專利名稱：：放射性標(biāo)記大分子的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及制備放射性標(biāo)記的大分子的方法，所述大分子例如諸如多肽的生物大分子。本發(fā)明還涉及放射性標(biāo)記的大分子及其藥學(xué)制劑和獸醫(yī)學(xué)制劑。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于體外診斷測(cè)試和體內(nèi)診斷成像、局部放射治療和靶向放射治療的放射性標(biāo)記的大分子。
背景技術(shù)：
：本領(lǐng)域已知產(chǎn)生放射性標(biāo)記的大分子的方法，所述大分子例如包括蛋白、肽和抗體在內(nèi)的多肽。通常，傳統(tǒng)方法依賴于對(duì)大分子主鏈的亞基的簡單取代反應(yīng)，例如多肽中酪氨酸的碘化，或依賴于有機(jī)化學(xué)來制造包含能夠強(qiáng)烈地保留放射性核素(通常是金屬離子)的螯合實(shí)體的衍生物，例如單克隆抗體的螯合物衍生物。對(duì)于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，諸如抗體的多肽的放射性標(biāo)記密度是相當(dāng)大的問題，特別是對(duì)于成像或治療應(yīng)用，其要求在非常少量的材料中高水平的放射性。同樣，如果需要研究一系列不同的金屬放射性同位素的適用性，需要對(duì)于每種金屬定制螯合物化學(xué)。因此，非常期望具有可使用廣泛不同的金屬放射性同位素而不需要對(duì)于放射性標(biāo)記的化學(xué)進(jìn)行重大改變的放射性標(biāo)記大分子的方法。在醫(yī)學(xué)中這將是特別有價(jià)值的，在醫(yī)學(xué)中必須從多樣性的可用的放射性同位素中選擇放射性同位素以確定最適合于不同的診斷和治療應(yīng)用的那些放射性同位素。需要克服或避免已知方法的一個(gè)或多個(gè)缺點(diǎn)或局限性的制備放射性標(biāo)記的大分子的改進(jìn)方法。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供制備放射性標(biāo)記的大分子，特別是放射性標(biāo)記的生物大分子的改進(jìn)方法，或提供現(xiàn)有技術(shù)的備選方法。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了制備放射性標(biāo)記的大分子的方法，所述方法包括在水性介質(zhì)中將大分子與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料接觸，所述水性介質(zhì)包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的PH。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述碳封裝納米顆粒復(fù)合材料為FibrinLite。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述碳封裝納米顆粒復(fù)合材料包含陰離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述陰離子表面活性劑為脫氧膽酸鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)包含陰離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述陰離子表面活性劑為脫氧膽酸鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)包含pH，在該pH時(shí)大分子上凈電荷基本上為零。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)包含基本上與大分子的pi相等的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)還包含通過減弱靜電排斥力來提高納米顆粒和大分子之間的短程弓I力而選擇的電解質(zhì)濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述電解質(zhì)為選自Na、K和Ca的簡單電解質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)中簡單電解質(zhì)濃度在大于約1毫摩爾至約150毫摩爾的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)包含不同于大分子的pi的pH以及大于約1毫摩爾至約150毫摩爾的范圍內(nèi)的簡單電解質(zhì)濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性顆粒芯包含選自以下的放射性同位素或放射性核素99mTC、198AU、213Bi、57C0、51Cr、64CU、67CU、165Dy、169Er、59i^、67Ga、68(;a嚴(yán)Gd、166H0、mIn、113mIn、^Ιλι、23^、24^、1。^、81!^、82!^、186!^、·!^、7^、15^、117"^、8、!·、2。1!!!、9’、169^、19”!·。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性顆粒芯包含99mTc。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子為生物大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物大分子選自多肽、抗體及其片段和衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子為多聚賴氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子被包含在導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體、膠或凝膠之中或之上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括將放射性標(biāo)記的大分子從未標(biāo)記的大分子和/或自由納米顆粒復(fù)合材料中分離。在本發(fā)明的第二方面，提供了放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含多種不同的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含多種不同的放射性標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含適合于成像的放射性標(biāo)記和適合于治療應(yīng)用的放射性標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體、膠或凝膠。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體為醫(yī)療裝置。在本發(fā)明的第三方面，提供包含放射性標(biāo)記的實(shí)體的藥物組合物，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子，以及藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述生物大分子選自多肽、抗體及其片段和衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子為多聚賴氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子為組織特異性大分子、器官特異性大分子、細(xì)胞類型特異性大分子或疾病狀態(tài)特異性大分子。在本發(fā)明的第四方面，提供制備放射性標(biāo)記的醫(yī)療裝置的方法，該方法包括在適合于將所述放射性標(biāo)記的大分子合并入所述醫(yī)療裝置中或合并在所述醫(yī)療裝置上的條件下，將與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子與醫(yī)療裝置接觸。在本發(fā)明的第五方面，提供了放射性標(biāo)記的醫(yī)療裝置，其包含合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上的與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二至第五方面的任一項(xiàng)的醫(yī)療裝置選自診斷裝置和治療裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二至第五方面的任一項(xiàng)的裝置為可注射的醫(yī)療裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子被合并在微粒、納米顆粒或脂質(zhì)體中或合并在微粒、納米顆粒或脂質(zhì)體上。在第二至第五方面任一項(xiàng)的一個(gè)實(shí)施方案中，所述醫(yī)療裝置包含放射性標(biāo)記的大分子，所述放射性標(biāo)記的大分子被包含在導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體之中或之上。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二至第五方面任一項(xiàng)的裝置為可植入的醫(yī)療裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二至第五方面任一項(xiàng)的醫(yī)療裝置為獸醫(yī)裝置。在第六方面，本發(fā)明提供了患者的放射治療的方法，該方法包括給予所述患者治療有效量的放射性標(biāo)記的大分子，其中所述放射性標(biāo)記的大分子包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料相關(guān)聯(lián)的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射治療為對(duì)于肺的內(nèi)部放射治療。例如，所述放射治療是對(duì)于原發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性的肺腫瘤的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子對(duì)于肺是特異性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子為多聚賴氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多聚賴氨酸分子量為約15kd至約30kd。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性顆粒芯包含選自以下的至少一種198Au、213Bi、tdr^Cu^Cdy^Er^Fe^Ga^Ga^GcU-HcKmirummldu^Nd^Pd、81Rb^82Rb,186Re,188Re,75Se,153Sm,117mSn,89Sr,201Th,90Y,169Yb,192Ir0在本發(fā)明的第七方面中，提供了制備與放射性同位素的無活性的原始粒子復(fù)合的大分子的方法，所述方法包括在水性介質(zhì)中將大分子與具有顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料接觸，所述顆粒芯包含放射性同位素的無活性的原始粒子，所述水性介質(zhì)包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的PH。在本發(fā)明的第八方面，提供了復(fù)合物，其包含大分子和具有顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料，所述顆粒芯包含放射性同位素的無活性的原始粒子。在本發(fā)明的第九方面，提供了放射性標(biāo)記大分子的方法，所述方法包括以下步驟(a)在水性介質(zhì)中將大分子與具有顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料接觸，所述顆粒芯包含放射性同位素的無活性的原始粒子，所述水性介質(zhì)包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的PH；以及(b)將所述無活性的原始粒子活化以產(chǎn)生放射性同位素。在本發(fā)明的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述水性介質(zhì)還包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的電解質(zhì)濃度。在第七至第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性同位素的無活性的原始粒子是硼的穩(wěn)定同位素(、)。在第七至第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子被包含在導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體之中或之上。在第七至第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括將所述大分子合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上。在一個(gè)實(shí)施方案中，在活化之前，將大分子合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括在所述活化之前，將所述醫(yī)療裝置給予個(gè)體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述給予包括在所述活化之前，將所述醫(yī)療裝置植入個(gè)體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述活化包括將所述原始粒子暴露于中子束。在第十方面，本發(fā)明提供了患者的放射治療的方法，所述方法包括給予所述患者一定量的復(fù)合物，所述復(fù)合物包含大分子和具有顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料，所述顆粒芯包含放射性同位素的無活性的原始粒子，并且將所述無活性的原始粒子活化以產(chǎn)生放射性同位素，其中當(dāng)所述無活性的原始粒子被活化時(shí)，所述量為治療有效量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述放射性同位素的無活性的原始粒子為硼(硼-10)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述活化包括將所述原始粒子暴露于中子束。在第十一方面，本發(fā)明提供了將患者中的醫(yī)療過程成像的方法，該方法包括將復(fù)合物給予所述患者，并且在所述個(gè)體中檢測(cè)所述復(fù)合物，所述復(fù)合物包含大分子和具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述檢測(cè)包括所述放射性的Y相機(jī)成像(gammacameraimaging)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述復(fù)合物包含雙重標(biāo)記的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述雙重標(biāo)記的大分子包含適合于治療的放射性同位素和適合于成像的放射性同位素。在本發(fā)明的第十二方面，提供了顯像劑，其包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子對(duì)于肺是特異性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子是多聚賴氨酸。在本發(fā)明的第十三方面，提供了診斷影響個(gè)體肺中血液循環(huán)的疾病或疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子，并且在所述個(gè)體中檢測(cè)所述復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子對(duì)于肺是特異性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述大分子是多聚賴氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多聚賴氨酸分子量為約15kd至約30kd。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或疾病狀態(tài)選自肺栓塞、肺氣腫、慢性阻塞性肺疾病^OPD)、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腫瘤和感染。以上所述的發(fā)明概述是非限制性的，并且從優(yōu)選實(shí)施方案的以下詳細(xì)描述以及權(quán)利要求中，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)清晰。附圖簡述現(xiàn)在，參考附圖描述本發(fā)明的優(yōu)選形式，其中圖la=Pt^iFibrinLite與兔免疫球蛋白包被的微孔結(jié)合的影響。在圖所示，在不同條件下將Tc-99mFibrinLite稀釋液(110；100μL)與兔免疫球蛋白(Sigma15006)包被的聚苯乙烯微孔(NuncLockwe11s)結(jié)合。500μΜ檸檬酸鈉pH3.5("pH3.5”)；500μM檸檬酸鈉pH3.5力口10μM脫氧膽酸鈉(“pH3.5D0C")；500μM檸檬酸鈉pH3.5加150mMNaCl("pH3.5+NaCl”)；500μM檸檬酸鈉ρΗ3.5力口10μMDOC力口150mMNaCl("pH3.5+N+D”)；注釋“pH6.0”、“pH6.0+D0C”、“pH6.0+NaCl”以及“pH6.0+N+D”具有相應(yīng)的含義，但PH為6.0而不是pH3.5。條形圖表示雙平行孔的平均值。圖lb:Tc-99mFibrinLite與未包被的微孔、用兔血清白蛋白(SigmaA0764)飽和包被后的微孔或用兔免疫球蛋白(IgG；Sigma15006)飽和包被后的微孔的結(jié)合。條形圖表示雙平行孔的平均值。圖2:Tc-99mFibrinLite與未包被的微孔、用兔免疫球蛋白的免疫制劑(R389；AmericanDiagnostica)飽和包被后的微孔或用IgG的兩種不同鼠單克隆抗體(Mab3689和Mab3471；AmericanDiagnostica)飽和包被后的微孔的結(jié)合。條形圖表示雙平行孔的平均值。圖3在ρΗ3·5(陰影條)或ρΗ6·5(無陰影條)的500mM檸檬酸鈉中，Tc_99mFibrinLite與未包被的微孔、用兔血清白蛋白(SigmaA0764)或用硫酸魚精蛋白(SigmaP4505)飽和包被后的微孔的結(jié)合。條形圖表示雙平行孔的平均值。圖4=FibrinLite與白蛋白結(jié)合的電解質(zhì)誘導(dǎo)將I~c-99mFibrinLite(以110稀釋于所示濃度的氯化鈉溶液中；100μL)與預(yù)先用兔血清白蛋白(SigmaA0764)包被的聚苯乙烯微孔(Nunclockwells)結(jié)合。結(jié)果表示用3個(gè)不同的FibrinLite制劑進(jìn)行的3次獨(dú)立試驗(yàn)。圖5未包被的Tc_99mFibrinLite被注射入麻醉的兔的耳靜脈中之后的循環(huán)系統(tǒng)清除和生物分布。注射之后立即開始一系列圖像的獲取(SiemensDiacamγ相機(jī))；每個(gè)框代表30秒的間隔。圖6多聚賴氨酸(SigmaP4408)處理的Tc_99mFibrinLite被注射入麻醉的兔的耳靜脈中之后的循環(huán)系統(tǒng)清除和生物分布。注射之后立即開始一系列圖像的獲取(SiemensDiacamγ相機(jī))；每個(gè)框代表30秒的間隔。圖7a多聚D賴氨酸(MW4_15kd；SigmaP6403)處理的Tc_99mFibrinLite被注射入麻醉的兔的耳靜脈中之后的循環(huán)系統(tǒng)清除和生物分布。注射之后立即開始一系列圖像的獲取(SiemensDiacamγ相機(jī))；每個(gè)框代表30秒的間隔。圖7b多聚D賴氨酸(MW30_70kd；SigmaP7886)處理的I^c-ggmFibrinLite被注射入麻醉的兔的耳靜脈中之后的循環(huán)系統(tǒng)清除和生物分布。注射之后立即開始一系列圖像的獲取(SiemensDiacamγ相機(jī))；每個(gè)框代表30秒的間隔?？s寫為了方便起見，下文列出了本說明書中使用的下述縮寫本文使用的術(shù)語“SPECT”是單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)的縮寫。本文使用的術(shù)語“PET”是正電子發(fā)射斷層成像術(shù)的縮寫。本文使用的術(shù)語“SIRT”是選擇性內(nèi)部放射治療的縮寫。本文使用的術(shù)語“SMPS”是掃描式電移動(dòng)度顆粒分徑器(scanningmobilityparticlesizing)的縮寫。本文使用的術(shù)語“MCE”是混合纖維素酯的縮寫。本文使用的術(shù)語“PTFE”是聚四氟乙烯的縮寫。本文使用的術(shù)語“D0C”是脫氧膽酸鈉的縮寫。應(yīng)當(dāng)理解，在本文中，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所能認(rèn)同的適合情況，在放射性標(biāo)記的大分子的制備中，具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料(例如，F(xiàn)ibrinLite納米顆粒)的制備和用途的描述能夠采用必要的變換，成為具有包含放射性同位素的無活性的原始粒子的顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料的用途(例如，使用無活性的原始粒子而不是有活性的放射性同位素，以及在無活性的前體實(shí)施方案的情況下的活化步驟)。本文使用的術(shù)語“治療有效量”在其含義內(nèi)包括本發(fā)明中使用的無毒性的但足夠量的化合物或組合物以提供所需的治療效果。根據(jù)諸如被治療的物種、年齡、體重以及個(gè)體的一般情況、并存疾病、被治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度、給予的具體試劑和給藥方式等因素，所需的確切量會(huì)在個(gè)體之間不同。因此，對(duì)于任何給定的情況，本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)方法可以確定合適的“有效量”。在本說明書的上下文中，術(shù)語“包括(comprising)”表示“主要包括，但未必唯一包括”。此外，單詞“包括(comprising)”的變形，例如“包括(comprise)”和“包括(comprises)”具有相應(yīng)的變型的含義。因此，術(shù)語“包括(comprising)”及其變形以包含的含義而不是排它的含義使用，使得其他的整體或特征可以任選地存在于組合物、方法等中，這被描述為包括整體A，或包括整體A和B等。在本說明書的上下文中，術(shù)語“約”應(yīng)被理解為指示本領(lǐng)域技術(shù)人員與給定值相聯(lián)系的通常偏差。在本說明書的上下文中，在給出對(duì)于參數(shù)的范圍的情況下，應(yīng)當(dāng)理解為該參數(shù)包括給出的范圍內(nèi)的所有值，包括給出的范圍的端點(diǎn)。例如，“5至10”的范圍應(yīng)當(dāng)理解為包括5、6、7、8、9和10的值，以及在給出的范圍內(nèi)的任何子范圍，例如包括6至10、7至10、6至9、7至9等子范圍，并且包括在整數(shù)之間的、在給出的范圍的上下文中合理的任何值和范圍,例如5.5,6.5,7.5,5.5至8.5和6.5至9等。在本說明書的上下文中，術(shù)語“多個(gè)”是指大于1的任何數(shù)量。對(duì)于允許的范圍，通過引用將本文引用的所有參考文獻(xiàn)整體并入本文。優(yōu)選實(shí)施方案及其它實(shí)施方案的描述現(xiàn)在，包括僅通過舉例說明的方式，參考以下的實(shí)例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可以選擇合適的pH條件和任選的合適的電解質(zhì)濃度條件來促進(jìn)碳封裝放射性核素的納米顆粒復(fù)合材料和大分子之間的排斥電荷的減少，并因此使短程引力能夠壓倒遠(yuǎn)程靜電排斥力，使得納米顆粒復(fù)合材料(例如，F(xiàn)ibrinLite納米顆粒)變?yōu)閹缀醪豢赡娴嘏c大分子結(jié)合或復(fù)合。因此，本發(fā)明涉及將碳封裝的放射性核素的納米顆粒復(fù)合材料(例如，F(xiàn)ibrinLite)用于大分子的高比活性放射性標(biāo)記的方法，所述大分子能夠進(jìn)行吸引疏水、離子關(guān)聯(lián)或與包含納米顆粒的外部表面的石墨進(jìn)行分散相互作用。通常所述大分子包括生物大分子，例如多肽、抗體等。在具體的實(shí)施方案中，所述方法允許大分子的高親和力放射性標(biāo)記，所述大分子例如在診斷或治療的醫(yī)學(xué)應(yīng)用中使用那些大分子，和在研究應(yīng)用中使用的那些大分子，例9如用于體液或組織樣品中生物標(biāo)志物的具體體外分析，諸如腫瘤標(biāo)志物的疾病標(biāo)志物的體內(nèi)生物分布研究，以及由諸如單克隆抗體的特異性大分子靶向載體所鑒定的其他疾病部位的外部成像。所述方法也可以用于離體標(biāo)記諸如外周血細(xì)胞群體的亞類的完整活細(xì)胞，用于隨后注射入體內(nèi)并且通過成像技術(shù)追蹤器官分布，或在疾病部位的積累。因此，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的方法以及本發(fā)明的產(chǎn)物在放射性標(biāo)記的大分子是有用的任何情況下是有用的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在標(biāo)記的大分子通常遇到的條件下，大分子的高親和力放射性標(biāo)記基本上是不可逆的。通常，所述大分子的高親和力放射性標(biāo)記為，在體內(nèi)的條件下，存在低于約10%的解離。Nair等的日期為2005年12月20日標(biāo)題為“Methodfordetectionoffibrinclots(纖維蛋白凝塊的檢測(cè)方法)”的美國專利第6，977，068號(hào)中描述了在纖維蛋白凝塊檢測(cè)中使用碳封裝的放射性核素納米顆粒的方法。于2006年4月觀日提交并以WO2006/116798Al公開的標(biāo)題為“Amethodofforminganinjectableradioactivecompositionofacarbonencapsulatedradioactiveparticulate(^]^'!'!^性顆粒的可注射放射性組合物的方法)”的國際專利申請(qǐng)第PCT/AU2006/0005M號(hào)描述了生產(chǎn)碳封裝的納米顆粒的可注射制劑的方法。該文描述的方法可以被稱為“FibrinLite法”，并且由此生產(chǎn)的納米顆?？梢员环Q為“FibrinLite”。在允許的范圍內(nèi)，通過引用將US6，977，068和PCT/AU2006/000554(W02006/116798)的全部內(nèi)容并入本文中。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到產(chǎn)生碳封裝納米顆粒復(fù)合材料的水性分散的方法可以包括放射性氣溶膠的水捕獲步驟，并且該步驟可以通過多種方式實(shí)現(xiàn)。例如，用于制造碳封裝納米顆粒復(fù)合材料的放射性氣溶膠的水捕獲步驟可以包括但不限于以下1.文丘里洗滌器中氣溶膠的收集，例如根據(jù)公布于hdustrialandEngineeringChemistry(1951)volume43,part6,pages1358to1363的Ekman禾口Johnstone的方法。2.液體電極上氣溶膠的濃縮，例如根據(jù)公布于jTalanta(Igsi)Volume28,part1，pages43to47的Michalik禾口St印hens的方法。3.旋風(fēng)裝置的使用，例如P.J.Day在US6，508，864(于2003年1月21日公布)中公開的旋風(fēng)裝置。在一個(gè)示例性的實(shí)施方案中，可以使用PCT/AU2006/000M中所述的方法制備碳封裝納米顆粒復(fù)合材料，其中所述方法包括利用美國專利第5，792，241號(hào)中描述的Browitt沉淀器在水中捕獲放射性氣溶膠，通過引用將美國專利第5，792，241號(hào)的全部內(nèi)容并入本文。如本文所述，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了使用可以提供高比活性放射性和大分子的高親和力放射性標(biāo)記的碳封裝納米顆粒(例如，F(xiàn)ibrinLite納米顆粒)的方法。通過提供使用FibrinLite納米顆粒制備放射性標(biāo)記的大分子的方法，本發(fā)明人利用將金屬同位素包裹在碳籠中的碳封裝的方法(參見PCT/AU2006/000554)，使其物理上隔離于與其外部環(huán)境的接觸，這對(duì)于顆粒并從而對(duì)于大分子是特別有價(jià)值的性質(zhì)，特別是當(dāng)它們?cè)隗w內(nèi)使用時(shí)。由于只有納米顆粒復(fù)合材料的碳外部暴露于體內(nèi)的生物環(huán)境，因此放射性標(biāo)記的大分子的放射性金屬離子體內(nèi)浸出和生物攝取的可能性幾乎是不存在的。大分子和醫(yī)學(xué)中用途通過本發(fā)明，提供了將碳封裝的放射性核素的納米顆粒復(fù)合材料(FibrinLite)用于大分子的高比活性放射性標(biāo)記的方法，所述大分子優(yōu)選為生物大分子，例如多肽，包括蛋白、肽，抗體和諸如多聚賴氨酸的聚陽離子。本發(fā)明涉及可以用諸如多肽、蛋白和抗體的大分子包被納米顆粒的方法，這樣得到的顆粒具有可檢測(cè)的放射性標(biāo)記的高比活性的芯以及牢固結(jié)合的多肽。所述多肽可以選自與組織或細(xì)胞表面標(biāo)志物、抗原、受體或結(jié)合位點(diǎn)具有特異性相互作用的多樣性的生物配體?；诖蠓肿优c疾病標(biāo)志物所具有的特異性生物相互作用，放射性標(biāo)記的大分子可用于在體內(nèi)預(yù)定的疾病部位積累治療同位素。例如，具有對(duì)于腫瘤標(biāo)志物的特異性的放射性標(biāo)記的單克隆抗體可用于在腫瘤內(nèi)積累細(xì)胞毒性劑量的治療同位素。在這類應(yīng)用中，放射性同位素通常選自具有短程、高能量發(fā)射的能夠殺死增殖細(xì)胞的那些放射性同位素，例如wSm、’、125〗、131〗、192〗!·、1^^111^、166^)。這種腫瘤放射治療的實(shí)例提供于KaminskLNewEnglandJournalofMedicine352:441—449(2005)。使用放射性標(biāo)記的大分子的另一方法是在醫(yī)學(xué)成像中，例如用于疾病或疾病狀態(tài)的診斷。當(dāng)疾病或疾病狀態(tài)特異于、局限于或影響特定組織、器官或細(xì)胞類型時(shí)，可以選擇對(duì)該組織、器官或細(xì)胞類型具有特異性或?qū)λ黾膊』蚣膊顟B(tài)的特征具有特異性的大分子，所述疾病或疾病狀態(tài)的特征例如生物分子在受影響的狀態(tài)中相對(duì)于未受影響的狀態(tài)中的改變的表達(dá)。例如，如本文所示，F(xiàn)ibrinLite與多聚賴氨酸復(fù)合對(duì)肺組織是選擇性的并且當(dāng)給予至個(gè)體時(shí)優(yōu)先靶向于肺。以這種方式，多聚賴氨酸包被的FibrinLite可被用作診斷影響肺中血液循環(huán)的疾病或疾病狀態(tài)的診斷的顯像劑，所述疾病或疾病狀態(tài)例如肺栓塞、肺氣腫、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腫瘤和感染。所述成像允許醫(yī)生或技術(shù)人員形成肺循環(huán)系統(tǒng)的圖像，例如用來鑒定疾病狀態(tài)的不存在或存在，包括例如其嚴(yán)重程度、其進(jìn)展、其治療有效性。使用的另一方法為以放射性標(biāo)記的納米顆粒的形式用于術(shù)中成像，例如用于腫瘤部位引流淋巴結(jié)的鑒定和定位，例如乳腺癌患者中前哨淋巴結(jié)的成像。在該技術(shù)中，將放射性標(biāo)記的納米顆粒直接注射入腫瘤部位，從該處所述納米顆粒在間質(zhì)液中遷移并進(jìn)入腫瘤部位引流淋巴，最終在最近的(前哨)淋巴結(jié)中積累。在該情況下的同位素選自最適合成像的那些同位素,例如99;Tc。[Lermanetal,EurJNuclMedMolImaging33329-337(2006)]。在該應(yīng)用中，顆粒足夠小以使它們能在組織中的間質(zhì)液中分散并被收集在淋巴引流中；因此通常使用納米顆粒而不是微粒。使用的另一方法是在硼中子俘獲療法(BNCT)中。該方法涉及在疾病部位，通常為諸如成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的腫瘤部位中積累諸如硼-10的穩(wěn)定同位素前體(或原始粒子)，并將低能量中子束應(yīng)用于積累的同位素。腫瘤細(xì)胞中或與腫瘤細(xì)胞鄰近的硼-10在俘獲中子后裂變并且產(chǎn)生的高能量重電荷粒子僅破壞與其緊密相鄰的細(xì)胞，主要破壞癌細(xì)胞，鄰近的正常細(xì)胞大部分不受影響。本發(fā)明提供了諸如溶液或分散液的游離形式的大分子，或包含在醫(yī)療裝置內(nèi)或包含在醫(yī)療裝置上的大分子，所述大分子可以與諸如硼的穩(wěn)定同位素的高親和力和/或高密度放射性前體進(jìn)行制備，從而允許該同位素在治療部位的改善的遞送和濃度。應(yīng)當(dāng)注意，本文中關(guān)于醫(yī)學(xué)中的用途應(yīng)理解為同樣適用于人類應(yīng)用和諸如獸醫(yī)的非人類應(yīng)用。因此應(yīng)當(dāng)理解，除非另外指明，涉及患者、個(gè)體(subject)或個(gè)體(individual)是指人類或非人類，例如具有社會(huì)、經(jīng)濟(jì)或研究重要性的任何物種的個(gè)體，包括但不限于兔、羊、牛、馬、豬、貓、犬、靈長類和嚙齒類物種。類似地，應(yīng)當(dāng)注意，本文中關(guān)于“醫(yī)療”裝置應(yīng)理解為同樣適用于在人類應(yīng)用中和在諸如獸醫(yī)的非人類應(yīng)用中適用的醫(yī)療裝置。本文使用的術(shù)語“裝置”應(yīng)理解為包括可以用于治療中的裝置和可以用于診斷中的裝置，所述治療包括預(yù)防或?qū)嶋H疾病狀態(tài)或癥狀的治療，所述診斷包括在患者身體上或身體內(nèi)進(jìn)行的診斷和用獲自患者身體的樣品進(jìn)行的診斷或?qū)Λ@自患者身體的樣品進(jìn)行的診斷。因此，本文使用的術(shù)語“裝置”包括治療裝置和診斷裝置。本文使用的“診斷”應(yīng)當(dāng)理解為包括在以下情況下進(jìn)行的檢查操作懷疑具有疾病或疾病狀態(tài)，例如初步檢查、預(yù)后、無論是否存在治療時(shí)的疾病或疾病狀態(tài)的進(jìn)展，以及不存在這樣的懷疑，但期望檢查，例如健康檢查、群體篩查或研究的目的。放射性同位素和無活性的前體本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，由于本發(fā)明的方法允許FibrinLite顆粒用于標(biāo)記大分子，因此，可以被合并入FibrinLite納米顆粒中的任何放射性同位素可以用作放射性標(biāo)記大分子的放射性同位素。類似地，可以被合并入FibrinLite納米顆粒中并且能夠活化而產(chǎn)生放射性同位素的放射性同位素的任何無活性的原始粒子可以用于制備無活性的前體-標(biāo)記的大分子并由此用于制備放射性標(biāo)記的大分子。如PCT/AU2006/0005M中所述，多種放射性同位素可以被合并入FibrinLite納米顆粒中，所述放射性同位素包括發(fā)射Y射線的那些同位素，例如Tc-99m、Ga-67;發(fā)射β射線的那些同位素，例如Υ-90;發(fā)射α射線的那些同位素，例如Bi-213；和發(fā)射正電子射線的那些同位素，例如Cu-64?？梢岳萌魏魏线m的金屬放射性同位素，包括198Au、64Cu、213Bi、tdr^Dy^Er^Fe^Ga^Ga^GcUMHcKmirumrnldu^Na^Na^Pd^Rb^Rb、186Re,188Re,75Se,153Sm,117mSn,89Sr,201Th,90Y,169Yb,192Ir0類似地，可以在相關(guān)的實(shí)施方案中利用放射性同位素的任何合適的無活性的前體，包括kiB15可以在FibrinLite納米顆粒中使用并因此在本發(fā)明方法中使用的同位素的范圍包括理想地適用于診斷成像應(yīng)用的那些同位素，所述診斷成像應(yīng)用為例如，使用Tc-99m或Ga-67的單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(SPECT)和使用Cu_64或的正電子發(fā)射斷層成像術(shù)(PET)。此外，還包括適合于如上所述的靶向放射治療的同位素，例如已經(jīng)用于某些類型腫瘤的消融那些同位素，例如用于治療淋巴瘤的Y-90標(biāo)記的單克隆抗體。本發(fā)明提供可選擇的方法，通過該方法可以制備適合于腫瘤診斷成像或適合于腫瘤治療的標(biāo)記的實(shí)體和其它實(shí)體。通常，最適合成像的放射性同位素可能不是最適合治療的。本發(fā)明還包括大分子的雙重標(biāo)記的可能性，其中選擇一種用于最佳成像的同位素，并且選擇另一種用于最佳治療的同位素。該復(fù)合材料旨在允許在將微珠(beads)用于腫瘤治療時(shí)更可靠的劑量測(cè)定，使用成像以促進(jìn)治療劑量的局部化并且還旨在能夠進(jìn)行已經(jīng)遞送至給定器官部位的治療同位素的劑量，和遞送至腫瘤的劑量與遞送至正常宿主組織的劑量相比的外部評(píng)估?？梢酝ㄟ^任何合適的方法制備雙重標(biāo)記的裝置，例如通過將裝置與兩種不同標(biāo)記的大分子接觸或者將裝置與用兩種不同放射性標(biāo)記進(jìn)行標(biāo)記的大分子組合物接觸；其中對(duì)于后者的情況，雙重標(biāo)記的大分子組合物可以使用兩種不同標(biāo)記的FibrinLite組合物(同時(shí)地或連續(xù)地)進(jìn)行制備，或通過制備自身為雙重標(biāo)記的單一FibrinLite復(fù)合材料進(jìn)行制備。通常，12使用兩種不同的同位素制備兩種單獨(dú)的FibrinLite制劑，并且將兩種制劑的混合物用于放射性標(biāo)記大分子。通過改變混合物中兩種制劑的比例，能夠調(diào)節(jié)治療活性，同時(shí)保持適當(dāng)水平的成像活性。對(duì)于某些應(yīng)用，通常對(duì)于某些治療應(yīng)用，產(chǎn)生注射后局部位于靶器官部位的放射性同位素和攜帶無活性的原始粒子的大分子的局部積累是有利的。然后，將器官部位暴露于窄中子束可以活化原始粒子而形成治療同位素。在該實(shí)施方案中，用于裝載大分子的納米顆?？梢园ǚ庋b的穩(wěn)定金屬同位素，例如硼-10(10B)，所述穩(wěn)定金屬同位素是為放射性同位素的無活性的原始粒子，其可以通過暴露于諸如中子束的合適的活化劑進(jìn)行活化而在原位形成治療同位素。通過該方法，可以更安全地并且更有效地局部產(chǎn)生諸如α發(fā)射體的非常短壽命、高能量同位素以用于腫瘤消融的目的。用于放射性標(biāo)記大分子的納米顆粒復(fù)合材料的制劑BTIHigfeIS^"Amethodofforminganinjectableradioactivecompositionofacarbonencapsulatedradioactiveparticulate($^^'!'射性顆粒的可注射放射性組合物的方法)，，的PCT/AU2006/000554(以WO2006/116798公布)制備具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料(FibrinLite)，通過引用將PCT/AU2006/000554的內(nèi)容并入本文。因此通?？梢詫?fù)合材料制備成中性或輕微酸性pH的、包含碳封裝放射性核素的納米顆粒的穩(wěn)定水性分散液。納米顆粒的分散液通常可以包含非常低(例如，約1微摩爾至約20微摩爾的范圍內(nèi)，通常為約10微摩爾)濃度的陰離子表面活性劑，所述陰離子表面活性劑例如脫氧膽酸鈉，其與有生命個(gè)體的血液循環(huán)相容，并且可以注射入有生命個(gè)體的血液循環(huán)中。通常，在放射性標(biāo)記的實(shí)體的治療應(yīng)用或體外診斷應(yīng)用中，可以使用管理機(jī)構(gòu)認(rèn)可的用于在人類或視情況動(dòng)物中靜脈內(nèi)使用(例如，注射)的任何陰離子表面活性劑。如PCT/AU2006/000554中所述，示例性的放射性核素為Tc_99m。每個(gè)納米顆粒在其芯中能夠攜帶數(shù)萬或更多的同位素原子，從而能夠容易獲得明顯高于用傳統(tǒng)標(biāo)記方法可獲得的比活性的非常高水平的比活性。對(duì)于FibrinLite，以及使用Tc-99m作為模型封裝的放射性同位素，可以制備負(fù)載為約ImCi至約100mCi、約5mCi至約IOOmCij^J7.5mCi至約95mCi、約IOmCi至約90mCi、約15mCi至約85mCi、約20mCi至約80mCi、約25mCi至約75mCi、約30mCi至約70mCi、約35mCi至約65mCi、約40mCi至約60mCi、約45mCi至約55mCi或約50mCi至約55mCi的范圍內(nèi)的Tc-99m。根據(jù)所需，顆粒的典型制劑可以容易地制備為在2mL的水懸浮液中包含約ImCi至約30mCi。從使用掃描式電移動(dòng)度顆粒分徑器(SMPS)得到的顆粒的氣相表征中，可以證實(shí)懸浮液能夠包含約50μg的納米顆粒材料，從而使比活性高達(dá)600mCi/mg或超過22GBq/mg?？梢愿鶕?jù)需要，通過改變用于在氣溶膠發(fā)生器中負(fù)載坩堝的同位素的活性來調(diào)整制劑的比活性。如PCT/AU2006/0005M中所述，在FibrinLite方法中可以使用寬范圍的合適的放射性同位素，因此應(yīng)當(dāng)認(rèn)為在本發(fā)明的方法中可以使用寬范圍的同位素。同位素具體的實(shí)例為锝，更具體為"mTc。锝的固體形式可以為高锝酸鈉或PCT/AU2006/000554中所述的電解過程期間產(chǎn)生的任何不溶性形式的锝，例如不溶性氧氯化物。锝可以為锝的放射性同位素的形式?？梢岳闷渌饘俜派湫酝凰鼗蚍派湫院怂?，例如198Aiu64CU、213Bi、57Co、51Cr、165Dy、lfi9Er、59Fe、66Ga、67Ga^8Ga嚴(yán)GCU166HOJllIrKl13mIrK177LiU23NiU24NiU1c13PcU81Rb、82Rb、186Re、188徹、75%、1535!11、11%11、8^、2°1111、巧、16>、19211~、94"^和8^。對(duì)于涉及顆粒裝載并由此用放射性同位素的無活性的原始粒子“標(biāo)記”大分子或包含大分子的裝置的應(yīng)用，可以使用任何合適的無活性的原始粒子。通常可以使用"Β。如PCT/AU2006/0005M中所述，可以將FibrinLite納米顆粒制備為具有非常低電解質(zhì)濃度的穩(wěn)定的水性分散液，所述電解質(zhì)濃度低于l.OmMNaCl當(dāng)量。在制備用于本發(fā)明的FibrinLite顆粒中，可以利用PCT/AU2006/000554中描述的或從中推導(dǎo)出的用于制備FibrinLite顆粒的任何方法。在PCT/AU2006/0005M所述的優(yōu)選方法中，在放射性同位素在2700°C以上燒蝕之前，可以通過將負(fù)載同位素的石墨坩堝在約1600°C至1650°C加熱15秒以去除載體氯化鈉來實(shí)現(xiàn)這點(diǎn)。氯化鈉的沸點(diǎn)僅為1413°C，并且Tc-99m放射性同位素在該溫度下是不揮發(fā)的。當(dāng)在本發(fā)明的方法中利用備選的放射性同位素時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能夠確定燒蝕的合適溫度，例如參考PCT/AU2006/000554。根據(jù)PCT/AU2006/0005M制造的FibrinLite納米顆粒水性分散液在靜置例如48小時(shí)后不絮凝、沉淀或沉積。納米顆粒的分散液可以包含非常低(例如，約1微摩爾至約20微摩爾的范圍內(nèi)，通常為約10微摩爾)濃度的陰離子表面活性劑，所述陰離子表面活性劑通常為脫氧膽酸鈉，其與有生命個(gè)體的血液循環(huán)相容，并且可以注射入有生命個(gè)體的血液循環(huán)中(參見，本文的圖5和圖6)?？梢砸匀魏魏线m的方式保存FibrinLite納米顆粒，優(yōu)選地允許分散液的穩(wěn)定性，例如通過保存在低濃度的弱酸性緩沖液中，例如終濃度為300微摩爾的檸檬酸二氫鈉、PH4.1。納米顆粒的分散液是穩(wěn)定的，并且可以通過使用容易獲得的親水性膜過濾器進(jìn)行尺寸分級(jí)，所述過濾器例如Millipore混合纖維素酯(MCE)注射過濾器，可購得800nm、450nm和220nm的孔隙率。典型的FibrinLite納米顆粒制劑中大于90%的放射性會(huì)通過SOOnm的MCE過濾器，并且通過薄層色譜法能夠顯示相同的制劑通常包含低于5%的可溶性同位素。使用FibrinLite納米顆粒放射性標(biāo)記大分子的條件可以在本發(fā)明的方法中使用由此制備或獲得納米顆粒用于大分子的放射性標(biāo)記。疏水性界面，例如空氣-水界面，碳?xì)浠衔?水界面以及推斷的水性FibrinLite懸浮液中的石墨-水界面，通常在純水中吸引輕微優(yōu)勢(shì)的羥基離子。結(jié)果為，盡管表面電位通常非常低(幾十毫伏)，但這些界面表現(xiàn)為輕微的帶負(fù)電荷。對(duì)于FibrinLite，納米顆粒由于吸附了在其制劑中使用的陰離子表面活性劑，通常為脫氧膽酸鹽，所以納米顆粒也可以在其表面攜帶增加的負(fù)電荷。如果顆粒和大分子在相同水性介質(zhì)中為相似的帶負(fù)電荷的，則當(dāng)它們的擴(kuò)散雙層電荷重疊時(shí)，它們可以以幾十納米的規(guī)?；ハ噍p微排斥。然而，選擇這樣的水性介質(zhì)的PH，其中大分子上的凈電荷基本為零，所述PH例如為大分子的pl，非常迅速地屏蔽該電位，從而在這些系統(tǒng)中提供了對(duì)于顆粒吸附和粘連至大分子的低能屏障。德拜長度<IOnm時(shí)的這樣的屏蔽將產(chǎn)生這樣的情況，其中吸引分散、離子關(guān)聯(lián)或疏水力通常將主導(dǎo)這些表面的總相互作用能量。結(jié)果是，一旦顆粒與大分子結(jié)合，顆粒將以本質(zhì)上不可逆的方式牢固地吸附于該大分子。因此，該條件促進(jìn)大分子和納米顆粒復(fù)合材料的親和結(jié)合(avidbinding)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，其中發(fā)生接觸的介質(zhì)可以包含pH或電解質(zhì)濃度，所述PH或電解質(zhì)濃度通過在范圍和級(jí)別上減小長程靜電排斥力來提高納米顆粒和大分子之間短程引力的影響以壓倒長程靜電排斥力。作為成功接觸的結(jié)果，大分子可以被描述為與納米顆粒復(fù)合材料相關(guān)聯(lián)或與納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合。所得的實(shí)體還可以被稱為復(fù)合物。應(yīng)當(dāng)注意，在本文語境中，術(shù)語“復(fù)合(complex)”和“與...復(fù)合(complexedwith)”在除了作為成功接觸的結(jié)果而發(fā)生的、在接觸中大分子和納米顆粒復(fù)合材料緊密結(jié)合之外，并非意指大分子和納米顆粒復(fù)合材料的任何特別的結(jié)構(gòu)上的排列。在本發(fā)明的方法中，可以通過在合適的pH并優(yōu)選地還有合適的電解質(zhì)濃度的條件下，使納米顆粒和大分子接觸，從而將FibrinLite納米顆粒用于標(biāo)記大分子。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以選擇合適的溶液條件，所述條件促進(jìn)以上所述的屏蔽過程并且因此能夠使短程引力壓倒靜電排斥力，使得FibrinLite納米顆粒幾乎不可逆地與大分子結(jié)合。根據(jù)本文的公開內(nèi)容應(yīng)當(dāng)理解，能夠憑經(jīng)驗(yàn)確定合適的結(jié)合條件以及根據(jù)需要的最佳結(jié)合條件，例如PH和電解質(zhì)濃度，用于納米顆粒和大分子之間所需的接觸。在任何合適的介質(zhì)中可以發(fā)生接觸，盡管通常優(yōu)選水性介質(zhì)。在接觸之前，可以在合適的保存介質(zhì)中制備或保存納米顆粒，所述合適的保存介質(zhì)通常選擇為允許分散液的穩(wěn)定性。因此納米顆粒的分散液可以包含非常低(例如，約10微摩爾)濃度的陰離子表面活性劑，例如脫氧膽酸鈉。在本發(fā)明方法的接觸步驟之前，可以將納米顆粒預(yù)處理以調(diào)整分散液的條件來促進(jìn)納米顆粒與大分子的結(jié)合。例如，可以調(diào)整以下條件例如緩沖液類型、pH、電解質(zhì)濃度和類型、表面活性劑存在或不存在以及任何組分的濃度，包括納米顆粒?？梢栽诖蠓肿哟嬖诨虿淮嬖谙?，進(jìn)行介質(zhì)PH和離子強(qiáng)度的調(diào)整。通常，當(dāng)納米顆粒存在時(shí)，會(huì)在大分子也存在的情況下進(jìn)行介質(zhì)PH和離子強(qiáng)度的調(diào)整，從而促進(jìn)納米顆粒和大分子之間的結(jié)合，而不是僅納米顆粒之間的結(jié)合，僅納米顆粒之間的結(jié)合會(huì)導(dǎo)致聚集和成團(tuán)。本文的實(shí)施例表明，可以通過使用與大分子的pi接近的pH和合適濃度的簡單電解質(zhì)氯化鈉(NaCl)實(shí)現(xiàn)FibrinLite納米顆粒與大分子的結(jié)合，在大于約ImMNaCl的濃度時(shí)，氯化鈉在誘導(dǎo)納米顆粒與大分子的親和結(jié)合中是有效的。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)本文公開的內(nèi)容，可以使用多種電解質(zhì)中的任意一種或多種可以達(dá)到誘導(dǎo)納米顆粒與大分子親和結(jié)合的合適條件。本發(fā)明人在本文中描述，大于約1毫摩爾的簡單電解質(zhì)濃度可以用于誘導(dǎo)納米顆粒與大分子的親和結(jié)合，并因此當(dāng)納米顆粒具有放射性顆粒芯時(shí)，可以用于提供放射性標(biāo)記的大分子的制備。通常，用于接觸的溶液或介質(zhì)的簡單電解質(zhì)濃度預(yù)期為約1毫摩爾至約200毫摩爾的范圍內(nèi)；通常為約10毫摩爾至約175毫摩爾；約20毫摩爾至約150毫摩爾；約50毫摩爾至約150毫摩爾。更通常，溶液的電解質(zhì)濃度預(yù)期為約1毫摩爾至約200毫摩爾；通常為約10毫摩爾至約175毫摩爾；約20毫摩爾至約150毫摩爾；約40毫摩爾至約150毫摩爾；約50毫摩爾至約150毫摩爾；約75毫摩爾至約150毫摩爾；約90毫摩爾至約150毫摩爾；約100毫摩爾至約150毫摩爾；約150毫摩爾。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，通過例如使用NaCl，其中用約150mM濃度的NaCl可以達(dá)到合適的離子強(qiáng)度，或使用例如低于約75mM濃度的MgSO4，可以達(dá)到用于本發(fā)明接觸步驟的電解質(zhì)溶液或介質(zhì)的離子強(qiáng)度。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，通過使用諸如NaCl和MgSO4混合物的許多不同的離子種類，可以達(dá)到電解質(zhì)溶液的合適離子強(qiáng)度。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，通過使用至少一種離子種類和至少一種諸如滲透溶質(zhì)或高分子量聚合物的非離子種類可以達(dá)到離子強(qiáng)度，所述高分子量聚合物例如聚乙二醇。例如，當(dāng)水的有效濃度降低時(shí)，可需要增加電解質(zhì)的濃度，例如以約250mM。本發(fā)明的方法中可以使用任何合適的離子種類。例如，所述離子種類可以選自Na、Ni、Al、Ru、Pt、Os、Ir、Fe,Se,Sn、K、Te、Mn、Mo、V、Mg、Zn、Ca、Cu、Co的鹽。對(duì)于在有生命個(gè)體中的醫(yī)療或獸醫(yī)用途，離子種類通常限于在有效濃度時(shí)無毒性的那些離子，例如Na、K、Ca。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)不存在對(duì)于給定的反應(yīng)條件設(shè)定(例如在接觸步驟中)的任何其它相關(guān)改變時(shí)，用于代替Na的K通常與Na以相同濃度使用，而用于代替Na的Ca通常以Na的一半濃度使用。接觸步驟中使用的緩沖液可以是任何合適的pH。如本文所述，水性介質(zhì)的pH通常選擇為適合于通過抑制靜電排斥力促進(jìn)納米顆粒和大分子之間的短程引力。通常根據(jù)接觸中將使用的大分子選擇緩沖液的PH。優(yōu)選地，緩沖液在約pH3至約pHIO的范圍內(nèi)或更高，約pH3至約pH8、約pH3.5至約pH8.5、約pH4至約pH8、約pH4.5至約pH7.5、約pH5至約PH7。更優(yōu)選地，接觸步驟的pH，例如水性介質(zhì)的pH，接近諸如多肽的在接觸中將使用的大分子的pi。仍然更優(yōu)選地，接觸步驟的PH基本上處于在接觸中將使用的大分子的pi。如本文所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員考慮到諸如電解質(zhì)類型、濃度和大分子的其他反應(yīng)條件可以確定所需PH和最佳pH。接觸可以包含在接觸過程期間的條件的改變，例如接觸期間孵育溫度的升高或降低，或接觸期間介質(zhì)的攪拌或混合的增加或減少。本發(fā)明的方法適合于任何大分子的放射性標(biāo)記。為說明本文所述的方法的普遍實(shí)用性，本文的實(shí)施例證實(shí)了納米顆粒與具有低Pl的蛋白(白蛋白)和具有高Pl的蛋白(魚精蛋白)以及多克隆抗體和單克隆抗體的高親和力結(jié)合?；诒疚奶峁┑拿枋?，顯而易見的是，本發(fā)明的方法適于在用于與FibrinLite接觸的條件下放射性標(biāo)記任何下述大分子所述大分子表面的至少一部分存在疏水區(qū)域(優(yōu)選為大部分的表面)。大分子具有這樣的Pl也是可取的，在所述Pl時(shí)大分子保持其生物活性或返回至接近中性PH后可以恢復(fù)其生物活性。在接觸步驟中，大分子可以以任何合適的形式被提供給FibrinLite納米顆粒，所述合適的形式例如，諸如作為溶液的游離形式，作為例如金屬、合成聚合物的表面上的包被或配體的附著形式，或者整合形式。為了說明，“附著”形式的大分子還可以包括以下情況，其中大分子與諸如導(dǎo)管或微?；蛭⑶?、納米顆粒、脂質(zhì)體的載體、裝置或植入物結(jié)合。附著可以為任何合適的形式，包括大分子與載體、裝置或植入物直接結(jié)合，或者可以為間接的，例如通過一種或多種中間分子或結(jié)合劑，所述中間分子例如在離子交換樹脂上或吸附在結(jié)合表面上。“整合”形式的大分子包括，例如，大分子形成諸如導(dǎo)管、微粒或微球的載體、裝置或植入物的組成部分的情況。包被或封裝可以是部分的或者可以是完全的。大分子也可以呈現(xiàn)在活細(xì)胞或脂質(zhì)體的表面上。因此，當(dāng)在放射性標(biāo)記的醫(yī)療裝置的制備中使用本發(fā)明時(shí)，可以在大分子被合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上或者以其他方式用于醫(yī)療裝置的制備之前，將大分子與碳封裝的納米顆粒(包含放射性同位素或其無活性的原始粒子)接觸并因此被碳封裝的納米顆粒標(biāo)記，或者可以在大分子被合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上或者以其他方式用于醫(yī)療裝置的制備之后進(jìn)行接觸，從而在接觸中使用醫(yī)療裝置或其前體。在接觸步驟中，大分子可以被提供給FibrinLite納米顆粒，所述大分子被包含在導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體之中或之上?？梢圆捎没虿徊捎靡粋€(gè)或多個(gè)其他過程步驟使用放射性標(biāo)記的大分子(或用放射性同位素的無活性的原始粒子“標(biāo)記”的大分子)。當(dāng)實(shí)施一個(gè)其他步驟時(shí)，其可以是與接觸同時(shí)進(jìn)行或者在接觸后進(jìn)行，或者，當(dāng)實(shí)施多個(gè)其他步驟時(shí)，它們可以是其他步驟的組合，與接觸同時(shí)進(jìn)行和在接觸后進(jìn)行。當(dāng)在接觸后實(shí)施其他步驟時(shí)，所述步驟可以在與實(shí)施接觸相同或不同的介質(zhì)的存在下實(shí)施?？梢栽诮佑|后，將放射性標(biāo)記的大分子(或用放射性同位素的無活性的原始粒子“標(biāo)記”的大分子)進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)純化步驟。這可以包括將放射性標(biāo)記的大分子與未標(biāo)記的大分子和/或自由納米顆粒復(fù)合材料分離。在通常的反應(yīng)中，接觸可以導(dǎo)致納米顆粒與大分子理想的結(jié)合以提供放射性標(biāo)記的大分子，同時(shí)未反應(yīng)的組分保留在接觸步驟的水性介質(zhì)中，通常為未與大分子連接的部分納米顆粒復(fù)合材料。去除未反應(yīng)組分是可取的，例如在自由納米顆粒復(fù)合材料是有害的的情況下，例如血液運(yùn)輸至非靶器官。在以下情況時(shí)去除未反應(yīng)組分是可取的，如不去除未結(jié)合的大分子，其將與標(biāo)記的大分子競爭諸如細(xì)胞受體或抗原位點(diǎn)的特異性結(jié)合位點(diǎn)，并從而削弱標(biāo)記的大分子的成像能力或治療能力。未反應(yīng)組分的去除可以是部分的，基本上完全的或者完全的。在該背景下，“部分”去除應(yīng)理解為包括去除任何量的一種或多種未反應(yīng)的或不期望的組分，更通常地，去除高達(dá)約80%、90%或95%的一種或多種未反應(yīng)的或不期望的組分，并且“完全”去除應(yīng)理解為去除大于約95%的一種或多種未反應(yīng)的或不期望的組分。通常優(yōu)選去除至少95%的未反應(yīng)的或不期望的組分，更優(yōu)選去除大于約96^^97^^98%或99%的未反應(yīng)的或不期望的組分。因此，應(yīng)當(dāng)理解，在該背景下，關(guān)于“純化”意圖表示任何程度的純化，由此，與純化步驟前相比，“純化”步驟后的放射性標(biāo)記的大分子(或用放射性同位素的無活性的原始粒子“標(biāo)記的”大分子)包含較少雜質(zhì)，例如接觸中的未反應(yīng)的或不期望的組分。在純化步驟中可以使用能夠?qū)⒎派湫詷?biāo)記的大分子(或用放射性同位素的無活性的原始粒子“標(biāo)記的”大分子)與諸如未結(jié)合的放射性納米顆粒的未反應(yīng)的或不期望的組分分離的任何方法。例如，所述方法可以包括從放射性標(biāo)記的大分子洗去一種或多種不期望的組分，或者可以包括從一種或多種不期望的組分中提取出放射性標(biāo)記的大分子，或者可以包括這些步驟的組合。放射性標(biāo)記的大分子可以被合并或整合入實(shí)體中或合并或整合在實(shí)體上，所述實(shí)體例如生物或非生物實(shí)體，例如載體、裝置或植入物，例如導(dǎo)管或微粒。通常，將被合并或整合入實(shí)體中或合并或整合在實(shí)體上的放射性標(biāo)記的大分子是在溶液、懸浮液或分散液中自由的?？梢允狗派湫詷?biāo)記的大分子附著于實(shí)體，所述實(shí)體例如生物或非生物實(shí)體，例如載體、裝置或植入物，例如導(dǎo)管或微粒。可以通過允許放射性標(biāo)記部分或完全保留的任何合適的方法進(jìn)行附著，包括直接和間接結(jié)合或附著。當(dāng)期望保留放射性標(biāo)記的大分子的生物活性時(shí)，可以通過允許大分子生物活性部分或完全保留的任何合適方法進(jìn)行附著?？梢詫⒎派湫詷?biāo)記的大分子用于諸如載體、裝置或植入物的實(shí)體的包被或封裝。所述包被或封裝可以是部分的或者可以是完全的。醫(yī)療裝置，例如，諸如血管移植物和支架的可植入裝置，可以包括本領(lǐng)域已知的另外的改進(jìn)。例如，所述裝置可以包含生物活性，例如生物活性包被，所述包被具有例如通過包含抗血栓形成劑、抗生素、抗細(xì)菌劑或抗病毒劑而得到的抗血栓形成和/或抗感染性質(zhì)。具有生物活性包被的可植入裝置的制備在本領(lǐng)域是已知的并且例如在I^tnaik等的標(biāo)題為"Methodforimpartingabio-activecoatingmodified(給予改良的生物活性包被的方法)，，的美國專利第6，803，069號(hào)中描述，通過引用將其全部內(nèi)容并入本文。放射性標(biāo)記多肽本發(fā)明提供放射性標(biāo)記大分子，特別是放射性標(biāo)記生物大分子的方法。所述大分子包括多肽。應(yīng)當(dāng)理解，本文使用的術(shù)語“多肽”意指通過肽鍵連接的任何氨基酸聚合物?！岸嚯摹笨梢允侨魏伍L度的，包括但不限于，小于約50個(gè)氨基酸的分子和多于約50個(gè)氨基酸的分子。因此，本文使用的術(shù)語“多肽”包括也可以被可選擇地稱為“肽”的氨基酸聚合物，例如由約10-50個(gè)氨基酸組成的分子。氨基酸可以包括天然存在的那些氨基酸以及在實(shí)驗(yàn)室中合成而不是天然存在的那些氨基酸，例如天然存在的天然L構(gòu)型的D立體異構(gòu)體。多肽可以是線性形式、分支形式或環(huán)化形式的天然存在的肽。為清晰起見，即，應(yīng)當(dāng)注意術(shù)語“多肽”也包括蛋白，所述蛋白包括全長蛋白以及蛋白的免疫原片段、截短的或部分的序列，蛋白的生物學(xué)活性和無活性類似物和變體以及蛋白的前體形式。大分子可以是聚陽離子，例如多聚賴氨酸和魚精蛋白，所述多聚賴氨酸包括多聚D賴氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，多聚賴氨酸分子量為約Ikd-約5kD或約^d-約Kkd，或約15kd-約30kd，或約30kd_約40kd，或約40kd_約50kd，或約50kd_約60kd，或約60kd_約70kd，或約70kd-約80kd，或約80kd-約90kd，或約90kd_約100kd。本發(fā)明的多肽包括天然存在的多肽，無論其是分離自或來源于天然存在來源，例如從生物物理上進(jìn)行提取、純化或分離，還是以諸如化學(xué)合成或重組產(chǎn)生或體外無細(xì)胞合成的任何方法產(chǎn)生。納米顆粒與本發(fā)明的表面結(jié)合多肽的復(fù)合物可被用為探針或檢測(cè)器類，所述探針或檢測(cè)器類對(duì)于檢測(cè)或測(cè)定具有與所述表面結(jié)合多肽的特異性相互作用的任何配體是有用的。多肽可以選自不同種類的分子，例如以下非限制性實(shí)例。大分子包括多肽，所述多肽包含對(duì)于以下的特異性結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)蛋白、多聚體蛋白的亞基或單體鏈、細(xì)胞表面受體、或諸如免疫學(xué)標(biāo)志物或腫瘤診斷或預(yù)后標(biāo)志物的細(xì)胞表面標(biāo)志物抗原。多肽與細(xì)胞表面受體的結(jié)合也會(huì)具有生物學(xué)功能，例如誘導(dǎo)對(duì)于受影響的細(xì)胞的抗增殖效應(yīng)或誘導(dǎo)凋亡。在體外活細(xì)胞將標(biāo)記的探針內(nèi)化，在它們被引入有生命個(gè)體中后，可以實(shí)現(xiàn)隨后體內(nèi)細(xì)胞的生物分布或組織或器官局部化成像。大分子包括抗體或免疫球蛋白片段，所述抗體或免疫球蛋白片段與細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)蛋白、多聚體蛋白的亞基或單體鏈、細(xì)胞表面受體、或諸如免疫學(xué)標(biāo)志物或腫瘤診斷或預(yù)后標(biāo)志物的細(xì)胞表面標(biāo)志物抗原反應(yīng)。在體外活細(xì)胞將標(biāo)記的探針內(nèi)化，在它們被引入有生命個(gè)體中后，可以實(shí)現(xiàn)隨后體內(nèi)細(xì)胞的生物分布成像。根據(jù)本發(fā)明，動(dòng)物或人抗血清的IgG組分可以使用本文所述的方法與諸如FibrinLite納米顆粒的納米顆粒的表面結(jié)合，并且使用任何已知的免疫測(cè)定的放射性測(cè)量方法，可以將所得的標(biāo)記的探針用于例如檢測(cè)或測(cè)定組織樣品提取物或體液樣品中與所述免疫IgG特異性地反應(yīng)的相應(yīng)抗原。反應(yīng)性抗原可以具有醫(yī)學(xué)重要性，例如作為癌癥患者中的腫瘤標(biāo)志物，在該情況下樣品的免疫測(cè)定會(huì)得到對(duì)診斷、預(yù)后或治療控制有價(jià)值的信肩、ο在將標(biāo)記的探針注射或局部遞送(例如，通過動(dòng)脈導(dǎo)管)至有生命個(gè)體中后，目的配體可以接近標(biāo)記的探針。然后，通過諸如單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(SPECT)或正電子發(fā)射斷層成像術(shù)(PET)的領(lǐng)域內(nèi)已知的方法，可以將來自標(biāo)記的探針的信號(hào)用于外部成像。因此，可以體內(nèi)測(cè)定目的配體的定位和局部濃度。然后，通過領(lǐng)域內(nèi)已知的任何手段的成像可以顯示可能由于諸如腫瘤的病理損傷的配體在組織或器官部位的存在或過多。然后，人和動(dòng)物的活體中探針定位的外部成像可以具有診斷、預(yù)后或治療價(jià)值，例如在癌癥患者的評(píng)估和治療安排中。在一個(gè)實(shí)施方案中，目的配體可以作為藥物、診斷或治療物質(zhì)、感染劑或外來物質(zhì)存在于生物樣品或有生命個(gè)體中，并且通過使用標(biāo)記的探針以及本文的任何方法對(duì)其進(jìn)行的檢測(cè)和測(cè)定可以給出關(guān)于患者的疾病狀態(tài)或?qū)μ囟ㄖ委煹姆磻?yīng)的臨床重要數(shù)據(jù)。在另一實(shí)施方案中，體內(nèi)目的配體的局部豐度可以是患者對(duì)藥物的反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，所述藥物以諸如細(xì)胞毒性藥的治療劑或諸如射線治療的預(yù)定劑量的放射治療給予，在該情況下使用放射性標(biāo)記的探針的目的配體的定位和豐度的成像可以提供諸如腫瘤對(duì)化學(xué)治療或放射治療的反應(yīng)或缺乏反應(yīng)的早期指征。這對(duì)于治療醫(yī)師能夠在需要的情況下對(duì)癌癥患者的化學(xué)治療或放射治療安排做出早期改變是有價(jià)值的。本文所述的FibrinLite納米顆粒可以攜帶放射性同位素作為可用于離體放射性檢測(cè)或體內(nèi)成像的可檢測(cè)的標(biāo)記。在另一實(shí)施方案中，同位素可以選自適合于局部放射治療的那些治療放射性核素，例如WSm^Y^Ir^PcU111^!和166Ho。在該情況下，可以選擇用于包被FibrinLite的抗體(例如，單克隆抗體)，從而通過抗體對(duì)已知配體的特異性的手段，能夠?qū)⒅委焺┝康耐凰囟ㄎ辉陬A(yù)定的組織或器官部位，所述已知配體作為疾病狀態(tài)結(jié)果在所述部位過多存在，例如癌癥患者中腫瘤標(biāo)志物。本發(fā)明人之前描述了使用可以合并入納米顆粒中的不同種類的放射性同位素，包括Y(例如，Tc-99m)、β(例如，Υ-90)、α(例如，Bi-213)或正電子(例如，Cu-64)發(fā)射體。部分的這些同位素理想地適合于成像應(yīng)用(例如，SPECT使用Tc-99m或Ga-67,PET使用Cu-64,Ga-68或Zr-89)。部分的這些同位素適合于上文所述的靶向放射治療，并且事實(shí)上在本領(lǐng)域內(nèi)已知用于某些類型的腫瘤的消融，例如，Y-90用于結(jié)腸直腸癌肝轉(zhuǎn)移的局部消融。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過諸如尺寸排阻色譜(分子篩)或離心的本領(lǐng)域內(nèi)已知的數(shù)種方法中的任意方法，可以將具有結(jié)合的蛋白的納米顆粒復(fù)合材料與任何過量的未結(jié)合的蛋白分離。然而，應(yīng)該注意到，多肽、蛋白或抗體的溶液不需要具有能飽和納米顆粒表面的高濃度。相反，可以使用亞飽和濃度，并且可以使用非活性蛋白(passiveprotein)完成表面飽和，并從而保持標(biāo)記的探針的特異性。例如，如果納米顆粒用于標(biāo)記對(duì)腫瘤標(biāo)志物有特異性的單克隆抗體，并且抗體的可獲得量是受限的，則可以用非免疫Y球蛋白或免疫測(cè)定
技術(shù)領(lǐng)域：
人員已知的其他商業(yè)封閉劑來完成納米顆粒的表面飽和。這會(huì)在免疫測(cè)定中防止FibrinLite顆粒與不相關(guān)的蛋白或塑料表面的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)納米顆粒復(fù)合材料可被用于標(biāo)記將在體內(nèi)成像用途中使用的探針時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意，靜脈注射的未包被的納米顆粒復(fù)合材料在20分鐘內(nèi)被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)幾乎完全從循環(huán)中清除，所述網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)即諸如肝的Kupffer細(xì)胞的吞噬細(xì)胞。因此，對(duì)于體內(nèi)成像，有時(shí)需要使用具有特定包被的納米顆粒復(fù)合材料制劑，所述包被被設(shè)計(jì)為延長納米顆粒復(fù)合材料標(biāo)記的探針在循環(huán)中的存在，并因此允許探針與特定靶標(biāo)結(jié)合更長時(shí)間。在這類情況下，可以選擇這樣的的包被其適合于從循環(huán)系統(tǒng)中所需的清除速率，并且補(bǔ)充納米顆粒表面上的探針蛋白。為此目的，包被可以選自諸如聚乙二醇(PEG)的已知能延長循環(huán)持久性的那些分子或被肝的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)用作清除劑的受體拮抗劑。在體內(nèi)使用之前，也可以用純化的血漿蛋白包被納米顆粒復(fù)合材料的表面，從而減少諸如補(bǔ)體系統(tǒng)的體內(nèi)反應(yīng)性血液組分的結(jié)合。可以使用的血漿蛋白的實(shí)例包括經(jīng)典粘附蛋白，例如玻連蛋白和纖連蛋白。用這些蛋白直接包被顆粒也可以用于實(shí)現(xiàn)顆粒與其他特異探針蛋白通過蛋白化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員已知的交聯(lián)劑進(jìn)行結(jié)合。當(dāng)發(fā)現(xiàn)探針蛋白與FibrinLite顆粒直接結(jié)合可降低對(duì)于探針的特異性配體的親和力時(shí)，這樣做是可取的。該概念可以擴(kuò)展到在顆粒表面上的多層復(fù)合材料，其也用于增加呈現(xiàn)的相互作用位點(diǎn)的表面密度，或增加物理顆粒大小，或促進(jìn)與甚至具有不同的受體種類或特異性的細(xì)胞表面受體的多位點(diǎn)相互作用。用蛋白和抗體包被FibrinLite納米顆粒復(fù)合材料的方法可以根據(jù)PCT/AU2006/0005M制備碳封裝的放射性核素的納米顆粒復(fù)合材料?？梢灾苽浒挤庋b的放射性核素(例如，Tc-99m)的納米顆粒的中性或微酸性pH的穩(wěn)定水性分散液。納米顆粒的分散液也可以包含非常低(例如，10微摩爾)濃度的陰離子表面活性劑脫氧膽酸鈉，其與有生命個(gè)體的血液循環(huán)相容，并且可以注射入有生命個(gè)體的血液循環(huán)中(參見，本文的圖5和圖6)。這些顆粒中的每一個(gè)能夠攜帶數(shù)萬或更多的同位素原子作為標(biāo)記源，從而能夠容易地獲得非常高水平的比活性，該比活性明顯高于用傳統(tǒng)標(biāo)記方法可獲得的那些比活性。對(duì)于具有作為模型封裝的放射性同位素的Tc_99m的納米顆粒復(fù)合材料，能夠?qū)⒓{米顆粒的典型制劑容易地制備為，按照需要在2mL的水性懸浮液中包含約ImCi-約30mCi。從使用掃描式電移動(dòng)度顆粒分徑器(SMPS)技術(shù)得到的顆粒的氣相表征中，能夠證實(shí)該懸浮液包含約50μg的納米顆粒材料，從而使產(chǎn)生的比活性高達(dá)600mCi/mg或超過22GBq/mg。碳封裝過程將金屬同位素包裹在碳籠中，使其物理上隔離于與其外部環(huán)境的接觸，這是對(duì)于顆粒在體內(nèi)使用時(shí)的特別有價(jià)值的性質(zhì)。放射性金屬離子的浸出和生物攝蕖的可能性幾乎是不存在的。只有納米顆粒復(fù)合材料的碳外部暴露于體內(nèi)的生物環(huán)境。由于所述碳是石墨形式，所以其具有天然吸附性質(zhì)，并且這可以用作對(duì)于所選擇的多肽的物理吸附的基礎(chǔ)。無論如何，需要首先確定有利于多肽附著的合適的條件，并且以下研究和實(shí)例說明如何確定這些條件。FibrinLite納米顆粒復(fù)合材料能夠通過涉及其石墨表面的疏水或分散相互作用而高親和力結(jié)合。為了使石墨表面與諸如多肽的大分子形成疏水相互作用，該多肽必需能夠以非常近的距離接近石墨表面，因此需要靜電排斥力被抑制。本發(fā)明人證實(shí)當(dāng)多肽被提供給具有最小凈表面電荷的納米顆粒制劑，或通過將PH調(diào)整至接近多肽的等電點(diǎn)，或通過用合適濃度的電解質(zhì)抗衡離子屏蔽多肽的電荷時(shí)，可以滿足該條件。結(jié)合經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)可被用于確定合適的結(jié)合條件。盡管下文研究和實(shí)例集中于FibrinLite納米顆粒復(fù)合材料與免疫球蛋白相互作用，應(yīng)當(dāng)理解同樣的方法可被用于確定FibrinLite納米顆粒復(fù)合材料與幾乎任何多肽的相互作用的合適條件。生物醫(yī)學(xué)研究、醫(yī)學(xué)診斷和治療用途中大部分抗體由屬于IgG類免疫球蛋白的血漿Y球蛋白組成。盡管血漿中大部分球蛋白具有pH4.5-pH6.5的等電點(diǎn)，但I(xiàn)gG包含等電點(diǎn)主要為5.5-8.0的多種不同個(gè)體蛋白。然而，可以假定，例如，在pH3.5下，白蛋白比大部分血漿IgG離它的等電點(diǎn)更近，而在pH6.0下，大部分IgG比白蛋白離它們的等電點(diǎn)更近。從而IgG并且因此大部分抗體在中性pH或接近中性pH下會(huì)具有最少的電荷并且應(yīng)該完全20能與FibrinLite相互作用。本文中發(fā)明人描述了方法，通過該方法可以誘導(dǎo)大分子與碳封裝的納米顆粒復(fù)合材料的親和結(jié)合。通過結(jié)合優(yōu)選的實(shí)施方案和實(shí)例說明本文的描述?；诒疚牡拿枋?，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)意識(shí)到，當(dāng)使用備選方案時(shí)，可以憑經(jīng)驗(yàn)確定合適的條件，這些備選方案包括放射性同位素或其無活性的原始粒子、大分子、電解質(zhì)和PH。藥物制劑和/或治療制劑本發(fā)明還提供放射性標(biāo)記的大分子的藥物組合物和治療組合物，所述放射性標(biāo)記的大分子例如放射性標(biāo)記的生物大分子，其中所述大分子與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料(FibrinLite)相關(guān)聯(lián)。通常地，對(duì)于醫(yī)療用途，本發(fā)明化合物的鹽為藥學(xué)可接受的鹽，盡管其它鹽用于發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽的制備。藥學(xué)可接受的鹽是指在正確的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適于用于與人或低等動(dòng)物的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)等，并且是與合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比相匹配的那些鹽。藥學(xué)可接受的鹽在本領(lǐng)域是公知的。S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences,1977,66:1-19中詳細(xì)描述了藥學(xué)可接受的鹽。所述鹽可以在本發(fā)明化合物最終分離和純化期間原位制備，或通過將游離堿性功能團(tuán)與合適的有機(jī)酸反應(yīng)來單獨(dú)制備。代表性的酸加成鹽包括，乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲基磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。代表性的堿或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒銨、季銨和胺陽離子，其包括但不限于銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺、三乙醇胺等。常規(guī)給藥方式包括注射(皮下、靜脈內(nèi)等)、口服給藥、吸入、經(jīng)皮施用、局部乳膏或凝膠或粉劑、或者直腸給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，給藥方式為腸胃外給藥。在另一實(shí)施方案中，給藥方式為口服給藥。根據(jù)給藥途徑，可以用材料包被制劑和/或化合物以保護(hù)化合物免受可以使化合物治療活性失活的酶、酸和其它自然條件的作用。化合物還可以腸胃外或腹膜內(nèi)給藥。本發(fā)明化合物的分散液還可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇及其混合物和油中制備。在通常的保存和使用條件下，藥物制劑可以包含防腐劑以防止微生物生長。適合于注射的藥物組合物包括無菌水性溶液(可溶于水的情況下)或分散液和用于無菌注射溶液或分散液的即用型制劑的無菌粉劑。理想地，組合物在制備和保存條件下是穩(wěn)定的，并且可以包含防腐劑以穩(wěn)定組合物來對(duì)抗諸如細(xì)菌和真菌的微生物的污染作用。本發(fā)明的化合物可以口服給藥，例如用惰性稀釋劑或可吸收可食用的載體口服給藥?；衔锖推渌煞诌€可以裝入硬殼或軟殼明膠膠囊中，被壓縮為片劑或直接合并入個(gè)體的飲食中。對(duì)于口服治療給藥，化合物可以與賦形劑合并并且以可攝取片劑、含服片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮液、糖漿劑、薄片等形式使用。適宜地，這樣的組合物和制劑可以包含以重量計(jì)至少的活性化合物。當(dāng)然，本發(fā)明化合物，通常為藥物組合物和制劑中的放射性標(biāo)記的多肽的百分比可以變化，例如可以方便地為劑量單位重量的約2%至約90%、約5%至約80%、約10%至約75%、約15%至約65%、、約20%至約60%、約25%至約50%、約30%至約45%或約35%至約45%。治療上有用的組合物中的化合物的量為可獲得合適的劑量。術(shù)語“藥學(xué)可接受的載體”旨在包括溶劑、分散介質(zhì)、包被、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑等。這些介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)的用途在本領(lǐng)域是公知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與化合物是不相容的，否則考慮其在治療組合物和治療及預(yù)防方法中的用途。補(bǔ)充的活性化合物也可以被合并入本發(fā)明的組合物中。以劑量單位形式配制的腸胃外組合物以用便于給藥和劑量的均勻性是特別有利的。本文使用的“劑量單位形式”是指適合作為用于待治療個(gè)體的單元式劑量的物理分離單位(physicallydiscreteunits)；包含預(yù)定量化合物的每一單位經(jīng)過計(jì)算可與需要的藥物載體聯(lián)合產(chǎn)生所需的治療效果。為了方便并有效的給藥，化合物可以以有效量與適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的載體配制在可接受的劑量單位中。在組合物包含補(bǔ)充的活性成分的情況下，參考所述成分的通常劑量和給藥方式來確定劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體為可口服給藥的載體。藥物組合物的另一形式是配制為適合于口服給藥的腸衣顆粒、片劑或膠囊劑的劑型。本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括延遲釋放制劑。本發(fā)明的化合物還可以以“前藥”的形式進(jìn)行給藥。前藥是化合物的無活性的形式，其在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性形式。合適的前藥包括化合物活性形式的酯、磷酸酯等。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可通過注射進(jìn)行給藥。對(duì)于可注射溶液，載體可以為包含諸如水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)、其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。例如，通過使用諸如卵磷脂的包被，在分散液的情況下通過保持需要的粒度以及通過使用表面活性劑，可以保持合適的流動(dòng)性。通過包括各種抗細(xì)菌劑和/或抗真菌劑能夠?qū)崿F(xiàn)微生物作用的預(yù)防。合適的試劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的并且包括例如對(duì)羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、芐醇、抗壞血酸、硫汞撒(thimerosal)等。在許多情況下，可以優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如糖、諸如甘露醇、山梨糖醇的多元醇、氯化鈉。通過在組合物中包含諸如單硬脂酸鋁和明膠的延遲吸收的試劑可以實(shí)現(xiàn)可注射組合物的延長吸收?？梢酝ㄟ^以下制備無菌可注射溶液將適當(dāng)溶劑中所需量的類似物與一種上文列舉的成分或其組合合并，視需要，隨后過濾滅菌。通常地，通過將類似物并入無菌媒介中來制備分散液，所述媒介包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自上文列舉的所需的其它成分。片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等還能夠包含以下結(jié)合劑，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例如磷酸氫鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；和甜味劑，例如蔗糖、乳糖或糖精或調(diào)味劑，例如薄荷、冬青油或櫻桃調(diào)味劑。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時(shí)，除了以上類型的材料外，其能夠包含液體載體。各種其它材料可以作為包被存在或者以其他方式修飾劑量單位的外形。例如，能夠用蟲膠、糖或兩者包被片劑、丸劑或膠囊劑。糖漿劑或酏劑能夠包含類似物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的尼泊金甲酯或尼泊金丙酯、染料和諸如櫻桃或桔子調(diào)味劑的調(diào)味劑。當(dāng)然，在制備任何劑量單位形式中使用的任何材料應(yīng)當(dāng)是藥學(xué)純的并且在使用的劑量下是基本上無毒的。此外，類似物能夠被合并入緩釋制劑和藥劑中。優(yōu)選地，藥物組合物還可以包括合適的緩沖液以最小化酸水解。合適的緩沖劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的并且包括但不限于磷酸鹽、檸檬酸鹽、碳酸鹽及其混合物。本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物可以進(jìn)行單次或多次給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虼_定本發(fā)明化合物和/或組合物的有效、無毒劑量水平，以及確定適合于治療所述化合物和組合物適用的疾病和/或感染的給藥方式。此外，能夠使用常規(guī)治療過程測(cè)定試驗(yàn)確定最佳治療過程對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，所述最佳治療過程例如每日給予的本發(fā)明化合物或組合物的劑量數(shù)，持續(xù)限定的天數(shù)。通常，每M小時(shí)的有效劑量可以為約0.OOOlmg每kg體重至約IOOOmg每kg體重；例如,約0.OOlmg每kg體重至約750mg每kg體重；約0.Olmg每kg體重至約500mg每kg體重；約0.Img每kg體重至約500mg每kg體重；約0.Img每kg體重至約250mg每kg體重；或約1.Omg每kg體重至約250mg每kg體重。更適合地，每M小時(shí)的有效劑量可以為約1.Omg每kg體重至約200mg每kg體重；約1.Omg每kg體重至約IOOmg每kg體重；約1.Omg每kg體重至約50mg每kg體重；約1.Omg每kg體重至約25mg每kg體重；約5.Omg每kg體重至約50mg每kg體重；約5.Omg每kg體重至約20mg每kg體重；或約5.Omg每kg體重至約15mg每kg體重。可選地，有效劑量可以高達(dá)約500mg/m2。例如，通常，有效劑量預(yù)期為約25mg/m2至約500mg/m2、約25mg/m2至約350mg/m2、約25mg/m2至約300mg/m2、約25mg/m2至約250mg/m2、約50mg/m2至約250mg/m2和約75mg/m2至約150mg/m2。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物的給藥量可以為約IOOmg每天至約IOOOmg每天,例如,約200mg每天至約750mg每天、約250mg每天至約500mg每天、約250mg每天至約300mg每天或約270mg每天至約^Omg每天。本發(fā)明的化合物可以作為治療方案的一部分與其它藥物一起給藥。給予活性化合物的組合是可取的，例如用于治療特殊疾病或疾病狀態(tài)的目的。因此，可以將兩種或更多種藥物組合物組合為適于組合物共同給藥的試劑盒的形式，其中至少一種包含本發(fā)明的化合物，這在本發(fā)明的范圍內(nèi)?，F(xiàn)在，將參考以下實(shí)施例，僅通過舉例說明的方式，更詳細(xì)地描述本發(fā)明。該實(shí)施例旨在用作說明本發(fā)明并且不應(yīng)當(dāng)解釋為限制貫穿本說明書的描述的公開內(nèi)容的通用性。實(shí)施例實(shí)施例1.在該系列實(shí)驗(yàn)中，按照以下研究了FibrinLite與、球蛋白在不同的pH條件下的結(jié)合。將96孔微板中的微孔用兔免疫球蛋白飽和包被之后進(jìn)行結(jié)合測(cè)試，這使得在結(jié)合和多步洗滌步驟之后能夠?qū)为?dú)的孔的放射性進(jìn)行個(gè)別測(cè)定。在PH3.5和pH6.0下都使用檸檬酸鹽緩沖液(500μΜ)，以能夠在非常低的電解質(zhì)濃度和生理電解質(zhì)濃度下直接比較pH對(duì)結(jié)合的影響，隨后詳述。pH對(duì)于FibrinLite與兔免疫球蛋白包被的微孔結(jié)合的影響首先用兔免疫球蛋白(IgG，Sigma15006)飽和包被聚苯乙烯微孔(Nunc-ImmunoLockffe11模塊)。用500μg/mL(100μL/孔)的IgG溶液在攪拌下37°C包被孔3小時(shí)。在不同緩沖液條件下，將稀釋的(110)Tc-99mFibrinLite與包被的聚苯乙烯微孔接觸，所述條件以條件⑴至(viii)列出，即⑴500μM檸檬酸鈉pH3.5(低電解質(zhì)條件)；(ii)500μM檸檬酸鈉ρΗ3.5力口10μM脫氧膽酸鈉(DOC)；(iii)500μM檸檬酸鈉pH3.5力口150mMNaCl；(iv)500μM檸檬酸鈉pH3.5加10μM脫氧膽酸鈉加150mMNaCl；(ν)500μM檸檬酸鈉pH6.0(低電解質(zhì)條件)；(vi)500μM檸檬酸鈉ρΗ6.0力口10μM脫氧膽酸鈉(DOC)；(vii)500μM檸檬酸鈉ρΗ3.5力口150mMNaCl；以及(viii)500μM檸檬酸鈉ρΗ6.0力口10μM脫氧膽酸鈉加150mMNaCl。在37°C下攪拌孵育20分鐘以允許結(jié)合，然后，在單獨(dú)分別的孔中的放射性計(jì)數(shù)之前，用水沖洗孔五次。如圖Ia中所示，與FibrinLite與未包被的聚苯乙烯微孔的結(jié)合(數(shù)據(jù)未顯示)相反，與IgG包被的孔的結(jié)合在pH6.0時(shí)比在pH3.5時(shí)更強(qiáng)，并且不需要添加電解質(zhì)就可以獲得可觀的放射性標(biāo)記密度。事實(shí)上，不同于FibrinLite與未包被的聚苯乙烯孔的結(jié)合，添加150mM氯化鈉并未增強(qiáng)與IgG包被的結(jié)合。一旦結(jié)合，在不存在電解質(zhì)情況下附著的FibrinLite顆粒也保持高親和力，正如結(jié)合測(cè)定中多次沖洗后放射性標(biāo)記的保留所證實(shí)的。另外，在10μM離子表面活性劑脫氧膽酸鈉存在的存在情況下，顆粒與IgG包被之間的結(jié)合在pH6.0仍然發(fā)生，這指示不需要電解質(zhì)的強(qiáng)的、穩(wěn)定的相互作用。相比之下，在ρΗ3.5時(shí)獲得的較低結(jié)合顯著地被脫氧膽酸降低(圖la)。在另一實(shí)驗(yàn)中，研究了Tc_99mFibrinLite稀釋液(110；100μL)與預(yù)先用白蛋白或免疫球蛋白包被的聚苯乙烯微孔(NuncLockwells)的結(jié)合。通過與等分部分(100μL/孔)的兔血清白蛋白(SigmaA0764；250μg/mL)或兔免疫球蛋白(IgG,Sigma15006，250μg/mL)在37°C下攪拌孵育3小時(shí)來包被微孔。將FibrinLite110稀釋到0.5mMpH6.3的檸檬酸鈉緩沖液中，并且將等分部分(IOOyL)的稀釋液分配至包被的并沖洗的微孔上，并允許在37°C下攪拌結(jié)合20分鐘。在用水或生理鹽水(150mMNaCl)沖洗5次之后，將個(gè)體孔取下并進(jìn)行計(jì)數(shù)(圖lb)。條形圖表示雙平行孔的平均值。如圖Ib中所示，在非常低的電解質(zhì)濃度(在這種情況下為pH6.3的0.5mM檸檬酸鈉緩沖液)和接近中性pH(6.3)下，免疫球蛋白可以與結(jié)合FibrinLite，而白蛋白不能。因?yàn)榘椎鞍子捎谄涞偷入婞c(diǎn)而在中性PH時(shí)具有負(fù)電荷，同時(shí)免疫球蛋白具有與中性更接近的等電點(diǎn)，所以這些結(jié)果符合FibrinLite結(jié)合取決于由可能配體上接近零電荷所促進(jìn)的吸引相互作用。這種類型的相互作用也被以下觀察支持與用水沖洗相比，大部分結(jié)合的FibrinLite不會(huì)通過鹽水沖洗而被釋放。實(shí)施例2=FibrinLite與免疫球蛋白結(jié)合多克隆和單克隆在以上實(shí)施例6中描述的實(shí)驗(yàn)中使用的兔免疫球蛋白是從正常非免疫的兔制備。也測(cè)試了免疫作用可能顯著地改變免疫球蛋白群體的平均等電點(diǎn)并從而改變與FibrinLite結(jié)合的可能性。因此按照以下測(cè)試了來自免疫的兔的純化IgG。首先通過與等分部分(100μL/孔)的兔免疫球蛋白的免疫制劑(R389，AmericanDiagnostica)或兩種不同的IgG的鼠單克隆抗體(Mab3689和Mab3471，AmericanDiagnostica)中的一種在37°C攪拌孵育3小時(shí)來飽和包被聚苯乙烯微孔(Nunc-ImmunoLockWel1模塊)。然后，在低電解質(zhì)條件下(pH6或pH6.5的500μM檸檬酸鈉)將"Tc-ggmFibrinLite稀釋液(110)添加到未包被的和包被的微孔。在37°C下攪拌孵育30分鐘以允許結(jié)合。然后，在單獨(dú)分別的孔中的放射性計(jì)數(shù)之前，用水沖洗孔五次。如圖2所示，在pH6.0并且不添加電解質(zhì)的情況下，用兔免疫球蛋白的免疫制劑仍然獲得FibrinLite的強(qiáng)的并且可觀的結(jié)合。上文使用的兔免疫球蛋白制劑(例如，R389)代表免疫細(xì)胞的許多不同克隆的產(chǎn)物，即，它們是天然多克隆的，并且因此是由許多不相關(guān)的IgG分子的群體組成，每種分子可能具有不同等電點(diǎn)。相比之下，單克隆抗體代表細(xì)胞的單一克隆的產(chǎn)物，并且僅由一種具有其自身特征的等電點(diǎn)的免疫球蛋白分子組成。因此，盡管不太可能一種結(jié)合條件用于獲得用FibrinLite可觀地或最優(yōu)地標(biāo)記所有單克隆抗體，但顯示類型的結(jié)合實(shí)驗(yàn)可以確定對(duì)于指定情況的合適的條件。圖2中使用兩種不同的鼠單克隆抗體例證這點(diǎn)。在pH6.0時(shí)，顯而易見的是，一種單克隆(Mab3689,AmericanDiagnostica)以相對(duì)高水平結(jié)合FibrinLite，而FibrinLite與另一種單克隆(Mab3471，AmericanDiagnostica)僅相對(duì)低水平地結(jié)合。將pH增加到6.5足以使兩種情況(Mab3689和Mab3471)中都發(fā)生相對(duì)高水平的結(jié)合。因此，對(duì)于單克隆抗體，每種情況應(yīng)該單獨(dú)地處理，并且通過使用例如本文描述的微孔結(jié)合測(cè)試，結(jié)合PH(并且如果需要，結(jié)合電解質(zhì)濃度)優(yōu)化條件。最重要原則是通過減少抗體上的凈電荷來促進(jìn)FibrinLite納米顆粒和抗體之間的短程吸引相互作用?？梢酝ㄟ^將pH調(diào)整到盡可能接近抗體的等電點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)這點(diǎn)。實(shí)施例3為更好地證實(shí)通用原則，用兩種具有很大不同等電點(diǎn)的蛋白進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)，即血清白蛋白(低PI)和魚精蛋白(PI)。用兔血清白蛋白或魚精蛋白飽和包被聚苯乙烯微孔。用pH7.2的磷酸鹽緩沖鹽溶液中500μg/mL的每種蛋白(100μL/孔)在37°C下攪拌包被孔3小時(shí)。在用水沖洗5次之后，在pH3.5和pH6.5下，將低電解質(zhì)條件(500μM檸檬酸鈉)中的Tc-99mFibrinLite稀釋液(110)添加到孔(100μL/孔)。在37°C下攪拌孵育30分鐘以允許結(jié)合，并且在單獨(dú)孔中的放射性計(jì)數(shù)之前，用水沖洗孔五次。顯示對(duì)于等電點(diǎn)為pH4.4-5.1的血清白蛋白和等電點(diǎn)為pH>10的魚精蛋白的結(jié)合結(jié)果(圖3)。在接近白蛋白的等電點(diǎn)的pH3.5，獲得FibrinLite與白蛋白非常高的結(jié)合，而在該P(yáng)H，僅獲得FibrinLite與魚精蛋白的低結(jié)合。相比之下，在更接近魚精蛋白的等電點(diǎn)的pH6.5下，獲得FibrinLite與魚精蛋白可觀的結(jié)合，并且在該pH下，獲得與白蛋白的不顯著的結(jié)合。因此，對(duì)于任何指定的蛋白，使用接近該蛋白的等電點(diǎn)的PH條件可以獲得較強(qiáng)的FibrinLite結(jié)合。實(shí)施例4=FibrinLite與白蛋白結(jié)合的電解質(zhì)誘導(dǎo)電解質(zhì)誘導(dǎo)Tc_99mFibrinLite與預(yù)先用白蛋白包被的聚苯乙烯微孔(Nunclockwells)的結(jié)合。通過與500μg/mL的兔血清白蛋白(100μL/well,SigmaA0764)在37°C下攪拌孵育3小時(shí)包被微孔，并且用水沖洗3次。將FibrinLite以110稀釋到0、4.69、9.38、18.75、37.5、75和150mM的氯化鈉溶液中，并且將等分部分(IOOyL)的稀釋液分配至包被的并沖洗的微孔上，并允許在37°C下攪拌30分鐘以允許結(jié)合。用水沖洗4次之后，取下個(gè)體微孔并進(jìn)行計(jì)數(shù)。如圖4所示，采用三種不同的FibrinLite制劑進(jìn)行三次獨(dú)立試驗(yàn)。如之前圖Ib和3中所示，F(xiàn)ibrinLite與白蛋白包被的微孔在pH6.5時(shí)僅顯示非常弱的結(jié)合，而在PH3.5時(shí)強(qiáng)結(jié)合，即接近白蛋白的等電點(diǎn)，其吸引相互作用占優(yōu)勢(shì)。然而，如圖4所示，在接近中性pH白蛋白帶負(fù)電荷時(shí)，可以通過添加足夠的電解質(zhì)誘導(dǎo)FibrinLite的結(jié)合。實(shí)施例5=IV注射的未包被的FibrinLite從循環(huán)中的清除將Tc-99m標(biāo)記的FibrinLite(約1.OmL中1.9mCi)注射進(jìn)置于SiemensDiacamY相機(jī)的檢測(cè)頭下的麻醉的兔的耳靜脈中。注射后立即開始獲取一系列圖像。圖5中顯示的每個(gè)框代表之后的30秒間隔。兔的頭部位于每個(gè)框的左邊。觀察到放射性同位素快速地通過心和肺并且在肝和脾中積累。僅4分鐘之后(框8)，絕大部分注射的放射性活性局限在肝和脾中。因此，靜脈內(nèi)注射的未包被的FibrinLite納米顆粒在20分鐘內(nèi)幾乎完全從循環(huán)中清除。該減少是由網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)介導(dǎo)，即諸如肝的Kupffer細(xì)胞的吞噬細(xì)胞。對(duì)于體內(nèi)成像，有時(shí)需要使用具有特定包被的納米顆粒復(fù)合材料制劑，所述特定包被被設(shè)計(jì)為延長納米顆粒復(fù)合材料標(biāo)記的探針在循環(huán)中的存在，并因此允許探針與特定靶標(biāo)結(jié)合更長時(shí)間。在這類情況下，可以特別選擇符合從循環(huán)系統(tǒng)中所需的清除速率的包被，并且補(bǔ)充納米顆粒表面上的探針蛋白。為此目的，包被可以選自諸如聚乙二醇(PEG)的已知可延長循環(huán)持久性的那些分子，或被用作肝的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的清除劑的細(xì)胞受體的拮抗劑，例如聚肌苷酸。實(shí)施例6使用多聚賴氨酸包被的FibrinLite的體內(nèi)成像也可以用所選擇的特異性地重新引導(dǎo)納米顆粒復(fù)合材料的體內(nèi)器官生物分布的試劑包被納米顆粒復(fù)合材料的表面。對(duì)于諸如新目的器官中的腫瘤的疾病病變的成像或治療，這樣做是理想的。圖6列舉了實(shí)例，其顯示了使用以典型聚陽離子多聚D賴氨酸處理的Tc-99mFibrinLite的特異性的兔肺的成像。用ρΗ6·0的0.5mMTris-乙酸緩沖液中的3.0μg/mL多聚D賴氨酸(SigmaP4408，分子量15-30kd)在室溫下處理Tc_99m標(biāo)記的納米顆粒復(fù)合材料(約1.OmL中3.5mCi)1小時(shí)。然后，將混合物注射進(jìn)置于SiemensDiacamγ相機(jī)的檢測(cè)頭下的麻醉的兔的耳靜脈中。在注射之后立即開始獲取一系列圖像，并且圖6中顯示的每個(gè)框代表之后30秒的間隔。兔的頭部在每個(gè)框的右邊。觀察到放射性同位素幾乎專一地在肺中快速積累，并且穩(wěn)定地保持在該位置直到獲取系列的最后G分鐘)。圖6表明用多聚D賴氨酸處理Tc_99mFibrinLite納米顆粒是產(chǎn)生放射性標(biāo)記在肺的血管網(wǎng)絡(luò)中的特異性積累，從而實(shí)現(xiàn)該網(wǎng)絡(luò)的成像的有效方法。使用賴氨酸的非天然存在D立體異構(gòu)體的聚合物，從而減少體內(nèi)該聚合物的蛋白酶降解的可能性，其對(duì)于賴氨酸的天然L立體異構(gòu)體是特異性的。使用這種肺成像方法研究的兔在該操作之后順利恢復(fù)，并且某些兔被重復(fù)研究三次，每次持續(xù)數(shù)周的周期，同時(shí)每次獲得十分相似的肺圖像。接受多次該FibrinLite制劑注射的兔未表現(xiàn)任何不良反應(yīng)并且所有外觀和行為都是正常的。通過這種方法，提示多聚D賴氨酸處理的納米顆粒復(fù)合材料可以用于檢測(cè)來自流動(dòng)阻塞(例如栓塞)或網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)(例如腫瘤誘導(dǎo)的血管生成)的肺中正常血循環(huán)的任何病理紊亂。因此，多聚D賴氨酸處理的Tc-99mFibrinLite是用于肺診斷和預(yù)后的靶向顯像劑的示例性并且非限制的實(shí)例。然而，同樣地，可以制備含有諸如Y-90的治療同位素而不是成像同位素的納米顆粒復(fù)合材料，并且用合適的聚陽離子處理之后可以用于肺中存在的原發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性腫瘤的區(qū)域放射治療。實(shí)施例7多聚D賴氨酸分子量對(duì)FibrinLite生物分布的影響在pH6的0.5mMTris-乙酸緩沖液中的兩種不同分子量范圍的多聚D賴氨酸A分子量4-15kd(6.0μg/mL；SigmaP6403)和B分子量30_70kd，(1.5μg/mL；SigmaP7886)在20°C下預(yù)處理^-99ιFibrinLite1小時(shí)。將每種預(yù)處理的FibrinLite制劑(3.5mCi)注射進(jìn)麻醉的兔的耳靜脈中并且在SiemensDiacamY相機(jī)下對(duì)Tc_99m標(biāo)記的生物分布進(jìn)行成像。在注射之后立即開始獲取一系列的圖像，每個(gè)框代表30秒的間隔。兔的頭部在每個(gè)框的右邊。該實(shí)驗(yàn)顯示獲自多聚D賴氨酸處理的Tc-99mFibrinLite的肺成像取決于聚陽離子的分子大小(圖7A和7B)。令人意外的是，該性質(zhì)不是聚陽離子分子大小的簡單函數(shù)；盡管分子量15kd至30kd的多聚D賴氨酸對(duì)于特異性的肺成像有效，(參見圖6)，但等摩爾濃度的分子量4kd至15kd的多聚D賴氨酸與分子量30kd至70kd的多聚D賴氨酸都不是同樣有效。4-15kd多聚D賴氨酸表現(xiàn)出部分肺特異性，但是相當(dāng)部分的標(biāo)記仍然出現(xiàn)在脾中(圖7A)。30-70kd多聚D賴氨酸明顯更差，相當(dāng)多的標(biāo)記出現(xiàn)在肝、脾和骨髓中(圖7B)，與未處理的^-99ιFibrinLite沒有不同。因此表明，使用Tc_99mFibrinLite標(biāo)記方法，可以容易地評(píng)估不同的大分子在體內(nèi)靶向于指定器官的有用性。不需要求助于有機(jī)化學(xué)并且使用非常低濃度的靶向分子可以容易地實(shí)現(xiàn)這點(diǎn)。討論本文的實(shí)施例證實(shí)，通過合適的pH和任選的電解質(zhì)濃度條件能夠?qū)崿F(xiàn)諸如多肽的大分子的高親和力標(biāo)記，在該條件下，短程引力壓倒靜電排斥力。這些實(shí)施例表明，因?yàn)镕ibrinLite與大分子的結(jié)合涉及對(duì)增加的電解質(zhì)濃度相對(duì)不敏感的吸引疏水、離子關(guān)聯(lián)或分散相互作用，所以能夠在生理電解質(zhì)濃度下進(jìn)行結(jié)合。使用本文所述的方法，F(xiàn)ibrinLite納米顆粒牢固地保持與大分子相關(guān)聯(lián)，并且在體內(nèi)可能遇到的電解質(zhì)條件下，放射性標(biāo)記不會(huì)解離。對(duì)于多肽，帶電的化學(xué)基團(tuán)(例如，羧酸鹽或氨基)存在于多肽表面，并且因此多肽分子的凈電荷是多肽的環(huán)境PH的功能。在該情況下，通過調(diào)整pH使其接近于多肽的pl，其中凈電荷實(shí)際為零，可以誘導(dǎo)FibrinLite與多肽的結(jié)合。通過抑制靜電排斥力使得短程引力可以占優(yōu)勢(shì)有利于結(jié)合。以上描述了本發(fā)明優(yōu)選的形式。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不應(yīng)限于以上所示的具體實(shí)施方案?？梢詫?duì)其進(jìn)行對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的修飾和變化，這不脫離本發(fā)明的范圍。2權(quán)利要求1.制備放射性標(biāo)記的大分子的方法，所述方法包括在水性介質(zhì)中將大分子與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料接觸，所述水性介質(zhì)包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的PH。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述碳封裝納米顆粒復(fù)合材料為FibrinLite。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水性介質(zhì)包含PH，在該pH下所述大分子上的凈電荷基本上為零。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水性介質(zhì)包含與所述大分子的Pl基本相等的pH。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水性介質(zhì)還包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的電解質(zhì)濃度。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述電解質(zhì)是選自Na、K和Ca的簡單電解質(zhì)。7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述水性介質(zhì)的簡單電解質(zhì)濃度為大于約1毫摩爾至約150毫摩爾的范圍。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水性介質(zhì)包含與所述大分子的Pl不同的PH和范圍為大于約1毫摩爾至約150毫摩爾的簡單電解質(zhì)濃度。9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述放射性顆粒芯包含選自以下的放射性同位素或放射性核素fTc^Au^Bi^Co^Ci^Cu^Cu^Dy^Er^Fe^Ga^Ga^Gd^Ho、1MrKl13mIrKi77Lu^NiK24NLic13Pcu8lRlK82RlK186ReJ88ReJ5Sh153SnKmmSrK89SiN2c11TtK9U9YlK192Ir。10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述放射性顆粒芯包含99mTc。11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述大分子是生物大分子。12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述大分子選自多肽、抗體及其片段和衍生物。13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述大分子是多聚賴氨酸。14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述大分子被包含在導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體、膠或凝膠之中或之上。15.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法還包括將放射性標(biāo)記的大分子與未標(biāo)記的大分子和/或自由納米顆粒復(fù)合材料分離。16.放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。17.如權(quán)利要求16所述的放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含多個(gè)不同的大分子。18.如權(quán)利要求16所述的放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含多個(gè)不同的放射性標(biāo)記。19.如權(quán)利要求16所述的放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含適合于成像的放射性標(biāo)記和適合于治療應(yīng)用的放射性標(biāo)記。20.如權(quán)利要求16所述的放射性標(biāo)記的實(shí)體，其包含導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體、膠或凝膠。21.包含放射性標(biāo)記的實(shí)體的藥物組合物，所述放射性標(biāo)記的實(shí)體包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子以及藥學(xué)可接受的載體、佐劑或賦形劑。22.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述大分子選自多肽、抗體及其片段和衍生物。23.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述大分子是多聚賴氨酸。24.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述大分子是組織特異性、器官特異性、細(xì)胞類型特異性、或疾病狀態(tài)特異性的大分子。25.制備放射性標(biāo)記的醫(yī)療裝置的方法，所述方法包括在適合于將放射性標(biāo)記的大分子合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上的條件下，將與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子與所述醫(yī)療裝置接觸。26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述醫(yī)療裝置是診斷裝置或治療裝置。27.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述醫(yī)療裝置是導(dǎo)管、纖維、棒桿或細(xì)絲、膜、薄片、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或紗網(wǎng)、多孔海綿、管或支架、珠或膠囊或已知尺寸的微珠形式的微粒、納米顆粒、脂質(zhì)體、膠或凝膠。28.放射性標(biāo)記的醫(yī)療裝置，其包含合并入醫(yī)療裝置中或合并在醫(yī)療裝置上的與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。29.患者的放射治療的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的放射性標(biāo)記的大分子，其中所述放射性標(biāo)記的大分子包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料相關(guān)聯(lián)的大分子。30.如權(quán)利要求四所述的方法，其中所述放射治療是對(duì)于肺的內(nèi)部放射治療。31.如權(quán)利要求四或30所述的方法，其中所述放射治療是用于原發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性肺腫瘤的治療。32.如權(quán)利要求四所述的方法，其中所述大分子對(duì)于肺是特異性的。33.如權(quán)利要求四或32所述的方法，其中所述大分子是多聚賴氨酸。34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述多聚賴氨酸分子量為約15kd至約30kd。35.如權(quán)利要求四-34中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述放射性顆粒芯包含198Au、213Bi、57C0、51Cr、64CU、67CU、165Dy、lfi9Er、59Fe、67GaJ8Ga^3Gculfi6HcKmIrKl13mIrK177LiU23NiU24NiUi03Pcu81Rb^82Rb,186Re,188Re,75Se,153Sm,117mSn,89Sr,201Th,90Y,169Yb,192Ir中的至少一種。36.將患者中的醫(yī)療操作成像的方法，所述方法包括給予所述患者復(fù)合物并測(cè)定所述個(gè)體中的所述復(fù)合物，所述復(fù)合物包含大分子和具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料。37.顯像劑，其包含與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子。38.如權(quán)利要求37所述的顯像劑，其中所述大分子對(duì)于肺是特異性的。39.如權(quán)利要求37所述的顯像劑，其中所述大分子是多聚D賴氨酸。40.診斷影響個(gè)體肺中血液循環(huán)的疾病或疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料復(fù)合的大分子，并測(cè)定所述個(gè)體中的所述復(fù)合物。41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述大分子是多聚D賴氨酸。42.如權(quán)利要求40所述的方法，其中具體所述疾病或疾病狀態(tài)選自肺栓塞、肺氣腫、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腫瘤和感染。全文摘要本發(fā)明涉及制備放射性標(biāo)記的大分子的方法，所述方法包括在水性介質(zhì)中將大分子與具有放射性顆粒芯的碳封裝納米顆粒復(fù)合材料接觸，所述水性介質(zhì)包含通過減弱靜電排斥力來提高所述納米顆粒和大分子之間的短程引力而選擇的pH。文檔編號(hào)A61K51/06GK102065906SQ200980123852公開日2011年5月18日申請(qǐng)日期2009年4月23日優(yōu)先權(quán)日2008年4月24日發(fā)明者大衛(wèi)·華萊士·金,羅斯·溫特沃思·斯蒂芬斯,蒂莫西·約翰·森登申請(qǐng)人:澳大利亞國立大學(xué)