nèi)注射所述組合意外地在48小內(nèi)使疼痛減輕(VAS值從 86. 5mm降至14. 5mm)，并且兩次重復(fù)注射使疼痛進(jìn)一步改善(第9天的VAS值=11，第16 天的VAS值=12)。與任一產(chǎn)品的效果相比，該出人意料的效果在第3次注射后(第21天 的VAS值為13)持續(xù)了至少一周。利用W0MAC評(píng)分對(duì)受損膝部的活動(dòng)性進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)估， 也得到了同樣的結(jié)果。W0MAC分值從基線時(shí)的61降至第7、14和21天的44、41和37。同 樣地，用Lequesne分值評(píng)估的algofunctional評(píng)分也顯示出顯著的改善，其分值從基線時(shí) 的20分別降至第7、14和21天的15、13、12。這些結(jié)果完全是意料之外的，因?yàn)樵谥匦略u(píng)估 其效果的統(tǒng)合分析中，透明質(zhì)酸使疼痛分值的減少不超過(guò)15mm，并且透明質(zhì)酸的效果直到 3 4周時(shí)才發(fā)揮出來(lái)。尚無(wú)可樂(lè)定用于骨關(guān)節(jié)炎的數(shù)據(jù)。實(shí)施例2 對(duì)2名髖關(guān)節(jié)變性病患者的受損髖部實(shí)施單次關(guān)節(jié)內(nèi)注射(約20mg透 明質(zhì)酸和約150 u g可樂(lè)定)。分別在基線(第0天)、第7天、第14天、第21天和第28天 評(píng)估疼痛和活動(dòng)性。評(píng)估項(xiàng)目包括患者記錄疼痛強(qiáng)度(0 =無(wú)疼痛，100 =無(wú)法忍受的疼痛) 所填寫(xiě)的0 100mm視覺(jué)模擬評(píng)分、記錄疼痛和活動(dòng)性的W0MAC評(píng)分(較差可能分值=96) 禾口 algofunctional i平分(Lequesne，較差分值=24)。如圖4、5和6所示，在用該組合進(jìn)行治療的髖關(guān)節(jié)變性病患者中，單次關(guān)節(jié)內(nèi)注射 約20mg透明質(zhì)酸和約150 y g可樂(lè)定引起迅即、顯著且長(zhǎng)期的效果。VAS從基線時(shí)的52mm 降至第7、14、21和28天的10、11、42和51。同樣地，W0MAC分值從基線時(shí)的69降至第7、 14,21和28天的27、28、43和72。Algofunctional分值從13降至第7和14天的8和8，并在第21和28天回復(fù)到注射前的值(分別為13和14)。這些結(jié)果是出人意料的，因?yàn)闆](méi)有報(bào)道過(guò)施用透明質(zhì)酸后3周內(nèi)有如此改善。沒(méi) 有與可樂(lè)定相關(guān)的數(shù)據(jù)。長(zhǎng)效止痛效果也是完全出乎意料的?？偟膩?lái)講，向患者關(guān)節(jié)內(nèi)同時(shí)注射可樂(lè)定和透明質(zhì)酸顯示出疼痛評(píng)分(80% )和 關(guān)節(jié)功能評(píng)分(60% )的顯著改善，這種改善維持約2 3周。針對(duì)腫脹也觀察到類(lèi)似的有利改善，其中腫脹顯示顯著地減弱。在該可行性 研究中，未報(bào)道出現(xiàn)主要副作用。令人感興趣的是，僅觀察到部分治療逃脫(treatment escape)。實(shí)施例3 關(guān)節(jié)內(nèi)產(chǎn)品的臨床經(jīng)驗(yàn)。已報(bào)道了關(guān)節(jié)內(nèi)施用⑴皮質(zhì)類(lèi)固醇、( )透 明質(zhì)酸和(iii)TNFa抑制劑的最全面臨床數(shù)據(jù)。在最近的一篇文獻(xiàn)中，Uthman等(Postgrad Med J. 2003 年 8 月；79 (934) :449_53) 對(duì)關(guān)節(jié)內(nèi)產(chǎn)品的所有已發(fā)表數(shù)據(jù)進(jìn)行了綜述。除皮質(zhì)類(lèi)固醇和透明質(zhì)酸外，對(duì)于一些物質(zhì) 或方法僅有零星報(bào)道，例如涉及奧古蛋白(orgotein)、放射性滑膜切除術(shù)、右旋葡萄糖增生 注射療法(dextrose prolotherapy)、硅酮、鹽水灌洗、非灌洗的鹽水注射、鎮(zhèn)痛劑、氨基葡 萄糖、促生長(zhǎng)激素抑制素(somatostatin)、木聚硫鈉(sodiumpentosan polysulfate)、氯 喹、粘多糖多硫酸酯、乳酸溶液和塞替派細(xì)胞抑制藥(thiot印a cytostatic^)，而并無(wú)其效 果的確切證據(jù)。棚列4 寸/胃日月砠！^臺(tái)臺(tái)^〒&·對(duì)標(biāo)準(zhǔn)單關(guān)節(jié)炎治療與可樂(lè)定_透明質(zhì)酸組合的比較(歷史數(shù)據(jù)和已發(fā)表數(shù)據(jù)) 顯示該組合對(duì)單關(guān)節(jié)炎癥狀的效果更好。通過(guò)分值(例如疼痛分值或功能性分值)的降低(其表明有改善)來(lái)量度效果。 n. r.=無(wú)報(bào)道，n.m.=未檢測(cè)；*統(tǒng)合分析和/或已發(fā)表研究中的平均數(shù)據(jù) (Bliddal 等，2006，Bliddal 等，2006，F(xiàn)erncindez Upez和 Ruano-Ravina 2006，Arrich 等， 2005 ；Bellamy 等，2006 ；Bellamy 等，2006) ；** 僅為主要副作用實(shí)施例5 :A2A/HA與關(guān)節(jié)內(nèi)HA的比較 文獻(xiàn)報(bào)道的透明質(zhì)酸最大效果是使疼痛減少55%、功能改善23% (Kolarz等， 2003)，但是這些效果似乎從未重復(fù)出來(lái)(Arich等，2005 ；Wang等，2004 ；Lo等，2003)。透明質(zhì)酸的這些最大效果比所報(bào)道的可樂(lè)定-透明質(zhì)酸組合之效果要差得多(分 別為，疼痛減少55%對(duì)85%，功能改善23%對(duì)55% )。未見(jiàn)透明質(zhì)酸針對(duì)腫脹(骨關(guān)節(jié) 炎和其它炎性關(guān)節(jié)疾病中的主要疼痛因素)之益處的報(bào)道，而施用可樂(lè)定和透明質(zhì)酸的組 合則明顯減少腫脹。先前也未研究過(guò)可樂(lè)定對(duì)慢性膝部疼痛的作用。對(duì)可樂(lè)定在急性疼痛中之效果的研究表明，可樂(lè)定的作用不超過(guò)72小時(shí) (Gentili等，2001)，甚至最短作用時(shí)間僅為4小時(shí)(Alagol等，2005)。而可樂(lè)定-透明質(zhì) 酸組合的效果顯示可達(dá)2周。實(shí)施例6 將上述可樂(lè)定的效果外推至其它a 2-腎上腺素能藥劑。在對(duì)照情況(地塞米松)下，測(cè)定了由LPS刺激TH1細(xì)胞誘導(dǎo)的、a 2-腎上腺素 能激動(dòng)劑對(duì)IL-10釋放的抑制作用。如圖7所示，研究結(jié)果為-1(TM地塞米松抑制 65 %的由LPS所刺激TH1細(xì)胞分泌的IL-1 3。-1(TM米伐折醇和10_5M可樂(lè)定顯示出地塞米松DEX(10_7M)效果的80 90%。-胍法辛和莫索尼啶(moxonidine)的效果為地塞米松(DEX)效果的40 60%， 而其它藥劑僅有微弱效果。-胍那芐(Guanabenz)、溴莫尼定(Brimonidine)和甲基多巴(Methyldopa)沒(méi)有 效果。實(shí)施例7 在外周血單核細(xì)胞樽型中測(cè)試可樂(lè)定與誘明質(zhì)酸組合的效果。簡(jiǎn)言之， 利用Ficoll梯度離心從健康志愿者的肝素化靜脈血中分離出PBMC(外周血單核細(xì)胞)。用 PBS清洗MNC(mononuclear cell，單核細(xì)胞)3次并用含100U/mL青霉素、100 y g/mL鏈霉素 和10%熱滅活FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行重懸。將100. 000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，每孔 總體積為200 ii L。
將PBMC(100. 000個(gè)細(xì)胞/200ii L)接種于96孔微量滴定板中，并用g/mL植物 血凝素(phytohemagglutinin，PHA)進(jìn)行刺激，或者不刺激。測(cè)試透明質(zhì)酸“HA” (200 u g/ mL)和對(duì)氨基可樂(lè)定“A2A” (5uM)對(duì)PBMC的效果。增殖測(cè)定。在培養(yǎng)結(jié)束前將培養(yǎng)物與1 P Ci/mL的3H-胸腺嘧啶溫育24h，以測(cè)定 增殖情況。然后，用冰冷的PBS清洗細(xì)胞兩次，并用冰冷的5%三氯乙酸(TCA)清洗細(xì)胞兩 次。最后，用0. IN Na0H-0. 1% Triton-XlOO裂解細(xì)胞。收集上清液，并在閃爍液存在下利 用粒子計(jì)數(shù)器進(jìn)行分析。結(jié)果以cpm( “每分鐘計(jì)數(shù)”=在1分鐘連續(xù)計(jì)數(shù)系列中觀察 到的放射性元素的衰變數(shù))表示。IL-1 3 檢測(cè)(利用 ELISA)。利用 Quantikine ELISA 試劑盒(R&DSystems Inc, Mineapolis，USA)對(duì)PBMC或培養(yǎng)物上清液中的IL-10水平進(jìn)行測(cè)量。估計(jì)可檢出的 IL-1 0最低濃度為1. 0pg/mL。將PHA刺激所誘導(dǎo)的PBMC之IL_1 ^釋放與PBMC增殖設(shè)為對(duì)照，并與經(jīng)HA和/ 或A2A處理之PBMC的測(cè)定值進(jìn)行比較。還測(cè)定了由LPS刺激TH1細(xì)胞所誘導(dǎo)之PBMC釋放IL_1 ^的抑制以及PBMC增殖 的抑制，其與PHA刺激細(xì)胞情形中的趨勢(shì)相似。單獨(dú)加入HA的效果 由PHA刺激所誘導(dǎo)的IL-I β分泌顯示出與本底情況(其中未檢測(cè)到IL-I β )相 比的顯著增加，并將其設(shè)定為100。PMBC細(xì)胞的增殖也顯著增加，其系數(shù)約為20。出人意料 的是，與本底情況相比，單獨(dú)加入HA時(shí)觀察到類(lèi)似的細(xì)胞因子增加，而PBMC增殖則未受影 響。當(dāng)用PHA刺激時(shí)，HA的加入?yún)f(xié)同增加IL-I β的分泌，其比刺激情況下高3倍，而且也 能降低PBMC增殖(其系數(shù)下降2)。單獨(dú)加入Α2Α的效果 A2A對(duì)本底(未經(jīng)刺激的情況)無(wú)作用。令人感興趣的是，當(dāng)用PHA刺激時(shí)，A2A 的加入完全抑制由PHA刺激所誘導(dǎo)的IL-Ιβ分泌之增加，至檢測(cè)不出的水平，但卻不能抑制PBMC增殖。A2A和HA組合的效果
.
令人感興趣的是，與PHA/HA情況下相比，HA/A2A組合表現(xiàn)出強(qiáng)效抗炎作用。事實(shí) 上，加入A2A能夠顯著逆轉(zhuǎn)(超過(guò)50%)由？撤/撤刺激所引起的11^-10分泌增加，使其水 平與單獨(dú)使用PHA時(shí)相同。出人意料的是，A2A還可抑制PBMC的增殖(再抑制35% )。已知在炎癥期間，較低分子量的透明質(zhì)素(hyaluronan)片段通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞因子 (例如IL-6和單核細(xì)胞趨化蛋白(monocytechemoattractant protein，MCP-1))的分泌從 而作為引發(fā)炎癥以及激活免疫系統(tǒng)的藥劑。HA還能夠增強(qiáng)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞與細(xì)胞外基 質(zhì)的粘附(Yamawaki等，2009)。這些實(shí)驗(yàn)表明，透明質(zhì)酸對(duì)于細(xì)胞因子(例如IL-I β )的 產(chǎn)生具有強(qiáng)效刺激作用，而對(duì)PBMC增殖則沒(méi)有。已表明，可樂(lè)定改變Thl/Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生(Xu等，2007 ； Cook-Mi lis等， 1998)。這些實(shí)驗(yàn)表明，加入α 2-腎上腺素受體激動(dòng)劑完全抑制由PHA刺激所引起的細(xì)胞 因子(例如IL-I β )分泌增加，但不能抑制PBMC增殖。出人意料的是，ΗΑ/Α2Α組合對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生和炎性細(xì)胞增殖均表現(xiàn)出強(qiáng)效的抗炎 作用。事實(shí)上，向HA中加入Α2Α能夠顯著抑制IL-I β分泌的增加，并且還能抑制PBMC的增殖。參考文獻(xiàn)Jasmin Arrich, et al. (Intra-articular hyaluronic acid for thetreatmentof osteoarthritis of the knee :systematic review andmeta-analysis. CMAJ 2005 ；172(8)2005)Bellamy et al. (Cochrane Database Syst. Rev. ,2006 19，(2)CD005321)Barron, M. G. (J. Am. Osteopath.，107，ES 21-27)Zouher et al. (Paediath. Anaesth. 2005，15(11)p. 964-970) ·Luiz-Cleber P. et al. (Anaesth. Analog 2005，101 (3)p.807—811)Murphy DR (Med. Health R. I.，2000，83 (4) p. 104-107)Armand, S et al. (Br. J. Anaesth. 1998,81 (2) p. 126—134)Gentili M et al. (Pain 1996，64，p.593-596)Reuben S. et al. (Anaesthesial，1999，91，p.654-658)Uthman I, et al. (Intra-articular therapy in osteoarthritisPostgrad Med J.2003 Aug ；79 (934) 449-532003)Kolarz Genoteal(seminars in Arthritis and Rheumatism vol 32,n° 5,2003)Rubin B. (the Journal of the American Osteopathic Association2005, vol 105，n° 9，suppl. 4，p.523-528)Wang Chen-Ti et al. (The journal of bone and joint surgeryAmerican volume,2004，vol. 86—A，n° 3 p.538—549)Lo Grace et al. (The journal of the American medicalassociation,vol 900 n° 23，p.3115-3121).Cook-Mills et al. , Immunology. 85 544-549(1995).Yamawaki H et al.，Glycobiology，19，83-92(2009).
權(quán)利要求
藥物組合物，其用于通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)注射來(lái)治療和/或預(yù)防急性或慢性骨關(guān)節(jié)病和/或癥狀，所述藥物組合物包含-可能地足量的藥物載體或稀釋劑；-糖胺聚糖；-有效量的活化α2-腎上腺素能受體的化合物，優(yōu)選α2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述急性或慢性骨關(guān)節(jié)癥狀選自疼痛、喪失活動(dòng)性 和/或功能。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中所述a2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑選自可 樂(lè)定、對(duì)氨基可樂(lè)定、噻胺唑啉、5-溴_6-(2四氫咪唑-2-基氨基)喹喔啉、右美托咪定、 地托咪定、美托咪定、羥甲唑啉、替扎尼定、米伐折醇、洛非西定、甲芐噻嗪、胍法辛、胍氯芳、 胍諾沙芐，或者其衍生物或結(jié)構(gòu)類(lèi)似物、a-甲基去甲麻黃堿、艾才派碩、吲哚拉明、6-烯丙 基-2-氨基-5，6，7，8-四氫4H-噻唑并[4，5_d]氮雜革,二鹽酸鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的藥物組合物，其中所述糖胺聚糖以基于糖胺聚糖之水凝膠的形 式存在，并且其中所述糖胺聚糖和所述活化a 2-腎上腺素能受體的化合物共價(jià)連接或不 共價(jià)連接。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述糖胺聚糖選自蛋白聚糖、硫酸 軟骨素、硫酸角質(zhì)素或透明質(zhì)酸或其衍生物、殼聚糖、殼聚糖或甲殼素的衍生物，或者其混 合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的藥物組合物，其為注射溶液。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含0.1 100mg/kg體重的所述糖胺 聚糖以及0. 1 y g lmg的所述化合物。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述骨關(guān)節(jié)病(特別是炎性來(lái) 源的骨關(guān)節(jié)病)選自骨關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、膝關(guān)節(jié)病、髖關(guān)節(jié)變性病以及其它涉及關(guān)節(jié) 的炎性一般病癥或癥狀，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、脊柱關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性多肌痛、強(qiáng)直性脊柱炎、 賴(lài)特爾綜合癥、銀屑病性關(guān)節(jié)病、腸病性關(guān)節(jié)炎(與炎性腸病例如出血性結(jié)腸炎和克羅恩 病有關(guān))、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)病性關(guān)節(jié)病、急性風(fēng)濕熱、痛風(fēng)、軟骨鈣質(zhì)沉著癥、羥磷灰石 晶體沉積病和萊姆病。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述注射每周進(jìn)行2次，優(yōu)選每周進(jìn) 行1次，更優(yōu)選2周或更多周進(jìn)行一次。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含另外的抗炎化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含成人間充質(zhì)干細(xì)胞或非人胚 胎間充質(zhì)干細(xì)胞。
12.組合物，其包含-可能地足量的藥物載體或稀釋劑；-0. 1 100mg/kg體重的糖胺聚糖；-0. 1 ii g lmg活化a 2-腎上腺素能受體的化合物。
13.藥盒，其包含-含有前述權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)之組合物的瓶；-用于向哺乳動(dòng)物對(duì)象之發(fā)炎關(guān)節(jié)遞送所述組合物的裝置；并且還包含“用于儲(chǔ)存所述組合物的儲(chǔ)庫(kù)裝置；-用于分配所述藥物組合物的可沿所述儲(chǔ)庫(kù)之縱向軸移動(dòng)的活塞裝置；以及 _用于向所述哺乳動(dòng)物對(duì)象的外周神經(jīng)遞送所述藥物組合物的裝配在所述儲(chǔ)庫(kù)裝置上 的中空針。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防急性或慢性骨關(guān)節(jié)病以及急性或慢性骨關(guān)節(jié)癥狀(尤其是骨關(guān)節(jié)炎)的關(guān)節(jié)內(nèi)藥物組合物，該組合物包含可能地足量的藥物載體或稀釋劑、糖胺聚糖、活化α2腎上腺素能受體的化合物、抗炎劑和干細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K31/726GK101878029SQ200980101174
公開(kāi)日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2009年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月15日
發(fā)明者克里斯·韋沃埃特, 恩里科·巴斯蒂亞內(nèi)利, 皮埃爾·阿塔利 申請(qǐng)人:骨治療公司