專利名稱：包含透明質(zhì)酸、葡糖胺或尿囊素的氧化光活化皮膚再生組合物的制作方法
包含透明質(zhì)酸、葡糖胺或尿囊素的氧化光活化皮膚再生組
合物 背景(a)領(lǐng)域所公開(kāi)的主題主要涉及一種皮膚再生(skin rejuvenation)組合物及其治療方法。(b)相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)應(yīng)用非消融皮膚再生以修復(fù)或補(bǔ)償面、頸、手和身體暴露區(qū)域的皮膚因時(shí)序老化 (chronological-ageing)和光老化兩者造成的后果，已變得十分受歡迎。從最初的機(jī)械脫皮術(shù)和化學(xué)脫皮術(shù)，臨床醫(yī)生很快采取使用激光的消融皮膚再生的應(yīng)用，盡管在停機(jī)時(shí)間 (downtime)具有在患者中引起嚴(yán)重病態(tài)(紅斑和水腫)的負(fù)面影響。這些缺點(diǎn)大幅地抵消了治療的良好效果。光子嫩膚技術(shù)(photorejuvenation technique)例如激光和強(qiáng)脈沖光 (IPL)源隨后被開(kāi)發(fā)以在冷卻下將熱損傷傳遞給真皮，被稱為非消融的皮膚再生。這通常將熱損傷局限于皮膚深層(真皮)，同時(shí)強(qiáng)制冷卻有助于保護(hù)上層(并因而高度可見(jiàn)的層) 免受熱損傷。激光消融皮膚表面重建是除去或改善主要皺紋和其它嚴(yán)重的老化癥狀的流行治療方式。消融療法的原理基于光_組織相互作用，其通過(guò)精確的表皮消融傳遞最佳量受控的殘余熱損傷，從而引起傷口反應(yīng)并因此使臨床結(jié)果最大化，同時(shí)使副作用及其相關(guān)停機(jī)時(shí)間最小化。令人遺憾的是，由此產(chǎn)生的結(jié)痂、浮腫和長(zhǎng)期紅斑是幾乎最堅(jiān)決的患者的主要絆腳石。如Albrecht等在WO 05/032459和WO 05/021094中所描述，使用光敏染料例如
赤蘚紅B、番紅0的皮膚光動(dòng)力學(xué)療法已被用于殺滅細(xì)菌。光敏染料被用于直接殺滅細(xì)菌。 這些專利申請(qǐng)中描述的組合物缺乏氧化劑和愈合因子，并且不將它們用于直接促進(jìn)皮膚再生。因此，侵入性或非侵入性治療后需要加速和/或改善皮膚再生。加速痊愈提供增強(qiáng)的患者安全性(例如感染和疼痛的窗口減少)，也符合更少攻擊性和更少侵入性治療的趨勢(shì)。因此，在由時(shí)序老化和光老化引起的損傷建立后，非常有需要提供一種皮膚損傷再生的新組合物以改善患者的皮膚狀況和加速愈合過(guò)程。發(fā)明概述根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，公開(kāi)了一種皮膚再生組合物，其包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑(photoactivator)及至少一種選自透明質(zhì)酸、葡糖胺和尿囊素的愈合因子，以及藥學(xué)上可接受的載體。所述氧化劑可選自過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫脲和過(guò)氧化苯甲酰。所述皮膚再生組合物還可包含至少一種親水性膠凝劑。所述親水性膠凝劑可選自葡萄糖、改性淀粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙基纖維素、羥丙基纖維素、carbopol 聚合物、藻酸、藻酸鈉、藻酸鉀、藻酸銨、藻酸鈣、瓊脂、角叉菜膠、刺槐豆膠、果膠、明膠。
所述光活化劑可選自咕噸衍生物染料、偶氮染料、生物染色劑和類胡蘿卜素。所述咕噸衍生物染料可選自芴染料、熒光酮染料和rhodole染料。所述芴染料可選自焦寧染料和羅丹明染料。所述焦寧染料可選自焦寧Y和焦寧B。
所述羅丹明染料可選自羅丹明B、羅丹明G和羅丹明WT。所述熒光酮染料可選自熒光素和熒光素衍生物。所述熒光素衍生物可選自焰紅染料B、玫瑰紅和汞溴紅。所述熒光素衍生物可選自伊紅和赤蘚紅。所述偶氮染料可選自甲基紫、中性紅、對(duì)位紅、莧菜紅、淡紅、誘惑紅AC(allura red AC)、酒石黃、橘黃G、麗春紅4R、甲基紅和紫脲酸銨-紅紫酸銨。所述生物染色劑可選自番紅0、堿性品紅、酸性品紅、碘化3，3' _ 二己基羰花青 (3,3' dihexylocarbocyanine iodide)、胭脂紅酸和吲哚菁綠。所述類胡蘿卜素可選自藏紅花酸、α-藏紅花原色素(8，8-雙脫輔基-8，8-類胡蘿卜素酸(8，8-diapo-8，8-carotenoic acid))、玉米黃素、番茄紅素、α -胡蘿卜素、β -胡蘿卜素、紅木素和巖藻黃質(zhì)。所述類胡蘿卜素可作為選自藏紅花紅粉、胭脂樹橙提取物和褐藻提取物的混合物存在于組合物中。所述皮膚再生組合物還可包含至少一種螯合劑。所述螯合劑可選自乙二胺四乙酸(EDTA)和乙二醇四乙酸(EGTA)。所述皮膚再生組合物還可包含至少一種脂解刺激因子。所述脂解刺激因子可選自咖啡因和1，7- 二甲基黃嘌呤。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，公開(kāi)了一種皮膚再生的方法，其包括以下步驟a)在患者皮膚上局部施用組合物，所述組合物包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑；及b)將步驟a)所述的皮膚用光化光處理足以使所述光活化劑引起所述氧化劑活化的時(shí)間。所述皮膚再生的方法可包括將皮膚暴露于光化光中達(dá)約60秒至約5分鐘的時(shí)間。所述皮膚再生的方法可包括將皮膚暴露于光化光中達(dá)每cm2待處理區(qū)域約60秒至約5分鐘的時(shí)間。所述皮膚再生的方法可包括將皮膚暴露于在正被處理的區(qū)域上連續(xù)移動(dòng)的光化光源中。所述皮膚再生的方法可包括將皮膚暴露于光化光中，所述光化光可為具有400nm 至600nm之間波長(zhǎng)的可見(jiàn)光。以下術(shù)語(yǔ)在下面定義。術(shù)語(yǔ)“親水性膠凝劑”意指稠化和穩(wěn)定液體溶液、乳劑和懸浮液的物質(zhì)。當(dāng)其大部分由液體組成時(shí)，親水性膠凝劑溶于液體中并提供將固體物質(zhì)外觀賦予所得凝膠的結(jié)構(gòu)。 親水性膠凝劑與增稠劑非常相似。術(shù)語(yǔ)“光化光”意指由特定光源(燈、LED或激光)發(fā)射并且在與物質(zhì)(例如以下定義的光活化劑)相互作用時(shí)能被該物質(zhì)吸收并產(chǎn)生可辨別或可測(cè)量變化的光能；對(duì)于臨床可辨別變化，我們可假定使用的光活化劑顏色的變化(例如從紅色至透明)。
術(shù)語(yǔ)“光活化劑”意指能吸收光化光的化合物。所述光活化劑容易經(jīng)歷光致激發(fā)并接著將其能量傳遞給其它分子，從而增強(qiáng)或加速光的色散，并增強(qiáng)或活化存在于反應(yīng)混合物中的氧化劑。 術(shù)語(yǔ)“氧化劑”意指容易傳遞氧原子并氧化其它化合物的化合物，或在氧化還原化學(xué)反應(yīng)中獲得電子的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“螯合劑”意指去除金屬離子(例如鐵)并將其保存于溶液中的化學(xué)制品。術(shù)語(yǔ)“愈合因子”意指促進(jìn)或增強(qiáng)組織愈合或再生過(guò)程的化合物。術(shù)語(yǔ)“脂解”意指脂質(zhì)被降解成其組成性脂肪酸的過(guò)程。術(shù)語(yǔ)“暴露于光化光的時(shí)間”意指每次施用光化光時(shí)組織、皮膚或傷口暴露于光化光的時(shí)間。術(shù)語(yǔ)“暴露于光化光的總時(shí)間”意指數(shù)次施用光化光后組織、皮膚或傷口暴露于光化光的累積時(shí)間。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”意指防腐劑溶液、鹽溶液、等滲(約0. 9% )鹽溶液或約5%的白蛋白溶液、懸浮液、無(wú)菌水、磷酸緩沖鹽水等。適合遞送給患者的其它緩沖劑、分散劑和惰性無(wú)毒物質(zhì)可包含于本發(fā)明的組合物中。所述組合物可為溶液劑、混懸劑或適于給藥的任意合適制劑，并通常無(wú)菌及不含不需要的顆粒物質(zhì)。所述組合物可通過(guò)常規(guī)滅菌技術(shù)進(jìn)行滅菌。術(shù)語(yǔ)“再生”意指老化過(guò)程或可能對(duì)大分子、細(xì)胞、組織和器官(包括皮膚)具有損傷或引起損傷積累的任何其它過(guò)程(例如由摔倒引起的擦傷、燒傷等)的逆轉(zhuǎn)或緩解。再生為任何這類損傷的修復(fù)。術(shù)語(yǔ)“光再生”意指使用光逆轉(zhuǎn)或緩解老化過(guò)程或可能對(duì)大分子、細(xì)胞、組織和器官(包括皮膚)具有損傷或引起損傷積累的任何其它過(guò)程(例如由跌倒引起的擦傷、燒傷
寸乂 O如附圖中所描述，本文主題的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)根據(jù)以下所選實(shí)施方案的詳細(xì)描述將會(huì)變得更顯而易見(jiàn)。如會(huì)認(rèn)識(shí)到，所公開(kāi)和要求保護(hù)的主題能夠在多方面進(jìn)行改變，所有均不會(huì)背離權(quán)利要求的范圍。因此，認(rèn)為附圖和說(shuō)明書在本質(zhì)上是說(shuō)明性的，而不是限制性的， 并且主題的全部范圍在權(quán)利要求中闡述。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示伊紅Y不影響細(xì)胞的生存力。將H印G2細(xì)胞用漸增濃度(0.001-100 μ M) 的伊紅Y處理24小時(shí)，或不處理(CTL)。星形孢菌素(STS)被用作引起細(xì)胞死亡的陽(yáng)性對(duì)照。較高濃度(0.5和ImM)的伊紅Y不可被測(cè)試，因?yàn)樵撊玖细蓴_測(cè)定。圖2顯示赤蘚紅B不影響細(xì)胞的生存力。將H印G2細(xì)胞用漸增濃度 (0. 001-100 μ Μ)的赤蘚紅B處理24小時(shí)，或不處理(CTL)。星形孢菌素(STS)被用作引起細(xì)胞死亡的陽(yáng)性對(duì)照。較高濃度(0.5和ImM)的赤蘚紅B不可被測(cè)試，因?yàn)樵撊玖细蓴_測(cè)定。圖3顯示了用或不用本發(fā)明組合物處理并暴露至光的大鼠皮膚的橫截面圖。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種皮膚再生組合物和在患者皮膚上使用所述組合物的方法。此產(chǎn)品加速了皮膚的再生。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種使用組合物的方法，即光動(dòng)力學(xué)技術(shù)，其中通過(guò)光將所述組合物活化，提供對(duì)皮膚的有益效果并促進(jìn)再生。所述組合物和方法可用于治療由正常的時(shí)序老化(temporal aging)引起的損傷以及由暴露于太陽(yáng)引起的皮膚過(guò)早老化引起的損傷。這些損傷包括但不限于光老化、 色素沉著過(guò)度、毛孔粗大、皮膚不規(guī)則(skin irregularities)、細(xì)紋、深色皮膚變色、曬傷、色素性病變(pigmen ted lesions)(例如黑素細(xì)胞增殖、網(wǎng)狀黑素過(guò)度病(reticular m elanotic hypermelanoses))、色素沉重過(guò)度病變(例如外傷后色素沉著過(guò)度)、皺紋、皮膚松弛和瘢痕。也可將其用于治療一系列廣泛的皮膚病況。這些病況包括但不限于痤瘡和痤瘡瘢痕、酒渣鼻。也可用所述組合物治療痣(皮膚上的污點(diǎn))、胎斑，例如貝克氏痣、藍(lán)痣、先天性痣、色素痣(胎塊)、太田痣和伊藤痣(nevus of Ota and Ito)、色素性梭形細(xì)胞痣 (pigmented spindle cell nevus)禾口發(fā)育不良疲。對(duì)皮膚的可見(jiàn)血管病變也可用所述組合物治療。這些病變包含但不限于纏繞性毛細(xì)血管擴(kuò)張、著色斑、櫻桃狀血管瘤(也被稱為“德摩根斑(De Morgan spots)”和“老年血管瘤”)、蜘蛛痣(也被稱為蛛狀痣、蜘蛛狀痣或蛛形血管瘤)、血管病變例如血管胎記、藍(lán)、 紅或紫葡萄酒色痣、紅或藍(lán)面部和腿部靜脈(veins)(也被稱為蛛狀靜脈)。所述組合物和方法可用于幫助去除大多數(shù)紋身。所述組合物包含多種選自可能組分組的活性成分。這些多種活性成分每種都具有其作用機(jī)制。氧化劑所述組合物包含氧化劑作為氧自由基的來(lái)源。過(guò)氧化物化合物為包含過(guò)氧基團(tuán) (R-0-0-R)的氧化劑，過(guò)氧基團(tuán)為包含兩個(gè)氧原子的鏈狀結(jié)構(gòu)，每個(gè)氧原子與另一個(gè)氧原子和基團(tuán)或某種元素鍵合。用于制備激活媒質(zhì)的合適氧化劑包括但不限于過(guò)氧化氫(H2O2)為制備有機(jī)過(guò)氧化物的起始材料。H2O2是強(qiáng)氧化劑，而過(guò)氧化氫獨(dú)特的性質(zhì)在于其降解成水和氧氣且不形成任何持久的有毒殘留化合物。此組合物中使用的過(guò)氧化氫可用在凝膠中，例如用6%的過(guò)氧化氫。本發(fā)明組合物中可使用的過(guò)氧化氫的合適濃度范圍為約3. 5 %至約6 %。脲過(guò)氧化氫(也被稱為過(guò)氧化脲、過(guò)氧化氫脲或過(guò)碳酰胺)可溶于水并含大約 35%過(guò)氧化氫。所述組合物中使用的過(guò)氧化氫脲可用作凝膠劑，例如用表示5. 6%過(guò)氧化氫的16%過(guò)氧化氫脲。本發(fā)明組合物中可使用的過(guò)氧化脲的合適濃度范圍為約10%至約 16%。過(guò)氧化脲以可用熱或光化學(xué)反應(yīng)加速的緩釋方式降解成脲和過(guò)氧化氫。釋放的脲 [尿素，(NH2)CO2)],高度可溶于水且為強(qiáng)蛋白變性劑。它增加一些蛋白質(zhì)的溶解度并增強(qiáng)皮膚和/或黏膜的再水合。過(guò)氧化苯甲酰由通過(guò)過(guò)氧化物基團(tuán)連接的兩個(gè)苯甲酰基(羧酸的H被移除的苯甲酸)組成。在痤瘡的治療中發(fā)現(xiàn)，濃度在2. 5%至10%變化時(shí)，釋放的過(guò)氧化物基團(tuán)有效殺菌。過(guò)氧化苯甲酰也促進(jìn)皮膚更新并清潔毛孔，這進(jìn)一步有助于減少細(xì)菌數(shù)并減少痤瘡。過(guò)氧化苯甲酰與皮膚接觸時(shí)降解成苯甲酸和氧氣，沒(méi)有一種是有毒的。本發(fā)明組合物中可使用的過(guò)氧化苯甲酰的合適濃度范圍為約2. 5%至約5%。因?yàn)槠湓黾拥亩拘约捌渑c光動(dòng)力能量傳遞不可預(yù)見(jiàn)的反應(yīng)，所以應(yīng)避免包含其它形式的過(guò)氧化物(例如有機(jī)或無(wú)機(jī)過(guò)氧化物)。光活化劑
光活化劑將光能傳遞給氧化劑。合適的光活化劑可為熒光染料(或染色劑)，但也可采用其它染料類別或染料(生物學(xué)和組織學(xué)染料、食品著色劑、類胡蘿卜素)?；旌瞎饣罨瘎┛赏ㄟ^(guò)混合的染料分子增加光吸收并增強(qiáng)吸收和光_生物調(diào)節(jié)選擇性。這創(chuàng)造了產(chǎn)生新的光敏性和/或選擇性的光活化劑混合物的多種可能性。光活化劑的有利特性是增加的熒光性。在本發(fā)明中，光在綠至黃光譜的二次放射會(huì)是有利的，因?yàn)檫@是深穿透波長(zhǎng)范圍，具有血液的深吸收。這導(dǎo)致血流強(qiáng)烈的增加、血管舒張和血管舒縮現(xiàn)象。合適的光活化劑包括但不限于咕噸衍牛物咕噸衍生物染料已在全世界長(zhǎng)時(shí)間使用并測(cè)試。它們顯示出低毒性和增強(qiáng)的熒光性。咕噸類別由3個(gè)亞類組成:a)芴；b)熒光酮；和c)rhodole0芴類別包括焦寧(例如焦寧Y和B)和羅丹明(例如羅丹明B、G和WT)。取決于使用的濃度，焦寧和羅丹明兩者可能有毒且其與光的相互作用可能導(dǎo)致毒性增加。rhodole 染料類別發(fā)生的類似作用是已知的。熒光酮類別包括熒光素染料和熒光素衍生物。熒光素是在顯微術(shù)中常用的熒光團(tuán)，具有494nm的最大吸收和521nm的最大放射。 熒光素的二鈉鹽被稱為D&C Yellow 8。它具有非常高的熒光性但快速光降解。在本發(fā)明組合物中，熒光素與其它光活化劑如吲哚菁綠和/或藏紅花紅粉的混合物將增加這些其它化合物的光吸收。伊紅類別包括伊紅Y (四溴熒光素、酸性紅87、D&C Red 22)，具有514-518nm的最大吸收，將細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、膠原、肌纖維和紅細(xì)胞染成強(qiáng)烈的紅色；和伊紅B(酸性紅91、 eosin scarlet、二溴-二硝基熒光素)，具有與伊紅Y相同的染色特性。因其對(duì)使用的光譜廣譜藍(lán)光、藍(lán)至綠光和綠光的敏感性，可使用伊紅Y、伊紅B或兩者的混合物。其組織和生物膜染色性質(zhì)及其低毒性也是有利的。伊紅Y和伊紅B均對(duì)紅細(xì)胞染色，因而賦予本發(fā)明組合物止血(控制血流或阻擋血流)性質(zhì)和在施用組合物過(guò)程中增加對(duì)損傷或傷口軟組織的光選擇性靶向。焰紅染料B (2，4，5，7-四溴-4，5，6，7-四氯熒光素、D&C Red 28、酸性紅92)是熒光素的紅色染料衍生物，其通過(guò)光氧化作用用于廢水的消毒和解毒。它具有535-548nm的最大吸收。它也用作制備光敏染料和藥品的中間體。赤蘚紅B (酸性紅51、四碘熒光素)是櫻桃粉紅、煤基氟食物染料，用作生物染色劑及生物膜和牙菌斑顯示劑，在水溶液中具有524-530nm的最大吸收。它受光降解。由于其對(duì)使用光譜的光敏感性及其染色生物膜的能力，赤蘚紅也用在一些實(shí)施方案中。當(dāng)在感染或污染組織的深口袋(例如在牙周治療的牙周袋)中使用組合物時(shí)，包含赤蘚紅應(yīng)為有利的。玫瑰紅(4，5，6，7-四氯-2，4，5，7-四碘熒光素、酸性紅94)是具有544_549nm最大吸收的明亮淡藍(lán)粉紅(bluish-pink)生物學(xué)染料，已被用作染料、生物染色劑和診斷輔助劑。也用在合成化學(xué)中以從三線態(tài)氧中產(chǎn)生單線態(tài)氧。汞溴紅(紅汞)是具有508nm最大吸收的熒光素的有機(jī)汞二鈉鹽。它用作防腐劑。
偶氮染料偶氮(或重氮)染料共有N-N基團(tuán)，稱為偶氮基團(tuán)。它們主要用在分析化學(xué)中或用作食品著色劑，并且它們是非熒光的。合適的偶氮染料包括甲基紫、中性紅、對(duì)位紅(顏料紅1)、莧菜紅(偶氮玉紅S)、淡紅(偶氮玉紅、食品紅3、酸性紅14)、誘惑紅AC(FD&C 40)、 酒石黃(FD&C Yellow 5)、橘黃G(酸性橙10)、麗春紅4R(食品紅7)、甲基紅(酸性紅2)、 紫脲酸銨-紅紫酸銨。牛物染餼劑在對(duì)生物材料染色方案中常用的染料分子也可用作光活化劑。合適的生物染色劑包括番紅(番紅0、堿性紅2)也是偶氮染料并用在組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)中。它在革蘭氏染色方案中是標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)染劑。品紅(堿性或酸性)(鹽酸薔薇苯胺)是洋紅生物學(xué)染料，其可染色細(xì)菌并已用作防腐劑。它具有M0-555nm的最大吸收。碘化3，3' -二己基羰花青(Di0C6)是用于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、泡囊膜和線粒體染色的熒光染料。它顯示出光動(dòng)力毒性；當(dāng)暴露于藍(lán)光時(shí)，具有綠色熒光。胭脂紅酸(酸性紅4、中性紅4)是從胭脂蟲中天然獲得的紅色葡糖苷羥基蒽醌 (glucosidal hydroxyanthrapurin)0吲哚菁綠(ICG)用作血容量確定、心輸出量或肝功能的診斷輔助劑。ICG與紅細(xì)胞強(qiáng)烈結(jié)合，當(dāng)用在與熒光素的混合物中時(shí)，ICG增加藍(lán)至綠光的吸收。類胡蘿卜素類胡蘿卜素染料也可充當(dāng)光活化劑。藏紅花紅粉是含天然類胡蘿卜素的化合物。藏紅花是從番紅花獲得的香料。其特征在于苦味和碘仿或干草樣香味；這些特征是由化合物藏紅花苦苷和藏花醛引起的。它也包含賦予其特征性黃-紅顏色的類胡蘿卜素染料藏紅花原色素。藏紅花包含多于150種不同的化合物，其中很多是類胡蘿卜素芒果藏紅花原色素(mangicrocin)、reaxanthine、番茄紅素，和多種α-和β -胡蘿卜素，其顯示出良好的光吸收和有益的生物活性。藏紅花也可充當(dāng)光子傳遞劑和愈合因子。藏紅花的顏色主要是 α-藏紅花原色素(8，8-雙脫輔基-8，8-類胡蘿卜素酸)的效果。干藏紅花紅粉對(duì)波動(dòng)的 PH水平高度敏感并在光和氧化劑存在下快速化學(xué)降解。其更耐熱。數(shù)據(jù)顯示藏紅花具有抗癌、免疫調(diào)節(jié)和抗氧化性質(zhì)。對(duì)于吸光度，針對(duì)藏紅花原色素特定的光子波長(zhǎng)440nm(藍(lán)光)來(lái)確定。其具有深紅色并形成具有186°C熔點(diǎn)的晶體。當(dāng)溶于水時(shí)，形成橙色溶液。藏紅花酸是藏紅花的另一種化合物，發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)出抗血脂作用和促進(jìn)氧氣在不同組織中滲透。更具體地，觀察到毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增加的氧合作用。觀察到肌肉和大腦皮層氧合作用的增加，引致在具有誘導(dǎo)的出血性休克或肺氣腫的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中存活率增加。胭脂樹橙香料(anatto a spice)含有顯示相關(guān)抗氧化性質(zhì)的類胡蘿卜素紅木素作為主要組分(70% -80% )0β -胡蘿卜素也顯示出合適的特性。巖藻黃質(zhì)是具有光敏化氧化還原反應(yīng)的顯著能力的褐藻組分。愈合因子
愈合因子包括在組合物施用部位促進(jìn)或增強(qiáng)組織愈合或再生過(guò)程的化合物。在組合物光活化過(guò)程中，皮膚或黏膜在治療部位增加分子吸收。在延長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)觀察到治療部位處血流的增加。隨著愈合因子的加入，由于自由基級(jí)聯(lián)的動(dòng)態(tài)相互作用，淋巴引流的增加和滲透壓平衡可能的改變可被增強(qiáng)或甚至強(qiáng)化。合適的愈合因子包括但不限于透明質(zhì)酸(乙酰透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鹽)是非硫酸化的糖胺聚糖，廣泛分布于整個(gè)結(jié)締組織、上皮組織和神經(jīng)組織中。它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組分之一，并對(duì)細(xì)胞增殖和遷移作出重大貢獻(xiàn)。乙酰透明質(zhì)酸是皮膚的主要組分，在皮膚中參與組織修復(fù)。它大量存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，同時(shí)有助于組織流體動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和增殖及參與大量的細(xì)胞表面受體相互作用，特別是包括初級(jí)受體CD44的相互作用。透明質(zhì)酸酶類酶降解乙酰透明質(zhì)酸。 人體中有至少七種類型的透明質(zhì)酸酶樣酶，其中幾種是腫瘤抑制劑。透明質(zhì)酸的降解產(chǎn)物， 低聚糖和非常低分子量的透明質(zhì)酸，顯示促血管生成(pro-angiogenic)性質(zhì)。另外，最近的研究顯示，乙酰透明質(zhì)酸片段但非天然高分子量的乙酰透明質(zhì)酸，在組織損傷中可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞的炎癥應(yīng)答。透明質(zhì)酸很適合針對(duì)皮膚的生物學(xué)應(yīng)用。由于其高生物相容性，透明質(zhì)酸被用于促進(jìn)組織再生。目前的研究證明，透明質(zhì)酸出現(xiàn)在愈合早期以物理地為介導(dǎo)免疫應(yīng)答的白細(xì)胞創(chuàng)造空間。它用在傷口愈合應(yīng)用的生物支架合成中和皺紋治療中。葡糖胺是人體組織中最豐富的單糖之一及糖基化蛋白質(zhì)和脂質(zhì)生物合成中的前體。它通常用在骨關(guān)節(jié)炎的治療中。葡糖胺常用的形式是其硫酸鹽。葡糖胺顯示多種作用， 包括抗炎活性、刺激蛋白聚糖合成和蛋白水解酶的合成。葡糖胺可用在本發(fā)明組合物中的合適的濃度范圍為約至約3%。尿囊素是glyosilic酸的二酰脲。它具有去角質(zhì)效果，增加細(xì)胞外基質(zhì)的水含量，增強(qiáng)上層死亡(凋亡)皮膚細(xì)胞的脫落，并促進(jìn)皮膚增殖和傷口愈合。另外，藏紅花可同時(shí)充當(dāng)光子傳遞劑和愈合因子。螯合劑可以包含螯合劑以在閉合感染口袋和難以到達(dá)的損害中促進(jìn)涂層的去除；螯合劑可充當(dāng)金屬離子淬滅劑和緩沖劑。合適的螯合劑包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)它是一種氨基酸，用于螯合二價(jià)或三價(jià)金屬離子。EDTA通過(guò)4個(gè)羧酸基團(tuán)和2個(gè)胺基與金屬結(jié)合。EDTA與Mn (III) Je (III)、Cu (III)、Co (III)形成特別強(qiáng)的絡(luò)合物，防止血小板聚集和血塊形成。它用在齒髓治療中作為儀器使用中的涂層去除劑。它用來(lái)緩沖溶液。乙二醇四乙酸(EGTA)與EDTA相關(guān)，但具有對(duì)鈣離子比對(duì)鎂離子高得多的親和力。 它可用于制備類似活細(xì)胞內(nèi)部環(huán)境的緩沖溶液，并常用于牙醫(yī)學(xué)，更具體地牙髓病學(xué)中去除涂層。脂解刺激因子可包含脂解刺激因子，以將組合物用于美容應(yīng)用例如皺紋治療中。咖啡因和咖啡因的代謝衍生物1，7_ 二甲基黃嘌呤在脂解過(guò)程中可增加以釋放甘油和脂肪酸到血流中。親水性膠凝劑皮膚再生組合物也可包含一種或多種親水性膠凝劑。親水性膠凝劑增強(qiáng)組合物的稠度并有助于促進(jìn)組合物應(yīng)用到皮膚或受傷區(qū)域。此外，當(dāng)與過(guò)氧化氫(H2O2)使用時(shí)，它可有助于緩慢釋放H2O2，并提供更直接的反應(yīng)，因?yàn)榧僅2A可直接使用。合適的親水性膠凝劑包括但不限于葡萄糖、改性淀粉、甲基纖維素、羧甲基纖維素、丙基纖維素、羥丙基纖維素、 carbopol 聚合物、藻酸、藻酸鈉、藻酸鉀、藻酸銨、藻酸鈣、瓊脂、角叉菜膠、刺槐豆膠、果膠和明膠。組合物的用途納入合適的光敏化合物并用適當(dāng)波長(zhǎng)光源活化，引致過(guò)氧化物(氧化劑)源的降解過(guò)程和通過(guò)光動(dòng)力現(xiàn)象發(fā)生的其它反應(yīng)的加速。納入的染料被特定波長(zhǎng)的光子照射并激發(fā)到更高能態(tài)。當(dāng)光活化劑激發(fā)的電子返回到較低能態(tài)時(shí)，它們發(fā)射出較低能級(jí)的光子，因而引起較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光的發(fā)射(Mokes頻移)。在合適的環(huán)境中，大部分這種能量轉(zhuǎn)移被傳遞給氧或活性過(guò)氧化氫并導(dǎo)致氧自由基的形成，例如單線態(tài)氧。由組合物活化產(chǎn)生的單線態(tài)氧和其它活性氧類被認(rèn)為以策動(dòng)力方式(hormetic fashion)運(yùn)作。也就是說(shuō)，健康有益的效果通過(guò)低暴露于一般有毒刺激(例如活性氧)，通過(guò)刺激和調(diào)節(jié)目標(biāo)組織細(xì)胞中的應(yīng)激反應(yīng)途徑而帶來(lái)。對(duì)外源產(chǎn)生的自由基(活性氧類) 的內(nèi)源性反應(yīng)在對(duì)外源自由基提高的防御能力中被調(diào)節(jié)，并引起愈合和再生過(guò)程的加速。 另外，組合物的活化也將產(chǎn)生抗菌效果。細(xì)菌對(duì)暴露于自由基的極端敏感使本發(fā)明組合物成為實(shí)際上的殺菌組合物?？赡艿淖饔脵C(jī)制應(yīng)為強(qiáng)化的氧化還原信號(hào)傳遞現(xiàn)象，導(dǎo)致產(chǎn)生突出的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，在所述過(guò)程中細(xì)胞將一種信號(hào)轉(zhuǎn)化為另一種信號(hào)；活化的“第二信使”引起以較小刺激開(kāi)始的“信號(hào)級(jí)聯(lián)”，所述較小刺激通過(guò)這些信號(hào)的生物監(jiān)控放大引出大的反應(yīng)。這些復(fù)雜的機(jī)制可能通過(guò)生長(zhǎng)因子活化涉及血管生成現(xiàn)象而作用。這種方法可描述成光動(dòng)力學(xué)療法的形式。但是，不像其中光活化激活劑 (photoactoactivator)摻于組織結(jié)構(gòu)中的其它光動(dòng)力技術(shù)，在本發(fā)明方法中，光活化材料與組織處于簡(jiǎn)單接觸且當(dāng)被光活化時(shí)，充當(dāng)與組織化學(xué)地相互作用的“光動(dòng)力裝置”。另外， 光化光穿透組織，而由光活化劑發(fā)射的光(較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光)也被組織吸收。可使用任何光化光源。任何類型的鹵素?zé)?、LED或等離子弧燈，或激光可能是合適的。合適的光化光源的主要特征將會(huì)是其以適于活化組合物中存在的一種或多種光活化劑的一種或多種波長(zhǎng)發(fā)射光。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用氬激光。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用磷酸鈦氧鉀(KTP)激光(例如GreenLight 激光)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，LED光固化裝置是光化光源。在再一個(gè)實(shí)施方案中，光化光源是具有400和600nm之間波長(zhǎng)的可見(jiàn)光源。另外，光化光源應(yīng)具有合適的能量密度。非準(zhǔn)直光源(LED、鹵素?zé)艋虻入x子燈)合適的能量密度在約900mW/cm2至約2000mW/cm2范圍內(nèi)。激光光源合適的能量密度在約0. 5mff/cm2至約 0. 8mff/cm2 范圍內(nèi)。暴露于光化光的持續(xù)時(shí)間將依賴于治療區(qū)域表面，和進(jìn)行治療的損害、外傷或損傷的類型。組合物的光活化可發(fā)生在數(shù)秒內(nèi)或甚至毫秒內(nèi)，但延長(zhǎng)的暴露時(shí)間有利于充分利用吸收光、反射光和再發(fā)射光對(duì)本發(fā)明組合物的協(xié)同作用及其與治療中的組織的相互作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，已施用皮膚再生組合物的組織、皮膚或傷口暴露于光化光的時(shí)間為 60秒至5分鐘的時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，已施用皮膚再生組合物的組織、皮膚或傷口暴露于光化光的時(shí)間為每cm2治療區(qū)域60秒至5分鐘，以致使IOcm2暴露的總時(shí)間將為10分鐘至50分鐘之間。在又一個(gè)實(shí)施方案中，光化光源在治療區(qū)域上連續(xù)移動(dòng)，持續(xù)合適的暴露時(shí)間。在再一個(gè)實(shí)施方案中，施行皮膚再生組合物和光化光的多次施用。在一些實(shí)施方案中，組織、皮膚或傷口暴露于光化光至少2、3、4、5、或6次。在一些實(shí)施方案中，暴露于光化光前進(jìn)行皮膚再生組合物的新鮮施用。備詵實(shí)施方案實(shí)施例I通過(guò)混合以下組分制備示例性的皮膚再生組合物
氧化劑光活化劑愈合因子過(guò)氧化氫脲(16%)赤蘚紅B(0.5%) 伊紅 B(0.25%) 藏紅花紅粉(0.25%)硫酸葡糖胺(3%) 透明質(zhì)酸(3%)將氧化劑(4mL)和愈合因子(1. 5mL)混合，接著與光活化劑(ImL)混合。將由此得到的組合物施用于患者皮膚上，并用由LED光固化裝置(藍(lán)光)提供的光化光活化。治療后移除組合物。實(shí)施例II通過(guò)混合以下組分制備第二種示例性皮膚再生組合物
氧化劑光活化劑愈合因子過(guò)氧化氫脲(16%)熒光素吲咪菁綠藏紅花紅粉(0.25%)硫酸葡糖胺(3%) 透明質(zhì)酸(3%)將氧化劑(4mL)和愈合因子(1. 5mL)混合，接著與光活化劑(ImL)混合。將由此得到的組合物施用于患者皮膚，并用由LED光固化裝置(藍(lán)光)提供的光化光活化。治療后移除組合物。第二種示例性組合物使用熒光素染料作為組合物中存在的其它染料(吲哚菁綠和藏紅花紅粉)的光活化劑。將少量熒光素添加到吲哚菁綠和藏紅花紅粉溶液中引起處于活化其它染料化合物波長(zhǎng)的光的再發(fā)射，并通過(guò)增加建立的臨床吸收/再發(fā)射標(biāo)準(zhǔn)改善治療。吲哚菁綠很好地結(jié)合血紅蛋白并有助于組織的選擇性能量吸收，還有助于用產(chǎn)生的自由基級(jí)聯(lián)靶向這些組織。另外，這種光活化劑混合物能使藏紅花呈現(xiàn)紅色熒光，而這又改善光動(dòng)力和生物刺激兩種現(xiàn)象。
實(shí)施例III光活化劑伊紅Y和赤蘚紅B的毒性通過(guò)測(cè)定這些化合物對(duì)人體細(xì)胞的細(xì)胞毒性來(lái)評(píng)價(jià)。具有上皮細(xì)胞形態(tài)的H印G2人肝細(xì)胞癌細(xì)胞用濃度漸增(0.001至100 μ M)的伊紅 Y或赤蘚紅B處理M小時(shí)，并評(píng)價(jià)細(xì)胞存活。當(dāng)與未處理細(xì)胞相比較時(shí)，漸增濃度的伊紅 Y (圖1)或赤蘚紅B (圖2)不影響細(xì)胞生存力。星形孢菌素(STS)被用作誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的陽(yáng)性對(duì)照并引起劑量依賴作用(圖1和2)。類似的結(jié)果通過(guò)用乳酸脫氫酶(LDH)的釋放測(cè)量細(xì)胞死亡獲得。因此，既不是伊紅Y也不是赤蘚紅B導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加。實(shí)施例IV動(dòng)物模型中的皮膚再生幾項(xiàng)光動(dòng)力技術(shù)(PDT)的研究已表明PDT對(duì)細(xì)胞類型的刺激作用，尤其是膠原前體和與細(xì)胞發(fā)育相關(guān)的酶的形成。本發(fā)明提供可用于治療大的表面積而沒(méi)有顯著副作用的皮膚再生方法。一項(xiàng)研究在Wistar大鼠中進(jìn)行以評(píng)價(jià)本發(fā)明組合物在光存在下在動(dòng)物皮膚模型 (使用皮瓣模型)中的效果。使用3cm乘9cm(3X9)樹脂玻璃模板，在背部皮膚上用手術(shù)標(biāo)記追蹤皮瓣，將肩胛骨下角和骨盆上骨作為界限。使用無(wú)菌技術(shù)將帶顱底的純隨機(jī)形態(tài)皮瓣切下，并通過(guò)深筋膜(包括淺筋膜、肉膜、皮下組織和皮膚)被架起。為盡量減少皮膚收縮和模擬人體皮膚，將肉膜的0. 5cm皮下層從傷口邊緣移除。在1小時(shí)內(nèi)，將不滲透屏障 (例如硅酮薄膜)置于皮瓣及其供皮區(qū)之間以消除傷口床支持的可能性。然后移除該薄膜， 將皮瓣返回到原來(lái)的位置并用4/0尼龍縫線以間斷方式手術(shù)閉合皮瓣邊緣。緊隨皮瓣的閉合，在皮瓣蒂部外涂13. 5g凝膠制劑(0.5g/cm2)并進(jìn)行輻照。對(duì)照不接收任何處理。小心將軟膏均勻分布于整個(gè)皮瓣。在試驗(yàn)當(dāng)天制備凝膠制劑。對(duì)凝膠+光組別，將動(dòng)物用凝膠制劑處理，將皮瓣用LED燈輻照3分鐘?，F(xiàn)在參照?qǐng)D3，與未處理皮膚相比，結(jié)果顯示在用本發(fā)明組合物處理的皮膚上真皮厚度增加和新膠原形成。這些結(jié)果支持本發(fā)明組合物在皮膚再生過(guò)程中刺激產(chǎn)生更好結(jié)果的作用。本文描述的實(shí)施方案和實(shí)施例是對(duì)要求保護(hù)主題的一般性說(shuō)明并非限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的是，在不背離所要求保護(hù)的公開(kāi)主題的精神和范圍的情況下，這些實(shí)施方案可如何容易地針對(duì)各種應(yīng)用和以各種方式進(jìn)行修改和/或調(diào)整。在本文中權(quán)利要求應(yīng)理解為包括而不限于所有備選實(shí)施方案和本文主題的等同物。本文所用的短語(yǔ)、措詞和術(shù)語(yǔ)是說(shuō)明性的并非限制性的。在法律允許范圍內(nèi)，本文引用的所有參考文獻(xiàn)均通過(guò)引用以其整體結(jié)合。會(huì)認(rèn)識(shí)到，本文公開(kāi)的不同實(shí)施方案的任何方面可在可能的備選實(shí)施方案及特征的備選組合范圍內(nèi)進(jìn)行組合，所有不同的特征組合應(yīng)理解為形成所要求保護(hù)主題的一部分。
權(quán)利要求
1.一種皮膚再生組合物，其包含至少一種氧化劑；至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑；及至少一種選自透明質(zhì)酸、葡糖胺和尿囊素的愈合因子；以及藥學(xué)上可接受的載體。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述氧化劑選自過(guò)氧化氫、過(guò)氧化氫脲和過(guò)氧化苯甲酰。
3.權(quán)利要求1的組合物，其還包含至少一種親水性膠凝劑。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述親水性膠凝劑選自葡萄糖、改性淀粉、甲基纖維素、 羧甲基纖維素、丙基纖維素、羥丙基纖維素、carbopol 聚合物、藻酸、藻酸鈉、藻酸鉀、藻酸銨、藻酸鈣、瓊脂、角叉菜膠、刺槐豆膠、果膠和明膠。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述光活化劑選自咕噸衍生物染料、偶氮染料、生物染色劑和類胡蘿卜素。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述咕噸衍生物染料選自芴染料、熒光酮染料和rhodole 染料。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述芴染料選自焦寧染料和羅丹明染料。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述焦寧染料選自焦寧Y和焦寧B。
9.權(quán)利要求7的組合物，其中所述羅丹明染料選自羅丹明B、羅丹明G和羅丹明WT。
10.權(quán)利要求6的組合物，其中所述熒光酮染料選自熒光素和熒光素衍生物。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述熒光素衍生物選自焰紅染料B、玫瑰紅和汞溴紅。
12.權(quán)利要求10的組合物，其中所述熒光素衍生物選自伊紅和赤蘚紅。
13.權(quán)利要求5的組合物，其中所述偶氮染料選自甲基紫、中性紅、對(duì)位紅、莧菜紅、淡紅、誘惑紅AC、酒石黃、橘黃G、麗春紅4R、甲基紅和紫脲酸銨-紅紫酸銨。
14.權(quán)利要求5的組合物，其中所述生物染色劑選自番紅0、堿性品紅、酸性品紅、碘化 3,3' - 二己基羰花青、胭脂紅酸和吲哚菁綠。
15.權(quán)利要求5的組合物，其中所述類胡蘿卜素選自藏紅花酸、α-藏紅花原色素(8， 8-雙脫輔基_8，8-類胡蘿卜素酸)、玉米黃素、番茄紅素、α-胡蘿卜素、胡蘿卜素、紅木素和巖藻黃質(zhì)。
16.權(quán)利要求5的組合物，其中所述類胡蘿卜素作為選自藏紅花紅粉、胭脂樹橙提取物和褐藻提取物的混合物存在于所述組合物中。
17.權(quán)利要求1至權(quán)利要求16中任一項(xiàng)的組合物，其還包含至少一種選自乙二胺四乙酸(EDTA)和乙二醇四乙酸(EGTA)的螯合劑。
18.權(quán)利要求1至權(quán)利要求17中任一項(xiàng)的組合物，其還包含至少一種選自咖啡因和1， 7- 二甲基黃嘌呤的脂解刺激因子。
19.一種皮膚再生的方法，其包括以下步驟a)在患者皮膚上局部施用組合物，所述組合物包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑；及b)將步驟a)所述的皮膚用光化光處理足以使所述光活化劑引起所述氧化劑活化的時(shí)間。
20.一種治療皮膚病況的方法，其包括以下步驟a)在患者皮膚病況上局部施用組合物，所述組合物包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑；及b)將步驟a)所述皮膚病況用光化光處理足以使所述光活化劑引起所述氧化劑活化的時(shí)間。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述皮膚病況選自痤瘡和痤瘡瘢痕及酒渣鼻。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述皮膚病況為選自貝克氏痣、藍(lán)痣、先天性痣、色素痣、 太田痣和伊藤痣、色素性梭形細(xì)胞痣和發(fā)育不良痣的痣。
23.權(quán)利要求20的方法，其中所述皮膚病況為血管病變，其選自纏繞性毛細(xì)血管擴(kuò)張、 著色斑、櫻桃狀血管瘤、蜘蛛痣、血管胎記、藍(lán)葡萄酒色痣、紅葡萄酒色痣、紫葡萄酒色痣、紅色面部靜脈、藍(lán)色面部靜脈、紅色腿部靜脈和藍(lán)色腿部靜脈。
24.一種去除紋身的方法，其包括以下步驟a)在患者紋身上局部施用組合物，所述組合物包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑；及b)將步驟a)所述紋身用光化光處理足以使所述光活化劑引起所述氧化劑活化的時(shí)間。
25.權(quán)利要求19至權(quán)利要求M中任一項(xiàng)的方法，其中將所述皮膚暴露于光化光中達(dá)約 60秒至約5分鐘的時(shí)間。
26.權(quán)利要求19至權(quán)利要求M中任一項(xiàng)的方法，其中將所述皮膚暴露于光化光中達(dá)每 cm2待處理區(qū)域約60秒至約5分鐘的時(shí)間。
27.權(quán)利要求19至權(quán)利要求26中任一項(xiàng)的方法，其中所述光化光源在待處理區(qū)域上連續(xù)移動(dòng)。
28.權(quán)利要求19至權(quán)利要求27中任一項(xiàng)的方法，其中所述光化光為具有約400nm至約 600nm之間波長(zhǎng)的可見(jiàn)光。
全文摘要
本文提供了一種皮膚再生組合物，其包含至少一種氧化劑、至少一種能夠活化所述氧化劑的光活化劑，及至少一種選自透明質(zhì)酸、葡糖胺和尿囊素的愈合因子，以及藥學(xué)上可接受的載體。
文檔編號(hào)A61K8/60GK102256591SQ200980154338
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月7日
發(fā)明者F·貝利尼, N·勞皮斯, R·皮爾加利尼 申請(qǐng)人:克洛克斯科技公司