專利名稱：抗-igf-1r抗體和其它化合物的治療聯(lián)合的制作方法
抗-1GF-1R抗體和其它化合物的治療聯(lián)合
背景技術(shù)：
聯(lián)合治療化合物(諸如，例如生物和小分子)在癌癥治療中已日益成為人們關(guān)注 的方案。參見例如Bianco，R.，et al.，” Combination of biological therapies in non-small cell lung cancer, “ Ann Oncol. ，17， Suppl 2 :ii52-54(2006)；Rodriguez,J. , et al. ,“ Combining chemotherapy and targeted therapies in metastatic colorectal cancer，” World J Gastroenterol. ,13(44) :5867-76 (2007)；Gligorov, J.，et al.， “ Novel therapeutic strategies combining
antihormonal and biological targeted on clinical trials and perspectives, 115-28(2007)；
therapies in breast cancer :focus “Crit Rev Oncol Hematol. ,64(2)Bracci， L ， et al. ， ” IFN-alpha and novel strategies of combination therapy for cancer, “ Ann NY Acad Sci. ，1112 :256-268(2007)；Ho，C.，et al.， “ Dual inhibition :combining epidermal growth factor-targeted therapies in non-small-cell lung cancer, “ Clin Lung Cancer, 8(7) :420-4(2007)；Leonetti, C. ， et al. ， ' Targeting different signaling pathways with antisense oligonucleotides combination for cancer therapy, “ Curr Pharm Des.， 13(5) :463-70(2007)；和Cascone，Τ·，et al. , “ Combined targeted therapies in non-small cell lung cancer :a winner strategy ？ ， 〃 Curr Opin Oncol. ,19 (2)(2007)。本發(fā)明涉及在過度增殖病癥(例如癌癥)的治療中、特別是在靶向由胰島素樣生 長因子-1受體(IGF-IR)介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及另外的細(xì)胞生長、細(xì)胞增殖和細(xì)胞存活 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的聯(lián)合治療方案。一系列流行病學(xué)研究顯示高于正常循環(huán)水平的IGF-I與多種常見癌癥風(fēng)險 的增加有關(guān)，所述癌癥包括乳腺癌(Hankinson et al, Lancet 1998. 351 :1393-6), 前列腺癌(Chan et al, Science. 1998. 279 :563-6)、月市癌(Yu et al, J. Natl. Cancer Inst. 1999. 91 :151-6)和結(jié)腸直腸癌(Ma et al, J. Natl. Cancer Inst. 1999. 91 :620-5)。 IGF-2循環(huán)水平的上升同樣顯示與子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險上升有關(guān)(Jonathan et al, Cancer Biomarker & Prevention. 2004. 13 :748-52)。與此相反，據(jù)觀察 IGF 結(jié)合蛋白、IGF-BP3 之一和癌癥風(fēng)險的水平上升呈負(fù)相關(guān)。另外，還在癌癥患者中發(fā)現(xiàn)了 IGF的水平上升 (Peyrat et al Eur.J.Cancer. 1993. 3511393-6 ；Jonathan et al, Cancer Biomarker & Prevention. 2004. 13 :748-52)。IGF系統(tǒng)在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)化中扮演了重要的角色(Jones et al, Endocrinology Rev. 1995. 16 :3-34)。IGF系統(tǒng)包含了兩種不相關(guān)的受體_胰島素樣生長 因子受體KIGF-IR ;CD221)和胰島素樣生長因子受體2 (IGF-2R ；⑶222)；兩種配體-胰島素樣生長因子KIGF-I和IGF-2)；多種IGF結(jié)合蛋白(IGFBP-1至IGFBP-6)。此外，多 種IGFBP蛋白酶(例如，胱天蛋白酶、金屬蛋白酶、前列腺-特異性抗原)水解IGF結(jié)合的 IGFBP以釋放游離IGF，后者隨后與IGF-IR和IGF-2R相互作用。IGF系統(tǒng)還可緊密結(jié)合胰島 素和胰島素受體(InsR) (Moschos et al. Oncology 2002. 63 :317-32 ；Baserga et al. ,Int J. Cancer. 2003. 107 :873-77 ；Pollak et al. ,Nature Reviews Cancer. 2004. 4 :505-516)。在癌癥細(xì)胞中，受體酪氨酸激酶(TK)在胞外腫瘤微環(huán)境和控制多種細(xì)胞功能(例 如，細(xì)胞分裂周期、存活、凋亡、基因表達(dá)、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、細(xì)胞附著以及細(xì)胞遷移)的胞內(nèi) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的聯(lián)系中扮演重要的角色。由于控制細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制已經(jīng)得到了較好地 理解，因而可通過靶向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件中的配體結(jié)合、受體表達(dá)/循環(huán)、受體激活和所涉及蛋 白的水平來開發(fā)破毀一種或多種該類細(xì)胞功能的治療策略(Hanahan and Weinberg, Cell 2000. 100 :57-70)。I型胰島素樣生長因子受體(IGF-1R，⑶221)屬于受體酪氨酸激酶(RTK)家族 (Ullrich et al.，Cell. 1990. ,61 :203-12)。IGF-1R 被廣泛表達(dá)，其配體 IGF-I 和 IGF-2 在出生前和出生后發(fā)育、生長激素響應(yīng)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、存活中具有重要作用，并與擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移 腫瘤表型的獲得具有關(guān)聯(lián)(Baserga, Cell. 1994. 79 :927-30 ；Baserga et al.，Exp. Cell Res. 1999. 253 :1-6, Baserga et al.，Int J. Cancer. 2003. 107 :873-77).。免疫組化研究 顯示一系列人腫瘤表達(dá)更高水平的IGF-1R。IGF-IR的分子構(gòu)造包含兩個胞外α亞基(130_135kD)和兩個包含胞漿催化激 酶區(qū)的跨膜β亞基(95kD)。與胰島素受體(InsR)相同，IGF-IR由于具有共價二聚體 (α 2 β 2)結(jié)構(gòu)而區(qū)別于其它RTK家族成員。IGF-IR在結(jié)構(gòu)上與^isR過度相關(guān)(Pierre De Meyts and Whittaker, Nature Reviews Drug Discovery. 2002,1 :769_83) 。
酶區(qū)與hsR具有84%的序列一致性，而在近膜區(qū)和N-末端區(qū)分別占有61 %和44%的序列 一致性(Ulrich et al.，EMBO J.，1986,5 :2503-12 ；Blakesley et al.，Cytokine Growth Factor Rev.，1996. 7 :153-56)。IGF-I和IGF-2是IGF-1R的兩個激活配體。IGF-1和IGF-2與α鏈的結(jié)合誘發(fā) 構(gòu)型變化，從而導(dǎo)致在特定酪氨酸殘基的各β -鏈發(fā)生自身磷酸化，將受體由未磷酸化狀 態(tài)轉(zhuǎn)化為激活狀態(tài)。激酶區(qū)活化環(huán)中三個酪氨酸殘基(在1131、1135和1136的Tyr殘基) 的活化導(dǎo)致增強(qiáng)催化活性，該活性引發(fā)如IRS-I和She銜接蛋白等底物的對接和磷酸化。 這些底物的活化導(dǎo)致了存活(PI3K、AKT、TOR、S6)和/或增殖(絲裂原活化的蛋白激酶， p42/p44)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)中涉及的另外蛋白的磷酸化(Pollak et al. , Nature Reviews Cancer. 2004. 4 :505-516 ；Baserga et al.，Biochem Biophys Act. 1997. 1332 :F105_F126 ； Baserga et al, Int.J. Cancer. 2003. 107 :873-77)。盡管在IGF-IR和hsR之間具有過度的同源性，但是有證據(jù)顯示這兩種受體具有 截然不同的生物作用JnsR是葡萄糖運(yùn)輸和糖原和脂肪生物合成等生理功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié) 劑，而IGF-IR是細(xì)胞生長和分化的有效調(diào)節(jié)劑。與hsR不同，IGF-IR在組織中普遍表達(dá)并 對組織生長產(chǎn)生作用，它受到調(diào)節(jié)IGF-I的生長激素(GH)的控制。盡管據(jù)顯示IGF-IR活 化促進(jìn)正常細(xì)胞生長，但是實(shí)驗(yàn)證據(jù)提示IGF-IR并非絕對必需(Baserga et al,Exp Cell Res. 1999. 253 :1_6 ；Baserga et al,Int.J.Cancer. 2003. 107 :873-77)。IGF在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡中具有至關(guān)重要的作用。據(jù)顯示對IGF-IR介導(dǎo)
7的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制降低腫瘤生長率，增加凋亡，提高化療和其它分子靶向治療對腫瘤的殺 傷(綜述參見 Pollak et al. , Nature Reviews Cancer. 2004. 4 :505-516 ；Zhang et al., Breast Cancer Res. 2000. 2 :170-75 ；Chakravarti et al,Cancer Res. 2002. 62 :200-07)。抑制腫瘤中IGF-IR功能的實(shí)驗(yàn)方案取得了鼓舞人心但也頗為有限的成就，且它 們在治療癌癥中的作用尚待臨床檢驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)方案包括針對IGF-IR的抗體(Kull et al.，J.Biol. Chem. 1983，258 :6561-66 ；Kalebic et al.，Cancer Res. 1994. 54 :5531-4)， 針對 IGF-I 或 IGF-2 的中和抗體(Fang et al, Mol. Cancer Therapy. 2006. 5 :114-20 ； Miyamoto et al, Clin. Cancer Res. 2005，11 :3494-502)，小分子酪氨酸激酶抑制劑 (Garcia-Escheverria et al, Cancer Cell. 2004. 5 :231-9 ；Scotlandi et al, Cancer Res. 2005. 65 :3868-76)，反義寡聚核苷酸(Shapiro et al, J. Clin. Invest. 1994. 94 1235-42 ；Wraight et al. Nature Biotech. 2000. 18 :521-26 ；Scotlandi et al, Cancer Gene Therapy. 2002. 9 :296-07)，IGF-IR 的顯性-陰性突變體(Prager et al,Proc. Natl. Acad. Sci. 1994,91:2181-85 ；Kalebic et al.，Int. J. Cancer 1998. 76:223-7 ；Scotlandi et al. Jnt. J. Cancer. 2002 :101 :11-6)，IGF配體類似物(Pietrzkowski et al,Mol. Cell. Biol. 1992. 12 :3883-89),重組 IGF 結(jié)合蛋白(Yee et al. Cell growth Differ. 1994. 5 73-77 ；Van Den Berg et al, Eur. J. Cancer. 1997,33 :1108-1113 Jerome et al AACR 2004,Abstract # 5334)，GH釋放激素拮抗劑GHRH(&ereday et al,Cancer Res. 2003. 63 7913-19 ；Letsh et al,Proc Natl. Acad. Sci. USA. 2003. 100:1250-55)以及 GII (Kopchick et al，2002. Endocr. Rev. 23，623-46)?？贵w抑制IGF-IR功能的能力首先通過靶向IGF-IR的α亞基中未知表位的小鼠 單克隆抗體(a IR3)得到證實(shí)(Kull et al.，J. Biol. Chem. 1983,258 :6561-6)。后續(xù)開 發(fā)的針對IGF-IR的α亞基的其它抗體在不同的實(shí)驗(yàn)癌癥模型中顯示了對IGF-IR功能不 同程度的抑制(Maloney et al. Cancer Res. 2003. 63 :5073-83 ；Burtrum et al, Cancer Res. 2003. 63 :8912-21 ；Sachdev D et al, Cancer Res. 2003. 63,627-35 ；Cohen et al, Clin.Cancer Res. 2005. 11 :3065-74 ；Goetsch et al, Intl. J. Cancer. 2005. 113 :316-28. Lu et al, J. Biol. Chem. 2004. 280 :19665-72)。在癌癥細(xì)胞中，除了促生存和增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，IGF-IR的活化還顯示參與運(yùn)動和 侵入(Ress et al.，Oncogene 2001. 20 :490-00, Nolan et al, Int. J. Cancer. 1997. 72 828-34，Stracke et al, J. Biol.Chem. 1989. 264 :21544-49 Jackson et al, Oncogene, 2001. 20 :7318-25)。據(jù)顯示腫瘤細(xì)胞生產(chǎn)IGF系統(tǒng)的一種或多種成分(IGF-1、IGF-2、IGF-1R、IGF-2R 和IGF-BP)。盡管體外研究表明腫瘤可以生產(chǎn)IGF-I或IGF-2，但是翻譯研究表明IGF-2在 腫瘤中為更加相關(guān)的更普遍表達(dá)的IGF。這是由于腫瘤中沉默IGF-2等位基因因?yàn)楸磉z傳 變異而印跡丟失((LOI)時導(dǎo)致了 IGF-2基因的雙等位基因表達(dá)(Fienberg et al.，Nat. Rev.Cancer 2004. 4 :143-53 ；Giovannucci et al, Horm. Metab. Res. 2003. 35:694-04 ；De Souza et al, FASEB J. et al，1997. 11 :60-7)。這反過來向癌癥細(xì)胞和支持腫瘤生長的微 環(huán)境提供了更多的IGF-2。IGF-IR敏感腫瘤接受來自循環(huán)的IGF-1 (肝生成)和來自腫瘤的IGF-2的受體活 化信號，因此目標(biāo)為同時破壞IGF-I和IGF-2介導(dǎo)的生物活性的方法應(yīng)提供更好的抗腫瘤應(yīng)答。因此，同時有效阻斷IGF-I和IGF-2介導(dǎo)的生物功能的抗-IGF-IR抗體方法可相對 其它未能有效阻斷腫瘤微環(huán)境中IGF-I和IGF-2介導(dǎo)的IGF-IR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物功能的方 法提供更好的療效。對于安全性，IGF-IR有著普遍表達(dá)，因此靶向IGF-1R的抗體對于避免由普通組織 中ADCC和CDC活性產(chǎn)生的毒性應(yīng)具有極小的或不具有效應(yīng)功能。開發(fā)該類抗體的一種可 能是包含不介導(dǎo)ADCC或⑶C功能的人gamma 4Fc區(qū)的非糖基化形式。另外，下列特性也值得注意=IGF-IR與致癌基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)。IGF/ IGF-IR活化介導(dǎo)癌癥細(xì)胞中的促分裂和促生存信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。IGF-IR活化還促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動和 轉(zhuǎn)移。IGF-IR在多種癌癥中過量表達(dá)。具有高于正常循環(huán)IGF水平的個體患上癌癥的風(fēng)險 增加。在許多癌癥患者中發(fā)現(xiàn)了增加的IGFl和2的血漿水平。人腫瘤產(chǎn)生的IGF-2作為 自分泌生長因子。以單一制劑和聯(lián)合化療和生物制劑均證實(shí)了腫瘤生長的抑制。在本領(lǐng)域仍存在對用于治療各種腫瘤性疾病(包括癌癥及其轉(zhuǎn)移瘤)的具有不同 或改善的結(jié)合、功效和安全特征的IGF-IR抗體的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及聯(lián)合治療，并且特別是涉及通過聯(lián)合使用兩種或多種治療劑來治療增 殖病癥(例如癌癥)。特別地，本發(fā)明涉及聯(lián)合抗-IGF-IR抗體和其它抗癌治療劑以減輕 或消除細(xì)胞生長和增殖、致癌作用、腫瘤發(fā)生和/或轉(zhuǎn)移性病灶。當(dāng)和使用單一制劑治療的 效果比較時，本發(fā)明的聯(lián)合治療可在治療癌癥和減輕細(xì)胞過度增殖、致癌作用、腫瘤發(fā)生和 /或轉(zhuǎn)移性病灶中具有協(xié)同效果。本發(fā)明部分基于IGF系統(tǒng)在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)化中的重要作用。特別 地，I型胰島素樣生長因子受體((IGF-IR)及其配體(IGF-1和IGF-2)在出生前和出生后 發(fā)育、生長激素響應(yīng)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、存活中具有重要作用，并與擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移腫瘤表型的獲得具 有關(guān)聯(lián)。本發(fā)明一般涉及IGF-IR抗體、其抗原結(jié)合片段或衍生物。某些特定的IGF-IR抗 體和抗原結(jié)合片段抑制IGF-IR功能或阻斷IGF-I和IGF-2介導(dǎo)的IGF-IR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物 功能。此外，本發(fā)明一般涉及各種腫瘤性疾病(包括癌癥和轉(zhuǎn)移瘤)、以及各種與IGF-IR信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的過度增殖疾病、病癥或損傷的治療方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋與選自由M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、 M12-E01和M12-G04構(gòu)成的組的參考單克隆Fab抗體片段或是與選自由P2A7. 3E11、 20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考 單克隆抗體特異性結(jié)合相同IGF-IR表位的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-1RIGF-1R的分離的抗體或其 抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其片段競爭性地抑制選自由M13-C06、M14-G11、M14-C03、 Μ14-Β01、Μ12-Ε01和M12-G04構(gòu)成的組的參考單克隆Fab抗體片段或是選自由Ρ2Α7. 3Ε11、 20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考 單克隆抗體結(jié)合IGF-1R。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其抗原結(jié)合 片段，其中該抗體或其片段包含與選自由M13-C06、M14-G11、M14-C03、Μ14-Β01、Μ12-Ε01 和M12-G04構(gòu)成的組的單克隆Fab抗體片段或是選自由Ρ2Α7. 3E1U20C8. 3Β8、Ρ1Α2. 2Β11、
920D8. 24B1U P1E2. 3B12和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的單克隆抗體相同的抗原結(jié)合域。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的重鏈可變區(qū)(VH)包含與選自由SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :48,SEQ ID NO :53,SEQ ID NO :58和SEQ ID NO :63構(gòu)成的組的參考氨基酸序列至少具
有90% —致性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的輕鏈可變區(qū)(VL)包含與選自由SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO 78, SEQ ID N0:83、SEQ ID NO 88, SEQ ID N0:93、SEQ ID NO 98, SEQ ID N0:103、SEQ ID NO :108, SEQ ID NO :113和SEQ ID NO :118構(gòu)成的組的參考氨基酸序列至少具有90%
一致性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含除了 20個或更少保守氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :9,SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 43,SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 53、SEQ ID N0:58 禾口 SEQ ID NO :63 構(gòu)成的組的參考
氨基酸序列一致的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含除了 20個或更少保守氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO 68、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :93、SEQ ID NO :98、 SEQ ID NO :103, SEQ ID NO :108、SEQ ID NO :113 和 SEQ ID NO :118 構(gòu)成的組的參考氨基
酸序列一致的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的 VH 包含選自由 SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :53, SEQ ID NO :58和SEQ ID NO :63構(gòu)成的組的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的 VL 包含選自由 SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO 83,SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 103,SEQ ID NO 108,SEQ ID NO :113和SEQ ID NO :118構(gòu)成的組的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH和VL分別包含與選自由SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 68 ；SEQ ID N0: 8 和 SEQ ID NO 73 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO 20 和 SEQ ID NO 83 ；SEQ ID NO :26 和 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO :32 和 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO :38 和 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO 43 和 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO 48 和 SEQ ID NO :108 ；SEQ ID NO 53 和 SEQ ID NO 103 ；SEQ ID NO 58 和 SEQ ID NO :113 ；禾口 SEQ ID NO 63 禾口 118 構(gòu)成的組的參 考氨基酸序列至少具有90% —致性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH和VL分別包含除了各有20個或更少保守氨基酸替換外與選自由SEQID NO 4 和 SEQ ID NO 68 ；SEQ ID NO 8 和 SEQ ID NO 73 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO :20和 SEQ ID NO 83 ；SEQ ID NO :26和 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO :32和 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO :38 禾和 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO :43 和 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO 48 和 SEQ ID NO 108 ；SEQ ID N0:53 禾和 SEQ ID NO 103 ；SEQ ID N0:58 禾和 SEQ ID NO :113 ； 和SEQ ID NO 63和118構(gòu)成的組的參考氨基酸序列一致的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH和VL分別包含選自由SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 68 ；SEQ ID NO 8 和 SEQ ID NO 73 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO 20 和 SEQ ID NO 83 ；SEQ ID NO :26 和 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO :32 和 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO :38 和 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO 43 和 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO 48 和 SEQ ID NO :108 ；SEQ ID NO 53 和 SEQ ID NO 103 ；SEQ ID NO 58 和 SEQ ID NO :113 ；和 SEQ ID NO 63 和 118 構(gòu)成的組的氨 基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含除了兩個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID N0:5、SEQ ID NO :10, SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:21、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :44,SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :59 和 SEQ ID NO :64 構(gòu)成的組的參考 VH-⑶Rl氨基酸序列一致的Kabat重鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)_1 (VH-⑶Rl)氨基酸序列。在另外的 實(shí)施方案中，VH-CDRl 氨基酸序列選自由 SEQ ID N0:5、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :49、 SEQ ID NO :54, SEQ ID NO :59 和 SEQ ID NO :64 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含除了四個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO 45,SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 55、SEQ ID N0:60 和 SEQ ID NO :65 構(gòu)成的組的參考 VH-⑶R2氨基酸序列一致的Kabat重鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)-2 (VH-OTM)氨基酸序列。在另外的 實(shí)施方案中，VH-CDR2 氨基酸序列選自由 SEQ ID N0:6、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :50、 SEQ ID NO :55, SEQ ID NO :60 和 SEQ ID NO :65 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含除了四個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :12,SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 35、SEQ ID N0:41、SEQ ID NO :46,SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :61 和 SEQ ID NO :66 構(gòu)成的組的參考 VH-⑶R3氨基酸序列一致的Kabat重鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)-3 (VH-⑶舊)氨基酸序列。在另外的 實(shí)施方案中，VH-CDR3 氨基酸序列選自由 SEQ ID N0:7、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO :23, SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :51、 SEQ ID NO :56, SEQ ID NO :61 和 SEQ ID NO :66 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含除了四個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO 69, SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :99、SEQID NO :104, SEQ ID N0:109、SEQ ID NO :114 禾口 SEQ ID NO :119 構(gòu)成的組的參考 VL-CDR1 氨基酸序列一致的Kabat輕鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)-I(VL-CDRl)氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案 中，VL-CDRl 氨基酸序列選自由 SEQ ID NO 69, SEQ ID NO 74, SEQ ID NO 79, SEQ ID NO: 84,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 104,SEQ ID NO 109,SEQ ID NO :114 禾Π SEQ ID NO :119 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含除了兩個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO 70, SEQ ID NO 75,SEQ ID NO 80,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO :105, SEQ ID N0:110、SEQ ID NO :115 禾口 SEQ ID NO : 120 構(gòu)成的組的參考 VL-CDR2 氨基酸序列一致的Kabat輕鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)-2 (VL-CDM)氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案 中，VL-CDR2 氨基酸序列選自由 SEQ ID NO 70, SEQ ID NO 75, SEQ ID NO 80, SEQ ID NO:
85、SEQID NO :90、SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :100、SEQ ID NO :105、SEQ ID NO :110、SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO :120 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含除了四個或更少氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO 71, SEQ ID NO 76, SEQ ID N0:81、SEQ ID NO 86, SEQ ID N0:91、SEQ ID NO 96, SEQ ID N0:101、SEQ ID NO :106, SEQ ID N0:111、SEQ ID NO :116 禾口 SEQ ID NO : 121 構(gòu)成的組的參考 VL-CDR3 氨基酸序列一致的Kabat輕鏈決定簇互補(bǔ)區(qū)-3(VL-CDR;3)氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案 中，VL-CDR3 氨基酸序列選自由 SEQ ID N0:71、SEQ ID NO 76, SEQ ID N0:81、SEQ ID NO:
86、SEQID NO :91、SEQ ID NO :96、SEQ ID NO :101, SEQ ID NO :106, SEQ ID NO : 111、SEQ ID NO 116 和 SEQ ID NO :121 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含除了在至少一個所述VH-CDR中一個、兩個、三個或四個氨基酸 替換外選自由 SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO :10、11 和 12 ;SEQ ID NO: 15、16 和 17 ；SEQ ID NO :21、22和23 ;SEQ ID NO :27、28和 29 ;SEQ ID NO :33、34和 35 ;SEQ ID N0:39、40和 41;· SEQ ID NO :44、45 和 46 ;SEQ ID NO :49、50 和 51 ;SEQ ID NO :54、55 和 56 ;SEQ ID NO: 59,60 和 61 ；以及 SEQ ID NO :64、65 和 66 構(gòu)成的組的 VH-CDRl、VH-CDR2 和 VH-CDR3 氨基 酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VH包含選自由SEQ ID N0:5、6和7;SEQ ID NO :10、11和12 ;SEQ ID NO: 15、16 和 17;SEQ ID NO :21、22 和 23 ;SEQ ID NO :27、28 禾口 29 ;SEQ ID NO :33、34 和 35 ;SEQ ID NO :39,40 和 41 ；· SEQ ID NO :44、45和 46；SEQ ID NO :49、50 和 51 ；SEQ ID NO :54、55 ^P 56 ；SEQ ID NO :59、60 和 61 ；以及 SEQ ID NO :64、65 和 66 構(gòu)成的組的 VH-CDR1、VH_CDR2 和VH-⑶R3氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含除了在至少一個所述VL-CDR中一個、兩個、三個或四個氨基酸替 換外選自由 SEQ ID NO 69,70 和 71 ；SEQ ID NO :74、75 和 76 ；SEQ ID NO :79、80 和 81 ；SEQ ID NO :84、85和86 ;SEQ ID NO :89、90和91 ;SEQID NO :94、95和96 ;SEQ ID N0:99、100和 101 ；SEQ ID NO :104,105 和 106 ；SEQ ID NO :109,110 和 111 ；SEQ ID NO :114,115 和 116 ；以及SEQ ID NO 119、120和121構(gòu)成的組的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗體或其片段，其中 該抗體或其片段的VL包含選自由SEQ ID NO :69、70和71 ;SEQ ID NO :74、75和76 ;SEQ ID NO :79、80 和 81 ;SEQ ID NO :84、85 和 86 ;SEQ ID NO :89、90 和 91 ;SEQ ID N0:94、95 禾口 96 ；SEQ ID NO :99、100和 101 ;SEQ ID NO 104、105和 106 ;SEQ ID NO :109、110和 111 ;SEQ ID NO :114、115 和 116 ；以及 SEQ ID NO :119、120 和 121 構(gòu)成的組的 VL-CDR1、VL-CDR2 禾口 VL-⑶R3氨基酸序列。在上述抗體或其片段的多種實(shí)施方案中，VH框架區(qū)和/或VL框架區(qū)除了五個或 更少的氨基酸替換外為人源。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段結(jié)合線性表位或非線性構(gòu)型表位。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段為多價體，并包含至少兩條重鏈和至少兩 條輕鏈。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段是多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，上述 抗體或其片段是雙特異性的。在上述抗體或其片段的多種實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域?yàn)橥耆嗽?。在?外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域來自選自由M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、 M12-E01和M12-G04構(gòu)成的組的單克隆Fab抗體片段。在上述抗體或其片段的多種實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域是鼠源。在另外的實(shí) 施方案中，重鏈和輕鏈可變域來自由選自由P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B11、 P1E2. 3B12和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的單克隆抗體。在多種實(shí)施方案中，上述抗體或其片段是人源化、嵌合、靈長源化、或完全人源的。 在某些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段是Fab片段、Fab'片段、F (ab) 2片段或Fv片段。在 某些實(shí)施方案中，上述抗體是單鏈抗體。在某些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段包含選自由人kappa恒定區(qū)和人lambda恒 定區(qū)構(gòu)成的組的輕鏈恒定區(qū)。在某些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段包含重鏈恒定區(qū)或其片段。在另外的實(shí)施 方案中，重鏈恒定區(qū)或其片段是人IgG4。在某些其它實(shí)施方案中，該IgG4被突變以去除糖 基化位點(diǎn)。在另外的實(shí)施方案中，該IgG4突變包含Kabat編號系統(tǒng)的SMlP和T318A。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段通過以解離常數(shù)(Kd)低于對所述參考單克 隆抗體的Kd表征的親和力特異性結(jié)合IGF-IR多肽或其片段或IGF-Rl變體多肽。在另外的 實(shí)施方案中，該解離常數(shù)(Kd)不大于 ^d(T2M、10-2M、5xl(^M、10-3M、5xl0-4M、10-4M、5xl0-5M、
1(Γ"Μ、5χ10 Μ、1(Γ12Μ、5Χ10 Μ、1(Γ"Μ、5Χ1(ΓμΜ、1(ΓμΜ、5Χ1(Γ15Μ、或 IO-15M0在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段相對于鼠IGF-IR多肽或其片段或者非人 靈長動物IGF-IR多肽或其片段優(yōu)先結(jié)合人IGF-IR多肽或其片段。在某些其它實(shí)施方案中，上述抗體或其片段結(jié)合人IGF-IR多肽或其片段，并且還 結(jié)合非-人靈長動物IGF-IR多肽或其片段。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段結(jié)合在細(xì)胞表面上表達(dá)的IGF-1R。在另外 的實(shí)施方案中，細(xì)胞是惡性腫瘤細(xì)胞、腫瘤性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移細(xì)胞。
在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段阻斷胰島素生長因子與IGF-IR的結(jié)合。 在另外的實(shí)施方案中，胰島素生長因子是胰島素生長因子-I(IGF-I)或胰島素生長因 子-2(IGF-2)。在某些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段同時阻斷IGF-I和IGF-2與IGF-IR 的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段抑制IGF-IR-介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、IGF-I或 IGF-2-介導(dǎo)的IGF-IR磷酸化、腫瘤細(xì)胞生長或IGF-IR內(nèi)在化。在另外的實(shí)施方案中，上述抗體或其片段還包含與其融合的外源多肽。在一些實(shí)施方案中，上述抗體或其片段結(jié)合至選自由細(xì)胞毒素劑、治療劑、細(xì)胞抑 制劑、生物毒素、前藥、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑、藥劑、淋巴因子、外源抗體 或其片段、可檢測的標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)構(gòu)成的組的制劑、以及兩種或多種任意所述制劑 的組合，或聯(lián)合使用。在另外的實(shí)施方案中，該細(xì)胞毒素劑(和IGF-IR抗體結(jié)合或聯(lián)合使 用)選自由放射性核、生物毒素、酶活毒素、細(xì)胞抑制或細(xì)胞毒性治療劑、前藥、免疫活性配 體、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑構(gòu)成的組、或是兩種或多種任意所述細(xì)胞毒素劑的組合。在另外的實(shí)施 方案中，該可檢測的標(biāo)記選自由酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射活性標(biāo)記 構(gòu)成的組、或是兩種或多種任意所述可檢測的標(biāo)記的組合。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含上述抗體或其片段和載體的組合物。本發(fā)明的某些實(shí)施方案涵蓋包含編碼抗體VH多肽的核酸的分離的多聚核苷酸， 其中VH多肽的氨基酸序列與選自由SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO 53,SEQ ID NO 58和SEQ ID NO :63構(gòu)成的組的參考氨基酸序列至少具有90%—致 性；并且包含該VH多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另外的實(shí)施方案 中，VH 多肽的氨基酸序列選自由 SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO 58 和 SEQ ID NO 63 構(gòu)成的組。在某些實(shí)施方案中，編碼該VH多肽的核苷酸序列在不改變該VH多肽的氨基酸序 列的情況下進(jìn)行優(yōu)化以提高表達(dá)。在另外的實(shí)施方案中，該優(yōu)化包括鑒別并去除剪接供體 和剪接受體位點(diǎn)和/或用于表達(dá)該多聚核苷酸的細(xì)胞的密碼子的優(yōu)化。在另外的實(shí)施方案 中，該核酸包含選自由 SEQ ID NO 3, SEQ ID N0:8、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO :19, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37, SEQ ID NO :42, SEQ ID NO :47, SEQ ID NO :52, SEQ ID NO :57 禾口 SEQ ID NO :62 構(gòu)成的組的核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多聚核苷 酸，其中該VL多肽的氨基酸序列與選自由SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :78、 SEQ ID NO 83,SEQ ID NO 88,SEQ ID NO 93,SEQ ID NO 98,SEQ ID NO 103,SEQ ID N0: 108,SEQ ID NO :113和SEQ ID NO :118構(gòu)成的組的參考氨基酸序列至少具有90% —致性； 并且其中包含該VL多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另外的實(shí)施方案 中，該 VL 多肽的氨基酸序列選自由 SEQ ID NO 68, SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 83,SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO :103、SEQ ID NO :108、SEQ ID NO 113 和 SEQ ID NO :118 構(gòu)成的組。
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在某些實(shí)施方案中，編碼該VL多肽的核苷酸序列在不改變所述VL多肽的氨基酸 序列的情況下進(jìn)行優(yōu)化以提高表達(dá)。在另外的實(shí)施方案中，該優(yōu)化包括鑒別并去除剪接供 體和剪接受體位點(diǎn)和/或用于表達(dá)該多聚核苷酸的細(xì)胞的密碼子的優(yōu)化。在另外的實(shí)施方 案中，該核酸包含選自由 SEQ ID NO 67,SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :87,SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :97、SEQ ID NO 102,SEQ ID NO :107、SEQ ID NO :112 和SEQ ID NO :117構(gòu)成的組的核苷酸序列。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含編碼抗體VH多肽的核酸的分離的多聚 核苷酸，其中該VH多肽的氨基酸序列除了 20個或更少的保守氨基酸替換之外與選自由SEQ ID NO 4, SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :26, SEQ ID NO :32, SEQ ID NO :38, SEQ ID NO :43, SEQ ID NO :48, SEQ ID NO :53, SEQ ID NO :58 禾口 SEQ ID NO :63 構(gòu)成的組的參考氨基酸序列一致；并且其中包含所述VH多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特 異性結(jié)合IGF-1R。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多聚核苷 酸，其中該VL多肽的氨基酸序列除了 20個或更少的保守氨基酸替換之外與選自由SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :93、SEQ ID NO :98、SEQ ID NO :103、SEQ ID NO :108、SEQ ID NO :113 和 SEQ ID NO :118 構(gòu)成的組 的參考氨基酸序列一致；并且其中包含所述VL多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合 IGF-IR0在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了兩個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 5,SEQ ID NO 10、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :27, SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO 59和SEQ ID NO :64構(gòu)成的組的參考VH-⑶Rl氨基酸序列一致的VH-⑶Rl氨基酸序 列的編碼核酸；并且其中包含所述VH-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。 在另外的實(shí)施方案中，VH-CDIU氨基酸序列選自由SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 10,SEQ ID N0:
15、SEQID NO :21、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO 59 和 SEQ ID NO 64 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了四個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 6,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 16、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO 60和SEQ ID NO 65構(gòu)成的組的參考VH-⑶R2氨基酸序列一致的VH-⑶R2氨基酸序 列的編碼核酸；并且其中包含所述VH-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。 在另外的實(shí)施方案中，VH-CDR2氨基酸序列選自由SEQ ID NO :6、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO:
16、SEQID NO :22、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :50, SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :60 和 SEQ ID NO :65 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了四個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 7,SEQ ID NO 12、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO 61和SEQ ID NO 66構(gòu)成的組的參考VH-⑶R3氨基酸序列一致的VH-⑶R3氨基酸序 列的編碼核酸；并且其中包含所述VH-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另外的實(shí)施方案中，VH-CDR3氨基酸序列選自由SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 12, SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO 61 和 SEQ ID NO 66 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了四個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 69, SEQ ID NO 74, SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 104,SEQ ID NO 109,SEQ ID NO :114 和SEQ ID NO 119構(gòu)成的組的參考VL-⑶Rl氨基酸序列一致的VL-⑶Rl氨基酸序列的編 碼核酸；并且其中包含所述VL-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另外 的實(shí)施方案中，VL-CDRl氨基酸序列選自由SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 74, SEQ ID NO :79、 SEQ ID NO 84,SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 104,SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO :114 禾口 SEQ ID NO :119 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了兩個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 70, SEQ ID NO 75, SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 85, SEQ ID NO :90、SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :100、SEQ ID NO :105、SEQ ID NO :110、SEQ ID NO 115和SEQ ID NO :120構(gòu)成的組的參考VL-⑶R2氨基酸序列一致的VL-⑶R2氨基酸序列的 編碼核酸；并且其中包含所述VL-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另 外的實(shí)施方案中，VL-CDR2氨基酸序列選自由SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO 80,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO 100,SEQ ID NO 105,SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO :115 和 SEQ ID NO :120 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含除了四個或更少的氨 基酸替換之外與選自由 SEQ ID NO 71, SEQ ID NO 76, SEQ ID N0:81、SEQ ID NO 86, SEQ ID NO :91、SEQ ID NO :96、SEQ ID NO :101、SEQ ID NO :106、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 116和SEQ ID NO :121構(gòu)成的組的參考VL-⑶R3氨基酸序列一致的VL-⑶R3氨基酸序列的 編碼核酸；并且其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另 外的實(shí)施方案中，VL-CDR3氨基酸序列選自由SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO 81,SEQ ID NO 86,SEQ ID NO :9USEQ ID NO 96,SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO 106,SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO :116 和 SEQ ID NO :121 構(gòu)成的組。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋分離的多聚核苷酸，其包含編碼抗體VH多肽的核 酸，其中所述VH多肽包含選自由SEQ ID N0:5、6和7;SEQ ID NO :10、11和12 ;SEQ ID NO: 15、16*17;SEQ ID NO :21、22 和 23 ;SEQ ID NO :27、28 和 29 ;SEQ ID NO :33、34 和 35 ;SEQ ID NO :39、40 和 41 ;SEQ ID NO :44、45 和 46 ;SEQ ID NO :49、50 和 51 ;SEQ ID N0:54、55 禾口 56 ；SEQ ID NO :59、60 和 61 ；以及 SEQ ID NO :64、65 和 66 構(gòu)成的組的 VH-CDR1、VH-CDR2 和VH-CDR3氨基酸序列；并且其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合 IGF-IR0在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多聚核苷 酸，其中所述VL多肽包含選自由SEQ ID NO :69、70和71 ;SEQ ID NO :74、75和76 ;SEQ ID NO :79,80 和 81 ；SEQ ID NO :84、85 和 86 ；SEQ ID NO :89、90 和 91 ；SEQ ID NO :94、95 和 96 ；SEQ ID NO :99、100 禾口 101 ;SEQ ID NO 104、105 禾口 106 ;SEQ ID NO :109、110 和 111 ； SEQ ID NO 114、115 和 116 ；以及 SEQ ID NO :119、120 和 121 構(gòu)成的組的 VH-CDR1、VH_CDR2
16和VH-CDR3氨基酸序列；并且其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合 IGF-IR0在一些實(shí)施方案中，上述多聚核苷酸還包含融合至抗體VH多肽或抗體VL多肽的 信號肽的編碼核酸。在某些其它實(shí)施方案中，上述多聚核苷酸還包含編碼融合至該VH多肽的重鏈恒 定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域、編碼融合至該VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2結(jié)構(gòu)域、編碼融合至該VH多肽的 重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域、或編碼融合至所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。在另外的實(shí)施方 案中，重鏈恒定區(qū)是人IgG4。在某些其它實(shí)施方案中，該IgG4被突變以去除糖基化位點(diǎn)。 在另外的實(shí)施方案中，該IgG4突變包含使用Kabat編號系統(tǒng)的SMlP和T318A。在一些實(shí)施方案中，上述多聚核苷酸包含編碼融合至所述VL多肽的輕鏈恒定區(qū) 結(jié)構(gòu)域的核酸。在另外的實(shí)施方案中，輕鏈恒定區(qū)是人kappa。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含由該核酸 編碼的、與選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組的 參考單克隆Fab抗體片段或與由選自由P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B11、 P1E2. ;3B12和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考單克隆抗體特異性結(jié)合相同IGF-Rl 表位的多肽。在上述多聚核苷酸的多種實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段包含由該核酸 編碼的、競爭性地抑制選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組的參考單克隆Fab抗體片段或由選自由P2A7. 3E1U20C8. 3B8, P1A2. 2B11、 20D8. 24B1UP1E2. 3B12和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考單克隆抗體的多肽。在上述多聚核苷酸的多種實(shí)施方案中，該VH多肽或VL多肽的框架區(qū)除了五個或 更少的氨基酸替換外為人源。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含由該核酸編碼的、結(jié)合線 性表位或非線性構(gòu)型表位的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段為多價體，且包含了至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。在上述多聚核苷酸的某些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段為多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段為雙特異性的。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段包含完全人源的重鏈和輕鏈可變域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域與 選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組的單克隆 Fab 抗體片段一致。在上述多聚核苷酸的某些其它實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其 抗原結(jié)合片段包含鼠源的重鏈和輕鏈可變域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域與 由選自由 P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組 的雜交瘤生產(chǎn)的單克隆抗體一致。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段是人源化的。
在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段是靈長源化的。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段是嵌合的。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段是完全人源的。在上述多聚核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段是Fab片段、Fab'片段、F (ab) 2片段或Fv片段。在上述多聚核苷酸的某些實(shí)施 方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈抗體。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段通過以解離常數(shù)(Kd)不大于 hl(T2M、10-2M、5xl(^M、10-3M、5xl0-4M、10-4M、5xl0-5M、
1(Γ"Μ、5χ10~Μ、1(Γ12Μ、5Χ10^Μ、1(Γ"Μ、5Χ1(ΓμΜ、1(ΓμΜ、5Χ1(Γ15Μ、或 10-1 表征的親和力特異 性結(jié)合IGF-Rl多肽或其片段，或IGF-IR變體多肽。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段相對于鼠IGF-IR多肽或其片段或者非人靈長動物IGF-IR多肽或其片段優(yōu)先結(jié)合 人IGF-IR多肽或其片段。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段結(jié)合人IGF-IR多肽或其片段，并且還結(jié)合非-人靈長動物IGF-IR多肽或其片段。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段結(jié)合在細(xì)胞表面上表達(dá)的IGF-1R。在另外的實(shí)施方案中，細(xì)胞是惡性腫瘤細(xì)胞、腫 瘤性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移細(xì)胞。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段阻斷胰島素生長因子與IGF-IR的結(jié)合。在另外的實(shí)施方案中，胰島素生長因子是 胰島素生長因子-I(IGF-I)或胰島素生長因子-2(IGF-2)。在上述多聚核苷酸的某些其它 實(shí)施方案中，所述抗體或其片段同時阻斷IGF-I和IGF-2與IGF-IR的結(jié)合。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原 結(jié)合片段抑制IGF-IR-介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、抑制IGF-I或IGF-2-介導(dǎo)的IGF-IR磷酸化、抑制 腫瘤細(xì)胞生長或抑制IGF-IR內(nèi)在化。在一些實(shí)施方案中，上述多聚核苷酸還包含編碼外源多肽的核酸。在上述多聚核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗 原結(jié)合片段結(jié)合至選自由細(xì)胞毒素劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前藥、肽、蛋白、酶、 病毒、脂質(zhì)、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑、藥劑、淋巴因子、外源抗體或其片段、可檢測的標(biāo)記、聚乙二醇 (PEG)構(gòu)成的組的制劑、以及兩種或多種任意所述制劑的組合，或聯(lián)合使用。在另外的實(shí)施 方案中，該細(xì)胞毒素劑(和IGF-IR抗體結(jié)合或聯(lián)合使用)選自由放射性核、生物毒素、酶活 毒素、細(xì)胞抑制或細(xì)胞毒性治療劑、前藥、免疫活性配體、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑構(gòu)成的組、或是兩 種或多種任意所述細(xì)胞毒素劑的組合。在某些其它實(shí)施方案中，該可檢測的標(biāo)記選自由酶、 熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射活性標(biāo)記構(gòu)成的組、或是兩種或多種任意所 述可檢測的標(biāo)記的組合。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含上述多聚核苷酸的組合物。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含上述多聚核苷酸的載體。在另外的實(shí)施 方案中，多聚核苷酸和啟動子可操作地關(guān)聯(lián)。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含這種載 體的宿主細(xì)胞。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供其中多聚核苷酸和啟動子可操作地關(guān)聯(lián) 的載體。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋制備特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或其片段的方 法，包括培養(yǎng)包含上述多聚核苷酸的載體的宿主細(xì)胞；以及回收所述抗體或其片段。在另外 的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供由上述方法制備的分離的多肽。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋由上述多聚核苷酸編碼的分離的多肽。在上述多肽的另外的實(shí)施方案中，包含所述多肽的抗體或其片段特異性結(jié)合 IGF-IR0其它實(shí)施方案包括包含上述多肽的分離的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含分離VH編碼多聚核苷酸和分離VL編碼多聚 核苷酸的組合物，其中該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸分別包含與選自由SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 68 ；SEQ ID NO 8 和 SEQ ID NO 73 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO :20和 SEQ ID NO 83 ；SEQ ID NO :26和 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO :32 禾口 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO :38 禾口 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO :43 禾口 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO 48 和 SEQ ID NO 108 ；SEQ ID N0:53 禾口 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID N0:58 禾口 SEQ ID NO :113; 以及SEQ ID NO :63和118構(gòu)成的組的參考氨基酸序列至少具有90%—致性的氨基酸序 列的編碼核酸；并且其中由該VH和VL編碼多聚核苷酸所編碼的抗體或其片段特異性結(jié)合 IGF-IR0在另外的實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸分別包含選 自由 SEQ ID NO :4 禾口 SEQ ID NO 68 ； SEQ ID NO :8 禾口 SEQ ID NO 73 ； SEQ ID NO: 14 禾口 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO 20 禾口 SEQ ID NO 83 ；SEQ ID NO 26 禾口 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO 32 和 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO 38 和 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO 43 和 SEQ ID NO :103 ； SEQ ID NO 48 和 SEQ ID NO :108 ；SEQ ID NO 53 和 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO 58 和 SEQ ID NO :113 ；以及SEQ ID NO 63和118構(gòu)成的組的氨基酸序列的編碼核酸。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的涵蓋部分提供包含分離VH編碼多聚核苷酸和 分離VL編碼多聚核苷酸的組合物，其中該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸分 別包含除了少于20個保守氨基酸替換外與選自由SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 68 ；SEQ ID NO 8 和 SEQ ID NO 73 ；SEQ ID NO :14 禾口 SEQ ID NO 78 ；SEQ ID NO 20 和 SEQ ID NO 83 ； SEQ ID NO :26 和 SEQ ID NO 88 ；SEQ ID NO :32 和 SEQ ID NO 93 ；SEQ ID NO :38 和 SEQ ID NO 98 ；SEQ ID NO :43 和 SEQ ID NO :103 ；SEQ ID NO :48 和 SEQ ID NO :108 ；SEQ ID NO 53 和 SEQ ID NO 103 ；SEQ ID N0:58 禾口 SEQ ID NO :113;以及 SEQ ID NO :63 和 118 構(gòu)成的組 的參考氨基酸序列一致性的氨基酸序列的編碼核酸；并且其中由該VH和VL編碼多聚核苷 酸所編碼的抗體或其片段特異性結(jié)合IGF-1R。在另外的實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷 酸編碼包含選自由 SEQ ID NO :5、6 和 7 ；SEQ ID NO :10、11 和 12 ；SEQ ID NO 15、16 和 17 ； SEQ ID NO 21,22 和 23 ；SEQ ID NO :27、28 和 29 ；SEQ ID NO :33、34 和 35 ；SEQ ID NO :39、 40 禾口 41;SEQ ID NO :44、45 和 46 ;SEQ ID NO :49、50 和 51 ;SEQ ID NO :54、55 和 56 ;SEQ ID NO :59,60 和 61 ；以及 SEQ ID NO :64、65 和 66 構(gòu)成的組的 VH-CDR1、VH_CDR2 和 VH-CDR3 氨 基酸序列的VH多肽；其中該VL編碼多聚核苷酸編碼包含選自由SEQ ID NO :69,70和71 ；SEQ ID NO 74,75 和 76 ；SEQ ID NO :79、80 和 81 ；SEQ ID NO :84、85 和 86 ；SEQ ID NO :89、 90 和 91 ；SEQ ID NO :94、95 和 96 ；SEQ ID NO :99,100 禾口 101 ；SEQ ID NO 104、105 禾口 106 ； SEQ ID NO :109、110 和 111 ;SEQ ID NO 114、115 和 116 ；以及 SEQ ID N0:119、120 禾口 121 構(gòu)成的組的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的VL多肽；并且其中由該VH和VL編 碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片段特異性結(jié)合IGF-1R。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，VH編碼多聚核苷酸還包含融合至抗體VH多肽 的信號肽的編碼核酸。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，VL編碼多聚核苷酸還包含融合至抗體VL多肽 的信號肽的編碼核酸。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，VH編碼多聚核苷酸還包含編碼融合至該VH多 肽的重鏈恒定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域的核酸、還包含編碼融合至該VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2結(jié)構(gòu)域 的核酸、還包含編碼融合至該VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域的核酸、或還包含編碼融合 至所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。在另外的實(shí)施方案中，重鏈恒定區(qū)是人IgG4。在某些 其它實(shí)施方案中，該IgG4被突變以去除糖基化位點(diǎn)。在另外的實(shí)施方案中，該IgG4突變包 含使用Kabat編號系統(tǒng)的S241P和T318A。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，VL編碼多聚核苷酸還包含編碼融合至所述VL 多肽的輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的核酸。在另外的實(shí)施方案中，輕鏈恒定區(qū)是人kappa。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段與選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組的參考單克 隆 Fab 抗體片段或與由選自由 P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B11、P1E2. 3B 12 和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考單克隆抗體特異性結(jié)合相同IGF-Rl表位。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段競爭性地抑制選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的 組的參考單克隆Fab抗體片段或由選自由P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B11、 P1E2. 3B 12和P1G10. 2B8構(gòu)成的組的雜交瘤生產(chǎn)的參考單克隆抗體與IGF-IR的結(jié)合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，該VH和VL多肽的框架區(qū)除了五個或更少的氨 基酸替換外為人源。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段結(jié)合線性表位或非線性構(gòu)型表位。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段為多價體，且包含了至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段是多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片段 是雙特異性的。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片 段包含完全人源的重鏈和輕鏈可變域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域與選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組的單克隆 Fab 抗體片段一致。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由VH和VL編碼多聚核苷酸編碼的抗體或其片段包含鼠源的重鏈和輕鏈可變域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變域與由選自由 P2A7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組的雜交瘤
生產(chǎn)的單克隆抗體一致。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段是人源化的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段是靈長源化的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段是嵌合的。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段是完全人源的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段是Fab片段、Fab'片段、F (ab) 2片段或Fv片段。在上述組合物的某些實(shí)施方案中，包 含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈抗體。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段通過以解離常數(shù)(Kd)不大于 ^ 1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5χ103Μ、1(Γ3Μ、5χ1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5χ1(Γ5Μ、
1(Γ"Μ、5χ10~Μ、1(Γ12Μ、5Χ10^Μ、1(Γ"Μ、5Χ1(ΓμΜ、1(ΓμΜ、5Χ1(Γ15Μ、或 10-1 表征的親和力特異 性結(jié)合IGF-Rl多肽或其片段，或IGF-IR變體多肽。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段相對于鼠IGF-IR多肽或其片段或者非人靈長動物IGF-IR多肽或其片段優(yōu)先結(jié)合人 IGF-IR多肽或其片段。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段結(jié)合人IGF-IR多肽或其片段，并且還結(jié)合非-人靈長動物IGF-IR多肽或其片段。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段結(jié)合在細(xì)胞表面上表達(dá)的IGF-1R。在另外的實(shí)施方案中，細(xì)胞是惡性腫瘤細(xì)胞、腫瘤性 細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移細(xì)胞。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段阻斷胰島素生長因子與IGF-IR的結(jié)合。在另外的實(shí)施方案中，胰島素生長因子是胰 島素生長因子-I(IGF-I)或胰島素生長因子-2(IGF-2)。在上述組合物的某些其它實(shí)施方 案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段同時阻斷IGF-I和IGF-2與IGF-IR的結(jié)合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段抑制IGF-IR-介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、抑制IGF-I或IGF-2-介導(dǎo)的IGF-IR磷酸化、抑制腫瘤 細(xì)胞生長或抑制IGF-IR內(nèi)在化。在一些實(shí)施方案中，上述組合物、VH編碼多聚核苷酸、VL編碼多聚核苷酸或VH和 VL編碼多聚核苷酸還包含編碼外源多肽的核酸。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由該核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合 片段結(jié)合至選自由細(xì)胞毒素劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前藥、肽、蛋白、酶、病毒、月旨 質(zhì)、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑、藥劑、淋巴因子、外源抗體或其片段、可檢測的標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)構(gòu)成的組的制劑、以及兩種或多種任意所述制劑的組合，或聯(lián)合使用。在另外的實(shí)施方案 中，該細(xì)胞毒素劑(和IGF-IR抗體結(jié)合或聯(lián)合使用)選自由放射性核、生物毒素、酶活毒 素、細(xì)胞抑制或細(xì)胞毒性治療劑、前藥、免疫活性配體、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑構(gòu)成的組、或是兩種 或多種任意所述細(xì)胞毒素劑的組合。在某些其它實(shí)施方案中，該可檢測的標(biāo)記選自由酶、熒 光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射活性標(biāo)記構(gòu)成的組、或是兩種或多種任意所述 可檢測的標(biāo)記的組合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸包含于第一載體，而該VL 編碼多聚核苷酸包含于第二載體。在另外的實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸和第一啟動 子可操作地關(guān)聯(lián)而該VL編碼多聚核苷酸和第二啟動子可操作地關(guān)聯(lián)。在某些其它實(shí)施方 案中，該第一和第二啟動子為同一啟動子的拷貝。在另外的實(shí)施方案中，該第一和第二啟動 子不一致。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，該第一和第二載體包含于單個宿主細(xì)胞。在上述組合物的某些其它實(shí)施方案中，該第一和第二載體包含于獨(dú)立的宿主細(xì) 胞。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋制備特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或其片段的方法， 包括培養(yǎng)上述宿主細(xì)胞；以及回收所述抗體或其片段。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋制備特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或其片段的方 法，包括共培養(yǎng)獨(dú)立的宿主細(xì)胞，；以及回收所述抗體或其片段。在上述方法的另外的實(shí)施 方案中，本發(fā)明提供了合并該VH和VL編碼多肽，以及回收所述抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋由上述制備的特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或其片 段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋其中該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷 酸在相同載體上的組合物、及其中的載體。在上述載體的多種實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸均 和啟動子可操作地關(guān)聯(lián)。在上述載體的多種實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸進(jìn) 行框內(nèi)融合，從與之可操作地關(guān)聯(lián)的單個啟動子進(jìn)行共同轉(zhuǎn)錄，并共同翻譯成單鏈抗體或 其抗原結(jié)合片段。在上述載體的多種實(shí)施方案中，該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸從 與之可操作地關(guān)聯(lián)的單個啟動子進(jìn)行共同轉(zhuǎn)錄，但單獨(dú)翻譯。在另外的實(shí)施方案中，載體還 包含位于該VH編碼多聚核苷酸和該VL編碼多聚核苷酸之間的IRES序列。在某些其它實(shí) 施方案中，該編碼VH的多聚核苷酸和該編碼VL的多聚核苷酸分別可操作地關(guān)聯(lián)單獨(dú)啟動 子并單獨(dú)轉(zhuǎn)錄。在另外的實(shí)施方案中，該獨(dú)立的啟動子為同一啟動子的拷貝或該獨(dú)立的啟 動子不一致。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋包含上述載體的宿主細(xì)胞。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋制備特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或其片段的方 法，包括培養(yǎng)上述宿主細(xì)胞；以及回收所述抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋由上述方法制備的特異性結(jié)合IGF-IR的抗體或 其片段。
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在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋在動物中治療過度增殖病癥的方法，包括向需要 治療的動物施用包含以下成分的組合物a)上述分離的抗體或其片段；以及b)藥學(xué)上可接 受的載體。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋在動物中治療過度增殖病癥的方法，包括向需 要治療的動物施用包含以下成分的組合物a)上述分離的抗體或其片段；以及b) —種或多 種用于治療過度增殖病癥的另外的制劑；c)藥學(xué)上可接受的載體。在另外的實(shí)施方案中， 本發(fā)明涵蓋在動物中治療過度增殖病癥的方法，包括向需要治療的動物施用a)包含上述 分離的抗體或其片段和藥學(xué)上可接受的載體的組合物；b)包含一種或多種用于治療過度 增殖病癥的另外的制劑和藥學(xué)上可接受的載體的一種或多種單獨(dú)組合物(其中所述單獨(dú) 組合物以任何的順序、以任何的時間段同時或順序施用)。在另外的實(shí)施方案中，過度增殖 病癥選自由癌癥、贅生物、腫瘤、惡性腫瘤或其轉(zhuǎn)移性病灶構(gòu)成的組。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段特異性結(jié)合在惡性腫瘤細(xì)胞的表面 上表達(dá)的IGF-1R。在另外的實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合惡性腫瘤細(xì)胞導(dǎo)致惡性腫瘤細(xì) 胞的生長抑制。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制IGF和惡性腫瘤細(xì)胞的結(jié)合。 在另外的實(shí)施方案中，IGF是IGF-I或IGF-2。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制IGF-I結(jié)合所述惡性腫瘤細(xì) 胞，但不抑制IGF-2。在某些其它實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制IGF-2結(jié)合所述惡性腫瘤 細(xì)胞，但不抑制IGF-I。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段促進(jìn)IGF-IR內(nèi)在化進(jìn)入所述惡性 腫瘤細(xì)胞。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制IGF-IR磷酸化或抑制腫瘤細(xì) 胞增殖。在另外的實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞增殖通過預(yù)防或延緩轉(zhuǎn)移生長而受到抑制。在上述方法的各種實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。在另外的實(shí)施 方案中，腫瘤細(xì)胞增殖通過預(yù)防或延緩腫瘤擴(kuò)散至鄰近組織而受到抑制。在上述方法的各種實(shí)施方案中，過度增殖疾病或病癥是位于下列部位的贅生物 前列腺、結(jié)腸、腹部、骨、乳房、消化系統(tǒng)、肝臟、胰臟、腹膜、腎上腺、甲狀旁腺、垂體腺、睪丸、 卵巢、胸腺、甲狀腺、眼、頭、頸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、骨盆、皮膚、軟組 織、脾臟、胸部或泌尿生殖道。在上述方法的各種實(shí)施方案中，過度增殖疾病或病癥是癌癥，所述癌癥選自由下 列疾病構(gòu)成的組上皮鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、胰腺癌、子宮 頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、睪丸癌、甲狀腺癌和頭頸癌。 在另外的實(shí)施方案中，所述癌癥選自由下列疾病構(gòu)成的組胃癌、腎癌、腦癌、膀胱癌、結(jié)腸 癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌。在上述方法的各種實(shí)施方案中，動物是哺乳動物。在另外的實(shí)施方案中，哺乳動物 是人。


圖1 :IGF-1R特異性Fab的結(jié)合活性。㈧由ELISA所得的純化抗-IGF-1R Fab抗 體對重組IGF-lR-his和IGFlR-Fc蛋白的結(jié)合。(B)通過流式細(xì)胞儀所得的純化抗-IGF-IRFab抗體對在3T3上表達(dá)的人IGF-IR的結(jié)合。圖2 =Fab對MCF-7細(xì)胞上表達(dá)的IGF-IR的結(jié)合活性。圖3 抗-IGF-IR Fab在MCF7細(xì)胞中抑制(A) IGF-I和(b) IGF-2誘導(dǎo)的磷酸化。圖4 由ELISA所得的IGF-1R Fab片段抗體與可溶性IGF-IR(A)和INSR(B)的結(jié)
口 O圖5 對G4.P. agly型完全人源M13-C06和M14-C03抗體的非還原型和還原型SDA PAGE分析。圖6 由ELISA測定的完全人源G4. P(A)和G4. P. agly (B)型抗-IGF-1R抗體的結(jié) 合活性。圖7 由流式細(xì)胞儀測定的完全人源抗體對MCF_7(A)、IGF_1R/3T3(B)細(xì)胞上表達(dá) 的IGF-IR的結(jié)合。在MCF-7上的結(jié)合EC50在2. 7-12xl0-10nM范圍內(nèi)。圖8 由RIA測定的G4型完全人源抗體阻斷IGF-1 (A)和IGF-2 (B)結(jié)合IGF-1R的 能力。圖9 (A) G4型完全人源抗體對H_23腫瘤細(xì)胞響應(yīng)IGF-I的增殖的抑制；(B)G4型 完全人源抗體對H-23腫瘤細(xì)胞響應(yīng)IGF-2的增殖的抑制；(C) G4型完全人源抗體對Calu_6 腫瘤細(xì)胞響應(yīng)IGF-I的增殖的抑制。圖 10 :M13. C06. G4. P. agly、M14. C03. G4. P. agly 和 M14. Gl 1. P 抗體 IGF-I (A)和 IGF-2(B)驅(qū)動的受體磷酸化的抑制。圖11 :M13. C06. G4. P. agly對下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制。(A)磷酸化Akt (Thr308)和 總Akt分別在頂部和底部行中顯示，(B)頂部磷酸化p44/42 MAI3K和總p44/42 MAI3K分別 在頂部和底部行顯示。圖12 選擇的IGF-IR mAbs對IGF-I介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長的抑制。(A)H23 ；⑶ Calu-6 ； (C)Panc-I ； (D)BxPC3 ； (E)MaPaCa ；和(F)Colo205。柱表示平均值和 SD。圖13 抗-IGF-IR抗體對IGF-1和IGF-2驅(qū)動的H-23細(xì)胞的增殖的抑制。圖14 :M13-C06. G4. P. agly抗體對BxPC3細(xì)胞增殖(由重組人IGF-I和IGF-2驅(qū) 動)的抑制。圖 15 :M13-C06. G4. P. agly 抗體對 NCI-H23 細(xì)胞增殖(由重組人 IGF-I 和 IGF-2 驅(qū)動)的抑制。圖16 :M13-C06. G4. P. agly抗體對A549細(xì)胞增殖(由重組人IGF-I和IGF-2驅(qū) 動)的抑制。圖17 完全人源IGF-IR抗體對IGF-1和IGF-2誘導(dǎo)的Akt的氨基酸殘基kr473 磷酸化的抑制。圖18 完全人源M13. C06. G4. P. agly抗體在胰腺癌模型中顯示了體內(nèi)劑量依賴性 腫瘤生長抑制。圖19 完全人源M13. C06. G4. P. agly抗體在肺癌模型中顯示了體內(nèi)劑量依賴性腫 瘤生長抑制。圖20 完全人M13. C06. G4. P. agly抗體聯(lián)合吉西他濱施用在抑制腫瘤生長中顯示 了增強(qiáng)的效力。圖21 完全人源M13. C06. G4. P. agly抗體與食蟹猴成纖維細(xì)胞系上表達(dá)的IGF-1R的結(jié)合。圖22 =IGF-IR抗體結(jié)合表位的交叉競爭性結(jié)合分析。圖23 IRS-I和p85(PI3K的調(diào)節(jié)亞基)的共免疫沉淀證實(shí)了 M13-C06. G4. P. agly 介導(dǎo)的IGF-IR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制。圖M :IGF_1R和INSR在哺乳動物細(xì)胞中的免疫沉淀證實(shí)了 M13. C06. G4. P. agly 抗體結(jié)合IGF-IR但不結(jié)合胰島素受體。以采用鼠抗-人頂㈧或鼠抗-人IGF-IR(B)免 疫印跡(Western印跡)分析檢測IGF-IR和INSR蛋白。圖 25 :M13-C06Fab 對(A)hlGF-lR-Fc 禾Π (B)mlGF-lR-Fc 的相對結(jié)合親和力測定。 (A)和⑶的χ-和y_軸比例相同。在各圖的底部顯示了用于結(jié)合擬合的殘余物以表明該 1 1結(jié)合模型在測定M13-C06對各個受體的相對親和力中的適用性。圖26 :M13. C06抗體在SI3R測定中結(jié)合hIGF_lR_Fc和mlGF-lR-Fc對照與抗體結(jié) 合IGF-IR突變蛋白SD006 (結(jié)合陽性)和SD015 (結(jié)合陰性)的實(shí)施例。圖27 :IGF-1R和INSR的結(jié)構(gòu)表示A) IGF-IR的結(jié)構(gòu)示意圖。FnIII_2包含如圖 所示的體內(nèi)蛋白水解處理的環(huán)狀結(jié)構(gòu)?？缒^(qū)顯示為橫跨磷脂雙層圖的螺旋環(huán)。IGF-IR 中的IGF-1/IGF-2結(jié)合位點(diǎn)的位置以星號顯示。經(jīng)證明僅一種IGF-1/IGF-2分子結(jié)合至各 IGF-IR異源二聚分子。B和C)定位至同源INSR結(jié)構(gòu)表面的M13-C06 IGF-IR結(jié)合表位。 M13-C06 IGF-IR結(jié)合表位基于過度同源性INSR晶體結(jié)構(gòu)建模。B)具有對應(yīng)IGF-IR中同 源性位置V462-H464的氨基酸殘基位置(即INSR中的L472-K474)的INSR結(jié)構(gòu)的表面表 示以黑色陰影顯示。對應(yīng)IGF-IR的前三個結(jié)構(gòu)域(即L1-CR-L2)(例如包含在本文中所述 平頭IGF-IR(1-46 -Fc構(gòu)建體)顯示為灰色陰影。C)具有暴露表面區(qū)域至溶劑以及在對 應(yīng)IGF-IR的462-464 (即INSR的472-474)的殘基的14A (埃)半徑(或28A直徑)之內(nèi) 的殘基的INSR結(jié)構(gòu)的表面表示以黑色陰影顯示。對應(yīng)IGF-IR氨基酸462-464的殘基的具 有灰色陰影以顯示實(shí)驗(yàn)確認(rèn)的該目標(biāo)表位的表面區(qū)域。圖28 在以M13. C06.G4.P. agly抗體處理的鼠腫瘤中體內(nèi)1GF-1R表達(dá)的免疫印 跡(Western印跡)分析。圖四由原發(fā)人結(jié)腸腫瘤生成的腫瘤中M13-C06. G4. P. agly的體內(nèi)抗腫瘤活性。圖30 由乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞生成的腫瘤中M13-C06. G4. P. agly的體內(nèi)抗腫瘤活 性。圖31 :M13-C06抗體體外不顯示ADCC活性。圖 32 抗體 M13-C06、M14-C03、M14-G11 和 IR3 對人 IGF-IHis 結(jié)合生物素化 hIGF-lR-Fc 的抑制。圖 33 抗體 M13-C06、M14-C03、M14-G11、P1E2 和 IR3 對人 IGF_2His 結(jié)合生物素化 hIGF-lR-Fc 的抑制。圖；34 =ELISA分析來檢測人IGF-IHis與生物素化hlGF-lR的結(jié)合。人IGF-IHis 在PBST(圓圈)和含有2μΜ M13-C06的PBST(方塊)中連續(xù)稀釋。圖35 突變影響M13-C06與hIGF-lR-Fc結(jié)合的殘基被圖示至同源頂胞外結(jié)構(gòu)域 的結(jié)構(gòu)。IGF-IR氨基酸殘基415、427、468、478和532的突變對于M13-C06抗體結(jié)合具有 無法檢測的影響。IGF-IR氨基酸殘466、467、533、564和565的突變對于M13-C06抗體結(jié) 合具有微弱不利影響。IGF-IR氨基酸殘基459、460、461、462、464、482、483、490、570和571的突變對于M13-C06抗體結(jié)合具有強(qiáng)烈不利影響。參見表20編輯的突變分析結(jié)果。圖36 突變影響M14-G11與hIGF_lR_Fc結(jié)合的殘基被圖示至人IGF-1R的前三個 胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)。IGF-IR氨基酸殘基觀、227、237、285、286、301、327和412的突變對于 M14-G11抗體結(jié)合具有無法檢測的影響。IGF-IR氨基酸殘基257、259、沈0、263和沈5的突 變對于M14-G11抗體結(jié)合具有微弱不利影響。IGF-IR氨基酸殘基254的突變對于M14-G11 抗體結(jié)合具有中等不利影響。IGF-IR氨基酸殘基248和250的突變對于M14-G11抗體結(jié)合 具有強(qiáng)烈不利影響。參見表20編輯的突變分析結(jié)果。圖37 突變影響IR3和P1E2與hIGF_lR_Fc結(jié)合的殘基被圖示至人IGF-IR的前 三個胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)。IGF-IR氨基酸殘基28,227,237,250,259,260,264,285,286,306 和412的突變對于抗體結(jié)合具有無法檢測的影響。IGF-IR氨基酸殘基257、沈3、301、303、 308,327和389的突變對于抗體結(jié)合具有微弱不利影響。IGF-IR氨基酸殘基248和254的 突變對于M14-G11抗體結(jié)合具有中等不利影響。IGF-IR氨基酸殘基265的突變對于抗體結(jié) 合具有強(qiáng)烈不利影響。參見表20編輯的突變分析結(jié)果。圖38 示出在無血清的條件下通過聯(lián)合不同IGF-IR表位的抗體靶向而增強(qiáng)抑制 由IGF-1/IGF-2刺激的BXPC3 (胰腺癌細(xì)胞系)細(xì)胞生長。圖39 示出和在相同對于抗體濃度處單獨(dú)使用抗體觀察到的情況相比，在 500nM至5nM之間的濃度處聯(lián)合等摩爾量的M13. C06. G4. P. agly (C06)和M14. Gll. G4. P. agly (Gll)抗體導(dǎo)致明顯增強(qiáng)抑制BXPC3細(xì)胞生長。圖40 示出在存在10%胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)條件下生長的H322M中觀察到的 效果的例子，其中和單獨(dú)抗體相比，由于C06/G11抗體而導(dǎo)致明顯更強(qiáng)地抑制細(xì)胞生長。圖41A和B 示出M13-C06和埃羅替尼單獨(dú)和聯(lián)合對于NSCLC細(xì)胞生長的影響。圖42 示出M13-C06和埃羅替尼單獨(dú)和聯(lián)合對于胰腺癌細(xì)胞生長的影響。圖43 示出M13-C06和埃羅替尼單獨(dú)和聯(lián)合對于結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響。圖44 示出M13-C06和埃羅替尼單獨(dú)和聯(lián)合在NSCLC細(xì)胞系中對于AKT和MAI3K信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。圖45A和B 示出在彌散的A549肺腫瘤模型中M13-C06作為單一制劑介導(dǎo)抗腫瘤 活性(A)和增強(qiáng)Tarceva的抗腫瘤活性(B)。圖46A和B 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合對于NSCLC細(xì)胞生長的影響。圖47 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合對于胰腺癌細(xì)胞生長的影響。圖48 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合對于結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響。圖49 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合對于肉瘤細(xì)胞生長的影響。圖50 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合在NSCLC細(xì)胞系中對于AKT和S6K信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。圖51 示出M13-C06和雷帕霉素單獨(dú)和聯(lián)合在肉瘤系中對于AKT和S6K信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 的影響。圖52 示出在SK-ES-I肉瘤模型中M13-C06作為單一制劑抑制腫瘤生長。圖53A和B 示出M13-C06和PD0325901單獨(dú)和聯(lián)合對于NSCLC細(xì)胞生長的影響。圖M 示出M13-C06和PD0325901單獨(dú)和聯(lián)合對于胰腺癌細(xì)胞生長的影響。圖55 示出M13-C06和PD0325901單獨(dú)和聯(lián)合對于結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響。
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圖56A和B 示出M13-C06和PI-103單獨(dú)和聯(lián)合對于NSCLC細(xì)胞生長的影響。圖57 示出M13-C06和PI-103單獨(dú)和聯(lián)合對于胰腺癌細(xì)胞生長的影響。圖58 示出M13-C06和PI-103單獨(dú)和聯(lián)合對于結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響。圖59 示出M13-C06和索拉非尼單獨(dú)和聯(lián)合對于兩種肝細(xì)胞癌細(xì)胞系生長的影 響。
具體實(shí)施例方式下列申請通過引用的方式全部并入本文中美國臨時專利申請 No. 60/786,347 0006年3月28日提交)；美國臨時專利申請No. 60/876，5 (2006年12月 22日提交)；美國專利申請No. 11/727，887 (2007年3月觀日提交)；美國臨時專利申請 No. 60/968，540 (2007 年 8 月 28 日提交)；美國專利申請 No. 12/200，766 (2008 年 8 月 28 日 提交)；美國臨時專利申請No. 61/071,087(2008年4月11日提交)；國際PCT公開No. WO 2007/126876 (PCT/US2007/007664 ；2007 年 3 月 28 日提交；2007 年 11 月 8 日公開)和國際 PCT 公開 No. WO 2009/032145 (PCT/US2008/010176 ；2008 年 8 月 28 日提交；2009 年 3 月 12 日公開)。本發(fā)明涉及聯(lián)合治療，特別是涉及通過聯(lián)合使用兩種或多種治療劑來治療過度增 殖病癥(例如癌癥)。特別地，本發(fā)明涉及聯(lián)合結(jié)合IGF-IR的抗體和其它治療劑以減輕或 消除細(xì)胞生長和增殖、致癌作用、腫瘤發(fā)生和/或轉(zhuǎn)移性病灶。當(dāng)和使用單一制劑治療的效 果比較時，本發(fā)明的聯(lián)合治療可在治療癌癥和減輕細(xì)胞過度增殖、致癌作用、腫瘤發(fā)生和/ 或轉(zhuǎn)移性病灶中具有協(xié)同效果。本發(fā)明的聯(lián)合包括聯(lián)合結(jié)合IGF-IR的抗體(或其片段)和 任何治療上用于治療過度增殖疾病或病癥的另外的制劑，而無論所述另外的制劑是否具有 抗過度增殖活性。例如，在另外的制劑不具有任何抗癌活性的情況下，聯(lián)合IGF-IR抗體的 另外的制劑可用于通過減輕或緩解征兆來治療癌癥。因此，本發(fā)明的聯(lián)合包括提供IGF-IR 抗體(或其片段)和另外的一種或多種制劑，其中所述另外的一種或多種制劑通過有益于 被治療的受試者的活性而支持癌癥的治療，盡管這種活性可能不是抗過度增殖的。例子是 聯(lián)合具有抗過度增殖活性的IGF-IR抗體(或其片段)和促紅細(xì)胞生成素(EPO)，所述促紅 細(xì)胞生成素刺激血紅細(xì)胞產(chǎn)生，但是其借助于其抗貧血活性而在癌癥治療中是有益的。聯(lián)合IGF-IR抗體(或其片段)的另外的制劑也不限于在本說明書中特定或一般 鑒定的具體藥物、化合物、化學(xué)品或分子中的任一種。當(dāng)然，可以在治療上用于治療過度增 殖疾病或病癥的任何另外的藥物、化合物、化學(xué)品或分子都可以聯(lián)合IGF-IR抗體(或其片 段)以起到所述疾病或病癥的治療效果。因此，在本說明書中特定或一般鑒定的所有藥物、 化合物、化學(xué)品和分子都僅僅是以提供例子的方式來鑒定，無論如何并不意欲以任何方式 限制本發(fā)明的聯(lián)合。另外，本發(fā)明的實(shí)施方案包括聯(lián)合可以用于治療過度增殖疾病或病癥 的第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和任何更多數(shù)量的另外的制劑(例 如10-20、20-100、100-1000、1000-1000000、或多于1，000，000的范圍內(nèi)的任何數(shù)量的另外 的制劑)。可以聯(lián)合IGF-IR抗體(或其片段)使用的化療化合物的一些特定例子包括但不 限于3-,1式-視黃酸 2-CDA 2-續(xù)腹氧瞧苷 5-露雜胞苷 5-戴原嘧啶
5-FU
6-·■呤 6-MP 6-TG
6-硫鳥嘌呤 ABRAXANE Φ ACCUTANE@
放射菌素-D ADRIAMYCJN ADRUCIL @ AGRYLIN ⑩ ALA-CORT @ 國地白介素 B侖單抗 ALIMTA @ H利維A酸 ALKABAN-AQ ALKERAN 全-反或視黃酸
α-干擾素 六甲魔胺 甲鱔蝶_ H*斯T S蠡米特 續(xù)味
ANANDRON Φ 耳則I沖 可拉伯糙跑苕啶 ARA-C ARANESP @ AREDIA Φ ARiMiDEX AROMASIN ARRANON -^Z::系申
天冬酰胺酶 ATR.AGEN ATRA4V AVASTIN 翹.雜跑苷
AZD6244 (ARRY-1428&6) BCG《卡介前》
BCNU (1,3-雙α-雪乙墓)-1-亞 墓
靨)
貝伐單抗 貝沙羅汀 BEXXAR tt卡魯胺 BICNtI @ BLENQXANE 腳來5橐 波替單抗 白消安
B USULFEX
C225 mafmm
CAMPATH CAM PTOSAR
mmm-ιι
卡培他濱 CARAC 卡tt 卡無芥 卡氣芥It CASODEX OC!-^ 013 CCI-779
CCNU (1-(2 _.驅(qū)I CDDP ι. Ii' CEENU CERUBIDINE <B ffl si晉單Ia 苯丁酸麗芥
晴橙菌因子 克拉屈渙 可tt機(jī)
COSMEGEN CPT-Il 環(huán)磷酰胺 CYTADREN 可 I跑苷 B糖跑苷I旨質(zhì)體 CYTOSAR-U CYTOXAN @ 觀燔曛膽 DAC0GEN@ 放射菌棄D
α途貝/i
達(dá)沙替
乙 >3-環(huán)己慕-1-IE 鏡二钂慕鈀)柔毛11素 柔紅靄累 a酸柔紅孬束 柔紅霉素應(yīng)艇體 DAUNOXOME @ DECADRON 地西他澳
DEFOROL1MUS (AP23573), DEUTA-CORTEF @ DELTASONE 地尼白介素2 DEPOCYT
權(quán)利要求
1.一種治療動物中的過度增殖病癥的方法，該方法包括向需要治療的動物施用一種或 多種組合物，所述組合物包含a)第一制劑，其中所述制劑是分離的IGF-IR(胰島素樣生長因子-1受體)抗體或其片 段，其中所述抗體其片段抑制IGF-IR介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；以及b)第二制劑，其中所述第二制劑是治療上用于治療過度增殖病癥的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二制劑抑制一個或多個生物進(jìn)程，所述生 物進(jìn)程選自由下列生物進(jìn)程構(gòu)成的組a)細(xì)胞生長；b)細(xì)胞增殖；和c)細(xì)胞存活，或者其中所述第二制劑抑制調(diào)節(jié)一個或多個生物進(jìn)程的一種或多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，所 述生物進(jìn)程選自由下列生物進(jìn)程構(gòu)成的組d)細(xì)胞生長；e)細(xì)胞增殖；和f)細(xì)胞存活。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述第二制劑是第二分離的抗體或其片段。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述第二制劑是小分子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述第二制劑是選自由下列物質(zhì)構(gòu)成的組的 大分子a)蛋白；b)多聚核苷酸；c)脂質(zhì)；和d)碳水化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述動物是哺乳動物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述過度增殖病癥選自由下列疾病 構(gòu)成的組癌癥、贅生物、腫瘤、惡性腫瘤、或其轉(zhuǎn)移性病灶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述過度增殖病癥是位于下列部位的贅生物前 列腺、結(jié)腸、腹部、骨、乳房、消化系統(tǒng)、肝臟、胰臟、腹膜、腎上腺、甲狀旁腺、垂體腺、睪丸、卵 巢、胸腺、甲狀腺、眼、頭、頸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、骨盆、皮膚、軟組織、 脾臟、胸部或泌尿生殖道。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述過度增殖病癥是癌癥，所述癌癥選自由下列 疾病構(gòu)成的組上皮鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、腦癌、骨癌、肺癌、胰腺癌、 子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、睪丸癌、甲狀腺癌、頭頸 癌、非小細(xì)胞肺癌、肉瘤和骨肉瘤。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是選自由下列物質(zhì)構(gòu)成的組的分 離的抗體或其片段a)M13-C06.G4. P ；b)M14-Gll.G4. P ；c)M14-C03.G4. ).d)M14-B01.G4. ).e)M12-E01.G4. ).f)M12-G04.G4. ).g)M13-C06.G4. ).aglyh)M14-Gll.G4. ).aglyi)M14-C03.G4. ).aglyj)M14-B01.G4. ).aglyk)M12-E01.G4. ).agly1)M12-G04.G4. )· agly。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是選自由下列物質(zhì)構(gòu)成的組的分 離的Fab抗體a)M13-C06；b)M14-Gll；c)M14-C03；d)M14-B01；e)M12-E01；和f)M12-G04o
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是由雜交瘤細(xì)胞系制備的分離的 抗體，所述雜交瘤細(xì)胞系選自由下列物質(zhì)構(gòu)成的組a)P2A7.3E11 ；b)20C8.3B8 ；c)P1A2.2B11 ；d)20D8.24B11 ；e)PlE2.3B12 ；和f)PlG10.2B8。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是由細(xì)胞系制備的分離的抗體， 所述細(xì)胞系選自由下列物質(zhì)構(gòu)成的組a)以美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)保藏號PTA-7444保藏的中華倉鼠卵巢(CHO)細(xì) 胞系；b)指定以ATCC保藏號PTA-7445保藏的CHO細(xì)胞系；c)以ATCC保藏號PTA-7855保藏的CHO細(xì)胞系；d)以ATCC保藏號PTA-7485保藏的雜交瘤細(xì)胞系；e)以ATCC保藏號PTA-7732保藏的雜交瘤細(xì)胞系；f)以ATCC保藏號PTA-7457保藏的雜交瘤細(xì)胞系；g)以ATCC保藏號PTA-7456保藏的雜交瘤細(xì)胞系；h)以ATCC保藏號PTA-7730保藏的雜交瘤細(xì)胞系；和i)以ATCC保藏號PTA-7731保藏的雜交瘤細(xì)胞系。
15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是由權(quán)利要求14所述的細(xì)胞系制備的分離的抗體，其中所述細(xì)胞系由ATCC保藏說明指定，所述ATCC保藏說明選自由下列保 藏說明構(gòu)成的組a)中華倉鼠卵巢(CHO):C06-40B5 ；CHO DG44Biogen Idec EA03. 14.06 ；b)中華倉鼠卵巢(CHO):C03-2CH0 DG44Biogen Idec DA 03. 14.06 ；c)中華倉鼠卵巢細(xì)胞系G1170 8e6細(xì)胞08. 09. 2006 ；d)雜交瘤8.P2A7. 3D11 ；e)雜交瘤細(xì)胞系:7.20C8. 3B8 ；f)雜交瘤:5.P1A2. 2B11 ；g)雜交瘤:7.20D8. 24. Bll ；h)雜交瘤細(xì)胞系:9.P1E2. 3B12 ；和i)雜交瘤細(xì)胞系:5P1G10.2B8。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合多肽結(jié)構(gòu)域的分離 的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述多肽結(jié)構(gòu)域由胰島素樣生長因子-1受體(IGF-IR)的纖連 蛋白III型結(jié)構(gòu)域-I (FNIII-I)構(gòu)成。
17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是抑制胰島素樣生長因 子-I(IGF-I)和胰島素樣生長因子-2(IGF-2)與IGF-IR結(jié)合的分離的抗體或抗原結(jié)合片 段。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抑制是變構(gòu)性的。
19.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合多肽結(jié)構(gòu)域的分離 的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述多肽結(jié)構(gòu)域由IGF-IR的富半胱氨酸區(qū)域(CRR)構(gòu)成。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述抗體抑制IGF-I和IGF-2配體與IGF-IR的纟口口。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抑制是競爭性的。
22.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合多肽結(jié)構(gòu)域的分離 的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述多肽結(jié)構(gòu)域由IGF-IR的富半胱氨酸區(qū)域(CRR)和第二富亮 氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域(L2)構(gòu)成。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述抗體抑制IGF-I而不抑制IGF-2配體與 IGF-IR的結(jié)合。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抑制是變構(gòu)性的。
25.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合和參考單克隆Fab 抗體片段或由雜交瘤制備的參考單克隆抗體相同的胰島素樣生長因子受體-I(IGF-IR) 表位的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述參考單克隆Fab抗體片段選自由M13-C06、 M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組，所述雜交瘤選自由 P2A7. 3E11、 20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組。
26.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合IGF-IR的分離的 抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段競爭性地抑制參考單克隆Fab抗體片段或 由雜交瘤制備的參考單克隆抗體與IGF-IR的結(jié)合，所述參考單克隆Fab抗體片段選自由 M13-C06、M14-G11、M14-C03、Μ14-Β01、Μ12-Ε01 和 M12-G04 構(gòu)成的組，所述雜交瘤選自由 Ρ2Α7. 3E1U20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組。
27.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第一制劑是特異性結(jié)合IGF-IR的分離的抗 體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段包含和單克隆Fab抗體片段或由雜交瘤制備 的單克隆抗體的抗原結(jié)合域等同的抗原結(jié)合域，所述單克隆Fab抗體片段選自由M13-C06、 M14-G11、M14-C03、M14-B01、M12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組，所述雜交瘤選自由 P2A7. 3E11、 20C8. 3B8、P1A2. 2B1U20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組。
28.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體重鏈和輕鏈可變域 來自單克隆Fab抗體片段，所述單克隆Fab抗體片段選自由M13-C06、M14-G11、M14-C03、 M14-B0UM12-E01 和 M12-G04 構(gòu)成的組。
29.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體重鏈和輕鏈可變域是鼠源。
30.根據(jù)權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體重鏈和輕鏈可變域 來自由雜交瘤制備的單克隆抗體，所述雜交瘤選自由Ρ2Α7. 3E1U20C8. 3Β8, Ρ1Α2. 2Β11、 20D8. 24B1UP1E2. 3Β12 和 P1G10. 2Β8 構(gòu)成的組。
31.根據(jù)權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述一種或多種組合物包含除了 所述第一和第二制劑之外的多種制劑，其中所述多種其它制劑是治療上用于治療過度增殖 病癥的。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用聯(lián)合治療的治療方法，其中多種治療上有用的化合物可聯(lián)合結(jié)合胰島素樣生長因子受體-1(IGF-1R)的抗體。提供了抑制IGF-1R-介導(dǎo)的促生存和腫瘤增殖途徑的特異性人和鼠單克隆抗體及其變體、片段和衍生物。還提供了阻斷配體、胰島素樣生長因子1(IGF-1)和胰島素樣生長因子2(IGF-2)結(jié)合IGF-1R的能力的特異性人和鼠單克隆抗體、以及該種抗體的片段、變體和衍生物。本發(fā)明還包括編碼上述抗體或其片段、變體或衍生物的多聚核苷酸、以及包含該種多聚核苷酸的載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明尤其包括使用本發(fā)明的利用IGF-1R抗體的聯(lián)合治療來治療癌癥的方法。
文檔編號A61K39/395GK102065895SQ200980122583
公開日2011年5月18日 申請日期2009年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月11日
發(fā)明者砍德薩米·哈里哈蘭, 董建英 申請人:比奧根艾迪克Ma公司