專利名稱：抗-pd-l1抗體及它們用于增強t細胞功能的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明一般涉及免疫功能和涉及增強T細胞功能，包括上調細胞介導的免疫應答，和涉及T細胞功能障礙病癥的治療。
背景技術：
共刺激或向T細胞提供兩種不同信號是通過抗原呈遞細胞(APCs)對靜息T淋巴細胞的淋巴細胞活化的廣泛接受的模型。Lafferty等，Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci.(澳大利亞實驗生物學和醫(yī)學科學雜志)M :27-42(197 。這種模型進一步提供從非自身中辨別自身和免疫耐受。Bretscher 等，Science (科學 1042-1049 (1970) ；Bretscher, P. A.，P. N. A. S. USA 96 :185-190(1999) Jenkins 等，J. Exp. Med.(實騎醫(yī)學雜志)165 302-319(1987)。在識別呈遞在主要組織相容性復合物(MHC)環(huán)境中的異源抗原肽之后，初次信號或抗原特異性信號通過T細胞受體(TCR)轉導。次級或共刺激信號通過表達在抗原呈遞細胞(APCs)上的共刺激分子傳遞給T細胞，誘導T細胞促進克隆擴增、細胞因子分泌和效應子功能。Lenschow等，Ann. Rev. Immunol.(免疫學年度綜述)14 :233(1996)。沒有共刺激時，T細胞不感受抗原刺激，不啟動有效免疫應答，還可導致對異源抗原的衰竭或耐雙(exhaustion or tolerance)0簡單的兩-信號模型可能是過于簡化了，因為TCR信號的強度實際上對T細胞活化和分化具有定量影響。Viola 等，Science (科學)273 104-106 (1996) ；Sloan-Lancaster, Nature (自然:156-159 (1993)。此外，如果TCR信號強度足夠高，即使在沒有共刺激信號時也可發(fā)生T細胞活化。更重要的是，T細胞對正性的和負性的(positive and negative)次級共刺激信號均接收。此類正性的和負性的信號的調節(jié)對最大化對宿主的保護性免疫應答同時維持免疫耐受和防止自身免疫是重要的。負性次級信號對誘導T細胞耐受似乎是必需的，而正性信號促進T細胞的活化。盡管簡單的兩-信號模型仍然提供對幼稚淋巴細胞的有效解釋，宿主的免疫應答是動態(tài)過程，也可將共刺激信號提供給暴露于抗原的T細胞。共刺激的機制有治療意義，因為已經顯示對共刺激信號的操作提供了增強或終止基于細胞的免疫應答的手段。最近，已經發(fā)現T細胞功能障礙或無反應性(anergy)與誘導且持續(xù)的表達抑制性受體程序性死亡1多肽(PD-I)同時發(fā)生。因此，治療性靶向PD-I和其它通過與PD-I相互作用傳導信號的分子(如程序性死亡配體1 (PD-Ll)和程序性死亡配體2(PD-L2))是強烈感興趣的領域。已經提出抑制PD-Ll信號傳導作為增強用于治療癌癥(例如腫瘤免疫)和感染(包括急性和慢性(例如持續(xù)性)感染)的T細胞免疫力的手段。然而，因為仍然需要對針對這種途徑的靶標的最佳治療進行商業(yè)化，存在重大的尚未滿足的醫(yī)療需求。
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發(fā)明概述本申請?zhí)峁┛?PD-Ll抗體，包括編碼此類抗體的核酸和含有此類抗體的組合物， 以及提供它們用于增強T細胞功能從而上調細胞介導的免疫應答的用途和提供治療T細胞功能障礙病癥，所述病癥包括感染(例如急性的和慢性的)和腫瘤免疫。在一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的重鏈可變區(qū)多肽，其包含HVR-Hl、HVR-H2 和HVR-H3序列，其中(a)所述 HVR-Hl 序列是 GFTFSX1SWIiKSEQ ID NO 1)；(b)所述 HVR-H2 序列是 AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(SEQ ID NO 2)；(c)所述 HVR-H3 序列是 RHWPGGFDY(SEQ ID NO 3)；而且其中 是D或G成是S或L 是T或S。在一個具體方面中，&是0;)(2是3并且另一方面，所述多肽還包含根據下式在HVR之間并置的可變區(qū)重鏈構架序列(HC-FRl) - (HVR-Hl) - (HC-FR2) - (HVR-H2) - (H C-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)0再一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。還一方面， 所述構架序列是VH亞型III共有構架。又一方面，所述構架序列的至少一個如下所述HC-FRl 是 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO 4)HC-FR2 是 WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO 5)HC-FR3 是 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO 6)HC-FR4 是 WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO :7)。又一方面，所述重鏈多肽還與包含HVR-Ll、HVR-L2和HVR-L3的可變區(qū)輕鏈組合， 其中(a)所述 HVR-Ll 序列是 RASQX4X5X6TX7X8A (SEQ ID NOs 8)；(b)所述 HVR-L2 序列是 SASX9DCiciS (SEQ ID NOs 9)；(c)所述 HVR-L3 序列是 QQX11X12X13X14PX15T (SEQ ID NOs 10)；而且其中 是D或V J5是V或I J6是S或N ;X7是A或F J8是V或L ;X9是F 或 T ；X10 是 Y 或 A ；X11 是 Y，G，F，或 S ；X12 是 L，Y，F 或 W ；X13 是 Y，N，A，T，G，F 或 I ；X14 是 H， V，P，T或I ；)(15是八，1，尺，卩或丁。又一方面，X4是D式是V成是S ；X7是A成是V ;X9是F ；X10是Y ；X11是Y ；X12是 L ；乂13是￥ ;&4是11成5是々。又一方面，所述輕鏈還包含根據下式在HVR之間并置的可變區(qū)輕鏈構架序列(LC-FRl) - (HVR-Ll) - (LC-FR2) - (HVR-L2) - (LC-FR3) - (HVR-L3) - (LC-FR4)。 又一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。又一方面，所述構架序列是VL κ I共有構架。又一方面，所述構架序列的至少一個如下所述LC-FRl 是 DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITC(SEQ ID NO 11)；LC-FR2 是 WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO 12)；LC-FR3 是 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO :13)；LC-FR4 是 FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :14)。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的抗-PD-Ll抗體或抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中 (a)所述重鏈包含HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3，而且其中
⑴所述 HVR-Hl 序列是 GFTFSX1SWIiKSEQ ID NO 1)；
(ii)所述 HVR-H2 序列是 AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(SEQ ID NO 2)；(iii)所述 HVR-H3 序列是 RHWPGGFDY(SEQ ID NO 3)；禾口(b)所述輕鏈包含HVR-Ll、HVR-L2和HVR-L3，而且其中(i)所述 HVR-Ll 序列是 RASQX4X5X6TX7X8A (SEQ ID NOs 8)；(ii)所述 HVR-L2 序列是 SASX9DCiciS (SEQ ID NOs 9)；禾口(iii)所述 HVR-L3 序列是 QQX11X12X13X14PiC15T (SEQ ID NOs 10)；而且其中 是D或G成是S或L成是T或S成是D或V式是V或I成是S 或N ;X7是A或F成是V或L ;X9是F或T ；X10是Y或A ；X11是Y，G，F，或S ；X12是L，Y，F或 W ；X13 是 Y，N，A，T，G，F 或 I ；X14 是 H，V，P，T 或 I ；X15 是 A，W，R，P 或 T。在一個具體方面中，)(1是0;)(2是3并且)(3是11。另一方面，)(4是0而是乂成是 S ;X7 是 A ；X8 是 V ;X9 是 F ；X10 是 Y ；X11 是 Y ；X12 是 L ；X13 是 Y ；X14 是 H ；X15 是 A。又一方面， X1是D A2是S并且X3是T，&是D ；X5是V J6是S ;X7是A ；X8是V ；知是F ；X10是Y ；X11是 Y ；X12 是 L ；X13 是 Y ；X14 是 H 并且 X15 是 A0還一方面，所述重鏈可變區(qū)包含如下在HVR之間并置的一個或多個構架序列(H C-FR1) - (HVR-Hl) - (HC-FR2) - (HVR-H2) - (HC-FR3) - (HVR-H3) - (HC-FR4)，所述輕鏈可變區(qū)包含如下在HVR之間并置的一個或多個構架序列(LC-FRl)-(HVR-Ll)-(LC-FR2)-(HVR-L2) -(LC-FR3) - (HVR-L3) - (LC-FR4) 0又一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。又一方面，所述重鏈構架序列來自于Kabat亞型I、II或III序列。又一方面，所述重鏈構架序列是VH亞型III共有構架。又一方面，所述重鏈構架序列的一個或多個如下所述
HC-FRlEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS
HC-FR2WVRQAPGKGLEffV
HC-FR3RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
HC-FR4WGQGTLVTVSA
(SEQ ID NO 4) (SEQ ID NO 5) (SEQ ID NO 6) (SEQ ID NO 7)
又一方面，所述輕鏈構架序列來自于Kabat κ I、II、II或IV亞型序列。又一方面，
所述輕鏈構架序列是VLk I共有構架。又一方面，所述輕鏈構架序列的一個或多個如下所述
LC-FRl LC-FR2 LC-FR3 LC-FR4
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC WYQQKPGKAPKLLIY
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FGQGTKVEIKR
(SEQID NO 11)
(SEQID NO 12)
(SEQID NO 13)
(SEQID NO 14)在又一個具體方面中，所述抗體還包含人或鼠恒定區(qū)。又一方面，所述人恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4組成的組。在又一個具體方面中，所述人恒定區(qū)是 IgGl0又一方面，所述鼠恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3組成的組。又一方面，所述鼠恒定區(qū)是IgG2A。在又一個具體方面中，所述抗體具有降低的或最小的效應子功能。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能由“更差效應子的Fc突變(effector-less Fc mutation) ”或去糖基化(aglycosylation)產生。在又一個實施方案中，所述更差效應子的 Fc突變是在恒定區(qū)中擬97A或擬65A/擬97A置換。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供抗-PD-Ll抗體，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中
LC-FRlLC-FR2LC-FR3LC-FR4
(SEQ ID NO 4) (SEQ ID NO 5) (SEQ ID NO 6) (SEQ ID NO 7)。(a)所述重鏈還包含 HVR-H1、HVR-H2 和 HVR-H3 序列，其分別與 GFTFSDSWIH(SEQ ID NO 15),AffISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO :16)和 RHWPGGFDY(SEQ ID NO :3)具有至少 85% 的序列同一性，或(b)所述輕鏈還包含 HVR-Ll、HVR-L2 和 HVR-L3 序列，其分別與 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO 17), SASFLYS(SEQ ID NO 18)和 QQYLYHPAT(SEQ ID NO 19)具有至少 85%的序列
同一性。在一個具體方面中，所述序列同一性是86%，87%，88%，89%，90%，91%，92%， 93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%或100%。另一方面，所述重鏈可變區(qū)包含如下在 HVR 之間并置的一個或多個構架序列(HC-FRl) - (HVR-Hl) - (HC-FR2) - (HVR-H2) - (HC-FR3) -(HVR-H3)-(HC-FR4)，所述輕鏈可變區(qū)包含如下在HVR之間并置的一個或多個構架序列 (LC-FRl) - (HVR-Ll) - (LC-FR2) - (HVR-L2) - (LC-FR3) - (HVR-L3) - (LC-FR4)。又一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。又一方面，所述重鏈構架序列來自于Kabat亞型I、II或 III序列。又一方面，所述重鏈構架序列是VH亞型III共有構架。又一方面，所述重鏈構架序列的一個或多個如下所述
HC-FRl EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS HC-FR2 WVRQAPGKGLEffV HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR HC-FR4 WGQGTLVTVSA
又一方面，所述輕鏈構架序列來自于Kabat κ I、II、II或IV亞型序列。又一方面， 所述輕鏈構架序列是VLk I共有構架。又一方面，所述輕鏈構架序列的一個或多個如下所述
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC WYQQKPGKAPKLLIY
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FGQGTKVEIKR在又一個具體方面中，所述抗體還包含人或鼠恒定區(qū)。又一方面，所述人恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4組成的組。在又一個具體方面中，所述人恒定區(qū)是IgGl。 又一方面，所述鼠恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3組成的組。又一方面，所述鼠恒定區(qū)是IgG2A。在又一個具體方面中，所述抗體具有降低的或最小的效應子功能。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能由“更差效應子的Fc突變”或去糖基化產生。在又一個實施方案中，所述更差效應子的Fc突變是在恒定區(qū)中擬97A或擬65A/^97A置換。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的抗-PD-Ll抗體，其包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中(a)所述重鏈序列與下述重鏈序列具有至少85%的序列同一性EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFT ISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA(SEQ ID N0:20)，或(b)所述輕鏈序列與下述輕鏈序列具有至少85%的序列同一性DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASFLYSGVPSRFSGSGSG TDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :21)。
(SEQID NO 11)
(SEQID NO 12)
(SEQID NO 13)
(SEQID NO 14)
LC-FRlLC-FR2LC-FR3LC-FR4
(SEQ ID NO 4) (SEQ ID NO 5) (SEQ ID NO 6) (SEQ ID NO 7)。
(SEQID NO 11)
(SEQID NO 12)
(SEQID NO 13)
(SEQID NO 14) 在一個具體方面中，所述序列同一性是86%，87%，88%，89%，90%，91%，92%， 93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%或100%。另一方面，所述重鏈可變區(qū)包含如下在 HVR 之間并置的一個或多個構架序列(HC-FRl)-(HVR-Hl)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3) -(HVR-H3)-(HC-FR4)，所述輕鏈可變區(qū)包含如下在HVR之間并置的一個或多個構架序列 (LC-FRl) - (HVR-Ll) - (LC-FR2) - (HVR-L2) - (LC-FR3) - (HVR-L3) - (LC-FR4)。又一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。又一方面，所述重鏈構架序列來自于Kabat亞型I、II或 III序列。又一方面，所述重鏈構架序列是VH亞型III共有構架。又一方面，所述重鏈構架序列的一個或多個如下所述
HC-FRl EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS HC-FR2 WVRQAPGKGLEffV HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR HC-FR4 WGQGTLVTVSA
又一方面，所述輕鏈構架序列來自于Kabat κ I、II、II或IV亞型序列。又一方面， 所述輕鏈構架序列是VLk I共有構架。又一方面，所述輕鏈構架序列的一個或多個如下所述
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC WYQQKPGKAPKLLIY
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FGQGTKVEIKR在又一個具體方面中，所述抗體還包含人或鼠恒定區(qū)。又一方面，所述人恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4組成的組。在又一個具體方面中，所述人恒定區(qū)是IgGl。 又一方面，所述鼠恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3組成的組。又一方面，所述鼠恒定區(qū)是IgG2A。在又一個具體方面中，所述抗體具有降低的或最小的效應子功能。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能來自于在原核細胞中產生。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能由“更差效應子的Fc突變”或去糖基化產生。在又一個實施方案中，所述更差效應子的Fc突變是在恒定區(qū)中擬97A或擬65A/擬97A置換。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供組合物，其包含上文描述的任何一種抗-PD-Ll 抗體與至少一種藥學上可接受的載體的組合。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供分離的核酸，其編碼抗-PD-Ll抗體的輕鏈或重鏈可變區(qū)序列，其中(a)所述重鏈還包含 HVR-H1、HVR-H2 和 HVR-H3 序列，其分別與 GFTFSDSWIH(SEQ ID NO 15),AffISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO :16)和 RHWPGGFDY(SEQ ID NO :3)具有至少 85% 的序列同一性，和(b)所述輕鏈還包含 HVR-Ll、HVR-L2 和 HVR-L3 序列，其分別與 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO 17), SASFLYS(SEQ ID NO 18)和 QQYLYHPAT(SEQ ID NO 19)具有至少 85%的序列
同一性。在一個具體方面中，所述序列同一性是86%，87%，88%，89%，90%，91%，92%， 93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%或100%。一方面，所述重鏈可變區(qū)包含如下在HVR 之間并置的一個或多個構架序列(HC-FRl)-(HVR-Hl)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3) - (HC-FR4)，所述輕鏈可變區(qū)包含如下在HVR之間并置的一個或多個構架序列(LC-F Rl) - (HVR-Ll) - (LC-FR2) - (HVR-L2) - (LC-FR3) - (HVR-L3) - (LC-FR4)。又一方面，所述構架序列來自于人共有構架序列。又一方面，所述重鏈構架序列來自于Kabat亞型I、II或III序列。又一方面，所述重鏈構架序列是VH亞型III共有構架。又一方面，所述重鏈構架序列的一個或多個如下所述
(SEQ ID NO 4) (SEQ ID NO 5) (SEQ ID NO 6) (SEQ ID NO 7)。LC-FRlLC-FR2LC-FR3LC-FR4
(SEQID NO 11)
(SEQID NO 12)
(SEQID NO 13)
(SEQID NO 14)
HC-FRl EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS HC-FR2 WVRQAPGKGLEffV HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR HC-FR4 WGQGTLVTVSA
又一方面，所述輕鏈構架序列來自于Kabat κ I、II、II或IV亞型序列。又一方面， 所述輕鏈構架序列是VLk I共有構架。又一方面，所述輕鏈構架序列的一個或多個如下所述
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC WYQQKPGKAPKLLIY
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FGQGTKVEIKR在又一個具體方面中，所述抗體還包含人或鼠恒定區(qū)。又一方面，所述人恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4組成的組。在又一個具體方面中，所述人恒定區(qū)是IgGl。 又一方面，所述鼠恒定區(qū)選自由IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3組成的組。又一方面，所述鼠恒定區(qū)是IgG2A。在又一個具體方面中，所述抗體具有降低的或最小的效應子功能。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能來自于在原核細胞中產生。在又一個具體方面中，所述最小的效應子功能由“更差效應子的Fc突變”或去糖基化產生。在又一個實施方案中，所述更差效應子的Fc突變是在恒定區(qū)中擬97A或擬65A/擬97A置換。又一方面，所述核酸還包含載體，該載體適合用于表達編碼前述任何一種抗-PD-Ll抗體的核酸。在又一個具體方面中，所述載體還包含適合用于表達該核酸的宿主細胞。在又一個具體方面中，所述宿主細胞是真核細胞或原核細胞。在又一個具體方面中， 所述真核細胞是哺乳動物細胞，如中國倉鼠卵巢(CHO)。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制備抗-PD-Ll抗體或其抗原結合片段的方法， 其包括在適合用于產生此類抗體或片段的條件下，培養(yǎng)含有適合于表達的形式的核酸的宿主細胞，該核酸編碼前述任何一種抗-PD-Ll抗體或抗原結合片段，并且回收所述抗體或片段。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供組合物，其包含本文提供的抗-PD-Ll抗體或其抗原結合片段和至少一種藥學上可接受的載體。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制品，其包括含有治療有效量的本文描述的組合物的容器和包裝說明書(package insert)，該包裝說明書說明用于治療T-細胞功能障礙病癥的用途。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制品，其包含任何一種上文描述的抗-PD-Ll組合物和至少一種BNCA分子的組合。一方面，BNCA分子是抗體、抗原結合抗體片段、BNCA寡肽、BNCA RNAi或BNCA小分子。另一方面，B7負性共刺激分子選自由以下各項組成的組CTLA-4, PD-I，PD-Ll，PD—L2，B7. 1，B7—H3 和 B7—H4。在又一個實施方案中，制品包含任何一種上文描述的抗-PD-Ll組合物和化療劑的組合。一方面，所述化療劑是吉西他濱(gemcitabine)。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制品，其包含任何一種上文描述的抗-PD-Ll抗體和一種或多種正性共刺激分子的激動劑的組合。一方面，正性共刺激分子是B7家族共刺激分子。另一方面，所述正性共刺激分子選自由下述各項組成的組⑶觀，⑶80，⑶86，ICOS/ ICOSL0又一方面，所述正性共刺激分子是TNFR家族共刺激分子。還一方面，所述TNFR共刺激分子選自由下述各項組成的組0X40/0X40L，4-1BB/4_1BBL，CD27/CD27L，CD30/CD30L 和HVEM/LIGHT，及其可溶性片段，構建體和激動性抗體。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制品，其包含任何一種上文描述的抗-PD-Ll抗體和一種或多種抗生素的組合。一方面，所述抗生素選自由下述各項組成的組抗病毒劑、 抗菌劑、抗真菌劑、抗原生動物劑。另一方面，所述抗病毒劑選自由下述各項組成的組逆轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、進入或融合抑制劑、成熟抑制劑、病毒釋放抑制劑、免疫應答增強劑、抗病毒協同增強劑、疫苗、肝激動劑和草藥療法。又一方面，所述組合包括一種或多種類型的抗病毒劑。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供制品，其包含任何一種上文描述的抗-PD-Ll抗體和一種或多種疫苗的組合。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供增強T細胞功能的方法，其包括施用有效量的任何一種上文描述的抗-PD-Ll抗體或組合物。一方面，所述抗-PD-Ll抗體或組合物使得功能障礙的T細胞無功能障礙。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供治療T細胞功能障礙病癥的方法，其包括施用治療有效量的任何一種上文描述的抗-PD-Ll抗體或組合物。在一個具體方面中，所述T細胞功能障礙病癥是感染或腫瘤免疫。另一方面，所述感染是急性的或慢性的。另一方面，所述慢性感染是持續(xù)性的、潛伏的感染或緩慢感染。又一方面，所述慢性感染是由選自由細菌、病毒、真菌和原生動物組成的組的病原體導致的。還一方面，降低了所述病原體在宿主中的水平。又一方面，所述方法還包括用疫苗治療。又一方面，所述方法還包括用抗生素治療。又一方面，所述病原體是細菌，所述方法還包括施用抗菌劑。又一方面，所述細菌選自由下述各項組成的組分枝桿菌屬物種(Mycobacterium spp.)、沙門氏菌屬物種(Salmonella spp.)、李斯特菌屬物種(Listeria spp，)、鏈球菌屬物種(Streptococcus spp·)、嗜血桿菌屬物種(Haemophilus，spp.)、奈瑟菌屬物種(Neisseria spp.)、克雷伯氏菌屬物種(Klebsiella spp.)、疏螺旋體屬物種(Borrelia spp.)、脆弱擬桿菌(Bacterioides fragillis)、密螺旋體屬物種(Tr印onema spp.)和幽門螺旋桿菌(HeliccAacter pylori)。又一方面，所述病原體是病毒，所述方法還包括施用抗病毒劑。又一方面，所述病毒選自由下述各項組成的組乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒(h印atitis-B，-C)、單 ^ ^^! -I>-II (herpes simplex virus -I, -II)"I> "II (human immunodeficiency virus -I, -II)、巨細胞病毒(cytomegalovirus)、EB 病毒(Eppstein Barr virus)、人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus)、人類T淋巴細胞白血病病毒—I、—II (human T lymphotrophic viruses, -I, —II)、水III帶^ 疫病毒(varicallazoster) 0又一方面，所述病原體是真菌，所述方法還包括施用抗真菌劑。又一方面，所述病癥選自由下述各項組成的組曲霉病(aspergilosis)、芽生菌病(blastomycosis)、白色念珠菌病(candidiasis albicans)、球抱子菌病(coccidioiodmycosis immitis)、組織胞菜菌病(histoplasmosis)、類球孢子菌病(paracoccidioiomycosis)、微孢子蟲病 (microsporidiosis)。又一方面，所述病原體是原生動物，所述方法還包括施用抗原生動物劑。又一方面，所述病癥選自由下述各項組成的組利什曼病(leishmaniasis)、瘧原蟲病(plasmodiosis) ( 8口，皰疾(malaria))、隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)、弓形體病(toxoplasmosis)、維蟲病(trypanosomiasis)禾口螺蟲感染(helminth infection)，包括那些由吸蟲(trematodes)(例如血吸蟲病(schistosomiasis))、絳蟲(cestodes)(例如包蟲病(echinococcosis))禾口線蟲(nemotodes)(如旋毛蟲病(trchinosis)、蟲回蟲病 (ascariasis)、絲蟲病(filariosis)和類圓線蟲病(strongylodiosis))導致的病癥。又一方面，所述T細胞功能障礙病癥是腫瘤免疫。又一方面，所述PD-Ll抗體或組合物和進一步包括傳統療法的治療方案組合，所述傳統療法選自由下述各項組成的組放射療法、化學療法、靶向療法、免疫療法、激素療法、血管發(fā)生抑制和姑息護理 (palliative care)。在又一個具體方面中，所述化學療法治療選自由下述各項組成的組 吉西他濱(gemcitabine)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、多柔比星(doxorubicin)、紫杉醇(paclitaxel)、順鉬(cisplatin)。在又一個具體方面中，所述腫瘤免疫力由選自由下述各項組成的組的癌癥導致乳腺癌(breast cancer)、肺癌(lung cancer)、結腸癌(colon cancer)、卵巢癌(ovarian cancer)、黑色素瘤(melanoma)、膀月光癌(bladder cancer)、腎
(kidney cancer)、月干· (liver cancer)、唾^夜―(salivary cancer)、胃· (stomach cancer)、神經膠質瘤(gliomas)、甲狀腺癌(thyroid cancer)、胸腺癌(thymic cancer)、上皮癌(epithelial cancer)、頭禾口頸癌(head and neck cancers)、胃癌禾口月夷腺癌(gastric and pancreatic cancer)。附圖簡述

圖1是圖解示例，描述了通過B7家族細胞表面分子的T細胞的共刺激。圖2是示意圖，顯示PMEL/B16T細胞刺激測定的實驗設計。圖3是柱狀圖，顯示了抗-PD-Ll Ab通過增強PMEL⑶8+T細胞中響應黑色素細胞肽gplOO的IFN- γ的產生對抗原-特異性T細胞功能的效應。在存在抗-PD-Ll抗體的刺激過程中產生IFN- γ的⑶8+T細胞的百分比和它們的IFN- γ產生水平兩者均增加。圖4是柱狀圖，顯示抗-PD-Ll Ab通過增強Ova-特異性⑶4+Τ細胞的增殖對抗原-特異性T細胞功能的效應，其通過抗-PD-Ll Ab YWM3. 55. Sl在用Ova-致敏的 (Ova-pulsed) Α20 B 細胞 /mPD-Ll APCs 次級刺激完成。圖5是系列FACS圖，顯示通過抗-PD-Ll抗體YWM3. 55S1在混合淋巴細胞反應中 (Mixed Lymphocyte Reaction)增強人CD8 T細胞的增殖。也報道了通過稀釋法在CFSE強度中測量的增殖細胞的百分數。圖6是用嵌合形式的抗-PD-Ll Ab YW243. 55S70治療慢性LCMV的實驗設計的示意圖。箭頭指示在用h IO6Pfu克隆13LCMV感染后14天開始6次給藥抗-PD-Ll的時機。圖7A和7B是圖表，顯示在通過抗-PD-Ll Ab YWM3. 55. S70體內治療慢性LCMV感染后的離體(ex vivo)細胞中增強的CD8效應子功能。通過YW243. 55. S70阻斷PD-Ll增CN 102245640 A
說明書
9/107 頁加了 CD8+T細胞的脫粒(如通過表面CD107A的增加所測量的)(圖7A)和增加了響應LCMV 肽gp33的產生IFN- Y細胞％ (圖7B)。gp33-特異性細胞的頻率通過用H2_Db gp33五聚體染色顯示。圖8A和8B顯示在用抗-PD-Ll抗體體內治療后慢性LCMV感染中血液和組織LCMV 滴度的降低。在圖8A中，來自于不同標示組織的病毒滴度在第21天和第觀天(分別為Ab 治療后的一周和兩周)進行分析。在圖8B中，在第0，7，14，21和觀天分析血清病毒滴度， LCMV接種發(fā)生在第0天，治療在第14天開始。圖9A顯示由于治療性處理已經建立的腫瘤(治療開始于第14天，當腫瘤是250mm3 時)后應用抗-PD-Ll抗體，MC38. Ova結腸癌腫瘤生長的顯著降低。圖9B是直方圖，顯示通過流式細胞術測量的組織培養(yǎng)中MC38. Ova細胞上PD-Ll表達的表面水平。PD-L2不被 MC38. Ova細胞表達。圖10是圖表，顯示單獨的PD-Ll阻斷治療以及聯合抗-VEGF或者聯合吉西他濱 (Gemcitabine)在C57BL/6小鼠中對MC38. Ova腫瘤生長的效應。圖IlA-B分別是通過噬菌體展示鑒定的11個抗-PD-Ll抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列。有陰影的條顯示不同定義的⑶R，而框內區(qū)域顯示HVR的范圍。優(yōu)詵實施方案的詳細描述本文提及的所有參考文獻通過引用明確并入本文。通用技術除非另有說明，本發(fā)明的實施將采用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規(guī)技術，這些都在本領域的技術范圍內。這些技術在文獻中有充分解釋，諸如Molecular Cloning =A Laboratory Manual (分子克隆實驗室手冊)， 第二版(Sambrook 等，1989) ；Oligonucleotide Synthesis (寡核苷酸合成)(Μ. J. Gait，編輯，1984) ；Animal Cell Culture (動物細胞培養(yǎng))(R. I. Freshney，編輯，1987) ；Methods in Enzymology (酶學中的方法)(Academic Press, Inc. ) ；. Current Protocols in Molecular Biology (當代分子生物學方案)(F. M. Ausubel等，編輯1987，和定期更新)；PCR :The Polymerase Chain Reaction (PCR 聚合酶鏈反應)，(Mullis 等，編輯，1994) ；A Practical Guide to Molecular Cloning(分子克隆實用指南)(Perbal Bernard V. , 1988) ；Phage Display :A Laboratory Manual (噬菌體展示實驗室手冊)(Barbas 等，2001)。I.宿主免疫A.淋巴細胞發(fā)育和活化人類中兩種主要類型的淋巴細胞是T (胸腺來源的)和B (骨髓來源的)。這些細胞來自于骨髓和胎肝(fetal liver)中已經定向為淋巴發(fā)育途徑的造血干細胞。這些干細胞的后代沿著不同途徑成熟為B或T淋巴細胞。人類中B淋巴細胞發(fā)育完全在骨髓內進行。 另一方面，T細胞從離開骨髓通過血流移動到胸腺的不成熟的前體發(fā)育，在胸腺它們增殖并分化為成熟的T淋巴細胞。從胸腺或骨髓出現的成熟的淋巴細胞處于靜止或“靜息”狀態(tài)，即它們是有絲分裂不活躍的。當分散到血流中，這些“幼稚”或“處女”淋巴細胞移動到多種次級或外周淋巴器官，諸如脾、淋巴結或扁桃體。大部分處女淋巴細胞具有固有的短的壽命，在離開骨髓或胸腺一些天后死亡。然而，如果此類細胞接受存在抗原的信號，它們可活化并經歷連續(xù)輪次的細胞分裂。然后所產生的后代細胞中的一些回復到靜息狀態(tài)成為記憶淋巴細胞-B和T細胞，其對于再次遇到刺激變應原而基本上是致敏的?；罨奶幣馨图毎钠渌蟠切毎鋬H存活一些天，但執(zhí)行特異性防御活性。淋巴細胞活化是指有序系列事件，通過它當受刺激時靜息淋巴細胞經過分裂和產生后代，后代中的一些變?yōu)樾毎?。完整應答包括誘導細胞增殖(有絲分裂發(fā)生)和表達免疫功能。當特異性配體結合它們表面上的受體時淋巴細胞被激活。該配體對于T細胞和B細胞是不同的，但產生的細胞內生理機制是類似的。一些異源抗原本身可誘導淋巴細胞活化，特別是與B細胞上的表面免疫球蛋白或 T細胞上其它糖蛋白交聯的大的聚合抗原。然而，大部分抗原不是聚合的，即使大量直接結合B細胞也不能導致激活。這些更常見抗原當與附近活化的輔助T-淋巴細胞共刺激時激活B細胞。此類刺激可來自于T細胞分泌的淋巴因子，但是其最有效的傳遞是通過使B細胞直接與T細胞表面蛋白接觸，該T細胞表面蛋白與某些B細胞表面受體相互作用產生次級信號。B. T 細胞T淋巴細胞不表達免疫球蛋白，反而通過稱為T細胞受體(TCR)的表面蛋白檢測異源物質的存在。這些受體通過直接接觸或通過影響其它免疫細胞的活性識別抗原。與巨噬細胞一起，T細胞是參與細胞介導的免疫的主要細胞類型。不像B細胞，T細胞僅在特定環(huán)境中能夠檢測異源物質。具體而言，只有在異源蛋白首先被切割成小肽，其然后展示在第二宿主細胞(稱為抗原呈遞細胞(APC))表面上時，T 淋巴細胞將識別該異源蛋白。許多類型的宿主細胞能夠在某些條件下呈遞抗原，但是某些類型更特異地適合這一目的并且在控制T細胞活性中特別重要，包括巨噬細胞和其它B細胞?？乖蔬f部分依賴于特異性蛋白，稱為主要組織相容性復合物(MHC)蛋白，其處于呈遞細胞表面上。因此，為了刺激細胞介導的免疫，異源肽必須與MHC肽組合呈遞到T細胞，這種組合必須被T細胞受體識別。存在兩種主要T細胞亞型，細胞毒性T淋巴細胞(T。細胞或CTLs)和輔助T細胞 (Th)細胞，其可粗略地通過基于細胞表面表達標記CD8和CD4來鑒別。T。細胞在病毒防御中是重要的，能夠通過識別某些細胞表面表達的病毒肽直接殺死病毒。Th細胞促進其它細胞類型的增殖、成熟和免疫功能，例如淋巴因子分泌從而控制B細胞、巨噬細胞和細胞毒性 T細胞的活性。處女和記憶T淋巴細胞通常均處于靜息狀態(tài)，在這種狀態(tài)它們不顯示顯著的輔助或細胞毒活性。當被激活時，這些細胞經歷數輪有絲分裂以產生子代細胞。這些子代細胞中的一些返回靜息狀態(tài)作為記憶細胞，但其它變成效應細胞，活躍地表達輔助或細胞毒活性。這些子代細胞與它們的親本相似⑶4+細胞僅能產生⑶4+后代，而⑶8+細胞僅能產生⑶8+后代。效應T細胞表達不在靜息T細胞上表達的細胞表面標記，諸如⑶25， CD28,CD29,CD40L,轉鐵蛋白受體和II類MHC蛋白。當激活刺激撤回時，細胞毒性或輔助活性在數天的期間隨著效應細胞的死亡或回復靜息狀態(tài)而逐漸消退。與B細胞的活化相似，T淋巴細胞對大部分抗原的應答也需要兩種類型的同時刺激。第一種是抗原，其如果被MHC蛋白適當展示在抗原呈遞細胞，可被T細胞受體識別并結合。盡管這種抗原-MHC復合物的確向細胞內發(fā)送信號，其通常不足以導致T細胞活化。完全活化，諸如輔助T細胞所發(fā)生的，需要與其它特異性配體一起的共刺激，該配體稱為輔助刺激因子，表達在抗原呈遞細胞表面上。另一方面，細胞毒性T細胞的活化通常需要IL-2， 其是活化的輔助T細胞分泌的細胞因子。C.免疫應答哺乳動物免疫系統與其它身體防御相區(qū)別的三種主要功能性質包括(1)特異性-在大量靶分子中獨特地識別和應答或不應答的能力，( 識別-從非自身中確定自身的從而與所有數不清的蛋白和其它有機分子和平共存，但仍然對引入身體的異源物質強烈反應的能力，和C3)記憶-通過經驗建模從而與特定異源病原體的后來的相遇將激發(fā)比初次相遇發(fā)生更快且強烈的應答的能力。當這些功能中的一個或多個受到破壞，將導致生理病癥。處女淋巴細胞從初級淋巴器官持續(xù)地釋放到外周，每種攜帶能夠進行抗原結合的表面受體。B細胞中抗原結合通過表面結合的免疫球蛋白介導，而T細胞中通過T細胞受體介導。但處女淋巴細胞被激活時，它們增殖產生子代細胞，子代細胞然后可進行進一步的活化和增殖循環(huán)。對給定抗原的應答的速度和強度大部分由克隆選擇決定子代細胞或特異于特定抗原的克隆越大，能夠識別和參與免疫應答的細胞數目越多。每個免疫應答是復雜的，并由涉及數種細胞類型的順次事件復雜地調節(jié)。當免疫原進入體內并遇到專門種類的細胞(稱為抗原呈遞細胞(APCs))時其被觸發(fā)。這些APCs捕獲微小量的免疫原并以能夠被抗原特異性輔助T淋巴細胞識別的形式展示。然后輔助T細胞被激活并且反過來促進其它類型的淋巴細胞(諸如B細胞或細胞毒性T細胞)的活化。然后活化的淋巴細胞增殖并執(zhí)行它們特異性的效應子功能。在這種過程的每個階段，淋巴細胞和APC通過直接接觸或通過分泌調節(jié)細胞因子相互通訊。被APC捕獲的外來抗原經歷一系列變化稱為抗原加工。此類加工(特別是蛋白免疫原的加工)涉及變性和部分蛋白水解消化，從而該免疫原被切割成短肽。然后所產生的有限數目的肽與II類MHC蛋白非共價結合并運輸到APC表面，該過程稱為抗原呈遞。與 APC直接接觸的CD4+輔助T淋巴細胞可被活化，但其僅在表達能夠識別并結合APC呈遞的特定肽-MHC復合物的T細胞受體蛋白時才被活化。輔助T(Th)細胞是免疫應答的主要協調者(orchestrators)，因為需要它們來活化兩種其它淋巴效應細胞細胞毒性T(Tc)細胞和抗體分泌漿細胞。Th活化在免疫應答早期發(fā)生并且需要至少兩個信號。一個信號由T細胞抗原受體與APC表面通過CD3蛋白復合物傳遞的抗原性肽-MHC復合物的結合提供，而第二個通過APC的共刺激信號被認為是來自于T細胞表面上獨立的信號傳遞蛋白與APC上特異性配體的結合。一種已知的此類相互作用是T細胞蛋白CD^和已知為B7的APC表面蛋白的家族。其它表面蛋白配對也可以介導共刺激。共刺激的過程隨后更詳細地描述。認為本發(fā)明的抗-PD-Ll抗體通過拮抗由通過 PD-Ll的信號傳導提供的負性共刺激信號增強共刺激。總之，兩個信號誘導輔助T細胞開始分泌細胞因子白細胞介素-2 (IL-2)，也開始在其表面上表達特異性高親合力IL-2受體。IL-2對于T淋巴細胞是高度強力的促有絲分裂因子，對活化的T細胞的增殖反應是必需的。IL-2對分泌它的細胞的效應-一種已知為自分泌效應的現象。還已經顯示即使T細胞已經接收到兩種信號，如果其本身IL-2受體被阻斷其將不會增殖。IL-2也可通過所謂的旁分泌效應作用于緊鄰的細胞。這種效應對于激活Tc細胞是特別重要的，Tc細胞通常不產生足夠刺激它們自身增殖的IL-2。除了 IL-2以外，活化的Th細胞分泌其它細胞因子并促進B細胞、巨噬細胞和其它細胞類型的生長、分化和功能。APC和抗原特異性Th細胞之間的接觸也具有對APC的效應-其中最重要的之一是釋放IL-1。認為這種細胞因子以自分泌方式作用以增加II類MHC蛋白和多種粘附分子的表面表達由此增強Th細胞的結合和增強抗原的呈遞。同時，IL-I以旁分泌的方式發(fā)揮對Th 細胞的功能以促進IL-2分泌和IL-2受體的表達。在Th細胞以上述方式活化的過程中，一些B細胞也可以通過它們的抗原受體結合免疫原，其是膜結合形式的抗體，它們將在晚些時候分泌。不像T細胞，B細胞以其游離的未加工的形式識別免疫原。特異性抗原結合提供一種類型的信號，其能夠導致B細胞活化。 第二種類型由活化的Th細胞提供，該細胞通過在其表面上結合非免疫球蛋白受體表達輔助激活B細胞的蛋白。這些Th-來源的信號(其作用于B細胞而不論其抗原特異性)稱為輔助因子。這些輔助因子包括IL-2，IL-4和IL-6。然而，輔助通過細胞-細胞接觸更有效地獲得，該細胞-細胞接觸允許T細胞表面上的蛋白與B細胞上的那些直接接觸。當一種被稱為CD40配體(CD40L)的蛋白(其僅在Th細胞被激活后表達在Th細胞上)與B細胞上稱為⑶40的蛋白結合時，發(fā)生最有效形式的接觸-介導的輔助。在稱為旁觀者(by-stander) 活化的過程中，與活化的B細胞的接觸甚至能夠足以激活靜息B細胞，即使該B細胞的表面免疫球蛋白尚未結合抗原。T。淋巴細胞發(fā)揮功能來清除在它們表面上表達異源抗原的細胞(諸如病毒感染的宿主細胞)。大部分T。細胞表達⑶8而非⑶4，因而識別與I類而非II類MHC蛋白相關的抗原。當體細胞被病毒感染，一些致免疫的病毒蛋白可在細胞內進行加工，然后所產生的肽作為與I類MHC分子一起的表面復合物出現。然后這些肽-MHC復合物可被抗原特異性克隆的T細胞受體識別，提供T。-細胞活化必需的兩個信號中的一個。這種第一信號單獨誘導T。細胞上的高親合力的IL-2受體。第二信號由從附近的活化的Th淋巴細胞分泌的IL-2 提供。一旦接收到兩個信號，活化的T。細胞獲得細胞毒活性，使其能夠殺死其所結合的細胞，以及殺死其它攜帶相同肽-MHC I類復合物的細胞。在一些情況中，殺死由于T。釋放特異性毒素到靶細胞上發(fā)生；在其它情況中，T。誘導靶細胞通過凋亡而自殺?；罨腡。細胞也增殖，產生額外的具有相同抗原特異性的T。細胞。D.通過免疫球蛋白超家族的共刺激1. B7. 1/B7. 2-CD28/CTLA-4可能最佳表征的T細胞共刺激途徑是通過B7. 1 (⑶80) /B7. 2 (⑶86)-⑶觀/ CTLA-4(⑶152)的信號傳導。這種信號傳導途徑對于T細胞活化和耐受是重要的。 Karandikar 等，J. Neuroimmunol.(神經免疫學雜志)巡10—18 (1998) ；Oosterwegal 等，Curr. Opin. Immunol.(當代免疫學觀點)U :294-300(1999) ；Salomon 等，Annu. Rev. Immunol.(免疫學年度綜述)19 :225-252(2001) ；Sansom, D. M.，Immunol. 101 169-177(2000) ；Chambers 等，Annu. Rev. Immunol.(免疫學年度綜述:565-592 Q001)。Β7· l[Freeman 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)1^ :625-631 (1991) ；Freedman 等，J. Immunol.(免疫學雜志)137 :3260-3267 (1987) ；Yokochi 等，J. Immunol.(免疫學雜志)128 :823-827(1982)]和 B7. 2 [Freeman 等，Science (科學)262 :909-911(1993)； Freeman 等，J.Exp· Med.(實驗醫(yī)學雜志)1^ :2185-2192 (1993) ； Azuma 等，Nature (自然巡:76-79(1993)]具有針對兩種刺激受體CD-觀和CTLA-4的雙重特異性。Aruffo 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國國家科學院學報)M :8573-8577(1987) ；Gross 等， J. Immunol.(免疫學雜志)1M :3201-3210 (1990)。⑶觀組成型表達在T細胞的表面上 [Gross 等，J. Immunol.(免疫學雜志)149 :380-388 (1992) 1,而 CTLA-4,更高親合力的警體，具有隨著T細胞活化迅速上調的表達。Peach等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志 2049-2058(1994) ；Linsley 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)176 :1595-1604(1992)； Kinsley 等，Immunity(免疫)1 :793-801 (1994) ；Linsley 等，Immunity(免疫)4: 535-543 (1996)。大部分APC群體以低水平組成型表達B7. 2，當B7. 1在活化后晚期誘導表達時其被迅速上調。Freeman 等，kience (科學)_ :909-911 (1993) ；Hathcock 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)1迎=631-640(1994)。B7. 2以前的表達和小鼠敲除數據表明B7. 2對于起始免疫應答是更重要的共刺激的分子，但其它方面兩個分子具有大部分重疊的功能。 McAdam 等，Immuno. Rev.(免疫學綜述)165 :631-640 (1994)。⑶觀與B7. 1和B7. 2相互作用以傳遞信號，該信號與TCR信號協同來促進T 細胞活化。Lenschow 等，Annu. Rev. Immunol.(免疫學年度綜述:233-258 (1996)； Lanzavecchia等，Cell (細胞)巡1-4 (1999)。沒有TCR信號時，CD^信號傳導不具有生理意義。CD^信號傳導調節(jié)T細胞活化的閾值并顯著降低T細胞活化所需TCR結合的數目。Viola等，kience (科學:104-106 (1996)。⑶沘活化通過促進T細胞存活維持 T細胞應答，由此使細胞因子能夠起始T細胞克隆擴增和分化。Thompson等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA(美國國家科學院學報)86 :1333-1337 (1989) ；Lucas 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1M:5757_5768(1"5) ；Shahinian 等，Science (科學)261 :609-612 (1993)； Sperling 等，J. Immunol.(免疫學雜志)157 :3909-3917(1996) ；Boise 等，Immunity (免疫)1:87-98 (1995)。CD^還優(yōu)化以前活化的T細胞的應答，促進白細胞介素2 (IL-2)的產生和T細胞的存活。盡管一些應答是不依賴于⑶觀的，尚不清楚這種共刺激的獨立性是來自于強的抗原刺激，還是依賴于其它未知共刺激途徑的結果。CTLA-4活化導致負性信號，其抑制TCR-和⑶- 介導的信號轉導。CTLA-4的參與導致IL-2合成的抑制和通過細胞周期的進展并導致T細胞應答的終止。Wahrnas 等，Immunity (免疫)丄405-413(1994) ；Walunas 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)183 2541-2550(1996) ；Krummel 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)182 :459-466 (1995) ；Brunner 等，J. Immunol.(免疫學雜志)162 :5813-5820 (1999) ；Greenwald 等，Immunity (免疫)M 145-155 (2001)。CTLA-4在調節(jié)T細胞應答(包括外周T細胞耐受)中發(fā)揮重要作用。盡管尚不清楚信號傳導如何通過CTLA-4和CD^進行協調，一些可能包括通過誘導免疫抑制細胞因子，外部競爭CD^與B7的結合，直接拮抗CD^信號傳導和/或TCR-介導的信號傳導。因此，拮抗CTLA-4 (例如，拮抗性抗-CTLA抗體)和/或激動B7. 1/B7. 2/^擬8可用于增強感染(例如急性的和慢性的)治療和腫瘤免疫中的免疫應答。2. IC0S/IC0SL 信號傳導APC和T細胞之間相互作用的另一個途徑通過IC0S(CD278)和IC0SL(B7_H2， ⑶275)發(fā)生。IC0S/IC0SL信號傳導促進T-輔助細胞分化和效應子功能，對于白細胞介素-IO(IL-IO)的產生特別重要，但在調節(jié)T細胞擴增和IL-2產生中的作用更為普通，包括調節(jié)T細胞、T細胞耐受和自身免疫。與⑶觀相比，ICOS不在幼稚T細胞上組成型表達，但在TCR結合后在T細胞上迅速被誘導。Hutloff 等，Nature (自然)397 :263-266(1999) ；Yoshinaga 等，Nature (自然)402 :827-832(1999) ；Beier 等，Eur. J. Immunol.(免疫學雜志)迎3707-3717 (2000)； Coyle 等，Immunity (免疫)1^ :95-105(2000) ；Mages 等，Eur. J. Immunol.(免疫學雜志)迎 1040-1047 (2000) ；McAdam 等，J. Immunol.(免疫學雜志:5035-5040 (2000)。這表明ICOS提供對于活化T細胞的共刺激信號。盡管通過⑶觀的共刺激增強了 ICOS表達， 并且ICOS表達在不存在B7. 1和B7. 2時降低，ICOS并不完全依賴于⑶觀信號。McAdam 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1膽:5035-5040(2000) ；Aicher 等，J. Immunol.(免疫學雜志)164 :4689-4696(2000) ；Kopf 等，J. Exp. Med.(實騎醫(yī)學雜志)192 :53-61 (2000)。ICOS 在分化的初始階段過程中在T輔助細胞類型1和2 (ThI和TP)上被上調，但在Τη2細胞上保持高水平，在ThI細胞上降低。在生發(fā)中心(germinal center)中ICOS在T細胞上的表達模式，Beier 等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)30 :3707-3717(2000) ；Mages 等， Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)30 1040-1047 (2000)表明了 ICOS在T細胞輔助B細胞中的作用。功能研究已經證明了這一點，甚至ICOS的表達已經在大鼠B細胞上證實， 盡管沒有在其它物種中證實。iTezuka等，Biochem. Biophys. Res. Commun.(生物化學和生物物理學研究通訊)276 :335-345(2000 :McAdam 等，Nature (自然 102-105 Q001)； Dong 等，Nature (自然)迴:97-101(2001) ；Dong 等，J. Immunol.(免疫學雜志 3659-3662(2001) ；Tafuri 等，Nature (自然)409 :105-109(2001)。IC0S/IC0SL信號傳導的一個作用似乎是調節(jié)通過最近激活的以及效應T細胞的細胞因子的產生(例如，IL-4, IL-13)。Hutloff 等，Nature (自然)397 :263-266(1999)； Coyle 等，Immunity (免疫)叢95-105 (2000) ；Dong 等，Nature (自然盤97-101 (2001)。 在變應性氣道疾病的研究中，Th2效應子功能，但不是Th2分化通過ICOS阻斷得到證實。 iTesciuba 等，J. Immunol.(免疫學雜志)167 1996-2003 (2001)。表明 ICOS 也可調節(jié) ThI 效應子功能，ThI和Th2細胞因子的產生可通過ICOS-Ig融合蛋白經體外再活化進行抑制。 Kopf 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志:53-61 (2000)。ICOS的另一個可能功能涉及維持ThI應答。在多發(fā)性硬化的自身免疫腦脊髓炎 (EAE)實驗模型中，髓磷脂-特異性CD4+T細胞介導的ThI疾病顯示ICOS阻斷的結果當共刺激在T細胞致敏過程中被阻斷然后在EAE的效應期過程中時可能不同。Dong等，NatUre(自然)i膽97-101 Q001) ；Rottman 等，Nature Immunol.(自然免疫學)2 :605-611 Q001)； Sporici等，Clin. Immunol.(臨床免疫學)■ =277-288(2001)。髓磷脂少突神經膠質細胞糖蛋白(MOG)誘導的EAE在ICOS+敲除小鼠中大大加重，同時與野生型相比IFN-γ的產生增加。類似地，在誘導EAE過程中的ICOS阻斷加重疾病也導致IFN-Y產生的增加。因此，致敏過程中的ICOS阻斷導致應答的ThI極化。有趣的是，髓磷脂-特異性的TCR轉基因T細胞在ICOS-Ig存在下的體外致敏抑制它們誘導EAE的能力，與體內觀察的ICOS-Ig 阻斷的結果完全相反。Sporici等，見上文。體外和體內相反結果的差異尚不清楚，但可能反應ICOS對IL-10產生調節(jié)T細胞以及效應T細胞在體內ICOS阻斷過程中的作用。通過 IL-10的共刺激在增強IL-10產生中非常有效，比通過⑶觀的共刺激更有效。Hutloff等， 見上文。IL-10、IL-12調節(jié)環(huán)在調節(jié)EAE中是關鍵的，因為IL-10-/-而非IL4-/-小鼠發(fā)生加重的 EAE。Segal 等，J.Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)187 :537-546 (1998)。ICOS另一個可能的作用是增強T細胞依賴性B細胞體液應答。ICOS+和ICOSL+小鼠已經顯示對于T細胞依賴性B細胞應答需要ICOS。Hutloff等，Nature (自然)迎工: 263-66(1999) ；Chapoval 等，Nat. Immunol.之269-74 (2001) ；Coyle 等，Immunity (免疫)1^ :95-105^000) ；McAdam 等，Nature (自然巡102-5 Q001) ；Tafuri 等，Nature (自然)409 :105-9(2001) ；Suh 等，Nat. Immunol.(自然免疫學)4 :899-906(2003)。ICOS+ 小鼠也顯示應答初次免疫的而降低的生發(fā)中心，應答次級激發(fā)的生發(fā)中心形成的嚴重缺陷和 IgG類型轉換的缺陷。ICOS在T:B細胞相互作用中的功能通過鑒定在成人發(fā)生的常見變異型免疫缺陷病的患者的T細胞中ICOS的純合缺失得到進一步驗證。Grimbacher等，Nat. Immunol.(自然免疫學)4 :261-68 Q003)。因此，激動IC0S/IC0SL(例如，激動性抗-ICOS抗體、可溶性IC0S/IC0SL配體)可用于增強在治療感染(例如，急性的和慢性的)和/或腫瘤免疫中的免疫應答。3. PD-I 涂徑調節(jié)T細胞活化的重要負性共刺激信號通過程序性死亡-1受體(PD-I)(⑶279) 及其配體結合配偶體PD-Ll (B7-H1，CD274)和PD-L2 (B7-DC，CD273)提供。PD-I的負調節(jié)作用通過易于自身免疫的PD-I敲除(Pdcdl+)揭示。Nishimura等，Immunity (免疫)U: 141-51 (1999) ；Nishimura 等，Science (科學:319-22 (2001)。PD-1 與 CD^ 和 CTLA-4 相關，但缺少允許同二聚化的膜鄰近半胱氨酸。PD-I的胞質結構域含有基于免疫受體酪氨酸的抑制基序(ITIM，V/IxYxxL/V)。PD-1 僅結合 PD-Ll 和 PD-L2。Freeman 等，J. Exp. Med. (實騎醫(yī)學雜志)192 1-9 (2000) ；Dong 等，Nature Med.(自然醫(yī)學:1365-1369 (1999)； Latchman 等，Nature Immunol.(自然免疫學)2 :261-268 Q001) Jseng 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)1M :839-846(2001)。PD-I可在T細胞、B細胞、天然殺傷T細胞、活化的單核細胞和樹突狀細胞(DCs) 上表達。PD-I被激活的人⑶4+和⑶8+T細胞、B細胞和骨髓細胞表達，但不被未刺激的這些細胞表達。這與⑶更受限制的表達形成對比。Nishimura等，Int. Immunol. (國際免疫學)§ :773-80(1996) ；Boettler 等，J. Virol.(病毒學雜志)巡:3532-40(2006)。 已經從活化的人T細胞中克隆了至少4種PD-I的變體，包括缺少(i)外顯子2，(ii)外顯子3，(iii)外顯子2和3或(iv)外顯子2至4的轉錄本。Nielsen等，Cell. Immunol. (細胞免疫學).109-16 (2005)。除了 PD-I Δ ex3之外，所有變體在靜息外周血單核細胞 (PBMCs)中作為全長PD-I以相似水平表達。在用抗-⑶3和抗-⑶觀活化人T細胞時，所有變體的表達顯著被誘導。PD-I Δ ex3變體缺少跨膜結構域，并與可溶性CTLA-4相似，后者在自身免疫中發(fā)揮重要作用。mda等，Nature (自然506-11 (2003)。這種變體在患有類風濕性關節(jié)炎的患者滑膜液和血清中富集。Wan等，J. Immunol.(免疫學雜志)1H 8844-50(2006)。兩種PD-I配體的差別在于它們的表達模式。PD-Ll在小鼠T和B細胞、⑶S、巨噬細胞、間充質干細胞和骨髓來源的肥大細胞上組成型表達。Yamazaki等，J. Immunol. (免疫學雜志)1巡5538-45 0002)。PD-Ll在廣泛范圍的非造血細胞(例如角膜、肺、 血管上皮、肝非實質細胞、間充質干細胞、胰島、胎盤合胞體滋養(yǎng)層細胞、角質化細胞)上表達[Keir 等，Annu. Rev. Immunol.(免疫學年度綜述)26 :677-704(2008)]，并在很多細胞類型活化后上調。類型I和類型II干擾素(IFN，s)上調PD-L1。Eppihimer等， Microcirculation(微循環(huán))2 :133-45^002) ；Schreiner 等，J. Neuroimmunol.(神經免疫學雜志) 155 :172-82(2004)。當MyD88，TRAF6和MEK被抑制時，PD-Ll在細胞中的表達降低。Liu 等，Blood(血液)110 296~304 (2007)。 JAK2 也參與 PD-L1 誘導。Lee 等，FEBS Lett. 580 :755-62(2006) :Liu 等,Blood(血液)110 :296-304(2007)。磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)(—種修飾磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和Akt信號傳導的細胞磷酸酶)的喪失或抑制增加了癌癥中轉錄后PD-Ll表達。Parsa等，Nat. Med.(自然醫(yī)學)叢84-88 (2007)。PD-L2表達比PD-Ll更受限制。PD-L2在DCs、巨噬細胞和骨髓來源的肥大細胞上誘導表達。PD-L2也在大約二分之一至三分之二的靜息腹膜Bl細胞上表達，但不在常規(guī)的B2B細胞上表達。Zhong等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)37 =2405-10(2007)。 PD-L2+B1細胞結合磷脂酰膽堿，可能對于抵抗細菌抗原的先天免疫應答是重要的。通過 IFN- γ對PD-L2的誘導部分地依賴于NF- κ B。Liang等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)迎2706-16(2003)。PD-L2也可通過GM-CF、IL-4和IFN-γ在單核細胞和巨噬細胞上誘導。Yamazaki 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1巡:5538-45(2002) ；Loke 等，PNAS 100 5336-41(2003)。PD-I信號傳導典型地對細胞因子產生比對細胞增殖具有更大效應，對IFN-γ、 TNF-α和IL-2的產生具有顯著效應。PD-I介導的抑制性信號傳導也依賴于TCR信號傳導的強度，在低水平的TCR刺激傳遞更大的抑制。這種降低可通過經⑶觀的共刺激[Freeman 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)192 1027-34(2000) 1 或 IL-2 的存在[Carter 等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)32 :634-43(2002)]而得到克服。經PD-Ll和PD-L2的信號傳導可能是雙向的證據正在增加。S卩，除了修飾TCR 或BCR信號傳導之外，信號傳導也可能傳遞回表達PD-Ll和PD-L2的細胞。盡管用天然人抗-PD-L2抗體(分離自患有Waldenstrom’ s巨球蛋白血癥的患者)處理樹突狀細胞未發(fā)現上調MHC II或B7共刺激分子，此類細胞的確產生更大量的促炎細胞因子，特別是TNF-α和IL-6，并刺激T細胞增殖。Nguyen等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)196 1393-98(2002)。用這種抗體處理小鼠也(1)增強對轉板(transplated)的bl6黑素瘤的抵抗并迅速誘導腫瘤-特異性的CTL。Radhakrishnan等，J. Immunol.(免疫學雜志)170 :1830-38(2003) ；Radhakrishnan 等，Cancer Res.(癌癥研究)M :4965-72 (2004)； Heckman 等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)37 :1827-35(2007) ； (2)阻斷小鼠變應性哮喘模型中氣道炎癥疾病的發(fā)展。Radhakrishnan等，J. Immunol.(免疫學雜志)m 1360-65(2004) ；Radhakrishnan 等，J. Allergy Clin. Immunol.(變態(tài)反應臨床免疫學雜志)116 :668-74(2005)。)向樹突狀細胞(“DC’ s”)反向信號傳導的進一步的證據來自于對骨髓來源的 DC與可溶性PD-I (融合到Ig恒定區(qū)的PD-I EC結構域-“s-PD-1”)一起培養(yǎng)的研究。 Kuipers 等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)36 =2472-82(2006)。這種 sPD-Ι 以可通過施用抗-PD-I逆轉的方式抑制DC活化并增加IL-10的產生。另外，數個研究顯示了獨立于PD-I的PD-Ll或PD-L2的受體。B7. 1已經被鑒定為PD-Ll的結合配偶體。Butte等，Immunity (免疫)忍111-22 (2007)。化學交聯研究顯示PD-Ll和B7. 1可通過它們的IgV-樣結構域相互作用。B7. 1: PD-Ll相互作用可誘導向T細胞中的抑制性信號。在⑶4+T細胞上通過B7. 1連接PD-Ll或在⑶4+T細胞上通過PD-Ll 連接B7. 1傳遞抑制性信號。當通過在抗-⑶3加上B7. 1包被的珠子刺激時，缺少⑶觀和 CTLA-4的T細胞顯示降低的增殖和細胞因子產生。在缺少針對B7. 1的所有受體(即，C擬8， CTLA-4和PD-L1)的T細胞中，T細胞增殖和細胞因子產生不再被抗-CD3加上B7. 1包被的珠抑制。這表明在沒有⑶觀和CTLA-4時B7. 1在T細胞上特異性地通過PD-Ll發(fā)揮作用。相似地，當在存在抗-⑶3加上PD-Ll包被的珠子進行刺激時，缺少PD-I的T細胞顯示降低的增殖和細胞因子產生，表明在T細胞上PD-Ll連接對B7. 1的抑制性效應。當T細胞缺少所有針對PD-Ll的已知受體(S卩，無PD-I和B7. 1)時，T細胞增殖不再被抗-⑶3加上 PD-Ll包被的珠子破壞。因此，PD-Ll可通過B7. 1或PD-I發(fā)揮對T細胞的抑制性效應。B7. 1和PD-Ll的直接相互作用表明目前對共刺激的理解是不完全的，低估了這些分子的表達對T細胞的重要性。PD-Ll+ T細胞的研究顯示T細胞上的PD-Ll可下調T細胞細胞因子的產生。Latchman等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA(美國國家科學院學報)101 10691-96 (2004)。因為在T細胞、B細胞、DCs和巨噬細胞上PD-Ll和B7. 1兩者均表達，有可能存在這些細胞類型上的B7. 1和PD-Ll之間的定向相互作用。另外，非造血細胞上的 PD-Ll可與T細胞上的B7. 1和PD-I相互作用，提出了 PD-Ll是否參與它們的調節(jié)的問題。 B7. 1 PD-Ll相互作用的抑制性效應的一個可能解釋是T細胞PD-Ll可從與⑶觀相互作用中俘獲或隔離APC B7. 1。因此，拮抗經PD-Ll的信號傳導，包括從與PD_1、B7. 1或兩者的相互作用中阻斷 PD-Ll,由此阻止PD-Ll發(fā)送負性共刺激信號到T細胞和其它抗原呈遞細胞，可能增強應答感染(例如，急性的和慢性的)和腫瘤免疫的免疫。此外，本發(fā)明的抗-PD-Ll抗體可與 PD-1:PD-L1信號傳導的其它組分的拮抗劑(例如拮抗性抗-PD-I和抗-PD-L2抗體)組合。4. B7-H3共刺激信號也可通過廣泛表達在淋巴和非淋巴組織中的B7-H3(B7RP_2，CD276， PR0352)提供。Chapoval 等，Nat. Immunol.(自然免疫學)2 :269-74Q001)。在人中， B7-H3具有4Ig和2Ig變體，4Ig形式是主要的，而2Ig變體在小鼠中是主要的。Sim等， J. Immunol.(免疫學雜志:6294-97(2002) ；Steinberger 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1位:2352-59(2004) ；Ling 等，Genomics (基因組學)盤365-77(2003)。最近的研究已經顯示B7-H3既是T細胞應答的刺激劑又是T細胞應答的抑制劑。 刺激性活化的證據如下提供(1)與抗-⑶3組合，B7-H3/Ig融合物共刺激⑶4+和⑶8+T細胞的增殖，并刺激IFN-Y和⑶8的裂解活性，Chapoval等，Nat. Immunol.(自然免疫學 269-74(2001)；和O)向EL-4淋巴瘤模型的腫瘤中注射B7-H3表達質粒導致50%的腫瘤的完全消退，其依賴于CD8+T細胞和NK細胞。然而，數個最近研究已經顯示這種分子的抑制性作用。B7-H3+APC敲除顯示在MLR應答中同種異體反應性T細胞增殖的兩倍的增加。 ⑶4T細胞通過抗-⑶3和抗-⑶觀的活化在轉染了任何一種形式的B7-H3的HLA-DR2中受到抑制。Ling等，Genomics (基因組學)型365-77 (2003)。結果是降低的增殖和IFN- γ , TNF-α，IL-10和GM-CSF的產生。對這些研究的調和(reconsiliation)在于對于B7-H3存在兩種功能相反的受體，與⑶觀和CTLA-4如何經B7. 1和B7. 2調節(jié)信號傳導類似。因此，B7-H3信號傳導的阻斷當與本發(fā)明的抗_PD_L1抗體組合時可促進增強對感染和腫瘤免疫的免疫應答。
5. B7-H4最近添加到B7 家族的是 B7-H4 (B7x, B7-S1，B7-H. 5，VTCNl，PR01291)，其是T細胞應答的負性調節(jié)物。Zang等，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α.(美國國家科學院學報)1Μ(18), 10388-10392 (2003) ；Watanabe 等，Nat. Immunol.(自然免疫 ψ )4(7) ,670-679(2003) ；Prasad,等，Immunity (免疫)叢(6)，863-873 Q003) ；Sica 等， Immunity (免疫)叢(6)，849-861 Q003)。人和小鼠的B7-H4在淋巴器官(脾和胸腺)和非淋巴器官(包括肺、肝、睪丸、卵巢、胎盤、骨骼肌、胰和小腸)中均廣泛表達。在正常人組織中通過IHC未檢測到B7-H4或B7-H4在翻譯水平的調節(jié)。IHC顯示B7-H4在肺和卵巢腫瘤中高表達，實時聚合酶鏈反應(PCR)分析表明小鼠B7-H4也在前列腺、肺和結腸癌細胞系中高表達。B7-H4結合活化的但非幼稚T細胞上尚且未知的受體，這不同于CTLA-4、I COS, PD-I和B7-H3受體。盡管最初報道BTLA是B7-H4的配體，所報道的B7_H4/Ig融合物與野生型結合但不結合BTLA+細胞迫使人得到結論HVEM而非BTLA是B7-H4的獨特配體。Sedy 等，Nat. Immunol.(自然免疫學)& :90-98 Q004)。B7-H4轉染子和固定的B7_H4/Ig融合物的研究證明B7-H4傳遞抑制TCR-介導的⑶4+和⑶8+T細胞增殖、細胞周期在G0/G1期的進展和IL-2產生的信號。Sica等， Immunity (免疫)叢849-61 (2003) ；Zang 等，PNAS 100 10388-92 (2003) ；Prasad 等， Immunity (免疫)叢:863-73 (2003)。B7. 1共刺激不能克服B7_H4/Ig誘導的抑制。阻斷抗-B7-H4抗體增加了 T細胞增殖和體外IL-2的產生。體內施用與施用完全弗氏佐劑(CFA) 中鑰孔蜮血藍蛋白(KLH)相當的抗-B7-H4抗體經過用KLH體外再刺激后導致抗-KLH抗體 IgM產生的中度增加和T細胞增殖和IL-2產生的兩到三倍增力Π，表明體內在存在抗-B7-H4 時更大的T細胞的致敏?？?B7-H4阻斷抗體顯著加速EAE的發(fā)生和嚴重性，在抗-B7-H4治療的自身免疫小鼠模型的腦中增加了⑶4+和⑶8+T細胞和⑶Ilb+巨噬細胞。B7-H4上可獲得的組合的實驗數據表明其可下調外周組織的免疫應答并在調節(jié)T細胞耐受中發(fā)揮作用。 B7-H4的表達也可在腫瘤免疫中逃避宿主的免疫應答中發(fā)揮作用。Choi等，J. Immunol.(免疫學雜志)111:4650- Q003)。因此，拮抗B7-H4當與本發(fā)明的抗-PD-Ll抗體組合時可用于增強對感染和腫瘤免疫的免疫應答。6. BTLA B7家族成員BTLA(CD272，BTLA-1)與PD-1和CTLA功能類似。最初鑒定為Thl細胞的選擇性標記，BTLA僅在淋巴細胞上表達。與CTLA-4，ICOS和PD-I相似，活化過程中 BTLA在T細胞上被誘導。然而，與ICOS相比(其在Th2細胞上保持增加，但在Thl細胞中下調)，BTLA保持在Thl細胞上表達，而不在Th2細胞上表達。與PD-I相似，BTLA也在B 細胞上表達。Gavrieli等，Biochem. Biophys. Res. Commun.(生物化學和生物物理學研究通訊)312 :1236-43 (2003)。然而，BTLA在靜息和活化的B細胞上均表達，而PD-I在活化的B 細胞上上調。BTLA具有兩個ITIM基序。BTLA在B和T淋巴細胞上均發(fā)揮抑制性效應。Watanabe等，Nat. Immunol.(自然免疫學)i =670-79(2003)。BLTA+B細胞顯示對抗-IgM中度的應答，但對體外抗-CD3 顯示增加的應答。極化的BTLA+Thl細胞顯示應答體外抗原暴露的增殖的大約兩倍的增加。在體內，BTLA+小鼠顯示半抗原-特異性的抗體應答的三倍增加和對EAE增強的易感性。BTLA+小鼠的表型與PD-I+小鼠表型相似，表現出對自身免疫增加的易感性，但比
25CTLA-4+小鼠更微細的表型。然而，考慮到其作為負性調節(jié)子的作用，阻斷BTLA證明當與
本發(fā)明的抗-PD-Ll抗體組合時可用于增強感染和抗腫瘤免疫中的免疫應答。 有趣的是，最近已經顯示Ig超家族成員BTLA也與TNFR家族成員HVEM相互作用。
Sedy 等，Nat. Immunol.(自然免疫學:90-98 Q005) ；Gonzalez 等，Proc. Natl. Acad. Sci.
USA(美國國家科學院學報:1116-1121 Q005)。HVEM在下文TNFR家族共刺激因子下綜述。E. TNFR家族共刺激因子1. 0X40/0X40L (CD 134)0X40(CD134, TXPG1L, TNFRSF4)禾口 0X40L(CD134L， CD252, GP34, TNFSF4, TXGP1) 缺陷小鼠具有對病毒和普通蛋白抗原兩者和在接觸-敏感性反應中具有降低的初次CD4+T 細胞應答。Chen 等，Immunity (免疫)U :689-698(1999) ；Kopf 等，Immunity (免疫)U 699-708(1999) ；Murata 等，J. Exp. Med.(實騎醫(yī)學雜志)191 :365-374(2000) ；Gramaglia 等，J. Immunol.(免疫學雜志=3043-3050(2000)。在初次應答的晚期產生更低頻率的抗原特異性效應T細胞和更少的記憶T細胞發(fā)育。Gramaglia等，見上文。與⑶27缺失的T細胞相比，0X40缺失的幼稚CD4+T細胞群體中早期增殖未受破壞。然而，在活化后 4-5天發(fā)生降低的增殖和顯著的凋亡性細胞死亡，結果是很少T細胞長期存活。Rogers等， Immunity (免疫):445-455 Q001)。對于0X40-缺失的CD8+T細胞，初始細胞分裂未受影響，但初次效應細胞的積累在遇到抗原后3-6天顯著降低。Croft等，Nat. Immunol.(自然免疫學)3 :609-620 (2003)。通過樹突狀細胞或T細胞轉基因表達0X40L增加了抗原-應答⑶4+T細胞的數目，產生與異常T細胞活化相關的自身免疫-樣癥狀。Brocker等，Eur. J. Immunol. (歐洲免疫學雜志) :1610-1616(1999) ；Murata 等，J. Immunol.(免疫學雜志 4628-4636 (2002)。免疫接種后，注射激動性抗-0X40抗體導致在初次應答的峰值時更多數目的抗原-反應性⑶4+T細胞的積累，伴隨所產生的記憶T細胞數目的增加。Gramaglia 等，見上文.，Bansai-Pakala 等，Nature Med.(自然醫(yī)學:907-912 Q001)，Maxwell 等， J. Immunol.(免疫學雜志)164 :107-112(2000) ；Weatherill 等，Cell. Immunol.(細胞免疫學:63-75 (2001)。當抗原-致敏的小鼠用對0X40特異性激動性抗體處理時發(fā)生增加的初次效應CTL的積累。De Smedt等，J. Immunol.(免疫學雜志)迴=661-670(2002)。認為0X40提供晚期作用信號，其允許在初次免疫應答的峰值新產生的效應細胞存活。也有好的證據證明0X40在⑶觀下游發(fā)揮功能-除了增加由⑶觀信號介導的 0X40的表達之外，相對于0X40缺失的⑶觀缺失的功能分析已經顯示在不存在⑶觀信號時早期初次T細胞應答顯著破壞，但是在沒有0X40信號時僅晚期應答被破壞。Rogers 等，Immunity (免疫)邊445_455 (2OOl) ；Bertram 等，J. Immunol.(免疫學雜志)168 3777-3785(2002)。因此，0X40/0X40L的活化(諸如通過應用激動性抗體)當與本發(fā)明的抗_PD_L1抗體組合時可能用于治療T細胞功能障礙病癥。2. 4-1BB (CD137) /4-1BBL，與0X40/0X40L 相似，缺失 4-1BB(CD137, TNFRSF9)和 4-1BBL(TNFSF9)的 T 細胞當沒有4-1BBL時在初次應答中顯示更少的抗原-反應性CD8+T細胞積累和更少的記憶 T 細胞發(fā)育。DeBenedette 等，J. Immunol.(免疫學雜志)163 4833-4841 (1999) ；Tan 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1M :4859-4868(1999) ；Tan 等，J. Immunol.(免疫學雜志=2320-2325 (2000)。另外，阻斷4-1BBL不改變CD8+T細胞的初始增殖應答，但是抑制3-6天后初次應答峰值的效應CTL的積累，這是由于已經分裂數次的細胞的凋亡導致的。Cooper 等，Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學雜志)32 =521-529 (2002)。激動性抗-4-1BB 抗體和抗-4-1BBL-轉染的APC也產生相似的結果體內CTL和⑶4+T細胞應答顯著增加。Melero 等，Nature Med.(自然醫(yī)學)3 :682-685(1997) ；MeIero 等，Eur. J. Immunol. (歐洲免疫學雜志) :1116-1121(1998) ；Takahashi 等，J. Immunol.(免疫學雜志)162 5037-5040(1999) ；Guinn 等，J. Immunol.(免疫學雜志)162 :5003-5010 (1999) ；Halstead 等，Nature Immunol.(自然免疫學)3 :536-541 (2002) ；Takahashi 等，Immunol. Lett. 76 183-191(2001) ；Bansal-Pakala 等，J. Immunol.(免疫學雜志)169 :5005-5009(2002)。 4-1BB-特異性的抗體不改變初始增殖應答，支持4-1BBL阻斷實驗的結論，表明4-1BB在提供細胞存活信號中的晚期活性。與0X40相似，認為4-1BB提供晚期作用信號，其允許初次免疫應答的峰值新產生的效應細胞的存活。也存在好的證據證明4-1BB比⑶觀更晚發(fā)揮功能一除了由⑶觀信號介導的0X40和4-1BB的表達增加之外，⑶觀缺失對比4-1BB缺失的功能分析已經顯示在沒有CD^信號時早期初次T細胞應答顯著破壞，但在沒有0X40信號時僅晚期應答被破壞。Rogers 等，Immunity (免疫)邊445-455 (2001) ；Bertram 等，J. Immunol.(免疫學雜志)1巡:3777-3785(2002)。激動性抗-⑶137抗體可誘導癌癥中的腫瘤消退，其中⑶8+CTL發(fā)揮中心作用。Melero 等，Nat. Med.(自然醫(yī)學)2 :682-5 (1997) ；Hirano 等，Cancer Res.(癌癥研究)迎(3) :1089-96000幻。在此類腫瘤中組成型和可誘導的PD-Ll表達賦予抗性，其在阻斷PD-Ll時是可逆轉的。Hirano等。因此，4-1BB/4-BBL的活化(諸如通過應用激動性抗體)，特別是與PD-Ll拮抗劑 (例如抗-PD-Ll抗體)組合可能用于治療T細胞功能障礙病癥。3. CD27/CD27L(CD70)在體外阻斷研究(其中破壞了⑶27/⑶70相互作用)中已經證明了 CD27(TNFRSF7，S152)和CD27L(CD70，TNFSF7)信號傳導在T細胞應答的初始階段的重要性。Oshima 等，Int. Immunol.(國際免疫學)邊517-5 (1998) ；Agematsu 等，J Immunol. (免疫學雜志)IM :1421-14 (1994) ；Hintzen 等，J. Immunol.(免疫學雜志)154 2612-2623(1995)。缺少⑶27的T細胞最初正常分裂，但然后在活化后較差地增殖3或更多天。Hendriks 等，Nature Immunol.(自然免疫學)丄433_44(K2000)。這表明 CD27 參與促進幼稚T細胞群體的初始擴增，這是通過早期抑制T細胞死亡或通過作用于細胞周期以允許活化后2-3天持續(xù)的分裂進行。這一點通過CD27-缺陷小鼠的體內研究得到加強，該研究中發(fā)生更少數目的抗原特異性應答(第4-8天)和在3周或更多周的期間更少的記憶 T細胞發(fā)育。Hendriks等，見上文。T細胞活化后早期⑶27的表達被上調，表明其主要傳遞維持在效應子應答峰值之前的早期增殖的信號。因此，⑶27/⑶27L的活化(包括通過應用激動性抗體活化)特別是與本文描述的抗-PD-Ll抗體組合，可能用于治療T細胞功能障礙病癥。
4. CD30/CD30L (CD153)CD30(TNFRSF8，Ki-I)和 CD30L(CD153，TNFSF8)信號傳導對體外數種 T 細胞功能是共刺激的。Del Prete 等，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)182 1655-1661 (1995), Bowen 等，J. Immunol.(免疫學雜志)156 :442-449(1995)。對CD30L的阻斷試劑抑制Th2細胞發(fā)育并增強Thl細胞體外發(fā)育。這種活性與顯示⑶30優(yōu)選地由Th2細胞和類型2細胞毒性Tc2細胞表達的數據一致。Del Prete等，見上文，Nakamura等，J. Immunol.(免疫學雜志)丄巡=2090-2098 (1996)。在未極化的初次應答中⑶30在幼稚T細胞活化后的3_4天表達。Nakamura等，見上文顯示其功能不限于類型2細胞因子-支配的應答。盡管⑶30/⑶30L信號傳導的精確機制不清楚，已經表明其可能類似于0X40和 4-1BB。當過繼性轉移的抗原特異性CD8+T細胞轉移到CD30L-缺陷小鼠中時，它們不在初次應答的峰值大量積累，并且更少的記憶T細胞發(fā)育。因此，CD30可能也提供增殖和/或存活信號以允許在初次應答的峰值產生大量抗原特異性T細胞。因此，⑶27/⑶27L的活化(包括通過應用激動性抗體)，特別是與本文描述的抗-PD-Ll抗體組合，可能用于治療T細胞功能障礙病癥。5. HVEM/LIGHTHVEM(HVEA, ATAR, LIGHTR, TNFRSF14, PR0509)禾口 LIGHT(CD258， HVEML, TR2, TNFSF14，PR0726)對T細胞共刺激的效應由于以下原因而變得復雜1) LIGHT也結合淋巴細胞毒素-β受體(LI^R)的能力，和2) HVEM結合可溶性LTa 3。因此，任何對HVEM/ LIGHT效應的研究應當考慮對于這種信號傳導系統的其它結合配偶體的效應。阻斷 LIGHT可抑制早期T細胞增殖和同種異體混合-淋巴細胞反應(MLRs)中細胞因子的分泌。Tamada 等，J. Immunol.(免疫學雜志)IM :4105-4110(2000)，Kwon 等，J. Biol. Chem. (生物化學雜志:14272-14276(1997) ；Harrop 等，J. Immunol.(免疫學雜志)161 1786-1794(1998) ；Tamada 等，Nature Med.(自然醫(yī)學垣283-289 QOOO)。當在 MHC-不匹配的心臟同種異體移植中阻斷LIGHT時，促炎細胞因子的產生被抑制。知等，J. Exp. Med. (實驗醫(yī)學雜志)皿=795-800 (2002)。此外，同種異體皮膚移植物在LIGHT和⑶觀兩者均缺失的受體中受到伴隨延遲的動力學的排斥。Scheu等，J.Exp. Med.(實驗醫(yī)學雜志)1迪: 1613-1624(2002)。提議延遲的移植物排斥可能表明T細胞克隆擴增或細胞因子產生的早期抑制。這種結論得到以下支持(i)體外研究顯示LIGHT-缺陷應答同種異體抗原的脾細胞具有降低的THl和TH2兩種細胞因子的產生和弱的細胞毒性T淋巴細胞活性(CTL)活性的產生[Sieu等，見上文.]，和(ii)體內研究顯示阻斷LIGHT降低同種異體反應性CTL的產生。Tamada 等，Nature Med.(自然醫(yī)學)g :283-289 Q000)。因此，HVEM/LIGHT (諸如通過應用激動性抗體)，特別是與本文描述的抗_PD_L1抗體組合，可用于治療T細胞功能障礙病癥。II.定義“變應原”或“免疫原”是任何能夠觸發(fā)免疫應答的分子。用于本文時，該術語覆蓋抗原分子本身或其來源，諸如花粉粒、動物皮屑、昆蟲毒液或食品。這與術語抗原相比較，抗原是指能夠被免疫球蛋白或T細胞受體特異性識別的分子。任何能夠誘導免疫應答的異源物質是潛在的變應原。許多天然和合成來源的不同化學藥品已知是變應原性的。復雜天然有機化學品(特別是蛋白質)可能導致抗體介導的變態(tài)反應，而簡單有機化合物、無機化學
28品和金屬更優(yōu)選地導致T細胞介導的變態(tài)反應。在一些情況下，相同變應原可導致多于一種類型的變態(tài)反應。暴露于變應原可以是通過吸入、注射、注射或皮膚接觸。在免疫功能障礙的環(huán)境中，“功能障礙(Dysfunction)，，是指對抗原性刺激的免疫降低的應答狀態(tài)。該術語包括衰竭(exhaustion)和/或無反應性(anergy)兩者的共同要素，其中可發(fā)生抗原識別，但跟著發(fā)生的免疫應答對控制感染或腫瘤生長是無效的?！澳褪堋被颉懊庖吣褪堋笔敲庖呦到y不能啟動對特定抗原的防御性免疫應答。耐受可以是天然的或自身的，其中身體不攻擊其本身蛋白和抗原，或耐受可以是被誘導的，來自于對免疫系統的操作。中心耐受在淋巴細胞發(fā)育過程中發(fā)生，在胸腺和骨髓中進行。在這種過程中，識別自身抗原的T和B淋巴細胞在它們發(fā)育成完全免疫活性的細胞之前被消除。 這種過程在胎兒發(fā)育中最活躍，但在產生未成熟的淋巴細胞的整個生命中持續(xù)。外周T細胞耐受是指對存在于外周組織中的自身抗原的功能無應答性，在T和B細胞成熟并進入外周后發(fā)生。這些過程包括通過“調節(jié)性”T細胞抑制自身反應性細胞和在沒有伴隨炎癥的共刺激信號時遇到抗原的淋巴細胞中產生低反應性(無反應性)。“獲得的”或“誘導耐受”是指免疫系統對外部抗原的適應，其特征是淋巴組織對給定抗原的特異性無-反應性，對于該抗原在其它情況下將可能誘導細胞介導的免疫或體液免疫。在成人中，耐受可臨床誘導， 其通過反復施用大劑量抗原或刺激免疫應答所需的閾值以下的小劑量，諸如經過靜脈內或舌下施用可溶性抗原進行。免疫抑制也協助耐受的誘導。自身耐受的破壞可導致自身免疫?！霸鰪奣細胞功能”意思是誘導、導致或刺激T細胞具有持續(xù)的或擴大的生物學功能，或恢復或重新激活衰竭的或失活的T細胞。增強T細胞功能的實例包括相對于介入之前的此類水平增加從CD8+T細胞的Y-干擾素的分泌、增加增殖、增加抗原應答性(例如，病毒或病原體清除)。在一個實施方案中，增強的水平是至少50 %，備選地60 %，70 %，80 %， 90 %，100 %，120 %，150 %，200 %。測量這種增強的方式是本領域普通技術人員已知的。"T細胞功能障礙病癥”是T細胞的病癥或狀態(tài)，其特征在于對抗原性刺激降低的應答性。在具體實施方案中，T細胞功能障礙病癥是與通過PD-I不適當增加的信號傳導特異性相關的病癥。在另一個實施方案中，T細胞功能障礙病癥是其中T細胞是無反應性的或具有降低的分泌細胞因子、增殖或執(zhí)行細胞溶解活動的能力的病癥。在一個具體方面中， 降低的應答性導致無效控制病原體或表達免疫原的腫瘤。以T細胞功能障礙為特征的T細胞功能障礙病癥的實例包括未解決的急性感染、慢性感染和腫瘤免疫?！奥愿腥尽笔侵高@樣的感染，其中傳染原(例如，病原體如病毒、細菌、原生動物寄生蟲、真菌或諸如此類)已經在感染的宿主中誘導了免疫應答，但尚未如在急性感染過程中一樣被從宿主中清除或消除。慢性感染可以是持續(xù)性的、潛伏性的或緩慢的。盡管急性感染典型地被免疫系統在數天或數周(如流感)內解決，持續(xù)性的感染可以相對低的水平持續(xù)數月、數年、數十年或一生(例如，乙型肝炎)。相比之下，潛伏性的感染的特征是長期的無癥狀活動，被一段時間的迅速增加的高度感染和升高的病原體水平不時打斷(例如單純皰疹)。最后，緩慢感染的特征是疾病癥狀的逐漸和連續(xù)增加，諸如長期的潛伏期，隨后在臨床癥狀出現后是延長的和進展的臨床過程開始。不像潛伏性的和持續(xù)性的感染，慢感染可以不以病毒增殖的急性期開始(例如，小RNA病毒感染(picornaviruses infection)、 綿羊髓鞘脫落病毒(visna virus)、瘙癢病(scrapie)、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease))。能夠誘導慢性感染的示例性傳染劑包括病毒(例如，巨細胞病毒、EB病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、單純皰疹病毒I型和II型、人免疫缺陷病毒1型和2型，人乳頭狀瘤病毒、人T淋巴細胞病毒1型和2型，水痘-帶狀皰疹病毒等等)，細菌(例如， 結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)，李斯特菌屬物種(Listeria spp·)，肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)，月市炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)，金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus)，疏螺旋體屬物種(Borrelia spp.)，幽門螺旋桿菌 (Helicobacter pylori)等等)，原生動物寄生蟲(例如，利什曼原蟲屬物種(Leishmania spp·)，惡性皰原蟲(Plasmodium falciparum)，血吸蟲屬物種(Schistosoma spp·)，弓形蟲屬物禾中(Toxoplasma spp.)，維蟲屬物禾中(Trypanosoma spp. ), Taenia carssiceps 等等)，和真菌(例如，曲霉屬物種(Aspergillus spp.)，白色念珠菌(Candida albicans)， 粗球孢子菌(Coccidioides immitis),夾膜組織胞菜菌(Histoplasma capsulatum), 卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)等等)。另外的傳染劑包括朊病毒或錯誤折疊的蛋白質，其通過在這些組織中進一步傳播蛋白錯誤折疊影響腦或神經元結構，導致形成淀粉樣蛋白斑(其導致細胞死亡、組織損傷和最終死亡)。由朊病毒感染導致的疾病的實 歹Ij包括3 氏病及禾中(Creutzfeldt—Jakob disease and its varieties),
Gerstmann-Straussler- Scheinker 綜合征(GSS) ( Gerstmann-Straussler-Scheinker
syndrome (GSQ)，致命性家族性失眠癥(sFI) (fatal familial insomnia (sFI))，庫魯病 (kuru)，瘙癢病(scrapie)，牛的牛海綿狀腦病(BSE)(又名“瘋?！辈?(Bovine spongiform encephalopathy (BSE) in cattle (aka "mad cow" disease)),以禾中云力 的腦病[例如，傳染性水貂腦病(TME) (transmissible mink enc印halopathy(TME))，白尾鹿(white-tailed deer)、麇鹿(elk)和騾鹿(mule deer)中慢性消耗性疾病(chronic wasting disease (CWD)),貓海綿狀腦病(feline spongiform encephalopathy),尼牙藪羚(nyala)、羚羊(oryx)和更大角羚(greater kudu)中的外來有蹄類腦病(EUE) (exotic ungulate encephalopathy (EUE)，1|它鳥白勺海腦病(spongiform encephalopathy of the ostrich)]0“腫瘤免疫”是指這樣的過程，其中腫瘤逃避免疫識別和清除。因此，作為治療概念，當所述逃避減弱時腫瘤免疫得到“治療”，腫瘤被免疫系統識別并攻擊。腫瘤識別的實例包括腫瘤結合、腫瘤收縮和腫瘤清除。"B7-負性共刺激拮抗劑” (“BNCA”)是這樣的試劑，其降低、阻斷、抑制、消除或干擾負性共刺激信號，所述負性共刺激信號由或通過由B7家族的成員介導的T淋巴細胞上表達的細胞表面蛋白介導。一方面，BNCA可單獨或與本發(fā)明的抗-PD-I抗體組合使功能障礙的T細胞變得無-功能障礙。另一方面，BNCA可以是這樣的試劑，其抑制B7-負性共刺激分子的核酸或蛋白合成、表達、信號傳導和/或表達后加工。又一方面，BNCA是抗體、結合抗原的抗體片段、BNCA寡肽、BNCA RNAi或BNCA小分子，其降低、阻斷、抑制、消除或干擾B7-負性共刺激分子的信號轉導。示例性B7負性共刺激分子包括CTLA-4，PD-Ll, PD-I, B7. 1 (Τ 細胞上表達的)，PD-L2，Β7-Η3和Β7-Η4。正性共刺激激動劑是這樣的分子，其增加、增強、增進或協助由或通過表達在T淋巴細胞上的細胞表面蛋白介導的共刺激信號。一方面，正性共刺激分子可以是激活正性共刺激途徑的細胞外結構域、可溶性構建體或激動性抗體。示例性正性共刺激分子包括Β7超家族分子，例如，Β7. 1，Β7. 2，CD28和IC0S/IC0SL。另外的實例包括TNFR家族共刺激分子，例如，0X40/0X40L, 41-BB/41-BBL, CD27/CD27L, CD30/CD30L 和 HVEM/LIGHT。“小分子”或“小有機分子”是具有低于大約500道爾頓(Daltons)的分子量的分子?！案蓴_RNA” “RNAi”是10-50個核苷酸長的減少靶基因表達的RNA，其中部分鏈足夠互補(例如，與靶基因具有至少80%的同一性)。RNA干擾的方法是指靶標特異性的抑制基因表達(即“基因沉默”)，發(fā)生在轉錄后水平(例如，翻譯)，并且包括RNA介導的基因表達抑制的所有轉錄后和轉錄機制，諸如以下描述的那些P. D. Zamore, kience (科學巡 1265(2002)和 Hannan 和 Rossi ,Nature (自然)431 :371-378(2004)。用于本文時，RNAi 可以是小干擾RNA (siRNA)、短發(fā)夾RNA (shRNA)和/或微小RNA (miRNA)的形式。此類RNAi分子常常是雙鏈RNA復合物，其能夠以分離互補或部分互補的RNA鏈的形式表達。設計雙鏈 RNA復合物的方法是本領域已知的。例如，在Sandy等，BioTechniques 39 =215-224(2005) 中可找到對合適的shRNA和siRNA的設計和合成?！靶「蓴_RNA”或siRNA是10-50個核苷酸長的減少靶基因表達的雙鏈RNA(dsRNA) 雙螺旋，其中第一條鏈的部分鏈足夠互補(例如，與靶基因具有至少80 %的同一性)。 siRNAs是特異性設計的以避免抗病毒應答，其特征是增加的干擾素合成、非特異性蛋白合成抑制和RNA降解，其常常導致哺乳動物細胞中與使用RNAi相關的細胞的自殺或死亡。 Paddison 等，Proc Natl Acad Sci USA 99(3) :1443-8. (2002).術語“發(fā)夾”是指7-20個核苷酸的成環(huán)RNA結構?！岸贪l(fā)夾RNA”或shRNA是10_50 個核苷酸長度的單鏈RNA，其特征是減少靶基因表達的發(fā)夾彎曲，其中RNA鏈部分足夠互補 (例如，與靶基因具有至少80%的同一性)。術語“莖-環(huán)”是指同一個分子堿基對的兩個區(qū)之間的配對以形成以短的未配對的環(huán)為末端的雙螺旋，產生棒糖形結構。“微小RNA”或“miRNA” (以前稱為stRNA)是大約10_70個核苷酸長度的單鏈 RNA,最初轉錄為以“莖-環(huán)”結構為特征的前-miRNA，其隨后在通過RNA誘導的沉默復合物 (RISC)進一步加工后加工為成熟miRNA。"BNCA干擾RNA”或“BNCA RNAi”結合(優(yōu)選特異性結合)BNCA核酸并降低其表達。這意味著存在BNCA RNAi時的B7負性共刺激分子的表達與對照(其中不存在BNCA RNAi)中的B7負性共刺激分子的表達相比更低。BNCA RNAi可使用已知的方法鑒定和合成(Shi Y.，Trends in Genetics 19(1) :9-12 (2003)，W02003056012, W02003064621, W02001/075164, W02002/044321。"BNCA寡肽”是結合，優(yōu)選特異性結合B7負性共刺激多肽的寡肽，分別包括如本文所描述的受體，配體或信號傳導組分。此類寡肽可使用已知的寡肽合成方法化學合成或可使用重組技術制備和純化。此類寡肽通常至少大約5個氨基酸長，備選地至少大約6， 7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32， 33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57， 58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82， 83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或 100 個氨基酸的長度或更長。此類寡肽可使用已知的技術不經過過度實驗進行鑒定。在這一方面，注意為獲得能夠特異性結合多肽靶標的寡肽而篩選寡肽文庫的技術是本領域熟知的(參見，例如，美國專利號 5，556，762，5，750，373，4，708，871，4，833，092，5，223，409，5，403，484，5，571，689，5，663，143 ；PCT
發(fā)明者亨利·丘, 吳巖, 布里安·歐文, 希瑟·梅克爾, 桑吉·馬里亞塔桑, 珍妮·張, 蘇菲·M·萊哈爾 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司