專利名稱：口服組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種口服組合物，當(dāng)口服時，其可以對皮膚有益，并涉及活性化合物的組合的用途。
背景技術(shù)：
改善人皮膚的外觀和感覺已經(jīng)進(jìn)行了許多研究工作。但是，大多數(shù)的商業(yè)上可買到的產(chǎn)品是通過作用于皮膚的外部來解決這問題。這些當(dāng)中最常見的形式是外用護(hù)膚霜。 但是，這樣的局部施用具有它們的局限性，并且主要針對皮膚的死表面層進(jìn)行處理。已知通過攝取某些組分可以提供改善皮膚的外觀和紋理。因此，這樣的組分是從皮膚的內(nèi)部起作用，因此可以通過進(jìn)入活體內(nèi)部提供更大的可能性來改善皮膚。此外，這種效果可以被公眾所感受到，在本質(zhì)上比局部施用更有效或有醫(yī)療效果。我們的共同在審的國際申請?zhí)朠CT/EP2005/011658涉及穩(wěn)定的可消費的乳狀液。EP 1 640 001涉及一種口服使用的治療性混合物，其包括維生素、大豆衍生物和多酚。該混合物可以用來治療心血管疾病。US 2003/0138531涉及用于食物及飲料的粉末組合物，其包括大豆蛋白分離物和花色素苷(anthocyanin)。大豆蛋白按重量計算占粉末混合物的50到95 %，和花色素苷 (anthocyanin)組分按重量計算占4到49%。粉末主要是用于溶解或者懸浮在液體中以形成果味飲料。US 6 423 365描述了一種櫻桃衍生組合物的制備方法，其可以用作食品添加劑或者食物補充劑。該組合物包含花色素苷(anthocyanin)、生物類黃酮(bioflavinoids)和酚類化合物，包括黃豆苷原。EP 1 629 723公開了一種功能性食品，包含大豆粉和含木酚素(Iignan)的黑麥糠(rye bran)，添加起香味作用的組分，如干的越桔(lingonberries)或者歐洲越桔 (bilberries)。包含大豆蛋白和野生越桔(lingonberries)組分的制劑公開在Potter等 (LffT 40，807-814 (2007)中。US 2006/0078533A1公開了一種預(yù)防和治療老化和年齡相關(guān)疾病的方法，基于通過調(diào)節(jié)膽固醇(cholesterol)新陳代謝、類異戊二烯(isoprenoid)消耗和/或抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道來抑制白介素_6炎癥。US 2007/0116779A1公開了一種設(shè)計用來拮抗對發(fā)生在Parkinson病的變性過程特異性的主要緩和因子的保健品。WO 2006/024545A1公開了至少兩種化合物用于制備藥物、醫(yī)用食物或者保健品的用途，其中第一個化合物是具有特定通式的天然化合物，確定為PARP-I抑制劑，和第二個化合物是NAD+前體。WO 2005/092121A2公開了一種包含水果或者植物材料(plant material)的全部的必需營養(yǎng)素的組合物，其具有增加的穩(wěn)定性、生物利用度和可混性，及其制備方法。US 2002/0068121A1 公開了槲皮酮(quercetin)和異黃酮(isoflavone)的混合物，異黃酮(isoflavone)選自染料木黃酮(genistein)、黃豆苷原和glycetin，當(dāng)用作抗炎劑或特別用于抗衰老目的的皮膚制劑時顯示出協(xié)同效應(yīng)。Huang等(International J. of Pharmaceutics, 364，36-44 (2008))評價了大豆異黃酮(isoflavone)的皮膚吸收的可行性。Wang 等(Life Sciences，83，176-184 (2008))公開了 THP-1 巨噬細(xì)胞用矢車菊色素-3-0-β-糖苷進(jìn)行預(yù)處理12小時可以提高核受體過氧化物酶體增殖物激活受體和肝X 受體α的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性。仍需要口服給藥的組合物，其具有用于賦予消費者的皮膚益處的改進(jìn)性能。

發(fā)明內(nèi)容
在第一方面，本發(fā)明提供一種適宜口服的、包含黃豆苷原(daidzein)和花色素 (anthocyanidin)的組合物，其中黃豆苷原與花色素的重量比在1 1到1 100的范圍之內(nèi)，其中黃豆苷原以預(yù)制備水分散液的形式存在，并且其中組合物不含大豆蛋白。這種組合物可以提供在皮膚中的抗炎效果。已經(jīng)注意到如果黃豆苷原不是預(yù)制備水分散液的形式，黃豆苷原可能會有沉淀 (sediment)或凝團(tuán)(clump)的趨勢，這將妨礙黃豆苷原在消化道(gut)中的吸收。接著，這將不利地影響如在實施例中舉例說明的所觀察到的有益效果。本發(fā)明組合物是一種口服組合物，即它適宜口服。因而，該組合物是可食用且無毒的。在第二方面，本發(fā)明提供黃豆苷原和矢車菊色素(cyanidin)在制備適宜口服、用于在皮膚中獲得抗炎效果的組合物中的用途。在第二方面的另一個實施方案中，提供一種組合物，該組合物包含黃豆苷原和矢車菊色素，用于在皮膚中獲得抗炎效果。在本發(fā)明的第三方面，提供黃豆苷原和矢車菊色素在制備適宜口服、用于治療粉刺的組合物中的用途。第三方面的另一個實施方案中，提供一種組合物，該組合物包含黃豆苷原和矢車菊色素，用于治療粉刺。在本發(fā)明的第四方面，提供一種減少皮膚炎癥的方法，其包括向需要其的受試者提供本發(fā)明組合物。在本發(fā)明的第五方面，提供一種治療粉刺的方法，其包括向需要其的受試者提供本發(fā)明組合物。本發(fā)明的第二到第五方面，黃豆苷原的日劑量至多l(xiāng)OOmg，優(yōu)選地從1到lOOmg，最優(yōu)選地從10到50mg，和花色素的日劑量至多l(xiāng)OOOmg，優(yōu)選地從10到lOOOmg，最優(yōu)選地從 50 至Ij 750mg。本發(fā)明的第六方面，提供了一種制造依照第一個方面的組合物的方法，該方法包括以下步驟 (a)在40-95、優(yōu)選地50_85°C制備黃豆苷原在水中的分散液，靜置至少5、優(yōu)選地至少10、最優(yōu)選地至少15分鐘，從而制得預(yù)制備黃豆苷原水分散液；然后(b)將矢車菊色素和任何其他的水溶性組分加入到預(yù)制備黃豆苷原水分散液，從而制得水相；(c)任選地在油中溶解任何油溶性組分，從而制得油相；
(d)任選地混合水相和油相，從而制得乳狀液；其中步驟(C)可以在步驟(a)之前。本發(fā)明是基于驚奇地發(fā)現(xiàn)黃豆苷原和花色素苷(anthocyanin)之間的協(xié)同效應(yīng)。因此，本發(fā)明組合物包含黃豆苷原和花色素，其在1 1至1 100的范圍內(nèi)，更有代表性的范圍是從1 1到1 50，經(jīng)常1 1到1 20，合宜地1 1到1 15，優(yōu)選地 1 1 至Ij 1 10。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物是基本上均相的水乳狀液、懸浮液或者分散液的形式。適合的花色素包括化合物，比如aurantindin、花青苷(cyanin)、矢車菊色素、飛燕草色素(delphinidin)、europindin、luteolindin、天竺葵色素(pelargonidin)、錦葵色素(malvidin)、甲基花青素(peonidin)、矮牽牛素(petunidin)、越桔色苷(idaein)、花青素鼠李葡糖苷(keracyanin)、紫菀苷(asterin)和rosindin。特別優(yōu)選的花色素是矢車菊色素，一種天然有機化合物，其歸為類黃酮(flavonoid)。除非另有說明，術(shù)語“花色素”意欲包括不僅花色素化合物本身，而且包括有關(guān)的花色素苷(anthocyanin)衍生物，比如糖苷(glucoside)、蘆丁糖苷(rutinoside)和槐糖苷 (sophoroside)。相應(yīng)地，作為“花色素”組分，本發(fā)明組合物可以包括矢車菊色素、花青苷、越桔色苷(idaein)、花青素鼠李葡糖苷(keracyanin)、紫菀苷(asterin)及其衍生物中的一種或多種，或者單獨或者組合。有代表性地，矢車菊色素本身單獨或者與一種或多種其他的花色素類化合物組合存在。經(jīng)常地，當(dāng)存在矢車菊色素時，化合物花青苷、越桔色苷(idaein)、花青素鼠李葡糖苷(keracyanin)、紫菀苷(asterin)和它們的衍生物僅僅以痕量存在，這對于物質(zhì)的天然植物提取物來說是常見的。例如，按組合物的矢車菊色素組分的重量計算，相關(guān)的化合物可以以小于1 %，優(yōu)選地小于0. 2%，經(jīng)常地小于0. 05%，更經(jīng)常地小于0. 01 % 存在。優(yōu)選地，在矢車菊色素與其他的花色素化合物組合存在時，矢車菊色素按花色素組分的重量計算以大于50%，優(yōu)選地大于75%存在。本發(fā)明組合物優(yōu)選地包含花色素，其含量按重量計算從0. 0001到0. 1%，更優(yōu)選地從0. 001到0. 05%,甚至更優(yōu)選地從0. 005到0. 04%,最優(yōu)選地從0. 005到0. 025%,比如從0.01到0.025%。經(jīng)常地，矢車菊色素的濃度將是0.001到5μΜ，優(yōu)選地從0.01到 1. 5 μ Μ，更優(yōu)選地從0. 5到1. 2 μ Μ，最優(yōu)選地0. 8到1. 2 μ Μ。包括矢車菊色素的花色素是在許多紅漿果(red berries)中存在的顏料，包括但不限于歐洲越桔(bilberries)、黑莓(blackberry)、越桔(Iingonberries)、櫻杉匕(cherry)、蔓越毒(cranberry)、接骨木果(elderberry)、山植(hawthorn)、羅甘奪 (loganberry)、阿薩伊漿果(acai berry)和覆盆子(raspberry)。它們還可以存在于其他水果如蘋果和李子中。最高濃度的花色素存在于水果的皮中。黃豆苷原是一種在大豆和紅三葉草(red clover)中存在的異黃酮 (isoflavone)。除非另有說明，術(shù)語“黃豆苷原”意欲不僅包括黃豆苷原，還包括代謝物，例如ο-去甲安哥拉紫擅素(o-desmethylangolensin)禾口二氧黃豆昔原(dihydrodaidzein) 及其衍生物，或者單獨存在或者組合。有代表性地，黃豆苷原本身單獨存在或者與一種或多種衍生物或者代謝物組合存在。經(jīng)常地，當(dāng)存在黃豆苷原時，代謝物或者衍生物僅僅以痕量存在，這對于物質(zhì)的天然植物提取物來說是常見的。例如，按組合物的黃豆苷原組分的重量計算，衍生物可以以小 于1 %，優(yōu)選地小于0. 2%，經(jīng)常地小于0. 05%，更經(jīng)常地小于0. 01 % 存在。優(yōu)選地，在黃豆苷原與黃豆苷原衍生物或者代謝物組合存在的情況下，按組合物的黃豆苷原組分的重量計算，黃豆苷原以大于50%，優(yōu)選地大于75%存在。本發(fā)明組合物優(yōu)選地包含黃豆苷原，其含量從0. 0001到0. 1 %，更優(yōu)選地從0. 001 到0. 05%,甚至更優(yōu)選地從0. 005到0. 04%,最優(yōu)選地從0. 005到0. 025%，比如從0. 01到 0. 025%，按組合物的重量計算。經(jīng)常地，組合物中的黃豆苷原的濃度范圍從0. 001到5μΜ， 優(yōu)選地從0. 01到1. 5 μ Μ,更優(yōu)選地從0. 5到1. 2 μ Μ，最優(yōu)選地從0. 8到1. 2 μ Μ。優(yōu)選地，黃豆苷原以天然產(chǎn)物或其提取物或濃縮物的組分的形式存在。天然產(chǎn)物優(yōu)選地是大豆或者紅三葉草(red clover)，更優(yōu)選大豆。黃豆苷原，當(dāng)它來自于大豆，優(yōu)選地通過除去大豆蛋白來提純至少到一定程度。因此，本發(fā)明組合物優(yōu)選地包含按重量計算小于1 %、更優(yōu)選地小于0. 5 %、甚至更優(yōu)選地小于0. 1 %，比如小于0. 01 %或者小于 0. 001%或者小于0. 0001%的大豆蛋白。組合物優(yōu)選地包含一種或多種其他組分，其選自抗氧化劑、調(diào)味劑、防腐劑和穩(wěn)定劑。本發(fā)明組合物可以采用任何適當(dāng)?shù)男问?，包括，例如食物制品和營養(yǎng)補充劑?？诜慕M合物包括飲料、棒(bars)及其他液體和固體形式，比如片劑、丸劑、膠囊和粉末(其可以包含結(jié)晶物質(zhì))，以及涂抹食品(spreads)、人造黃油、奶油、沙司、調(diào)味品、蛋黃醬、冰淇淋、餡料(fillings)、糖果和谷物。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，組合物是可食用的并且優(yōu)選地是水基的，即包含按重量計算至少50 %、優(yōu)選地按重量計算至少60 %或乃至按重量計算至少70 %的水。水可以是加入的，或者可以來源于包含黃豆苷原和/或花色素苷(anthocyanin)的天然產(chǎn)物。 它可以是液體或凍結(jié)的。因此，產(chǎn)品具有常規(guī)水基產(chǎn)品的感覺，并可以作為消費者的正常飲食的一部分定期消費。例如它可以代替在早餐時間常規(guī)消費的果汁。本發(fā)明組合物優(yōu)選地包裝成飲料，例如裝在一種容器中，比如硬紙盒(carton)或者涂布紙(coated paper)或紙板(cardboard)、玻璃或塑料的瓶。容器的容量優(yōu)選地從10到500ml，比如從20到100ml。在備選的實施方案中，本發(fā)明組合物被裝在膠囊中，與告知使用者推薦劑量方案的說明書一起提供。有代表性地，黃豆苷原和/或花色素苷(anthocyanin)將于是是更加濃縮的形式。膠囊可以是由任何適當(dāng)?shù)谋绢I(lǐng)域公知的材料制成，例如明膠。膠囊適合于消費者吞服，并且典型地將服用一或兩個膠囊，每天1至4次。每個膠囊優(yōu)選地包含從0. 1到1000 毫克的黃豆苷原，典型地從5到100毫克，經(jīng)常地從20到50毫克?；ㄉ剀?anthocyanin) 典型地以0. 1到1000毫克，備選地5到100毫克和優(yōu)選地20到50毫克存在。備選地，本發(fā)明組合物可以作為復(fù)合食品的一種組分被包含，例如組合物可以以固體或者膠凝的形式存在，作為棒或類似產(chǎn)品中的陷料或者層。因此，組合物可以被包括在大量日常食品中，例如在“健康食品”棒中，其可以作為其他快餐食物的代替物被食用。為了阻止或者減慢組合物的自然氧化降解，一種或多種附加的抗氧化劑優(yōu)選地存在于本發(fā)明組合物中。適合的附加的抗氧化劑，雖然不排他地，可以選自下面的目錄，或者單獨或者組合TBHQ、抗壞血酸酯(例如抗壞血酸棕櫚酸酯)、抗壞血酸、生育酚類、迷迭香提取物、水果濃縮物或者提取物、紅茶或者綠茶提取物、沒食子酸丙酯、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、檸檬酸或酯、生育三烯酚類、多酚類、酚類化合物、類黃酮(flavonoids)和除氧劑。特別優(yōu)選的附加的抗氧化劑是維生素C和E。這些不僅是有效的抗氧化劑，而且當(dāng)使用時它們已經(jīng)顯示出提供了皮膚益處。附加的抗氧化劑的量可以加入到足夠防止組合物在至少6個月的標(biāo)準(zhǔn)的貯藏期限內(nèi)變腐敗。顯然地，抗氧化劑的量將取決于所使用的抗氧化劑的類型和活性。本發(fā)明組合物可以包含調(diào)味料，不過如果黃豆苷原或者花色素由調(diào)味物質(zhì)如果汁提供的話，調(diào)味料的添加可能是不必需的。適合的調(diào)味劑可以是天然的或者合成的。調(diào)味劑可能是需要的以便使產(chǎn)品在消費時更可口。組合物可以包含乳化劑，更優(yōu)選地食品級磷脂(phospholipid)乳化劑。優(yōu)選地， 磷脂乳化劑是卵磷脂。磷脂乳化劑是油溶性的，但卵磷脂可以在乳化之前添加到任一相中。 優(yōu)選地，它被加入到水相。優(yōu)選地，按重量計算，任何乳化劑以至少0. 01%，優(yōu)選地從0. 05 到3 %，更優(yōu)選地從0. 1到1 %的量存在于組合物中。本發(fā)明組合物可以包含多不飽和脂肪酸，比如ω-3脂肪酸(即具有12到26 個碳原子的不飽和羧酸)。優(yōu)選的ω-3脂肪酸是選自二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)及其混合物。適合的多不飽和脂肪酸還可以選自油酸(oleic acid)、亞油酸(linoleic acid)、Y -亞油酸、亞麻酸(linolenic acid)、花生四烯酸(arachidonic acid)。多不飽和脂肪酸可以以天然油如魚油的組分的形式存在。組合物還可能包含類胡蘿卜素(carotenoid)，比如含量按重量計算在0. 0005到 0. 1%，例如從0.002到0.04%。類胡蘿卜素，是油溶性的，主要被包括在油相中。高度優(yōu)選的類胡蘿卜素是胡蘿卜素(carotene)和番茄紅素(lycopene)。這些類胡蘿卜素提供適度的保護(hù)，避免紫外線引起的紅斑，這認(rèn)為是由于它們的抗氧化性能，包括清除反應(yīng)性氧物質(zhì)。組合物還可能包含附加的大豆異黃酮(isoflavone)(包括糖基化 (glycosylated)和/或非糖基化形式的染料木黃酮(genistein))，典型地，含量按重量計算是從0. 0001到0. 1%ο本發(fā)明組合物可以通過制備水相和油相來制成。首先，黃豆苷原的水分散液是在 75攝氏度下制備，并靜置約15分鐘，接著其余的水溶性組分加入預(yù)制備分散液中，并且油溶性組分放進(jìn)油相。如果使用乳化劑，優(yōu)選地將它加入水相。然后將油相和水相混合以制得乳狀液。在優(yōu)選的過程中，油是在粉末載體材料上以幫助乳狀液形成。乳狀液可以然后包裝在密封容器如金屬、涂布紙板(例如Tetra Pak)或者塑料容器中。接著，優(yōu)選地，密封容器以使沒有頂空(headspace)或者提供氣體填充的(例如氮氣或二氧化碳)頂空。這有助于更進(jìn)一步阻止氧化。備選地，乳狀液可以被冷凍和包裝，并以冷凍消費產(chǎn)品的形式銷售。本發(fā)明的第六方面所用的油可以選自棕櫚油、可可油、椰子油、棕櫚仁油、大豆油 (soy bean oil)、橄欖油、向日葵油、菜籽油、紅花油、玉米油、棉籽油、可可油等價物、可可油替代物、魚油、琉璃苣油、松子油、芫荽油、真菌油(fungal oils)、其餾分物、其硬化物質(zhì)、 硬化物質(zhì)的餾分物及其混合物。皮膚中的抗炎效果的益處包括以下中的一個或多個抗老化效應(yīng)降低的干燥度；增加的堅固性(firmness)；增加的彈性；減少的細(xì)紋和皺紋；較少的斑點、丘疹和瑕疵 (包括粉刺)；更清潔的皮膚；較小敏感性的皮膚；及一般地更健康的皮膚。皮膚可以包括全身的皮膚，優(yōu)選地臉、頸和/或手的皮膚。皮膚還可以包括頭皮，具有對頭發(fā)(包括減緩老化)和頭皮癢或者刺激的益處。本發(fā)明組合物優(yōu)選地用于其抗老化和/或抗皺紋效果。 消費者的皮膚可以描述為平滑和/或清潔和/或無瑕疵。以下非限制性實施例舉例說明本發(fā)明，無論如何不限制它的范圍。在實施例以及說明書通篇中，全部的百分比、份數(shù)和比例，如非特別指出均是以重量計。更進(jìn)一步，全部的百分比、重量和比例均采用術(shù)語“大約”來修飾，除非另作說明。為避免疑惑，除非另有說明， 這里描述的本發(fā)明組合物的所有組分均可以以任何組合的方式使用。


本發(fā)明現(xiàn)參考以下附圖進(jìn)行說明圖1組合物中矢車菊色素和黃豆苷原組合的每μ g蛋白質(zhì)的pg PGE2 ；圖2組合物中矢車菊色素和黃豆苷原組合的每μ g蛋白質(zhì)的ng IL6 ；及圖3組合物中矢車菊色素和染料木黃酮(genistein)組合的每Pg蛋白質(zhì)的 ngIL60
實施例在大豆異黃酮(isoflavone)(黃豆苷原)和花色素苷(anthocyanin)(矢車菊色素)之間在人原發(fā)性真皮成纖維細(xì)胞中的抗炎的協(xié)同效應(yīng)。細(xì)胞制備建立一個體外模型用于研究氧化性應(yīng)激對源自皮膚的原發(fā)性真皮成纖維細(xì)胞的炎癥狀況的影響(利用PGE2和IL6作為皮膚炎癥的主要標(biāo)記)。細(xì)胞采用下面方式制備a.細(xì)胞在6孔(9. 5cm2)板中生長；b.測試溶液在Dulbecco的改良fegle培養(yǎng)基(DMEM)中制備；c.用1 μ M的佛波醇豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)將細(xì)胞氧化應(yīng)激(oxidatively stressed)；d.在PMA處理后M小時(t24)收集組織培養(yǎng)上清液和細(xì)胞團(tuán)(cell pellet)；和e.對所有組織培養(yǎng)上清液分析乳酸脫氫酶(LDH)，作為細(xì)胞毒性(見下文)、PGE2 和IL6合成的量度。細(xì)胞毒性測定(Promega)對所有組織培養(yǎng)上清液檢查細(xì)胞毒性，采用!Iomega CytoTox 96非放射性的細(xì)胞毒性測定。該測定定量地測量細(xì)胞溶菌時釋放的LDH，并且是細(xì)胞活力的良好指示。50yL 組織培養(yǎng)上清液或者對照培養(yǎng)基加入到96孔微滴定度板的復(fù)制孔(duplicate wells)中。 50 μ L CytoTox試劑加入到各個孔中并徹底混合。板在暗處在室溫下培養(yǎng)30分鐘，其后 50 μ L停止溶液加入到各個孔，在492nm處讀板。吸光度水平大于對照培養(yǎng)基的吸光度的兩倍的任何試驗樣品被認(rèn)為是具有細(xì)胞毒性。從樣品中總結(jié)出的結(jié)果都沒有顯示出任何細(xì)胞毒性的跡象。IL6ELISA(R&D Systems)每個組織培養(yǎng)上清液的IL6蛋白質(zhì)的濃度用QuantGlo Q6000 Human IL6測定法 (R&D Systems)并依照該廠家的使用說明進(jìn)行測定。在從O到3000pg/ml的濃度下，在校準(zhǔn)器稀釋劑中制備6個IL6標(biāo)準(zhǔn)品。50 μ L的測定稀釋劑和150 μ L的組織培養(yǎng)上清液或者標(biāo)準(zhǔn)品加入復(fù)制孔。板在室溫下，在水平軌道板搖床上培養(yǎng)兩小時，然后用清洗緩沖液沖洗4次。200 μ L IL6結(jié)合物加入每個孔中，板在水平軌道板搖床上培養(yǎng)三小時。如前所述將板沖洗。每個孔得到200 μ L底物溶液，板在室溫下在工作臺頂部(bench top)培養(yǎng)40分鐘。每個孔的相對光單位(RLU)用光度計測定， 設(shè)置一分鐘延遲時間，1秒/孔讀取時間，求和模式并自動獲得。繪制平均RLU對IL6濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并回歸分析計算最佳擬合線。所有樣品中未知的IL6蛋白質(zhì)的濃度由此估算。PGE2 高靈敏度 ELISA(R&D Systems)每個組織培養(yǎng)上清液的PGE2蛋白質(zhì)的濃度用DE2100 Human PGE2測定法(R&D Systems)并依照該廠家的使用說明進(jìn)行測定。在從0到1000pg/ml的濃度下，在校準(zhǔn)器稀釋劑中制備8個PGE2標(biāo)準(zhǔn)品。150 μ L 測定稀釋劑和50 μ L組織培養(yǎng)上清液或者標(biāo)準(zhǔn)品加入復(fù)制孔中。50 μ LPGE2HS抗體溶液加入到每個孔中，板在2-8°C下培養(yǎng)18- 小時。然后用清洗緩沖液沖洗板四次。200yL磷酸ρ-硝基苯酯(pNPP)底物加入到每個孔中，板在室溫下培養(yǎng)一小時。然后50yL停止溶液被加入到每個孔中。每個孔的光密度用設(shè)定為405nm的微板讀取器測定，波長修正設(shè)定在570nm和590nm之間。繪制平均光密度對PGE2濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并回歸分析計算最佳擬合線。所有樣品中未知的PGE2蛋白質(zhì)的濃度由此估算。材料染料木黃酮(genistein)和黃豆苷原來自Sigma Aldrich,矢車菊色素 (cyaniding) | Chromadex 導(dǎo)。MM結(jié)果顯示在附圖中，其中圖1 組合物中矢車菊色素和黃豆苷原結(jié)合的協(xié)同抗炎效果(PGE2)；圖2 組合物中矢車菊色素和黃豆苷原結(jié)合的協(xié)同抗炎效果(IL6)；和圖3 組合物中矢車菊色素和染料木黃酮(genistein)結(jié)合的非協(xié)同抗炎效果 (IL6)。
權(quán)利要求
1.一種適宜口服的包含黃豆苷原和花色素的組合物，其中黃豆苷原與花色素的重量比在1 1到1 100的范圍之內(nèi)，其中黃豆苷原以預(yù)制備水分散液的形式存在，并且其中組合物不含大豆蛋白。
2.前述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中黃豆苷原與花色素的比例范圍為1 1 至Ij 1 15。
3.權(quán)利要求1所述的組合物，其是以基本上均相的水乳狀液、懸浮液或者分散液的形式存在。
4.權(quán)利要求1或者權(quán)利要求2所述的組合物，其中花色素選自aurantindin、矢車菊色素、飛燕草色素、europindin, luteolindin、天竺葵色素、錦葵色素、甲基花青素、矮牽牛素、 越桔色苷、花青素鼠李葡糖苷、紫菀苷和rosindin及其混合物。
5.權(quán)利要求4所述的組合物，其中花色素是矢車菊色素。
6.前述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中黃豆苷原和/或花色素以天然產(chǎn)物或者它的提取物或者濃縮物的組分的形式存在。
7.權(quán)利要求6所述的組合物，其中天然產(chǎn)物是植物材料。
8.權(quán)利要求6或者權(quán)利要求7所述的組合物，其中天然產(chǎn)物選自大豆、紅三葉草和紅漿^ ο
9.權(quán)利要求8所述的組合物，其中天然產(chǎn)物是大豆和蔓越莓。
10.前述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其包含一種或多種選自抗氧化劑、調(diào)味劑、 防腐劑和穩(wěn)定劑的其它組分。
11.前述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其被包裝成飲料。
12.黃豆苷原和矢車菊色素在制備適宜口服、用以獲得皮膚中的抗炎效果的組合物中的用途。
13.黃豆苷原和矢車菊色素在制備適宜口服、用以治療粉刺的組合物中的用途。
14.權(quán)利要求12或者權(quán)利要求13所述的用途，其中黃豆苷原與矢車菊色素的重量比在從1 1到1 100的范圍之內(nèi)。
15.一種用于獲得皮膚中的抗炎效果的包含黃豆苷原和矢車菊色素的組合物。
16.一種用于治療粉刺的包含黃豆苷原和矢車菊色素的組合物。
17.依照權(quán)利要求15或者權(quán)利要求16所述的組合物，其中黃豆苷原與矢車菊色素的重量比在從1 1到1 100的范圍之內(nèi)。
18.一種減少皮膚炎癥的方法，其包括提供依照權(quán)利要求1-11任一項所述的組合物給需要其的受試者。
19.一種治療粉刺的方法，其包括提供依照權(quán)利要求1-11任一項所述的組合物給需要其的受試者。
20.依照權(quán)利要求18或者權(quán)利要求19所述的方法，其中黃豆苷原的日劑量至多 IOOmg,優(yōu)選地從1到lOOmg，最優(yōu)選地從10到50mg，和花色素的日劑量至多l(xiāng)OOOmg，優(yōu)選地從10到lOOOmg，最優(yōu)選地從50到750mg。
21.制備依照權(quán)利要求1-11任一項所述的組合物的方法，該方法包括以下步驟(a)在40-95、優(yōu)選地50-85°C制備黃豆苷原在水中的分散液并且靜置至少5、優(yōu)選地至少10、最優(yōu)選地至少15分鐘，從而制得預(yù)制備黃豆苷原水分散液；然后(b)將矢車菊色素和任何其他的水溶性組分加入到預(yù)制備黃豆苷原水分散液中，從而制得水相；(C)任選地在油中溶解任何油溶性組分，從而制得油相； (d)任選地混合水 相和油相，從而制得乳狀液； 其中步驟(c)可以在步驟(a)之前。
全文摘要
一種適宜口服的包含黃豆苷原和花色素的組合物，其中黃豆苷原與花色素的重量比在1∶1到1∶100的范圍之內(nèi)，其中黃豆苷原以預(yù)制備水分散液的形式存在，并且其中組合物不含大豆蛋白，其可以在皮膚中顯示出抗炎效果，包含黃豆苷原和花色素的組合物用于獲得在皮膚中的抗炎效果的用途，和一種通過口服所述組合物以減少皮膚炎癥的方法。
文檔編號A61P17/00GK102245177SQ200980149946
公開日2011年11月16日 申請日期2009年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月11日
發(fā)明者G·詹金斯, J·凱西, L·J·萬賴特 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司