專利名稱：含有特異性識(shí)別cd38的抗體和環(huán)磷酰胺的抗腫瘤組合的制作方法
含有特異性識(shí)別CD38的抗體和環(huán)磷酰胺的抗腫瘤組合本發(fā)明涉及在瘤形成疾病的治療中在治療上有用的針對(duì)CD38的單克隆抗體和商品名為Cytoxan(或Neosar)的環(huán)磷酰胺的組合。⑶38是一種45kD的II型跨膜糖蛋白，具有長(zhǎng)的C端胞外結(jié)構(gòu)域和短的N端胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。⑶38蛋白是一種雙功能胞外酶，能催化NAD+轉(zhuǎn)變成環(huán)ADP-核糖(cADPR)而且還將CADI3R水解成ADP-核糖。⑶38在許多造血惡性腫瘤中上調(diào)且與這些疾病有牽連。特異性識(shí)別CD38 的單克隆抗體 38SB13、38SB18、38SB19、38SB30、38SB31 和 38SB39 記載于PCT申請(qǐng)W02008/047M2。所述抗⑶38抗體能夠通過(guò)三種不同細(xì)胞毒性機(jī)制來(lái)殺死CD38+細(xì)胞，即誘導(dǎo)凋亡、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(⑶C)。另外，這些抗體能夠直接誘導(dǎo)⑶38+細(xì)胞凋亡，甚至在沒(méi)有基質(zhì)細(xì)胞或基質(zhì)衍生細(xì)胞因子存在的情況下。環(huán)磷酰胺是一種在化療中使用的烷化劑。仍然需要新的且有效的能在癌癥治療中使用的藥物?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)及對(duì)于本發(fā)明，人源化抗CD38抗體的功效在其與至少一種在抗癌治療中在治療上有用的物質(zhì)組合施用時(shí)可得到相當(dāng)大地改善，所述物質(zhì)具有與人源化抗CD38 抗體之一相同或不同的機(jī)制且在本發(fā)明中限定為環(huán)磷酰胺。術(shù)語(yǔ)“抗體”在本文中以最廣義使用，而且具體涵蓋單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)(任何同種型的，諸如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)、多克隆抗體、多特異性抗體、嵌合抗體、和抗體片段。典型的IgG抗體由通過(guò)二硫鍵相連接的兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈構(gòu)成。每條重和輕鏈含有一個(gè)恒定區(qū)和一個(gè)可變區(qū)。每個(gè)可變區(qū)含有三個(gè)稱作“互補(bǔ)決定區(qū)”(CDR)或“高變區(qū)”的區(qū)段，它們主要負(fù)責(zé)對(duì)抗原的表位的結(jié)合。自N端起序貫編號(hào)， 它們通常稱作⑶R1、⑶R2、和⑶R3?？勺儏^(qū)中⑶R以外較高度保守的部分稱作“構(gòu)架區(qū)”。如本文中使用的，“VH”或“VH”指抗體的免疫球蛋白重鏈，包括FV、SCFV、dSFV、Fab、 Fab'或F(ab' )2片段的重鏈的可變區(qū)。提到或“VL”指抗體的免疫球蛋白輕鏈，包 Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab'或F(ab' )2片段的輕鏈的可變區(qū)。38SB13抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 50組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :38組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :1，2和3組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :4，5和 6組成的氨基酸序列的CDR。38SB18抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 52組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :40組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :7，8和9組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID N0:10,11 和12組成的氨基酸序列的⑶R。38SB19抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 54組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :42組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO 13,14和15組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :16， 17和18組成的氨基酸序列的⑶R。38SB30抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 56組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :44組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO 19，20和21組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :22， 23和M組成的氨基酸序列的⑶R。38SB31抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 58組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :46組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO 25, 26和27組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO 28, 29和30組成的氨基酸序列的⑶R。38SB39抗體包含至少一條具有由SEQ ID NO 60組成的氨基酸序列的重鏈和至少一條具有由SEQ ID NO :48組成的氨基酸序列的輕鏈，所述重鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO 31,32和33組成的氨基酸序列的⑶R且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有由SEQ ID NO :34， 35和36組成的氨基酸序列的⑶R。生成38SB13、38SB18、38SB19、38SB30、38SB31、和 38SB39 鼠抗 CD38 抗體的雜交瘤細(xì)胞系已經(jīng)于2006年6月21日保藏于美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection, 10801University Bid, Manassas, VA, 20110-2209，USA)，保藏號(hào)分別為 PTA-7667、PTA-7669、PTA-7670、PTA-7666、PTA-7668、和 PTA-7671 (如 W02008/047242 中記載的)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“人源化抗體”指最低限度含有來(lái)源于非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。人源化的目的是降低要導(dǎo)入人中的異種抗體諸如鼠抗體的免疫原性，同時(shí)維持抗體的完全的抗原結(jié)合親和力和特異性。人源化的抗體或適合于不受其它哺乳動(dòng)物排斥的抗體可使用數(shù)種技術(shù)諸如表面重塑(resurfacing)和⑶R移植(grafting)來(lái)產(chǎn)生。如本文中使用的，表面重塑技術(shù)組合使用分子模擬、統(tǒng)計(jì)分析和誘變來(lái)改變抗體可變區(qū)的非CDR 表面以類似目標(biāo)宿主的已知抗體的表面。CDR移植技術(shù)涉及將互補(bǔ)決定區(qū)(例如小鼠抗體的)替代入人構(gòu)架域中，例如參見(jiàn)WO 92/22653。人源化嵌合抗體優(yōu)選如下的情況，恒定區(qū)和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)以外的可變區(qū)基本上或唯獨(dú)地來(lái)源于相應(yīng)的人抗體區(qū)，而CDR基本上或唯獨(dú)地來(lái)源于人以外的哺乳動(dòng)物。用于抗體表面重塑的策略和方法及其它用于降低抗體在不同宿主內(nèi)的免疫原性的方法披露于美國(guó)專利5，639，641，其整體通過(guò)引用結(jié)合到本文中?？贵w可使用多種其它技術(shù)來(lái)人源化，包括CDR移植(EP 0 239 400 ；WO 91/09967 ；美國(guó)專利號(hào)5，530，101 ；和 5，585，089)、鑲飾(veneering)或表面重塑(EP 0 592 106 ；EP 0 519 596 ；Padlan Ε. A.， 1991, Molecular Immunology 28(4/5) :489-498 ；Studnicka G.Μ. φ,1994, Protein Engineering, 7 (6) :805-814 ；Roguska Μ. Α.等，1994，PNAS，91 :969-973)、鏈改組(美國(guó)專利號(hào)5，565，332)、和鑒定柔性殘基(PCT/US2008/074381)。人抗體可通過(guò)多種本領(lǐng)域已知方法來(lái)準(zhǔn)備，包括噬菌體展示法。還可參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，444，887 ；4, 716，111 ；5, 545，806 ； 和 5，814，318 ；及國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào) WO 98/46645 ；WO 98/50433 ；WO 98/24893 ；WO 98/16654 ；WO 96/34096 ；WO 96/33735 ；和 WO 91/10741 (其整體通過(guò)引用結(jié)合到本文中)。本發(fā)明的藥物組合的抗⑶38抗體是識(shí)別⑶38并通過(guò)凋亡、ADCCdP⑶C來(lái)殺死 CD38+細(xì)胞的人源化抗體。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的人源化抗體能夠通過(guò)凋亡來(lái)殺死所述CD38+細(xì)胞，甚至在基質(zhì)細(xì)胞或基質(zhì)衍生的細(xì)胞因子缺失的情況下。此類人源化抗體的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是人源化的38SB13、38SB18、38SB19、38SB30、38SB31、或38SB39抗體或其表位結(jié)合片段。38SB13、38SB18、38SB19、38SB30、38SB31、和 38SB39 抗體的 CDR 通過(guò)模擬得到了鑒定，而且它們的分子結(jié)構(gòu)已被預(yù)測(cè)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含一個(gè)或多個(gè)如下⑶R的人源化抗體或其表位結(jié)合片段，所述⑶R具有選自SEQ ID N0:l，2，3，4，5， 6,7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32， 33，34，35和36的氨基酸序列。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了 38SB13的人源化形式，其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:l，2和3 所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:4，5和6所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了 38SB18的人源化形式，其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :7，8和9 所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:10，ll和12 所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了 38SB19的人源化形式， 其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 13,14 和15所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 16,17 和18所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了 38SB30的人源化形式，其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 19，20和21所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 22，23和M所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了 38SB31的人源化形式，其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :25,26和27所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :28,29和30所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了 38SB39 的人源化形式，其包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :31,32和33所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 34,35和36所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如下的人源化抗體或其片段，其包含具有選自 SEQ ID N0:66和72的氨基酸序列的VH。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了如下的人源化 38SB19抗體，其包含具有SEQ ID NO :66所示氨基酸序列的VH。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中， 提供了如下的人源化38SB31抗體，其包含具有SEQ ID NO :72所示氨基酸序列的VH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如下的人源化抗體或其片段，其包含具有選自SEQ ID NO :62，64，68和70的氨基酸序列的Vl。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了如下的人源化38SB19抗體，其包含具有選自SEQ ID NO :62和64的氨基酸序列的Vl。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了如下的人源化38SB31抗體，其包含具有選自SEQ ID NO :68和70的氨基酸序列的八。38SB13、38SB18、38SB19、38SB30、38SB31、和 38SB39 抗體的人源化形式均顯示出作為抗癌劑是特別有利的。它們的制備、物理特性和有益藥理特性記載于WO 2008/047242, 其整體通過(guò)引用結(jié)合到本文中。一般地，用于治療人類的劑量(它取決于隨所治療的受試者而變化的因素)介于口服施用的1和150mg/kg之間或介于靜脈內(nèi)施用的1和150mg/kg 之間。環(huán)磷酰胺(Cytoxan )是一種用于治療多種癌癥的氮芥烷化劑。它是一種前藥，在肝中被轉(zhuǎn)變成具有化療活性的活性形式。作為烷化劑，環(huán)磷酰胺阻止細(xì)胞分裂，主要是通過(guò)使DNA鏈交聯(lián)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。環(huán)磷酰胺可以口服和胃腸外配制劑得到。本發(fā)明的一個(gè)方面是一種藥物組合物，其包含抗⑶38抗體與至少環(huán)磷酰胺的組合。由于藥物的活性取決于使用的劑量，因此有可能使用較低的劑量及提高活性同時(shí)降低毒性現(xiàn)象。依照本發(fā)明的組合的改善的功效可通過(guò)測(cè)定治療協(xié)同來(lái)證明。如果一種組合在治療上優(yōu)于以其最大耐受劑量或在動(dòng)物物種中不會(huì)出現(xiàn)毒性的情況中以其最高測(cè)試劑量單獨(dú)使用所研究的最好藥劑，那么它表現(xiàn)出治療協(xié)同。此功效可例如通過(guò)Io^1細(xì)胞殺傷來(lái)定量，它是依照下面的公式確定的Iog10 細(xì)胞殺傷=T-C (天)/3. 32x Td其中T-C代表腫瘤生長(zhǎng)延遲，它是以天計(jì)的處理組的腫瘤(T)和對(duì)照組的腫瘤 (C)達(dá)到預(yù)定值(例如Ig)的中值時(shí)間，而Td代表以天計(jì)的對(duì)照動(dòng)物中腫瘤體積加倍所需要的時(shí)間[τ. H. Corbett 等，Cancer, 40 :2660-2680(1977) ；F. M. Schabel 等，Cancer Drug Development,Part B,Methods in Cancer Research, 17 :3-51,New York,Academic Press Inc. (1979)]。如果Iogltl細(xì)胞殺傷大于或等于0. 7，那么認(rèn)為藥物是有活性的。如果Ic^ltl 細(xì)胞殺傷大于或等于2. 8，那么認(rèn)為藥物是活性很高的。在一些情況中，當(dāng)處理持續(xù)時(shí)間超過(guò)10天且在組合中所評(píng)估的兩種化合物間不同時(shí)，計(jì)算log凈細(xì)胞殺傷Log10凈細(xì)胞殺傷=(T-C)-處理持續(xù)時(shí)間/3. 32x Td。當(dāng)log凈細(xì)胞殺傷大于或等于O時(shí)，宣告有活性。當(dāng)Iogltl細(xì)胞殺傷大于以其最大耐受劑量或以其最高測(cè)試劑量單獨(dú)施用的最好組分的Iogltl細(xì)胞殺傷值時(shí)，組合會(huì)表現(xiàn)出治療協(xié)同。組合對(duì)實(shí)體瘤的功效可以下面的方式通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定在第O天給進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物(一般是小鼠)皮下雙側(cè)移植30至60mg腫瘤碎塊。 荷瘤動(dòng)物基于它們的腫瘤大小來(lái)隨機(jī)化，之后進(jìn)行各種處理和對(duì)照。當(dāng)腫瘤在移植后達(dá)到預(yù)定大小時(shí)開(kāi)始化療，這取決于腫瘤的類型，并每天觀察動(dòng)物。處理期間每天對(duì)不同動(dòng)物組稱重，直至達(dá)到最大重量減輕及隨后發(fā)生完全重量恢復(fù)。然后每周一次或兩次對(duì)各組稱重， 直至試驗(yàn)結(jié)束。測(cè)量腫瘤一周1至5次，這取決于腫瘤加倍時(shí)間，直至腫瘤達(dá)到大約2g，或直至動(dòng)物死亡(如果這發(fā)生在腫瘤達(dá)到2g之前)。安樂(lè)死或死亡后立即對(duì)動(dòng)物尸檢?？鼓[瘤活性依照記錄的不同參數(shù)來(lái)測(cè)定。以它們的最佳劑量用hu38SB19和環(huán)磷酰胺的組合獲得的結(jié)果示于下文作為例子。因此，本發(fā)明還涉及含有依照本發(fā)明的組合的藥物組合物。組合所包含的組分可同時(shí)地、半同時(shí)地、分開(kāi)地、或間隔一段時(shí)間地施用以獲得組合的最大功效；每次施用的持續(xù)時(shí)間有可能自快速施用至持續(xù)灌注而變化。因此，為了本發(fā)明的目的，組合并非唯獨(dú)地限于通過(guò)各組分的物理聯(lián)合獲得的組合，而是還包括容許分開(kāi)施用(其可以是同時(shí)的或間隔一段時(shí)間的)的組合。依照本發(fā)明的組合物優(yōu)選是能胃腸外施用的組合物。然而，這些組合物在局限區(qū)域療法(localized regional therapy)的情況中可口服、皮下或腹膜內(nèi)施用。
用于胃腸外施用的組合物一般是藥學(xué)可接受的、無(wú)菌的溶液或懸浮液，其可任選在使用時(shí)根據(jù)需要來(lái)制備。對(duì)于制備非水溶液劑或混懸劑，可使用天然植物油諸如橄欖油、 芝麻油或液體石油(liquid petroleum)或可注射有機(jī)酯諸如油酸乙酯。無(wú)菌的水溶液可以由產(chǎn)品在水中的溶液組成。水溶液劑適合于靜脈內(nèi)施用，前提是恰當(dāng)調(diào)節(jié)PH及使溶液等張，例如用足夠量的氯化鈉或葡萄糖。滅菌可通過(guò)加熱或通過(guò)任何其它對(duì)組合物沒(méi)有不利影響的手段來(lái)進(jìn)行。組合也可采取脂質(zhì)體的形式或與載體像環(huán)糊精或聚乙二醇聯(lián)合的形式。 用于口服、皮下或腹膜內(nèi)施用的組合物優(yōu)選是水混懸劑或溶液劑。在依照本發(fā)明的組合中，其各組份的施用可以是同時(shí)的、分開(kāi)的或間隔一段時(shí)間的，尤其有利的是人源化抗CD38抗體的量占組合的10至90% (以重量計(jì))，此含量有可能依照有關(guān)物質(zhì)的性質(zhì)、尋求的功效和要治療的癌癥的性質(zhì)而變化。依照本發(fā)明的組合在數(shù)種類型的癌癥的治療中尤其有用，包括(但不限于)下述 癌(carcinoma)和腺癌(adenocarcinoma)，包括膀胱、乳房/乳腺、結(jié)腸、頭和頸、前列腺、 腎、肝、肺、卵巢、胰、胃、宮頸、甲狀腺和皮膚的，而且包括鱗狀細(xì)胞癌；淋巴樣譜系的造血腫瘤，包括多發(fā)性骨髓瘤、白血病、急性和慢性淋巴細(xì)胞性(或淋巴樣)白血病、急性和慢性成淋巴細(xì)胞性白血病、B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤、非何杰金(Hodgkin)淋巴瘤(例如伯基特氏淋巴瘤)；髓樣譜系的造血腫瘤，包括急性和慢性髓性(髓樣或髓細(xì)胞性)白血病、 和前髓細(xì)胞性白血??；間充質(zhì)起源的腫瘤，包括纖維肉瘤、骨肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤、和施旺細(xì)胞瘤(schwannoma)； 和其它腫瘤，包括黑素瘤、畸胎瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、和精原細(xì)胞瘤，和其它表達(dá) CD38的有待確定的癌癥。它們主要對(duì)于治療對(duì)常用抗癌劑有抗性的白血病、淋巴瘤和癌癥有用，因?yàn)楸景l(fā)明的抗CD38抗體具有獨(dú)特的作用機(jī)制。因此，本發(fā)明還涵蓋上述組合在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
實(shí)施例在此實(shí)施例中，在體內(nèi)證明了本發(fā)明的抗⑶38抗體/環(huán)磷酰胺組合用于腫瘤生長(zhǎng)抑制的有效性。所選擇的腫瘤模型是在SCID小鼠中植入的可移植人伯基特(Budkitt)氏淋巴瘤細(xì)胞系，即Namalwa模型。HU38SB19在含5%葡萄糖的水中配制。Hu38SB19，作為單一藥劑，靜脈內(nèi)施用，一周兩次，介于腫瘤植入后第11天和第18天之間。在組合分支中，hu38SB19處理進(jìn)行至第 35天(組合的最高劑量除外，該處理在第18天出現(xiàn)毒性時(shí)停止)。環(huán)磷酰胺在含5%葡萄糖的水中配制。環(huán)磷酰胺在腫瘤植入后第11天和第15天靜脈內(nèi)施用，一天一次。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告于表1。腫瘤加倍時(shí)間=1.9天。使用了下面的終點(diǎn) 在誘導(dǎo)彡20%體重減輕或彡10%藥物死亡的劑量宣告毒性， 抗腫瘤活性通過(guò)計(jì)數(shù)Iogltl總細(xì)胞殺傷=(T-C)/[3. 32x(以天計(jì)的腫瘤加倍時(shí)間)]來(lái)測(cè)定(T表示處理小鼠達(dá)到IOOOmg的中值時(shí)間而C表示對(duì)照小鼠達(dá)到相同大小的中值時(shí)間(15. 7天)；無(wú)腫瘤存活者排除在這些計(jì)算之外且分開(kāi)制表)。log總細(xì)胞殺傷 < 0. 7宣告無(wú)抗腫瘤活性，而log細(xì)胞殺傷> 2. 8的處理宣告高度有活性。 無(wú)腫瘤存活者(TFS)對(duì)應(yīng)于整個(gè)研究持續(xù)時(shí)間( >最后一次處理后100天)觸診極限(6;3mg)以下的完全消退。 治療協(xié)同如果組合比研究的最好單一藥劑更有活性(相差至少1個(gè)log細(xì)胞殺傷)，那么它具有治療協(xié)同。在觀6. lmg/kg/注射的劑量觀察到環(huán)磷酰胺單獨(dú)的毒性，5只小鼠中有3例死亡(60% )。因此，環(huán)磷酰胺的最高無(wú)毒劑量(HNTD)是177. 4mg/kg/注射(總注射劑量= 354. 8mg/kg)。發(fā)現(xiàn)177. 4mg/kg/注射劑量高度有活性，log總細(xì)胞殺傷為4. 8。關(guān)于hu38SB19，產(chǎn)品在40mg/kg/注射的劑量(總劑量120. Omg/kg)得到較好的耐受。沒(méi)有觀察到毒性，這可以通過(guò)抗體與鼠CD38沒(méi)有交叉反應(yīng)性來(lái)解釋。log細(xì)胞殺傷為 0. 4，指示hu38DB19在這些條件下無(wú)活性。286. lmg/kg/注射的環(huán)磷酰胺和40mg/kg/注射的hu38SB19的組合是有毒的，6只動(dòng)物中有3例藥物相關(guān)死亡(50% )，即與環(huán)磷酰胺單獨(dú)在相同劑量觀察到的非常相似。認(rèn)為177. 4mg/kg/注射的環(huán)磷酰胺與40mg/kg/注射的hu38SB19的劑量為HNTD。此劑量展現(xiàn)出20.0的log細(xì)胞殺傷和1/6TFS(第196天)，并因此認(rèn)為是高度有活性的。甚至更低劑量的110. 0mg/kg/注射和68. 2mg/kg/注射的環(huán)磷酰胺與40mg/kg/注射的hu38SB19是高度有活性的，log總細(xì)胞殺傷分別為15. 7和6. 9。值得注意的是，組合在評(píng)估的所有三種劑量水平的抗腫瘤活性比對(duì)最好藥劑即環(huán)磷酰胺(HNTD的log細(xì)胞殺傷為4. 8)觀察到的大超過(guò)一個(gè)log細(xì)胞殺傷。我們得出結(jié)論，此組合顯示治療協(xié)同。使用考慮了處理持續(xù)時(shí)間的log細(xì)胞殺傷凈值，此治療協(xié)同也得到了清楚地確立(組合的161og凈細(xì)胞殺傷對(duì)比于單獨(dú)的環(huán)磷酰胺的41og凈細(xì)胞殺傷)。表I :hu38SB19和環(huán)磷酰胺(CPA)的組合針對(duì)在SCID雌性小鼠中植入的晚期人伯基特氏淋巴瘤Namalwa。
權(quán)利要求
1.一種包含特異性識(shí)別⑶38的抗體和至少環(huán)磷酰胺的藥物組合，其中所述抗體能夠通過(guò)凋亡、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(⑶C)來(lái)殺死 ⑶38+細(xì)胞。
2.權(quán)利要求1的組合，其中所述抗體是人源化的抗體。
3.權(quán)利要求2的組合，其中所述抗體包含一個(gè)或多個(gè)具有選自SEQID NO :1，2，3，4，5， 6,7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35和36的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
4.權(quán)利要求3的組合，其中所述抗體包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈具有SEQ ID NO :66所示氨基酸序列且所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:13，14和 15所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈具有選自SEQ ID NO :62和64的氨基酸序列且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :16，17和18所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
5.權(quán)利要求3的組合，其中所述抗體包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈具有SEQ ID NO -J2所示氨基酸序列且所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO 25,26和 27所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈具有選自SEQ ID NO :68和70的氨基酸序列且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID而28，四和30所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
6.特異性識(shí)別CD38的抗體在制備用于制備治療癌癥的藥物的依照權(quán)利要求1的藥物組合中的用途。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述抗體是人源化的抗體。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述抗體包含一個(gè)或多個(gè)具有選自SEQID NO :1，2，3，4，5， 6,7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35和36的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述抗體包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈具有SEQ ID NO :66所示氨基酸序列且所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:13，14和 15所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈具有選自SEQ ID NO :62和64的氨基酸序列且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID NO :16，17和18所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
10.權(quán)利要求8的用途，其中所述抗體包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈，其中所述重鏈具有SEQ ID NO :72所示氨基酸序列且所述重鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID N0:25，26和 27所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，且其中所述輕鏈具有選自SEQ ID NO 68和70的氨基酸序列且所述輕鏈包含三個(gè)序貫具有SEQ ID而28，四和30所示氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。
全文摘要
包含特異性識(shí)別CD38的抗體和環(huán)磷酰胺的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K39/00GK102264387SQ200980149083
公開(kāi)日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2009年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月28日
發(fā)明者P·勒熱納, P·弗里尼奧 申請(qǐng)人:賽諾菲