專利名稱：來自佛手柑果的植物復合物、制造方法及作為膳食補充劑和在制藥領域中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及從佛手柑果白軟皮獲得的植物復合物(phytocomplex)(尤其干提取物)，其生產(chǎn)方法和在制藥領域中和作為膳食補充劑的應用。如果通過口服途徑施用，植物復合物具有對血液中膽固醇水平、甘油三酯和血糖施加正常化和控制作用并隨之發(fā)生強同質(zhì)(aterogeneous)作用的特性。這種作用的效果顯得更加有趣，因為與在人有機體中與高血糖和肥胖(代謝癥候群)相關的臨界因子的存在直接成比例。此外，在實驗動物中，植物復合物施加抗氧化/消炎作用，在口服后連同止痛效果一起出現(xiàn)，以及，對于局部使用，在已經(jīng)引起皮膚炎癥的區(qū)域涂敷后出現(xiàn)。最后，從對培養(yǎng)基中的腫瘤系上進行的研究，植物復合物顯示出抑制細胞增殖的持續(xù)活性。
背景技術：
佛手柑(Citrus Bergamia Risso & Poiteau)是一種基本上只生長在卡拉布里亞(Calabria)有限區(qū)域的柑橘類水果，已知其3個主要品種分別稱為i^mminello、 Fantastico 禾口 Castagnaro0已知在Calabrese柑橘類水果中，佛手柑代表了一種特別珍貴的利基產(chǎn)品(niche product)。事實上，這種柑橘類水果生長在雷焦卡拉布里亞(Reggio Calabria)省境內(nèi)的有限地帶，從第勒尼安(Tyrrhenian)南面跨越墨西拿海峽(Messina strait)地區(qū)到Jonic南面。因此，長不超過150公里的地帶，從雷焦卡拉布里亞的更嚴格說來海岸地區(qū)延伸至腹地的前山地區(qū)。截至目前，因為香精油的特性，佛手柑已經(jīng)得到專門使用，因為賦予專有香味在香料中特別需要，其仍然使用用于由最著名的香水企業(yè)制備幾種香水和用于生產(chǎn)“Acqua di Colonia”的基本成分。這種油是通過剝離佛手柑果皮的最外面部分(表皮(cuticola)) 獲得的。還已知，佛手柑具有顯著的防腐特性，從而數(shù)年來，一種佛手柑衍生物，Bergamon, 已經(jīng)生產(chǎn)并使用作為手術室的消毒劑。此外，從傳統(tǒng)醫(yī)學上，佛手柑提取物的令人放松的性能和營養(yǎng)性能是眾所周知的。最后，使用佛手柑香精的水醇溶液用于制備某些產(chǎn)品(特別是具有“Bergarytal”名稱的產(chǎn)品)，已被建議作為噴劑，賦予皮膚消腫作用以及在驅(qū)蚊中特別有效。但是，佛手柑香精的某些組分，例如佛手柑內(nèi)酯(bergaptene)，可能顯示毒性作用，這一發(fā)現(xiàn)通過為香精油提取物的安全使用而要求遠離這種化合物的規(guī)定限制了其應用。JC Gardana Claudio et al “ Evaluation of flavonoids and furanocuma η ns from Citrus Bergamia(Bergamot) juice and identification of new compounds “ MOLECULES(BASEL，SWITZERLAND)2008，vol.13，NO. 9，18 September 2008(2008-09-18) ,pages 2220-22 只針對佛手柑果汁樣本中類黃酮(flavonoids)和呋喃香豆素(furanocumarins)的含量的研究。W02008/061536 (COSMEDICAL APS [DK])描述了，除其它外，用于治療眼部疾病的組合物，也含有生物類黃酮(bioflavonoids)，以及從佛手柑中提取這種生物類黃酮的方法。 這種方法不使用果膠酶或用陽離子樹脂分離，沒有提及所獲得的產(chǎn)物的呋喃香豆素的含量。Mandalari Giuseppina et al “ Enzymatic hydrolysis of flavonoids and pectic oligosaccharides from bergamot(Citrus bergamia Risso)peel " Journal of Agricultural and Food Chemistry, American Chemical Society, Washington, US vol. 54,Nr. 21 1 October 2006 pages 8307-8313描述了從佛手柑果的果皮開始的類黃酮和其它化合物的提取，果皮被認為是香精油企業(yè)的副產(chǎn)品。Gattuso Giuseppe et al“ Flavonoid glycosides in bergamot juice (Citrus bergamia Risso)" Journal of gricultural and Food Chemistry, vol 54, Nr. 11, May 2006描述了基于區(qū)分包含在已經(jīng)用去甲基甲酰胺(dymethylformamide)即在醫(yī)療和/或美容產(chǎn)品中沒有找到用處的溶劑處理的具有產(chǎn)業(yè)原點(industrial origin)的佛手柑果汁中的兩個黃酮苷類化合物(glycosidates flavonoids)的唯一目的而發(fā)展的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，從佛手柑果，特別是從白軟皮，有可能獲得通過積極影響新陳代謝活動以及正常化由這些病變影響的對象的脂和血糖水平而顯示巨大治療作用的濃縮的植物復合物。白軟皮，在柑橘類水果中，是位于包括柑橘外皮(flavedo) 的表皮和果肉之間的部分，由管狀結構的形成實際網(wǎng)絡的細胞形成，大部分組織體積壓縮在細胞間空間中?？色@得的優(yōu)選處于干提取物形式的植物復合物，由于特定的提取和純化工藝，在其組分中存在水果中的被認為是潛在毒性物質(zhì)的呋喃香豆素(Bergaptene和 Bergamottine)大幅減少(至接近消除)，同時保持甚至增加所描述的治愈作用。因此，本發(fā)明的目的是權利要求1要求的方法。該方法將在下文更好地進行描述。
具體實施例方式步驟a (研磨部分去油的水果)水果，沒有最外面部分(柑橘外皮(flavedo))，并部分去油以去除外層表皮層 (outer cuticle)，優(yōu)選通過研磨機絞碎成長度上尺寸小于Icm的小條。步驟b (降低果膠含量)在從第1點獲得的混合物中，接種易于降解果膠的酶，果膠酶(pectolytic enzymes)，在20-40分鐘，優(yōu)選30分鐘，溫度取決于所用的酶，獲得了具有更加流動性的產(chǎn)物，因此是更好可加工的。步驟c (從液體部分分離纖維部分)有利的，利用順序通過傾析器(decanter)和離心機的手段，降低第2點的產(chǎn)物至殘余果肉含量低于0.5%。步驟d (失活果膠酶)這樣的結果將在第C點的液體巴斯德消毒后獲得，巴斯德消毒將具有通過蒸發(fā)消除殘留香精油的絕大部分的副效應。
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步驟e (使水溶液澄清)這通過在裝有等于12. 000道爾頓分子量的選擇性的半透膜(PM低于12. 000道爾頓的顆粒通過該膜)的設備中的超濾工藝獲得。本方法的變體，其中通過用膨潤土處理的手段發(fā)生使澄清作用，這也是可能的，并構成本發(fā)明的一部分。步驟f (清澈溶液在含有聚苯乙烯吸附樹脂的柱子上的吸附)從剩余溶液中分離多酚通過將多酚捕獲在具有直徑在100-150埃(Angstrom)的孔的聚苯乙烯吸附樹脂(例如SEPE Ξ ABEAD SP 207 Mitsubishi)的孔中獲得。根據(jù)本發(fā)明的方法的變體，多酚也可以用乙醇或甲醇與醋酸以3 1的比例混合的混合物進行提取， 通過隨后的溶劑濃縮(例如通過蒸發(fā)和隨后的干燥)進行回收。步驟g(第f點的捕獲在樹脂的孔中的多酚部分的回收并同時降低呋喃香豆素值高達400毫克/每公斤干產(chǎn)物)在用40°C熱水進行樹脂的外部洗滌后，為了消除步驟5的溶液中含有的糖和酸， 多酚部分的回收這樣進行，打開具有圓形空間分布特征的這些有機化合物，從而呈現(xiàn)線性形狀，從而從捕獲在其中的孔中釋放。這種效果是通過升高PH值高達強堿性(pH12-14)獲得的。這通過使用也會降解bergaptene和Bergamottine的堿性金屬的氫氧化物有利地發(fā)生。如果不是使用堿性溶液，而是使用乙醇或甲醇，可以獲得同等效果。在這種情況下，將無法獲得bergaptene禾口 Bergamottine的降角軍。步驟h (水相中植物復合物的化學穩(wěn)定性)多酚在其(打開的)線性形式是極其不穩(wěn)定的，因為它們往往是氧化現(xiàn)象的對象。 必須在非常短的時間內(nèi)將它們重新形成環(huán)形形狀。這樣的結果通過將PH從值14降低至強酸性值(約PH3)獲得。這種效果是通過從溶液中減少陽離子K+、Na+等等獲得的。這通過使用強陽離子樹脂(例如Relite CF H+ Mitsubishi)發(fā)生。這些用陽離子氫(H+)取代存在的陽離子。操作效果是溶液酸化至PH = 3，以及使用的堿性氫氧化物的陽離子的減少。 結果是在營養(yǎng)方面具有更多價值的產(chǎn)物。步驟i (產(chǎn)物的物理穩(wěn)定性；“干燥”)這通過去除水的手段獲得，有利地通過高真空蒸發(fā)，然后在低于60°C的溫度中直至完全干燥(即獲得低于14%的殘余濕度)。在這樣的濕度值，任何類型的有機污染物(酵母菌，細菌等)的增值受到抑制。獲得了干燥的產(chǎn)物。需要強調(diào)，提取和純化工藝允許以劇烈的方式減少含有的呋喃香豆素 (bergaptene和Bergamottine)，其代表了由于它們的潛在毒性的特征導致的問題，但是只在皮膚水平發(fā)現(xiàn)，并以比在果汁中發(fā)現(xiàn)的那些高得多的劑量。本發(fā)明的植物復合物，處于干提取物的形式，看起來像非常精細的、水溶性的粉末，帶有黃-棕色，具有特征性的香氣和苦味。它可以被封裝，放進封膜中，與油混合用于包裝面霜等，并因此與藥物上相容的賦形劑形成制劑，通常是膳食補充劑的制劑。本發(fā)明的另一目的是植物復合物，優(yōu)選處于干提取物形式，可根據(jù)本發(fā)明的方法從佛手柑果的白軟皮中獲得。本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)-且這也形成本發(fā)明的目的-植物復合物可用于臨床實踐和/或作為膳食補充劑，因為它在營養(yǎng)物質(zhì)(葉酸，維生素等)和抗氧化劑(特別是類黃酮)之間具有有利的比例，允許其用作抗血脂代謝紊亂(antidislipidemic)和抗同質(zhì)
6(antiaterogeneous)劑?；诜鹗指谈商崛∥锏慕M合物作為抗血脂代謝紊亂和，或抗同質(zhì)和，或消炎/止痛的局部或全身藥物和，或含有本發(fā)明的植物復合物的抗腫瘤劑，有利地處于干提取物形式，與在藥學中通常使用的添加劑和/或載體一起，也是本發(fā)明的目的。組合物可以以液體形式或其它形式，凍干、顆粒、粉末進行使用。已經(jīng)證明植物復合物，如果采用局部途徑涂敷，對具有發(fā)炎特征的皮膚病變實施其治療作用，在實驗動物中在全身施用后具有消炎/止痛作用，對培養(yǎng)基中的人腫瘤細胞具有抑制增殖作用。有利地， 建議劑量范圍從20至40毫克/公斤體重，優(yōu)選30毫克/公斤體重。本發(fā)明的其它目的是膳食補充劑，基于本發(fā)明的植物復合物，作為在抗血脂代謝紊亂和，或抗同質(zhì)類型的治療中和，或用于血管保護的佐劑。本發(fā)明的植物復合物是一種天然來源的產(chǎn)物，用于膳食補充或藥物應用，通過由其內(nèi)含有的多酚部分施加的抑制已在腸胃水平的膽固醇前體的吸收，以及抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶在哺乳動物中的活性的聯(lián)合作用的手段，施加正?；褐械哪懝檀妓健⒅竞脱堑淖饔?。此外，在研究根據(jù)本發(fā)明的植物復合物的效果中，發(fā)現(xiàn)在實驗動物中，通過證明缺乏毒性效果，主要血液生化學(hematochemical)指標(全血球計數(shù)、肝轉(zhuǎn)氨酶和高肌酸血癥(hypercreatininemia))在正常范圍的絕對保持。這些數(shù)據(jù)通過在處理的動物中在死后用顯微鏡檢查在肝和腎水平脂肪變性(steatosic)或壞死(necrosis)現(xiàn)象的缺乏進行了證實。此外，腦組織及周圍神經(jīng)的組織病理學(histopathological)分析證明了誘導的軸突病變(axonopathies)或髓鞘質(zhì)病(myelinopathies)的缺乏。植物復合物的毒性研究具有以下結果“根據(jù)現(xiàn)行法律框架，毒理學分析沒有顯示毒性因子”。特別是，加上普通柑橘類水果的污染物缺乏的情況，發(fā)現(xiàn)只要重金屬、殺蟲劑、多氯聯(lián)苯、亞硝酸鹽、硝酸鹽、染料、 霉菌存在，除去赭曲霉毒素(ochratoxins)、細菌內(nèi)毒素、厭氧細菌和霉菌缺乏外，還考慮到病理值或正常參考值以外的任何值的缺乏。從取自豚鼠的器官(肝、腎)的檢查中，注意到在口服施用中相當于80mg. /Kg體重/天的施用沒有毒性效果。需要強調(diào)，堿金屬氫氧化物的使用，尤其Κ0Η，大大降低存在的呋喃香豆素的量，所獲得的植物復合物從功能方面看起來更加濃縮。本發(fā)明的植物復合物目標的特征是具有處于以下百分比的主要生物類黃酮的多酚物質(zhì)的生物單一性
權利要求
1.一種用于從佛手柑果生產(chǎn)植物復合物的方法，其特征在于，包括下列步驟a)研磨沒有外層表皮層和柑橘外皮的佛手柑果，以獲得混合物；b)在所述混合物中接種酶以降解果膠；c)從步驟b)獲得的所述混合物的果肉含量的值降低至低于0.5%；d)失活在所述步驟b)中引入的所述酶；e)用具有30000道爾頓截留分子量的膜超濾從步驟b)獲得的混合物，獲得變得澄清的溶液；f)將從所述步驟e)獲得的變得澄清的溶液加入到含有聚苯乙烯吸附樹脂的柱子中以吸附多酚；g)用水在30°C-5(TC的溫度洗滌所述柱子，將pH升高至12-14之間的值，從而獲得洗脫液；h)將所述洗脫液通過陽離子樹脂，隨之發(fā)生PH升高至低于3.0的值，并回收所述洗脫液；i)干燥回收的洗脫液直至獲得處于干提取物形式的植物復合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述的使用的佛手柑果屬于栽培品禾中 Femminello、Fantastico 禾口 / 或 Castagnaro0
3.根據(jù)前述權利要求至少之一所述的方法，其特征在于，其中在所述步驟b)中所述酶是果膠類型的。
4.根據(jù)前述權利要求至少之一所述的方法，其特征在于，其中在所述步驟e)中所述使溶液變得澄清的行為通過用膨潤土處理或通過自然沉降而發(fā)生。
5.根據(jù)前述權利要求至少之一所述的方法，其特征在于，其中在所述步驟i)中干提取物具有殘留濕度< 14%。
6.根據(jù)前述權利要求至少之一所述的方法，其特征在于，其中在所述步驟i)后，所述干提取物進行研磨，或進一步進行加工。
7.可從根據(jù)權利要求1所述的方法的步驟h)獲得的洗脫液。
8.可從如在權利要求1-6至少之一中所要求的方法獲得的植物復合物。
9.根據(jù)權利要求8所述的植物復合物，其特征在于，處于干提取物形式，顯示具有不低于250g/kg的圣草酚-7-0-新橙皮糖甙、柚皮苷和新橙皮甙的最小濃度。
10.具有抗血脂代謝紊亂和降血糖效果的藥物組合物，其特征在于，含有根據(jù)權利要求 8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物，以及藥學上可接受的添加劑。
11.具有對人有止痛效果的藥物組合物，其特征在于，含有根據(jù)權利要求8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物，以及藥學上可接受的添加劑。
12.具有在人上局部涂敷的對皮膚疾病具有效果的藥物組合物，其特征在于，含有根據(jù)權利要求8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物，以及藥學上可接受的添加劑。
13.具有對人有抗腫瘤效果的單獨或作為已知的抗腫瘤化合物的共佐劑的藥物組合物，其特征在于，含有根據(jù)權利要求8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物，以及藥學上可接受的添加劑。
14.藥物組合物，其特征在于，含有活性劑根據(jù)權利要求8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物。
15.膳食補充劑，其特征在于，作為與在治療具有發(fā)炎特征的皮膚疾病中和在治療腫瘤中的血糖和/或血脂系統(tǒng)曲線有關的疾病治療中的佐劑，含有根據(jù)權利要求8所述的洗脫液和，或根據(jù)權利要求9所述的植物復合物以及通常使用的添加劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及從佛手柑果(bergamot fruit)白軟皮(albedo)(Citrus Bergamia Risso & Poiteau)獲得的植物復合物，其生產(chǎn)方法和應用，尤其處于干提取物形式，用作脂血(lypemic)和血糖(glycemic)類型的代謝不平衡的正?；幬铮诰哂邪l(fā)炎或退行特征的皮膚疾病的治療中，作為止痛/消炎劑，作為抗腫瘤劑和膳食補充劑。
文檔編號A61K36/752GK102215853SQ200980145544
公開日2011年10月12日 申請日期2009年11月13日 優(yōu)先權日2008年11月17日
發(fā)明者多梅尼科·馬拉拉, 朱塞佩·隆巴爾多, 溫琴佐·莫拉斯 申請人:草本植物與抗氧化劑衍生物有限公司