專利名稱：生育三烯酚組合物預(yù)防癌癥的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域，特別針對癌癥生物化學(xué)與分子生物學(xué)領(lǐng) 域。
背景技術(shù)：
癌癥，或更準(zhǔn)確而言惡性贅生物是其中一組細胞展示出未受控制的生長(超出正 常限度的分裂)、侵入(入侵和破壞臨近組織)和有時候的腫瘤轉(zhuǎn)移(經(jīng)淋巴或血液擴散至 體內(nèi)其他位置)的一類疾病。給定癌癥的病程發(fā)展或其缺乏病程發(fā)展是極為不同的且取決于贅生物的類型和 對治療的響應(yīng)。治療方式包括外科手術(shù)、化學(xué)療法、放射療法、激素操控和免疫療法。一般 而言，非常具體地對每種類型的癌癥進行治療，并且通常使用不同方式的組合，例如，在外 科手術(shù)之前或之后進行放射療法。對治療的響應(yīng)取決于腫瘤類型、其尺寸和其是否已擴散。大多數(shù)已知的癌癥治療方法對患者具有嚴(yán)重副作用。因此，本發(fā)明的一個目標(biāo)在 于探索其它的癌癥治療方法。

發(fā)明內(nèi)容
在第一方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防癌癥或預(yù)防在經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)的方 法，所述方法通過施用包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物而實 現(xiàn)，其中所述癌癥選自黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌和肺癌。在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，所述組合物包含Y-生育三烯酚或δ -生育 三烯酚中的至少一種以及OR，3S) -N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1，2，4，7，10， 13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸N-叔丁基酯，13-酯的三水合物 (多胃胃豐多酉享)((2R, 3S)-N-carboxy-3-phenylisoserine, N-tert-butylester, 13-ester with 5,20-epoxy-l,2,4,7,10，13-hexahydroxytax-ll_en_9_one_4_acetate_2_benzoat e,trihydrate)和/或(5Z) _5_ ( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑_4_甲酰胺(達卡巴嗪)或者 由上述物質(zhì)組成。在再一方面，本發(fā)明涉及一種抑制或逆轉(zhuǎn)癌癥的方法，所述方法通過施用包含 Y -生育三烯酚或δ -生育三烯酚中的至少一種以及QR，3S) -N-羰基-N-叔丁基酯-3-苯 基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉烷_11_烯_9_酮-4-乙酸酯-2-苯 甲酸13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和/或(5Ζ)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲 酰胺(達卡巴嗪)或者由上述物質(zhì)組成的組合物而進行。在又一方面，本發(fā)明涉及一種組合物在用于預(yù)防動物體內(nèi)的癌癥或預(yù)防經(jīng)歷癌癥治療后的動物體內(nèi)的癌癥復(fù)發(fā)的藥物制備中的用途，所述組合物包含Y-生育三烯酚和 S-生育三烯酚中的至少一種，其中所述癌癥選自黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱 癌、乳腺癌和肺癌。在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物在用于癌癥治療用藥物的制備中的 用途，所述組合物包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及OR， 3S)-N-羰基-3-苯基異絲氨酸N-叔丁基酯，5，20-環(huán)氧基_1，2，4，7，10，13-六羥基紫 杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和/或 (5Z)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達卡巴嗪)或者由上述物質(zhì)組成。在再一方面，本發(fā)明涉及一種組合物的制備方法，所述組合物包含Y-生育三烯 酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及QR，3S)-N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧 基-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸N-叔丁基酯，13-酯 的三水合物(多西紫杉醇)和/或(5Z)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達 卡巴嗪)或者由上述物質(zhì)組成，所述方法包括將Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至 少一種與(2R, 3S) -N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉 烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸N-叔丁基酯，13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和 /或(5Z)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達卡巴嗪)混合。


參考具體描述并結(jié)合非限制性實施例和附圖考慮時可以更好地理解本發(fā)明，在所 述附圖中圖1說明了展示出Y-T3下調(diào)PC-3細胞中的前列腺癌干細胞標(biāo)記物的實驗結(jié)果。 (A) Y-T3處理后的前列腺癌干細胞標(biāo)記物⑶44和⑶133的蛋白印跡。注意，Y-T3以劑量 和時間依賴性方式顯著下調(diào)兩種干細胞標(biāo)記物。(B)在經(jīng)5 μ g/ml的γ -T3處理M小時 后，PC-3細胞中的⑶44+群體的流式細胞儀分析。如箭頭所示，Y-T3處理后的⑶44+群體 相對于未經(jīng)處理的對照(陰影峰)減少。(C) Y -T3處理后的⑶44和⑶133的mRNA水平。 注意，標(biāo)記物在處理48小時和72小時后減少。樣品由GAPDH進行標(biāo)準(zhǔn)化。(D)通過MTT測 試檢驗用2. 5 μ g/ml和5 μ g/ml的γ -Τ3處理24小時、48小時和72小時后PC-3細胞的活 力。每個實驗至少重復(fù)三次。結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差(s.d.)顯示。(E)經(jīng)Y-T3處理 的PC-3細胞中的凋亡標(biāo)記物的蛋白印跡結(jié)果。注意，未檢測到PARP、半胱天冬酶-3、-7、-9 的未經(jīng)切割形式，這表明沒有經(jīng)Y-T3處理誘導(dǎo)的細胞凋亡。圖2說明了展示出Y-T3抑制PC-3細胞的干細胞性質(zhì)的實驗結(jié)果。(A)用由γ-T3 或空載劑(vehicle)處理的細胞進行球狀體形成測試。將200個PC-3細胞接種至聚HEMA 涂布的12孔板上并用Y-T3或空載劑處理14天。對形成的前列腺球(prostasphere)的 數(shù)目進行計數(shù)，并將結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差(s. d.)顯示。注意，Y-T3處理有效地抑制 了 PC-3細胞的球狀體形成能力。(B)在顯微鏡下捕獲前列腺球的圖像。注意，在Y-T3處 理組中無法發(fā)現(xiàn)前列腺球。圖3說明了顯示出Y-T3還在其它癌細胞系中抑制癌干細胞樣細胞的實驗結(jié) 果。(A)在經(jīng)空載劑和Y-T3處理的DU145和MGH-Ul細胞中的⑶44的蛋白印跡。在 低劑量Y-T3處理后，兩種細胞系的⑶44表達都被下調(diào)(N.B.Syg/ml的γ_Τ3相當(dāng)于12.176μΜ)。(B和C)顯示出在用不同劑量的Υ-Τ3處理M小時和48小時后DU145和 MGH-Ul (膀胱癌)細胞的活力的MTT測試。(D和Ε)用由、-Τ3或空載劑處理的細胞進行 球狀體形成測試。注意，Y-Τ3處理有效地抑制了兩種細胞系的球狀體形成能力。在顯微 鏡下捕獲前列腺球的圖像。注意，在Y-Τ3處理組中無法發(fā)現(xiàn)前列腺球。圖4說明了顯示出Y -Τ3顯著降低了體內(nèi)PC-3細胞的腫瘤生成能力的實驗結(jié)果。 (A)用PC-3-luc細胞原位注射2周的SCID小鼠的生物發(fā)光圖像。上排的SCID小鼠注射有 經(jīng)空載劑處理的PC-3-luc細胞，而下排的SCID小鼠注射有經(jīng)γ -Τ3處理PC-3-luc細胞。 注意，來自Y-Τ3組的3只小鼠沒有顯示出可檢測的腫瘤。(B)在第2周發(fā)展出可檢測的腫 瘤的小鼠的百分比。注意，Υ-Τ3組中超過半數(shù)的小鼠沒有形成可檢測的腫瘤，而在對照組 中發(fā)現(xiàn)了 100%的腫瘤形成。η = 16。圖5說明了展示出Υ-Τ3對靶向富含癌干細胞的前列腺球的效果的實驗結(jié)果。(A) 通過將DU145細胞維持在補充有血清替代培養(yǎng)基的非粘連培養(yǎng)基中而形成富含CSC的前列 腺球。然后用空載劑、Υ_Τ3(10μ g/ml或20 μ g/ml)或多西紫杉醇(Doc, 40ng/ml)將前列 腺球處理48小時。在處理前和處理后對球狀體進行計數(shù)。結(jié)果以球狀體數(shù)目相對于對照 的平均變化％ 士標(biāo)準(zhǔn)偏差顯示。注意，球狀體對于Y-T3高度敏感，但對高劑量多西紫杉 醇具有抗性。(B)用空載劑、40ng/ml的多西紫杉醇和10 μ g/ml的、-T3處理48小時處理 48小時后的前列腺球的圖像。發(fā)現(xiàn)經(jīng)Y-T3處理的球狀體被解離。圖6 (A)顯示未確定Y -T3會影響mTOR和β -聯(lián)蛋白，但抑制Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活與人前列腺癌高度相關(guān)，且表達AKT的組成型活性形式的轉(zhuǎn)基因 動物發(fā)展出前列腺上皮內(nèi)贅生瘤。(B) γ -Τ3增強的0CT3/4和巢蛋白mRNA表達，多能干細 胞表型的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物。圖7說明了本發(fā)明的一個方面的具體實施方式
，其中使用包含Y-生育三烯酚和 δ-生育三烯酚中的至少一種的組合物來在癌癥(在圖7所示的實施方式中為前列腺癌) 發(fā)生前預(yù)防癌癥(從頂端起的第3途徑)，和在用常規(guī)癌癥療法治療后預(yù)防癌癥(從頂端起 的第2途徑)。第1途徑說明了正常療法，其中用諸如化學(xué)療法或采用化學(xué)治療藥物(如多 西紫杉醇)等常規(guī)癌癥療法來治療包含前列腺癌干細胞(PCSC)的實體前列腺癌腫瘤。由 于那些療法不會影響PCSC，因而腫瘤能基于PCSC而重新發(fā)展。如本文所提及的實驗中所已 展示，當(dāng)對動物體施用包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物時，可 以避免實體前列腺癌腫瘤的發(fā)展(第3途徑)。此外，在腫瘤治療后施用包含Y-生育三烯 酚或S -生育三烯酚中的至少一種的組合物能避免PCSC啟動癌細胞更新，即本文所要求的 組合物預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)。圖8顯示Υ-Τ3和δ-Τ3以及包含Y _Τ3的組合物預(yù)防前列腺上皮內(nèi)贅生瘤 (PIN)的形成，PIN是前列腺癌發(fā)展的最有可能的前體。所用的前列腺癌小鼠模型此前已 被公開(Gabril，Μ. Y.，Duan, W.等，Molecular Therapy (2005)，第 11 卷，第 3 期，第 348 頁；Greenberg 等，Proc Natl Acad Sci USA(1995)，第 92 卷，第；3439_3443 頁；Duan，W., Gabril,Μ. Y.等，Oncogene (2005) 24，1510-1524 ；Wang S,Gao J 等，Cancer Cell，2003，第 4 卷，第 3 期，第 209-221 頁；Gabril,M. Y.，0nita，T.等，Gene Ther.，2002，第 9 卷，第 23 期， 第1589-1599頁)。簡言之，小鼠接受每周5天的治療并持續(xù)4 6個月。在治療結(jié)束時， 將小鼠處死，并收集其前列腺用于活組織檢查以檢驗PIN的發(fā)展和低/高等級前列腺癌。
圖9說明了顯示出維生素E異構(gòu)體對前列腺細胞的效果的結(jié)果。(A)在用不同的 維生素E異構(gòu)體處理M小時和48小時后通過MTT測試檢驗細胞活力。注意，維生素E異 構(gòu)體、特別是生育三烯酚在不同程度選擇性地影響前列腺癌細胞的活力，但對非腫瘤生成 性前列腺上皮細胞沒有顯著影響。與LNCaP相比，PC-3對于維生素E異構(gòu)體更好地響應(yīng)。 (B)在IC5tl在γ -T3存在時LNCaP和PC-3的生長速率。劑量水平對應(yīng)于圖9A中的劑量水 平。對于α-Τ3，使用ΙΟΟμΜ。UD表明未確定的IC5Q。圖10說明了展示出由Y-T3處理誘導(dǎo)的細胞凋亡的結(jié)果。(A)通過流式細胞儀的 細胞周期分析。對對照細胞和與Y "T3在IC5tl溫育M小時的受處理細胞進行流式細胞儀 分析。注意，亞Gl群在處理后出現(xiàn)。(B)PC-3中促凋亡途徑的IC5tl時間依賴性和M小時 劑量依賴性激活(分別以小時和yiH+)。注意，Y-T3以細胞劑量依賴性和時間依賴性方 式誘導(dǎo)關(guān)鍵分子(經(jīng)切割的半胱天冬酶3、7、8、9、PARP)的激活并調(diào)節(jié)bcl_2和bax的量之 比。(C)對于M小時的溫育時期，IC50 y -T3在LNCaP和PC-3而不是非腫瘤發(fā)生性前列腺 上皮細胞(PZ-HPV)上激活促凋亡基因并抑制促存活基因表達。圖11說明了促存活途徑被Y-T3失活的結(jié)果。㈧通過IC5tl時間依賴性和M小 時劑量依賴性蛋白印跡(分別以小時和μΜ計)檢測了 Y-Τ3對NF-K B途徑的激活的影 響。注意，NF- κ B ρ65核轉(zhuǎn)位和磷酸化i κ B被處理所抑制。(B) γ -Τ3處理還導(dǎo)致PC-3細 胞中Id家族蛋白和EGFR的下調(diào)。圖12說明了展示出在Y-Τ3誘導(dǎo)的細胞凋亡中涉及Jim N端激酶(JNK)激活的 結(jié)果。(A)通過MTT測試檢驗了在用γ -Τ3和JNK抑制劑(SP600125)溫育M小時后的細 胞活力。注意，添加JNK抑制劑減輕了 Υ-Τ3在PC-3中的細胞毒性，表明JNK介導(dǎo)Υ-Τ3 的抗增殖效應(yīng)。(B) 24小時劑量依賴性和IC5tl時間依賴性γ -Τ3處理(分別以小時和μ M 計)后的JNK活性，且通過測定ΜΚΚ4、SAPK/JNK, c-jun和ATF-2的磷酸化水平發(fā)現(xiàn)JNK活 性升高。因此，證實JNK與γ -T3抗癌性質(zhì)有關(guān)。圖13說明了展示出γ -T3處理對細胞侵入的抑制的結(jié)果。㈧M小時劑量依賴性 和IC5tl時間依賴性Y-T3處理誘導(dǎo)上皮標(biāo)記物(E-鈣粘蛋白、Y-聯(lián)蛋白)的表達，但抑制 間質(zhì)標(biāo)記物(波形蛋白、twist蛋白和α -SMA)和E-鈣粘蛋白阻遏劑(snail蛋白)的表 達。(B)收集侵入的用指定劑量的Y-T3處理的雄性激素依賴性PCa細胞(PC-3)，然后平 板接種至涂布有基質(zhì)膠(0. 5mg/ml)的插入物中。用結(jié)晶紫染色入侵透過膜的細胞，并在顯 微鏡下對圖像拍照。用提取緩沖液裂解后，測定595nm處的強度。圖14說明了展示出Y-T3對于多西紫杉醇誘導(dǎo)的細胞凋亡的協(xié)同效應(yīng)的結(jié)果。
(A)24小時的多西紫杉醇和Y-T3共處理的效果。用不同劑量的Y-T3和IOOnM的多西紫 杉醇將細胞溫育對小時。通過MTT測試檢測細胞活力。用多西紫杉醇和Y-T3共處理后 的凋亡PC-3和LNCaP細胞的百分比明顯高于用任何一種試劑單獨處理的凋亡細胞百分比。
(B)使用蛋白印跡進一步展示出M小時的Y-T3與多西紫杉醇的共處理通過激活促凋亡 分子(經(jīng)切割的PARP、半胱天冬酶3、7、8、9)增強了 PC-3細胞凋亡。還針對Id_l、EGFR、 ikB,NF-KB p65確定了額外的對增殖基因的抑制。(C)所提出的PCa細胞中的T3抗癌途 徑。此外在圖^C中單獨展示了提出的黑色素瘤細胞中的抗癌途徑。圖15說明了展示出Y-T3處理在乳腺癌細胞(BCa)中誘導(dǎo)細胞凋亡的結(jié)果。㈧ 通過經(jīng)MTT測試在處理后M小時檢測細胞活力確定了不同維生素E異構(gòu)體的IC5(I。注意，維生素E異構(gòu)體，特別是β-T3、γ-Τ3和δ-Τ3在不同程度選擇性抑制BCa細胞的活力， 但對非腫瘤發(fā)生性乳腺上皮細胞沒有顯著影響。(B)用Υ-Τ3處理細胞(IC5ch9ci)導(dǎo)致對亞 Gl細胞群的誘導(dǎo)。凋亡細胞的比例(亞Gl組分)以劑量依賴性方式增加。(C) Υ-Τ3誘導(dǎo) MDA-MB-231細胞中的DNA片段。簡言之，收集細胞并提取片段化DNA并通過電泳在含有溴 化乙錠的2%瓊脂糖凝膠中進行分析。(D)還通過末端脫氧核苷酸基轉(zhuǎn)移酶(TUNE^IHi) 來檢測Y -Τ3誘導(dǎo)的DNA片段化(“未經(jīng)處理”的黑色圖像，即不能檢測到DNA損傷；20 μ M 禾口 40 μ M的γ -Τ3，具有嚴(yán)重DNA損傷的凋亡細胞通過DNA中的裂口的存在而以綠色熒光出 現(xiàn)，DNA裂口的存在可以通過末端脫氧核苷酸基轉(zhuǎn)移酶而鑒定)(比例尺為25 μ m)。圖16顯示了展示出Y -T3處理對促凋亡分子的激活的結(jié)果。(A) γ _Τ3處理誘導(dǎo) 關(guān)鍵凋亡性分子(經(jīng)切割的半胱天冬酶3、7、8、9、PARP)的激活并以細胞劑量依賴性方式調(diào) 節(jié)bcl-2和bax的量之比。(B) y -T3激活MCF7和MDA-MB-231細胞上的促凋亡基因，但不 激活非腫瘤發(fā)生性乳腺上皮細胞上的促凋亡基因(MCF-10A)。圖17顯示了展示出Y-T3對促存活途徑的失活的結(jié)果。(A)通過蛋白印跡檢 測Y -T3對NF- κ B途徑的活性的影響。在總細胞裂解物中，I κ B的磷酸化受、-T3處理 的抑制。類似地，核轉(zhuǎn)位的NF-K B p65在核蛋白提取物中受到抑制。(Β)γ-Τ3處理導(dǎo)致 MDA-MB-231細胞中EGFR和Id家族蛋白的表達的下調(diào)。(C) γ -Τ3處理還導(dǎo)致MDA-MB-231 細胞中的Idl的上游調(diào)節(jié)物的下調(diào)(Src、Smadl/5/8和L0X)。粘著斑激酶活性O(shè)^ak)與LOX 的激活極為相關(guān)。(D)將用Y-T3處理的MDA-MB-231細胞裂解，并將裂解物用于使用抗Src 抗體的免疫沉淀測試。結(jié)果表明，Src和Smadl/5/8之間的物理相互作用受γ_Τ3處理的 影響。圖18顯示展示出在Y -Τ3誘導(dǎo)的細胞凋亡期間Jim N末端激酶(JNK)和MAPK/ ERK激活的結(jié)果。(A)在M小時γ -Τ3處理后通過測定SAPK/JNK、c-jun和ATF-2的磷酸 化水平檢測JNK活性。注意，所有蛋白的磷酸化水平都受Y-T3的誘導(dǎo)，表明JNK受Y-T3 處理的激活。(B)通過MTT測試檢測在用Y -T3和JNK抑制劑(SP600125)溫育24小時后 的細胞活力。注意，JNK抑制劑的添加減輕了 Y-T3對MDA-MB-231細胞的細胞毒性，表明 JNK介導(dǎo)Y-T3的抗增殖效應(yīng)。(C)發(fā)現(xiàn)MAPK/ERK活性在Y-T3處理M小時后升高，MAPK/ ERK活性通過測定Mekl/2、Erkl/2和Elkl的磷酸化水平而檢測。(D)通過MTT測試檢測用 Y-T3和MAPK/ERK抑制劑(U0126/PD98059)溫育M小時后的細胞活力。注意，MAPK/ERK 抑制劑的添加對Y -T3在MDA-MB-231細胞上的細胞毒性沒有影響。圖19說明了展示出Y-T3處理抑制細胞侵入的實驗結(jié)果。(A)收集用指定劑量 的Y-T3處理的MDA-MB-231細胞，然后平板接種至涂布有基質(zhì)膠(0. 5mg/ml)的插入物上。 用結(jié)晶紫染色入侵透過膜的細胞，并在顯微鏡下對圖像拍照。用提取緩沖液裂解后，測定 595nm處的強度，并以平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差表示(右圖)。(B)M小時劑量依賴性γ-T3處理對 上皮標(biāo)記物(α聯(lián)蛋白、β聯(lián)蛋白、、聯(lián)蛋白)的表達沒有影響，但抑制間質(zhì)標(biāo)記物(Twist 蛋白和α -SMA)和E-鈣粘蛋白阻遏劑(Snail蛋白、Twist蛋白)的表達。PC_3展示出表 達野生型E-鈣粘蛋白的雄性激素依賴性前列腺癌細胞系。圖20說明了展示出Y-T3對多西紫杉醇誘導(dǎo)的細胞凋亡的協(xié)同效應(yīng)的實驗結(jié) 果。(A)M小時的多西紫杉醇和Y-T3共處理的效果。用50nM的多西紫杉醇和不同劑量的 Y-T3與細胞溫育M小時。通過MTT測試檢測細胞活力。用多西紫杉醇和Y-T3共處理后的活MDA-MB-231細胞的百分比明顯低于用任何一種試劑單獨處理的活細胞百分比。(B C)使用蛋白印跡進一步展示出，對小時的Y-T3與多西紫杉醇的共處理通過激活促凋亡分 子(經(jīng)切割的PARP、半胱天冬酶3、7、8、9)促進了 MDA-MB-231/MCF7細胞的凋亡。通過蛋白 印跡分析還確認(rèn)了 Id-I和EGFR表達的抑制。Y -TP表示γ -生育三烯酚。(D)通過MTT 測試檢測用Y-T3和3-氨基丙腈(APN)溫育24小時后的細胞活力。注意，APN的添加減輕 了 Y-T3對MDA-MB-231細胞的細胞毒性。(E)確定在γ_Τ3處理后Idl mRNA被阻抑。然 而，確定在用3-氨基丙腈(APN)和Y-T3共處理后Idl mRNA被部分恢復(fù)。GAPDH的量作為 內(nèi)參照而測定。(F) 3-氨基丙腈(APN)和Y-T3的共處理逆轉(zhuǎn)了促凋亡基因(半胱天冬酶 3、7、8、9和PARP)的激活并部分恢復(fù)了 Idl的組成型激活。圖21說明了展示出維生素E異構(gòu)體對黑色素瘤細胞的影響的結(jié)果。(A)在用不同 的維生素E異構(gòu)體處理M小時后通過MTT測試檢測細胞活性。注意，維生素E異構(gòu)體、特 別是生育三烯酚以不同程度影響黑色素瘤細胞的活力。(B)在Y-T3存在時在IC5tl的C32 生長速率，對于α-Τ3，使用100 μ Μ。圖22說明了展示出Y-Τ3誘導(dǎo)細胞凋亡的結(jié)果。(A)流式細胞儀細胞周期分析。 對對照細胞和與Y-Τ3在IC5tl溫育M小時的受處理細胞進行流式細胞儀分析。注意，亞Gl 群在處理后出現(xiàn)。(B)C32和G361中促凋亡途徑的劑量依賴性激活(以μΜ計)。注意，在 M小時溫育期間，Υ-Τ3以細胞劑量依賴性方式誘導(dǎo)關(guān)鍵分子(經(jīng)切割的半胱天冬酶3、7、 8>9, PARP)的激活。圖23說明了展示出C32細胞中促存活途徑被Y_T3失活的結(jié)果。㈧通過蛋白印 跡檢測了 Υ-Τ3(以μΜ計)對NF-K B途徑的激活的影響。注意，NF-KB ρ65核轉(zhuǎn)位和磷 酸化i κ B被γ -T3處理所抑制。(B) y -T3處理還導(dǎo)致C32細胞中Id家族蛋白和EGFR的 下調(diào)。圖M說明了展示出在γ -T3誘導(dǎo)的C32細胞的凋亡中涉及Jim N末端激酶(JNK) 激活的結(jié)果。(A)通過MTT測試檢驗了在用Y -T3和JNK抑制劑(SP600125)溫育24小時 后的細胞活力。注意，添加JNK抑制劑減輕了 Y-T3在C32中的細胞毒性，表明JNK介導(dǎo) Y -T3的抗增殖效應(yīng)。通過測定SAPK/JNK、c-jun和ATF-2的磷酸化水平發(fā)現(xiàn)Y -T3處理 后的JNK活性升高。因此，證實JNK與γ -T3抗癌性質(zhì)有關(guān)。圖25說明了展示出在惡性黑色素瘤G361中Y _T3處理對細胞侵入的抑制的結(jié) 果。(A)收集用指定劑量的Υ-Τ3處理的G361細胞，然后平板接種至涂布有基質(zhì)膠(0. 5mg/ ml)的插入物中。用結(jié)晶紫染色入侵透過膜的細胞，并在顯微鏡下對圖像拍照。用提取緩沖 液裂解后，測定595nm處的強度。(B) Y-T3處理誘導(dǎo)上皮標(biāo)記物(E-鈣粘蛋白和Y -聯(lián)蛋 白)的表達；但抑制間質(zhì)標(biāo)記物(波形蛋白、α-SMA和twist蛋白)的表達。將用不同劑 量的Y -T3處理M小時的G361細胞裂解，并用蛋白印跡分析。圖沈說明了展示出Y-T3對C32中多西紫杉醇誘導(dǎo)和達卡巴嗪誘導(dǎo)的凋亡的協(xié) 同效應(yīng)的結(jié)果。(A)多西紫杉醇和Y-T3共處理的效果。將C32細胞分別與40μΜ的γ-Τ3 和50ηΜ/500μΜ的多西紫杉醇/達卡巴嗪溫育M小時。通過MTT測試檢測細胞活力。在多 西紫杉醇和Y "Τ3共處理后相對于對照的活C32細胞的百分比顯著低于用任一種試劑單獨 處理的百分比。(B)使用蛋白印跡進一步表明，Y-Τ3與多西紫杉醇或達卡巴嗪的共處理通 過激活促凋亡分子(經(jīng)切割的PARP、半胱天冬酶3、7、9)增進了 C32細胞凋亡。還針對C32細胞中的Id_l、EGFR、磷酸化iKB確定了額外的對增殖基因的抑制。(C)所提出的黑色素 瘤細胞中的Y-T3抗癌途徑。此外在圖12C中單獨展示了提出的PCa細胞中的抗癌途徑。圖27說明了展示藥代動力學(xué)、單急性毒性和血清標(biāo)記物的實驗結(jié)果。(A)40只5 周齡的C57BL/6黑色小鼠接受含Img Y _生育三烯酚的單劑量腹膜內(nèi)(i. p.)注射。將5 只小鼠在不同時間點處死(10分鐘、30分鐘、lh、;3h、6h、Mh、48h和72h)。使用“材料和方 法”中所述的HPLC方法分析血清中的Y-生育三烯酚濃度。(B)90只C57BL/6黑色小鼠 (每組 10 只)接受含有在 100 μ 1 注射體積中的 lmg、2mg、^ig、aiig、12mg、16mg、20mg、30mg 和40mg的Y-生育三烯酚的單劑量腹膜內(nèi)注射。在30天中觀察小鼠的體重和存活，其后 通過吸入CO2處死。(C) 10只C57BL/6黑色小鼠每周接受5劑量的含有Img的γ -生育三 烯酚或DMSO空白的腹膜內(nèi)注射。通過心臟失血將小鼠處死并對血清執(zhí)行“材料和方法”中 所述的生物標(biāo)記物檢測方法。在所檢測的任何參數(shù)中都沒有毒理學(xué)變化。生物標(biāo)記物的血 清水平是白蛋白(Alb)、肌酸(Cre)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、脲(toe) 和堿性磷酸酶(ALP) (RANDOX laboratories Ltd, Crumlin，英國)。圖觀說明了展示出體重、腫瘤尺寸和所施用的Y-T3的器官分布的實驗結(jié)果。將 PCa細胞植入雄性BALB/c無胸腺裸鼠并隨機選為3組(每組η = 5)；對照(DMS0作為空 載劑)、Y "Τ3 (50mg/kg/日)和Y -T3與多西紫杉醇的組合治療(50mg y _T3/kg/日，和 7. 5mg多西紫杉醇/kg/周)。在每次藥物治療前將小鼠稱重(A)并用碳纖維卡尺(Fisher scientific, Pittsburgh, PA)測定腫瘤(B)0 (C)使用“材料和方法”中所述HPLC方法分 析器官和血清中的Y-T3濃度。圖四說明了在藥物治療后異種移植至雄性BALB/c無胸腺裸鼠上的PCa細胞的 成像。(A B)對于兩次重復(fù)實驗，將PCa細胞植入雄性BALB/c無胸腺裸鼠并隨機選為3 組(每組η = 10)；對照(DMS0作為空載劑)、γ -Τ3 (50mg/kg/日)和Y-T3與多西紫杉 醇的組合治療(50mg Y_T3/kg/日，和7.5mg多西紫杉醇/kg/周)。小鼠接受熒光素溶液 (150mg/kg體重)腹膜內(nèi)注射。(Al)顯示用DMSO (溶劑)、單一試劑(1. 5mg Y-T3/日/ 小鼠)或組合療法(1. 5mg y -T3/日/小鼠和0. 75mg多西紫杉醇/周/小鼠)治療的帶 有s. c. PC3-Luc腫瘤的裸鼠的側(cè)視圖。將2000000個PC3_Luc細胞接種至雄性裸鼠并在施 用熒光素后5分鐘使用IVIS 成像系統(tǒng)(Xenogen Corp.，Hopkinton, MA，美國)監(jiān)測腫瘤 抑制。(Bi)顯示用DMSO(溶劑)、單一試劑(1. Omg γ -Τ3/日/小鼠)或組合療法(1. Omg Y "Τ3/日/小鼠和0. 15mg多西紫杉醇/周/小鼠)治療的帶有s. c. PC3-Luc腫瘤的裸鼠 的側(cè)視圖。將2000000個PC3-LUC細胞接種至雄性裸鼠并在治療結(jié)束時使用IVIS 成像系 統(tǒng)監(jiān)測腫瘤抑制。(A2)和(B2)不同治療組中的平均小鼠體內(nèi)信號強度。(A3)和(B3)對 照、Y-T3和Y-T3與多西紫杉醇的組合治療中的代表性腫瘤照片。箭頭指示裸鼠上的原 位腫瘤。(A4)和(B4)從對照組、Y-T3組以及Y-T3與多西紫杉醇組移除的腫瘤的尺寸 的代表照片。圖30顯示了說明Y -T3對癌細胞增殖的抗腫瘤效應(yīng)的圖像。通過采用抗PCNA、 Ki67和Id-I的小鼠抗體以及二抗(抗小鼠Fab-HRP)的IHC免疫組織化學(xué)確定了的PCNA、 Ki67和Id-I下調(diào)。這三種細胞增殖分子的表達水平在用Y-T3單獨治療或Y-T3與多西 紫杉醇(Doce)共同治療后變低(所有圖中比例尺為100 μ m)。圖31顯示了說明Y -T3對癌細胞凋亡的抗腫瘤效應(yīng)的圖像。通過采用抗經(jīng)切割半胱天冬酶3和經(jīng)切割PARP的兔多克隆抗體以及二抗(抗兔Fab-HRP)的IHC免疫組織化 學(xué)確定了經(jīng)切割半胱天冬酶3和經(jīng)切割PARP的存在。這兩種分子的表達水平在用Y-T3 單獨治療或Y-T3與多西紫杉醇(Doce)共同治療后變高(所有圖中比例尺為100 μ m)。圖32顯示了 Y-T3對腫瘤抑制基因及其阻抑劑的抗腫瘤效應(yīng)的圖像。通過采用 抗E-鈣粘蛋白和Snail的抗體以及二抗(Fab-HRP)的IHC免疫組織化學(xué)確定了腫瘤抑制 基因(E-鈣粘蛋白；(A))及其阻抑劑(Snail蛋白；(B))的表達變化。這兩種分子的表達水 平在用Y-T3單獨治療或Y-T3與多西紫杉醇(Doce)共同治療后反相關(guān)(所有圖中比例 尺為 100 μ m)。
具體實施例方式在第一方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防癌癥或預(yù)防在經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)的方 法，所述方法通過施用包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物而實 現(xiàn)。本發(fā)明人首次表明，本文所述的組合物能夠a)下調(diào)干細胞標(biāo)記物(如干細胞標(biāo)記 物CD133和CD44)的表達，如本文所提到的蛋白印跡和流式細胞儀分析所證實；和b)抑制 球和腫瘤形成。因此，經(jīng)本發(fā)明人證明，據(jù)發(fā)現(xiàn)用本文所述的組合物對可能發(fā)展為癌細胞的 細胞進行預(yù)處理可以干擾細胞的腫瘤初始化能力。這些發(fā)現(xiàn)得到體外以及體內(nèi)數(shù)據(jù)的支 持，從本文提到的實驗結(jié)果將變得顯而易見。本發(fā)明的該方面的一般性原理如圖7所示，其 基于以下實例其中將包含Y-生育三烯酚和S-生育三烯酚中的至少一種的組合物用于 預(yù)防癌癥或避免在經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)。在圖8所示的另一個實例中，如果對經(jīng)遺 傳修飾以發(fā)展前列腺上皮內(nèi)贅生瘤(PIN)的特殊小鼠飼喂如下組合物，則所述小鼠不會發(fā) 展出PIN，所述組合物包含Y-生育三烯酚或δ-生育三烯酚或者γ-生育三烯酚和δ-生 育三烯酚的混合物中的至少一種。“預(yù)防癌癥”是指避免或阻止癌癥發(fā)生的行為。在本情形中，使用本文所指的組合 物具有使癌癥無法在動物體內(nèi)發(fā)展的效果。應(yīng)將“預(yù)防”與“癌癥治療”區(qū)分，在“癌癥治 療”中，將本文所指的組合物用于治療已經(jīng)存在于動物體內(nèi)的癌細胞，換言之用于治療已經(jīng) 罹患癌癥的動物體。有時會使用術(shù)語“化學(xué)預(yù)防”。如同術(shù)語癌癥治療，“化學(xué)預(yù)治”也是指 治療已經(jīng)罹患癌癥的患者，而不應(yīng)被與本發(fā)明的權(quán)利要求中所提及的“癌癥預(yù)防”混淆?；?學(xué)預(yù)治表明治療應(yīng)該避免使用對經(jīng)歷此種特定治療的動物體具有最嚴(yán)重的副作用的化學(xué) 療法。在另一個實施方式中，本文所指的組合物還能用于預(yù)防經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù) 發(fā)。這意味著罹患癌癥且經(jīng)歷了使動物體從癌癥治愈的治療的動物體使用本文所指的組合 物以預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)。在一個實施方式中，其意味著動物體經(jīng)歷并完成了使動物體從癌癥治 愈或愈合的治療。與正在進行的癌癥治療的差異基于以下事實本文所指的組合物并非用 于破壞癌細胞或阻止其增殖，但對于“預(yù)防癌癥”而言是用于預(yù)防或阻止癌癥復(fù)發(fā)。本文所 提及的“愈合”或“治愈”在臨床上被定義為癌癥的體征或癥狀的永久性缺失；隨著癌癥的 臨床證據(jù)的消失的完全緩解或完全響應(yīng)?！鞍┌Y治療”是指針對消除或除去癌細胞的任何類型的已知癌癥治療。癌癥治療或 療法的主要方法是外科手術(shù)、放射療法(對局部和局部區(qū)域性疾病而言)和化學(xué)療法(對系統(tǒng)性疾病而言)。其它重要方法包括激素療法(對于某些癌癥，例如前列腺癌、乳腺癌或 子宮內(nèi)膜癌)、免疫療法(單克隆抗體、干擾素和其它生物響應(yīng)調(diào)節(jié)劑和腫瘤疫苗)、如類 視色素等分化劑的使用、利用細胞生長知識和分子生物學(xué)的試劑以及上述治療或療法的混
合 O一般而言，認(rèn)為“癌癥”是指喪失其正常控制機制并因而具有未受調(diào)節(jié)的生長(增 殖)、缺乏分化、局部組織侵入和通常的腫瘤轉(zhuǎn)移的細胞組(通常源自單個細胞)。癌性(惡 性)細胞能從任何器官內(nèi)的任何組織發(fā)展。隨著癌性細胞生長和繁殖，其形成能侵入并破 壞正常的臨近組織的癌性組織團(稱為腫瘤)。術(shù)語“腫瘤”是指異常生長物或團塊，腫瘤 可以為癌性或非癌性。來自原發(fā)(初始)位點的癌性細胞能在整個體內(nèi)擴散(轉(zhuǎn)移)。癌 性細胞在稱為轉(zhuǎn)化的復(fù)雜過程中從健康細胞發(fā)展而來。所述過程的第一步是初始化，其中 細胞遺傳材料(DNA中、有時在染色體結(jié)構(gòu)中)的變化引導(dǎo)細胞稱為癌性。本文所指包含 Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物可以避免這種初始化。在一個實施方式中，能使用本文所述的組合物治療的癌癥類型可以是由遺傳突變 (如染色體癌基因異常)造成的癌癥或由病毒(僅舉幾例，如乳頭狀瘤病毒、愛潑斯坦-巴 爾(Epstein-Ban·)病毒)引起的癌癥。兩組主要的負(fù)責(zé)遺傳突變的基因是癌基因和腫瘤 抑制基因。癌基因是調(diào)節(jié)細胞生長的正?；?原癌基因)的異常形式，而腫瘤抑制基因 是在細胞分裂和DNA修復(fù)中起著重要作用并且對于檢測細胞中不適當(dāng)?shù)纳L信號至關(guān)重 要的天然基因。因此，在一個實施方式中，待治療的癌癥是指由癌基因的突變所導(dǎo)致的癌癥 或由腫瘤抑制基因的突變所導(dǎo)致的癌癥。在另一個實施方式中，癌癥類型可以包括但不限于淋巴細胞性白血病、髓性白血 病、惡性淋巴瘤、骨髓組織增殖性疾病或?qū)嶓w腫瘤。在再一個實施方式中，癌癥是指可以包 括但不限于黑色素瘤(皮膚癌)、前列腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌和肺癌的癌癥類 型。在一個實例中，癌癥是指前列腺癌、乳腺癌或黑色素瘤(皮膚癌)。在另一個實施方式 中，本發(fā)明針對通過施用包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物來 預(yù)防前列腺上皮內(nèi)贅生瘤(PIN)或經(jīng)歷癌癥治療后的前列腺上皮內(nèi)贅生瘤(PIN)復(fù)發(fā)。維生素E由兩種主要成分組成——生育酚(T)和生育三烯酚CH)。生育三烯酚 (T3)主要見于棕櫚油中。生育三烯酚與生育酚(T)共同為所有活細胞提供了重要的抗氧 化劑活性來源。這種普通抗氧化劑屬性反映出生育三烯酚與生育酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)的相似性， 其差異僅在于其結(jié)構(gòu)側(cè)鏈(對生育三烯酚而言含有法尼基，對于生育酚而言含飽和葉綠基 (phytyl))。來自色原烷醇環(huán)的羥基的共同氫原子起到清除鏈增長過氧基自由基的作用。 根據(jù)其色原烷醇環(huán)上甲基的位置，可以將生育酚與生育三烯酚區(qū)分為4中異構(gòu)體形式α、 β、Y 禾口 δ。如上所述，為了預(yù)防癌癥或預(yù)防經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)，使用包含Y-生育 三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種的組合物。Y-生育三烯酚或δ-生育三烯酚是維 生素E的異構(gòu)形式。維生素E由兩種主要成分組成——生育酚(T)和生育三烯酚CH)。生 育三烯酚CH)主要見于棕櫚油中。生育三烯酚與生育酚(T)共同為所有活細胞提供了重 要的抗氧化劑活性來源。這種普通抗氧化劑屬性反映出生育三烯酚與生育酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)的 相似性，其差異僅在于其結(jié)構(gòu)側(cè)鏈(對生育三烯酚而言含有法尼基，對于生育酚而言含飽 和葉綠基)。
存在著不同的生育酚和生育三烯酚異構(gòu)形式(見式I和式II)。生育酚由分別源 自尿黑酸(HGA)和二磷酸葉綠酯的色原烷醇和15碳尾部組成。另一方面，生育三烯酚與生 育酚在結(jié)構(gòu)上的差異在于烴尾部中的三個反式雙鍵的存在。式I和式II以及其后的說明 提供了有關(guān)生育酚(T)和生育三烯酚(T3)的已知異構(gòu)形式的概述。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防癌癥或預(yù)防在經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)的方法，所述方法通過施用包含 Y -生育三烯酚或δ -生育三烯酚中的至少一種的組合物而實現(xiàn)，其中所述癌癥選自黑色 素瘤、前列腺癌、前列腺上皮內(nèi)贅生瘤、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌和肺癌。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥治療選自外科手術(shù)、放射療法、化學(xué)療法、 激素療法、免疫療法、分化劑以及上述治療或療法的組合。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述癌癥是前列腺癌。
4.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物是富含Y-生育三烯酚或 S-生育三烯酚的制劑。
5.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，基于所述組合物的總重量％，所述組合 物包含大于10重量％的Y-生育三烯酚或δ-生育三烯酚或者γ-生育三烯酚和δ-生 育三烯酚的混合物。
6.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物包含的Y-生育三烯酚和 S-生育三烯酚之比為1 Y，其中Y小于10。
7.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物還包含α-生育三烯酚和/ 或β -生育三烯酚和/或α -生育酚。
8.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物的施用量為約IOmg 約 IOOOmg總生育三烯酚重量％含量/60kg成人，或約IOmg 約500mg總生育三烯酚重量％含 量/60kg成人。
9.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中以能獲取在動物血液中對于每種單獨生 育三烯酚異構(gòu)體而言約0. lmg/L 30mg/L或者約10mg/L 30mg/L的血清水平濃度的量 施用所述組合物。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述動物是哺乳動物。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述哺乳動物選自人、豬、馬、小鼠、大鼠、牛、狗和貓。
12.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物被配制為液體天然油、水溶 性乳化液、冷水分散性粉末和小珠。
13.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物作為片劑、凝膠劑、糖錠劑、 持續(xù)釋放制劑、軟膏劑或可注射制劑或者以膠囊化形式施用。
14.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中將所述組合物口服、皮內(nèi)、皮下或腹膜 內(nèi)施用。
15.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物還包含選自綠茶多酚、有機 硫化合物、分離自云芝或雜色云芝的蛋白結(jié)合多糖、紅色類胡蘿卜素色素以及上述物質(zhì)的 組合的物質(zhì)。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述綠茶多酚選自表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶 素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述有機硫化合物選自源自蒜的S-烯丙基巰基半 胱氨酸和源自蒜的蒜素。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述蛋白結(jié)合多糖是多糖K(Krestin，PSK)或多 糖肽(PSP)。
19.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述紅色類胡蘿卜素色素是番茄紅素。
20.一種組合物，所述組合物包含Y-生育三烯酚或δ-生育三烯酚中的至少一種 以及( ，3S)-N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉 烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸N-叔丁基酯，13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和 /或(5Z)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達卡巴嗪)。
21.—種抑制或逆轉(zhuǎn)癌癥的方法，所述方法通過施用包含Y-生育三烯酚或δ-生育三 烯酚中的至少一種以及OR，3S) -N-羰基-N-叔丁基酯-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1， 2,4, 7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯_2_苯甲酸13-酯的三水合物(多 西紫杉醇)和/或(5Ζ)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達卡巴嗪)的組合 物而進行。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述癌癥選自黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、 前列腺上皮內(nèi)贅生瘤、膀胱癌、乳腺癌和肺癌。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，所述方法用于抑制或逆轉(zhuǎn)黑色素瘤，其中所述組合物 包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及(2R，3S)-N-羰基-N-叔丁基 酯-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1,2,4,7,10,13-六羥基紫杉烷-11-烯_9_酮-4-乙 酸酯-2-苯甲酸，13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和/或(5Z) -5- ( 二甲基氨基異二氮烯) 咪唑-4-甲酰胺(達卡巴嗪)。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，所述方法用于抑制或逆轉(zhuǎn)前列腺癌，其中所述組合物 包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及(2R，3S)-N-羰基-N-叔丁基 酯-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1,2,4,7,10,13-六羥基紫杉烷-11-烯_9_酮-4-乙 酸酯-2-苯甲酸13-酯的三水合物(多西紫杉醇)。
25.如權(quán)利要求21所述的方法，所述方法用于抑制或逆轉(zhuǎn)乳腺癌，其中所述組合物 包含Y-生育三烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及(2R，3S)-N-羰基-N-叔丁基 酯-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1,2,4,7,10,13-六羥基紫杉烷-11-烯_9_酮-4-乙 酸酯-2-苯甲酸13-酯的三水合物(多西紫杉醇)。
26.如權(quán)利要求20所述的組合物或權(quán)利要求21 25中任一項所述的方法，其中所述 組合物是富含Y-生育三烯酚或δ-生育三烯酚的制劑。
27.如權(quán)利要求20或沈所述的組合物或者權(quán)利要求21 沈中任一項所述的方法，其 中，基于所述組合物的總重，所述組合物包含大于10重量％的Y-生育三烯酚或δ-生育 三烯酚或者Y-生育三烯酚和S-生育三烯酚的混合物。
28.如權(quán)利要求20或沈 27所述的組合物或者權(quán)利要求21 27中任一項所述的方 法，所述組合物包含的Y-生育三烯酚和S-生育三烯酚之比為1 Y，其中Y小于10。
29.如權(quán)利要求20或沈 28所述的組合物或者權(quán)利要求21 28中任一項所述的方 法，其中所述組合物還包含α -生育三烯酚和/或β -生育三烯酚和/或α -生育酚。
30.如權(quán)利要求20或沈 四所述的組合物或者權(quán)利要求21 四中任一項所述的方 法，其中所述組合物還包含選自綠茶多酚、有機硫化合物、分離自云芝或雜色云芝的蛋白結(jié) 合多糖、紅色類胡蘿卜素色素以及上述物質(zhì)的組合的物質(zhì)。
31.如權(quán)利要求21 30中任一項所述的方法，其中所述組合物的施用量為約IOmg 約IOOOmg總生育三烯酚重量％含量/60kg成人，或約IOmg 約500mg總生育三烯酚重量％含量/60kg成人。
32.如權(quán)利要求21 31中任一項所述的方法，其中以能獲取在動物血液中對于每種單 獨生育三烯酚異構(gòu)體而言約0. lmg/L 30mg/L或者約10mg/L 30mg/L的血清水平濃度 的量施用所述組合物。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述動物是哺乳動物。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述哺乳動物選自人、豬、馬、小鼠、大鼠、牛、狗和貓。
35.如權(quán)利要求21 34中任一項所述的方法，其中所述組合物以水溶形式施用。
36.如權(quán)利要求21 35中任一項所述的方法，其中所述組合物作為片劑、凝膠劑、糖錠 劑、持續(xù)釋放制劑、軟膏劑或可注射制劑或者以膠囊化形式施用。
37.如權(quán)利要求21 35中任一項所述的方法，其中將所述組合物口服、皮內(nèi)、皮下或腹 膜內(nèi)施用。
38.一種組合物在用于預(yù)防動物體內(nèi)的癌癥或預(yù)防經(jīng)歷癌癥治療后的動物體內(nèi)的癌癥 復(fù)發(fā)的藥物制備中的用途，所述組合物包含Y-生育三烯酚和S-生育三烯酚中的至少一 種，其中所述癌癥選自黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、前列腺上皮內(nèi)贅生瘤、膀胱癌、乳 腺癌和肺癌。
39.一種組合物在用于癌癥治療用藥物的制備中的用途，所述組合物包含Y-生育三 烯酚或S-生育三烯酚中的至少一種以及QR，3S)-N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán) 氧基-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯_9_酮-4-乙酸酯_2_苯甲酸N-叔丁基酯， 13-酯的三水合物(多西紫杉醇)和/或(5Z)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺 (達卡巴嗪)。
40.一種權(quán)利要求20所述的組合物的制備方法，所述方法包括將Y-生育三烯酚或 δ -生育三烯酚中的至少一種與OR，3S) -N-羰基-3-苯基異絲氨酸，5，20-環(huán)氧基-1，2， 4，7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯_2_苯甲酸N-叔丁基酯，13-酯的三 水合物(多西紫杉醇)和/或(5Ζ)-5-( 二甲基氨基異二氮烯)咪唑-4-甲酰胺(達卡巴 嗪)混合。
全文摘要
本發(fā)明涉及預(yù)防癌癥或預(yù)防在經(jīng)歷癌癥治療后的癌癥復(fù)發(fā)的方法，所述方法通過施用包含γ-生育三烯酚或γ-生育三烯酚中的至少一種的組合物而實現(xiàn)，其中所述癌癥選自黑色素瘤、前列腺癌、前列腺上皮內(nèi)贅生瘤、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌和肺癌。本發(fā)明還涉及包含γ-生育三烯酚或δ-生育三烯酚和多西紫杉醇和/或達卡巴嗪中的至少一種的組合物，并且涉及抑制腫瘤或使其停滯或逆轉(zhuǎn)的方法，所述方法通過施用包含γ-生育三烯酚或γ-生育三烯酚以及多西紫杉醇和/或達卡巴嗪中的至少一種的組合物而進行。本發(fā)明還涉及制備那些組合物的方法。
文檔編號A61K31/4164GK102088971SQ200980123895
公開日2011年6月8日 申請日期2009年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月23日
發(fā)明者凌明達, 葉一霖, 葉惠妮, 王云川 申請人:達沃斯生命科學(xué)有限公司