專利名稱：由骨粉和纖維蛋白膠制成的固體骨架的制作方法
由骨粉和纖維蛋白膠制成的固體骨架
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于骨再生的骨架以及制備該骨架的方法，更特別地涉及一種包括纖維蛋白膠、與纖維蛋白膠混合的骨粉以及用于容納促骨生長素的多個(gè)小孔的骨再生骨架，其中所述骨架具有預(yù)先確定的凝結(jié)形狀。
背景技術(shù)：
骨組織工程學(xué)的目的是通過在需要骨頭的位置移植骨原細(xì)胞來誘導(dǎo)骨再生以及發(fā)育骨組織。這種組織工程需要骨原細(xì)胞、骨原細(xì)胞所附接的用以存活的骨架以及用于促使骨誘導(dǎo)以及異化骨再生的生長因子。當(dāng)給部件賦予刺激物同時(shí)保持適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和環(huán)境， 各自的部件會(huì)形成骨組織。因此，有很多的為每個(gè)部件尋找理想因子的研究。特別地，骨傳導(dǎo)材料(例如用于形成骨頭的骨架)對(duì)于骨原細(xì)胞的寄生是很重要的。類似于骨礦物質(zhì)中材料的骨傳導(dǎo)材料應(yīng)該是生物相適的，并且提供與骨周圍環(huán)境接近的表面反應(yīng)以及物理支持。各種骨傳導(dǎo)材料(例如陶瓷、膠原質(zhì)、生物分解的聚合體等)已經(jīng)被研究。Takahashi等人報(bào)道了使用多孔滲水羥磷灰石(HA)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)的骨結(jié)合(Takahashi K 等人，J Biomed Master Res A12 :117_123，2007) ,Asahina 等人報(bào)道了使用HA、膠原質(zhì)、牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白等(Asahina I等人，J Med dent Sci. 44 =63-69,1997), Ohgushi 等人報(bào)道了使用陶瓷骨架(Ohgushi H 等人，J Biomed Mat Res 26 :885-95,1992 ； OhgushiH 等人，J Biomed Mat Res 32 :341_8，1996)，以及 Caplan 等人報(bào)道了使用多孔滲水磷酸鈣等(CaplanAI. J Cell Physiol 213(2) :341-347,2007) 另外，歐洲專利第1231947號(hào)公開了骨替換材料，其包括(a)由纖維蛋白或纖維蛋白原組成的軟基質(zhì)、(b)活細(xì)胞以及(c)由非陶瓷羥磷灰石膠結(jié)材料組成的固定基質(zhì)。另外，日本專利申請(qǐng)第1999-513590號(hào)提出了一種生物可降解的、多孔滲水三維骨移植基質(zhì)，其包括由礦物化膠原質(zhì)形成的并且顆粒尺寸為5μπι或更銷的磷酸鈣微粒，磷酸鈣微粒被固定在基質(zhì)上。另外，美國專利公開號(hào)為2008-02132 的專利申請(qǐng)文件公開了一種用于生產(chǎn)纖維蛋白的方法，這種蛋白纖維含有治療骨折的半固態(tài)造骨細(xì)胞成分，所述方法包括隔離造骨細(xì)胞與動(dòng)物的骨組織、在Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基或(DMEM)中或α -MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)/增殖被隔離的造骨細(xì)胞以制備造骨細(xì)胞懸浮液、以及混合造骨細(xì)胞懸浮液和半固態(tài)造骨細(xì)胞凝結(jié)素。但是，傳統(tǒng)的骨架不能用于活造骨細(xì)胞生長的介質(zhì)。另外，當(dāng)骨架在骨缺陷區(qū)域內(nèi)被嫁接時(shí)，其形狀和強(qiáng)度不能被保持并且在治療過程中不能被穩(wěn)定地保持，這會(huì)導(dǎo)致很差的骨再生效率。公開內(nèi)容技術(shù)問題本發(fā)明努力研制一種能克服上述問題的骨架，并且發(fā)現(xiàn)通過混合纖維蛋白膠和骨粉以及冷干上述混合物所獲得的固態(tài)骨架在活的有機(jī)體內(nèi)是穩(wěn)定的、能夠保持在骨再造過程中持續(xù)放置細(xì)胞的空間、以及即使在活的有機(jī)體環(huán)境中能維持其適當(dāng)?shù)男螤詈蛷?qiáng)度，借此能誘導(dǎo)快速的骨再生。因此，本發(fā)明是基于這些事實(shí)來被實(shí)現(xiàn)的。另外，通過混合纖維蛋白膠和骨粉之后的冷干過程，在混合物中能形成大量的小孔，借此改進(jìn)促骨再生素的吸收和維持。另外，本發(fā)明骨架可在具有預(yù)定期望形狀的鑄模中被冷干從而具有期望的形狀。 該有益效果是提供一種適于在骨缺陷區(qū)域內(nèi)使用的骨架。結(jié)合最近的3D掃描技術(shù)，可在患者體能準(zhǔn)確地確定骨缺陷區(qū)域并且再生骨架的形狀，并且因此能改進(jìn)本發(fā)明的使用。因此，本發(fā)明的目的是提供一種用于故再生的固體骨架，其中骨粉與纖維蛋白膠混合，纖維蛋白膠包括作為主要成分的纖維蛋白原和凝血酶。更特別地，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于骨再生的混凝骨架，其中通過混合骨粉和包含作為主要成分的纖維蛋白原和凝血酶的纖維蛋白膠以及冷干合成的混合物以形成多個(gè)小孔從而容納促骨生長素。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種具有期望形狀的骨架，這種骨架通過將纖維蛋白和骨粉的混合物放入具有預(yù)定形狀的鑄模內(nèi)并且冷干所述混合物來獲得。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種為患者定制的骨架，這種骨架通過使用3D數(shù)字掃描技術(shù)來制備與患者的骨缺陷區(qū)域相應(yīng)的鑄模、將纖維蛋白膠與骨粉的混合物放入鑄模內(nèi)并且冷干混合物來獲得的。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種用于骨再生的凝結(jié)骨架，其中骨粉與纖維蛋白膠混合，纖維蛋白膠包含作為主要成分的纖維蛋白原和凝血酶。也就是說， 本發(fā)明骨架的特征在于骨粉被加至纖維蛋白膠。另外，本發(fā)明骨架可以是固態(tài)和凝固態(tài)。為此，纖維蛋白膠和骨粉可以被混合在一起，并且所產(chǎn)生的混合物可以被冷卻干燥。同樣，本發(fā)明骨架可被處理以在被冷卻干燥之前具有預(yù)定的形狀，或者可以在預(yù)定的鑄模中被冷卻干燥。一方面，形狀和鑄?？蓪?duì)應(yīng)患者的顎骨或齒缺陷區(qū)域。更特別地，鑄?？赏ㄟ^(a)使用3DCT制備3D模型以及(b)在3D顱骨模型內(nèi)使用牙用樹脂制備用于制備適于骨缺陷區(qū)域的骨架的鑄模被制備的。在本發(fā)明中，術(shù)語“骨粉”涉及除去了造骨細(xì)胞的粉碎骨粉，優(yōu)選地涉及粉碎無機(jī)骨粉。骨粉可選自自體骨、同種異體骨、異種骨以及人造骨(例如羥磷灰石)的至少一種。在本發(fā)明中，骨粉可在市場上購買到，例如Dynagraft (Austem有限公司)，Biocera(Oscotec 公司)，Bio-Oss (JungsanBiomed 有限公司)，ICB(Purgo)，MBCP (Purgo)，等等。在本發(fā)明中，術(shù)語“纖維蛋白膠”涉及包含作為主要成分的纖維蛋白原和凝血酶的生物適合以及生物可降解的產(chǎn)品。纖維蛋白膠被使用在各種應(yīng)用中。例如，在歐洲，纖維蛋白膠通過施加作為組織粘合劑的纖維蛋白原、凝血酶、氯化鈣或者纖維蛋白溶解酶抑制劑被臨床上用于替代或加強(qiáng)縫合以經(jīng)過纖維蛋白的組織粘合來縫合末梢神經(jīng)和改進(jìn)血管。另外，在日本，纖維蛋白膠被用作腦神經(jīng)手術(shù)(包括血管手術(shù)領(lǐng)域)、整形外科手術(shù)(例如骨粘合)以及為傷口受傷的患者止血的手術(shù)粘合劑。例如，在市場上可購買到Greenplast (綠十字公司),Beriplast-P (Aventis)，Tisseel (Baxter)等等。本發(fā)明纖維蛋白膠優(yōu)選地包括纖維蛋白原和凝血酶。纖維蛋白原的濃度為10至1000mg/ml，優(yōu)選地為10至100mg/ml。而凝血酶的濃度為0. 1至1000IU/ml，優(yōu)選地為1至 100IU/ml。本發(fā)明纖維蛋白膠進(jìn)一步包括抑肽酶或氯化鈣。另外，本發(fā)明纖維蛋白膠進(jìn)一步包括水溶性粘合劑。水溶性粘合劑可以是細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)、蒸餾水或血液。在本發(fā)明中，當(dāng)骨粉和纖維蛋白膠混合在一起時(shí)，纖維蛋白膠數(shù)量上的增加會(huì)增加引起毒性的可能性，并且因此優(yōu)選地適于調(diào)整纖維蛋白膠的含量。另外，當(dāng)骨架的大小更大時(shí)，優(yōu)選地增加骨粉的含量以保持骨架的密度和形狀。考慮到這些事實(shí)，在本發(fā)明中，纖維蛋白膠和骨粉可以1 1至10的體積比混合，優(yōu)選地為1 1至5，更加優(yōu)選地為1 1 至3。本發(fā)明促骨生長素包括各種用于促進(jìn)骨生長的因子。例如，促骨生長素可包括荷爾蒙、細(xì)胞因子或干細(xì)胞等等。更特別地，促骨生長素可以是血小板衍生生長因子(PDGF) 或血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。當(dāng)纖維蛋白膠和骨粉的混合物經(jīng)受冷干過程時(shí)由于在混合物上形成大量的小孔， 本發(fā)明骨架可以改進(jìn)促骨生長素的吸收和保持。冷干的骨架已經(jīng)吸收了包含促骨生長素的介質(zhì)并且將該介質(zhì)傳遞入小孔內(nèi)。本發(fā)明的另一方面涉及一種用于制備具有預(yù)定形狀的固態(tài)骨架的方法，所述方法包括混合骨粉和纖維蛋白膠并且在具有預(yù)定形狀的鑄模中冷干所產(chǎn)生的混合物。冷干過程可以采用傳統(tǒng)的方式進(jìn)行，這意味著在冷干過程中殘留水分的量為2% w/w或更少。另外，本發(fā)明冷干過程可使用市場上購買的冷干機(jī)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種制備患者定制的骨架的方法，這種骨架適合患者的骨缺陷區(qū)域以通過將骨架應(yīng)用到骨缺陷區(qū)域來促進(jìn)骨再生。特別地，本發(fā)明制備患者定制的骨架的方法包括(a)使用3DCT制備3D模型，(b) 使用牙用樹脂在3D模型中制備鑄模，該鑄模用于制備適于骨缺陷區(qū)域的骨架，以及(c)將纖維蛋白膠和骨粉的混合物放入鑄模并且冷干所述混合物。有益效果本發(fā)明用于骨再生的固態(tài)骨架適合活的有機(jī)體并且在骨再生過程中持續(xù)地改進(jìn)促骨生長素(例如細(xì)胞或細(xì)胞因子)的吸收和保持。另外，本發(fā)明固態(tài)骨架可將骨再生誘導(dǎo)至合適的形狀(因?yàn)楣虘B(tài)骨架的形狀要適合骨缺陷區(qū)域)，維持能放置各種用于骨再生的材料的空間，以及即使在活的有機(jī)體環(huán)境中保持合適的形狀和密度，借此誘導(dǎo)快速的骨再生。

圖1顯示了使用在本發(fā)明中的纖維蛋白膠成套材料的構(gòu)造；圖2顯示了本發(fā)明冷干的Biocera/纖維蛋白塊；圖3顯示了本發(fā)明冷干的Biocera/纖維蛋白塊的制備過程(A 混合MBCP和纖維蛋白膠，B 冷干過程之前的凝膠狀態(tài)，C 冷干過程，D 冷干過程之后的固態(tài))；圖4A顯示了 MBCP和纖維蛋白膠的混合物；圖4B顯示了通過冷干混合物所獲得的MBCP/纖維蛋白塊的狀態(tài)；圖5分別顯示了作為試驗(yàn)動(dòng)物的小豬的麻醉誘導(dǎo)、牙齒的提取以及提取的牙齒；
圖6顯示了本發(fā)明骨移植材料被移植到小豬的齒槽缺陷區(qū)域內(nèi)的位置；圖7顯示了移植本發(fā)明骨移植材料的過程(A 通過下顎內(nèi)的殘余齒槽脊的經(jīng)翻瓣來暴露移植區(qū)域，B 以鞍狀物的形式形成唯一的骨缺陷區(qū)域，以及移植MBCP和纖維蛋白膠混合物或MBCP/纖維蛋白塊)；圖8A至8D顯示了使用Dicom閱讀器程序分析骨密度(圖8A 線條調(diào)整，圖8B 厚度調(diào)整，圖8C 密度測量，以及圖8D 被分割成3個(gè)碎片的密度測量(10x10像素大小，3mm 厚度))；圖9顯示了涉及本發(fā)明骨移植材料被移植的區(qū)域的3D計(jì)算機(jī)X線體層照相術(shù)的
結(jié)果；圖10顯示了涉及本發(fā)明骨移植材料被移植的區(qū)域的免疫組織化學(xué)著色的結(jié)果。發(fā)明的具體實(shí)施方式下文中，將參考附圖描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。下文中，將參考附圖詳細(xì)地描述本發(fā)明的具體實(shí)施方式
從而使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地實(shí)施本發(fā)明。實(shí)施例1 制備本發(fā)明骨架1-1、制備纖維蛋白膠使用Greenplast kit (Greenplast成套材料、綠十字集團(tuán)、韓國)制備纖維蛋白膠(圖1)。如下實(shí)施纖維蛋白膠的制備。1)制備瓶-1溶液5ml首先，瓶-1內(nèi)的蛋白質(zhì)濃度確定為97.6mg/ml。為了調(diào)整蛋白質(zhì)濃度至40mg/ml， 溶液被稀釋2. 5倍。2. 5ml的瓶-2溶液被加至一個(gè)瓶_1以溶解蛋白質(zhì)，并且2. 5ml的生理鹽水溶液被加至另一瓶-1以溶解蛋白質(zhì)。然后，兩個(gè)完全溶解的瓶-1溶液被收集到一個(gè)
試管中。2)制備瓶-3溶液瓶-3中的凝血酶滴定度確定為557IU/ml。為了調(diào)整凝血酶滴定度至20IU/ml，溶液被稀釋28倍。2. 5ml的瓶-4溶液被加至一個(gè)瓶_3中以溶解蛋白質(zhì)，并且Iml的瓶-4溶液被取出并且被加至IOml的生理鹽水溶液中，并且被徹底混合。1-2、混合纖維蛋白膠和骨粉1)盤狀骨塊稱量0. 25g的骨粉(Biocera)并且將其放入M孔平板的每個(gè)孔中。0. 2ml的瓶_1 溶液被加入每個(gè)孔中并且與骨粉混合從而使得骨粉能充分地吸收瓶-1溶液。然后，0. Iml 的瓶-3溶液被加入每個(gè)孔中并且使用調(diào)藥刀迅速地混合，所產(chǎn)生的混合物被保持成固定的。2)半圓形桿狀骨塊使用具有IOml吸液管的已準(zhǔn)備好的鑄模。稱重1. 25g的骨粉(Biocera)并且放置到每個(gè)通道中。2ml的瓶-1溶液被加入每個(gè)孔中并且混合從而使得骨粉能充分地吸收瓶-1溶液。0. 5ml的瓶-3溶液被加入每個(gè)孔中并且使用調(diào)藥刀迅速地混合，所產(chǎn)生的混合物被保持在室溫一個(gè)小時(shí)。1-3、冷干
冷干器的隔板的溫度被設(shè)定在-45 V并且運(yùn)行冷干器。結(jié)果，獲得冷干的半圓形桿狀骨塊(圖2)。實(shí)施例2 用于試驗(yàn)的材料和方法2-1、試驗(yàn)動(dòng)物和材料使用4條30kg的小豬(PWG，韓國)作為試驗(yàn)動(dòng)物。這些豬在室溫下使用軟動(dòng)物飼料和水、采用合格的喂養(yǎng)設(shè)備喂養(yǎng)預(yù)定的一段時(shí)間。1)牙齒提取從小豬的左右下顎提取從前白齒至第一白齒的牙齒。提取牙齒之后，傷口被連續(xù)地縫合?？p合一周之后，進(jìn)行注射，并且傷口愈合一個(gè)月。在愈合過程中，在外殼手術(shù)中進(jìn)行額外的結(jié)實(shí)牙齒的提取。2)制備MBCP/纖維蛋白塊(1)制備纖維蛋白膠使用Greenplast kit (Greenplast成套材料、綠十字集團(tuán)、韓國)制備纖維蛋白膠。Iml的Greenplast成套材料包括濃縮的人類纖維蛋白原、抑肽酶、人類血清凝血酶以及α-MEM(介質(zhì)溶液)。抑肽酶與濃縮的人類纖維蛋白原混合以制備纖維蛋白原溶液、而 α -MEM與人類血清凝血酶混合以制備凝血酶溶液。(2)制備MBCP/纖維蛋白合成物(下文中被稱為“MBCP+纖維蛋白膠”)已經(jīng)準(zhǔn)備好的纖維蛋白膠(包含纖維蛋白原溶液以及凝血酶溶液)與MBCP以 1 1的體積比混合，并且所產(chǎn)生的混合物被裝入已經(jīng)制備好的鑄模中。然后，所述混合物經(jīng)受冷干過程以制備MBCP/纖維蛋白塊(也即本發(fā)明骨架)(圖3和4)。2-2、試驗(yàn)方法1)麻醉誘導(dǎo)為了小豬的骨移植，動(dòng)物麻醉劑(Rompun ;3mg/kg，Bayer韓國有限公司，韓國) 和可他命的每個(gè)被靜脈內(nèi)地注射給小豬以誘導(dǎo)全身麻醉。使用隊(duì)0+02進(jìn)行口腔插管以誘導(dǎo)全身麻醉。為了提供視野，上顎與下顎的犬齒被繃帶系住從而導(dǎo)致最大的張開度。使用 Potadine對(duì)口腔滅菌，并且包含1 100，000體積比腎上腺素的利多卡因(Yuhan有限公司，韓國)被注射入下顎剩余的牙槽骨內(nèi)從而誘導(dǎo)局部麻醉并且阻止流血(圖5)。2)牙槽骨暴露小豬的剩余牙槽骨經(jīng)受水平的切入和垂直的切入，并且骨膜被剝離以將下顎的臉頰側(cè)和舌面(lingual side)暴露至最大。3)對(duì)照組和試驗(yàn)組的編制使用半徑3mm的微鋸形成深度為4至5mm、長度8mm以及底部寬度6至7mm的鞍形二壁骨缺陷。使用外科圓頭銼或槽子或槌將粗燥區(qū)域打磨成期望的形狀。首先，用于對(duì)照組的MBCP與纖維蛋白膠混合，所產(chǎn)生的混合物被凝結(jié)并且被裝入右手骨缺陷區(qū)。然后，用于試驗(yàn)組的MBCP/纖維蛋白塊被裝入左手骨缺陷區(qū)的前面(圖6)。在傷口處釋放切入以釋放張力，并且使用4-0尼龍以進(jìn)行持續(xù)的鎖定縫合。阿莫西林(Tiramox ，SAMJIN制藥有限公司，韓國)和雙氯芬酸鈉(Kinpoin ，SAMJIN制藥有限公司，韓國)被肌肉內(nèi)地注射入所有的試驗(yàn)動(dòng)物三天以防止外科手術(shù)之后的感染，并
8且試驗(yàn)動(dòng)物被喂養(yǎng)具有高蛋白奶的軟食物一周。使用洗必太(Hexamedin ，Bukwang制藥有限公司，韓國)消毒一周(圖7)。2-3、可視檢查在手術(shù)之后，持續(xù)地對(duì)提供給小豬的飼料進(jìn)行消毒，并且小豬被保持健康狀態(tài)。手術(shù)2、4以及8周之后，小豬被宰殺，并且在骨組織樣本被福爾馬林保存之前用肉眼觀察骨移植區(qū)域的愈合水平、炎癥狀況以及傷口開裂。2-4、計(jì)算機(jī)X線斷層攝影術(shù)檢查隨后，使用標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)字射線照片檢查每個(gè)骨移植區(qū)域并且每個(gè)骨移植區(qū)域經(jīng)受牙齒計(jì)算機(jī)X線斷層攝影。然后，相對(duì)于骨移植區(qū)域的中心，進(jìn)行骨移植區(qū)域之間的垂直和水平骨切割。1) 3D計(jì)算機(jī)X線斷層攝影使用錐形束CT(Alphard vega，朝日倫琴設(shè)備公司，日本)影像小豬的包含每個(gè)移植材料的下顎骨。所述影像在SOKVp的管壓下和8mA的管流下進(jìn)行15秒。所有試樣的空間分辨率被設(shè)定至0. 2mmX0. 2mm,并且每個(gè)試驗(yàn)獲取約512個(gè)圖像。所獲得的圖像以“.dcm” 的格式存儲(chǔ)，并且使用DICOM閱讀器程序(OnDemand 3應(yīng)用軟件，Cybermed公司，韓國)分析這些文件，并且所有的圖像在診斷監(jiān)控器(WIDE公司，韓國)上被鑒別和分析。2)骨密度分析在Dicom閱讀器程序上相對(duì)于骨缺陷區(qū)域的中心調(diào)整冠狀平面、矢形面以及橫向面的軸線。相對(duì)于10像素X 10像素的感興趣區(qū)域(ROI)，測量橫向平面上骨缺陷區(qū)域的五個(gè)區(qū)(例如上、下、左、右區(qū))的射線照片不透明性。每個(gè)骨缺陷區(qū)域的三個(gè)區(qū)域(例如前、 中和后區(qū))被測量，并且在每個(gè)小豬上進(jìn)行相同的分析2、4和8周。然后，隨著時(shí)間的推移統(tǒng)計(jì)地分析射線照片的不透明性。另外，基于分析結(jié)果，隨著時(shí)間的推移試驗(yàn)組之間射線照片不透明性的變化被統(tǒng)計(jì)地分析。此處，該程序上的數(shù)值是代表1023至3071范圍的不透明性的相對(duì)值，并且小豬的皮層骨和松質(zhì)骨分別在約500至1300和-100至600的射線照片不透性下被測量(圖8)。2-5、組織學(xué)檢查1、在手術(shù)2、4和8周之后小豬被宰殺以獲得分別的組織樣本。然后，組織樣本被固定在10%的中性福爾馬林溶液中兩天，使用10%的EDTA除去礦物質(zhì)并且通過常規(guī)方法脫水并植入樹脂。然后，4至6 μ m大小的顯微鏡用薄片樣本被附接至多聚賴氨酸涂層載片以制備樣本。使得骨移植區(qū)域和正常區(qū)域被包含在組織斷片內(nèi)地制備組織斷片。為了觀察新骨和纖維性組織的形狀和檢查新骨和纖維性組織的形狀的變化，使用蘇木精&曙紅以及馬森三色染劑染色樣本并且在顯微鏡下檢查樣本。實(shí)施例3 試驗(yàn)結(jié)果3-1、臨床表現(xiàn)每組中的三個(gè)小豬中的每個(gè)在2、4和8周的時(shí)間點(diǎn)上被分析。從臨床評(píng)估的結(jié)果可以看出，在2周的時(shí)間點(diǎn)在對(duì)照組中出現(xiàn)傷口裂開和嚴(yán)重的炎癥。但是，在其他的試驗(yàn)組中，在試驗(yàn)的4和8周的時(shí)間點(diǎn)上沒有出現(xiàn)炎癥和傷口裂開，并且觀察到極好的骨再生(表 1)。
[表 1]通過MBCP+纖維蛋白膠和MBCP/纖維蛋白塊的炎癥
權(quán)利要求
1.用于骨再生的骨架，包括 纖維蛋白膠；與纖維蛋白膠混合的骨粉；以及被加工用來容納促骨生長素的多個(gè)孔； 其中所述骨架具有預(yù)定的凝結(jié)形狀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述骨架被處理以在冷干之前具有預(yù)定的形狀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述骨架在預(yù)定的鑄模中被冷干。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的骨架，其中所述鑄模通過下述方式制備(a)使用3D計(jì)算機(jī)X射線斷層掃描技術(shù)(CT)制備3維(3D)顱骨模型，以及(b)在3D顱骨模型內(nèi)使用牙用樹脂制備鑄模，該鑄模用于制備適于骨缺陷區(qū)域的骨^K O
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述骨粉是除掉造骨細(xì)胞的粉碎骨粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的骨架，其中所述骨粉選自自體骨、同種異體骨、異種骨以及人造骨中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述纖維蛋白膠包括纖維蛋白原和凝血酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的骨架，其中所述纖維蛋白原的濃度為10至1000mg/ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的骨架，其中所述凝血酶的濃度為0.1至1000IU/ml。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述纖維蛋白膠進(jìn)一步包括抑肽酶或氯化鈣。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述纖維蛋白膠進(jìn)一步包括水溶性粘合劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的骨架，其中所述水溶性粘合劑是細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)、蒸餾水或血液。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述骨粉和纖維蛋白膠以1至10 1的體積比混合ο
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨架，其中所述促骨生長素是荷爾蒙、細(xì)胞因子或干細(xì)胞。
15.一種制備用于骨再生的骨架的方法，所述方法包括 混合骨粉和纖維蛋白膠；以及冷干所產(chǎn)生的混合物，其中所述骨架包括被加工用來容納促骨生長素的多個(gè)孔并且具有預(yù)定的凝結(jié)形狀。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述骨架被處理以在冷干前具有預(yù)定的形狀。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的骨架，其中所述冷干過程是在預(yù)定的鑄模中進(jìn)行的。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述鑄模通過下述方式制備(a)使用3DCT制備3D顱骨模型，以及(b)在3D顱骨模型內(nèi)使用牙用樹脂制備鑄模，該鑄模用于制備適于骨缺陷區(qū)域的骨^K O
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述骨粉是除掉造骨細(xì)胞的粉碎骨粉。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述骨粉選自自體骨、同種異體骨、異種骨以及人造骨中的至少一種。
21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述纖維蛋白膠包括纖維蛋白原和凝血酶。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述纖維蛋白原的濃度為10至1000mg/ml。
23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述凝血酶的濃度為0.1至1000IU/ml。
24.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述維蛋白膠進(jìn)一步包括抑肽酶或氯化鈣。
25.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述纖維蛋白膠進(jìn)一步包括水溶性粘合劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述水溶性粘合劑是細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)、蒸餾水或血液。
27.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述骨粉和纖維蛋白膠以1至10 1的體積比混合ο
28.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述促骨生長素是荷爾蒙、細(xì)胞因子或干細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種骨再生骨架，并且更特別地涉及一種由纖維蛋白膠和骨粉的混合物組成的骨再生骨架，在骨架的內(nèi)部具有多個(gè)用于容納骨生長素的小孔，所述骨架具有預(yù)定的凝結(jié)形狀。本發(fā)明還涉及一種用于制造所述骨架的方法。
文檔編號(hào)A61L27/14GK102264401SQ200980152504
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2009年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者尹東賢, 李俊 申請(qǐng)人:圓光大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)