專利名稱：包含轉(zhuǎn)錄因子誘餌作為活性成分的用于外部應(yīng)用的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于外用制劑的組合物，其含有溶解有轉(zhuǎn)錄因子誘餌的脂肪酸系離子 液體作為基本成分。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)錄因子是指結(jié)合至啟動(dòng)子的上游或下游的DNA來控制基因的轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)；作 為代表例,可以提及 NF- κ B、E2F、GATA-3、STAT-1、STAT-6、Ks、AP-I 等等。其次，誘餌是指引誘物；具有與其應(yīng)結(jié)合或作用的某物相似的結(jié)構(gòu)的任何物質(zhì)被 稱為誘餌。作為轉(zhuǎn)錄因子誘餌，主要使用具有與基因組DNA上轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域相同的堿 基序列的雙鏈寡核苷酸(專利文件1 幻。在由這樣的寡核苷酸構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子誘餌的 共存下，某些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合至轉(zhuǎn)錄因子誘餌，而不是結(jié)合至其應(yīng)結(jié)合的基因組DNA上的結(jié) 合區(qū)域。因此，結(jié)合至基因組基因的轉(zhuǎn)錄因子降低，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子的活性降低。在這種情況 下，這些寡核苷酸作為基因組基因上真實(shí)結(jié)合區(qū)域的贗品(引誘物)起作用而結(jié)合至所述 轉(zhuǎn)錄因子；因而，它們被稱為轉(zhuǎn)錄因子誘餌。已知通過給予轉(zhuǎn)錄因子誘餌，可降低目標(biāo)轉(zhuǎn)錄 因子的活性而治療或預(yù)防由該轉(zhuǎn)錄因子引起的疾病。例如，當(dāng)NF- κ B誘餌被用作以上描述的轉(zhuǎn)錄因子誘餌時(shí)，NF- κ B的貢獻(xiàn)可以被抑 制，從而可以抑制或緩解例如變態(tài)反應(yīng)、哮喘和風(fēng)濕病等中的癥狀。因此，基于NF-K B誘餌 的新的抗炎性軟膏劑正在開發(fā)；特別是，它作為嚴(yán)重特異反應(yīng)性皮炎中面部病變的治療藥 物的臨床應(yīng)用研究正在進(jìn)行(非專利文獻(xiàn)1)。然而，出現(xiàn)了下述問題，轉(zhuǎn)錄因子誘餌的分子量通常是約10，000或更高，大大超 過容許經(jīng)皮吸收的分子量范圍。這是因?yàn)槠つw中隔離外界和生物體內(nèi)部環(huán)境的屏障功能非 常發(fā)達(dá)，因此，具有超過1，000的分子量的物質(zhì)的皮膚滲透被顯著地抑制。因而，除了皮膚 屏障功能顯著地降低的侵蝕性病變，例如，糜爛性部位，認(rèn)為通過外部應(yīng)用難以獲得治療效 果。在實(shí)際的治療中，獲得了正如預(yù)計(jì)的結(jié)果；出現(xiàn)了涉及如何提高例如NF-KB誘餌的轉(zhuǎn) 錄因子誘餌的經(jīng)皮吸收性的重大問題。因此，為了提高轉(zhuǎn)錄因子誘餌的皮膚透過性，已對各種劑型進(jìn)行了研究。例如，公 開了 NF- κ B誘餌、大豆磷脂與礦脂的混合物的制劑配方(專利文獻(xiàn)4) ,NF- κ B誘餌和海藻 酸鈉的水溶性凝膠制劑(專利文獻(xiàn)幻和具有擔(dān)載于納米粒子表面上的NF- κ B誘餌的制劑 (專利文獻(xiàn)6)。然而，它們都不是完全令人滿意的；特別是，其中NF-κ B誘餌穩(wěn)定地存在的 任何非水性制劑配方還是未知的。在這個(gè)背景下，需要開發(fā)轉(zhuǎn)錄因子誘餌的新的非水性皮膚外用制劑。專利文獻(xiàn)1 日本專利國內(nèi)重新公開96/035430專利文獻(xiàn)2 JP-3392143專利文獻(xiàn)3 :W095/11687
專利文獻(xiàn) 4 JP-A-2006-89475
專利文獻(xiàn) 5 JP-A-2007-137891
專利文獻(xiàn)6 JP-A-2008-056611非專利文獻(xiàn) 1 Japanese Journal of Clinical Medicine No. 63, extra issue 12，p659-663(2005)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題本發(fā)明涉及提供外用制劑組合物，其中例如NF-K B誘餌的轉(zhuǎn)錄因子誘餌被穩(wěn)定 地溶解以改善其經(jīng)皮吸收性。解決問題的手段因?yàn)楸景l(fā)明人中的一些人發(fā)現(xiàn)了如小牛胸腺DNA的巨大核酸可以利用離子液體 來溶解(日本專利申請2007-018004)，本發(fā)明人等提出了將離子液體用于轉(zhuǎn)錄因子誘餌的 概念，并進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)了通過在非水性條件下使用具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸 系離子液體作為溶劑，可提高轉(zhuǎn)錄因子誘餌在外用制劑中的溶解度，并改善轉(zhuǎn)錄因子誘餌 的經(jīng)皮吸收性。本發(fā)明人等還發(fā)現(xiàn)，通過混合多種脂肪酸系離子液體，可控制轉(zhuǎn)錄因子誘餌在外 用制劑中的溶解度。然后，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)通過控制溶解度，可促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子誘餌的經(jīng)皮吸 收性。因此，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，由于轉(zhuǎn)錄因子誘餌的經(jīng)皮吸收性通過控制其在本發(fā)明制劑中 的溶解度而得到改善，因此即使在以往尚未被報(bào)道的、含有極低濃度(0. 0001 )誘 餌的制劑中，誘餌也被經(jīng)皮吸收以展現(xiàn)其作用。基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的要點(diǎn)如下[1]非水性的外用制劑組合物，含有溶于脂肪酸系離子液體中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，所 述脂肪酸系離子液體獲自具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸和具有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺 化合物。[2]以上[1]中描述的外用制劑組合物，其中所述具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸 是選自由羥基乙酸、甲氧基乙酸、乙酰丙酸、癸酸和異硬脂酸構(gòu)成的組的一種或更多種。[3]以上[1]或[2]中描述的外用制劑組合物，其中所述具有4 12個(gè)碳原子的 有機(jī)胺化合物是選自由二乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺和三異丙醇胺構(gòu)成的組的一種或 更多種。[4]以上[1] [3]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述脂肪酸系 離子液體是多種脂肪酸系離子液體的混合離子液體。[5]以上W]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述混合離子液體是離子液 體(I)和離子液體(II)的混合物，所述離子液體(I)是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二 乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽，所述離子液體(II)是具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇 胺鹽或三異丙醇胺鹽。[6]以上[5]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體⑴的具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸選自由羥基乙酸、甲氧基乙酸和乙酰丙酸構(gòu)成的組。[7]以上[6]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體⑴的具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸是乙酰丙酸。
[8]以上[5] [7]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體 (II)是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。[9]以上[8]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有 2 5個(gè)碳原子的脂肪酸是乙酰丙酸。[10]以上[8]或[9]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)和 離子液體(II)的重量比為2 1 1 10的范圍。(IOa)以上[8]或[9]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體⑴和 離子液體(II)的重量比為1 1 1 5的范圍。[11]以上[5] [7]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液 體(II)是具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。[12]以上[11]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有 6 13個(gè)碳原子的脂肪酸是癸酸。[13]以上[11]或[12]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)的重量比為40 1 2 1的范圍。(13a)以上[11]或[12]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)的重量比為10 1 2 1的范圍。[14]以上[5] [7]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液 體(II)是具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。[15]以上[14]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有 14 20個(gè)碳原子的脂肪酸是異硬脂酸。[16]以上[14]或[15]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)的重量比為1 1 1 50的范圍。(16a)以上[14]或[15]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)的重量比為1 2 1 30的范圍。[17]以上[8]中描述的非水性外用制劑組合物，其中進(jìn)一步含有離子液體(IIa)， 該離子液體(IIa)是具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。[18]以上[17]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(IIa)的具有 14 20個(gè)碳原子的脂肪酸是異硬脂酸。[19]以上[17]或[18]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)及(IIa)的重量比為1 1 1 50的范圍。(19a)以上[17]或[18]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I) 和離子液體(II)及(IIa)的重量比為1 2 1 30的范圍。[20]以上[1] [19]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因 子誘餌的濃度是0. 0001 lw/w%。[21]以上[1] [19]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因 子誘餌的濃度是0. 0001 0. 2w/w%。[22]以上[1] [21]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中作為具有 2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的離子液體以所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌的濃 度的3 3000倍的濃度含有。
[23]以上[1] [21]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中以所述轉(zhuǎn)錄 因子誘餌的濃度的3 1000倍的濃度含有作為具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺 鹽或三乙醇胺鹽的離子液體。[24]以上[22]或[23]中描述的非水性外用制劑組合物，其中含有多種脂肪酸系 離子液體的混合離子液體，所述混合離子液體的濃度是0. 008 30W/W%。[25]以上[1] [24]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中添加了有機(jī) 溶劑。[26]以上[25]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述有機(jī)溶劑是選自由癸 二酸二乙酯、十四烷酸異丙酯和碳酸丙烯酯構(gòu)成的組的一種或更多種。[27]以上[1] [26]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中添加了螯合 劑。[28]以上[27]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述螯合劑是依地酸二鈉Τττ . ο[29]以上[1] [28]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述組合物 為添加有軟膏基質(zhì)的軟膏劑的形式。[30]以上[29]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述軟膏基質(zhì)是膠態(tài)烴或 白凡士林。[31]以上[1] [30]的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因 子選自由 NF- κ B、E2F、GATA-3、STAT-1、STAT-6、Ets 和 AP-I 構(gòu)成的組。[32]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列GGRHTYYHC的NF- κ B誘餌(其中R代表A或G，Y代表C或Τ，H代表A、C或Τ)。[33]以上[32]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述NF-κ B誘餌包含序列 GGATTTCCC 或 GGACTTTCC。[34]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列TTTSSCGS (其中S代表G或C)的E2F誘餌。[35]以上[34]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述E2F誘餌包含序列 TTTCCCGC。[36]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列WGATAR(其中W代表A或T，R代表A或G)的GATA-3誘餌。[37]以上[36]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述GATA-3誘餌包含序列 AGATAG0[38]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列TTCNNNGAA (其中N代表A、G、T或C)的STAT-1誘餌。[39]以上[38]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述STAT-I誘餌包含序列 TTCCGGGAA。[40]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列TTCNNNNGAA (其中N代表A、G、T或C)的STAT-6誘餌。[41]以上W0]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述STAT-6誘餌包含序列 TTCCCAAGAA。
[42]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列MGGAW(其中M代表A或C，W代表A或T)的Ets誘餌。[43]以上W2]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述Ets誘餌包含序列 CGGAA。[44]以上[31]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含 序列TGASTMA (其中S代表G或C，M代表A或C)的AP-I誘餌。[45]以上W4]中描述的非水性外用制劑組合物，其中所述引誘AP-I物包含序列 TGAGTCA。[46]抑制轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的方法，所述轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合至以上[1] W5] 的任一項(xiàng)中描述的非水性外用制劑組合物中含有的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，該方法包括向需要抑制 所述基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的哺乳動(dòng)物經(jīng)皮給予所述非水性外用制劑組合物。[47]轉(zhuǎn)錄因子誘餌和獲自具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸和具有4 12個(gè)碳原子 的有機(jī)胺化合物的脂肪酸系離子液體用于制造非水性外用制劑組合物的用途。[48]以上W7]中描述的用途，其中所述離子液體是離子液體(I)和離子液體 (II)的混合離子液體，所述離子液體(I)是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或 三乙醇胺鹽，所述離子液體(II)是具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異 丙醇胺鹽。發(fā)明效果通過制備具有轉(zhuǎn)錄因子誘餌和具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸系離子液體作為基 本成分的外用制劑組合物，可穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄因子誘餌，并改善所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌的經(jīng)皮吸收性。 通過使用多種脂肪酸系離子液體，可控制轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度以進(jìn)一步改善經(jīng)皮吸收 性。特別地，通過制備非水性外用制劑組合物，轉(zhuǎn)錄因子誘餌的穩(wěn)定性可被改善。如上所述， 可利用本發(fā)明提供含有轉(zhuǎn)錄因子誘餌的各種外用制劑產(chǎn)品，例如，液體劑、軟膏劑和貼劑。


圖1是顯示使用小鼠DTH模型的評價(jià)結(jié)果的圖。圖中，*表示ρ <0.05 (vs. 0% 組)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供用于外用制劑的組合物，其含有轉(zhuǎn)錄因子誘餌和具有2 20個(gè)碳原子 的脂肪酸系離子液體作為基本成分。雖然在本發(fā)明中誘餌靶向的轉(zhuǎn)錄因子沒有特別的限制，只要它是調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄 作用的因子，并且是除RNA聚合酶以外的蛋白質(zhì)；例如，作為藥物開發(fā)目標(biāo)正在被開發(fā)的那 些，例如 NF- κ B、E2F、GATA-3、STAT-1、STAT-6、Ets 禾口 AP-1 是優(yōu)選的。在此，“轉(zhuǎn)錄因子誘餌”沒有特別的限制，只要它是能夠與基因組DNA上所述轉(zhuǎn)錄 因子實(shí)質(zhì)上結(jié)合或作用的區(qū)域競爭性地結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的核酸；一般地，所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌 是雙鏈寡核苷酸，其包含與基因組DNA上的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域相同或基本上相同的堿基序 列，并通常由14 35個(gè)堿基對、更優(yōu)選15 30個(gè)堿基對、再更優(yōu)選17 25個(gè)堿基對、最 優(yōu)選18 22個(gè)堿基對組成?！盎旧舷嗤膲A基序列”是指堿基序列，其中在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域的共有序列中1、2或3個(gè)堿基被其他堿基替換，并且其保持了與所述共有序列相等 或更高的對轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合性(例如，90%或更高)。所期望的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的基因組DNA 上的堿基序列實(shí)際上是廣泛可變的，已知大量類似于、但不完全相同于共有序列的順式元 件序列；因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員基于公知的順式元件的序列信息可容易地設(shè)計(jì)基本上相同 的堿基序列。雖然雙鏈寡核苷酸可以是雙鏈DNA、雙鏈RNA和DNA =RNA雜交物的任一者，但 優(yōu)選雙鏈DNA。在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域(順式元件)中共通可見的堿基序列(共有序列)對于相應(yīng) 的轉(zhuǎn)錄因子是公知的，每一種通常由約5 15個(gè)堿基對組成。作為代表性的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合 的共有序列的實(shí)例(顯示有義鏈序列；下同)，可以提及以下。(1)轉(zhuǎn)錄因子NF- κ B 序列GGRHTYYHC (其中R代表A或G，Y代表C或T，H代表 八、(或10(2)轉(zhuǎn)錄因子E2F 序列TTTSSCGS (其中S代表G或C)。(3)轉(zhuǎn)錄因子GATA-3 WGATAR(其中W代表A或T，R代表A或G)(4)轉(zhuǎn)錄因子 STAT-I 序列 TTCNNNGAA (其中 N 代表 A、G、T 或 C)(5)轉(zhuǎn)錄因子 STAT-6 序列 TTCNNNNGAA (其中 N 代表 A、G、T 或 C)(6)轉(zhuǎn)錄因子Ks 序列MGGAW(其中M代表A或C，W代表A或T)(7)轉(zhuǎn)錄因子AP-I 序列TGASTMA (其中S代表G或C，M代表A或C)作為雙鏈誘餌寡核苷酸的修飾的形式， 鈴形誘餌寡核苷酸、具有分子內(nèi)切口的 現(xiàn)鈴形誘餌寡核苷酸、發(fā)夾形誘餌寡核苷酸等等，也被包括在與本發(fā)明相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子誘 餌中。作為與上述轉(zhuǎn)錄因子的誘餌中含有的順式元件同源的更為特異性的序列的實(shí)例， 可以分別提及以下。(Ia)NF-K B 誘餌序列 GGATTTCCC 或 GGACTTTCC
(2a) E2F 誘餌序列 TTTCCCGC(3a) GATA-3 誘餌序列 AGATAG(4a) STAT-I 誘餌序列 TTCCGGGAA(5a) STAT-6 誘餌序列 TTCCCAAGAA(6a) Ets 誘餌序列 CGGAA(7a) AP-I 誘餌序列 TGAGTCA如上所述，轉(zhuǎn)錄因子通常結(jié)合的順式元件序列由約5 15個(gè)堿基對組成；因此，通 常使用的轉(zhuǎn)錄因子誘餌具有添加到其一個(gè)或兩個(gè)末端的總共1 30個(gè)、優(yōu)選1 25個(gè)、更 優(yōu)選2 20個(gè)、特別優(yōu)選3 17個(gè)堿基對。添加的堿基(序列)可以是任何一種，只要它 不會(huì)不利地影響轉(zhuǎn)錄因子誘餌的性質(zhì)。更具體地，可以提及由各堿基序列(轉(zhuǎn)錄因子的目標(biāo)序列被下劃線)組成的雙鏈 寡核苷酸，例如以下顯示的那些(Ib)作為NF- κ B誘餌，例如5' -CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3‘ (SEQ ID NO 1),5' -AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3‘ (SEQ ID NO 2),5' -AGTTGAGGACTTTCCAGGC-3‘ (SEQ ID NO :3)等等，
(2b)作為E2F誘餌，例如5' -CTAGATTTCCCGCG-3 ‘ (SEQ ID NO 4),5' -CTAGATTTCCCGCGGATC-3‘ (SEQ ID NO :5)等等，(3b)作為GATA-3誘餌，例如5' -AGCTTGAGATAGAGCT-3‘ (SEQ ID NO :6)等等，(4b)作為STAT-I誘餌，例如5' -GATCTAGGGATTTCCGGGAAATGAAGCT-3‘ (SEQ ID NO 7),5' -TGTGAATTACCGGAAGTG-3‘ (SEQ ID NO :8)等等，(5b)作為STAT-6誘餌，例如5' -GATCAAGACCTTTTCCCAAGAAATCTAT-3‘ (SEQ ID NO :9)等等，(6b)作為Ets誘餌，例如5' -AATTCACCGGAAGTATTCGA-3‘ (SEQ ID NO 10)等等，(7b)作為AP-I誘餌，例如5' -AGCTTGTGAGTCAGAAGCT-3‘ (SEQ ID NO 11)等等。作為構(gòu)成轉(zhuǎn)錄因子誘餌的寡核苷酸，優(yōu)選地使用天然型DNA或RNA，特別是DNA;為 了改善穩(wěn)定性(化學(xué)的和/或?qū)γ傅?或比活性(對轉(zhuǎn)錄因子的親和力)，可以含有各種化 學(xué)修飾。雖然轉(zhuǎn)錄因子誘餌可以通過，例如，利用商業(yè)上可獲得的自動(dòng)化DNA/RNA合成儀 (Applied Biosystemsjeckman等等)，合成由如上所述設(shè)計(jì)的堿基序列組成的單鏈寡核苷 酸的有義鏈和反義鏈的每一個(gè)，并退火這兩者來產(chǎn)生；可以使用本領(lǐng)域公知的其他方法。溶解在本發(fā)明的外用制劑組合物中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌的含量可以是這樣，以使最終 配合于所述外用制劑中的量實(shí)現(xiàn)經(jīng)皮吸收后治療有效水平的遞送。配合于外用制劑組合物 中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌的含量可以是，例如，0.0001 lw/w1^。更優(yōu)選的，可以提及0.0001 0. 2w/w%。最優(yōu)選的，可以提及0. 0001 0. lw/w%。在本發(fā)明的外用制劑組合物中，所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌溶于具有2 20個(gè)碳原子的脂 肪酸系離子液體中。在此，“具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸系離子液體”是指具有2 20個(gè)碳原子的 脂肪酸和有機(jī)胺化合物的等摩爾的熔融鹽或等摩爾的平衡混合物；考慮到使用的轉(zhuǎn)錄因子 誘餌的濃度和其他添加劑的影響，過量的脂肪酸或有機(jī)胺可以添加到所述外用制劑組合物 中。所述過量理想地在0.2倍摩爾量之內(nèi)。作為優(yōu)選的有機(jī)胺化合物，可以提及具有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化合物。對于在本發(fā)明中的“具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸”，可以使用具有2 10個(gè)的 中鏈脂肪酸，例如，羥基乙酸、乙酰丙酸、己酸、辛酸、癸酸等等；具有11 20個(gè)碳原子的飽 和或不飽和高級(jí)脂肪酸，例如，月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、油酸等等。作 為優(yōu)選的脂肪酸的實(shí)例，可以提及具有5 20個(gè)碳原子的脂肪酸，例如，乙酰丙酸、癸酸、肉 豆蔻酸、異硬脂酸和油酸。此外，可以制備和使用適當(dāng)?shù)幕旌想x子液體，其中通過適當(dāng)?shù)乩?用多種這些酸，控制轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度。作為特別優(yōu)選的脂肪酸，可以提及乙酰丙酸和 異硬脂酸。在本發(fā)明中，“具有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化合物”是指其中碳原子的數(shù)目是4 12個(gè)的有機(jī)胺化合物。作為優(yōu)選的有機(jī)胺，可以提及由羥基基團(tuán)取代的直鏈的或分支 的烷基胺化合物。作為更優(yōu)選的有機(jī)胺，可以提及二乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺、三異丙 醇胺等等。本發(fā)明中使用的脂肪酸系離子液體可以是單獨(dú)的離子液體或混合離子液體。在 此，“混合離子液體”是指多種上述的具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸系離子液體的混合物； 存在著3種混合離子液體一種具有共同的脂肪酸和不同的有機(jī)胺化合物，一種具有共同 的有機(jī)胺化合物和不同的脂肪酸，一種具有不同的脂肪酸和不同的有機(jī)胺化合物。在本發(fā) 明中，為了控制轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度或經(jīng)皮吸收性，可以視情況使用適合的組合?？梢钥?慮離子液體的作用確定混合離子液體的含量比例。為了控制轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度，使用提供高溶解度的離子液體和提供低溶解度 的離子液體的混合物。作為其中轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度高的優(yōu)選的離子液體(用于溶解的離子液體= 離子液體(I))，可以提及其中誘餌溶解度是或更高的離子液體。作為更優(yōu)選的離 子液體，可以提及其中誘餌溶解度是或更高的離子液體。作為特別優(yōu)選的離子液 體，可以提及其中誘餌溶解度是或更高的離子液體。更具體地，作為提供轉(zhuǎn)錄因子誘餌的高溶解度的用于溶解的離子液體(離子液體(I))，可以提及具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽。在此，作為具有 2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的實(shí)例，可以提及羥基乙酸、甲氧基乙酸、乙酰丙酸等等。更優(yōu)選 的，可以提及乙酰丙酸。因此，作為用于轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解的離子液體的實(shí)例，可以提及乙酰丙酸二乙醇胺鹽、乙酰丙酸三乙醇胺鹽、羥基乙酸二乙醇胺鹽、羥基乙酸三乙醇胺鹽、 甲氧基乙酸二乙醇胺鹽、甲氧基乙酸三乙醇胺鹽等等。同時(shí)，作為其中轉(zhuǎn)錄因子誘餌的溶解度低的優(yōu)選的離子液體(用于稀釋的離子液 體=離子液體(II))，可以提及其中誘餌溶解度是或更低的離子液體。作為更優(yōu)選 的離子液體，可以提及其中誘餌溶解度是0. 或更低的離子液體。作為特別優(yōu)選的離 子液體，可以提及其中誘餌溶解度是0.2%或更低的離子液體。更具體地，作為提供轉(zhuǎn)錄因子誘餌的低溶解度用于稀釋的離子液體(離子液體(II))，可以提及具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。優(yōu)選的， 可以提及具有5 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。在此，作為具 有5 20個(gè)碳原子的脂肪酸的實(shí)例，可以提及乙酰丙酸、癸酸、肉豆蔻酸、異硬脂酸、油酸等 等。更優(yōu)選的，可以提及乙酰丙酸和異硬脂酸。因此，作為提供轉(zhuǎn)錄因子誘餌的低溶解度的 離子液體的實(shí)例，可以提及乙酰丙酸二異丙醇胺鹽、乙酰丙酸三異丙醇胺鹽、癸酸二異丙醇 胺鹽、癸酸三異丙醇胺鹽、異硬脂酸二異丙醇胺鹽、異硬脂酸三異丙醇胺鹽等等。優(yōu)選的，可 以提及乙酰丙酸二異丙醇胺鹽、乙酰丙酸三異丙醇胺鹽、異硬脂酸二異丙醇胺鹽、異硬脂酸 三異丙醇胺鹽等等。本發(fā)明的脂肪酸系離子液體可以通過，例如，在室溫下或在加溫下以等摩爾的比 例或按需要以任何一種過量，混合具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸和有機(jī)胺化合物，優(yōu)選具 有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化合物來制備。所述過量理想地在0. 2倍摩爾量之內(nèi)?；旌?離子液體可以通過，例如，以合適的含量比例混合如上所述制備的離子液體來獲得。至于用于溶解轉(zhuǎn)錄因子誘餌的離子液體的量，必須首先溶解轉(zhuǎn)錄因子誘餌；因而，首先必需使用提供高溶解度的離子液體。重要的是在溶解之后，誘餌使用用于稀釋的離子 液體來稀釋，使得混合離子液體中的溶解度更接近飽和。因而，作為用于誘餌溶解的離子液 體的量，必需將量設(shè)置在比轉(zhuǎn)錄因子誘餌的量高的3 3000倍的水平下。對于使用的離子 液體的合適的量，更優(yōu)選的，可以提及比誘餌的量高的3 1000倍的量，特別優(yōu)選3 800倍。在本發(fā)明的外用制劑組合物中脂肪酸系離子液體的濃度主要受到外用制劑的形 式的影響；例如，對于液體劑，濃度優(yōu)選的是10 50w/w%，對于軟膏劑約0. 008 30w/ w%。作為軟膏制劑中更優(yōu)選的濃度，可以提及0.01 20W/W% ；作為最優(yōu)選的濃度，可以 提及 0. 01 10w/w%。當(dāng)使用單一離子液體時(shí)，可以使用單獨(dú)的、提供轉(zhuǎn)錄因子誘餌的高溶解度的用于 溶解的離子液體。在那種情況下，在外用制劑組合物中的離子液體濃度也與使用的轉(zhuǎn)錄因 子誘餌的量相關(guān)；隨著使用的轉(zhuǎn)錄因子誘餌的量降低，使用的脂肪酸系離子液體的相對量 降低。例如，當(dāng)使用乙酰丙酸三乙醇胺鹽或乙酰丙酸二乙醇胺鹽時(shí)，期望的是所述鹽以比誘 餌濃度高的約3 3000倍的濃度添加。作為單一離子液體的優(yōu)選的濃度，可以提及比誘餌 濃度高的3 200倍的濃度。作為單一離子液體的特別優(yōu)選的濃度，可以提及比誘餌濃度 高的3 100倍的濃度。為了調(diào)整離子液體中的誘餌溶解度，可以使用包含多種離子液體的混合物的混合 離子液體。在那種情況下，作為用于溶解的離子液體(離子液體(I))，可以使用其是具有 2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的一種或更多種離子液體。作為用于 稀釋的離子液體(離子液體(II))，可以使用其是具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙 醇胺鹽或三異丙醇胺鹽的一種或更多種離子液體。至于混合離子液體的含量比例，優(yōu)選的范圍取決于用于稀釋的離子液體的脂肪酸 的選擇而變化(具體地，用于稀釋的離子液體的脂肪酸是(1)具有2 5個(gè)碳原子的脂肪 酸，(2)具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸，或(3)具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸)。在本發(fā)明中，作為“具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸”的實(shí)例，可以提及羥基乙酸、甲 氧基乙酸、乙氧基乙酸、乙酰丙酸、乳酸等等；作為優(yōu)選的脂肪酸，可以提及羥基乙酸、甲氧 基乙酸和乙酰丙酸。作為特別優(yōu)選的脂肪酸，可以提及乙酰丙酸。在本發(fā)明中，作為“具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸”的實(shí)例，可以提及2-乙基己 酸、癸酸等等；作為優(yōu)選的脂肪酸，可以提及癸酸。在本發(fā)明中，作為“具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸”的實(shí)例，可以提及肉豆蔻酸、 異硬脂酸、油酸，等等，作為優(yōu)選的脂肪酸，可以提及異硬脂酸、油酸。(1)當(dāng)使用其是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的用于 溶解的離子液體(離子液體(I))和其是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的三異丙醇胺鹽或二 異丙醇胺鹽的用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以提及離子液體(I)離子液 體(II) =2 1 1 10的范圍內(nèi)的混合離子液體的重量比。優(yōu)選的，可以提及1 1 1 5的范圍內(nèi)的離子液體(I)離子液體(II)的比例。例如，當(dāng)乙酰丙酸三乙醇胺鹽用 作用于溶解的離子液體(離子液體(I))且乙酰丙酸三異丙醇胺鹽用作用于稀釋的離子液 體(離子液體(II))時(shí)，可以使用離子液體(I)離子液體(II)=I 1 1 10的重量 比。優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II) = 1 1 1 5。例如，當(dāng)乙酰丙酸二乙醇胺鹽用作用于溶解的離子液體(離子液體(I))且乙酰丙酸三異丙醇胺鹽用作用于 稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以使用離子液體(I)離子液體(II) = 2 1 1 10的重量比。優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II) = 1 1 1 4。例 如，當(dāng)羥基乙酸三乙醇胺鹽用作用于溶解的離子液體(離子液體(I))且羥基乙酸三異丙醇 胺鹽用作用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，離子液體(I)離子液體(II)的重量 比優(yōu)選的在1 1 1 8的范圍內(nèi)，更優(yōu)選1 1 1 4。(2)當(dāng)具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的離子液體被用 作用于溶解的離子液體(離子液體(I))，具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽 或三異丙醇胺鹽的離子液體被用作用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以使用其 中混合離子液體的含量重量比是離子液體(I)離子液體(II)=I 1 1 50的混合 離子液體。優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II) = 1 2 1 30的混合離 子液體。更優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II) = 1 2 1 20的混合離 子液體。例如，當(dāng)乙酰丙酸三乙醇胺鹽用作用于溶解的離子液體(離子液體(I))且異硬脂 酸二異丙醇胺鹽用作用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以使用離子液體(I) 離子液體(II) = 1 0 1 50的重量比。優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體 (II) = 1 2 1 30的重量比。更優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II)= 1 2 1 20的重量比。(3)當(dāng)具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的離子液體被用 作用于溶解的離子液體(離子液體(I))，具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽 或三異丙醇胺鹽的離子液體被用作用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以使用其 中離子液體(I)離子液體(II)重量比在40 1 2 1的范圍內(nèi)的混合離子液體。優(yōu) 選的，可以提及其中離子液體(I)離子液體(II)的比例是10 1 2 1的混合離子 液體。例如，當(dāng)乙酰丙酸三乙醇胺鹽用作用于溶解的離子液體(離子液體(I))和癸酸二異 丙醇胺鹽用作用于稀釋的離子液體(離子液體(II))時(shí)，可以使用離子液體(I)離子液 體(II) = 40 1 2 1的重量比。優(yōu)選的，可以提及離子液體(I)離子液體(II)= 10 1 2 1的重量比。還可能的是混合3種或更多種離子液體；例如，有可能使用具有2 5個(gè)碳原子的 脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽的離子液體作為用于溶解的離子液體(離子液體(I))， 具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的三異丙醇胺鹽或二異丙醇胺鹽的離子液體(II)和具有 14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽的離子液體(IIa)作為用于 稀釋的離子液體。在這種情況下，可以使用其中離子液體(I)離子液體(II)+離子液體 (IIa)的重量比在1 1 1 50的范圍內(nèi)的混合離子液體。優(yōu)選的，可以提及其中離子 液體(I)離子液體(II) +離子液體(IIa)的重量比在1 2 1 30的范圍內(nèi)的混合 離子液體。例如，組合乙酰丙酸三乙醇胺鹽(離子液體(I))與作為用于稀釋的離子液體的 乙酰丙酸三異丙醇胺鹽(離子液體(II))和異硬脂酸二異丙醇胺鹽(離子液體(IIa))，可 以使用離子液體(I)離子液體(II) +離子液體(IIa) = 1 2 1 30的重量比。由于混合離子液體的含量比例與如上所述在離子液體中的誘餌溶解度相關(guān)，考慮 制劑中轉(zhuǎn)錄因子誘餌含量(濃度)，誘餌濃度被調(diào)節(jié)到盡可能接近在離子液體中誘餌飽和 濃度的水平。例如，當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子誘餌濃度是0. 0001 0. 時(shí)，用于溶解的離子液體的和用于稀釋的離子液體的含量比例可以參考如實(shí)施例2中所示的誘餌溶解度等等來調(diào)整。 例如，當(dāng)所述制劑中轉(zhuǎn)錄因子誘餌濃度是0. 02%時(shí)，乙酰丙酸三乙醇胺鹽被用作用于溶解 的離子液體(離子液體(I))，異硬脂酸二異丙醇胺鹽被用作用于稀釋的離子液體(離子液 體(II))，混合離子液體的重量比優(yōu)選地在1 0 1 30的范圍內(nèi)，乙酰丙酸三乙醇胺鹽 的量作為1。更優(yōu)選的，可以提及在1 2 1 20、再更優(yōu)選的1 2 1 13的范圍 內(nèi)的重量比。在此，術(shù)語“外用制劑組合物”被用作涵蓋了非水性外用制劑組合物和水性外用制 劑組合物兩者的概念?！胺撬酝庥弥苿┙M合物”是不含有水作為構(gòu)成成分的外用制劑組合 物。非水性外用制劑組合物中，在試劑中含有的吸收的或吸附的水不被考慮。同時(shí)，“水性 外用制劑組合物”含有水作為組分。含有的水的量取決于制劑的形狀而變化，理想地是容許 水與基質(zhì)良好混合和均勻分散的量。對于制劑中的水濃度，約10%或更低是優(yōu)選的。本發(fā)明的非水性外用制劑組合物除了上述用于外用制劑的組合物之外可以含有 有機(jī)溶劑。在此，“有機(jī)溶劑”是指起作用來稀釋和溶解脂肪酸系離子液體中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌 的溶劑。此外，作用于皮膚表面來改善經(jīng)皮吸收性的有機(jī)溶劑是期望的。例如，可以提及醚， 如THF、丁基醚、聚乙二醇甲醚；酮，如甲基異丁基酮；低級(jí)烷基羧酸酯，如乙酸乙酯、乙酸丙 酯、丁酸乙酯；脂肪酸酯，如癸二酸二乙酯、十四烷酸異丙酯、二異丙基己二酸酯、十四烷基 棕櫚酸酯、硬脂酰硬脂酸酯、十四烷基豆蔻酸酯、油酸甘油三酯、二十六烷基二十四烷酸酯、 蟲蠟醇cerophosphate、蟲蠟醇Iaccerate ；碳酸酯，如碳酸丙烯酯；植物油，如橄欖油和椰 子油，等等。作為優(yōu)選的有機(jī)溶劑，可以提及脂肪酸酯，例如十四烷酸異丙酯和癸二酸二乙 酯，植物油，例如椰子油和橄欖油。此外，可以提及高級(jí)醇，例如，苯甲醇、月桂醇、肉豆寇醇、 十六醇、硬脂醇、十八烷基醇、2-十二醇；具有1 12個(gè)碳原子的低級(jí)醇，例如，乙醇、丙醇、 異丙醇、正丁醇、戊醇、辛醇和十二烷醇；多元醇，例如乙二醇、甘油、丙二醇和1，3_ 丁烯醇， 等等。作為優(yōu)選的有機(jī)溶劑，可以提及乙醇、異丙醇、乙二醇和丙二醇。有或沒有這些有機(jī)溶劑的添加、添加的量視需要來選擇。優(yōu)選的，可以提及0. 5 10 / %的范圍。本發(fā)明的非水性外用制劑組合物可以進(jìn)一步含有螯合劑。在此，“螯合劑”是指 用于除去例如Si的二價(jià)金屬離子，以抑制皮膚表面上存在的DNA酶(DNase)的活性的螯 合試劑。具體地，可以提及具有低皮膚刺激性、用于此目的的螯合劑；例如，依地酸二鈉 鹽(EDTA*2Na)、乙酰乙酸酯，例如乙酰乙酸甲酯，和乙酰乙酸乙酯等等。優(yōu)選的，可提及 EDTA · 2Na。在此，“外用制劑”可以根據(jù)目標(biāo)疾病和預(yù)期用途制備成外用制劑的各種劑型的形 式。例如，可以提及液體劑、凝膠劑、軟膏劑、乳膏劑、洗劑、貼劑，等等。它們可以使用通常 用于藥物制造的方式來生產(chǎn)。此外，作為其他添加劑，可以視情況使用通用的公知的抗氧化劑、防腐劑、增稠劑 和保存劑。作為抗氧化劑，抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、異抗壞血酸、乙酸鹽 生育酚、丁基羥基茴香醚、生育酚、焦亞硫酸鈉、二丁基羥基甲苯、沒食子酸丙酯，等等。作為防腐劑的實(shí)例，可以提及苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鈉、脫氫醋酸鈉、對鄰羥基苯甲酸、對鄰羥基苯甲酸鈉、乙基對鄰羥基苯甲酸酯、丙基對鄰羥基苯甲酸酯(對 羥基苯甲酸丙酯)、丁基對鄰羥基苯甲酸酯、異丙基對鄰羥基苯甲酸酯、異丁基對鄰羥基苯 甲酸酯、丙酸、丙酸鈉、苯扎氯銨、水楊酸，其混合物，等等。優(yōu)選的，可以提及對羥基苯甲酸 甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯扎氯銨、水楊酸、其混合物，等等。增稠劑是指在標(biāo)準(zhǔn)溫度下在水中是固體和微溶的物質(zhì)。作為無機(jī)材料的實(shí)例，可 以提及例如，非晶二氧化硅、白陶土(石膏)、硅藻土、滑石粉、水合二氧化硅、輕質(zhì)無水硅 酸、硅酸鎂、硅酸鈣、磷酸鈣、硫酸鋇，等等。作為有機(jī)材料的實(shí)例，可以提及結(jié)晶纖維素，等 等。作為優(yōu)選的一種，可以提及輕質(zhì)硅酸酐。本發(fā)明的外用制劑組合物可以通過在用于制劑的基本構(gòu)成成分中溶解或懸浮藥 效成分來制備。作為軟膏劑形式的外用制劑組合物的基質(zhì)，可以提及例如白凡士林、液體 石蠟、膠態(tài)烴，等等。膠態(tài)烴通過膠凝烴類，例如，液體石蠟、石蠟、異鏈烷烴、鯊?fù)?、角鯊烯?聚丁烯等等來制備。特別地，用聚乙烯樹脂膠凝的液體石蠟和用橡膠/彈性體膠凝的油或 脂肪是優(yōu)選的。例如，可以提及Plastibase(商品名)或Poloid(商品名)，其是通過用按 重量計(jì)算5 10%的聚乙烯樹脂膠凝液體石蠟(日本藥典)來制備的，通過添加甘油脂肪 酸酯到膠態(tài)烴以賦予親水性來制備的親水膠態(tài)烴(Plastibase Hydrophilic (商品名))等寸。在乳膏劑中，可以提及用例如油成分如鯊?fù)?、液體石蠟、礦脂、羊毛脂、固態(tài)石蠟或 蜂蠟、水、表面活性劑、濕潤劑等等的混合物的乳劑制備的基質(zhì)。在液體劑中，可以提及用醇類例如異丙醇、乙醇、丙二醇或甘油，油或脂肪例如橄 欖油或大豆油和水的混合溶液制備的基質(zhì)。在貼劑中，粘合劑被用作基質(zhì)。如在此提及的，粘合劑主要包括彈性體、膠粘劑、軟 化劑、填充物、抗氧化劑，等等。特別地，所述軟化劑、填充物和抗氧化劑可以按需要被增加、 減少或除去。作為上述的彈性體，可以提及合成橡膠，例如，苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯塊狀 (以下稱為SIQ共聚物、苯乙烯-丁二烯-苯乙烯塊狀共聚物、苯乙烯-乙烯-丁二烯橡 膠-苯乙烯塊狀共聚物、丁苯橡膠、聚異戊二烯、聚異丁烯、聚丁烯、丁基橡膠、硅橡膠；丙烯 酸酯樹脂，例如聚丙烯酸甲酯和聚甲基丙烯酸甲酯；天然橡膠等等。作為優(yōu)選的彈性體，可 以提及基于橡膠聚合物的彈性體，例如，苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯塊狀共聚物、丁苯橡膠、 聚丁烯、聚異戊二烯、丁基橡膠和天然橡膠。這些可以單獨(dú)地使用，或以2種或更多種的組 合使用。以上描述的樹脂膜可以單獨(dú)地使用，或在2種或更多種的疊層中使用。以上描述的膠粘劑是指脂環(huán)烴樹脂、多萜樹脂、脂肪族烴樹脂、聚苯乙烯樹脂、松 香、氫化松香，等等。作為優(yōu)選的膠粘劑，可以提及脂環(huán)烴樹脂。作為以上描述的軟化劑的實(shí)例，可以提及基于石油的軟化劑，例如，加工的油和低 分子聚丁烯，基于脂肪油的軟化劑，例如蓖麻油和椰子油、純化的羊毛脂，等等。作為以上描述的填充物的實(shí)例，可以提及氧化鋅、二氧化鈦、碳酸鈣、硅酸，等等。作為本發(fā)明的外用制劑組合物的活性成分的各種轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)各種炎癥相關(guān)基 因的表達(dá)，包括細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子、粘附分子和細(xì)胞凋亡相關(guān)分子。特別地，由 于NF-K B誘導(dǎo)了多種炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，NF-KB誘餌預(yù)計(jì)通過抑制這些基因的表達(dá)展 現(xiàn)多種抗炎作用，由于其作用特異性，產(chǎn)生比類固醇更低的副作用發(fā)生率。當(dāng)前，利用這種誘餌對特異反應(yīng)性皮炎的臨床應(yīng)用正在被研究。如上所述生產(chǎn)的本發(fā)明的外用制劑組合物是低毒性的，可以經(jīng)皮給予需要抑制轉(zhuǎn) 錄因子的基因轉(zhuǎn)錄控制的人類或其他哺乳動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、兔、綿羊、豬、牛、貓、狗、 猴，等等)，所述轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合至所述外用制劑組合物中含有的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，例如，患有預(yù) 計(jì)通過抑制所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)得以改善其狀況的疾病的動(dòng)物。本發(fā)明的外用制劑組合物的給藥方案取決于給予的受試者、目標(biāo)疾病、癥狀等等 而變化；例如，對用于治療成年人特異反應(yīng)性皮炎，活性成分NF-K B誘餌的合適的量(對于 單劑量的量，通常約0. Img lg，優(yōu)選約1 500mg)可以經(jīng)皮地每天給予約1 5次，優(yōu)選 每天約1 3次。如果癥狀特別嚴(yán)重，可以取決于該癥狀來提高劑量。實(shí)施例在下文中在以下實(shí)施例和試驗(yàn)例的基礎(chǔ)上更具體地描述本發(fā)明，然而，本發(fā)明無 論如何不受所述實(shí)施例或試驗(yàn)例的限制。對于軟膏制劑中的NF- κ B誘餌，如下所述地進(jìn)行 ⑴皮膚透過性試驗(yàn)和⑵使用OVA誘導(dǎo)小鼠DTH模型(延遲過敏性反應(yīng)模型)的小鼠經(jīng) 皮吸收性評價(jià)試驗(yàn)。(I)NF- κ B i秀餌的皮膚誘i寸t牛i平價(jià)i式駘(錄U^i式駘)根據(jù)日本厚生勞動(dòng)省發(fā)行的“Guidelinefor Bioequivalence Studies of Generic Products of Preparations for Topical Skin Application，，中指定的方法，帶 有某些修改，評價(jià)了誘餌的皮膚透過性。(a)定性評價(jià)試驗(yàn)軟膏制劑施加到受試者前臂的前側(cè)表面Icm半徑的區(qū)域中；經(jīng)過1小時(shí)之后，小心 地擦去施加部位的軟膏制劑，重復(fù)地施加和除去膠帶。丟棄前兩個(gè)樣品膠帶；取第三膠帶之后的五個(gè)膠帶一組作為皮膚的一層(作 為一個(gè)試管)，分別地獲得皮膚的第一到第三層。提取溶劑(3ml甲醇和0.5ml的IOmM Tris-EDTA(pH 7.0))預(yù)先置于試管中，取下的每個(gè)膠帶立即浸入提取溶劑中。在完成剝離 之后，破碎每個(gè)膠帶并進(jìn)行超聲。過濾提取物，利用蒸發(fā)器餾出溶劑到0. 2ml的殘余量。采集所獲得的濃縮溶液100 μ 1，通過HPLC檢查誘餌的有無。(b)定量評價(jià)試驗(yàn)軟膏制劑施加到受試者前臂的前側(cè)表明15mm半徑的區(qū)域中；在過去30分鐘之后， 小心地擦去施加部位的軟膏制劑，重復(fù)地施加和除去膠帶。按照與(1)相同的方式，獲得前 3層皮膚的膠帶。提取溶劑^nl超純水和0. 5ml的IOmM Tris-EDTA(pH 7. 0))預(yù)先置于試 管中，取下的每個(gè)膠帶立即浸入提取溶劑中。在完成剝離之后，破碎每個(gè)膠帶并進(jìn)行超聲。 過濾提取物，利用蒸發(fā)器餾出溶劑到0. 15ml的殘余量。采集獲得的濃縮溶液100μ 1，采集的誘餌的量通過HPLC測定。皮膚的第3層的膠 帶中檢測的誘餌的量用作皮膚透過性的標(biāo)度(ng/層)。⑵利用OVA誘導(dǎo)小鼠DTH模型(延遲過敏性反應(yīng)模型)的NF- κ B誘餌的小鼠經(jīng) 皮吸收性評價(jià)試驗(yàn)(1) OVA的制備和初次致敏稱出規(guī)定量的卵清蛋白(OVA)，用D-PBS[Dulbecco' s磷酸鹽緩沖鹽水](_)制備 OVA溶液5mg/mL。等體積的弗氏不完全佐劑添加到OVA 10mg/mL溶液，利用Vortex (商品名)混合器搖動(dòng)混合物5分鐘來形成乳劑，從而制備OVA/乳劑。OVA/乳劑在腹部的上下兩部分的兩個(gè)皮內(nèi)部位以100 μ L/部位給予BALB/c小鼠 (雌性，7周齡)。(2)誘餌的給予20mg的各制劑在單次給予的情況下在第二次致敏之前M小時(shí)施加到右足，在重 復(fù)給予的情況下在第二次致敏之前1、2和3天施加到右足；24小時(shí)后，使用溫水濕潤的脫 脂棉除去藥物。(3)第二次致敏在初次致敏后9天，進(jìn)行第二次致敏。稱出規(guī)定量的0VA，用D-PBS(-)制備OVA ang/mL溶液。小鼠右足被致敏，左足保持未致敏。以50 μ L/部位向小鼠致敏的足的后側(cè)中 心皮下給予OVA 2mg/mL。D-PBS (-)以50 μ L/部位給予未致敏的足。G) DTH反應(yīng)的測定在第二次致敏之后M小時(shí)，利用厚度規(guī)(Mitutoyo生產(chǎn)的)在每個(gè)足的中心測定 足厚度。進(jìn)行三次測定，獲得平均值作為足厚度。通過以下公式計(jì)算足厚度的增加來進(jìn)行評價(jià)(致敏的足厚度)_(未致敏的足厚度)=(足厚度增加)由于在第二次致敏時(shí)給予的影響而在足上展現(xiàn)了內(nèi)出血的個(gè)體從評價(jià)中排除。以相對于無誘餌制劑給藥組(0%組)中的足厚度增加的，試驗(yàn)制劑給藥組中的足 厚度增加抑制率(％ )作為指標(biāo)，評價(jià)經(jīng)皮吸收性(延遲過敏性反應(yīng)抑制)。通過t_測驗(yàn)進(jìn)行組間比較。實(shí)施例1 =NF- κ B誘餌的非水性液體劑組合物NF-K B誘餌是易溶于水的化合物，難以用它制備非水性外用制劑。然而，可將 NF- κ B誘餌溶于以下的脂肪酸系離子液體以實(shí)現(xiàn)液化NF- κ B誘餌。(1)利用乙酰丙酸系離子液體(單一離子液體)的非水性外用制劑組合物稱出乙酰丙酸和等摩爾量的二乙醇胺和三乙醇胺的每一種，混合，每種產(chǎn)生的混 合物在80°C加溫20分鐘，產(chǎn)生2種乙酰丙酸系的離子液體。稱出SEQ ID NO :1所示的約IOmg NF-κ B誘餌，添加到約1. Og的2種乙酰丙酸系 離子液體的每一種中，混合物在80°C加溫約30分鐘。在容許混合物冷卻到室溫之后，檢查 誘餌溶解的狀態(tài)。結(jié)果，NF-K B誘餌溶于二乙醇胺鹽和三乙醇胺鹽的乙酰丙酸系離子酸的 每一種中；成功地制備了非水性液體。此外，測定了以上描述的2種離子液體中NF-K B誘餌的溶解度；發(fā)現(xiàn)溶解度如以 下的表1中所示。[表1]
權(quán)利要求
1.非水性的外用制劑組合物，含有溶于脂肪酸系離子液體中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，所述脂 肪酸系離子液體獲自具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸和具有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化合 物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的外用制劑組合物，其中所述具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸是選自 由羥基乙酸、甲氧基乙酸、乙酰丙酸、癸酸和異硬脂酸構(gòu)成的組的一種或更多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的外用制劑組合物，其中所述具有4 12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化 合物是選自由二乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺和三異丙醇胺構(gòu)成的組的一種或更多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述脂肪酸系離子液 體是多種脂肪酸系離子液體的混合離子液體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的非水性外用制劑組合物，其中所述混合離子液體是離子液體(I) 和離子液體(II)的混合物，所述離子液體(I)是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺 鹽或三乙醇胺鹽，所述離子液體(II)是具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或 三異丙醇胺鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)的具有2 5個(gè) 碳原子的脂肪酸選自由羥基乙酸、甲氧基乙酸和乙酰丙酸構(gòu)成的組。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)的具有2 5個(gè) 碳原子的脂肪酸是乙酰丙酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求5 7的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)是 具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有2 5個(gè) 碳原子的脂肪酸是乙酰丙酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)和所述離子 液體(II)的重量比為2 1 1 10的范圍。
11.根據(jù)權(quán)利要求5 7的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II) 是具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有6 13個(gè)碳原子的脂肪酸是癸酸。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)和所述離 子液體(II)的重量比為40 1 2 1的范圍。
14.根據(jù)權(quán)利要求5 7的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II) 是具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(II)的具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸是異硬脂酸。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)和所述離 子液體(II)的重量比為1 1 1 50的范圍。
17.根據(jù)權(quán)利要求8的非水性外用制劑組合物，其中進(jìn)一步含有離子液體(Ila)，所述 離子液體(IIa)是具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(IIa)的具有14 20個(gè)碳原子的脂肪酸是異硬脂酸。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或18的非水性外用制劑組合物，其中所述離子液體(I)和所述離 子液體(II)及(IIa)的重量比為1 1 1 50的范圍。
20.根據(jù)權(quán)利要求1 19的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌 的濃度是0. 0001 lw/w%。
21.根據(jù)權(quán)利要求1 19的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌 的濃度是0. 0001 0. 2w/w%。
22.根據(jù)權(quán)利要求1 21的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中以所述轉(zhuǎn)錄因子誘 餌的濃度的3 3000倍的濃度含有作為具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三 乙醇胺鹽的離子液體。
23.根據(jù)權(quán)利要求1 21的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中以所述轉(zhuǎn)錄因子誘 餌的濃度的3 1000倍的濃度含有作為具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三 乙醇胺鹽的離子液體。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的非水性外用制劑組合物，其中含有多種脂肪酸系離子液體 的混合離子液體，所述混合離子液體的濃度是0. 008 30W/W%。
25.根據(jù)權(quán)利要求1 M的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中添加了有機(jī)溶劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的非水性外用制劑組合物，其中所述有機(jī)溶劑是選自由癸二酸二 乙酯、十四烷酸異丙酯和碳酸丙烯酯構(gòu)成的組的一種或更多種。
27.根據(jù)權(quán)利要求1 沈的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中添加了螯合劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的非水性外用制劑組合物，其中所述螯合劑是依地酸二鈉鹽。
29.根據(jù)權(quán)利要求1 觀的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述組合物為添加 有軟膏基質(zhì)的軟膏劑的形式。
30.根據(jù)權(quán)利要求四的非水性外用制劑組合物，其中所述軟膏基質(zhì)是膠態(tài)烴或白凡士林。
31.根據(jù)權(quán)利要求1 30的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子選自 由 NF- κ B、E2F、GATA-3、STAT-1、STAT-6、Ets 禾口 AP-I 構(gòu)成的組。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 GGRHTYYHC (其中R代表A或G，Y代表C或T，H代表A、C或T)的NF- κ B誘餌。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的非水性外用制劑組合物，其中所述NF-KB誘餌包含序列 GGATTTCCC 或 GGACTTTCC。
34.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 TTTSSCGS (其中S代表G或C)的E2F誘餌。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的非水性外用制劑組合物，其中所述E2F誘餌包含序列 TTTCCCGC。
36.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 WGATAR(其中W代表A或T，R代表A或G)的GATA-3誘餌。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的非水性外用制劑組合物，其中所述GATA-3誘餌包含序列 AGATAG0
38.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 TTCNNNGAA (其中 N 代表 A、G、T 或 C)的 STAT-1 誘餌。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的非水性外用制劑組合物，其中所述STAT-I誘餌包含序列 TTCCGGGAA。
40.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 TTCNNNNGAA (其中 N 代表 A、G、T 或 C)的 STAT-6 誘餌。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的非水性外用制劑組合物，其中所述STAT-6誘餌包含序列 TTCCCAAGAA。
42.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 MGGAW(其中M代表A或C，W代表A或T)的Ets誘餌。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的非水性外用制劑組合物，其中所述Ets誘餌包含序列CGGAA。
44.根據(jù)權(quán)利要求31的非水性外用制劑組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄因子誘餌是包含序列 TGASTMA (其中S代表G或C，M代表A或C)的AP-I誘餌。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的非水性外用制劑組合物，其中所述AP-I誘餌包含序列 TGAGTCA。
46.抑制轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的方法，所述轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合至根據(jù)權(quán)利要求1 45 的任一項(xiàng)的非水性外用制劑組合物中含有的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，該方法包括向需要抑制所述基 因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的哺乳動(dòng)物經(jīng)皮給予所述非水性外用制劑組合物。
47.轉(zhuǎn)錄因子誘餌和獲自具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸和具有4 12個(gè)碳原子的有 機(jī)胺化合物的脂肪酸系離子液體用于制造非水性外用制劑組合物的用途。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的用途，其中所述混合離子液體是離子液體(I)和離子液體(II) 的混合物，所述離子液體(I)是具有2 5個(gè)碳原子的脂肪酸的二乙醇胺鹽或三乙醇胺鹽， 所述離子液體(II)是具有2 20個(gè)碳原子的脂肪酸的二異丙醇胺鹽或三異丙醇胺鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了良好皮膚透過性的轉(zhuǎn)錄因子誘餌的外用制劑組合物，所述組合物包含溶于脂肪酸系離子液體中的轉(zhuǎn)錄因子誘餌，所述脂肪酸系離子液體獲自具有2～20個(gè)碳原子的脂肪酸和具有4～12個(gè)碳原子的有機(jī)胺化合物。
文檔編號(hào)A61P19/02GK102046208SQ200980119328
公開日2011年5月4日 申請日期2009年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月28日
發(fā)明者中野達(dá)朗, 坂口誠, 小林勝則, 濱本英利, 筱原一也 申請人:安琪士摩奇株式會(huì)社, 株式會(huì)社醫(yī)藥處方