專利名稱：工程化抗il-13抗體、組合物、方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)人白介素13(IL_13)蛋白或其片段具有免疫特異性的工程化抗體及其制備和使用方法，并包括治療適應(yīng)癥。
背景技術(shù)：
IL-13是含有4個(gè)α螺旋的球狀蛋白，其屬于生長(zhǎng)激素樣細(xì)胞因子家族，該家族包括IL-4、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、IL-2和巨噬細(xì)胞集落刺激因子。IL-13結(jié)合到由為52-kDa亞基的IL-13Ra 1和為HOkDa亞基的pl40組成的異源二聚體受體，導(dǎo)致STAT6 的激活。還已知存在第二個(gè)IL-13受體Ra2。Ral受體負(fù)責(zé)在與IL-13結(jié)合時(shí)引發(fā)信號(hào)級(jí)聯(lián)。Ra2受體以比Ral更強(qiáng)的親和力結(jié)合到IL-13上，然而其功能還待確定。發(fā)生哮喘反應(yīng)的患者的活化⑶4+Th2淋巴細(xì)胞增加，造成氣道炎癥。活化的Th2 淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(IL-4、IL-5、IL-9、IL-10和IL-13)，這些細(xì)胞因子促進(jìn)炎癥，造成與氣道高反應(yīng)性相關(guān)的組織損傷。研究已表明，IL-13是鼠模型中哮喘的主要成因，并且人IL-13的單核苷酸多態(tài)性變體R130Q (Graves等人，2000《變態(tài)反應(yīng)與臨床免疫學(xué)雜志》 (J Allergy Clin Immunol) 105 :506_13)是哮喘發(fā)展的重要風(fēng)險(xiǎn)因素(Heinzmann 等人， 2000《人類分子遺傳學(xué)》(Hum. Mol. Genet.) 9 :549_559 ；《美國(guó)呼吸雜志》(Am. J. Respir.)； Howard 等人，2001《細(xì)胞分子生物學(xué)》(Cell Mol. Biol.) 25 :377_384 ；W00123410)。鼠模型中，用抗IL-13中和Mab處理抑制了受刺激動(dòng)物中的哮喘反應(yīng)。因此，證據(jù)表明，中和IL-13 可能有利于治療患者的哮喘和氣道狹窄。因此，需要提供對(duì)人IL-13具有特異性的人抗體，以在治療中使用，來(lái)減少或消除 IL-13介導(dǎo)的疾病，并且獲得優(yōu)于已知抗體或其片段的改善。

發(fā)明內(nèi)容
本文所描述和受權(quán)利要求書保護(hù)的主題涉及抗IL-13抗體和組合物，可用于治療患有與IL-13相關(guān)的病變或病癥的受試者，所述病變或病癥包括但不限于呼吸性病癥，例如哮喘和肺部纖維變性；心血管病癥；癌癥；皮膚病和纖維變性病癥。本發(fā)明提供了能夠在體外、體內(nèi)或原位阻斷IL-13的生物活性的抗IL-13單克隆抗體，所述阻斷IL-13的生物活性包括但不限于抑制人IL-13的野生型或天然變體結(jié)合到人IL-13受體α 1 ；抑制人 IL-13或人IL-13的天然變體結(jié)合到人IL-13受體α 2 ；防止或抑制人腫瘤細(xì)胞的人IL-13 依賴性增殖；抑制人IL-13依賴性IgE產(chǎn)生；減少組織的嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)，并且此抗體在人 IL-13上有特異性結(jié)合位點(diǎn)。提供了示例性抗IL-13單克隆抗體的氨基酸序列，其可由用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)的核酸編碼。具有由所選結(jié)合片段構(gòu)建的結(jié)合域的抗體或抗體片段以及具有SEQ ID N0:27和 28表示的氨基酸序列的指定變體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明提供特定組合物和用于制備此類組合物的教導(dǎo)，所述組合物包含在選自SEQ ID NO :2- 的免疫球蛋白可變區(qū)內(nèi)參與抗原結(jié)合的殘基。這些結(jié)合域具有所需特性，并且能夠調(diào)節(jié)治療具體IL-13相關(guān)病變所需的生物活性。在一個(gè)方面，本發(fā)明是一種分離的抗體，其包含SEQ ID NO 表示的重鏈可變區(qū)和根據(jù)式(I)的輕鏈CDR3 (L-CDR3)Q-Q-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-P-Y-T(SEQ ID NO 29) (I)其中) 可以是 His、Gln 或 Pro ；Xaa2 可以是 Asn、Asp、Ser、Leu、Pro、Ile、Phe、Glu 或 Val ；Xaa3 可以是 Glu、Asp、Gly、Ser、Ile、Tyr、Tryp、Asn、His、Val、Met、Arg、Leu、Phe、 Pro或不存在；以及Xaa4 可以是 Tyr、Gly、Ser, Ala、Val、Phe, Thr、Glu 或不存在。在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述抗體包含SEQ ID NO 25和沈表示的結(jié)合域。在另一方面，本發(fā)明涉及一種抗體，其結(jié)合到人野生型IL_13(SEQ ID N0:1)上的共同表位，所述表位由包含SEQ ID而25和沈的工程抗IL-13抗體M1295和包含SEQ ID NO :2和3的命名為C863的鼠-人嵌合抗體的結(jié)合所限定。由這些抗體識(shí)別的表位包含IL-13的8個(gè)殘基，其中3個(gè)殘基來(lái)自螺旋A (ArglO、Ilel3、Glul4)，5個(gè)殘基來(lái)自螺旋 D (LeulOO、Lysl03、Phel06、Argl07、Glul08)，其中原子間距不超過(guò)4.θΑ。基于接觸的數(shù)目， ArglO和Argl07看起來(lái)是所述表位的關(guān)鍵殘基。在另一個(gè)實(shí)施例中，提供抗原表位作為疫苗的組分。具有SEQ ID NO 1的殘基10、 13、14、100、103和106-108的上述表位由本發(fā)明的抗體識(shí)別，用于主動(dòng)免疫宿主以引發(fā)抗 IL-13抗體的產(chǎn)生。產(chǎn)生的抗體能夠治療或預(yù)防與IL-13生物活性相關(guān)的病理病癥。另一個(gè)實(shí)施例涉及通過(guò)如下方式治療或預(yù)防與IL-13生物活性相關(guān)的病理病癥 將本發(fā)明的治療或預(yù)防有效量的抗體或抗體組合施用給需要此類治療的受試者。在一個(gè)方面，將抗IL-13抗體施用給診斷患有哮喘的患者。在另一方面，將抗IL-13抗體施用給診斷患有特應(yīng)性皮炎的患者。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼本文所述抗IL-13抗體的序列、結(jié)構(gòu)域、部分或變體的分離的核酸分子。還設(shè)想與編碼抗IL-13抗體的核酸序列雜交或互補(bǔ)的核酸序列。本發(fā)明還提供了包含所述抗IL-13抗體核酸分子的重組載體，包含此類核酸和/或重組載體的宿主細(xì)胞，以及制備和/或使用此類抗體核酸、載體和/或宿主細(xì)胞的方法。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的IL-13結(jié)合抗體的編碼序列、結(jié)構(gòu)域、部分或變體，其可以在包含合適載體溶液或試劑的組合物中，作為藥用組合物施用給患者。本發(fā)明還涉及生成、純化和包裝本文所述抗體的方法，用于通過(guò)施用治療或預(yù)防有效量的抗體，治療或預(yù)防與IL-13生物活性相關(guān)的病理病癥。本發(fā)明提供了用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗IL-13抗體的方法，包括如本文所述在抗IL-13抗體以可檢測(cè)和可回收的量表達(dá)的條件下，培養(yǎng)宿主細(xì)胞。大體上，本文所公開和受權(quán)利要求書保護(hù)的主題包括結(jié)合到IL-13表位(SEQ ID NO 1)上的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述表位包含SEQ ID NO :1的第10位精氨酸和第107位精氨酸，并且還可以包含選自下列的殘基SEQ ID NO :1的第6位絲氨酸、第13位異亮氨酸、第14位谷氨酸、第100位亮氨酸、第103位賴氨酸、第106位苯丙氨酸以及第108位谷氨酸。一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含抗體互補(bǔ)位，所述抗體互補(bǔ)位包含輕鏈可變區(qū)，并且還包含酪氨酸殘基，所述酪氨酸殘基a)在第10位精氨酸處與IL-13 相互作用；以及b)與SEQ ID NO 1的第14位谷氨酸成鍵。抗體互補(bǔ)位還可以包含所述輕鏈可變區(qū)的組氨酸殘基和天冬酰胺殘基，并且還可以包含重鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包含選自酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、纈氨酸和精氨酸的抗體互補(bǔ)位接觸殘基?？贵w互補(bǔ)位的輕鏈可變區(qū)可以包含SEQ ID NO 2,并且所述色氨酸在SEQ ID NO 2的第32位，并且所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 3,并且所述接觸殘基包括第32位酪氨酸、第M位色氨酸和第104 位酪氨酸；分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段包含抗體互補(bǔ)位，抗體互補(bǔ)位包含輕鏈可變區(qū)，還包含天冬氨酸殘基，該天冬氨酸殘基a)在第10位精氨酸與IL-13相互作用；以及b) 與SEQ ID NO :1的第6位絲氨酸成鍵，其中所述抗體互補(bǔ)位還包含所述輕鏈可變區(qū)的酪氨酸殘基和組氨酸殘基?？贵w互補(bǔ)位還可以包含重鏈可變區(qū)，重鏈可變區(qū)包含選自酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、纈氨酸和精氨酸的抗體互補(bǔ)位接觸殘基。輕鏈可變區(qū)可以包含SEQ ID NO 25，并且所述天冬氨酸在SEQ ID NO 25的第92位，重鏈可變區(qū)可以包含SEQ ID NO: 26，并且所述接觸殘基包括第32位酪氨酸、第M位色氨酸和第104位色氨酸；一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其與選自C863、HFAL62和M1295的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到IL-13表位。所述單克隆抗體包含SEQ ID NO : 表示的輕鏈 CDR3 (L-CDR3)，并且 SEQ ID NO :29 的 L-CDR3 還如式(I)所示限定式(I)-Q-Q-Xaa1-Xaa2 -Xaa3-Xaa4-P-Y-T (SEQ ID NO :29)，其中 Xagi1 可以是His、Gln 或Pro ；Xagi2 可以是 Asn、Asp、 Ser> Leu、Pro、lie、Phe> Glu 或 Val ；Xaa3 可以是 Glu、Asp、Gly、Ser> lie、Tyr> Tryp> Asn、 His、Val、Met、Arg、Leu、Phe、Pro 或不存在；以及 Xagi4 可以是 Tyr、Gly、kr、Ala、Val、Phe、 Thr、Glu或不存在。所述單克隆抗體可以包含SEQ ID NO J8表示的重鏈可變區(qū)和/或SEQ ID NO 27表示的輕鏈可變區(qū)；一種分離的單克隆抗體，其包含SEQ ID NO 9的所述可變輕鏈及其變體，以及SEQ ID NO: 20的所述可變重鏈及其變體。SEQ ID NO :9表示的可變輕鏈的變體包含選自以下殘基位置處的改變第91位組氨酸、第92位天冬酰胺、第93位谷氨酸和第94位酪氨酸。所述殘基可以發(fā)生改變或缺失，如在提交的本專利申請(qǐng)中的權(quán)利要求18的表中所反映的那樣。SEQ ID NO :20表示的可變重鏈的變體包含選自以下殘基位置處的改變第31位蘇氨酸、第34位甲硫氨酸、第100位甲硫氨酸和第106位纈氨酸。所述殘基發(fā)生改變或缺失，如在提交的本專利申請(qǐng)中的權(quán)利要求20的表中所反映的那樣。一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含SEQ ID NO :25的所述輕鏈可變區(qū)和SEQ ID NO :26的所述重鏈可變區(qū)。該抗體還包含相應(yīng)的輕鏈和重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)以及重鏈鉸鏈區(qū)。該抗體以及本文所述的任何其他抗體都可以制備成藥物組合物。分離的抗體可以包含SEQ ID N0:25和SEQ ID NO J6表示的序列變體，其中此變體保留了結(jié)合到IL-13表位(SEQ ID N0:1)的能力，其中所述表位包含SEQ ID NO :1的第10位精氨酸和第107位精氨酸，并且所述表位還可以包含選自下列的殘基SEQ ID NO :1的第6位絲氨酸、第13位異亮氨酸、第14位谷氨酸、第100位亮氨酸、第103位賴氨酸、第106位苯丙氨酸和第108位谷氨酸。一種分離的人源化重組抗體，其包含人源化重鏈可變區(qū)和人源化輕鏈可變區(qū)，其中所述人源化重鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQ ID NO 3的所述重鏈的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和來(lái)自人受體抗體重鏈的人源骨架區(qū)，并且所述人源化輕鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQ ID N0:2的所述輕鏈的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)和來(lái)自人受體抗體輕鏈的人源骨架區(qū)；其中所述人源化抗體降低了 IL-13對(duì)THP-I細(xì)胞上的IL-13受體的結(jié)合，如由STAT6信號(hào)傳導(dǎo)所測(cè)定的那樣。所述抗體基本上調(diào)節(jié)IL-13多肽的活性，所述活性的調(diào)節(jié)選自(a)抑制人重組野生型人IL-13 結(jié)合到人IL-13受體α 1或合適的動(dòng)物IL-13受體，如由野生型IL-13誘導(dǎo)的Mat_6磷酸化所測(cè)定的那樣，(b)抑制人重組野生型人IL-13結(jié)合到人IL-13受體α 2或合適的動(dòng)物IL-13受體，(c)與用鹽水處理的卵白蛋白致敏動(dòng)物相比，在用抗體處理的大鼠組中減少嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)目，以及(d)與非特異性對(duì)照試劑相比，在化學(xué)藥品激發(fā)的動(dòng)物中降低氣道阻力。所述抗體可以包含選自SEQ ID而3、20和沈的重鏈可變區(qū)的⑶R和選自SEQ ID NO :2、9、14和26的輕鏈可變區(qū)的⑶R ；對(duì)人IL-13具有免疫特異性的抗原結(jié)合抗體片段，其結(jié)合到IL-13變體RllOQ上， 由表面等離子體共振(Biacore)所測(cè)定的Kd值小于250pM(0. 250 X I(T9M)，并且防止IL-13 結(jié)合到THP-I細(xì)胞上的IL-13R2 α 1，如由STAT6信號(hào)傳導(dǎo)所測(cè)定的那樣，并且該抗體顯示出在來(lái)自螺旋A的殘基處，包括ArglO、Ilel3、Glul4，和來(lái)自螺旋D的殘基處，包括Lysl03、 Phel06、Argl07、Glul08處接觸人IL-13，其中原子間距不超過(guò)4.0A;分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1的IL-13抗體或本文所述和受權(quán)利要求書保護(hù)的任何抗體；以及包含此類核酸的載體、宿主細(xì)胞；組合物，其包括藥物組合物，并包含權(quán)利要求1的IL-13抗體或本文所述的任何其他抗體；用于在細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物中診斷或治療IL-13相關(guān)病癥(包括哮喘)的方法，包括接觸或施用包含有效量(0.001-50mg/kg)的本文所述抗體的組合物；用IL-13表位免疫宿主的方法，所述表位包含來(lái)自螺旋A的殘基(ArglO、Ilel3、 Glul4)和來(lái)自螺旋D的殘基(Lysl03、Phel06、Argl07、Glul08)或其模擬肽；以及藥物組合物，其包含提交的權(quán)利要求1-22和M-30中任一項(xiàng)的抗體，以及使用提交的權(quán)利要求1-22和M-30中任一項(xiàng)的抗IL-13抗體，來(lái)制備用于治療IL-13介導(dǎo)的疾病的藥劑。


圖1.選自人源骨架文庫(kù)的V區(qū)比對(duì)，所述比對(duì)用于輕鏈(上方比對(duì))和重鏈(下方比對(duì))的移植鼠源C836 CDR(框內(nèi))的人源銜接。圖2.得自IL-13R α 2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析的數(shù)據(jù)，所述分析使用C863的人源化變體生成的數(shù)種高親和力mAb，其中L-CDR3變體(指定的)與重鏈變體2C02配對(duì)，并且生物素化的 IL-13-WT 用量為 500pg/ml。圖3.反映用于限定優(yōu)選抗體結(jié)構(gòu)的不同編號(hào)方案的圖表。序列表簡(jiǎn)述
權(quán)利要求
1.一種結(jié)合到IL-13表位(SEQ ID NO=D的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述表位包含SEQ ID NO 1的第10位精氨酸和第107位精氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其中所述表位還包含選自以下的殘基SEQID NO :1的第6位絲氨酸、第13位異亮氨酸、第14位谷氨酸、第100位亮氨酸、第103位賴氨酸、第106位苯丙氨酸和第108位谷氨酸。
3.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含抗體互補(bǔ)位，所述抗體互補(bǔ)位包含輕鏈可變區(qū)，并且還包含酪氨酸殘基，所述酪氨酸殘基a)在第10位精氨酸處與IL-13相互作用；以及b)與SEQ ID NO 1的第14位谷氨酸成鍵。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的單克隆抗體，其中所述抗體互補(bǔ)位還包含在所述輕鏈可變區(qū)上的組氨酸殘基和天冬酰胺殘基。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的單克隆抗體，其中所述抗體互補(bǔ)位還包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、纈氨酸和精氨酸的抗體互補(bǔ)位接觸殘基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的單克隆抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID N0:2，并且所述酪氨酸在SEQ ID NO :2的第32位，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :3，并且所述接觸殘基包括第32位酪氨酸、第M位色氨酸和第104位酪氨酸。
7.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含抗體互補(bǔ)位，所述抗體互補(bǔ)位包含輕鏈可變區(qū)，并且還包含天冬氨酸殘基，所述天冬氨酸殘基a)在第10位精氨酸與IL-13 相互作用；以及b)與SEQ ID NO 1的第6位絲氨酸成鍵。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的單克隆抗體，其中所述抗體互補(bǔ)位還包含在所述輕鏈可變區(qū)上的酪氨酸殘基和組氨酸殘基。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的單克隆抗體，其中所述抗體互補(bǔ)位還包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含選自酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、纈氨酸和精氨酸的抗體互補(bǔ)位接觸殘基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的單克隆抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID N0:25，并且所述天冬氨酸在SEQ ID NO :25的第92位，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID N0:26，并且所述接觸殘基包括第32位酪氨酸、第M位色氨酸和第104位酪氨酸。
11.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其與選自C863、HFAL62和M1295的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到IL-13表位。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分離的單克隆抗體，其中競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到IL-13表位的所述抗體包含 SEQ ID NO 29 的輕鏈 CDR3 (L-CDR3)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的分離的單克隆抗體，其中SEQID NO 29的L-⑶R3進(jìn)一步限定為如式(I)所示式(I)--Q-Q-Xaar)(a￡i2-Xaa3-)(a￡i4-P-Y-T(SEQ ID NO :29)其中Xagi1可以是His、Gln或Pro ；Xaa2 可以是 Asn、Asp、Ser> Leu、Pro、lie、Phe> Glu 或 Val ；Xaa3 可以是 Glu、Asp、Gly、Ser、lie、Tyr、Tryp、Asn、His、Val、Met、Arg、Leu、Phe、Pro 或不存在；以及Xaa4 可以是 Tyr、Gly、Ser, Ala、Val、Phe, Thr、Glu 或不存在。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體，其中競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到IL-13表位的所述抗體包含SEQID NO 28的重鏈可變區(qū)。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體，其中競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到IL-13表位的所述抗體還包含SEQ ID NO 27的輕鏈可變區(qū)。
16.一種分離的單克隆抗體，其包含SEQ ID NO :9的可變輕鏈及其變體，以及SEQ ID NO 20的可變重鏈及其變體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的單克隆抗體，其中SEQID NO :9的可變輕鏈的所述變體包含選自以下殘基位置處的改變第91位組氨酸、第92位天冬酰胺、第93位谷氨酸和第94 位酪氨酸。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的單克隆抗體，其中選自第91位組氨酸、第92位天冬酰胺、 第93位谷氨酸和第94位酪氨酸的所述殘基被改變成不同氨基酸或缺失，如下所示
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的單克隆抗體，其中SEQID NO :20的可變重鏈的所述變體包含選自以下殘基位置處的改變第31位蘇氨酸、第34位甲硫氨酸、第100位甲硫氨酸和第106位纈氨酸。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的單克隆抗體，其中選自第31位蘇氨酸、第34位甲硫氨酸、 第100位甲硫氨酸和第106位纈氨酸的所述殘基被改變成不同氨基酸或缺失，如下所示
21.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含SEQ ID NO :25的輕鏈可變區(qū)和 SEQ ID NO 26的重鏈可變區(qū)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的分離的抗體，其中將所述輕鏈可變區(qū)和所述重鏈可變區(qū)融合到相應(yīng)的輕鏈和重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)和重鏈鉸鏈區(qū)。
23.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求21所述的抗體。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的分離的抗體，其還包含SEQID NO 25和SEQ ID NO 26的變體，其中此類變體保留了結(jié)合IL-13表位(SEQ ID NO=D的能力，其中所述表位包含SEQ ID NO 1的第10位精氨酸和第107位精氨酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的分離的抗體，其中所述表位還包含選自以下的殘基SEQ ID NO 1的第6位絲氨酸、第13位異亮氨酸、第14位谷氨酸、第100位亮氨酸、第103位賴氨酸、第106位苯丙氨酸和第108位谷氨酸。
26.一種分離的人源化重組抗體，其包含人源化重鏈可變區(qū)和人源化輕鏈可變區(qū)，其中所述人源化重鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQ ID NO 3的重鏈的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和來(lái)自人受體抗體重鏈的人源骨架區(qū)，并且所述人源化輕鏈可變區(qū)包含來(lái)自SEQ ID NO :2的輕鏈的3 個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)和來(lái)自人受體抗體輕鏈的人源骨架區(qū)；其中所述人源化抗體降低了 IL-13對(duì) THP-I細(xì)胞上的IL-13受體的結(jié)合，如由STAT6信號(hào)傳導(dǎo)所測(cè)定的那樣。
27.根據(jù)權(quán)利要求沈所述的抗體，其中所述抗體基本上調(diào)節(jié)IL-13多肽的至少一種活性，所述活性的調(diào)節(jié)選自(a)抑制人重組野生型人IL-13結(jié)合到人IL-13受體α 1或合適的動(dòng)物IL-13受體，如由野生型IL-13誘導(dǎo)的Mat-6磷酸化所測(cè)定的那樣，(b)抑制人重組野生型人IL-13結(jié)合到人IL-13受體α 2或合適的動(dòng)物IL-13受體，(c)與用鹽水處理的卵清白蛋白致敏動(dòng)物相比，在用抗體處理的大鼠組中減少嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)目，以及(d)與非特異性對(duì)照試劑相比，在化學(xué)藥品激發(fā)的動(dòng)物中降低氣道阻力。
28.根據(jù)權(quán)利要求沈所述的抗體，其包含選自SEQID NO :3、20和沈的所述重鏈可變區(qū)的CDR。
29.根據(jù)權(quán)利要求沈所述的抗體，其包含選自SEQID而2、9、14和沈的所述輕鏈可變區(qū)的⑶R。
30.一種對(duì)人IL-13具有免疫特異性的抗原結(jié)合抗體片段，其結(jié)合到IL-13變體 R110Q，由等離子體表面共振(Biacore)所測(cè)定的Kd小于250pM(0. 250X I(T9M)，并防止 IL-13結(jié)合到THP-I細(xì)胞上的IL-13R2 α 1，如由STAT6信號(hào)傳導(dǎo)所測(cè)定的那樣，并且所述抗體顯示出在來(lái)自螺旋A的包括ArglO、Ilel3、Glul4在內(nèi)的殘基和來(lái)自螺旋D的包括 Lysl03、Phel06、Argl07、Glul08在內(nèi)的殘基處接觸人IL-13，其中原子間距不超過(guò)4.0入。
31.一種編碼權(quán)利要求1所述的IL-13抗體的分離的核酸。
32.一種核酸載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求31所述的分離的核酸。
33.一種原核宿主細(xì)胞或真核宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求31所述的分離的核酸。
34.一種組合物，其包含權(quán)利要求1所述的IL-13抗體和藥用載體或稀釋劑。
35.一種用于在細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物中診斷或治療IL-13相關(guān)病癥的方法，其包括接觸或施用包含有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體的組合物。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述IL-13相關(guān)病癥是哮喘。
37.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述有效量為0.001-50毫克/千克所述細(xì)胞、 組織、器官或動(dòng)物。
38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述接觸或所述施用是通過(guò)至少一種選自以下的方式進(jìn)行腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、病灶內(nèi)、靜脈推注、陰道、直腸、口腔、舌下、鼻內(nèi)或經(jīng)皮方式。
39.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其還包括在所述(a)接觸或施用之前、同時(shí)或之后，施用至少一種包含有效量的至少一種化合物或多肽的組合物，所述化合物或多肽選自可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)告分子、抗感染藥物、心血管(CV)系統(tǒng)藥物、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ藥物、自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素或激素刺激藥物、用于流體或電解質(zhì)平衡的藥物、血液學(xué)藥物、抗腫瘤藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物、營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑。
40.一種醫(yī)學(xué)裝置，其中所述裝置適用于促進(jìn)權(quán)利要求1所述的IL-13抗體與需要所述抗體的患者的細(xì)胞、組織或器官接觸。
41.一種用于人藥學(xué)用途或診斷用途的制品，其包括包裝材料和容器，所述容器包含溶液或凍干形式的根據(jù)權(quán)利要求1所述的至少一種IL-13抗體。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的制品，其中所述容器是腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、 心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、病灶內(nèi)、靜脈推注、陰道、直腸、口腔、舌下、鼻內(nèi)或經(jīng)皮遞送裝置或系統(tǒng)的組件。
43.一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的至少一種分離的哺乳動(dòng)物IL-13抗體的方法， 其包括提供能夠以可回收的量表達(dá)所述抗體的宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞。
44.一種IL-13抗體，其通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法制備。
45.一種使用IL-13表位免疫宿主的方法，所述表位包含來(lái)自螺旋A的殘基(ArglO、 Ilel3、Glul4)和來(lái)自螺旋 D 的殘基(Lysl03、Phel06、Argl07、Glul08)或其模擬肽。
46.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-22和24-30中任一項(xiàng)所述的抗體。
47.根據(jù)權(quán)利要求1-22和24-30中任一項(xiàng)所述的抗IL-13抗體在用于制造治療IL-13 介導(dǎo)的疾病的藥劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)人白介素13(IL-13)蛋白或其片段具有免疫特異性的工程化抗體及其制備和使用方法，并包括治療適應(yīng)癥。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102264391SQ200980142406
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2009年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月20日
發(fā)明者A·V·特普利亞科夫, E·赤, G·拉胡納坦, H·M·周, J·C·阿爾馬格羅, J·M·卡通, J·吉爾斯-科馬, J·弗蘭森, K·T·奧奈爾, L·云, R·V·斯萬(wàn)森, S·趙, W·科爾迪爾, Y·馮 申請(qǐng)人:森托科爾奧索生物科技公司