專利名稱：用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜合癥(aids)的含有天堂椒的水溶性抗病毒產(chǎn)品的制作方法
用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的含有天 堂椒的水溶性抗病毒產(chǎn)品本發(fā)明涉及一種基于天堂椒(Aframomum Melegueta)植物的葉片的抗病毒產(chǎn)品， 其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。其打算用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜 合癥(AIDQ和其變體。AIDS是一種影響了全球、尤其是非洲國家的傳染性疾病。人們已 經(jīng)注意到，AIDS經(jīng)常伴隨有淋巴結病綜合癥，而在這種疾病的末期，患者的免疫防御陷入崩 潰。1983年，來自巴斯德研究所(Institut Pasteur)的呂克蒙塔尼(Luc Montagnier)教 授分離出了造成這一大范圍傳染病的病原體。根據(jù)本發(fā)明人所了解的現(xiàn)有技術，能夠確認以下文獻OAPI專利第09043號，1991年3月31日授予約瑟夫克魯茲(Jos印hCruz)，涉及基 于含羞草(Mimosa Pudica Linn)葉片提取物的新穎抗病毒組合物。OAPI專利第11602號， 授予埃瑞克-格布杜索博士(Dr. ErickGbodossou)，涉及含五種植物(膠苦瓜(Momordica Balsamina)、天堂椒、節(jié)莎草(Cyperus Articulatus)、埃特格木(Ficus Iteophylla)禾口 酸豆(Tamarinduslndica))的提取物的組合物。在博士的治療過程中，所吸收的產(chǎn)品去除 糞便和尿液中的AIDS病毒。其它文獻包括1994年9月授予美國制藥康公司(Pharmakon USA, Inc)的專利 WO 94/18993 ； 1992 年 4 月 16 日授予紐約大學(New York University) 的專利US 5484889 ;2000年6月22日授予帕雅生物技術公司(Paya Biotechnic Inc.) 的專利WO 0035466 ；和1999年3月23日授予克帕爾S.達利沃(Kirpal S. Dhaliwal)的 專利US 5886029。當前針對AIDS病毒進行的所有研究都在疫苗或是殺死體內(nèi)的病毒方面 未能獲得進展。當前的抗逆轉錄病毒藥物使病原體突變成致病力更強的病毒。在這種大 范圍傳染病存在的二十多年里，為了找到疫苗，抗病毒劑，研究所、政府和非政府組織、聯(lián)合 國機構，簡單地說，所有的科技、政治、文化和民間社會團體，都經(jīng)常與世界衛(wèi)生組織(World Health Organization)或者其它合作者和資金供應者展開合作，投入了這場針對HIV/AIDS 的戰(zhàn)斗。使用如疊氮胸苷(AZT)、DDC、3TC、AZT/3C和茚地那韋(indinavir)等抗病毒物質 治療HIV的常規(guī)方法使得血漿病毒載量降低到最低水平，并保持盡可能長的時間。得到的 結果即使為陽性的，也仍很有限。平均起來，有50%的患者在治療大約12個月后觀察到血 漿病毒載量降到50個拷貝/毫升。然而，在當前的研究狀態(tài)中，通過使用抗逆轉錄病毒藥 物仍未解決的問題持續(xù)存在，尤其是不可能完全根除病原體。即使當CD4淋巴細胞含量已經(jīng)實質上增加，但由于抗逆轉錄病毒藥物的持續(xù)毒性 尚未解決，致使免疫修復意義不大。其它問題也未通過使用抗逆轉錄病毒藥物得到解決，例如早期發(fā)展抗逆轉錄病毒 藥物抗性的風險，以及關于治療功效持續(xù)時間的不確定性。與使用當前的抗逆轉錄病毒藥 物相關的約束也應引起注意，因為患者每天需要攝取約20種產(chǎn)品，而這對于最廣泛地暴露 于HIV/AIDS感染的非洲人群的購買力來說，成本太高。而且，就當前技術進展而言，還沒有 具有水溶性的可注射的抗逆轉錄病毒產(chǎn)品。目前還不知道此類的產(chǎn)品。推薦的一種預防措 施是使用避孕套；我們知道，避孕套的使用不僅限制了生育，而且知道，它并非完全有效。國際社會越來越清楚地意識到需要使醫(yī)務人員進行HIV的預防和號召使用傳統(tǒng)藥物。本發(fā)明 的產(chǎn)品是基于天堂椒植物的葉片，其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。塞內(nèi)加爾 (Senegal)的科研部門(ScientificResearch Department)已經(jīng)從植物學、藥理學和化學 方面對這種植物進行了研究，而且莫爾豪斯醫(yī)學院(Morehouse School of Medicine)(美 國喬治亞州亞特蘭大(Atlanta，GA, USA))基于本發(fā)明人開發(fā)的參照系統(tǒng)對這種植物的提 取物進行了分析。I-棺物學、藥理學和化學研究棺物名稱天堂椒棺物學方面根莖型植物，具有直立莖干，高度可達1到1. 5米。在從地面伸出的花梗上有美麗 的喇叭形花朵；紅色果實?；瘜W方面經(jīng)過蒸餾，得到含有石竹烯、C16碳氫化合物(kayene)、β菔烯、桉油精、香葉醇、 乙酸香葉酯和松油醇的香精油。種子(稱為摩洛哥豆蔻(grainsof paradise))含有0. 30% 具有宜人的芳香烴氣味的淺黃色香精，以及極辣的苦味素非洲豆蔻醇(paradol)，其接近 于姜酮醇(gingerol)。通過增加抑制和抵消病毒增殖的培養(yǎng)基的改變，使其作用偏向于苦 瓜子蛋白(momorcharin)的作用。藥理學方面非洲豆蔻屬(Aframomum)是殺絳蟲瀉藥，而且在缺乏相關性浮腫 (deficiency-related edema)的情況下，其煎劑可用于洗澡。其根部具有驅蟲特性。其在 治療風濕病和肺病方面起有重要作用。II-天堂椒的體外研究將干燥并磨成粉的葉片提供給莫爾豪斯醫(yī)學院(美國喬治亞州亞特蘭大)的病毒 學小組，以便基于本發(fā)明人的參照系統(tǒng)驗證其對所述病毒和其變體的體外活性。A-目的本研究涉及確定天堂椒提取物是否能阻斷AIDS病毒的復制，以及干燥的天堂椒 粉末是否能溶于水。本研究也旨在研究所述產(chǎn)品對感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)病 毒和其變體的細胞的直接作用。B-實施測試將葉片提取物的可溶部分混入Img所述病毒(NL4-3KFS)的pM等效物中。最初 測試的病毒與提取物為IOmg病毒相對于1微克提取物。必須針對當前的應用測試提取物， 并說明其對病毒的直接作用。所述作用可包括阻斷病毒gpl20的包膜蛋白，或溶解病毒包 膜中所含的脂質?；蛘?，活性成分可能整合病毒粒子，并影響病毒殼體或催化蛋白質，如逆轉錄、蛋 白酶或整合酶。在與提取物一起預先培育15分鐘后，需要將提取物/病毒混合物添加到提供支持 的組織培養(yǎng)物中。病毒必須在37°C溫度下吸收提取物30分鐘。隨后，用PBS洗滌培養(yǎng)物3 次，最后保存在冷培養(yǎng)基中。在初始研究中，需要使用具有MAGI指示劑的細胞，這些細胞是 設計成將被HIV-I感染的HeLa細胞。感染后，這些細胞產(chǎn)生β _半乳糖苷酶，其可在感染發(fā)展時檢測呈藍色。經(jīng)處理的藍色細胞與未經(jīng)處理的細胞的數(shù)量的比較，相對地指示抑制 作用。初始研究中使用的病毒不應具有任何抑制作用，并因此僅限于細胞感染的單一步驟。 此單一細胞感染步驟遠不能成為確定與感染相關的作用的最具指示性的方法。在這些測試 中，重要的是確立適宜的劑量，即，對細胞無毒，而且仍含有最大濃度的可溶物質。如果在初 始測試中發(fā)現(xiàn)了抗逆轉錄病毒活性，那么必須確定影響的是病毒生命周期的哪一部分?？?以使用特定的病毒分離株和“指示劑”細胞來確定病毒進入的相對性能。如果病毒進入是 完整的，那么有可能使用PCR測試，通過檢測前病毒DNA形成的各個步驟，來確定逆轉錄受 影響的程度。產(chǎn)生完整病毒粒子的能力可使用標準P24ELISA測試直接測定，而病毒成熟則 可由病毒粒子中存在的多數(shù)病毒蛋白來測定。也需要至少能夠初步確定可溶物質的性質。 蛋白酶提取物處理能夠確定該提取物中存在的蛋白質是否是產(chǎn)生所述活性的原因?；谶@些目的和指導，進行了實驗。III-針對產(chǎn)品特征鑒定的實驗A-天堂椒提取物的溶解件將1克干燥的天堂椒粉末在經(jīng)100%甲醇滅菌的蒸餾水中浸軟，并在室溫下靜置1 小時。隨后，使得到的溶液通過裝有0. 45微米過濾器的滅菌設備，以便截留殘余的不可溶 物質?？扇懿糠种胁缓毦?。開始時存在于干物質中的物質完全被溶解。得到的溶液的 最大濃度為每毫升約IOOmg干粉。B-產(chǎn)品對警感染細胞的作用-為了確定可溶性提取物是否具有任何抗病毒活性，使用典型的MAGI細胞來測試 其對受感染細胞的作用。-利用HeLa細胞對MAGI細胞進行遺傳修飾，所述HeLa細胞含有包括病毒LTR的 報告基因盒，其位于大腸桿菌β-gal的編碼基因的上游。-所述基因的表達取決于HIV蛋白Tat的活化，而這需要感染HIV。-受感染的細胞變藍，并且可以在顯微鏡下進行計數(shù)。-用IngHIV KFS病毒接種兩塊板。-同時，將200μ 1提取物添加到細胞中，并培育2小時。-洗滌細胞2次，并將提取物放回冷培養(yǎng)基中。在產(chǎn)品提取物存在下，感染48小時 的細胞消失了。根據(jù)此觀察結果，可以確定，該提取物直接對病毒作用，而且主要影響受感染的靶 細胞。為此，進行以下測試。再建立兩塊含有未受感染的活細胞的板。一塊板作為對照。將基于天堂椒的抗病 毒產(chǎn)品引入第二塊板中。30分鐘后，將AIDS病毒注入含有MAGI測試細胞的該第二塊板中， 隨后恢復至培育溫度。這些活細胞沒有變藍，即，它們未受感染。這一實驗使我們得出以下結論-該產(chǎn)品具有抗病毒活性。-該產(chǎn)品使病毒滅活。-該產(chǎn)品可破壞感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ病毒和其變體的細胞。C-混合產(chǎn)品的SELDI質譜分析
研究該產(chǎn)品后發(fā)現(xiàn)，活性成分并不復雜，其中分子的大小為小于10，OOODa，并顯示 出對蛋白酶處理的抗性。IV-結果這些不同的實驗證實，所述產(chǎn)品-具有抗病毒活性，-對感染AIDS病毒的細胞有毒并具有破壞性作用，-使病毒失活，并且呈現(xiàn)抑制病毒的能力，-可溶于水，-不復雜，分子大小為小于10，OOODa，并顯示出對蛋白酶處理的抗性。本發(fā)明的用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)和其變體的基于天堂椒 的抗病毒產(chǎn)品制備如下。收集天堂椒的葉片，然后自然干燥，并磨成細粉；將干粉在經(jīng)100%甲醇滅菌的水 中浸軟；接著，使溶液通過直徑為45微米的過濾器，產(chǎn)生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且 可溶于水的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品可用作陰道殺微生物劑，而且也可以任何其它形式使用。體外測試表明，所得溶液可阻斷獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ病毒和其變體的 發(fā)展，并且間接刺激和增加網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)，由此增強患者的免疫防御能力。
權利要求
1.一種用于治療用途的基于天堂椒(Aframomum Melegueta)的抗病毒產(chǎn)品和其制備 方法，所述治療用途是用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ和其變體。
2.根據(jù)權利要求1所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述制備方法包含三個步驟a)第一步，收集干燥的天堂椒葉片，并磨成細粉，b)第二步，將所述天堂椒葉片的粉末在經(jīng)100%甲醇滅菌的水中浸軟，c)第三步，使所述溶液通過0.45微米的過濾器。
3.根據(jù)權利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其可溶于水。
4.根據(jù)權利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其具有抗病毒活性。
5.根據(jù)權利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其對感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS) 和其變體的細胞有毒并具有破壞性作用。
6.根據(jù)權利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其使所述病毒滅活，并具有抑制病毒的能力。
7.根據(jù)權利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其不復雜，分子大小為小于10，000Da，并 顯示出對蛋白酶處理的抗性。
8.根據(jù)權利要求1至7任意一條所述的產(chǎn)品，其特征在于，其刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)。
9.根據(jù)權利要求1至8任意一條所述的產(chǎn)品，其特征在于，其可用作陰道殺微生物劑并 且可以任何其它形式使用。
10.根據(jù)任意一條前述權利要求所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述天堂椒葉片提取物的濃 縮和純化是根據(jù)化學和生物化學中所用的常規(guī)方法進行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于天堂椒的抗病毒產(chǎn)品，其可溶解病毒、抑制病毒，可溶于水，適用于治療和預防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)和其變體。所述產(chǎn)品制備如下收集天堂椒的葉片，自然干燥，并磨成細粉；將干粉在經(jīng)100％甲醇滅菌的水中浸軟；接著，使溶液通過直徑為0.45微米的過濾器，產(chǎn)生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且可溶于水的滅菌的產(chǎn)品；不同的實驗證實，所述產(chǎn)品具有抗病毒活性；對感染AIDS病毒的細胞有毒并具有破壞性作用，使所述病毒失活，并且呈現(xiàn)抑制病毒的能力；可溶于水，不復雜，分子大小為小于10,000Da，并顯示出對蛋白酶處理的抗性。
文檔編號A61K36/9064GK102131513SQ200980133499
公開日2011年7月20日 申請日期2009年3月31日 優(yōu)先權日2009年3月31日
發(fā)明者埃里克·維德金·阿格尼·格博多蘇 申請人:埃里克·維德金·阿格尼·格博多蘇