專利名稱：用于檢測(cè)發(fā)育異常的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供可用于在患Barrett食管的患者中測(cè)定發(fā)育異常部位的成像方法。該 方法包括使用含載體的光學(xué)成像劑，所述載體靶向EGFR的胞外區(qū)，該載體對(duì)EGFR的選擇性 也超過(guò)Her2。將載體用適合用綠色至近紅外波長(zhǎng)500-1200nm的光體內(nèi)成像的光學(xué)報(bào)道分 子標(biāo)記。還提供適合用于該方法的新的光學(xué)成像劑。
背景技術(shù)：
食管癌在所有報(bào)道的癌癥病例中少于5%，但在美國(guó)每年診斷約30，000新的此 類病例，生存率低(見(jiàn)下文)?？蓪⑹彻馨┓譃閮煞N主要類型，鱗狀細(xì)胞癌和腺癌，取決于 惡性細(xì)胞的類型。Barrett食管是惡變前狀態(tài)，伴隨食管癌特別是腺癌發(fā)病的危險(xiǎn)增加 [Kiesslich et al, Clin. Gastroenterol. Hepatol. ,4,979-987 (2006) ] 慢性反流增力口 Barrett食管的危險(xiǎn)，因此已提出胃食管反流(GERD)是食管癌的危險(xiǎn)因素。在美國(guó)和西歐食管的腺癌比鱗狀細(xì)胞癌更普遍。食管癌可以是可治療的疾病，但 很少能治愈?？偟?年生存率在5%-30%之間。早期診斷食管癌改善患者的生存率。主要 治療包括單獨(dú)手術(shù)或化療結(jié)合放療。用于治療食管癌的化療包括5-氟尿嘧啶和順鉬。缺 乏精確的手術(shù)前分期是主要的臨床問(wèn)題。在Barrett食管中低度發(fā)育異常(即異常組織生長(zhǎng))的存在是食管癌發(fā)病的 危險(xiǎn)因素，但目前監(jiān)測(cè)依賴組織病理學(xué)[Lim et al, Endoscopy, 39, 581-7 (2007) ] 0目前 在Barrett食管診斷發(fā)育異常是通過(guò)每l-2cm進(jìn)行隨機(jī)四象限活檢(Seattle方案)，這 耗費(fèi)時(shí)間且價(jià)格昂貴[DaCosta et al, Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. , 20 (1), 41-57 (2006)]。在常規(guī)內(nèi)窺鏡檢查過(guò)程中通?？床坏紹arrett食管的發(fā)育異常[Endlicher et al, Gut,48,314-319(2001)]οUS 6，035，229 (Washington研究基金)描述在導(dǎo)管末端利用照明和成像探針檢測(cè) Barrett食管的系統(tǒng)。該文件未公開(kāi)光學(xué)造影劑。已經(jīng)在檢測(cè)高度發(fā)育異?；驉盒越M織時(shí)用染料亞甲藍(lán)，比較在體內(nèi)Barrett食管 組織的染色與在體外活檢樣品的染色[Canto et al, Endoscopy, 33, 391-400 (2001) ] Kiesslich et al [Clin. Gastroenterol. H印atol.，4，979-987 U006)]報(bào)道用共 聚焦激光顯微內(nèi)窺鏡，用熒光素幫助檢測(cè)Barrett上皮和相關(guān)腫瘤。WO 2005/058371公開(kāi)使食管癌和Barrett食管體內(nèi)成像的光學(xué)成像造影劑。造影 劑對(duì)異常表達(dá)于Barrett食管的生物靶標(biāo)具有親和力。WO 2005/058371的造影劑優(yōu)選具有 式V-L-R其中V是一種或多種對(duì)食管癌或Barrett食管中異常表達(dá)的靶標(biāo)具有親和力的載體部 分；L是連接部分或鍵；和R是一種或多種在光學(xué)成像時(shí)可檢測(cè)的報(bào)道分子部分。
描述在Barrett食管、鱗狀細(xì)胞癌或腺癌中過(guò)度表達(dá)或下調(diào)的多種靶標(biāo)。靶標(biāo)優(yōu) 選選自-E-鈣粘蛋白、CD44、P62/c-myc (HGF受體)、p53和EGFR/erB_2 (權(quán)利要求5)。載 體(V)聲稱優(yōu)選選自肽、擬肽部分、寡核苷酸、低聚糖、脂肪相關(guān)化合物和傳統(tǒng)的有機(jī)藥物 樣小分子。報(bào)道分子(R)優(yōu)選與電磁波譜的紫外線至近紅外部分波長(zhǎng)區(qū)的光相互作用的染 料。表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和EGR受體(EGFR)是配體-受體對(duì)。人表皮生長(zhǎng)因子受體 (HER)家族包括4種密切相關(guān)的ErbB受體酪氨酸激酶EGFR (也稱為 ErbB-I 或 HER-1)；ErbB-2 (也稱為 HER-2 或 Neu)；ErbB-3 (也稱為 HER-3)；禾口ErbB-4 (也稱為 HER-4)。EGFR是位于細(xì)胞表面的170kDa蛋白質(zhì)，由氨基端胞外配體結(jié)合區(qū)、單個(gè)疏水跨 膜螺旋和胞內(nèi)區(qū)組成，胞內(nèi)區(qū)包含酪氨酸激酶區(qū)和含有關(guān)鍵性酪氨酸殘基和受體調(diào)節(jié)基序 的羧基端區(qū)。配體如EGF與胞外區(qū)的結(jié)合導(dǎo)致幾種C-端酪氨酸殘基的受體二聚體化、激 活和受體自磷酸化。這些磷酸化酪氨酸充當(dāng)多種胞質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的結(jié)合位點(diǎn)。在EGFR 下游這些途徑的激活引起細(xì)胞增殖、分化、移行/活動(dòng)、粘附、防止凋亡、提高存活和基因轉(zhuǎn) 錄。已知EGFR在許多上皮性腫瘤中異常激活[Mendolsohn et al, Semin. Oncol. ,33(4), 369-385(2006)]οCai et al [Eur. J. Nucl. Med. Mol. Lnaging，；35，186-208 Q008)]已回顧根據(jù) PET、 SPECT、光學(xué)和MRI使人EGF受體(EGFR，HER2，HER3和HER4)多模式成像的方法。Barrett食管是以鱗狀食管上皮代替柱狀上皮(化生)為特征的疾病。一部分 Barrett食管患者將發(fā)展為食管腺癌，在此過(guò)程中的關(guān)鍵步驟是發(fā)育異常的形成。因此診斷 發(fā)育異常的患者接受可包括抗反流藥物、內(nèi)窺鏡粘膜消融和手術(shù)切除的療法，取決于疾病 的嚴(yán)重禾呈度(圖 1 ；摘自"Guidelines for the Diagnosis and Management of Barrett's Columnar-lined Oesophagus (診斷和管理 Barrett 柱狀線食管的指南)”，UK Society of Gastroenterology,2005 年 8 月；www, bsg. org.uk)

圖1 :提出管理Barrett患者的指南
權(quán)利要求
1.一種體內(nèi)成像的方法，用于在患Barrett食管的患者中測(cè)定潛在發(fā)育異常的部位， 所述方法包括(i)提供含有靶向EGFR胞外區(qū)的載體的成像劑，所述載體用光學(xué)報(bào)道分子成像部分標(biāo) 記，該光學(xué)報(bào)道分子成像部分適合用波長(zhǎng)500-1200nm的光使哺乳動(dòng)物體體內(nèi)成像； ( )用步驟(i)的成像劑在所述患者至少一段食管中實(shí)施光學(xué)成像；(iii)從步驟(ii)的成像中測(cè)定在患者食管的一個(gè)或多個(gè)位置上與背景相比成像劑 的吸收是否增加；(iv)當(dāng)步驟(iii)的測(cè)定顯示至少一個(gè)此類位置吸收增加，則將該位置鑒定為潛在發(fā) 育異常的部位。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述載體具有最高達(dá)20kDa的分子量。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述載體包含EGFR胞外區(qū)的內(nèi)源性配體，選自(i)人EGF(hEGF)或其片段；(ii)TGF-a或其片段；(iii)雙調(diào)蛋白。
4.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述載體包含EGFR胞外區(qū)的外源性配體，選自(i)包含肽序列CKSPEPQHC 的 9-20_mer 肽(GE9)；(ii)包含肽序列LHLWVPEPWTQT 的 2_20-mer 肽(GElO)；(iii)包含肽序列YHWYGYTPQNVI 的 12-20-mer 肽(GEll)；(iv)包含肽序列MLYNPTTYQMDVNPEGK 的 17-20-mer 肽(Inherbin 1)； (ν)包含肽序列 LVYNKLTFQLEPNPHTK 的 17-20-mer 肽(Inherbin 3)；(vi)Affibody ；(vii)Nanobody ；(viii)包含肽序列LARLLT 的 6-15-mer 肽(D4)。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述光學(xué)報(bào)道分子是熒光染料。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述染料是菁染料。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述菁染料具有式Ia
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述染料是苯并吡喃鍋t染料。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中權(quán)利要求1步驟(i)的成像劑作為藥用組合物提供。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的方法，其中所述成像用于區(qū)分(a)無(wú)發(fā)育異常的Barrett食管；(b)發(fā)育異常；(c)癌。
11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其中權(quán)利要求1的方法還包括步驟 (ν)在步驟(iv)的一個(gè)或多個(gè)潛在發(fā)育異常部位上進(jìn)行活檢。
12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其中所述成像用于指導(dǎo)遞送局部治療的部位。
13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其中所述成像用于監(jiān)測(cè)治療的功效。
14.可用于權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)方法的成像劑，其中所述成像劑選自 (i)用權(quán)利要求7或權(quán)利要求8定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記的hEGF或其片段； ( )用權(quán)利要求7或權(quán)利要求8定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記的TGF- α或其片段；(iii)用權(quán)利要求1或5-8中任一項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記的雙調(diào)蛋白；(iv)包含氨基酸序列CKSPEPQHC的9-20-mer肽(GE9)，所述肽用權(quán)利要求6_8中任一 項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記；(ν)包含氨基酸序列 LHLWVPEPWTQT (GElO)或 YHWYGYTPQNVI (GEll)的 12-20_mer 肽，所 述肽用權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記；(vi)包含氨基酸序列MLYNPTTYQMDVNPEGK的12-20-mer肽(Inherbin1)，所述肽用權(quán) 利要求1或5-8中任一項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記；(vii)包含氨基酸序列LVYNKLTFQLEPNPHTK 的 12-20-mer 肽 Qnherbin 3)，所述肽用 權(quán)利要求1或5-8中任一項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記；(viii)用權(quán)利要求7或權(quán)利要求8定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記的權(quán)利要求4定義的 Affibody ；(ix)用權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)定義的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記的權(quán)利要求4定義的 Nanobody 。
15.權(quán)利要求14的成像劑，其中所述光學(xué)報(bào)道分子如權(quán)利要求7或權(quán)利要求8定義。
16.一種藥用組合物，所述藥用組合物包含權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的成像劑。
17.—種藥劑盒，所述藥劑盒用于制備權(quán)利要求16的藥用組合物。
18.權(quán)利要求1-8、14或15中任一項(xiàng)定義的成像劑在權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)方法中的用途。
19.藥劑盒在權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)方法中，用于制備權(quán)利要求1-8、14或15中任一項(xiàng) 定義的成像劑中的用途。
20.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)步驟(i)定義的載體在制備成像劑中的用途，所述成像劑用 于權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法。
全文摘要
本發(fā)明提供可用于在患Barrett食管的患者中測(cè)定發(fā)育異常部位的成像方法。該方法包括使用含載體的光學(xué)成像劑，所述載體靶向EGFR的胞外區(qū)，該載體對(duì)EGFR的選擇性也超過(guò)Her2。將載體用適合用綠色至近紅外波長(zhǎng)500-1200nm的光體內(nèi)成像的光學(xué)報(bào)道分子標(biāo)記。還提供適合用于該方法的新的光學(xué)成像劑。
文檔編號(hào)A61K49/00GK102123738SQ200980132466
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月15日
發(fā)明者A·丹尼卡斯, B·吉爾貝爾 申請(qǐng)人:通用電氣醫(yī)療集團(tuán)股份有限公司