專利名稱：基于細(xì)胞滲透性肽的激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞滲透性肽、細(xì)胞滲透性肽組合物及其使用方法和蛋白質(zhì)工程改造的方法。背景蛋白質(zhì)分子的三維構(gòu)象由其氨基酸序列決定，蛋白質(zhì)構(gòu)象的詳細(xì)情況決定其化學(xué)性質(zhì)。蛋白質(zhì)通常由含所連接的側(cè)鏈的多肽主鏈組成?；瘜W(xué)上不同的氨基酸側(cè)鏈序列使得每一種蛋白質(zhì)各有區(qū)別。由非共價(jià)相互作用(例如氫鍵、離子鍵和范德華引力)來穩(wěn)定蛋白質(zhì)的折疊結(jié)構(gòu)，所述非共價(jià)相互作用在多肽鏈的不同部分、鏈的一個(gè)部分與另一部分之間形成。由大量所述非共價(jià)鍵的聯(lián)合力量來決定每一折疊形態(tài)的穩(wěn)定性。每一種蛋白質(zhì)具有四級(jí)結(jié)構(gòu)組織水平。氨基酸序列是蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。二級(jí)結(jié)構(gòu)由主鏈酰胺基和羧基之間的氫鍵模式(例如α螺旋、β-折疊)來限定，而不考慮側(cè)鏈_主鏈和側(cè)鏈_側(cè)鏈氫鍵。多肽鏈的完整三維組織一三級(jí)結(jié)構(gòu)，是其中蛋白質(zhì)的片層和螺旋二級(jí)結(jié)構(gòu)在它們自己之上折疊以限定三維結(jié)構(gòu)的方式。四級(jí)結(jié)構(gòu)是指形成為多于一條多肽鏈的復(fù)合體的蛋白質(zhì)分子的完整結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域是或多或少彼此獨(dú)立折疊形成球狀緊密結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)單位。結(jié)構(gòu)域通常含有約40-約350個(gè)氨基酸，是模塊化的單位，很多大蛋白由其構(gòu)成。蛋白質(zhì)的不同結(jié)構(gòu)域通常與不同功能相關(guān)。任何多肽鏈采用的最終折疊結(jié)構(gòu)或構(gòu)象通常是自由能最小的結(jié)構(gòu)。1.激酶激酶是催化磷酰基從磷酸供體(通常為腺苷-5' _三磷酸(ATP))到受體底物的轉(zhuǎn)移反應(yīng)的十分普遍的酶群。盡管所有激酶基本上催化相同的磷?；D(zhuǎn)移反應(yīng)，但它們?cè)谄涞孜锾禺愋?、結(jié)構(gòu)和它們所參與的途徑方面表現(xiàn)出顯著的多樣性。對(duì)所有能得到的激酶序列(大約60，000個(gè)序列)的最近期分類表明，激酶可分組成25個(gè)同源蛋白質(zhì)家族。這些激酶家族基于結(jié)構(gòu)折疊的相似性進(jìn)一步組合為12個(gè)折疊組。另外，25個(gè)家族中的22個(gè)(大約為所有序列的98. 8%)屬于結(jié)構(gòu)折疊已知的10個(gè)折疊組。在其它3個(gè)家族中，多磷酸激酶形成獨(dú)特的折疊組，剩下的2個(gè)家族二者都是不可或缺的膜激酶，并構(gòu)成最后折疊組。這些折疊組不僅包括某些分布最廣泛的蛋白質(zhì)折疊，例如羅斯曼(Rossmarm)樣折疊(在拓?fù)浯涡颚?α-β-α-β中由兩個(gè)α螺旋連接的三個(gè)或更多個(gè)平行β鏈)、鐵氧還蛋白樣折疊(沿其主鏈含識(shí)別標(biāo)志β α β β α β 二級(jí)結(jié)構(gòu)的常見α+β蛋白質(zhì)折疊)、TIM桶折疊 (意指由沿肽主鏈交替出現(xiàn)的8個(gè)α-螺旋和8個(gè)平行鏈組成的保守的蛋白質(zhì)折疊) 和反平行桶折疊(β桶是扭轉(zhuǎn)卷曲形成密閉結(jié)構(gòu)的大折疊，其中第一條鏈由氫鍵合到最后一條鏈)，而且還包括蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的所有的主要類別(所有α、所有β、α + β、α / β)。在折疊組內(nèi)，每一家族的核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核心具有相同的結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)核心的拓?fù)鋵W(xué)通過循環(huán)排列相同或相關(guān)。未暗示折疊組內(nèi)家族間的同源性。I組(23，124個(gè)序列)激酶包括蛋白S/T-Y激酶、非典型蛋白激酶、脂質(zhì)激酶和 ATP抓握(grasp)酶，并進(jìn)一步包括蛋白S/T-Y激酶和非典型蛋白激酶家族(22，074個(gè)序列)。這些激酶包括膽堿激酶(EC 2. 7. 1，32)；蛋白激酶(EC 2. 7. 137)；磷酸化酶激酶 (EC 2. 7. 1. 38)；高絲氨酸激酶(EC 2. 7. 1. 39) ；I-磷脂酰肌醇 4-激酶(EC 2. 7. 1. 67)； 鏈霉素6-激酶(EC 2. 7. 1.72)；乙醇胺激酶(EC 2. 7. 1. 82)；鏈霉素3 ‘-激酶(EC 2. 7. 1. 87)；卡那霉素激酶(EC 2，7. 1. 95) ；5-甲硫核糖激酶(EC 2. 7. 1. 100)；紫霉素激酶 (EC 2. 7. 1. 103)；[羥甲基戊二酰-CoA還原酶(NADPH2)]激酶(EC 2. 7. 1. 109)；蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶(EC 2.7. 1. 112)；[異檸檬酸脫氫酶(NADP+)]激酶(EC 2.7. 1. 116)；[肌球蛋白輕鏈]激酶(EC 2. 7. 1. 117)；潮霉素-B激酶(EC 2. 7. 1. 119)；鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶(EC 2. 7. 1. 123)；視紫紅質(zhì)激酶(EC 2. 7. 1. 125) ；[β-腎上腺素能受體]激酶(EC 2，7. 1. 126)；[肌球蛋白重鏈]激酶(EC 2. 7. 1. 129) ； [Tau 蛋白]激酶(EC 2. 7. 1. 135)； 大環(huán)內(nèi)酯2'-激酶(EC 2. 7. 1. 136) ；I-磷脂酰肌醇3-激酶(EC 2. 7. 1. 137) ； [RNA-聚合酶]-亞基激酶(EC 2. 7. 1. 141)；磷脂酰肌醇-4，5- 二磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 153)；和磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 154)。I組進(jìn)一步包括脂質(zhì)激酶家族(321個(gè)序列)。 這些激酶包括I-磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1. 68) ；ID-肌醇-三磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 127)；肌醇-四磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1，140) ； I-磷脂酰肌醇_5_磷酸4-激酶(EC 2. 7. 1. 149) ； I-磷脂酰肌醇_3_磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1. 150)；肌醇-多磷酸多激酶(EC 2. 7. 1. 151)；和肌醇-六磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 21)。I組進(jìn)一步包括ATP抓握激酶 (729個(gè)序列)，所述激酶包括肌醇-四磷酸I-激酶(EC 2.7.1.134)；丙酮酸磷酸二激酶(EC 2. 7. 9. 1)；和丙酮酸、水二激酶(EC 2. 7. 9. 2)。II組(17071個(gè)序列)激酶包括羅斯曼樣激酶。II組包括P-環(huán)激酶家族 (7732個(gè)序列)。這些包括葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 12)；磷酸核酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 19)； 胸苷激酶(EC 2.7. 1.21)；核糖基煙酰胺激酶(EC 2. 7. 1. 22)；脫磷酸-CoA激酶(EC 2.7. 1.24)；腺苷酰硫酸激酶(EC 2.7. 1.25)；泛酸激酶(EC 2. 7. 1. 33)；蛋白激酶(細(xì)菌)(EC 2.7. 1.37)；尿苷激酶(EC 2. 7. 1. 48)；莽草酸激酶(EC 2. 7. 1. 71)；脫氧胞苷激酶(EC 2.7. 1.74)；脫氧腺苷激酶(EC 2. 7. 1. 76)；多核苷酸5 ‘-羥基-激酶(EC 2.7.1.78) ；6-磷酸果糖-2-激酶(EC 2.7.1.105)；脫氧鳥苷激酶(EC 2.7.1.113)；四?；?'-激酶(EC 2. 7. 1. 130)；脫氧核苷激酶(EC 2. 7. 1. 145)；腺苷鈷啉醇酰胺激酶 (EC 2. 7. 1. 156)；多磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 1)；磷酸甲羥戊酸激酶(EC 2. 7. 4. 2)；腺苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 3)；核苷-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 4)；鳥苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 8)；胸苷酸激 酶 (EC 2. 7. 4. 9)；核苷-三磷酸-腺苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 10)；(脫氧)核苷-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 13)；胞苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 14)；和尿苷酸激酶(EC 2. 7. 4. -)。II組進(jìn)一步包括烯醇丙酮酸磷酸羧激酶家族(815個(gè)序列)。這些酶包括蛋白激酶(HPr激酶/磷酸酶)(EC2. 7. 1. 37)；烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(GTP) (EC 4. 1. 1. 32)；和烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(ATP) (EC 4. 1. 1. 49)。II組進(jìn)一步包含磷酸甘油酸激酶(1351個(gè)序列)家族。這些酶包括磷酸甘油酸激酶(EC 2. 7. 2. 3)和磷酸甘油酸激酶(GTP) (EC 2. 7. 2. 10)。II組進(jìn)一步包括天冬氨酸激酶家族(2171個(gè)序列)。這些酶包括氨基甲酸激酶(EC 2. 7. 2. 2)；天冬氨酸激酶 (EC 2. 7. 2. 4)；乙酰基谷氨酸激酶(EC 2. 7. 2. 8 1)；谷氨酸5-激酶(EC 2. 7. 2. 1)和尿苷酸激酶(EC 2. 7. 4. -)。II組進(jìn)一步包括磷酸果糖激酶樣激酶家族(1998個(gè)序列)。這些酶包括6-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 11) ；NAD(+)激酶(EC 2. 7. 1. 23) ；I-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 56) ；二磷酸-果糖-6-磷酸I-磷酸轉(zhuǎn)移酶(EC 2. 7. 1. 90) ；二氫鞘氨醇激酶(EC 2. 7. 1. 91) ；二?；视图っ?EC 2. 7. 1. 107)；和神經(jīng)酰胺激酶(EC 2. 7，1. 138)。II組進(jìn)一步包括核糖激酶樣家族(2722個(gè)序列)。這些酶包括葡糖激酶(EC 2. 7. 1. 2)；己酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 3)；果糖激酶(EC 2. 7. 1. 4) ；6-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 11)；核糖激酶(EC 2. 7. 1. 15)；腺苷激酶(EC 2. 7. 1. 20)；吡哆醛激酶(EC 2. 7. 1. 35) ；2-脫氫-3-脫氧葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 45)；羥甲基嘧啶激酶(EC 2. 7. 1. 49)；羥乙基噻唑激酶(EC 2. 7. 1. 50)； I-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 56)；肌苷激酶(EC 2. 7. 1. 73) ；5-脫氫-2-脫氧葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 92)；塔格糖-6-磷酸激酶(EC 2. 7. 1. 144) ；ADP依賴性磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 146) ；ADP依賴性葡糖激酶(EC 2. 7. 1. 147)；和磷酸甲基嘧啶激酶(EC 2. 1. 4. 7)。II 組進(jìn)一步包括硫胺素焦磷酸激酶家族(175個(gè)序列)，所述激酶家族包括硫胺素焦磷酸激酶 (EC 2.7.6.2)。II組進(jìn)一步包括甘油酸激酶家族(107個(gè)序列)，所述激酶家族包括甘油酸激酶((EC 2. 7. 1.31) ο
III組激酶(10973個(gè)序列)包括鐵氧還蛋白樣折疊激酶。III組進(jìn)一步包括核苷_ 二磷酸激酶家族(923個(gè)序列)。這些酶包括核苷-二磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 6)。III組進(jìn)一步包括HPPK激酶家族(609個(gè)序列)。這些酶包括2-氨基-4-羥基-6-羥甲基二氫蝶啶焦磷酸激酶(EC 2. 7. 6. 3)。III組進(jìn)一步包括胍基激酶家族(324個(gè)序列)。這些酶包括胍乙酸激酶(EC 2. 7. 3. 1)；肌氨酸激酶(EC 2. 7. 3. 2)；精酸激酶(EC 2. 7. 3. 3)；和蚯蚓磷脂激酶(EC 2. 7. 3. 5)。III組進(jìn)一步包括組氨酸激酶家族(9117個(gè)序列)。這些酶包括蛋白激酶(組氨酸激酶)(EC 2.7.1.37)；[丙酮酸脫氫酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7.1.99)； 和[3-甲基-2-氧丁酸脫氫酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7. 1. 115)。IV組激酶(2768個(gè)序列)包括核糖核酸酶H-樣激酶。這些酶包括己糖激酶(EC 2.7. 1. 1)；葡糖激酶(EC 2.7. 1.2)；果糖激酶(EC 2.7. 1.4)；鼠李樹膠糖激酶(EC 2.7. 1.5)；甘露糖激酶(EC 2.7. 1.7)；葡糖酸激酶(EC 2.7. 1. 12) ；L-核酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 16)；木酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 17)；赤蘚糖醇激酶(EC 2. 7. 1. 27)；甘油激酶(EC 2. 7. 1.30)；泛酸激酶(EC 2.7.1.33) ；D-核酮糖激酶(EC 2.7.1.47) ；L-巖藻酮糖激酶(fucolokinase) (EC 2.7.1.51) ；L-木酮糖激酶(EC 2.7.1.53)；阿洛糖激酶(EC 2.7.1.55) ；2-脫氫-3-脫氧半乳糖酸激酶(EC 2.7.1.58) ；N-乙酰葡糖胺激酶(EC 2.7.1.59) ；N-酰基甘露糖胺激酶(EC 2. 7. 1. 60)；多磷酸-葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶 (EC 2. 7. 1.63) 糖苷激酶(EC 2. 7. 1. 85)；乙酸激酶(EC 2. 7. 2. 1) ； 丁酸激酶(EC 2. 7. 2. 7)；支鏈-脂肪酸-激酶(EC 2. 7. 2. 14)；和丙酸激酶(EC 2. 7. 2.-)。V組激酶(1119個(gè)序列)包括ΤΙΜβ/α-桶激酶。這些酶包括丙酮酸激酶(EC 2. 7. 1. 40)。
VI組激酶(885個(gè)序列)包括GHMP激酶。這些酶包括半乳糖激酶(EC 2.7. 1.6)； 甲羥戊酸激酶(EC 2.7. 1.36)；高絲氨酸激酶(EC 2.7.1.39) ；L-阿拉伯糖激酶(EC 2. 7. 1. 46)；巖藻糖激酶(EC 2. 7. 1. 52)；莽草酸激酶(EC 2. 7. 1. 71) ;4_ (胞苷 5 ‘ -二磷酸)-2-C-甲基-D-赤蘚糖醇激酶(EC 2. 7. 1. 148)；和磷酸甲羥戊酸激酶(EC 2. 7. 4. 2)。VII組激酶(1，843個(gè)序列)包括AIR合成酶樣激酶。這些酶包括硫胺素-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 16)和硒化物、水二激酶(EC 2. 7. 9. 3)。VIII組激酶(565個(gè)序列)包括核黃素激酶(565個(gè)序列)。這些酶包括核黃素激酶(EC 2. 7. 1. 26)。IX組激酶(197個(gè)序列)包括二羥基丙酮激酶。這些酶包括甘油酮激酶(EC 2. 7. 1. 29)。 X組激酶(148個(gè)序列)包括推定的甘油酸激酶。這些酶包括甘油酸激酶(EC 2. 7. 1. 31)。XI組激酶(446個(gè)序列)包括多磷酸激酶。這些酶包括多磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 1)。XII組激酶(263個(gè)序列)包括整合膜激酶。XII組包括多萜醇激酶家族。這些酶包括多萜醇激酶(EC 2. 7. 1. 108)。XII組進(jìn)一步包括十一萜醇激酶家族。這些酶包括十一萜醇激酶(EC 2. 7. 1. 66)。激酶在多種細(xì)胞代謝及信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起著必不可少的作用，它們屬于在結(jié)構(gòu)、 生物化學(xué)及細(xì)胞水平方面研究最徹底的酶。盡管事實(shí)上所有激酶使用相同的磷酸供體(大部分情況下為ATP)，并且表面上催化同樣的磷?；D(zhuǎn)移反應(yīng)，但它們?cè)谄浣Y(jié)構(gòu)折疊及底物識(shí)別機(jī)制方面表現(xiàn)出顯著的多樣性。這很大程度上是由于它們底物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)極為多樣化的特性。2.促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶(MK2和MK3)不同組的MAPK活化蛋白激酶(MAP-KAPK)界定了促分裂原活化蛋白激酶(MAPK) 下游。這些酶將信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到并非為MAPK直接底物的靶標(biāo)蛋白，因此，起著用MAPK級(jí)聯(lián)將磷酸化依賴的信號(hào)傳遞轉(zhuǎn)到多種細(xì)胞功能的作用。由三種MAPKAPK形成這些組之一 MK2、 MK3 (亦稱為3pK)和ΜΚ5 (亦定名為PRAK)。促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2 (亦稱為“ΜΑΡΚΑΡΚ2”、“ΜΑΡΚΑΡ-Κ2”、“ΜΚ2”)是絲氨酸/蘇氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶家族的激酶。 MK2與MK3高度同源(大約75%氨基酸同一性)。MK2和MK3的激酶結(jié)構(gòu)域與鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶(CaMK)、磷酸化酶b激酶和核糖體S6激酶(RSK)同種型的C-末端激酶結(jié)構(gòu)域(CTKD)最相似(大約35% -40%同一性)。mk2基因編碼兩種可變剪接的370個(gè)氨基酸(MK2A)和400個(gè)氨基酸(MK2B)的轉(zhuǎn)錄物。mk3基因編碼一個(gè)382個(gè)氨基酸的轉(zhuǎn)錄物。 MK2蛋白和MK3蛋白高度同源，但MK2A具有較短的C-末端區(qū)。MK2B的C-末端含有較短的 MK2A同種型中不存在的功能二分的核定位序列(NLS) (Lys-Lys-Xaa10-Lys-Arg-Arg-Lys-L ys)，表明可變剪接決定MK2同種型的細(xì)胞定位。MK3具有相似的核定位序列。在MK2B和 MK3 二者中發(fā)現(xiàn)的核定位序列都包含D結(jié)構(gòu)域(Leu-Leu-Lys-Arg-Arg-Lys-Lys)，研究顯示所述D結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)MK2B和MK3與ρ38 α和ρ38 β之間的特異性相互作用。ΜΚ2Β和ΜΚ3亦具有位于NLS和D結(jié)構(gòu)域的N-末端的功能核輸出信號(hào)(NES)。ΜΚ2Β中的NES足以在刺激后引發(fā)核輸出，該過程可用來普霉素B抑制。ΜΚ2和ΜΚ3中的催化結(jié)構(gòu)域的N-末端序列富含脯氨酸，并含有一個(gè)(ΜΚ3)或兩個(gè)(ΜΚ2)推定的Src同源3(SH3)結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點(diǎn)，研究顯示，對(duì)于MK2而言其介導(dǎo)體外與c-Abl的SH3結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。最近的研究表明，該結(jié)構(gòu)域參與MK2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移。MK2B和MK3主要位于靜止細(xì)胞的細(xì)胞核中，而MK2A存在于細(xì)胞質(zhì)中。MK2B和MK3 二者都在應(yīng)激刺激后經(jīng)由染色體區(qū)維持蛋白(chromosome region maintenance protein , CRM1)依賴性機(jī)制迅速輸出到細(xì)胞質(zhì)中。MK2B的核輸出似乎是通過激酶激活介導(dǎo)，因?yàn)榧っ傅募せ瞽h(huán)內(nèi)的Thr334的模擬磷酸化突變(phosphomimetic mutation)提高M(jìn)K2B的細(xì)胞質(zhì)定位。不受理論的束縛，認(rèn)為MK2B和MK3可含有組成型活性NLS和磷酸化調(diào)節(jié)的NES。MK2和MK3似乎遍在表達(dá)，主要是在心臟、骨骼肌和腎臟組織中表達(dá)。2. 1.激活ρ38α和ρ38 β的各種激活劑有效刺激ΜΚ2和ΜΚ3活性。ρ38在四個(gè)脯氨酸定向位置介導(dǎo)ΜΚ2的體外和體內(nèi)磷酸化Thr25、Thr222、Ser272和Thr334。這些位置中只有 Thr25在MK3中是非保守的。不受理論的束縛，盡管尚不知道磷酸化Thr25的功能，但其在兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點(diǎn)之間的位置，提示其可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)之間的相互作用。MK2中的 Thr222 (MK3中的Thr201)位于激酶結(jié)構(gòu)域的激活環(huán)中，業(yè)已證明其對(duì)MK2和MK3激酶活性不必可少。MK2中的Thr334 (MK3中的Thr313)位于催化結(jié)構(gòu)域的C-末端，并對(duì)激酶活性必不可少。業(yè)已解析MK2的晶體結(jié)構(gòu)，在不受理論的束縛的情況下，該晶體結(jié)構(gòu)表明Thr334 磷酸化對(duì)MK2核輸入和輸出起開關(guān)作用。Thr334磷酸化亦可減弱或干擾MK2的C末端與催化結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，這暴露了 NES并促進(jìn)核輸出。研究顯示，盡管p38能夠在細(xì)胞核中使MK2和MK3活化，但實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明MK2和MK3 的激活和核輸出偶聯(lián)磷酸化依賴性構(gòu)象開關(guān)，所述開關(guān)亦支配P38的穩(wěn)定性和定位，p38本身的細(xì)胞定位受MK2并可能受MK3控制。另外的研究顯示，在磷酸化并激活MK2后，細(xì)胞核 P38呈與MK2的復(fù)合物輸出到細(xì)胞質(zhì)中。p38和MK2之間的相互作用對(duì)于p38的穩(wěn)定性可能重要，因?yàn)檠芯勘砻髟贛K2缺陷型細(xì)胞中p38水平低，并且無(wú)催化活性的MK2蛋白的表達(dá)恢復(fù)P38水平。2. 2.底物和功能MK2與MK3共享很多底物。兩種酶具有類似的底物偏好，且以相似的動(dòng)力學(xué)常數(shù)使肽底物磷酸化。發(fā)現(xiàn)被MK2有效磷酸化所需的最小序列為Hyd-Xaa-Arg-Xaa-Xaa-pSer/ Thr，其中Hyd為體積大的疏水殘基。實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持p38在調(diào)節(jié)細(xì)胞因子生物合成和細(xì)胞遷移中的作用。定向缺失小鼠的mk2基因表明，盡管p38介導(dǎo)很多相似激酶的激活，但MK2似乎是負(fù)責(zé)這些p38依賴性生物過程的關(guān)鍵激酶。失去MK2導(dǎo)致(i)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的細(xì)胞因子例如腫瘤壞死因子 α (TNFa)、白介素-6(IL_6)和、干擾素(IFN-γ)合成缺陷；和(ii)改變小鼠胚胎胎成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的遷移。與MK2在炎性反應(yīng)中的作用一致，MK2缺陷型小鼠顯示對(duì)單核細(xì)胞增生利斯特氏特菌(Listeria monocytogenes)感染的易感性提高， 和局灶性缺血后炎癥介導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡降低。因?yàn)樵贛K2缺陷型細(xì)胞中亦顯著降低p38 蛋白水平，分清這些表型是否僅僅由于失去MK2是必要的。為達(dá)到此目的，在MK2缺陷型細(xì)胞中表達(dá)MK2突變體，結(jié)果表明，MK2催化活性對(duì)于恢復(fù)p38水平并不必要，但卻為調(diào)節(jié)細(xì)胞因子生物合成所需。2. 3. mRNA翻譯的調(diào)節(jié)
研究顯示，MK2通過提高TNF α的mRNA的翻譯速率來提高TNF α產(chǎn)生；在ΜΚ2缺陷型小鼠中不能檢測(cè)到TNFa轉(zhuǎn)錄、加工和釋放的明顯降低。已知p38途徑在調(diào)節(jié)mRNA穩(wěn)定性中起重要作用，MK2代表p38通過其來介導(dǎo)該功能的很可能靶標(biāo)。用MK2缺陷型小鼠進(jìn)行研究表明，MK2的催化活性為其對(duì)細(xì)胞因子產(chǎn)生及遷移的作用所必需，在不受理論的束縛的情況下，這表明MK2使涉及mRNA穩(wěn)定性的靶標(biāo)磷酸化。與此一致，MK2顯示結(jié)合和/ 或磷酸化不均一核的核糖核蛋白(hnRNP)AO、tristetraprolin、聚(A)-結(jié)合蛋白PABPl和 HuR(遍在表達(dá)的RNA結(jié)合蛋白的elav(黃猩猩果蠅(Drospholia melanogaster)中的胚胎致性異常視覺)家族成員)。已知這些底物與在3'非翻譯區(qū)富含AU元件的mRNA結(jié)合或共純化，這表明MK2可調(diào)節(jié)富含AU的mRNA例如TNF α的穩(wěn)定性。目前尚不知道ΜΚ3是否起相似作用，但ΜΚ2缺陷型成纖維細(xì)胞的LPS處理完全廢除了 hnRNPAO的磷酸化，這表明 MK3不能補(bǔ)償MK2的損失。 MK3與MK2 —起參與真核生物延伸因子2 (eEF2)激酶的磷酸化。eEF2激酶使eEF2 磷酸化并使其鈍化。eEF2活性對(duì)于翻譯期間的mRNA延伸很關(guān)鍵，eEF2在Thr56上的磷酸化導(dǎo)致終止mRNA翻譯。eEF2激酶在Ser377上的MK2和MK3磷酸化，表明這些酶可調(diào)節(jié)eEF2 激酶活性并藉此調(diào)節(jié)mRNA翻譯的延伸。2. 4.通過MK2和MK3的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)與很多MK相似，細(xì)胞核MK2促進(jìn)cAMP應(yīng)答元件結(jié)合(CREB)蛋白、血清應(yīng)答因子 (SRF)和轉(zhuǎn)錄因子ER81的磷酸化。野生型和MK2缺陷型細(xì)胞的比較顯示，MK2是應(yīng)激誘導(dǎo)的主要SRF激酶，這提示MK2在應(yīng)激介導(dǎo)的立即早期應(yīng)答中的作用。MK2和MK3 二者都在體內(nèi)與堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子E47相互作用，并在體外使E47磷酸化。發(fā)現(xiàn)MK2介導(dǎo)的E47磷酸化抑制E47的轉(zhuǎn)錄活性，并藉此抑制E47依賴性基因表達(dá)，這表明MK2和MK3可調(diào)節(jié)組織特異性基因表達(dá)及細(xì)胞分化。 2. 5. MK2和MK3的其它靶標(biāo)亦鑒別了幾種其它MK2和MK3底物，所述底物反映了 MK2和MK3在若干生物學(xué)過程中的多樣功能。支架蛋白14-3-3ζ是生理性ΜΚ2底物。研究表明，14-3-3ζ與多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑組分相互作用，所述組分包括蛋白激酶、磷酸酶和轉(zhuǎn)錄因子。另外的研究顯示，ΜΚ2介導(dǎo)的14-3-3 ζ在Ser58上的磷酸化危及其結(jié)合活性，這表明MK2可影響幾種通常受14-3-3 ζ調(diào)節(jié)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的調(diào)節(jié)。另外的研究顯示，ΜΚ2亦與7元Arp2和Arp3復(fù)合物的pl6亞基(pl6_Arc)相互作用并使其在Ser77上磷酸化。pl6-Arc在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)中起作用，這表明MK2可參與該過程。另外的研究顯示，MK2使小的熱休克蛋白HSP27、淋巴細(xì)胞特異性蛋白LSP-I 和波形蛋白磷酸化。HSP27尤其引人關(guān)注，因?yàn)槠湫纬纱蠊丫畚?，所述大寡聚物可起分子伴侶作用并保護(hù)細(xì)胞免遭熱休克和氧化應(yīng)激。HSP27在磷酸化后即失去其形成大寡聚物的能力，且不能阻斷肌動(dòng)蛋白聚合，這表明MK2介導(dǎo)的HSP27的磷酸化起自身穩(wěn)定作用，自身穩(wěn)定的目標(biāo)是調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)，否則在應(yīng)激期間肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)將失穩(wěn)。MK3亦顯示在體外和體內(nèi)使HSP27磷酸化，但尚未闡明其在應(yīng)激情況期間的作用。MK2和MK3亦可使5_脂加氧酶磷酸化。5_脂加氧酶催化炎性中介物白細(xì)胞三烯形成的初始步驟。亦顯示MK2使酪氨酸羥化酶、糖原合酶和Akt磷酸化。最后，MK2使腫瘤阻抑蛋白馬鈴薯球蛋白(tuberin)的Serl210磷酸化，形成了 14_3_3的?？课稽c(diǎn)。馬鈴薯球蛋白和錯(cuò)構(gòu)素(hamartin)通常形成功 能復(fù)合物，所述復(fù)合物通過拮抗mTOR依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，這表明P38-介導(dǎo)的MK2激活可通過提高14-3-3與馬鈴薯球蛋白的結(jié)合來調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)。3.激酶抑制真核生物蛋白激酶構(gòu)成通過其催化結(jié)構(gòu)域而相關(guān)聯(lián)的最大的同源蛋白超家族之一。最相關(guān)的蛋白激酶特異性針對(duì)絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸磷酸化。蛋白激酶在細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外刺激物的應(yīng)答中起不可或缺的作用。因此，認(rèn)為蛋白激酶的刺激是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中最常見的激活機(jī)制之一。已知很多底物通過多種蛋白激酶經(jīng)歷磷酸化。業(yè)已出版了關(guān)于各種蛋白激酶的催化結(jié)構(gòu)域的一級(jí)序列的大量信息。這些序列共享參與ATP結(jié)合、催化作用和保持結(jié)構(gòu)完整性的大量殘基。大部分蛋白激酶具有極為保守的30-32kDa的催化結(jié)構(gòu)域。研究已試圖鑒定和利用蛋白激酶的調(diào)節(jié)元件。這些調(diào)節(jié)元件包括抑制劑、抗體和封閉肽。3. 1.抑制劑酶抑制劑是與酶結(jié)合并藉此降低酶活性的分子。結(jié)合抑制劑可阻止底物進(jìn)入酶的活性位點(diǎn)和/或妨礙酶催化其反應(yīng)。抑制劑結(jié)合可逆或不可逆。不可逆抑制劑通常與酶作用并在化學(xué)上使其改變(例如通過修飾酶活性所需的關(guān)鍵氨基酸殘基)，以使其不再能夠催化其反應(yīng)。與此相反，可逆抑制劑非共價(jià)結(jié)合，根據(jù)這些抑制劑是否結(jié)合酶、酶-底物復(fù)合物或二者而產(chǎn)生不同的抑制類型。酶抑制劑通常通過其特異性和效價(jià)來評(píng)估。在本文范圍內(nèi)所用的術(shù)語(yǔ)“特異性” 是指抑制劑與其它蛋白質(zhì)的選擇性連接或其沒有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合。本文所用術(shù)語(yǔ)“效價(jià)” 是指抑制劑的解離常數(shù)，所述常數(shù)表示抑制酶所需的抑制劑的濃度。已研究用作蛋白激酶活性調(diào)節(jié)工具的蛋白激酶抑制劑。業(yè)已研究了將抑制劑用于例如細(xì)胞周期蛋白-依賴性(Cdk)激酶、MAP激酶、絲氨酸/蘇氨酸激酶、Src家族蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸激酶、鈣調(diào)蛋白(CaM)激酶、酪蛋白激酶、限制點(diǎn)激酶(Chkl)、糖原合酶激酶3(GSK-3)、c-Jim N-末端激酶(JNK)、促分裂原活化蛋白激酶1 (MEK)、肌球蛋白輕鏈激酶 (MLCK)、蛋白激酶A、Akt (蛋白激酶B)、蛋白激酶C、蛋白激酶G、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶、Raf激酶和Rho激酶。3. 2.抗體抗體為血清蛋白，其分子具有與其靶標(biāo)上的小化學(xué)基團(tuán)互補(bǔ)的表面小面積。每個(gè)抗體分子至少有2個(gè)所述互補(bǔ)區(qū)(稱為抗體結(jié)合位點(diǎn)或抗原結(jié)合位點(diǎn))，在某些類型的抗體分子中有10個(gè)、8個(gè)，或在某些種類中多至12個(gè)互補(bǔ)區(qū)，它們可與抗原上其相應(yīng)的互補(bǔ)區(qū) (抗原決定簇或表位)互相作用以將多價(jià)抗原的若干分子連接在一起形成網(wǎng)格(lattice)。全抗體分子的基本結(jié)構(gòu)單位由四條多肽鏈組成，兩條相同的輕鏈(L)(每一條含有約220個(gè)氨基酸)和兩條相同的重鏈(H)(每一條通常含有約440個(gè)氨基酸)。兩條重鏈和兩條輕鏈通過非共價(jià)鍵和共價(jià)鍵(二硫鍵)組合結(jié)合在一起。所述分子包含兩個(gè)相同的一半，每一個(gè)含有相同的抗原結(jié)合位點(diǎn)，包含輕鏈N-末端區(qū)和重鏈N-末端區(qū)。輕鏈和重鏈二者通常合作形成抗原結(jié)合表面。人抗體表現(xiàn)兩種輕鏈κ和λ ；免疫球蛋白的各個(gè)分子通常僅有一種或另一種。在正常血清中，發(fā)現(xiàn)60%的分子具有κ決定簇，30%為λ。發(fā)現(xiàn)很多其它物種顯示兩種輕鏈，但其比例不同。例如，小鼠和大鼠中有λ鏈但整體百分比很??；在狗和貓中，K鏈極低；馬未顯示具有任何K鏈；兔可具有5-40%的λ，視品系和b-基因座同種異型而定；和雞輕鏈與λ比與κ更同源。在哺乳動(dòng)物中，有5類抗體IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，每一種有其自己的重鏈種類-α (對(duì)于IgA)、δ (對(duì)于IgD)、ε (對(duì)于IgE)、Y (對(duì)于IgG)和μ (對(duì)于IgM)。另外， 有分別具有Y 1、Y 2、γ 3和γ 4重鏈的4種IgG免疫球蛋白亞類(IgG1UgG^ IgG3、IgG4)。 IgM在其分泌形式中為五聚物，由5個(gè)4-鏈單元組成，共提供10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。每個(gè)五聚物含有一個(gè)J鏈拷貝，其共價(jià)插入到兩個(gè)相鄰的尾區(qū)之間。所有5種免疫球蛋白種類不同于其它血清蛋白質(zhì)，因?yàn)樗鼈冿@示寬范圍的電泳遷移率且不均一。這種異質(zhì)性——即單個(gè)IgG分子例如在靜電荷方面彼此不同——是免疫球蛋白的固有性質(zhì)。可通過讓來自免疫供體的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系融合產(chǎn)生確立的小鼠雜交瘤克隆來產(chǎn)生單克隆抗體(mAb)，所述小鼠雜交瘤克隆在選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。雜交瘤細(xì)胞為永生化雜交細(xì)胞，其因分泌抗體的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞在體外融合而產(chǎn)生。體外免疫是指初次激活培養(yǎng)中的抗原特異性B細(xì)胞，這是另一種已廣泛接受的產(chǎn)生小鼠單克隆抗體的手段。亦可通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增來擴(kuò)增來自外周血淋巴細(xì)胞的免疫球蛋白重鏈(Vh)和輕鏈(Vk和VJ可變基因的多種庫(kù)?？赏ㄟ^用PCR讓重鏈和輕鏈V-基因隨機(jī)組合，來制備編碼單個(gè)多肽鏈的基因，所述多肽鏈中重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域經(jīng)由多肽間隔物 (單鏈Fv或scFv)連接。然后可通過與噬菌體末端的次要衣殼蛋白融合來克隆用于在絲狀噬菌體表面展示的組合庫(kù)。指導(dǎo)選擇的技術(shù)基于用嚙齒動(dòng)物免疫球蛋白V基因的人免疫球蛋白V基因改組。 所述方法需要(i)用小鼠單克隆抗體的重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域改組人λ輕鏈譜，所述小鼠單克隆抗體與目的抗原有反應(yīng)性；(ii)選擇針對(duì)該抗原的半-人Fab; (iii)在第二次改組中用所選擇的λ輕鏈基因作為人重鏈庫(kù)的“?？拷Y(jié)構(gòu)域(docking domain)”，以分離具有人輕鏈基因的克隆Fab片段；(ν)通過用含有所述基因的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體電穿孔來轉(zhuǎn)染小鼠骨髓瘤細(xì)胞；和(vi)表達(dá)Fab的V基因，其作為完整的IgGl與抗原反應(yīng)，該 IgGl為小鼠骨髓瘤λ抗體分子。舉例而言，本文所用術(shù)語(yǔ)“抗體”包括天然存在和非天然存在的抗體二者。具體而言，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括多克隆抗體和單克隆抗體及其片段。此外，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括嵌合抗體和全合成抗體及其片段。抗原決定簇或表位為分子上的抗原位點(diǎn)。連續(xù)的抗原決定簇/表位基本上是線性鏈。在規(guī)則結(jié)構(gòu)例如螺旋狀聚合物或蛋白質(zhì)中，抗原決定簇/表位基本上是該結(jié)構(gòu)表面內(nèi)或表面上的限定區(qū)或小塊，其包括來自分子不同部分能彼此靠近的氨基酸側(cè)鏈。這些為構(gòu)象性決定簇。本文所用表位可為激酶抑制肽上的抗原決定簇/抗原結(jié)合位點(diǎn)。表位可為相關(guān)的一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)序列?；パa(bǔ)性原理(通常與鎖鑰適合性比較)涉及相對(duì)弱的結(jié)合力(疏水鍵和氫鍵、范德華力和離子相互作用)，只有當(dāng)兩個(gè)反應(yīng)分子彼此可極為接近并實(shí)際上接近到一個(gè)分子的突出組成原子或原子基團(tuán)可融入另一個(gè)分子的互補(bǔ)凹陷或凹槽時(shí)，所述弱結(jié)合力才能有效發(fā)揮作用。抗原-抗體相互作用顯示高度特異性，所述特異性以多種水平顯示。就分子水平而言，特異性意指抗體與抗原的結(jié)合位點(diǎn)具有與非相關(guān)抗原的抗原決定簇完全不相似的互補(bǔ)性。在兩個(gè)不同抗原的抗原決定簇具有某種結(jié)構(gòu)相似性時(shí)，一個(gè)決定簇可能對(duì)另一個(gè)決定簇的某些抗體的結(jié)合位點(diǎn)出現(xiàn)某種程度的適合，這種現(xiàn)象產(chǎn)生交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)在理解抗原-抗體反應(yīng)的互補(bǔ)性或特異性中具有重要意義。免疫學(xué)特異性或互補(bǔ)性，使得檢測(cè)抗原中的少量雜質(zhì)/污染物成為可能。業(yè)已研究將某些抗體和蛋白激酶之間相互作用的特異性用于蛋白激酶活性調(diào)節(jié)。 業(yè)已將抗體分離用于例如MAP激酶途徑、蛋白激酶A、蛋白激酶B、蛋白激酶G、絲氨酸/蘇氨酸激酶、糖原合酶激酶-3(GSK-3)、應(yīng)激活化蛋白(SAP)激酶途徑和酪氨酸激酶。另外，業(yè)已將抗體分離用于蛋白激酶抑制劑和蛋白激酶底物。
3. 3.封閉肽肽為由兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸的鏈組成的化合物，其中鏈中的一個(gè)氨基酸的羧基經(jīng)由肽鍵與另一個(gè)氨基酸的氨基連接。肽已尤其用于研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。合成肽尤其可用作探測(cè)物以探測(cè)蛋白質(zhì)-肽相互作用發(fā)生的位置。抑制性肽尤其可用于臨床研究以檢查肽對(duì)蛋白激酶、癌蛋白和其它病癥抑制的作用。業(yè)已研究了數(shù)種封閉肽的應(yīng)用。例如，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)，這是對(duì)細(xì)胞增殖和分化必不可少的MAPK蛋白激酶。MAPK激活需要級(jí)聯(lián)機(jī)制，藉此MAPK通過上游 MAPKK(MEK)被磷酸化，MAPKK又被第三激酶MAPKKK (MEKK)磷酸化。ERK抑制肽通過與ERK 結(jié)合起MEK誘鉺的作用。其含有MEKl的氨基-末端的13個(gè)氨基酸(GMPKKKPTPIQLN) [SEQ ID NO 1]并與ERK結(jié)合。這阻斷MEK對(duì)ERK的激活，因?yàn)镋RK不能與MEK相互作用。ERK 抑制肽亦含有源自觸角足(Antennapedia)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)(PTD)序列(DRQIKIWFQNRRMKWKK) [SEQ ID NO :2]，所述序列使得肽可滲透細(xì)胞。其它封閉肽包括autocamtide-2相關(guān)抑制肽(AIP)。該合成肽具有高度特異性，是 Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II (CaMKII)的有效抑制劑。AIP是autocamtide-2的不能磷酸化的類似物，是CaMKII的高選擇性肽底物。AIP以IOOnM的IC5tl (IC5tl是獲得50%抑制所需的抑制劑濃度)抑制CaMKII。AIP抑制對(duì)于syntide-2 (CaMKII肽底物)和ATP為非競(jìng)爭(zhēng)性的，但對(duì)于autocamtide-2為競(jìng)爭(zhēng)性的。抑制不受是否存在Ca2+/鈣調(diào)蛋白的影響。 CaMKII活性完全被AIP (1 μ Μ)抑制，而PKA、PKC和CaMKIV不受影響。AIP的氨基酸序列為 KKALRRQEAVDAL(Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Ala-Val-Asp-Ala-Leu)[SEQ ID NO 3]。其它封閉肽包括細(xì)胞分裂蛋白激酶5(Cdk5)抑制肽(CIP)。Cdk5當(dāng)與p25締合時(shí)，使阿爾茨海默氏病特異性磷酸化表位的微管蛋白tau磷酸化。p25是截短的激活劑，其在生理Cdk5激活劑p35與淀粉樣蛋白β(Α丨)肽接觸后產(chǎn)生。當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞感染CIP后， CIP選擇性抑制p25/Cdk5活性，并阻抑皮層神經(jīng)元中異常的tau磷酸化。由CIP所顯示的特異性的原因尚未完全了解。業(yè)已研究以下將另外的封閉肽用于細(xì)胞外調(diào)節(jié)性激酶2 (ERK2)、ERK3、p38/ H0G1、蛋白激酶C、酪蛋白激酶II、Ca2+/鈣調(diào)蛋白激酶IV、酪蛋白激酶II、Cdk4、Cdk5、DNA 依賴性蛋白激酶(DNA-PK)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PAK3、磷酸肌醇(PI)-3激酶、PI-5激酶、PSTAIRE(cdk高度保守序列)、核糖體S6激酶、GSK-4、生發(fā)中心激酶(GCK)、SAPK(應(yīng)激活化蛋白激酶)、SEKl (應(yīng)激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶)和黏著斑激酶(FAK)。3.4.蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)是能夠滲透哺乳動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)膜并能將多種類型和分子量的化合物轉(zhuǎn)運(yùn)跨過膜的肽種類。這些化合物包括效應(yīng)器分子(例如蛋白質(zhì)、DNAjf 合肽、寡核苷酸)和小顆粒(例如脂質(zhì)體)。當(dāng)PTD化學(xué)上與其它蛋白質(zhì)連接或融合時(shí)，得到的融合蛋白仍能進(jìn)入細(xì)胞。盡管不知道轉(zhuǎn)導(dǎo)的準(zhǔn)確機(jī)制，但認(rèn)為這些蛋白質(zhì)的內(nèi)化不是由受體介導(dǎo)的或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的。PTD通常長(zhǎng)10-16個(gè)氨基酸，可按其組成分類，例如富含精氨酸和/或賴氨酸的肽。能夠?qū)⑿?yīng)器分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的PTD的用途在藥物設(shè)計(jì)中越來越有吸引力， 因?yàn)槠浯龠M(jìn)細(xì)胞吸收貨物分子。這些通常視其序列分為兩親(意指具有極性及非極性兩端)或陽(yáng)離子的細(xì)胞滲透性肽，為大分子提供非侵入式遞送技術(shù)。PTD通常亦被稱為“特洛伊肽(Trojan ρ印tide) ”、“膜易位序列”或“細(xì)胞滲透性蛋白”(CPP)。PTD亦可用于幫助新型HSP27激酶抑制劑滲透細(xì)胞膜(參見2008年1月10提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào) 11/972，459，標(biāo)題為“Polyp印tic Inhibitors of HSP27 Kinase and Uses Thereof (HSP27 激酶的多肽抑制劑及其用途)”;和2008年8月7日提交的序號(hào)12/188，109，標(biāo)題為“Kinase Inhibitors and Uses Thereof (激酶抑制劑及其用途)”，以其整體在此引作參考)。3. 4. 1.含有病毒PTD的蛋白闡述為具有轉(zhuǎn)導(dǎo)性質(zhì)的第一種蛋白為病毒來源的蛋白。這些蛋白仍為用于PTD作用的最常用的模型。HIV-I轉(zhuǎn)錄反式激活蛋白(TAT)和HSV-I VP 22蛋白是表征最為清楚的含病毒PTD的蛋白。TAT(HIV-1反式激活蛋白基因產(chǎn)物)是86個(gè)氨基酸的多肽，其作為整合的HIV-I 基因組的強(qiáng)力轉(zhuǎn)錄因子起作用。TAT在潛伏感染的細(xì)胞中對(duì)病毒基因組作用刺激病毒復(fù)制。 TAT蛋白的易位特性使得其能夠激活靜止的被感染細(xì)胞，其可通過調(diào)節(jié)包括細(xì)胞因子在內(nèi)的多種細(xì)胞基因來參與引發(fā)未感染細(xì)胞的隨后感染。TAT的最小PTD是9個(gè)氨基酸的蛋白序列RKKRRQRRR(TAT49_57) [SEQ ID NO :4]。用較長(zhǎng)TAT片段進(jìn)行的研究成功顯示轉(zhuǎn)導(dǎo)了大至 120kDa的融合蛋白。加入多種TAT-PTD以及合成TAT衍生物業(yè)已顯示可介導(dǎo)膜易位。已將含有TAT PTD的融合蛋白在涉及癌癥、將死亡-蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中和神經(jīng)變性性疾病的疾病模型的實(shí)驗(yàn)中用作治療部分。VP22是HSV-I間層蛋白，是HSV病毒粒子的結(jié)構(gòu)部分。VP22能夠不依賴于受體易位，并在細(xì)胞核中聚集。VP22的這種性質(zhì)將該蛋白歸類為含PTD的肽。包含全長(zhǎng)VP22的融合蛋白已被有效跨過細(xì)胞質(zhì)膜易位。3. 4. 2具有細(xì)胞間易位性質(zhì)的同源異型蛋白同源異型蛋白為參與形態(tài)學(xué)過程的高度保守的反式激活轉(zhuǎn)錄因子。它們通過60 個(gè)氨基酸的特殊序列與DNA結(jié)合。DNA結(jié)合同源異型域是同源異型蛋白最高度保守的序列。 業(yè)已闡述了幾種同源異型蛋白以展現(xiàn)PTD-樣活性；它們能夠以不依賴能量且不依賴胞吞作用的方式有效跨過細(xì)胞膜易位而無(wú)細(xì)胞類型特異性。觸角蛋白(Antp)是能夠跨過細(xì)胞膜易位的反式激活因子；能夠易位的最小序列是16個(gè)氨基酸的肽，其相應(yīng)于蛋白質(zhì)的同源異型域(HD)的第三個(gè)螺旋。該螺旋在4°C發(fā)生內(nèi)化，這表明該過程不依賴于胞吞作用。作為含AntpHD的融合蛋白產(chǎn)生的大至100個(gè)氨基酸的肽滲透穿過細(xì)胞膜。能夠易位的其它同源異型域包括果蠅ftz蛋白(Fushi tarazu, Ftz))和果蠅En蛋白(EngrailecbEn))同源異型域。很多同源異型域共享高度保守的第
三螺旋。 3.4.3.合成的 PTD業(yè)已合成了幾種PTD肽。這些合成肽中很多基于現(xiàn)有的記錄全面的肽，而其它的根據(jù)其堿性殘基和/或正電荷而選擇，通常認(rèn)為這些殘基對(duì)PTD功能很關(guān)鍵。合成肽包括但不限于PTD-4 (YARAAARQARA) [SEQ ID NO 5] ；PTD-5 (RRQRRTSKLMKR) [SEQ ID NO 6] ；MST-I(AAVLLPVLLAAR)[SEQ ID NO 7] ；L-R9(RRRRRRRRR)[SEQ ID NO 8]；和肽 2(SGffFRRffKK)[SEQ ID NO 9]。3.4.4.人 PTD人PTD被引入人患者后可繞過可能的免疫原性問題。含PTD序列的肽包括 Hoxa-5、Hox-A4、Hox-B5、Hox-B6、Hox-B7、H0X-D3、GAX、M0X-2 和 FtzPTD。這些蛋白質(zhì)都共有在 AntpPTD 中發(fā)現(xiàn)的序列(RQIKIWFQNRRMKWKK) [SEQ ID NO :10]。其它 PTD 包括 Islet-Ι、白介素-1 β、腫瘤壞死因子和來自卡波西(Kaposi)-成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(K-FGF或FGF-4) 信號(hào)肽的疏水序列，它們能夠不依賴能量、受體和胞吞作用易位。未確定的PTD包括成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)家族成員。4.病癥炎性病癥本文所用術(shù)語(yǔ)“炎癥”是指血管化組織響應(yīng)損傷的生理過程。參見例如 FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY，第 4 版，William Ε· Paul 編輯 Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia(1999)，第1051-1053頁(yè)，其在此引作參考。在炎癥過程中，參與解毒與修復(fù)的細(xì)胞被炎性中介物遷移到危害位置。炎癥通常特征為白細(xì)胞尤其是嗜中性粒細(xì)胞(多形核細(xì)胞)在炎癥位置強(qiáng)烈浸潤(rùn)，。這些細(xì)胞通過在血管壁或未損傷組織內(nèi)釋放有毒物質(zhì)促進(jìn)組織損傷。傳統(tǒng)上，炎癥被分為急性和慢性反應(yīng)。本文所用術(shù)語(yǔ)“急性炎癥”是指對(duì)急性損傷的快速短暫(幾分鐘到幾天)相對(duì)一致的反應(yīng)，特征為流液、血漿蛋白和嗜中性白細(xì)胞的聚積。在急性炎癥中，除去刺激物阻止單核細(xì)胞(在適當(dāng)激活后成為巨噬細(xì)胞)募集到炎癥組織，已有的巨噬細(xì)胞經(jīng)由淋巴系統(tǒng)離開組織。引起急性炎癥的傷害因子實(shí)例包括但不限于病原體(例如細(xì)菌、病毒、寄生蟲)、 來自外源(例如石棉)或內(nèi)源(例如尿酸鹽結(jié)晶、免疫復(fù)合物)來源的外來物體和物理因素(例如燒傷)或化學(xué)劑(例如腐蝕劑)。本文所用術(shù)語(yǔ)“慢性炎癥”是指較長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間的炎癥，其具有不明確的無(wú)限期的終止期。當(dāng)急性炎癥因?yàn)椴煌耆宄跏及l(fā)炎物質(zhì)或由于在同一位置出現(xiàn)的多個(gè)急性事件而持續(xù)時(shí)，慢性炎癥接管。包括淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞流入及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的慢性炎癥，可在延長(zhǎng)或反復(fù)的炎性活動(dòng)位點(diǎn)中導(dǎo)致組織瘢痕形成。在慢性炎癥中，已有的巨噬細(xì)胞被束縛在適當(dāng)位置，并刺激巨噬細(xì)胞增殖。不管引發(fā)劑是什么，伴隨急性炎癥的生理學(xué)變化包括四個(gè)主要特征(1)血管舒張，其導(dǎo)致血流量?jī)粼黾?，是?duì)急性組織損傷的最早的物理響應(yīng)；(2)因響應(yīng)炎性刺激物， 微靜脈襯里的內(nèi)皮細(xì)胞收縮，加寬了細(xì)胞內(nèi)連接以產(chǎn)生間隙，導(dǎo)致提高血管滲透性，這使得血漿蛋白滲漏及血細(xì)胞溢出血管；(3)炎癥特征通常為白細(xì)胞尤其是嗜中性粒細(xì)胞(多形核細(xì)胞)在炎癥位置強(qiáng)烈浸潤(rùn)。這些細(xì)胞通過在血管壁或未損傷組織中釋放毒性物質(zhì)來促進(jìn)組織損傷；和(4)因響應(yīng)特殊刺激物而從白細(xì)胞釋放的熱原引起的發(fā)熱。在 炎癥過程中，炎性反應(yīng)的可溶性炎性中介物以系統(tǒng)化方式與細(xì)胞組分一起發(fā)揮作用，試圖抑制并消除引起身體痛苦的物質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“炎性中介物”是指炎癥過程的分子中介物。這些可溶性可擴(kuò)散的分子在組織損傷和感染的位置局部及更遠(yuǎn)的位置兩處起作用。某些炎性中介物通過炎癥過程激活，而其它的因響應(yīng)急性炎癥或通過其它可溶性炎性中介物從細(xì)胞來源合成和/或釋放。炎性反應(yīng)的炎性中介物實(shí)例包括但不限于血漿蛋白酶、補(bǔ)體、激肽、凝血蛋白和溶纖維蛋白、脂質(zhì)中介物、前列腺素、白細(xì)胞三烯、血小板活化因子(PAF)、肽和胺(包括但不限于組胺、血清素和神經(jīng)肽)、促炎性細(xì)胞因子(包括但不限于白介素-1、白介素-4 (IL-4)、白介素-6 (IL-6)、白介素_8 (IL-8)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素-Y和白介素12(IL-12))。幾種與炎癥有關(guān)的病癥是多種疾病的原因。這些包括但不限于哮喘、自身免疫性疾病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病(IBD)、盆腔炎(PID)、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎和高敏感性。哮喘哮喘是涉及呼吸系統(tǒng)的慢性病，其中氣道通?？梢蝽憫?yīng)一種或多種引發(fā)物而偶發(fā)地收縮、發(fā)炎并襯有過量的黏液。這些引發(fā)物可包括但不限于接觸環(huán)境刺激物，所述環(huán)境刺激物為例如但不限于變應(yīng)原、煙、冷或熱空氣、香水、寵物毛屑、潮濕空氣、鍛煉或出汗或情志刺激。氣道窄化表現(xiàn)例如但不限于以下癥狀哮鳴、呼吸急促、胸部緊迫感、咳嗽、呼吸困難和喘鳴。在支氣管哮喘病理生理學(xué)中，表明哮喘受試者與正常對(duì)照受試者相比IL-6的血清水平高。Yokoyama，Α.等，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 151 (5) 1354-58 (1995)。研究亦表明，基于觀察，在哮喘患者支氣管肺泡灌洗液(BALF)中檢測(cè)到顯著的TNF-α和IL-6 水平，而無(wú)癥狀哮喘患者的患者BALF中的IL-I β水平變平，激活肺泡巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞 (Broide, D. H.等，J. Allergy Clin. Immunol. 89(5) :958_67，1992)。自身免疫性疾病強(qiáng)直性脊柱炎(AS、別赫捷列夫氏病、別赫捷列夫綜合征、馬_施病)是慢性炎性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性疾病。它主要影響脊柱關(guān)節(jié)和骨盆骶髂(sacroilium)，引起脊柱的最終融合。研究報(bào)道，AS患者中TNF- α和IL-6增加(而IL-I β水平未增加)，且IL-6與該疾病活動(dòng)緊密相關(guān)(Gratacos，J.等，Br. J. Rheumatol. 33 (10) :927_931. 1994)。AS 的癥狀包括但不限于脊柱下面部分或有時(shí)是整個(gè)脊柱的慢性疼痛和僵硬，通常疼痛指一邊或另一邊臀部或骶髂關(guān)節(jié)大腿后部；眼睛發(fā)炎(虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎)，其引起發(fā)紅、眼睛疼痛、視力受損、飛蚊癥、畏光；疲勞、惡心、主動(dòng)脈炎、肺尖纖維化和薦神經(jīng)根鞘擴(kuò)張。1型糖尿病是自身免疫性疾病，其中胰島細(xì)胞受到T-細(xì)胞攻擊，這使得身體不能產(chǎn)生胰島素。據(jù)報(bào)道細(xì)胞破壞性胰島炎與IL-I和TNF-α表達(dá)增加有關(guān)。另外，非糖尿病傾向小鼠和非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的胰島β-細(xì)胞中細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)基因表達(dá)，提示 IFNa ,IFN γ , IL-2和IL-10在胰島素依賴性糖尿病(IDDM)發(fā)展中的病原性作用及IL-4、 IL-6 禾口 TNF-a 的保護(hù)作用(Rabinovitch, A. Diabetes Metab. Rev. 14 :129_151，1998)。1 型糖尿病癥狀包括但不限于多尿癥、煩渴和體重減輕。格-巴(GuilliamS-Barre)綜合征是急性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病(影響外周神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病)。其經(jīng)常很嚴(yán)重，通常表現(xiàn)為上行性麻痹，特點(diǎn)為腿部疲軟，隨著完全失去深部腱反射擴(kuò)展到上肢和臉部。研究報(bào)道，IL-li3、IL_6*TNF-a在該疾病動(dòng)物模型中的差異表達(dá)說明了這些細(xì)胞因子的主要作用(Zhu，J.等，Clin. Immunol. Immunopathol,84(l) :85_94. 1997)。格-巴綜合征癥狀包括但不限于對(duì)稱性疲軟，通常首先影響下肢，并快速以上行性方式發(fā)展；有或無(wú)觸痛的“橡皮腿(rubbery leg) ” ；延髓無(wú)力(口咽性咽下困難)；呼吸困難；面神經(jīng)無(wú)力；感覺缺失(本體感受)；血壓大幅度變化； 直立性低血壓；和心率失常。狼瘡是慢性自身免疫性結(jié)締組織病，影響身體的任何部位，引起炎癥和組織損傷。 狼瘡最常損害心臟、關(guān)節(jié)、皮膚、肺、血管、肝臟、腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)。研究顯示，在狼瘡腎炎患者腎臟中活躍合成 IL-6 和 TNF-α (Herrera-Esparza, R.等，Lupus. 7 (3) 154-158，1998)。 另外的研究報(bào)道，在狼瘡腎炎動(dòng)物模型中TNF-α和IL-I β的表達(dá)提高了(BoswellJ.等， J. Immunol. 141 (9) :3050_3054，1988)。狼瘡癥狀包括但不限于疲勞、發(fā)熱、增重或減重、 關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、腫脹、面頰疹、皮膚損傷、嘴疼、脫發(fā)、呼吸急促、胸痛、目澀和雷諾氏現(xiàn)象 (Raynaud，s phenomenon) 0多發(fā)性硬化(MS)是影響腦和脊髓中的有髓神經(jīng)元的自身免疫性疾病。MS因損傷了髓鞘而引起；當(dāng)這種遮蓋物被損傷后神經(jīng)沖動(dòng)減慢或停止。研究報(bào)道在MS病例中TNF-a 表達(dá)增加了(Cannella，D.等，Ann. Neurol. 37(4) :424_435，2004)，在 MS 患者病灶中 IL-6 表達(dá)增加了 (Lock, C.等，Nature Medicine, 8 =500-508,2002) 多發(fā)性硬化的癥狀包括但不限于平衡缺失、肌肉痙攣、在任何區(qū)域麻木或異常感覺、移動(dòng)手臂或腿及步行有問題、一條或多條手臂或腿震顫、便秘、大便滲漏、失禁、復(fù)視覺、眼睛難受、面部疼痛和聽力缺失。銀屑病是影響皮膚和關(guān)節(jié)的慢性非傳染性的自身免疫性疾病。其通常引起紅色鱗狀斑出現(xiàn)在皮膚上。這些銀屑病斑是發(fā)炎和產(chǎn)生過多皮膚的部位。皮膚在這些部位快速聚積，呈現(xiàn)銀白色外觀。斑可影響任何區(qū)域，包括肘、膝、頭皮和生殖器。研究報(bào)道銀屑病患者中有高水平的 TNF-α、IL-I β 和 IL-6 (Mizutani，H.等，J. Dermatol. Sci, 14(2) 145-153. 1997)。硬皮病是分布廣泛的結(jié)締組織病，其涉及皮膚、血管、肌肉和內(nèi)部器官變化。研究報(bào)道在硬皮病患者血清中比對(duì)照血清中更經(jīng)常檢測(cè)到IL-6，并在兩類患者組中檢測(cè)到同樣的TNF-α水平，而從任一組中都未檢測(cè)出IL-I β (Needleman, B. W.等，Arthritis Rheum. 35(1) :67_72，1992)。皮膚癥狀包括但不限于熱燙、因響應(yīng)熱和冷手指和腳趾發(fā)藍(lán)或發(fā)紅(雷諾氏現(xiàn)象)、掉頭發(fā)、皮膚變硬、皮膚異常地發(fā)黑或發(fā)白、皮膚變厚和手及前臂發(fā)光、指尖或腳趾潰瘍。骨和肌肉癥狀包括但不限于關(guān)節(jié)疼痛、腳麻木和疼痛、手指和關(guān)節(jié)疼痛、僵硬和腫脹、手腕疼痛。另外的癥狀包括但不限于便秘、腹瀉、干咳、哮鳴和吞咽困難。斯耶格倫病(米庫(kù)利奇病、干燥綜合征)是自身免疫性疾病，其中免疫細(xì)胞攻擊并破壞產(chǎn)生眼淚及唾液的外分泌腺。研究顯示斯耶格倫病患者和正常健康對(duì)照者之間的 IL-I β、IL-6 和 TNF-α 水平顯著不同(Szodoray，P.等，Scand. J, Immunol, 59 (6) 592-599)。斯耶格倫病的癥狀包括但不限于口干、目澀、皮膚干燥、鼻干燥和陰道干燥。腎小球腎炎腎小球腎炎(血管球性腎炎，GN)是特征為腎臟小血管(腎小球)炎 癥的腎病。研究報(bào)道炎性細(xì)胞因子IL-I和TNF-α每一種都在腎小球腎炎的免疫/炎性過程中起作用， 封阻它們的作用會(huì)減輕疾病(Atkins, R. C. .Nephrology. 7 (si) :S2_S6，2007) Johnson,RJ. , Nephron. 73 (4) =506-514,1996) 0另外的研究報(bào)道，IL-6亦在腎小球腎炎中起作用 (Takemura,T.等，Virchows Archiv. 424(5) :459_464，1"4)。腎小球腎炎的癥狀包括但不限于水腫、高血壓和尿中存在紅細(xì)胞。泌尿系(urologic)慢性骨盆疼痛 泌尿系慢性骨盆疼痛綜合征是指與以下有關(guān)的疼痛綜合征膀胱(即間質(zhì)性膀胱炎(IC)、疼痛性膀胱綜合征(PBS))和前列腺(慢性前列腺炎(CP)、慢性骨盆疼痛綜合征(CPPS))。慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛綜合征(CP/CPPS)特征為持續(xù)3個(gè)月以上的骨盆或會(huì)陰疼痛而無(wú)尿道感染跡象。研究報(bào)道，具有炎性和非炎性CPPS組與對(duì)照組相比，IL-I β、TNF-α 和 IL-6 水平顯著提高(Orhan, I.等，Int. J. Urol. 8(9) :495_9，2001 ； Alexander, R. B.等，Urology. 52 (5) 744-749,1998 Jang, Τ. L.和 Schaeffer, A. J.，World J. Urol. 21 (2) :95-99，2003)。這些綜合征的癥狀可陰晴不定。疼痛可介于溫和不適到使人虛弱的范圍，并可從背和直腸輻射，這使得起坐困難。排尿困難(難以排尿或排尿疼痛)、關(guān)節(jié)痛(關(guān)節(jié)疼痛)、肌痛(肌肉疼痛)、不明疲勞、腹痛、陰莖持續(xù)性灼疼和頻繁性都可存在。 頻繁排尿及增加緊迫感可提示間質(zhì)性膀胱炎(炎癥集中于膀胱而不是前列腺)。射精可能疼痛，因?yàn)樵诰荷涑鲞^程中前列腺收縮，但神經(jīng)介導(dǎo)和肌肉介導(dǎo)的射精后疼痛更常見。某些患者報(bào)告性欲低下、性功能不全和勃起困難。射精后疼痛是區(qū)分CP/CPPS和良性前列腺增生(BPH)男人或正常男人的極為特異性的自訴。炎性腸病(IBD)術(shù)語(yǔ)“炎性腸病(IBD) ”是指大腸和小腸的炎性病況群。IBD包括克羅恩氏病 (Crohn’ s disease,⑶)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。其它形式的IBD包括膠原性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、改道性結(jié)腸炎、貝切特綜合征、感染性結(jié)腸炎和不明結(jié)腸炎。 很多這些病癥可呈現(xiàn)以下癥狀腹痛、嘔吐、腹瀉、便血(大便中鮮紅色血液)、體重減輕和諸如關(guān)節(jié)炎、壞疽性膿皮癥和原發(fā)性硬化性膽管炎等各種有關(guān)的自訴或疾病。通常通過用病理?yè)p傷活檢的結(jié)腸鏡檢查來診斷。研究報(bào)道，細(xì)胞因子例如IL-6、IL-l*TNF_a在調(diào)節(jié)腸免疫系統(tǒng)中起中心作用，在IBD中很多促炎性和抗炎性細(xì)胞因子的黏液濃度及全身濃度提高(Rogler, G.和 Andus，T. World J. Surg. 22 (4) :382_9，1998)。研究亦顯示，克羅恩氏病患者中TNF-α、IL-I β和IL_6水平高，及活檢培養(yǎng)物上清液中IL-I β和IL-6的濃度， 與由內(nèi)窺鏡檢查及組織學(xué)分級(jí)二者測(cè)量的組織參與程度正相關(guān)(Reimimd，J.等，Gut, 39 684-689，1996)。盆腔炎(PID)盆腔炎(PID)是指雌性子宮、輸卵管和/或卵巢炎癥，當(dāng)其發(fā)展到瘢痕形成時(shí)與附近組織及器官粘連。PID可導(dǎo)致組織壞死和膿腫形成。研究報(bào)道，在用抗生素治療前，PID 患者中的IL-I β ,IL-6和TNF-α顯著提高(與治療后相比)，這些細(xì)胞因子可在PID發(fā)病機(jī)制中起重要作用(Lee, S. Α.等，Clin. Chem. Lab，Med. 46 (7) :997_1003，2008)。再灌注損傷再灌注損傷是指當(dāng)缺血一段時(shí)間后血液供應(yīng)回到組織時(shí)引起的組織損傷。缺乏來自血液的氧和營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)生這樣的狀況，其中恢復(fù)血液循環(huán)通過氧化應(yīng)激的誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥和氧化性損傷而不是恢復(fù)正常功能。研究報(bào)道，IL-6通過減量調(diào)節(jié)TNF-α防止肝臟熱缺血/再灌注損傷(Camargo，C.等，H印atology. 26 (6) 1513-1520，2003)。癥狀包括但不限于高白細(xì)胞水平、細(xì)胞凋亡和自由基聚積。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎(RA)是慢性全身性自身免疫性疾病，其最常引起關(guān)節(jié)及腱鞘炎癥和組織損傷(關(guān)節(jié)炎)連同貧血。RA亦可在肺、心包膜、胸膜和眼睛鞏膜還有接節(jié)性病灶中產(chǎn)生彌漫性炎癥，最常見于皮膚下的皮下組織。RA可為使喪失能力并疼痛的病況，其可導(dǎo)致基本失去功能和移動(dòng)。研究報(bào)道，在RA和幼年型關(guān)節(jié)炎患者的血清中IL-Ιβ、IL-6和 TNF-α 水平升高(Ziolkowska，Μ.等，J. Immunol. 164 :2832_2838，2000)。RA 癥狀可在以下地方顯現(xiàn)關(guān)節(jié)(腫脹、疼痛、壓痛、局部熱感、僵硬和移動(dòng)受限)；皮膚(類風(fēng)濕性結(jié)節(jié))； 肺(纖維化、卡普蘭綜合征、胸腔積液)；腎臟(腎淀粉樣變性)；心臟和血管(動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、中風(fēng))；和眼睛(鞏膜外層炎、干性角膜結(jié)膜炎)。脈管炎“脈管炎”是指特征為血管(動(dòng)脈和靜脈)炎性破壞的病癥。研究報(bào)道TNF-α、IL_1 和IL-6為治療全身性脈管炎的潛在生物學(xué)靶標(biāo)(Levine，S. Μ.和Stone，J. H. Best Prac. Res. Clin. Rheumatol. 15 (2) =315-333, 2001)。脈管炎癥狀通常為全身性單器官或多器官功能障礙。這些癥狀可包括疲勞、衰弱、發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛、腹痛、高血壓、腎機(jī)能不全和神經(jīng)功能障礙。另外的癥狀可包括多數(shù)性單神經(jīng)炎、可觸知的紫癜(皮膚上的紫色斑)和肺-腎綜合征。高敏感性脈管炎(HSV)是因?qū)ν鈦砦镔|(zhì)的免疫應(yīng)答而起的繼發(fā)性脈管炎。研究報(bào)道活動(dòng)性HSV患者比健康對(duì)照組的血清IL-6和TNF-α顯著較高(Nalbant，S.等，Rheumatol. Int. 22(6) :244-248，2002)。5.病癥纖維化纖維化是器官或組織中因部分損傷或炎癥或因干擾其血液供應(yīng)而產(chǎn)生的過量的纖維性結(jié)締組織的形成或發(fā)展。其可為導(dǎo)致瘢痕的正常愈合反應(yīng)的結(jié)果，或其可為異常的反應(yīng)過程。存在若干種纖維化類型，包括但不限于胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化 (injection fibrosis)、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化和腎原性系統(tǒng)性纖維化(η印hrogenic systemic fibrosis)。囊性纖維化(CF、muCOvidOSiS、粘液粘稠病(mucovisidosis))是遺傳性的常染色體隱性病。其為美國(guó)最常見的致死性遺傳病之一，影響約30，000名個(gè)體，在白種人群中最普遍，每3，300名新生兒中有1名。囊性纖維化涉及的基因(在1989年被鑒定)，編碼稱為囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白(CFTR)的蛋白。CFTR正常由遍及身體的外分泌上皮細(xì)胞表達(dá)，調(diào)節(jié)氯化物離子、重碳酸鹽離子和谷胱甘肽進(jìn)出細(xì)胞。在囊性纖維化患者中，CFTR基因的突變?cè)斐蒀FTR蛋白功能的改變或完全失去，導(dǎo)致外分泌分泌物的滲透性、pH和氧化還原性質(zhì)缺失。在肺中，CF本身通過存在堵塞氣道的厚粘液分泌物顯現(xiàn)。在其它外分泌器官例如汗腺中，CF本身可不通過阻塞性表型顯現(xiàn)，而是通過分泌物中異常的鹽組成來顯現(xiàn)(因此用臨床汗液滲透性測(cè)定來檢測(cè)CF患者)。囊性纖維化患者疾病和死亡的首要原因是進(jìn)行性肺病。認(rèn)為阻塞氣道的CF黏液厚度由分泌物的同滲容摩異常性以及由存在大量源自炎性細(xì)胞亞類(稱為嗜中性粒細(xì)胞)的DNA、肌動(dòng)蛋白、蛋白酶和過氧化物酶造成。實(shí)際上，CF 肺病特征為對(duì)病毒及細(xì)菌病原體二者的早期極度活躍的嗜中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)。CF 肺的高炎性(hyperinflammatory)綜合征具有若干基礎(chǔ)，其中據(jù)報(bào)道促炎性趨化因子(主要是IL-8)和抗炎性細(xì)胞因子(主要是IL-10)之間的平衡起主要作用。參見Chmiel等， Clin Rev Allergy Immunol. 3(1) :5_27(2002)。研究報(bào)道，囊性纖維化患者的支氣管肺泡灌洗液比健康對(duì)照支氣管肺泡灌洗液中的TNF-α、IL-6和IL-I β水平高些(Bondf ield， T.L.等，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 152(1) :2111_2118，1995)。
注射性纖維化(IF)是肌內(nèi)注射的并發(fā)癥，通常發(fā)生在嬰兒和兒童的四頭肌、 三頭肌和臀肌肌肉中，其中受試者不能完全彎曲受影響的肌肉。其通常無(wú)疼痛感，但不斷發(fā)展。研究報(bào)道糖蛋白骨橋蛋白(OPN)在組織重建中起作用(Liaw，L.等，J.Clin. Invest. 101(7) :1469_1478，1998)，該促炎性中介物誘導(dǎo)人單核細(xì)胞中IL-I β增量調(diào)節(jié)， 并伴隨提高 TNF-α 和 IL-6 產(chǎn)生(Naldini，Α·等，J. Immunol. 177 :4267_4270，2006 ；Weber, G. F.禾口 Cantor，H.Cytokine Growth Factor Reviews. 7(3) :241 248，1996)。心內(nèi)膜心肌病(高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征(HS))是特征為血液中持續(xù)高嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(彡1500個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞/mm3)的疾病過程。HS同時(shí)影響很多器官。研究報(bào)道 IL-Ιβ、IL_6和TNF-α在病毒誘導(dǎo)的心肌炎患者中以高水平表達(dá)(Satoh，M.等，Virchows Archiv. 427(5) =503-509,1996)。癥狀可包括心肌病、皮膚損傷、血栓栓塞性疾病、肺病、神經(jīng)病、肝脾腫大(肝臟和脾臟同時(shí)增大)和心室大小減小。治療可包括用皮質(zhì)類固醇降低嗜酸性粒細(xì)胞水平。特發(fā)性肺纖維化(IPF、隱原性纖維化肺泡炎)是不明原因的慢性進(jìn)行性間質(zhì)性肺病。其與通常的間質(zhì)性肺炎的組織學(xué)模式有關(guān)，特征可為纖維化組織在肺間質(zhì)組織中異常并過量沉積且與炎癥的相關(guān)性極小。研究報(bào)道在特發(fā)性肺纖維化(IPF)患者中，TNF-α和 IL-6 釋放顯著增加(Zhang, Y.等，J. Immunol. 150 (9) :4188_4196，1993)，這歸因于 IL-1 β 的表達(dá)水平(KoIb，M.等，J. Clin. Invest. 107(12) 1529-1536，2001)。癥狀包括呼吸困難， 但亦包括干咳、杵狀變(手指畸形)和爆裂音(吸入期間肺中的爆裂音)。縱隔纖維化(MF)特征為集中于淋巴結(jié)的擴(kuò)散性的鈣化纖維化，其封阻大血管和氣道。MF為組織胞漿菌病的晚期并發(fā)癥。纖維化鼠模型中的研究報(bào)告IL-I β和TNF-α顯著提高(Ebrahimi，B.等，Am. J. Pathol. 158 :2117_2125，2001)。骨髓纖維化(髓樣化生、慢性特發(fā)性骨髓纖維化、原發(fā)性骨髓纖維化)是其中骨髓經(jīng)歷纖維化的骨髓病。骨髓纖維化導(dǎo)致進(jìn)行性骨髓功能衰竭。平均存活期為5年，死亡原因包括感染、出血、器官衰竭、門靜脈高壓和白血病轉(zhuǎn)化。業(yè)已報(bào)道TNF-α和IL-6水平在病毒誘導(dǎo)的骨髓纖維化動(dòng)物模型中升高(Bousse-Kerdiles，Μ.等，Ann. Hemato 1. 78 =434-444, 1999)。腹膜后纖維化(奧蒙德(Ormond)氏病)是特征為腹膜后腔纖維性組織增殖的疾病。腹膜后腔是含有腎臟、主動(dòng)脈、腎道和其它結(jié)構(gòu)的體腔。業(yè)已報(bào)道11^1、11^-6和1順-(1 在腹膜后纖維化發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用(Demko, T.等，J.Am. Soc. Nephrol. 8 =684-688, 1997)。腹膜后纖維化癥狀可包括但不限于下背疼痛、腎衰竭、高血壓和深部靜脈血栓形成。腎原性系統(tǒng)性纖維化(NSF、腎原性纖維化皮膚病)涉及皮膚、關(guān)節(jié)、眼睛和內(nèi)部器官的纖維化。NSF可與接觸釓有關(guān)?；颊咝纬纱竺娣e的硬化皮膚且有纖維化結(jié)節(jié)和斑塊。 亦可出現(xiàn)伴隨限制運(yùn)動(dòng)范圍的屈曲攣縮。NSF顯示真皮成纖維細(xì)胞和樹突細(xì)胞增殖、膠原束增厚、彈性纖維增加和粘蛋白沉積。某些報(bào)道提示，促炎性狀態(tài)提供引起腎原性系統(tǒng)性纖維化的誘病因素(Saxena, S.等，Int. Urol. N印hrol. 40 :715_724，2008)，在腎原性系統(tǒng)性纖維化動(dòng)物模型中 TNF-α 水平提高了 (Steger-Hartmann, Τ.等，Exper. Tox. Pathol. 61 (6) 537-552，2009)。 6.病癥內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙(內(nèi)皮功能障礙)指由內(nèi)皮執(zhí)行的正常生化過程的生理學(xué)功能障礙，所述正常生化過程為例如介導(dǎo)凝血、血小板粘附、免疫功能和調(diào)控血管內(nèi)和血管外空間的體積及電解質(zhì)含量。內(nèi)皮功能障礙可因疾病過程(例如感染性休克、高血壓、血膽固醇過多和糖尿病)以及因環(huán)境因子(例如來自吸煙的煙草產(chǎn)物)而引起。研究報(bào)道在諸如例如IL-6、IL_li3和TNF-α等細(xì)胞因子影響下，可損害內(nèi)皮依賴性擴(kuò)張，內(nèi)皮可喪失其響應(yīng)循環(huán)激素或自身有效物質(zhì)的能力。該作用可有利于傾向血管痙攣、血栓形成或動(dòng)脈粥樣化形成(Vila, Ε.和 Salaices，M. Am. J，Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 :H1016_H1021， 2005)。另外，研究表明，由IL-Ιβ和TNF-α調(diào)節(jié)的IL-6的過表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙中起重要作用(Kornman, K.等，J. Perio. Res. 34 (7) 353-357 (2006) ；Libby, P.等， Circulation. 86(6 Supp1) :III47_52(1992))。內(nèi)皮功能障礙特征可為動(dòng)脈和微動(dòng)脈不能因響應(yīng)適宜的刺激物而完全擴(kuò)張。例如，功能障礙的內(nèi)皮細(xì)胞(具有低血管舒張)不能以與健康內(nèi)皮細(xì)胞同樣的程度產(chǎn)生一氧化氮(NO)。該差異可通過多種方法來檢測(cè)，所述方法包括乙酰膽堿的離子電滲療法、動(dòng)脈內(nèi)給予各種血管活性物質(zhì)、局部加熱皮膚及通過給血壓表套袖加壓到高壓來暫時(shí)阻塞動(dòng)脈。 亦可在冠狀動(dòng)脈本身中進(jìn)行檢測(cè)，但除非有冠狀動(dòng)脈內(nèi)插管的臨床理由，否則通常不實(shí)施這種侵襲性操作。認(rèn)為這些技術(shù)刺激內(nèi)皮釋放N0，NO擴(kuò)散到周圍血管平滑肌引起血管舒張。允許遞送生物學(xué)活性重組蛋白和肽治療劑的系統(tǒng)一直是眾多研究的主題。用于局部遞送治療劑的系統(tǒng)使得這類物質(zhì)的生物學(xué)作用達(dá)到更大的功效。體內(nèi)遞送重組蛋白到期需靶標(biāo)一直是艱巨的任務(wù)。盡管在蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)肽領(lǐng)域有進(jìn)展，但經(jīng)由腺伴隨病毒、腺病毒、慢病毒、皰疹病毒載體和質(zhì)粒表達(dá)載體遞送編碼蛋白質(zhì)的基因的典型方法，仍然是蛋白質(zhì)表達(dá)的優(yōu)先選擇。由于病毒載體遞送特異性基因到許可細(xì)胞的天然能力，認(rèn)為病毒載體介導(dǎo)的基因表達(dá)是在分裂活躍的細(xì)胞類型或分裂后封阻的細(xì)胞類型中從頭表達(dá)功能蛋白的最有效和可靠的方法。但是，總是需要大劑量的病毒載體來達(dá)到目的蛋白的治療表達(dá)水平。此外，病毒載體可與宿主染色質(zhì)物質(zhì)整合。這些性質(zhì)對(duì)宿主遺傳系統(tǒng)施加長(zhǎng)期作用，因此，安全性仍是其最終臨床應(yīng)用的嚴(yán)重憂慮。更安全的備選方法是外源地產(chǎn)生重組蛋白，然后將其系統(tǒng)或通過局部注射遞送到靶標(biāo)器官。然而，將重組蛋白遞送到細(xì)胞或組織及其生物利用度需要進(jìn)一步改善。盡管若干研究提示PTD在藥物發(fā)現(xiàn)及將大至120kDa的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)到不同細(xì)胞中的潛力，但關(guān)于 PTD介導(dǎo)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)的效力問題仍然未解決。甚至某些研究業(yè)已顯示PTD介導(dǎo)的融合蛋白在體外/體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)失敗以及無(wú)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。此外，某些研究顯示，PTD融合蛋白或其它非分泌蛋白的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)可能不像重組蛋白一樣實(shí)現(xiàn)同樣的生物分布，并且難以讓 PTD通過血腦屏障進(jìn)入。本發(fā)明提供治療抑制劑肽用于抑制激酶，提供包含治療結(jié)構(gòu)域和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的肽類作為激酶活性抑制劑的用途，和PTD作為多種病癥治療劑的用途。簡(jiǎn)述 本發(fā)明提供含有治療量的抑制至少一種激酶的治療抑制劑肽的激酶抑制組合物， 用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法，和用所述激酶抑制組合物治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法。一方面，本發(fā)明提供用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的激酶抑制組合物，所述組合物包含(a)治療有效量的治療抑制劑肽，其中治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶，其中所述治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中第一結(jié)構(gòu)域包含蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域并位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)，其中第二結(jié)構(gòu)域包含治療結(jié)構(gòu)域并位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)；和(b)藥學(xué)上可接受的載體，其中所述組合物直接或間接降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。按照一個(gè)實(shí)施方案，治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11 ]具有基本同一性的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA [SEQ ID NO 12]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44] 具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體,所述變體與SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12、SEQ ID N0:13禾口 SEQ ID NO :15中的至少一種有至少90%同一性，并抑制TNF-α分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體，所述變體與 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO 15 中的至少一種有至少90%同一性，并抑制IL-Ιβ分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體，所述變體與 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID N0:15 中的至少一種有至少90%同一性，并抑制IL-6分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 2。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。根據(jù)另一實(shí)施方案， 激酶為Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶。根據(jù)另一實(shí)施方案，其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥為選自以下的至少一種病癥哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴綜合征、狼瘡、銀屑病、硬皮病、斯耶格倫病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、高敏感性脈管炎、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病(localized inflammatory disease)、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、缺血、內(nèi)膜增生、 狹窄、再狹窄、平滑肌瘤、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛(Prinzmetal's angina)、 心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、雷諾病(Raynaud’ s disease)、溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、血管病變、充血性心力衰竭、心肌頓挫、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生、慢性阻塞性肺病、骨質(zhì)減少、變性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、結(jié)腸炎、闌尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、耳炎、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、心代謝綜合征(cardiometabolic syndrome)、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、腎原性系統(tǒng)性纖維化、乳腺癌、前列腺癌和內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。根據(jù)另一實(shí)施方案，所述至少一種炎性細(xì)胞因子為IL-6、TNFa和IL_1 β中的至少一種。根據(jù)另一實(shí)施方案，將所述組合物置于生物醫(yī)學(xué)裝置的上面或里面。
另一方面，本發(fā)明提供用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供激酶抑制組合物，其中所述激酶抑制組合物包含(i)治療有效量的治療抑制劑肽，其中治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶， 其中治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中第一結(jié)構(gòu)域包含位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其中第二結(jié)構(gòu)域包含位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的治療結(jié)構(gòu)域；和 ( )藥學(xué)上可接受的載體；(b)將所述激酶抑制組合物給予有需要的受試者，從而抑制至少一種激酶；和(c)降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，從而治療所述病癥。按照一個(gè)實(shí)施方案，治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列YARRAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID N0:11]具有基本同一性的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO :43]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。 根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體,所述變體與SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13禾口 SEQ ID NO :15中的至少一種有至少90%同一性，并抑制TNF-α分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體，所述變體與 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO 15 中的至少一種有至少90%同一性，并抑制IL-Ιβ分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，多肽包含至少一種變體，所述變體與 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID N0:15 中的至少一種有至少90%同一性，并抑制IL-6分泌。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 2。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。根據(jù)另一實(shí)施方案， 激酶為Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶。根據(jù)另一實(shí)施方案，其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥為選自以下的至少一種病癥哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴綜合征、狼瘡、銀屑病、硬皮病、斯耶格倫病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病、盆腔炎、 再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、高敏感性脈管炎、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、缺血、內(nèi)膜增生、狹窄、再狹窄、平滑肌瘤、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛、心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、雷諾病、溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、血管病變、充血性心力衰
23竭、心肌頓挫、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生、慢性阻塞性肺病、骨質(zhì)減少、變性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、結(jié)腸炎、目尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、耳炎、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、心代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、腎原性系統(tǒng)性纖維化、乳腺癌、前列腺癌和內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。根據(jù)另一實(shí)施方案，所述至少一種炎性細(xì)胞因子為IL-6、TNF α和IL_1 β中的至少一種。根據(jù)另一實(shí)施方案，通過植入生物醫(yī)學(xué)裝置進(jìn)行給予步驟(a)，其中將所述組合物置于所述裝置的上面或里面。根據(jù)另一實(shí)施方案，給予步驟(a)為胃腸外給予。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示活性(相對(duì)于對(duì)照的％ )與抑制劑肽濃度(PM)的關(guān)系曲線圖。圖2顯示活性(相對(duì)于對(duì)照的％)與抑制劑肽濃度(PM)的關(guān)系曲線圖。圖3顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖。RFU/s = 每秒相對(duì)熒光單位。圖4顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖。RFU/s = 每秒相對(duì)熒光單位。圖5顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖。RFU/s = 每秒相對(duì)熒光單位。圖6顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖。RFU/s = 每秒相對(duì)熒光單位。圖7顯示IL-6的平均濃度(pg/ml/105個(gè)細(xì)胞)與時(shí)間的關(guān)系曲線圖。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID N0:11]。"f =顯著高于 Ing/mL 的 IL-1 β 處理的樣品。* =顯著低于11^/!^的11^-10處理的樣品。誤差條代表三個(gè)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖8顯示IL-6的平均濃度(pg/ml//105個(gè)細(xì)胞)與時(shí)間的關(guān)系曲線圖。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] ；FAK = FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]。*=顯著低于Ing/mL的TNF-α處理的樣品。誤差條代表三個(gè)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖9顯示IL-6的平均濃度(pg/ml/105個(gè)細(xì)胞)與時(shí)間的關(guān)系曲線圖。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] ； FAK = FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]。*=顯著低于lOng/mL的TNF-α處理的樣品。誤差條代表三個(gè)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖10顯示來自每一處理組的平均IL-I β濃度(pg/ml)的圖⑴ImM MK2i (治療抑制劑肽 YARAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO :11])及 TNF-α (5ng/ml) ； (ii)3mM MK2i 及 TNF-α (5ng/ml) ； (iii) ImM MK2i R TNF-α (lOng/ml)；和(iv)3mM MK2i R TNF-α (lOng/ ml) ο圖11顯示來自每一處理組的平均IL-6濃度(pg/ml)的圖(i)陰性對(duì)照(只有培養(yǎng)基)；(ii) TNF-α (5ng/ml) ； (iii) TNF-α (10ng/ml) ； (iv) TNF-α (5ng/l)和 MK2i (ImM 治療抑制劑肽 YARAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO :11]) ； (v) TNF- α (10ng/ml)和 MK2i (ImM) ； (vi)TNF-a (5ng/ml)禾口 MK2i (3mM)；禾口 (vii)TNF-a (lOng/ml)禾口 MK2i (3mM)。詳述本發(fā)明提供治療性激酶抑制組合物和可用于抑制促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶的方法。
術(shù)語(yǔ)匯編本文所用氨基酸縮寫為常規(guī)使用的縮寫A = Ala =丙氨酸；R = Arg =精氨酸；N =Asn =天冬酰胺；D = Asp =天冬氨酸；C = Cys =半胱氨酸；Q = Gln =谷氨酰胺；E = Glu =谷氨酸；G = Gly =甘氨酸；H = His =組氨酸；I = lie =異亮氨酸；L = Leu =亮氨酸；K = Lys =賴氨酸；M = Met =甲硫氨酸；F = Phe =苯丙氨酸；P = Pro =脯氨酸；S =Ser =絲氨酸；T = Thr =蘇氨酸；W = Trp =色氨酸；Y = Tyr =酪氨酸；V = Val =纈氨酸。氨基酸可為L(zhǎng)-或D-氨基酸。氨基酸可用合成氨基酸置換，如此改變是為了延長(zhǎng)肽的半衰期或提高肽的效價(jià)或增加肽的生物利用度。本文所用術(shù)語(yǔ)“給予”是指配藥、供給、施用、給予、分配或投遞。術(shù)語(yǔ)“給藥”或“給予”可互換使用，包括體內(nèi)給予以及直接給予離體組織。組合物通常可呈含有所需常規(guī)無(wú)毒藥學(xué)上可接受的載體、佐劑和溶媒的劑量單位制劑，經(jīng)口、含服、胃腸外、局部、通過吸入或吹入(即通過嘴或通過鼻)或直腸來全身給予，其；或可通過例如但不限于注射、植入、移植、局部施用或胃腸外等手段局部給予。本文所用術(shù)語(yǔ)“胃腸外”是指通過注射引入身體內(nèi) (即注射給予)，包括例如皮下(即在皮膚下注射)、肌內(nèi)(即注射到肌肉中)、靜脈內(nèi)(即注射到靜脈中)、鞘內(nèi)(即注射到脊髓周圍空間或大腦的蛛網(wǎng)膜下)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。胃腸外給予組合物用針(例如外科用針)來遞送。本文所用術(shù)語(yǔ)“外科用針”是指任何適于遞送流體(即能夠流動(dòng))組合物到所選擇的解剖結(jié)構(gòu)的針?？捎煤线m分散劑或濕潤(rùn)劑和助懸劑按照已知技術(shù)調(diào)配可注射制劑，例如無(wú)菌注射用水性或油性混懸劑?？蛇M(jìn)行另外的給予，例如靜脈內(nèi)、經(jīng)心包、經(jīng)口、經(jīng)由植入、跨粘膜、透皮、肌內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、淋巴管內(nèi)、病灶內(nèi)(intralesionally)或硬腦外給予?？衫鐚?shí)行一次、 多次和/或經(jīng)一個(gè)或多個(gè)延長(zhǎng)期給予。本文所用術(shù)語(yǔ)“局部給予”和“局部施用”可互換使用，是指遞送肽、核酸或包含肽或核酸的載體到組織或細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)表面，包括上皮表局部給予與透皮給予相比，通常提供局部而不是全身性作用。除非另外指出或暗示，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“局部給予”和“透皮給予”可互換使用。本文所用術(shù)語(yǔ)“締合”及其不同語(yǔ)法形式，是指直接、間接、主動(dòng)、被動(dòng)、惰性、非惰性、完全或不完全地連接、關(guān)聯(lián)或結(jié)合。本文所用術(shù)語(yǔ)“生物相容性”是指基于臨床風(fēng)險(xiǎn)/利益評(píng)估對(duì)對(duì)活組織不引起臨床相關(guān)組織刺激、損傷、毒性反應(yīng)或免疫學(xué)反應(yīng)。本文所用術(shù)語(yǔ)“可生物降解的”，是指將通過簡(jiǎn)單化學(xué)過程、通過身體酶的作用或通過人體內(nèi)其它類似機(jī)制隨時(shí)間主動(dòng)或被動(dòng)降解的材料。本文所用術(shù)語(yǔ)“載體”是指天然或人工合成的有機(jī)或無(wú)機(jī)成分，其與活性成分結(jié)合有利于應(yīng)用，其對(duì)有機(jī)體不產(chǎn)生顯著刺激，且不抵消本發(fā)明組合物的生物學(xué)活性和性質(zhì)。載體應(yīng)該純度足夠高且毒性足夠低，以使其適于給予待治療的受試者。載體可為惰性，或其可具有藥學(xué)益處、美容益處或二者都有。本文所用術(shù)語(yǔ)“病況”是指各種健康狀態(tài)，意指包括由任何潛在機(jī)理或紊亂、損傷以及健康組織和器官的促進(jìn)引起的病癥或疾病。本文所用術(shù)語(yǔ)“使…接觸”是指帶入或進(jìn)入接觸中。本文所用術(shù)語(yǔ)“接觸”是指觸及或者緊靠或局部接近的狀態(tài)或情況?？赏ㄟ^技術(shù)人員已知的任何給予手段來進(jìn)行使組合物與靶標(biāo)目的物(例如但不限于器官、組織、細(xì)胞或腫瘤)接觸。本文所用術(shù)語(yǔ)“可控調(diào)節(jié)元件”是指能夠影響核酸或其肽或蛋白質(zhì)產(chǎn)物表達(dá)的核酸序列?？煽卣{(diào)節(jié)元件可可操作地與本發(fā)明核酸、肽或蛋白質(zhì)連接。例如但不限于控制序列的可控調(diào)節(jié)元件，不必與它們控制其表達(dá)的核酸、肽或蛋白質(zhì)鄰接，只要起指導(dǎo)其表達(dá)的作用即可。因此，例如，啟動(dòng)子序列和本發(fā)明核酸之間可存在間插的非翻譯但轉(zhuǎn)錄的序列， 仍然可認(rèn)為該啟動(dòng)子序列與編碼序列“可操作地連接”。其它所述控制序列包括但不限于聚腺苷酸化信號(hào)、終止信號(hào)和核糖體結(jié)合位點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“控釋”意指其中從制劑釋放藥物的方式及分布譜受控的含有任何藥物的制劑。這是指即釋制劑以及非即釋制劑，非即釋制劑包括但不限于緩釋制劑和延釋制劑。本文所用術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”是指由細(xì)胞分泌的可溶性小蛋白物質(zhì)，其對(duì)其它細(xì)胞具有多種作用。細(xì)胞因子介導(dǎo)很多重要生理學(xué)功能，包括生長(zhǎng)、發(fā)育、傷口愈合和免疫應(yīng)答。它們通過與位于細(xì)胞膜上的其細(xì)胞特異性受體結(jié)合發(fā)揮作用，這使得在該細(xì)胞中開始獨(dú)特的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)，最終將導(dǎo)致靶標(biāo)細(xì)胞的生化及表型變化。細(xì)胞因子通常在局部起作用。它們包括1型細(xì)胞因子，其包括多種白介素以及幾種造血生長(zhǎng)因子；II型細(xì)胞因子，包括干擾素和白介素-10 ；腫瘤壞死因子(“TNF”)-相關(guān)分子，包括TNF α和淋巴毒素；免疫球蛋白超家族成員，包括白介素1( “IL-1”)；和趨化因子，在多種免疫和炎性功能中起關(guān)鍵作用的分子家族。同樣的細(xì)胞因子可能視細(xì)胞狀態(tài)而定對(duì)細(xì)胞具有不同作用。細(xì)胞因子通常調(diào)節(jié)其它細(xì)胞因子的表達(dá)并引發(fā)級(jí)聯(lián)。本文所用術(shù)語(yǔ)“延釋”按其常規(guī)意義提及藥物制劑，其中在給予制劑及藥物從制劑釋放之間有時(shí)間延遲?！把俞尅笨缮婕盎蛟谏婕敖?jīng)延長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)逐漸釋放藥物，因此可以是或不是“緩釋”。本文所用術(shù)語(yǔ)“疾病”或”病癥”通常是指損害健康或異常的功能狀態(tài)。與本發(fā)明有關(guān)的病癥可包括但不限于炎性病癥、纖維化、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、哮喘、局限性炎性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病、阿爾茨海默氏病、腫瘤病、神經(jīng)缺血、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 克羅恩氏病、炎性腸病、內(nèi)膜增生、狹窄、再狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化、平滑肌細(xì)胞腫瘤和轉(zhuǎn)移、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛、缺血、心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、未足月產(chǎn)、先兆子癇、子癇、雷諾病或現(xiàn)象、溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、與平滑肌痙攣有關(guān)的缺血性肌肉損傷、血管病變、緩慢性心律失常 (bradyarrythmia)、充血性心力衰竭、心肌頓挫、肺動(dòng)脈高壓、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生(意指星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖，其可包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷區(qū)的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積)、慢性阻塞性肺病(意指特征為氣流阻塞或受限的呼吸道病；包括但不限于慢性支氣管炎和肺氣腫)、骨質(zhì)減少、內(nèi)皮功能障礙、炎癥、變性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、斯耶格倫病、格-巴病、 傳染病、膿毒病、內(nèi)毒素休克、銀屑病、放射性小腸炎、硬皮病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、結(jié)腸炎、 闌尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、胰腺炎、耳炎、再灌注損傷、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、狼瘡、變態(tài)反應(yīng)、心代謝病、肥胖癥、II型糖尿病、I型糖尿病和NASH/肝硬化。本文所用術(shù)語(yǔ)“結(jié)構(gòu)域”是指或多或少獨(dú)立折疊形成球狀緊密結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)單位。本文所用術(shù)語(yǔ)“藥物”是指用于預(yù)防、診斷、緩解、治療或治愈疾病的治療劑或除食物外的任何物質(zhì)。
術(shù)語(yǔ)“雜交”是指兩個(gè)單鏈核酸分子通過堿基配對(duì)彼此結(jié)合。核苷酸在正常條件下結(jié)合其互補(bǔ)序列，因此兩條完全互補(bǔ)的鏈容易彼此結(jié)合(或“退火”)。然而，由于核苷酸的不同分子幾何學(xué)，兩條鏈之間的單一不一致性將使它們之間的結(jié)合在能量上更為不利?？赏ㄟ^定量測(cè)定兩條鏈退火的速率來測(cè)量堿基不相容性的作用，這可提供關(guān)于兩條退火的鏈之間的堿基序列相似性的信息。本文所用術(shù)語(yǔ)“水凝膠”是指導(dǎo)致產(chǎn)生固態(tài)、半固態(tài)、假塑性或塑料結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，其含有必需水性組分以產(chǎn)生膠狀或果凍樣團(tuán)塊。水凝膠吸收并保留大量H2O,這最終在水性環(huán)境存在下達(dá)到平衡含量。本文所用術(shù)語(yǔ)“親水的”是指對(duì)極性物質(zhì)例如水具有親和力的材料或物質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“身體內(nèi)”、“孔隙體積”、“切除口袋(resection pocket)”、“凹陷 (excavation)”、“注射位點(diǎn)”、“沉積位點(diǎn)”或“植入位點(diǎn)”意在包括身體所有組織而無(wú)限制； 作為其非限制性實(shí)例，可指因注射、手術(shù)切除、腫瘤或組織除去、組織損傷、膿腫形成而在其中形成的空間，或指通過對(duì)疾病或病理的臨床評(píng)估行為、治療或生理學(xué)反應(yīng)而形成的任何其它相似空腔、空間或袋。本文所用術(shù)語(yǔ)“抑制”用于指降低過程的量或速率、完全停止過程或減少、限制或阻斷其作用或功能。當(dāng)與參考物質(zhì)相比時(shí)，抑制可包括將量、速率或作用功能或過程降低或減少至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少45%、 至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%，其中所述參考物質(zhì)為不被抑制的物質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“損傷”是指由外在因素或外來力(為物理傷害或化學(xué)的)引起的身體結(jié)構(gòu)或功能的損害或傷害。術(shù)語(yǔ)“分離的”是指以下物質(zhì)(例如核酸、肽或蛋白質(zhì))，其(1)大體上或基本上不含通常在其天然存在環(huán)境中存在的與其伴隨或互相作用的組分。術(shù)語(yǔ)“大體上或基本上不含”用于指以下物質(zhì)，其至少80%不含通常在其天然存在環(huán)境中存在的與其伴隨或互相作用的組分。分離的物質(zhì)任選包含在其天然環(huán)境中不存在的物質(zhì)；或( 若物質(zhì)在其天然環(huán)境中，則所述物質(zhì)通過有意的人為介入被合成地(非天然地)改變成組合物和/或被置于細(xì)胞中的某個(gè)部位(例如基因組或亞細(xì)胞器)，該細(xì)胞對(duì)該環(huán)境中存在的物質(zhì)而言是非天然的?？蓪?duì)處于其天然狀態(tài)的物質(zhì)實(shí)施改變，或從其天然狀態(tài)除去，以產(chǎn)生人工合成物質(zhì)。例如，通過在其來源的細(xì)胞內(nèi)實(shí)施人為介入，如果天然存在的核酸被改變了，或如果其從被改變的DNA轉(zhuǎn)錄，則其成為分離的核酸。參見例如，Compounds and Methods for Site Directed Mutagenesis in Eukaryotic Cells (用于在真核細(xì)胞中定點(diǎn)誘變的化合物禾口方法)，Kmiec,美國(guó)專利號(hào) 5，565，350 ;In Vivo Homologous Sequence Targeting in Eukaryotic Cells (真核細(xì)胞中體內(nèi)同源序列靶標(biāo))；Zarling等，PCT/US93/03868。同樣地，天然存在的核酸(例如啟動(dòng)子)，如果通過非天然存在的手段被引入對(duì)該核酸非天然的基因組的基因座，也變成分離的。本文定義的“分離的”核酸亦被稱為“異源”核酸。本文所用術(shù)語(yǔ)“激酶”是指將磷酸基團(tuán)從高能供體分子轉(zhuǎn)移到特異性靶標(biāo)分子或底物的酶類型。高能供體類可包括但不限于ATP。本文所用術(shù)語(yǔ)“激酶活性”是指激酶介導(dǎo)的激酶底物的磷酸化作用。本文所用術(shù)語(yǔ)“激酶底物”是指可被激酶磷酸化的底物。
本文所用術(shù)語(yǔ)“不穩(wěn)定的”以其各種語(yǔ)法形式指易于改變或很可能改變。不穩(wěn)定的化合物為能夠改變狀態(tài)或成為無(wú)活性的化合物。本文所用術(shù)語(yǔ)“親脂性”是指與極性或水性環(huán)境相比，優(yōu)先親和非極性環(huán)境或?qū)Ψ菢O性環(huán)境具有親和力。本文所用術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)期釋放”意指將植入物構(gòu)建或配置以遞送治療水平的活性成分達(dá)至少7天或約30-約60天。本文所用術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物細(xì)胞”是指源自哺乳動(dòng)物綱動(dòng)物的細(xì)胞。本文所用哺乳動(dòng)物細(xì)胞可包括正常、異常和轉(zhuǎn)化細(xì)胞。在本發(fā)明中使用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞實(shí)例包括但不限于 神經(jīng)細(xì)胞、表皮細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、血液細(xì)胞、免疫細(xì)胞、干細(xì)胞、骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和母細(xì)胞。本文所用術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”意指調(diào)節(jié)、改變、使適合或調(diào)整到某種量度或比例。術(shù)語(yǔ)“正?！笔侵复蠼M別的標(biāo)準(zhǔn)、模型、中值或平均值。術(shù)語(yǔ)“正常健康受試者”是指不具有炎性病癥癥狀或其它跡象的受試者。術(shù)語(yǔ)“核酸”是指呈單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，除非另外限制，否則包括具有天然核苷酸的基本特性的已知類似物(例如肽核酸)，所述基本特性為其以與天然存在的核苷酸相似的方式與單鏈核酸雜交。術(shù)語(yǔ)“核苷酸”是指由雜環(huán)堿基、糖及一個(gè)或多個(gè)磷酸基團(tuán)組成的化合物。在最常見的核苷酸中，堿基為嘌呤或嘧啶的衍生物，糖為戊糖脫氧核糖或核糖。核苷酸是核酸的單體，其中3個(gè)或更多個(gè)核苷酸鍵合在一起以形成核酸。核苷酸是RNA、DNA和若干輔因子的結(jié)構(gòu)單位，所述輔因子包括但不限于CoA、FAD、DMN、NAD和NADP。嘌呤包括腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)；嘧啶包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。措詞“可操作地連接”是指一個(gè)或多個(gè)第一序列或結(jié)構(gòu)域足夠靠近一個(gè)或多個(gè)第二序列或結(jié)構(gòu)域，以使所述一個(gè)或多個(gè)第一序列或結(jié)構(gòu)域，可對(duì)所述一個(gè)或多個(gè)第二序列或結(jié)構(gòu)域或在所述第二序列或結(jié)構(gòu)域控制下的區(qū)域施加影響。本文所用術(shù)語(yǔ)“粒子”是指極小的組分(例如納米粒、微粒子或在某些情況下大一點(diǎn)的粒子)，其可含有本文所述激酶抑制組合物的全部或部分。本文所用術(shù)語(yǔ)“肽”是指通過肽鍵連接的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸。本文術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用，是指氨基酸殘基聚合物。所述術(shù)語(yǔ)適用于其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基為相應(yīng)天然存在氨基酸的人工化學(xué)類似物的氨基酸聚合物，以及適用于天然存在的氨基酸聚合物。天然存在氨基酸的這類類似物的基本特性在于，當(dāng)將其納入到蛋白質(zhì)中時(shí)，該蛋白質(zhì)與完全由天然存在的氨基酸組成的同一蛋白質(zhì)弓I出的抗體有特異性反應(yīng)性。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”亦包括修飾，所述修飾包括但不限于糖基化、脂質(zhì)連接、硫酸鹽化、谷氨酸殘基的Y-羧基化、羥基化和ADP-核糖基化。應(yīng)該了解，如人們所熟知及如上所述，多肽可以不完全為線性。例如，多肽可因遍在蛋白化而有分支，其可通常因翻譯后事件而為含或不含分支的環(huán)狀，所述翻譯后事件包括天然加工事件及天然不存在的人為操作帶來的事件。亦可通過非翻譯的天然加工及通過完全人工合成方法，來合成環(huán)狀、分支及分支環(huán)狀多肽。本文所用術(shù)語(yǔ)“肽模擬物”是指設(shè)計(jì)以模擬肽的小蛋白樣鏈。肽模擬物通常是從已有的肽修飾產(chǎn)生，以便改變分子的性質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”是指適用于給予人或其它脊椎動(dòng)物的一種或多種相容的固態(tài)或液態(tài)填充劑、稀釋劑或包封物質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“聚合物”是指由較小的相同的分子(稱為單體)連接在一起制備的不同化合物中的任一種。聚合物通常具有高分子量。分子連接在一起形成聚合物的過程稱為“聚合”。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”是指脫氧核糖多核苷酸、核糖多核苷酸或其具有天然核糖核苷酸的基本特性的類似物，所述基本特性為它們?cè)趪?yán)格雜交條件下與基本上與天然存在核苷酸相同的核苷酸序列雜交，和/或可以翻譯為與一種或多種天然存在的核苷酸相同的一種或多種氨基酸。多核苷酸可為天然或異源結(jié)構(gòu)基因或調(diào)控基因的全長(zhǎng)或亞序列。除非另外指出，否則該術(shù)語(yǔ)包括所提及的特定序列以及其互補(bǔ)序列。因此，具有因穩(wěn)定性或其它原因而修飾的主鏈的DNA或RNA，為如本文術(shù)語(yǔ)所意指的“多核苷酸”。此外，包含罕有堿基(例如次黃嘌呤核苷)或經(jīng)修飾的堿基(例如三苯甲基化堿基)的DNA或RNA (僅舉出兩個(gè)實(shí)例)， 為如本文所用術(shù)語(yǔ)的多核苷酸。應(yīng)該理解，已對(duì)DNA和RNA進(jìn)行大量修飾，所述修飾可用于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種有用目的。本文所采用的術(shù)語(yǔ)多核苷酸包括諸如化學(xué)修飾、酶修飾或代謝修飾的多核苷酸形式，以及病毒和細(xì)胞特有的DNA和RNA的化學(xué)形式，所述細(xì)胞尤其包括簡(jiǎn)單細(xì)胞和復(fù)雜細(xì)胞。本文所用術(shù)語(yǔ)“一級(jí)序列”是指氨基酸序列。本文所用術(shù)語(yǔ)“前藥”意指呈無(wú)活性形式且在給予受試者后通過生物學(xué)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化成活性形式的肽或衍生物，。本文所用以下術(shù)語(yǔ)闡述兩種或更多種核酸或多核苷酸之間的序列關(guān)系(a) “參考序列，，、(b) “比較窗”、(c) “序列同一性”、(d) “序列同一性百分比”和(e) “基本同一性”。
術(shù)語(yǔ)“參考序列，，是指用作序列比較的基礎(chǔ)的序列。參考序列可為特定序列的子集或全部；例如，全長(zhǎng)cDNA或基因序列的區(qū)段，或完全的cDNA或基因序列。術(shù)語(yǔ)“比較窗”是指多核苷酸序列的連續(xù)的特定區(qū)段，其中所述多核苷酸序列可與參考序列比較，其中比較窗中的多核苷酸序列部分與參考序列(不包含添加或缺失)相比， 可包含添加或缺失(即空位)用于兩個(gè)序列的最佳比對(duì)。通常比較窗長(zhǎng)度為至少20個(gè)連續(xù)核苷酸，任選可為至少30個(gè)連續(xù)核苷酸、至少40個(gè)連續(xù)核苷酸、至少50個(gè)連續(xù)核苷酸、 至少100個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)或更長(zhǎng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，為了避免由于在多核苷酸序列中包含空位而與參考序列高度相似，通常引入空位罰分，并從匹配數(shù)字中減去空位罰分。用于比較的序列比對(duì)方法在本領(lǐng)域眾所周知。可通過以下方法進(jìn)行用于比較的序列最佳比對(duì)Smith和Waterman的局部同源性算法，Adv. Appl. Math. 2 :482(1981)； Needlemar^Prnmsch 的同源性比對(duì)算法，J. Mol. Biol. 48 :443(1970) ；Pearson 和 Lipman 的相似性搜索方法，Proc. Natl. Acad. Sci,85 :2444(1988)；這些算法的計(jì)算機(jī)執(zhí)行，包括但不限于PC/ 基因程序中的 CLUSTAL，Intelligenetics, Mountain View, Calif ；Wisconsin 遺傳學(xué)軟件包(Genetics Software Package)中的 GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA 和 TFASTA， Genetics Computer Group (GCG),575 Science Dr. , Madison, Wis. , USA ；由 Higgins 禾口 Sharp 恰當(dāng)闡述的 CLUSTAL 程序，Gene 73:237-244(1988) ；Higgins 和 Sharp，CABIOS 5 151-153(1989) ；Corpet,等，Nucleic acids Research 16 10881-90(1988) ;Huang 等， Computer Applications in the Biosciences 8:155-65(1992)；禾口 Pearson 等，Methods in Molecular Biology 24:307-331(1994)。可用于數(shù)據(jù)庫(kù)相似性搜尋的BLAST程序家族包括用于針對(duì)核苷酸數(shù)據(jù)庫(kù)序列的核苷酸查詢序列的BLASTN ；用于針對(duì)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)序列的核苷酸查詢序列的BLASTX ；用于針對(duì)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)序列的蛋白質(zhì)查詢序列的BLASTP ； 用于針對(duì)核苷酸數(shù)據(jù)庫(kù)序列的蛋白質(zhì)查詢序列的TBLASTN ；和用于針對(duì)核苷酸數(shù)據(jù)庫(kù)序列的核苷酸查詢序列的 TBLASTX。參見 Current Protocols in Molecular Biology，第 19 章， Ausubel 等編輯，Greene Publishing 禾口 Wiley-Interscience, New York(1995)。除非另外指出，否則本文提供的序列同一性/相似性值，是指用BLAST 2. 0程序組用默認(rèn)參數(shù)獲得的值。Altschul 等，Nucleic acids Res. 25 :3389-3402 (1997)。用于進(jìn)行BLAST分析的軟件可例如通過生物技術(shù)信息國(guó)家中心(National Center for Biotechnology-Information) (http://www. hcbi. nlm. nih. rov/)公開獲得。該算法包括首先通過確定查詢序列中長(zhǎng)度W的短字串(word)來確定高得分序列對(duì)(HSP)，該短字串當(dāng)與數(shù)據(jù)庫(kù)序列中同樣長(zhǎng)度的字比對(duì)時(shí)，與某些正閥值分T匹配或符合。T被稱為鄰近字串分?jǐn)?shù)閥值(Altschul等，見上述)。這些初始鄰近字串命中作為用于啟始搜尋以發(fā)現(xiàn)含有它們的更長(zhǎng)HSP的種子。然后只要累積比對(duì)分?jǐn)?shù)可以增加，字串命中以兩個(gè)方向沿著每一個(gè)序列延伸。對(duì)于核苷酸序列，用參數(shù)M(匹配殘基對(duì)的獎(jiǎng)分；總是> 0)和N(不匹配殘基的罰分；總是<0)計(jì)算累積分?jǐn)?shù)。對(duì)于氨基酸序列，用打分矩陣來計(jì)算累積分?jǐn)?shù)。當(dāng)以下情況出現(xiàn)時(shí)，停止每一個(gè)方向的字串命中延伸累積比對(duì)分?jǐn)?shù)從其最大獲得值減少數(shù)量X ； 由于一個(gè)或多個(gè)負(fù)得分殘基比對(duì)的累積所致，累積分?jǐn)?shù)為0或低于0 ；或到達(dá)任一序列的末端。BLAST算法參數(shù)W、T和X決定比對(duì)的靈敏度及速度。BLASTN程序(對(duì)于核苷酸序列) 用以下默認(rèn)值字長(zhǎng)(W)為11，期望值(E)為10，閥值為100，M = 5，N = -4，兩條鏈都進(jìn)行比較。對(duì)于氨基酸序列，BLASTP程序用以下默認(rèn)值和BL0SUM62打分矩陣字長(zhǎng)(W)為3，期望值(E)為 10 (參見 Henikoff & Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915)。除計(jì)算序列同一性百分比外，BLAST算法亦進(jìn)行兩個(gè)序列間的相似性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 (參見例如 Karlin & Altschul，Proc. Natl. Acad. ki. USA 90:5873-5787(1993))。BLAST 算法提供的一種相似性量度是最小和概率(P(N))，其提供兩個(gè)核苷酸或氨基酸序列之間偶然出現(xiàn)匹配的可能性的指標(biāo)。BLAST搜索假定蛋白質(zhì)可作為隨機(jī)序列建模。然而，很多真實(shí)蛋白質(zhì)包含非隨機(jī)序列區(qū)域，它們可以是同聚合物區(qū)域(homopolymeric tract)、短期重復(fù)或富含一個(gè)或多個(gè)氨基酸的區(qū)域?？稍诓幌嚓P(guān)的蛋白質(zhì)之間比對(duì)所述低復(fù)雜度區(qū)域，雖然所述蛋白質(zhì)的其它區(qū)域完全不相似?？刹捎迷S多低復(fù)雜度過濾程序來減少所述低復(fù)雜度比對(duì)。例如，可單獨(dú)采用或聯(lián)合采用SEG(Wooten和Federhen, Comput. Chem.，17 149-163(1993))和 XNU (Claverie 和 States, Comput. Chem. , 17 :191-201(1993))低復(fù)雜度過濾器ο本文在兩個(gè)核酸或多肽序列情況下所用“序列同一性”或“同一性”，是指在特定比較窗內(nèi)針對(duì)最大一致性進(jìn)行比對(duì)時(shí)，這兩個(gè)序列中相同的的殘基。當(dāng)在提及蛋白質(zhì)時(shí)使用序列同一性百分比時(shí)，應(yīng)認(rèn)識(shí)到不同一的殘基位置通常是因保守氨基酸取代而不同，即在這些位置氨基酸殘基被具有相似化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)的其它氨基酸殘基取代， 因而并不改變分子的功能特性。當(dāng)序列因保守取代而不同時(shí)，可向上調(diào)整序列同一性百分比以校正取代的保守特性。認(rèn)為因所述保守取代而不同的序列具有“序列相似性”或“相似性”。用于進(jìn)行這種調(diào)整的手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。通常這包括將保守取代記分為部分不匹配而不是完全不匹配，藉此提高序列同一性百分比。因此，例如當(dāng)將相同氨基酸記為1分而非保守取代賦予0分時(shí)，將保守取代賦予0和1之間的分值。例如，按照例如在程序 PC/GENEantelligenetics，Mountain View, Calif.，USA)中執(zhí)行的 Meyers 和 Miller (Computer Applic. Biol, Sci.，4 :11-17(1988))算法計(jì)算保守取代得分。本文所用“序列同一性百分比”，意指通過在比較窗內(nèi)比較兩個(gè)最佳比對(duì)的序列而測(cè)定的值，其中比較窗中的多核苷酸序列部分與參考序列(不包含添加或缺失)相比可包含添加或缺失(即空位)用于兩個(gè)序列的最佳比對(duì)。百分比如下計(jì)算通過測(cè)定兩個(gè)序列中出現(xiàn)相同的核酸堿基或氨基酸殘基的位置數(shù)，以產(chǎn)生匹配位置數(shù)，用匹配位置數(shù)除以比較窗中的位置總數(shù)，再將該結(jié)果乘以100，獲得序列同一性百分比。多核苷酸序列的術(shù)語(yǔ)“基本同一性”，意指用所述比對(duì)程序之一，使用標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)與參考序列相比，多核苷酸包含具有至少70%序列同一性、至少80%序列同一性、至少90% 序列同一性和至少95%序列同一性的序列。技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，可通過考慮密碼子簡(jiǎn)并性、氨基酸相似性、讀框定位等，適當(dāng)調(diào)整這些值以確定由兩個(gè)核苷酸序列編碼的蛋白質(zhì)的相應(yīng)同一性。為了這些目的，氨基酸序列的基本同一性通常意指至少60%或至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的序列同一性。核苷酸序列基本上同一的另一指標(biāo)，是兩個(gè)分子在嚴(yán)格條件下是否彼此雜交。然而，如果其編碼的多肽基本上同一，則在嚴(yán)格條件下彼此不雜交的核酸仍然基本上同一。這可例如當(dāng)用遺傳密碼所允許的最大密碼子簡(jiǎn)并性形成核酸拷貝時(shí)發(fā)生。兩個(gè)核酸序列基本上同一的一個(gè)指標(biāo)是，第一核酸編碼的多肽與由第二核酸編碼的多肽有免疫學(xué)交叉反應(yīng)。在肽情況中的術(shù)語(yǔ)“基本同一性”，表示肽在特定比較窗內(nèi)包含與參考序列具有至少70 %序列同一性、至少80 %、至少85 %、至少90 %或95 %序列同一性的序列。任選用 Needleman和Wunsch，J. Mol. Biol. 48 =443(1970)的同源性比對(duì)算法進(jìn)行最佳比對(duì)。兩個(gè)肽序列基本上同一的指標(biāo)是，一條肽與針對(duì)第二肽產(chǎn)生的抗體有免疫學(xué)反應(yīng)。因此，例如當(dāng)兩條肽僅僅因保守取代而不同時(shí)，一條肽基本上與第二肽同一。“基本上相似”的肽除了不同一的殘基位置可因保守氨基酸變化而不同之外，共有如上所述序列。本文所用術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域”(亦稱為“PTD”、“特洛伊肽”、“膜易位序列”、 “細(xì)胞滲透性蛋白質(zhì)”、“CPP”)，是指通常能夠滲入哺乳動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)膜的肽類。PTD通常為10-16個(gè)氨基酸長(zhǎng)，并能夠?qū)⒍喾N類型和分子量的化合物轉(zhuǎn)運(yùn)跨過哺乳動(dòng)物細(xì)胞。這些化合物包括但不限于效應(yīng)器分子(例如蛋白質(zhì)、DNA、綴合肽、寡核苷酸)和小粒子(例如脂質(zhì)體)。當(dāng)PTD在化學(xué)上與其它蛋白質(zhì)連接或融合形成融合蛋白時(shí)，這些融合蛋白仍能夠滲透細(xì)胞質(zhì)膜并進(jìn)入細(xì)胞。本文所用術(shù)語(yǔ)“減低”或“降低”是指在程度、強(qiáng)度、狀態(tài)、狀況或限度方面降低或減少。術(shù)語(yǔ)“調(diào)控序列”(亦稱為“調(diào)節(jié)區(qū)”或“調(diào)節(jié)元件”)是指啟動(dòng)子、增強(qiáng)子或其它 DNA區(qū)段，其中調(diào)控蛋白例如轉(zhuǎn)錄因子優(yōu)先結(jié)合在此以控制基因表達(dá)從而控制蛋白質(zhì)表達(dá)。術(shù)語(yǔ)“受試者”或“個(gè)體或“患者”可互換使用，是指哺乳動(dòng)物來源的動(dòng)物物種成員， 包括但不限于小鼠、大鼠、貓、山羊、綿羊、馬、倉(cāng)鼠、雪貂、鴨嘴獸、豬、狗、豚鼠、兔和靈長(zhǎng)類， 例如猴、猿或人。術(shù)語(yǔ)“緩釋”(亦稱為“延釋”)在此以其常規(guī)含義使用，是指在延長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)提供藥物的逐漸釋放的藥物制劑，盡管不是必需但優(yōu)選在延長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)產(chǎn)生基本上恒定的血液藥物水平。本文所用術(shù)語(yǔ)“癥狀”是指病癥或疾病的征兆或跡象，尤其是當(dāng)個(gè)體隨正常功能、 感覺或外觀改變而經(jīng)歷的征兆或跡象。本文所用術(shù)語(yǔ)“綜合征”是指指示某些疾病或病況的癥狀模式。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療劑”是指提供治療效果的藥物、分子、核酸、蛋白質(zhì)、代謝物、 肽、組合物或其它物質(zhì)。本文所用術(shù)語(yǔ)“活性”是指負(fù)責(zé)預(yù)期治療效果的本發(fā)明組合物的成分、組分或要素。本文中術(shù)語(yǔ)“治療劑”和“活性劑”可互換使用。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療分量(therapeutic component) ”是指消除、減少或防止一定百分比群體中特定疾病表現(xiàn)的進(jìn)展的治療有效劑量(即給藥劑量和給藥頻率)。常用的治療分量的實(shí)例是ED50，其闡述在50%群體中對(duì)特定疾病表現(xiàn)治療有效的特定用量中的劑量。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療結(jié)構(gòu)域”是指與肽KALNRQLGVAA[SEQ ID NO :13]或其區(qū)段具有基本同一性的肽、肽區(qū)段或其變體或衍生物。治療結(jié)構(gòu)域通常不能滲透哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜，當(dāng)其與激酶接觸時(shí)，抑制激酶使得該激酶的激酶活性降低。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約99%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約95%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約90%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約85%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約80%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約75%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約70%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約80%。 治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約75%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約70%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約65%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約60%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約55%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約50%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約45%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約40%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約35%。 治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約30%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約25%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約20%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約 15%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約10%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約9%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約8%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約7%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約6%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約5%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約4%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約3%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約2%。 治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約1%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約0. 1%。治療結(jié)構(gòu)域可抑制激酶使得該激酶活性為未被抑制的激酶的約0. 01%。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療抑制劑肽”是指由第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的肽。第一結(jié)構(gòu)域包含蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)，并位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)。位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的第二結(jié)構(gòu)域包含治療結(jié)構(gòu)域。本文所用術(shù)語(yǔ)“近側(cè)”是指在空間、時(shí)間或次序方面極為靠近或貼近。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療效果”是指治療結(jié)果，其是經(jīng)判斷為希望得到并有益的結(jié)果。 治療效果可包括直接或間接阻止、減輕或消除疾病表明現(xiàn)。治療效果亦可包括直接或間接阻止、減輕或消除疾病顯現(xiàn)進(jìn)展。術(shù)語(yǔ)本發(fā)明一種或多種活性劑的“治療有效量”或“有效量”，為足以提供治療效果的量。本發(fā)明可采用的活性劑的有效量通常介于約0. OOOOOlmg/ kg體重-約100mg/kg體重之間。然而，劑量水平基于多種因素而定，所述因素包括損傷類型、患者的年齡、體重、性別、醫(yī)療條件、病況的嚴(yán)重程度、給藥途徑及所采用的特定活性劑。 因此，劑量方案可在大范圍變化，但可由醫(yī)師用標(biāo)準(zhǔn)方法常規(guī)確定。存在將核酸轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中的方法。本文所用術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction或 transduce) ”，是指穿過生物膜的過程。穿過生物膜可為從一個(gè)細(xì)胞到另一個(gè)細(xì)胞、從細(xì)胞外環(huán)境到細(xì)胞內(nèi)環(huán)境或穿過細(xì)胞膜或核膜。可經(jīng)歷轉(zhuǎn)導(dǎo)的物質(zhì)包括但不限于蛋白質(zhì)、融合蛋白、肽、多肽、氨基酸、病毒DNA和細(xì)菌DNA。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療”是指實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)中一個(gè)或多個(gè)(a)減輕病癥的嚴(yán)重程度；(b)限制待治療病癥特有的癥狀的發(fā)展；(c)限制待治療病癥特有的癥狀的惡化；(d) 限制先前有病癥的患者的病癥復(fù)發(fā)；和(e)限制先前有病癥癥狀的患者的癥狀復(fù)發(fā)。本文所用術(shù)語(yǔ)“變體”及其不同語(yǔ)法形式，是指基本上與參考核苷酸序列或參考氨基酸序列分別具有同一性的核苷酸序列或氨基酸序列。序列差異可為序列或結(jié)構(gòu)方面自然地改變或通過設(shè)計(jì)改變的結(jié)果。天然改變可在特定核酸序列的正常復(fù)制或自然復(fù)制過程期間產(chǎn)生。有計(jì)劃的改變可針對(duì)特定目的而特別設(shè)計(jì)，并為特定目的將其引入到序列中。所述特定改變可在體外用多種誘變技術(shù)實(shí)施。所述特定產(chǎn)生的序列變體可被稱為原始序列的 “突變體”或“衍生物”。技術(shù)人員同樣可產(chǎn)生具有單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或置換的多肽變體。 這些變體可尤其包括(a)其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被保守或非保守氨基酸取代的變體；(b)其中添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸的變體；(c)其中至少一個(gè)氨基酸包含取代基的變體； (d)其中靶標(biāo)蛋白與另一肽或多肽(例如融合配偶體、蛋白質(zhì)標(biāo)記或其它化學(xué)部分)融合的變體，所述融合可賦予靶標(biāo)蛋白有用的性質(zhì)，例如抗體的表位。用于獲得所述變體的技術(shù)包括遺傳(阻制、缺失、突變等)、化學(xué)和酶技術(shù)，其為技術(shù)人員所知。本文所用術(shù)語(yǔ)“突變” 是指在有機(jī)體的基因或染色體內(nèi)DNA序列的變化，導(dǎo)致產(chǎn)生在親代類型中未發(fā)現(xiàn)的新的品質(zhì)或性狀；或是指通過改變編碼基因的DNA的核苷酸序列或通過改變?nèi)旧w的物理排列而在染色體中發(fā)生這類變化的過程。突變的三種機(jī)制包括取代(一個(gè)堿基對(duì)交換另一個(gè)堿基對(duì))、添加(插入一個(gè)或多個(gè)堿基到序列中)和缺失(失去一個(gè)或多個(gè)堿基對(duì))。本文所用術(shù)語(yǔ)“取代”是指DNA中的一個(gè)或多個(gè)堿基交換為另一個(gè)或多個(gè)堿基。 取代可為同義取代或非同義取代。本文所用“同義取代”是指在編碼蛋白質(zhì)的基因外顯子中一個(gè)堿基取代另一個(gè)堿基使得所產(chǎn)生的氨基酸序列未經(jīng)改變。本文所用術(shù)語(yǔ)“非同義取代”是指在編碼蛋白質(zhì)的基因外顯子中一個(gè)堿基取代另一個(gè)堿基使得產(chǎn)生的氨基酸序列改變了。在本文中術(shù)語(yǔ)“缺失”和“缺失突變”可互換使用，是指從DNA丟失了一個(gè)或多個(gè)堿基。本文所用術(shù)語(yǔ)“添加”是指將一個(gè)或多個(gè)堿基或一個(gè)或多個(gè)氨基酸插入到序列中。以下代表彼此保守取代的氨基酸組1)丙氨酸㈧、絲氨酸⑶、蘇氨酸⑴；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E) ；3)天冬酰胺(N)、谷氨酸(Q) ；4)精氨酸(R)、賴氨酸(K) ；5)異亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸 (W)。組合物治療性激酶抑制劑肽一方面，本發(fā)明提供用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的激酶抑制組合物，所述組合物包含(a)治療有效量的治療抑制劑肽，其中治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶，其中治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中第一結(jié)構(gòu)域包含蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)，并位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)，其中位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的第二結(jié)構(gòu)域包含治療結(jié)構(gòu)域，其中所述組合物直接或間接降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。按照一個(gè)實(shí)施方案，第一結(jié)構(gòu)域位于第二結(jié)構(gòu)域的5'。根據(jù)另一實(shí)施方案，第二結(jié)構(gòu)域位于第一結(jié)構(gòu)域的3'。按照一個(gè)實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約 100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約0. 0000lmg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約0. OOOlmg/ kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約 0. 001mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約0. 0lmg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約0. lmg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約lmg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約10mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約20mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約30mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約40mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約50mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約60mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約70mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約80mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制性肽的治療有效量為約90mg/kg體重-約100mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案， 治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約90mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約80mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約70mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約60mg/kg 體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約
3450mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. OOOOOlmg/ kg體重-約40mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約 0. 00000lmg/kg體重-約30mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約20mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約10mg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約lmg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案， 治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約0. lmg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約0. lmg/kg體重的量。 根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約0. 0lmg/kg 體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. 00000lmg/kg體重-約 0. 00lmg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約0. OOOOOlmg/ kg體重-約0. 000lmg/kg體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療有效量為約 0. 00000lmg/kg 體重-約 0. 0000lmg/kg 體重的量。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案， 本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。 根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO 11]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 16]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案， 本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO :18]的肽。 根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO 19]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO 20]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGVAA[SEQ ID N0:13]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄?KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGVA[SEQ ID NO :29] 的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯KKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:30]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄?KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案， 本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLAVAA[SEQ ID NO 27]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的 PTD為具有氨基酸序列WjRRIKA[SEQ ID NO ;32]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO :33]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列mJ RIKAWLRRI [SEQ ID NO 34]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列FAKLAARLYR[SEQ ID NO :35]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的 PTD為具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR[SEQ ID NO :36]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，第一結(jié)構(gòu)域位于第二結(jié)構(gòu)域的5'。根據(jù)另一實(shí)施方案，第二結(jié)構(gòu)域位于第一結(jié)構(gòu)域的3'。根據(jù)另一實(shí)施方案，第一結(jié)構(gòu)域可操作地與第二結(jié)構(gòu)域連接。根據(jù)另一實(shí)施方案，第二結(jié)構(gòu)域可操作地與第一結(jié)構(gòu)域連接。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，激酶為MK2。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，激酶為MK3。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為 CaMK0根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為纖維化。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為內(nèi)毒素休克。內(nèi)毒素休克(感染性休克)是其中因存在炎性物質(zhì)所致循環(huán)系統(tǒng)不能為身體組織提供充足循環(huán)的病況。研究報(bào)道血清 TNF-α水平?jīng)Q定內(nèi)毒素休克的致死或非致死進(jìn)程(Mozes，Τ.等，Immunol. Lett. 27 (2) 157-62，1991)，而感染性休克患者的IL-6水平顯著提高了 (ffaage, A.等，J. Exp. Med. 169 333-338，1989)。內(nèi)毒素休克的癥狀包括但不限于輕度發(fā)燒、缺乏饑餓感、輕微精神和身體抑郁、心率增快、低脈壓、脫水和腹瀉。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為胰腺炎。胰腺炎是胰腺炎癥。急性胰腺炎是突然性的，而慢性胰腺炎特征為再發(fā)性或持續(xù)性腹痛，有或沒有脂肪瀉或糖尿病。有大量證據(jù)顯示促炎性細(xì)胞因子(例如TNF-α、IL-I β)在急性胰腺炎病理生理學(xué)中起關(guān)鍵作用，并可通過起近側(cè)中介物(proximal mediator)作用來介導(dǎo)急性胰腺炎的全身并發(fā)癥，該中介物誘導(dǎo)產(chǎn)生其它中介物，包括IL-6和IL-8。已表明IL-I β和TNF-α作為導(dǎo)致疾病進(jìn)展的物質(zhì)，IL-6 和 IL-8 作為嚴(yán)重程度指示劑(Pooran，N.等，J. Clin. Gastroenterol. 37(3) 263-266,2003).胰腺炎的癥狀包括但不限于嚴(yán)重上腹部痛且輻射至背部、惡心、嘔吐、血壓波動(dòng)(高或低)、心率提高、呼吸頻率提高、腹部壓痛并且腸鳴音可降低。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為哮喘。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為局限性炎性疾病。研究報(bào)道循環(huán)IL-6和 TNF-α在誘導(dǎo)局部炎性反應(yīng)中起重要作用(Xing, Ζ. J. Clin, Invest. 101 (2) :311-320, 1998)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病(動(dòng)脈粥樣硬化， ASVD)。ASVD是其中因累積脂肪物質(zhì)例如膽固醇所致動(dòng)脈壁增厚的病況。其為以下綜合征，其部分地由于巨噬細(xì)胞白細(xì)胞聚積而影響動(dòng)脈血管(動(dòng)脈壁中的慢性炎性反應(yīng))，并被低密度脂蛋白促進(jìn)，功能性高密度脂蛋白未能從巨噬細(xì)胞充分除去脂肪和膽固醇。研究表明，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展和臨床后遺癥中IL-Ιβ為調(diào)節(jié)蛋白(Moyer，C. F.等， Am. J.Pathol. 138(4) ；951-960，1991)。另外的研究報(bào)道IL-6和TNF-α亦與動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)因子有關(guān)(Haddy, N.等，Atherosclerosis. 70(2) :277-283. 2003) 動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病的癥狀包括但不限于心臟病發(fā)作、心臟性猝死(在癥狀開始后1小時(shí)內(nèi)死亡)、 外周動(dòng)脈閉塞性疾病、動(dòng)脈粥樣化形成(粥樣斑塊的形成過程)和狹窄。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為阿爾茨海默氏病。阿爾茨海默氏病(AD)是癡呆的形式。AD特征為在大腦皮質(zhì)和某些皮質(zhì)下區(qū)域中失去神經(jīng)元和突觸。這種失去導(dǎo)致受影響區(qū)域的總體萎縮，包括顳葉和頂葉以及部分額皮質(zhì)和扣帶回退化。AD的起因及進(jìn)展尚未完全了解，但通常認(rèn)為涉及神經(jīng)原纖維纏結(jié)及淀粉樣蛋白β。某些研究提示AD中淀粉樣蛋白生成是IL-I β /IL-6介導(dǎo)的大腦中急性期反應(yīng)的結(jié)果(VandenabeelhP.和Fiers， W. Immunol. Today. 12(7) :217-9. 1991)。另外的研究提示 TNF-α 及 IL-1 β 表達(dá)水平和認(rèn)知缺損之間的相關(guān)性(Alvarez，X.等，Mol. Chem. Neuropathol. 29 (2-3) :237-252. 1996)。 AD癥狀包括但不限于記憶喪失、意識(shí)錯(cuò)亂、易激惹、攻擊性、情緒波動(dòng)和死亡。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為腫瘤病。腫瘤病包括但不限于上皮來源的癌癥，例如但不限于乳腺癌和前列腺癌。根據(jù)某些實(shí)施方案，所述病癥為乳腺癌。根據(jù)某些實(shí)施方案，所述病癥為前列腺癌。乳腺癌為在乳腺組織中形成的癌癥，所述組織通常是導(dǎo)管(將乳輸送到乳頭的管道)和小葉(產(chǎn)乳的腺體)。乳腺癌有四個(gè)分期。0期(原位癌)，包括原位小葉癌(“LCIS”) 和原位管癌(“DCIS”)，其中癌細(xì)胞分別存在于小葉或?qū)Ч芤r里內(nèi)。1期為浸潤(rùn)性乳腺癌的早期階段，其中腫瘤不超過2cm跨度，癌細(xì)胞未擴(kuò)散到乳腺之外。在II期中，腫瘤為(i) 直徑不超過2cm，癌已擴(kuò)散到臂下的淋巴結(jié)；(ii)直徑在2-4cm之間，癌可擴(kuò)散到臂下的淋巴結(jié)；或(iii)癌直徑大于5cm，癌未擴(kuò)散到臂下的淋巴結(jié)。III期可為大腫瘤，但癌尚未擴(kuò)散到乳腺及附近淋巴結(jié)之外。其為局部晚期癌癥。在IIIA期中，腫瘤直徑可小于或可不小于5cm，并已擴(kuò)散到臂下淋巴結(jié)。在IIIB期中，腫瘤業(yè)已長(zhǎng)到胸壁或乳腺皮膚，癌擴(kuò)散到胸骨后的淋巴結(jié)。在IIIC期，腫瘤為任何大小，并擴(kuò)散到臂下、胸骨后及鎖骨下或上的淋巴結(jié)。IV期為遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移癌，其中癌業(yè)已擴(kuò)散到身體的其它部分。研究報(bào)道在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中 IL-6 水平提高了 (Zhang, GJ.和 Adachi，I. Anticancer Res. 19 (2B) :1427-1432,1999)，且TNF-α可增強(qiáng)IL_6刺激乳腺腫瘤中雌激素合成的能力(Reed, MJ.和Purohit， A. Endocrine Rev. 18(5) :701-715,1997) 另外的研究報(bào)道腫瘤相關(guān)IL-1 β存在于腫瘤微環(huán)境中，并可在調(diào)節(jié)乳腺腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用(Kurtzman，S. H.等，Oncology Reports. 6(1) :65-70,1998)，前列腺癌為在前列腺(在膀胱下和直腸前面存在的雄性生殖系統(tǒng)腺體)組織中形成的癌。前列腺癌有4個(gè)分期。在1期中，直腸指檢期間不能感覺到癌，且在聲波圖中觀察不到。其在當(dāng)為另一原因進(jìn)行外科手術(shù)時(shí)偶然被發(fā)現(xiàn)。1期癌僅在前列腺中，級(jí)別為Gl (或 Gleason分?jǐn)?shù)不高于4分)。在II期中，腫瘤比1期更為晚期或級(jí)別更高，但腫瘤未延伸到前列腺之外。其可在直腸指檢中感覺到，或其在聲波圖中觀察到。在III期中，腫瘤延伸到前列腺外，可侵入到精囊中，但仍未擴(kuò)散到淋巴結(jié)。在IV期中，腫瘤可侵入膀胱、直腸或附近結(jié)構(gòu)(超出精囊)。其可擴(kuò)散到淋巴結(jié)、骨頭或身體的其它部位。研究報(bào)道轉(zhuǎn)移性疾病患者的IL-6和TNF-α血清水平比局限性疾病患者顯著高，這兩種細(xì)胞因子的水平都直接與疾病程度相關(guān)(Michalaki, V.等，Br. J. Cancer. 90(12) :2312-6, 2004)。另外的研究報(bào)道 IL-I β為不同腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)血管生成和侵襲性所需(Voronov，E.，等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA,100(5) :2645-沈50，200；3)?；加星傲邢侔┑娜丝蔁o(wú)任何癥狀。對(duì)于有癥狀的人而言，常見癥狀包括但不限于排尿問題、陽(yáng)痿、尿血或精血和下背、臀部或大腿上部經(jīng)常疼痛。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為缺血。缺血是通常因血管因素導(dǎo)致的血液供應(yīng)受限，因而導(dǎo)致組織功能障礙。研究報(bào)道在缺血后的早期再循環(huán)期間IL-6、IL-I β和 TNF-α 水平升高了(Saito，K.等，Neurosci. Lett. 206 (2-3) 149-152，1996)。缺血的癥狀包括但不限于血液供應(yīng)中氧和葡萄糖短缺。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，所述病癥為神經(jīng)缺血。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為克羅恩氏病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為炎性腸病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為內(nèi)膜增生。內(nèi)膜增生為血管內(nèi)膜(動(dòng)脈或靜脈的最內(nèi)層)增厚，其為再造程序或動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)(手術(shù)剝離脂肪包裹的增厚動(dòng)脈襯里以便打開或加寬動(dòng)脈用于改善血液循環(huán))的并發(fā)癥。其涉及機(jī)械、細(xì)胞及體液因子對(duì)平滑肌細(xì)胞的協(xié)調(diào)刺激以誘導(dǎo)細(xì)胞激活程序，所述細(xì)胞激活程序?qū)е略鲋?、遷移和細(xì)胞外基質(zhì)沉積。內(nèi)膜增生是血管對(duì)損傷的普遍存在的反應(yīng)。研究報(bào)道IL-6的過表達(dá)(受IL-I β 和TNF-α調(diào)節(jié))在粥樣斑相關(guān)細(xì)胞中起重要作用(Kornman, K.等，J. Perio. Res. 34(7) 353-357. 2006 ；Libby, P.等，Circulation. 86 (6 Supp 1) :11147-52. 1992))。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為狹窄。狹窄是血管或其它管狀器官或結(jié)構(gòu)異常變窄。產(chǎn)生的綜合征視受影響的結(jié)構(gòu)而定。研究報(bào)道IL-6的過表達(dá)(受IL-Ιβ和TNF-a 調(diào)節(jié))在粥樣斑相關(guān)細(xì)胞(Id)中起重要作用。狹窄癥狀可包括但不限于發(fā)紺(皮膚和黏膜發(fā)藍(lán))、萎縮性改變(例如毛發(fā)脫落和皮膚發(fā)光)、體溫降低、脈搏減弱、感覺異常和癱瘓。 根據(jù)一些這類實(shí)施方案，所述病癥為再狹窄(狹窄復(fù)發(fā))。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為平滑肌細(xì)胞腫瘤和轉(zhuǎn)移。業(yè)已研究了幾種平滑肌細(xì)胞腫瘤及其轉(zhuǎn)移。這些包括平滑肌瘤。這些新生物通常為良性平滑肌新生物，它們不是癌變前的腫瘤，可發(fā)生在任何器官中，例如子宮、小腸和食管。子宮纖維瘤是子宮平滑肌的平滑肌瘤。盡管是良性腫瘤，子宮纖維瘤仍可導(dǎo)致經(jīng)血過量、貧血和不育。皮膚平滑
38肌瘤包括孤立性皮膚平滑肌瘤、多發(fā)性皮膚(或毛發(fā))平滑肌瘤，其產(chǎn)生于立毛肌肌肉； 血管平滑肌瘤(血管的平滑肌瘤)；肉膜狀(或生殖器)平滑肌瘤，其起源于生殖器、乳暈和乳頭的肉膜肌肉；和血管脂肪平滑肌瘤。研究報(bào)道在平滑肌瘤、子宮內(nèi)膜異位和子宮內(nèi)膜息肉團(tuán)中的子宮腔含有高水平細(xì)胞因子，例如IL-Ιβ和TNF-α (Inagaki, N.等，Eur. J. Obst. Gyn. 111(2) 197-203，2003)。另外的研究報(bào)道IL-6亦在平滑肌瘤中表達(dá)(Luo, X 等，Endocrinology. 146(3) :1097-1118,2005) 根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為平滑肌痙攣。平滑肌痙攣為突發(fā)的無(wú)意識(shí)的平滑肌(肌肉群)收縮。研究報(bào)道抵抗動(dòng)脈中的血管反應(yīng)性與IL-I β、IL-6和TNF-α 之間的平衡相關(guān)(Vila, Ε.和 Salaices, Μ. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 H1016-H1021,2005)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為心絞痛(angina，angina pectoris)。心絞痛為因心肌缺血而引起的嚴(yán)重胸痛。研究報(bào)道在不穩(wěn)定心絞痛中常見高水平的IL-6，且其與預(yù)后不良有關(guān)(Biasucci，L.等，Circulation. 94 :874-877. 1996)。另外，研究報(bào)道了 IL-6 和TNF-α的表達(dá)水平與冠脈死亡率之間的關(guān)聯(lián)(Koukkunen, H.等，Annals Med. 33(1) 37-47.2001)。心絞痛的癥狀包括但不限于胸部不適、胸痛、壓迫感、沉悶、憋悶、窒息、胸口、腹上部灼燒感或窒息感、背痛、頸部區(qū)疼痛、下頌疼痛、肩胛疼痛、惡心、嘔吐和臉色蒼白。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為普林茲邁托心絞痛(變異型心絞痛)。普林茲邁托心絞痛發(fā)生在正常冠狀動(dòng)脈或不明顯的動(dòng)脈粥樣硬化患者中。癥狀包括但不限于心絞痛的那些癥狀，通常在循環(huán)中靜止時(shí)(而不是在運(yùn)行時(shí))發(fā)生。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為心動(dòng)過緩(緩慢性心律失常)。心動(dòng)過緩是指靜息心率在每分鐘60拍以下。研究報(bào)道IL-I β、IL-6和TNF-α水平提高與心動(dòng)過緩有關(guān) (Fukuhara,Y.等，Toxicol. 41 (1) :49-55. 2003)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為緩慢
性心律失常。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為高血壓。高血壓是指升高的血壓(高血壓)。研究報(bào)道IL-I β、IL-6和TNF-α提高水平與心動(dòng)過緩有關(guān)(Fukuhara，Y.等， Toxicol. 41 (1) :49-55. 2003)。高血壓癥狀包括但不限于頭痛、嗜眠、意識(shí)錯(cuò)亂、視力障礙、 惡心、嘔吐、癲癇、易激惹和呼吸窘迫。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為心臟肥大(心臟增大)。心室肥大是心臟的心室變大。心室肥大通常與因高血壓(或其它疾病狀態(tài))而引起的病理變化有關(guān)。研究報(bào)道 IL-I β和TNF-α足以刺激增大性生長(zhǎng)反應(yīng)，提示過表達(dá)IL_6可導(dǎo)致心臟肥大(Yokoyama， Τ.等，Circulation. 95 :1247-1252. 1997)。心臟肥大的癥狀可包括但不限于頭痛、嗜眠、 意識(shí)錯(cuò)亂、視力障礙、惡心、嘔吐、癲癇、易激惹和呼吸窘迫。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為腎衰竭。當(dāng)腎臟不能適當(dāng)?shù)剡\(yùn)行時(shí)腎衰竭(腎臟衰竭)發(fā)生。研究報(bào)道了 IL-I β和TNF-α (Descamps-Latscha， B.等，J. Immunol. 154 ) :882-892. 1995)及增加的 IL-6 (Herbelin，A.等，Kidney Internat' 1. 39 :954-960. 1991)與腎衰竭的關(guān)聯(lián)。腎衰竭癥狀包括但不限于血液中高水平的尿、血液中磷酸鹽聚積、惡心、嘔吐、體重減輕、夜尿、發(fā)癢、心律失常、腿、踝或腳膨脹以及背或肋疼痛。
根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為中風(fēng)。中風(fēng)是因擾亂了對(duì)大腦的血液供應(yīng)而引起的大腦功能喪失。研究報(bào)道中風(fēng)后IL-6和TNF-α的血清水平增加了 O^rrareseiC 等，J. Cerebral Blood Flow Metabol. 19 1004-1009，1999)，并在局灶性腦缺血后增量調(diào)節(jié)IL-I β的表達(dá)水平(Wang, X.等，Stroke. 28 155-162，1997)。中風(fēng)癥狀包括但不限于 偏癱、麻木、感覺降低或振動(dòng)感覺、嗅覺改變、眼瞼下垂、平衡問題、失語(yǔ)癥、失用癥、記憶缺失和眩暈。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為肺動(dòng)脈高壓。肺動(dòng)脈高壓是指肺動(dòng)脈、肺靜脈或肺毛細(xì)血管血壓升高。研究報(bào)道在肺動(dòng)脈高壓患者中TNF-α水平升高了，IL-6血清水平?jīng)]有差異(Joppa, P.等，Chest. 130( :326-333. 2006) 肺動(dòng)脈高壓癥狀包括但不限于呼吸急促、頭昏、昏厥、外周性水腫和心力衰竭。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為妊娠毒血癥。妊娠毒血癥(妊娠高血壓病癥) 總的來說是指先兆子癇和子癇。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為先兆子癇。先兆子癇是與尿中大量蛋白有關(guān)的妊娠產(chǎn)生高血壓的病況。研究報(bào)道先兆子癇婦女與正常妊娠晚期婦女相比，IL-6 和 TNF-α 的血漿水平提高了 (Conrad, K.等，Am. J. R印ro. Immunol. 40 (2) 102-111,1998)。此外，在受試群(Id.)之間IL-1 β水平似乎未改變。癥狀包括但不限于血壓升高、母親內(nèi)皮、腎臟和肝臟廣泛受損。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為子癇。子癇特征為出現(xiàn)強(qiáng)直陣攣發(fā)作(癲癇大發(fā)作)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為未足月產(chǎn)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為雷諾病/現(xiàn)象。雷諾病為當(dāng)暴露于冷溫度或因響應(yīng)心理應(yīng)激時(shí)，影響到骨端(手指、腳趾、鼻和耳)的血流量的血管病癥。研究報(bào)道IL-6 和 TNF-α (Rychlik, W.，等，Int. Angiol. 25(4) :436.2006)在雷諾氏現(xiàn)象發(fā)病機(jī)制中起一定作用。雷諾病的癥狀包括但不限于發(fā)紺和臉色蒼白。如果癥狀是特發(fā)的，則診斷為雷諾病，而雷諾氏現(xiàn)象因多種其它病況而繼發(fā)發(fā)生，所述其它病況為例如但不限于結(jié)締組織病癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)炎和其它風(fēng)濕性疾病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為溶血性尿毒癥。研究報(bào)道，TNF- α和IL_1在溶血性尿毒癥綜合征期間誘導(dǎo)炎性中介物vero細(xì)胞毒素-1 (verocytotoxin-Ι)中起重要作用(van de Kar, N. C.等，Blood. 80 (11) =2755-2764,1992) 另外的研究報(bào)道 IL-6 水平亦提高了 (Karpman, D.等，Ped. N印hrol. 9 (6) =694-699,1995) 溶血性尿毒癥是特征為溶血性貧血(紅血細(xì)胞異常破裂)、急性腎衰竭(尿毒癥)和低血小板計(jì)數(shù)(血小板減少) 的疾病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為肛裂。肛裂為肛管皮膚的自然裂開或撕裂。大部分肛裂因肛門粘膜伸展超過其能力而引起。表面或淺肛裂通常將自愈。某些肛裂成為慢性和深部肛裂，不會(huì)痊愈。非痊愈性的最常見原因是內(nèi)部肛門括約肌肌肉痙攣，導(dǎo)致?lián)p害了到肛門粘膜的血液供應(yīng)。研究報(bào)道，在肛門周圍克羅恩氏病患者中比在小腸克羅恩氏病患者和健康對(duì)照者中的直腸粘膜IL-I β、IL-6和血清IL-6及TNF-α更高(Ruffolo，C等， Infl. Bowel Dis. 14(10) 1406-1412，2008)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為失弛緩癥。失弛緩癥(食管失馳緩、賁門失馳緩、賁門痙攣、食管蠕動(dòng)停止)是食管運(yùn)動(dòng)性失調(diào)。食管的平滑肌層失去正常蠕動(dòng)，食管下端的括約肌不能因響應(yīng)吞咽而合適地放松。研究報(bào)道與對(duì)照患者相比，食管炎患者粘膜中產(chǎn)生的 IL-6 和 IL-I β 的量顯著更多(Rieder，F(xiàn).等，Gastroenterol. 132 (1) :154-165, 2007)。癥狀包括但不限于吞咽困難、反胃、體重減輕、咳嗽和胸痛。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為陽(yáng)痿。勃起機(jī)能障礙(ED)是特征為不能使陰莖勃起或不能保持陰莖勃起的性功能障礙。發(fā)生勃起是因?yàn)檠哼M(jìn)入并保留在陰莖海綿體內(nèi)而產(chǎn)生的液壓作用所致。研究報(bào)道，ED患者中增加的IL-6、IL-I β和TNF-α血液水平與性表現(xiàn)負(fù)相關(guān)(Vlachopoulos，C.等，Eur. Heart. J. 27(22) :2640-2648. 2006)。ED 可有心血管病的癥狀。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為偏頭疼。偏頭疼是特征為劇烈頭痛、惡心和身體知覺改變的神經(jīng)綜合征。研究報(bào)道偏頭疼發(fā)作期間IL-6和TNF-α血清水平增加 (Peterlin，B.，等，Cephalagia. 27 (5) =435-446. 2007)。偏頭疼性頭痛是單邊脈沖式疼痛， 持續(xù)4小時(shí)-72小時(shí)；癥狀包括但不限于惡心、嘔吐、畏光和恐響癥。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為與平滑肌痙攣有關(guān)的缺血性肌肉損傷。研究報(bào)道，IL-1、IL-6和TNF-α產(chǎn)生負(fù)性肌力作用，在遭受缺血-再灌注的心肌膜中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用(Saini, H. K. Exp. Clin. Cardiol. 10(4) :213-222,2005) 根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為血管病變。血管病變是指特征為血管炎性破壞的異質(zhì)病癥群。動(dòng)脈和靜脈二者都可受影響。研究報(bào)道，IL-6是心臟移植相關(guān)的冠狀血管病變的重要風(fēng)險(xiǎn)因子(Densem,C.等，J.Heart Lung Transpl, 24 (5) :559_565，2005)。血管病變癥狀包括但不限于發(fā)熱、體重減輕、紫癜、網(wǎng)狀青斑、肌痛或肌炎、關(guān)節(jié)痛或關(guān)節(jié)炎、 多發(fā)性單神經(jīng)炎(mononeuritis muliplex)、頭痛、中風(fēng)、耳鳴、視力敏銳度減退(reduced visual acutity)、急性視力喪失、心肌梗塞、高血壓、壞疽、鼻出血、咳血、肺浸潤(rùn)、腹痛、血便和腎小球腎炎。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為充血性心力衰竭(CHF)。充血性心力衰竭是其中心臟不能維持身體內(nèi)充足的血液循環(huán)的病況。研究報(bào)道，CHF患者與正常健康受試者相比時(shí) IL-6 和 TNF-α 水平提高(Aukrust，P.等，Am. J. Cardiol. 83(3) :376-382. 1999)。CHF 的典型癥狀包括但不限于呼吸急促、咳嗽、腳及踝腫脹、腹部腫脹、增加體重、不規(guī)則脈或疾脈、疲憊、虛弱、心律失常、貧血和甲狀腺功能亢進(jìn)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為心肌頓抑或冬眠心肌。本文所用術(shù)語(yǔ)“慢性心肌缺血(CMI) ”是指因冠狀血管變窄而引起的心肌缺血的長(zhǎng)期亞急性或慢性狀態(tài)，其中心肌“冬眠”意指心肌減量調(diào)節(jié)或降低其收縮性，因此要求其心肌氧與降低的灌注匹配，藉此保存細(xì)胞存活力并防止心肌壞死。這種冬眠心肌在恢復(fù)足量血液供應(yīng)后能夠回到正?；蚪咏９δ?。一旦冠狀血流量恢復(fù)到正?；蚪咏?，缺血就解決了，然而，冬眠心肌仍不能收縮。這種流量-功能不匹配導(dǎo)致的在解決缺血后心肌功能慢速回復(fù)，稱為頓抑。功能恢復(fù)的時(shí)間長(zhǎng)度相當(dāng)不定，介于數(shù)天到數(shù)月之間，視多種參數(shù)而定，所述參數(shù)包括初始缺血性損傷的持續(xù)時(shí)間、初始損傷期間缺血的嚴(yán)重程度和動(dòng)脈流恢復(fù)的充分程度。多個(gè)研究提供了冬眠心肌中的炎癥的證據(jù)。Heusch, G.等，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 984-99 000 。研究亦報(bào)道，促炎性細(xì)胞因子例如IL-6和TNF-α在不復(fù)雜的冠狀血管重建后提高了，可促成手術(shù)后的心肌缺血和節(jié)段性壁異常(Rankin，J. J. Thorac. Cardiovas. Surg. 108 :626-35. 1994)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為舒張期功能障礙。舒張期功能障礙是指在心
41舒期期間心臟(即左心室)充血異常。心舒期是當(dāng)心臟(即心室)不收縮而是實(shí)際上松弛并填充從身體(進(jìn)入右心室)或從肺(進(jìn)入左心室)回來的血液時(shí)的心臟周期時(shí)期。研究表明，IL-6、IL_li3和TNF-α在全身膿毒病和其它形式的心臟功能障礙中介導(dǎo)心肌抑制 (Kelly, R.和 Smith，Τ. W. Circulation，95 :778-781,1997) 癥狀包括但不限于肺水腫、高血壓、大動(dòng)脈狹窄、瘢痕性心臟組織和糖尿病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為神經(jīng)膠質(zhì)增生(意指星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖，其可包括細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷區(qū)域沉積)。研究報(bào)道IL-I和IL-6促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕形成，而不誘導(dǎo)11^-6釋放的1順-(1不誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)增生(Woiciechowsky^ 等，Med. Sci. Monit. 10 (9) :BR325_330. 2004)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為慢性阻塞性肺病(COPD)(意指特征為氣流阻塞或受限的呼吸道病；其包括但不限于慢性支氣管炎和肺氣腫)。在COPD患者的痰中測(cè)量到 IL-6、IL-I β 和 TNF- α 的水平提高了 (Chung, K. Eur. Respir. J. 18 :50s_59S，2001)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為骨質(zhì)減少。骨質(zhì)減少是其中骨礦物質(zhì)密質(zhì) (其表明骨的密度和強(qiáng)度)低于正常健康受試者但未低到被分類為骨質(zhì)疏松癥的病況。骨質(zhì)減少可定義為骨礦物質(zhì)密質(zhì)T分在-1. 0和-2. 5之間，如通過雙能X線吸收計(jì)量術(shù)(DEXA) 所測(cè)。研究報(bào)道IL-I β、IL-6和TNF-α在骨吸收誘導(dǎo)中起一定作用(Rifas, L. Calcif. Tissue Int. 64 :1-7. 1999)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為變性關(guān)節(jié)炎(骨關(guān)節(jié)炎，OA)。骨關(guān)節(jié)炎是由一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的軟骨分解及最終損失引起的關(guān)節(jié)炎類型。骨關(guān)節(jié)炎通常影響手、 腳、脊椎和負(fù)荷大重量的關(guān)節(jié)，例如臀和膝。研究報(bào)道，伴隨促炎性細(xì)胞因子(IL-la、 IL-I β、TNF- α )產(chǎn)生的慢性炎性改變是早期OA患者滑膜的特征(Smith，Μ. D.，等， J. Rhematol. 24 (2) :365_371，1997)。骨關(guān)節(jié)炎的癥狀包括但不限于在反復(fù)使用后受影響的一處或多處關(guān)節(jié)疼痛、膨脹、溫暖感和受影響的一處或多處關(guān)節(jié)嘎吱作響。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為強(qiáng)直性脊柱炎。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為斯耶格倫病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為格-巴綜合征。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為硬皮病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為膿毒病。膿毒病是特征為全身性炎性狀態(tài) (全身炎癥反應(yīng)綜合征(S^S))并存在已知感染或懷疑有感染的病況。身體可對(duì)血液、尿、 肺、皮膚或其它組織中的微生物形成該炎性反應(yīng)。研究表明，IL-6和TNF-α為膿毒病有關(guān)的炎癥、發(fā)病率及與致死率中的關(guān)鍵中介物(Leon，L等，Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 275 :R269_R277. 1998)。膿毒病癥狀包括但不限于遍及整個(gè)身體的急性炎癥表現(xiàn)、發(fā)熱、白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高、惡心和嘔吐、心率加快和呼吸頻率增加。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，所述病癥為內(nèi)毒素休克。敗血癥是伴隨由于來自局部感染的致病力強(qiáng)的細(xì)菌侵入血流中所致毒性的全身性疾病。癥狀包括但不限于寒戰(zhàn)、發(fā)熱和疲勞。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為銀屑病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為放射性小腸炎。放射性腸病(放射性小腸炎)為由于放療所致的小腸襯里炎癥(膨脹)。研究報(bào)道輻射后IL-I β和TNF-α的 mRNA 水平提高了，且 IL-6 表達(dá)提高了(Linard，C.等，Int. J. Rad. Oncol. Biol. Phy. 58 O) 427-434. 2004)。放射性小腸炎的癥狀包括但不限于厭食、腹瀉、惡心、嘔吐和體重減輕。CN 102316731 A
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39/70 頁(yè)根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為肝硬化。肝硬化是因慢性肝病(CLD)引起的肝臟瘢痕形成和肝臟功能不良。研究報(bào)道，在慢性肝病患者中IL-Ιβ、TNF_a和IL_6的血清水平升高了，CLD患者的肝硬化組比無(wú)肝硬化的病例顯示更高的IL-I β、IL-6和TNF-α 血清水平(Tilg，H.等，Gastroenterology. 103(1) :264-74. 1992)。肝硬化的癥狀包括但不限于出血性瘡、意識(shí)錯(cuò)亂、陽(yáng)痿、黃疸病、惡心和嘔吐、體重減輕、胃氣脹、腹部消化不良、 發(fā)熱、腹痛和尿排出量減少。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為間質(zhì)纖維化。間質(zhì)性肺病或ILD包括超過180 種慢性肺病，其可為慢性非惡性(非癌性)和無(wú)傳染性的。間質(zhì)性肺病因肺氣囊之間稱為間質(zhì)組織的組織而得名，該組織為被纖維化(瘢痕形成)影響的組織。間質(zhì)性肺病亦可稱為間質(zhì)性肺纖維化或肺纖維化。研究報(bào)道，IL-I β的高水平表達(dá)伴隨IL-6和INF-α的局部增加及有明顯組織損傷的劇烈的急性炎性組織反應(yīng)(Kolb, Μ.等，J. Clin. Invest 107(12) 1529-1536,2001)。這些疾病中每一種的癥狀及過程可因人而異，但在多種形式的ILD之間共同的聯(lián)系是，它們都是從炎癥開始，例如細(xì)支氣管炎(涉及細(xì)支氣管(小氣道)的炎癥)； 肺泡炎(涉及肺泡(氣囊)的炎癥)；或脈管炎(涉及小血管(毛細(xì)血管)的炎癥)。超過 80%的間質(zhì)性肺病被診斷為塵肺病、藥物誘導(dǎo)的疾病或超敏感性肺炎。其它類型為結(jié)節(jié)?。惶匕l(fā)性肺纖維化；梗阻性細(xì)支氣管炎；組織細(xì)胞增多癥X ；慢性嗜酸性肺炎；膠原血管?。蝗庋磕[性脈管炎；古德帕斯丘綜合征和肺泡蛋白沉著癥。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為結(jié)腸炎。結(jié)腸炎是大腸(結(jié)腸)炎癥(膨脹)。結(jié)腸炎可有很多不同的原因，例如急性和慢性感染、炎性病癥(潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、淋巴細(xì)胞性和膠原性結(jié)腸炎)、血流量缺乏(缺血性結(jié)腸炎)和大腸輻射后。研究報(bào)道，結(jié)腸炎動(dòng)物模型中抑制TNF- α導(dǎo)致降低IL-I和IL_6水平，并減輕結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度 (Neurath，M.等，Eur. J. Immunol. 27(7) :1743-1750,2005) 結(jié)腸炎的癥狀包括但不限于腹部出血、腹痛、血便、脫水、腹瀉和腸積氣增加。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為闌尾炎。闌尾炎是闌尾發(fā)炎。闌尾是連在大腸上的小袋。研究報(bào)道，IL-6高水平表明是急性闌尾炎診斷的最好動(dòng)向(I^ajanen，H.等， Scan. J. Clin. Lab. Invest. 62(8) =579-584,2002)。另外的研究報(bào)道，在闌尾炎患者的腹膜液中 TNF-α 與低水平的 IL-6 一起存在(Fernando, Α.等，Ann. Surg. 237(3) =408-416, 2003)。闌尾炎癥狀包括但不限于腹痛、發(fā)熱、食欲降低、惡心、嘔吐、寒戰(zhàn)和便秘。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為胃炎。胃炎是胃襯里的炎癥。胃炎的常見原因包括例如酒精、吸煙和細(xì)菌感染。研究報(bào)道在感染幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)的患者(所有的都患有慢性胃炎)中比在幽門螺桿菌陰性且胃粘膜組織學(xué)上正常的患者中， 人胃粘膜產(chǎn)生的 TNF-α 和 IL-6 顯著高些(Crabtree，J.等，Gut. 32 1473-1477，1991)。胃炎的癥狀包括但不限于腹痛、腹部消化不良、黑便、食欲不振、惡心、嘔吐和吐血或咖啡渣樣物質(zhì)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為喉炎。喉炎是咽喉(喉)炎癥。喉炎通常與喪失聲音的聲嘶有關(guān)。喉位于氣管頂部，含有聲帶。當(dāng)聲帶發(fā)炎或感染時(shí)，其腫脹。這可引起聲嘶，有時(shí)可堵塞氣道。研究報(bào)道，在由鼻胃插管誘導(dǎo)的喉炎病例中IL-I β、IL_6和TNF-α 增加(Lima-Rodrigues，M.等，Larynscope. 1 18(1) :78-86. 2008)。喉炎癥狀包括發(fā)熱、聲嘶和頸部淋巴結(jié)或腺體腫脹。
根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為腦膜炎。腦膜炎是覆蓋腦和脊髓的膜發(fā)炎，其影響腦脊髓液。研究報(bào)道，重組形式的IL-6和TNF-α可誘導(dǎo)腦膜炎或血腦屏障損傷，這表明在腦脊髓液內(nèi)原位產(chǎn)生IL-I (有或沒有TNF)能夠介導(dǎo)腦膜發(fā)炎和血腦屏障損傷兩者， 血腦屏障損傷如在各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中所見(Quagliarello，V.等，J.Clin. Invest, 87(4) :1360-1366,1991)。腦膜炎的癥狀包括但不限于發(fā)熱和寒戰(zhàn)、精神狀態(tài)變化、惡心和嘔吐、畏光、劇烈頭痛、假性腦膜炎、激動(dòng)和呼吸急促。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為耳炎。耳炎是指耳朵感染或發(fā)炎。耳炎可影響耳朵的內(nèi)部或外部部分。按照其是突然短時(shí)間發(fā)生(急性)還是經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)發(fā)生(慢性)可對(duì)該病況進(jìn)行分類。研究報(bào)道在中耳炎動(dòng)物模型中IL-I β和TNF-α水平升高了 (Sato,K.等，Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 108(6) :559_63，1999)。另外的研究報(bào)道在有滲出液的中耳炎患者中 IL-6 水平提高了 (Jang, C.和 Kim, Y. Int. J. Ped. Otorhinol. 66(1) 37，2002)。癥狀包括但不限于寒戰(zhàn)、腹瀉、耳流出物、耳朵痛、耳鳴或嗡嗡響、發(fā)熱、聽力受損、易激惹、惡心和嘔吐。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為再灌注損傷。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為外傷性腦損傷。外傷性腦損傷由擊打或震動(dòng)頭部引起，或由擾亂大腦正常功能的穿通性頭部損傷引起。不是對(duì)頭部的所有擊打或震動(dòng)都導(dǎo)致外傷性腦損傷。外傷性腦損傷的嚴(yán)重程度可介于“輕微”(精神狀態(tài)或意識(shí)的短暫變化)到嚴(yán)重(損傷后長(zhǎng)時(shí)間無(wú)意識(shí)或遺忘)。研究報(bào)道，在嚴(yán)重外傷性腦損傷患者中IL-6 禾口 TNF-α 二者水平都提高了 (Csuka, E.等，J. Neuroimmunol. 101(2) :211-21,1999) 外傷性腦損傷的癥狀包括但不限于頭痛或脖子痛、記憶、集中精力或做決定困難、疲勞、情緒改變、惡心、畏光、視力模糊、耳鳴和喪失味覺或嗅覺。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為脊髓損傷。脊髓創(chuàng)傷或損傷為對(duì)脊髓的損傷，其可因?qū)顾璞旧淼膿p傷直接產(chǎn)生，或因?qū)χ車恰⒔M織或血管的損傷間接產(chǎn)生。 研究報(bào)道在損傷的脊髓中TNF-α、IL-6和IL_1 β的表達(dá)水平變高(Hayashi，Μ.等， J. Neurotrauma. 17(3) =203-18, 2000) 0脊髓損傷的癥狀包括但不限于虛弱和對(duì)損傷點(diǎn)或以下部位感覺缺失、呼吸困難、喪失正常的腸和膀胱控制、麻木、痙攣狀態(tài)和疼痛。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為周維神經(jīng)病變。術(shù)語(yǔ)“周維神經(jīng)病變”是指對(duì)周維神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。據(jù)報(bào)道在實(shí)驗(yàn)性軸索顯微外科術(shù)后過表達(dá)IL-6，并在損傷(神經(jīng)粉碎)后逐漸提高 IL-I 和 TNF-α 水平(Creange，Α.等，Eur. Cytokine Network. 8 (2) 145-51,1997)。癥狀與受影響的神經(jīng)類型有關(guān)，可在數(shù)天、數(shù)星期或數(shù)年時(shí)期內(nèi)觀察到。肌無(wú)力是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷最常見的癥狀。其它癥狀可包括疼痛性痙攣和肌束震顫(皮膚下可見的不受控制的肌肉顫搐)、肌肉損失、骨退化和皮膚、頭發(fā)及指甲變化。感覺神經(jīng)損傷引起更復(fù)雜的癥狀范圍，因?yàn)楦杏X神經(jīng)具有更廣的更高度特化的功能范圍。包裹在髓磷脂中的較大的感覺神經(jīng)纖維記憶感受震動(dòng)、輕觸和位置感覺。對(duì)大感覺纖維的損傷降低了感受震動(dòng)和觸覺的能力，導(dǎo)致麻木的總感覺，尤其是在手和腳中。沒有髓磷脂鞘的較小的感覺纖維傳播疼痛和溫度感覺。自主神經(jīng)損傷的癥狀多種多樣，視受影響的器官或腺體而定。自主神經(jīng)損傷的常見癥狀包括不能正常出汗，這可導(dǎo)致熱耐受不良；失去膀胱控制，這可引起感染或失禁；和不能控制肌肉，所述肌肉擴(kuò)張或收縮血管以維持安全血壓水平。喪失對(duì)血壓的控制可引起頭昏、頭暈或甚至當(dāng)人突然從坐著位置移動(dòng)到站立位置時(shí)昏厥(稱為體位性或直立性低血壓的病況)。胃腸癥狀經(jīng)常伴隨自主神經(jīng)病發(fā)生?？刂颇c肌肉收縮的神經(jīng)經(jīng)常失靈，導(dǎo)致腹瀉、便秘或失禁。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為多發(fā)性硬化。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為狼瘡(系統(tǒng)性紅斑狼瘡)。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為心代謝綜合征。心代謝綜合征(X綜合征， CMS)被定義為存在以下病況中的任何三種(i)腰周圍超重；(ii)高水平甘油三酯；(iii) 低水平HDL(好膽固醇)；(iv)高血壓；和(ν)高禁食血糖水平。CMS越來越盛行與肥胖癥相關(guān)，肥胖癥在很多年齡組中增加了。目前認(rèn)為CMS預(yù)測(cè)心血管死亡率和/或2型糖尿病的發(fā)展。CMS通過改變身體組成及脂肪再分布進(jìn)一步復(fù)雜化，通常與胰島素敏感性改變有關(guān)。很多糖尿病病人同時(shí)有這些病況中的幾種。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為肥胖癥。肥胖癥由國(guó)家衛(wèi)生院(NIH)定義為體重指數(shù)(BMI)為30及更高。體重指數(shù)是體重與身高的標(biāo)準(zhǔn)化比率，通常用作健康的一般指標(biāo)。可通過將體重(以千克計(jì))除以身高(以米計(jì))的平方來計(jì)算BMI。認(rèn)為18. 5和24. 9之間的BMI對(duì)大部分成年人為正常。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為II型糖尿病。2型糖尿病(非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)， 成年開始的糖尿病)是主要特征為胰島素抗性(當(dāng)存在胰島素時(shí)細(xì)胞無(wú)適當(dāng)反應(yīng))、相對(duì)胰島素缺乏和高血糖癥的代謝病癥。IL-6不僅損害胰島素敏感性，而且還是肝產(chǎn)生C反應(yīng)蛋白(該炎性標(biāo)記的最重要來源)的主要決定因素。對(duì)2型糖尿病患者的研究顯示，IL-6 的循環(huán)水平與內(nèi)臟脂肪面積(VFA)強(qiáng)相關(guān)，頸動(dòng)脈僵硬(動(dòng)脈粥樣硬化的指數(shù))與VFA和 IL-6及C-反應(yīng)蛋白水平二者都相關(guān)，這表明源自腹內(nèi)脂肪細(xì)胞的IL-6可參與加速2型糖尿病患者的動(dòng)脈粥樣硬化(Despres，J，Eur. Heart J. Supp 1. 8(B) :B4_B12，2006)。2 型糖尿病癥狀包括但不限于多尿和煩渴。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為I型糖尿病。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，炎性病癥為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。NASH為不是由于過量使用酒精引起的肝臟脂肪性炎癥。在NASH中，在肝臟中積聚脂肪，最終引起瘢痕組織。NASH可導(dǎo)致肝硬化。研究報(bào)道在NASH患者中TNF-α水平提高了(Bahceicoglu， H.等，！fepatoenterology. 52(65) 1549-53，2005)。另外的研究報(bào)道在 NASH 患者中 IL-6 水平(Kugelmas, M.等，H印atology. 38 O) 413-9 ；2003)和 IL-I β 水平(Brun, P.等， Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292 :G518_G525，2007)升高。NASH癥狀包括但不限于疲勞、不適和不明的右上象限腹部不適。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 KALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 WLRRIKAWLRR1KA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 WLRRIKAffLRRI [SEQ ID NO 34]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。另一方面，本發(fā)明提供分離的核酸，所述核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少85%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少86%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14] 的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少87%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。 在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少88%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少89%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少90%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列m^RRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少91%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少92%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少93%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14] 的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少94%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。 在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少95%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少96%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少97%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列m^RRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少98%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，分離的核酸編碼與治療抑制劑肽具有至少99%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些這類實(shí)施方案中，具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的治療抑制劑肽可操作地與可控調(diào)節(jié)元件連接。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] 的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 16]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO :18]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21] 的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，可將其中期需局部遞送組合物的激酶抑制組合物調(diào)配用于通過注射胃腸外給予，例如通過彈丸注射或連續(xù)輸注。用于注射的制劑可呈單位劑型，例如在安瓿或在多劑量容器中，且添加防腐劑。組合物可采取諸如在油性或水性溶媒中的混懸劑、 溶液劑或乳劑形式，可含有調(diào)配用劑，例如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。用于胃腸外給予的藥物制劑包括呈可水溶形式的活性化合物的水性溶液劑。另外，活性化合物的混懸劑可制備為合適的油性注射混懸劑。合適的親脂溶劑或溶媒包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。水性注射混懸劑可含有提高混懸劑的粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選混懸劑亦可含有合適的穩(wěn)定劑，或提高化合物的溶解度使其可用于制備高濃度的溶液劑的物質(zhì)?；蛘?，活性化合物可呈粉末形式用于在使用前用合適的溶媒例如無(wú)菌無(wú)熱原水構(gòu)成。藥物組合物(即激酶抑制組合物)亦可包含合適的固相或凝膠相載體或賦形劑。 所述載體或賦形劑的實(shí)例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物例如聚乙二醇。將合適的液態(tài)或固態(tài)藥物制劑形式例如與一種或多種賦形劑(視合適的情況而定)微囊化、蝸形化(encochleated)、包被到微型金顆粒上；包含在脂質(zhì)體、小丸中，用于植入到組織中；或干燥到待擦入到組織中的物體上。所述藥物組合物亦可呈以下形式顆粒劑、珠粒、散劑、片劑、包衣片劑、(微)膠囊劑、栓劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、霜?jiǎng)?、滴劑或延長(zhǎng)釋放活性化合物的制劑，在所述制劑中如上所述常規(guī)使用賦形劑和添加劑和/或輔助劑，例如崩解劑、粘合劑、涂層劑、膨脹劑、潤(rùn)滑劑或增溶劑。藥物組合物適用于多種藥物遞送系統(tǒng)。關(guān)于用于藥物遞送的方法簡(jiǎn)述，參見Langer 1990 Science M9，1527-1533，其在此引作參考。激酶抑制組合物和任選其它治療藥物，可以本身(純的)或以藥學(xué)上可接受的鹽形式給予。當(dāng)用于藥物中時(shí)，所述鹽應(yīng)該為藥學(xué)上可接受的鹽，但非藥學(xué)上可接受的鹽可合宜地用于制備其藥學(xué)上可接受的鹽。所述鹽包括但不限于從以下酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、對(duì)甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲烷磺酸、蟻酸、丙二酸、琥珀酸、2-萘磺酸和苯磺酸。所述鹽亦可制備為堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如羧酸基團(tuán)的鈉、鉀或鈣鹽?！八帉W(xué)上可接受的鹽”意指以下鹽，其在可靠醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于與人和低級(jí)動(dòng)物的組織接觸而無(wú)不當(dāng)?shù)亩拘?、刺激性、變態(tài)反應(yīng)等，且具有合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比。藥學(xué)上可接受的鹽在本領(lǐng)域眾所周知。例如，P，H. Mahl等在“Handbook of Pharmaceutical Salts properties, Selection, and Use (藥用鹽手冊(cè)性質(zhì)、選擇禾口使用)” (Wiley VCH, Zurich, Switzerland 2002)中詳細(xì)闡述了藥學(xué)上可接受的鹽。所述鹽可在最后分離及純化本發(fā)明所述化合物期間原位制備，或可通過讓游離堿性官能團(tuán)與合適的有機(jī)酸反應(yīng)來單獨(dú)制備。代表性酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽(羥乙基磺酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、 草酸鹽、撲酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。含氮堿性基團(tuán)亦可用諸如以下物質(zhì)季銨化低級(jí)烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯； 長(zhǎng)鏈商化物，例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基鹵化物，例如芐基溴化物和苯乙基溴化物等。由此獲得水溶性或油溶性或可分散產(chǎn)物。 可用于形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的實(shí)例包括，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸等無(wú)機(jī)酸及諸如草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸等有機(jī)酸?？稍谧詈蠓蛛x及純化本發(fā)明所述化合物期間，通過讓含羧酸部分與合適的堿(例如藥學(xué)上可接受的金屬陽(yáng)離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與銨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)，來原位制備堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于基于堿金屬或堿土金屬的陽(yáng)離子，例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和鋁鹽等；和無(wú)毒季銨和胺陽(yáng)離子，包括銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺等?？捎糜谛纬蓧A加成鹽的其它代表性有機(jī)胺包括乙二胺、 乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。亦可用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)程序獲得藥學(xué)上可接受的鹽，例如通過讓諸如胺等足夠堿性的化合物與提供生理學(xué)上可接受陰離子的合適酸反應(yīng)。亦可制備羧酸的堿金屬(例如鈉、鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣或鎂)鹽?？梢砸詥挝粍┬偷男问竭m宜地提供制劑，可通過制藥領(lǐng)域熟知的任何方法來制備制劑。所有方法包括讓激酶抑制肽或其藥學(xué)上可接受的酯、鹽、水合物、溶劑化物或前藥 (“活性化合物”)與構(gòu)成為一種或多種輔助劑的載體締合的步驟。一般而言，通過讓活性劑與液態(tài)載體或細(xì)粒固態(tài)載體或二者均勻并緊密締合，然后在需要時(shí)讓產(chǎn)物形成所期需制劑的形狀，來制備制劑。藥用劑或其藥學(xué)上可接受的酯、鹽、水合物、溶劑化物或前藥可與不損害所期需作用的其它活性物質(zhì)混合，或與補(bǔ)充所期需作用的物質(zhì)混合。用于胃腸外、皮內(nèi)、皮下、鞘內(nèi)或局部使用的溶液劑或混懸劑可包括但不限于例如以下組分無(wú)菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸，或重亞硫酸鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和調(diào)整滲透壓的物質(zhì)，例如氯化鈉或葡萄糖。胃腸外制劑可包封在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制造的多劑量小瓶中。靜脈內(nèi)給予的特定載體為生理鹽水或磷酸緩沖鹽水(PBS)。用于胃腸外注射的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的無(wú)菌水性或非水性溶液劑、分散劑、混懸劑或乳劑，和用于再構(gòu)成無(wú)菌注射溶液劑或分散劑的無(wú)菌粉末。通常認(rèn)為“溶液劑”為兩種或更多種物質(zhì)的均勻混合物。它通常是但并不一定是液態(tài)。在溶液劑中，溶質(zhì)分子(或溶解的物質(zhì))在溶劑中均一分布。本文所用“分散系統(tǒng)”或”分散劑”是指兩相系統(tǒng)，其中一相作為粒子或液滴分散在第二相或連續(xù)相中。本文所用術(shù)語(yǔ)“混懸劑”是指不溶解的細(xì)粒物質(zhì)分散在液態(tài)溶媒中的制劑?；鞈覄┑念w粒物質(zhì)可從其分散的液態(tài)溶媒中慢慢沉降；因此，混懸劑應(yīng)該在使用前充分搖晃以確保固體在溶媒中均一分布，藉此確保均一和合適的劑量。本文所用“乳劑”是指膠體系統(tǒng)，其中分散相和分散介質(zhì)二者都為不混溶的液體，其中分散的液體分布在遍及分散介質(zhì)液體的小球中。穩(wěn)定的基礎(chǔ)乳劑含有至少兩種液體和乳化劑。常見的乳劑類型為水包油，其中油為被分散的液體，水性溶液例如水為分散介質(zhì)；和油包水，其中正好相反，水性溶液為被分散相。亦可能制備非水性乳劑。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或溶媒的實(shí)例，包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合適的混合物、植物油(例如橄欖油)和可注射有機(jī)酯例如油酸乙酯?？衫缤ㄟ^使用包衣例如卵磷脂，通過在分散液的情況下保持所需粒徑，和通過使用表面活性劑，來保持合適的流動(dòng)性。這些組合物亦可含有佐劑，包括防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑和分散劑?？赏ㄟ^各種抗菌劑和抗真菌劑(例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)來確保防止微生物的作用。亦可期需包括等滲劑，例如糖、氯化鈉等?？赏ㄟ^使用延遲吸收的物質(zhì)例如單硬脂酸鋁和明膠，帶來延遲吸收的可注射藥物形式?；鞈覄┏钚曰衔锿膺€可含有助懸劑，例如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)、膨潤(rùn)土、瓊脂、西黃蓍膠及其混合物。通過形成藥物在可生物降解聚合物(例如聚交酯-聚乙醇酸交酯)中的微囊化基質(zhì)，制備可注射長(zhǎng)效制劑形式。藥物釋放速率可依賴藥物與聚合物的比率及所采用的特定聚合物的性質(zhì)來控制?？捎煤线m的聚合物質(zhì)或疏水物質(zhì)(例如作為可接受油中的乳劑)或離子交換樹脂或作為微溶的衍生物(例如作為微溶性鹽)來調(diào)配所述長(zhǎng)期作用的制劑。其它可生物降解聚合物實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。亦通過將藥物埋在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳劑中來制備可注射貯庫(kù)性制劑?？蓪?duì)局部注射制劑進(jìn)行滅菌，例如通過阻留細(xì)菌的過濾器過濾，或通過將滅菌劑摻入到無(wú)菌固態(tài)組合物形式中，所述無(wú)菌固態(tài)組合物可恰好在使用前溶解于或分散在無(wú)菌水或其它無(wú)菌可注射介質(zhì)中。注射制劑例如無(wú)菌注射水性或油性混懸劑，可按照已知技術(shù)用合適的分散劑或濕潤(rùn)劑和助懸劑來調(diào)配。無(wú)菌注射制劑亦可為在無(wú)毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液劑、混懸劑或乳劑，例如在1，3_ 丁二醇中的溶液劑。在可采用的可接受溶媒和溶劑中有水、林格氏溶液(美國(guó)藥典)和等滲氯化鈉溶液。另外，無(wú)菌不揮發(fā)性油常規(guī)地采用，或作為溶劑或作為懸浮介質(zhì)。為此目的可采用任何溫和不揮發(fā)性油， 包括合成的甘油單酯或甘油二酯。另外，在制備注射劑中使用脂肪酸，例如油酸。胃腸外(包括但不限于皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、鞘內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))給予的制劑包括水性和非水性無(wú)菌注射溶液劑，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和賦予制劑與目的受體血液等滲的溶質(zhì)；和水性和非水性無(wú)菌混懸劑，其可包括助懸劑和增稠劑。制劑可以以單位劑量或多劑量容器呈提，例如密封安瓿和小瓶中，并可以以凍干(冷凍干燥)狀態(tài)儲(chǔ)
49存，僅需在臨用前加入無(wú)菌液體載體，例如鹽水、注射用水。可由先前所述類型的無(wú)菌粉末、 顆粒和片劑制備臨時(shí)的注射溶液劑和混懸劑。調(diào)配本文所述組合物的另一方法涉及讓本文所述化合物與提高水溶解性的聚合物綴合。合適聚合物的實(shí)例包括但不限于聚乙二醇、聚-(d-谷氨酸)、聚-(1-谷氨酸)、 聚-(1-谷氨酸)、聚-(d-天冬氨酸)、聚-(1-天冬氨酸)、聚-(1-天冬氨酸)及其共聚物。 可使用具有約5，000-約100，000分子量及分子量為約20，000-約80，000的聚谷氨酸，具有分子量為約30，000-約60，000的聚谷氨酸亦可使用。用基本上如美國(guó)專利號(hào)5，977，163 所述的方案，聚合物經(jīng)由酯鍵與本發(fā)明治療抑制劑肽的一個(gè)或多個(gè)羥基綴合，所述專利在此引作參考。合適的緩沖劑包括乙酸和鹽(1-2 % w/v)；檸檬酸和鹽(1-3 % w/v)；硼酸和鹽(0. 5-2. 5 % w/v)；和磷酸和鹽(0. 8-2 % w/v)。合適的防腐劑包括苯扎氯銨 (0. 003-0. 03% w/v)；氯丁醇(0. 3-0. 9% w/v)；對(duì)羥基苯甲酸酯(0. 01-0. 25% w/v)和硫柳汞(0. 004-0. 02% w/v)。在某些實(shí)施方案中，激酶抑制組合物為藥物組合物。本發(fā)明中所述的藥物組合物含有治療有效量的激酶抑制組合物和任選包含在藥學(xué)上可接受的載體中的其它治療劑?；钚猿煞挚蔀榧っ敢种平M合物、治療抑制劑肽、PTD或治療結(jié)構(gòu)域或其組合。藥物組合物的各組分亦能夠以使得沒有本質(zhì)上損害所期需的藥物功效的相互作用的方式混合?？梢砸灶w粒提供包括激酶抑制組合物在內(nèi)的一種或多種治療劑。所述顆?？稍诒话掳鼑暮诵闹泻幸环N或多種治療劑。一種或多種治療劑亦可分散在整個(gè)顆粒中。一種或多種治療劑亦可被吸附在顆粒的至少一個(gè)表面上。顆?？删哂腥魏渭?jí)別釋放的動(dòng)力學(xué)，包括零級(jí)釋放、一級(jí)釋放、二級(jí)釋放、延遲釋放、持續(xù)釋放、立即釋放等及其任何組合。除一種或多種治療劑外，顆粒還可包含在制藥及醫(yī)藥領(lǐng)域常規(guī)使用的任何物質(zhì)，包括但不限于可侵蝕的、不可侵蝕的、可生物降解或不可生物降解的物質(zhì)或其組合。顆?？蔀楹谐嗜芤夯虺拾牍腆w狀態(tài)的激酶抑制組合物的微膠囊。顆?？蔀閹缀跞魏涡螤睢２豢缮锝到夂涂缮锝到獾木酆衔镔|(zhì)二者都可用于制備顆粒，用于遞送一種或多種治療劑。所述聚合物可為天然的或合成的聚合物。基于所需釋放時(shí)間選擇聚合物。特別引人關(guān)注的生物粘附聚合物包括Sawhney等在Macromolecules (1993) 26，581-587中所述的生物可蝕解的水凝膠，其中的教導(dǎo)并入本文中。這些包括聚透明質(zhì)酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸鹽、殼聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)，聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚 (甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸基酯)、聚(甲基丙烯酸十二烷基酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。在控釋系統(tǒng)中可含有一種或多種治療劑。為了延長(zhǎng)藥物的作用效果，通常需要減慢從皮下、鞘內(nèi)或肌內(nèi)注射的藥物的吸收。這可通過使用水溶性差的晶體或無(wú)定形物質(zhì)的液態(tài)混懸劑來實(shí)現(xiàn)。然后藥物的吸收速率視其溶解速率而定，溶解速率可取決于晶體大小及晶形。或者，通過將藥物溶解于或懸浮于油性溶媒中實(shí)現(xiàn)胃腸外給予的藥物形式的延遲吸收。用長(zhǎng)期持續(xù)釋放植入物可尤其適于治療慢性病況。長(zhǎng)期持續(xù)釋放植入物為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知，包括本文所述的某些釋放系統(tǒng)。
在另一實(shí)施方案中，激酶抑制組合物進(jìn)一步包含凝膠、緩慢釋放的固態(tài)或半固態(tài)化合物，其中所述凝膠、緩慢釋放的固態(tài)或半固態(tài)化合物包含治療有效量的治療抑制劑肽和包衣。包衣可為任何所期需材料，優(yōu)選聚合物或不同聚合物的混合物。任選可在成粒期間使用聚合物以形成具有活性成分的基質(zhì)，由此獲得活性成分的所期需釋放型式。所述凝膠、緩慢釋放的固態(tài)或半固態(tài)化合物能夠在所期需時(shí)期內(nèi)釋放活性劑?？蓪⑺瞿z、緩慢釋放的固態(tài)或半固態(tài)化合物植入最接近的期需位置，藉此活性劑的釋放產(chǎn)生局部化的藥理學(xué)作用。在另一實(shí)施方案中，激酶抑制組合物進(jìn)一步包含半固態(tài)遞送系統(tǒng)，所述遞送系統(tǒng)使用半固態(tài)、可生物降解、生物相容的遞送系統(tǒng)，或使用分散并懸浮于半固態(tài)、可生物降解、 生物相容性可生物降解的遞送系統(tǒng)中的可生物降解、生物相容的多顆粒，用于注射、沉積或植入在身體內(nèi)或身體上，以便促進(jìn)局部治療作用。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為激酶抑制組合物、治療抑制劑肽、PTD、治療結(jié)構(gòu)域或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一實(shí)施方案中，半固態(tài)遞送系統(tǒng)部分或全部包含生物相容的、可生物降解的、 粘性半固體，其中所述半固體包括水凝膠。在一個(gè)實(shí)施方案中，在下文中稱為GMO的單油酸甘油酯是預(yù)期的半固態(tài)遞送系統(tǒng)或水凝膠。然而，就粘度/剛性而言具有相似物理/化學(xué)性質(zhì)的很多水凝膠、聚合物、烴組合物和脂肪酸衍生物，可起半固態(tài)遞送系統(tǒng)的作用。例如， 可使用硫酸化的多糖，例如但不限于肝素。在一個(gè)實(shí)施方案中，如下制備凝膠系統(tǒng)通過將GMO加熱到其熔點(diǎn)G0-50°C )以上，并通過加入溫暖的水基緩沖液或電解質(zhì)溶液，例如磷酸鹽緩沖液或生理鹽水，從而產(chǎn)生三維結(jié)構(gòu)。水基緩沖液可由其它水性溶液或含有半極性溶劑的組合組成。GMO提供主要基于脂質(zhì)的水凝膠，其具有納入親脂材料的能力。GMO進(jìn)一步提供納入并遞送親水化合物的內(nèi)部水性通道。應(yīng)認(rèn)識(shí)到在室溫(大約25°C)時(shí)，凝膠系統(tǒng)可表現(xiàn)出包含寬廣范圍的粘度量度的不同相。在一個(gè)實(shí)施方案中，因其在室溫和生理溫度(約37°C )和pH(約7. 4)時(shí)的性質(zhì)而使用雙凝膠系統(tǒng)相。在雙凝膠系統(tǒng)相中，第一相為大約5% -大約15% H2O含量和大約 95%-大約85% GMO含量的層狀相。層狀相為具有適度粘度的流體，其可易于操作、傾倒和注射。第二相為由大約15% -大約40% H2O含量和大約85% -60% GMO含量組成的立方體相。其具有大約35%重量-大約40%重量的平衡水含量。本文所用術(shù)語(yǔ)“平衡水含量”是指存在過量水時(shí)的最大水含量。因此立方體相納入大約35%重量-大約40%重量的水。立方體相高度粘稠。可例如經(jīng)由Brookfield粘度計(jì)測(cè)量粘度。粘度超過1.2X106厘泊(cp)；其中1.2X IO6Cp是經(jīng)由Brookfield粘度計(jì)的杯錘配置所能獲得的粘度的最大量度。在一些這類實(shí)施方案中，可將治療劑納入半固體中，以便提供持續(xù)不間斷地釋放所述治療劑的系統(tǒng)。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療抑制劑肽。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為PTD。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療結(jié)構(gòu)域。在一些這類實(shí)施方案中，可將其它治療劑、生物學(xué)活性劑、藥物、藥劑和惰性物質(zhì)納入到半固體中，用于以各種釋放速率在身體內(nèi)提供局部生物學(xué)作用、生理學(xué)作用或治療作用。在某些實(shí)施方案中，使用備選的半固體、經(jīng)修飾的制劑及生產(chǎn)方法，以便改變半固體的親脂特性，或作為選擇，改變半固體中含有的水性通道。因此，不同濃度的各種治療劑可以以不同速率從半固體擴(kuò)散，或經(jīng)由半固體的水性通道隨時(shí)間從其中釋放?？赏ㄟ^改變水性組分的粘度、流動(dòng)性、表面張力或極性，使用親水物質(zhì)來改變半固體的稠度或治療劑的釋放。例如，除了在脂肪酸部分的碳9和碳10為雙鍵而不是單鍵外，結(jié)構(gòu)上與GMO相同的單硬脂酸甘油酯(GMQ，在加熱并加入水性組分后不形成膠凍，而GMO則會(huì)形成膠凍。然而，因?yàn)镚MS為表面活性劑，GMS在H2O中可混溶，直到大約20%重量/重量。本文所用術(shù)語(yǔ)“表面活性劑”是指表面活性物質(zhì)，因此其以有限濃度在H2O以及極性物質(zhì)中可混溶。加熱和攪拌后，80% H20/20% GMS組合產(chǎn)生具有類似于潤(rùn)手乳液的稠度的可鋪展糊劑。然后該糊劑與熔化的GMO組合，以便形成具有前述高粘度的立方體相凝膠。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療抑制劑肽。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為PTD。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方案中，用水解明膠例如市購(gòu)Gelfoam 來改變水性組分。分別可將大約6. 25% -12. 50%重量濃度的Gelfoam 置于大約93. 75% -87. 50%重量濃度的H2O或其它水基緩沖液中。加熱和攪拌后，H2O (或其它水性緩沖液)/Gelfoam 組合形成稠密的膠狀物質(zhì)。讓得到的物質(zhì)與GMO組合，因而如此形成的產(chǎn)物膨脹并形成高度粘稠的半透明凝膠， 其與單獨(dú)的純GMO凝膠相比延展性小些。在另一實(shí)施方案中，可用聚乙二醇(PEG)來改變水性組分以有助于藥物增溶。分別將大約0.5% -40%重量濃度的PEG (視PEG分子量而定)置于大約99. 5% -60%重量濃度的H2O或其它水基緩沖液中。加熱和攪拌后，H2O(或其它水性緩沖液)/PEG組合形成粘稠液體到半固態(tài)物質(zhì)。讓得到的物質(zhì)與GMO組合，因而如此形成的產(chǎn)物膨脹并形成高度粘稠的凝膠。在不受理論的束縛的情況下，假設(shè)治療劑可設(shè)想地以雙相方式從半固體通過擴(kuò)散釋放。第一相涉及例如包含在親脂性膜中的親脂性藥物由親脂性膜擴(kuò)散到水性通道。第二相涉及藥物從水性通道擴(kuò)散到外部環(huán)境中。藥物因?yàn)橛H脂性可將自己定位在其假定的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)內(nèi)的GMO凝膠里面。因此，將多于大約7. 5%重量的藥物例如激酶抑制組合物納入到GMO中，使得失去三維結(jié)構(gòu)的完整性，藉此凝膠系統(tǒng)不再保持半固態(tài)立方體相，并回復(fù)到粘稠的層狀相液態(tài)。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療抑制劑肽。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為PTD。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方案中，在生理溫度將約1-約45%重量的治療劑納入到GMO凝膠中，而不破壞正常的三維結(jié)構(gòu)。結(jié)果，該系統(tǒng)獲得藥物劑量靈活性顯著增加的能力。因?yàn)樵撨f送系統(tǒng)具有延展性，其可在植入部位被遞送和操作，以便粘附并適應(yīng)身體壁、空間或其它空隙的輪廓以及完全填充存在的所有空隙。該遞送系統(tǒng)確保在整個(gè)植入部位的藥物分布及均一遞送藥物。通過半固態(tài)遞送裝置促進(jìn)易于遞送和操作在空間內(nèi)的遞送系統(tǒng)。半固態(tài)遞送裝置有利于遞送系統(tǒng)的靶向和可控遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，多顆粒組分包含生物相容的可生物降解的聚合物或非聚合物系統(tǒng)，其用于形成固態(tài)結(jié)構(gòu)，包括但不限于糖粒(nonpareil)、小丸、晶體、團(tuán)塊、微球體或納米粒。在另一實(shí)施方案中，多顆粒組分包含丙交酯-乙交酯共聚物 (poly(lactic-co-glycolide)，PLGA)。PLGA為用于治療劑在體內(nèi)受控和延長(zhǎng)的遞送的可生物降解聚合物材料。所述遞送系統(tǒng)與經(jīng)常性的定期系統(tǒng)給藥相比，提供增強(qiáng)的治療功效， 并降低總毒性。不受理論的束縛，假定由不同摩爾比的單體亞單元組成的PLGA系統(tǒng)，會(huì)促進(jìn)在改造用于適應(yīng)靶向治療劑遞送的精確釋放概況方面的更大靈活性，所述改造通過改變聚合物降解速率來進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，PLGA組合物足夠純，以便為生物相容性的并在生物降解后保持生物相容。在一個(gè)實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)PLGA聚合物并使其成形為具有埋入其中的治療劑或藥物的微球體，藉此治療劑隨后由其中釋放。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為激酶抑制劑。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療抑制劑肽。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為PTD。在一些這類實(shí)施方案中，治療劑為治療結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方案中，多顆粒組分包含d，1丙交酯-己內(nèi)酯共聚物。這提供用于治療劑在體內(nèi)受控和延長(zhǎng)的遞送的可生物降解聚合物材料，其具有與PLGA聚合物相似的藥物釋放機(jī)制。在一個(gè)實(shí)施方案中，還用可生物降解和/或生物相容的非聚合物材料例如GMS 產(chǎn)生多顆粒微球體。在另一實(shí)施方案中，通過用于將多顆粒組分裝入膠囊或?qū)ζ溥M(jìn)行包被的方法進(jìn)一步修飾多顆粒組分，所述方法使用含相同或不同藥物物質(zhì)的相同組合物的聚合物，使用含相同或不同藥物物質(zhì)的不同聚合物，或用不含藥物、含相同藥物、含不同藥物或含多種藥物物質(zhì)的多次涂層處理。這使得產(chǎn)生多層(膠囊化)的多顆粒系統(tǒng)，其同時(shí)對(duì)單種或多種藥物具有大范圍的藥物釋放譜。在另一實(shí)施方案中，可單獨(dú)或與前述實(shí)施方案及預(yù)想實(shí)施方案協(xié)同，來使用控制藥物從多顆粒物理擴(kuò)散的速率的包衣材料。在另一實(shí)施方案中，激酶抑制組合物進(jìn)一步包含使用PLGA的遞送系統(tǒng)。PLGA聚合物含有易于水解的酯鍵。當(dāng)H2O滲入PLGA聚合物中時(shí)，其酯鍵被水解，水溶性單體離開 PLGA聚合物，由此隨時(shí)間促進(jìn)包埋藥物(例如但不限于激酶抑制組合物)的物理釋放。在一些這類實(shí)施方案中，可使用用于治療劑在體內(nèi)受控和延長(zhǎng)的遞送的其它種類的合成的可生物降解、生物相容的聚合物，包括聚酐、聚(磷酸鹽/酯)、聚二氧雜環(huán)己酮、纖維素類和丙烯酸酯類，其作為非限制性實(shí)例提供。在一些這類實(shí)施方案中，可使用用于治療劑在體內(nèi)受控和延長(zhǎng)的遞送的非聚合物材料，包括但不限于固醇類、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸類和膽固醇酯類，其作為非限制性實(shí)例提供。在另一方面，激酶抑制組合物進(jìn)一步包含半固態(tài)遞送系統(tǒng)，其充當(dāng)局部遞送治療劑的溶媒，包含親脂性、親水或兩性固態(tài)或半固態(tài)物質(zhì)；將其加熱到其熔點(diǎn)以上，此后接著加入溫暖水性組分，以便產(chǎn)生基于水含量粘性可變的凝膠狀組合物。在混合并形成半固態(tài)系統(tǒng)之前，將一種或多種治療劑納入并分散到熔化的親脂組分或水性緩沖液組分中。將凝膠狀組合物置于半固態(tài)遞送裝置內(nèi)用于隨后放置或沉積。凝膠系統(tǒng)因?yàn)檠诱剐远子诮?jīng)由半固態(tài)遞送裝置在植入部位遞送和操作，在此處粘附并適應(yīng)植入部位外形、空間或其它體內(nèi)空隙以及完全填充存在的所有空隙?；蛘撸冒锵嗳菥酆衔锘蚍蔷酆衔锵到y(tǒng)的多顆粒組分來產(chǎn)生具有埋入其中的治療劑的微球體。在最后處理方法后，將微球體納入到半固態(tài)系統(tǒng)中，并隨后置于半固態(tài)遞送裝置內(nèi)，以便易于從其中遞送到植入部位或類似空間， 藉此治療劑隨后通過一種或多種藥物釋放機(jī)制從其中釋放。在另一方面，本發(fā)明還提供生物醫(yī)學(xué)裝置，其包含至少一種分離的治療抑制劑肽， 其中將一種或多種分離的治療抑制劑肽置于裝置上面或里面。在一些這類實(shí)施方案中， 所述至少一種治療抑制劑肽為至少一種具有選自具有以下氨基酸序列的肽的氨基酸序列的肽WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]、FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]、YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO:
5311], YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :16]、YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO: 17]、YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO 18], YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]、 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]和 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]。另一方面，本發(fā)明提供與編碼包含PTD氨基酸序列的肽的mRNA特異性雜交的分離核酸。本文所用術(shù)語(yǔ)“特異性雜交”是指其中核酸與DNA的至少一條鏈的互補(bǔ)區(qū)區(qū)別性地或明確地形成堿基對(duì)的過程，所述DNA并非最初地與所述核酸配對(duì)的DNA。例如，可認(rèn)為可與編碼包含CPP序列的肽的細(xì)胞mRNA的至少部分結(jié)合或雜交的核酸，為特異性雜交的核酸。 選擇性雜交的核酸在嚴(yán)格雜交條件下經(jīng)歷所述核酸序列與特定核酸靶標(biāo)序列的雜交，該雜交以比該核酸序列與非靶標(biāo)核酸序列的雜交更高程度地進(jìn)行(例如至少為背景的2倍)且基本上排除與非靶標(biāo)核酸的雜交。選擇性雜交序列通常彼此具有約至少80%序列同一性、 至少90%序列同一性或至少100%序列同一性(即互補(bǔ))。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供與編碼包含治療抑制劑肽氨基酸序列的肽的mRNA特異性雜交的分離核酸。提取RNA的方法在本領(lǐng)域眾所周知，并被闡述于例如J. Sambrook等，“Molecular Cloning :A Laboratory Manual，，(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y,, 1989),第 1 卷，第 7 章，"Extraction, Purification, and Analysis of Messenger RNA from Eukaryotic Cells (來自真核細(xì)胞的信使RNA的提取、純化和分析)”， 其在此引作參考。其它分離和提取方法亦眾所周知，例如載于F. Ausubel等，” Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley & Sons，2007)中的方法。通常在離液劑 (例如鹽酸胍或硫氰酸胍)存在下進(jìn)行分離，但可選擇性使用其它去污劑或提取劑。通常通過經(jīng)寡(dT)-纖維素或具有結(jié)合mRNA分子的聚腺苷酸化3'部分的能力的其它色譜介質(zhì)的色譜法，從提取的總RNA分離mRNA。作為選擇但較不優(yōu)選的是，可使用總RNA。然而，通常優(yōu)選從哺乳動(dòng)物來源分離聚(A)+RNA。方法抑制激活細(xì)胞因子的激酶的方法另一方面，本發(fā)明提供用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供激酶抑制組合物，其中治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶，其中所述激酶抑制組合物包含治療有效量的治療抑制劑肽，其中所述治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中第一結(jié)構(gòu)域包含位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)，其中第二結(jié)構(gòu)域包含位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的治療結(jié)構(gòu)域； (b)將激酶抑制組合物給予有需要的受試者，從而抑制至少一種激酶；和(c)降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，從而治療所述炎性病癥。按照一個(gè)實(shí)施方案，其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥為選自以下的至少一種病癥選自哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴綜合征、狼瘡、銀屑病、硬皮病、斯耶格倫病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、高敏感性脈管炎、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、缺血、內(nèi)膜增生、狹窄、再狹窄、平滑肌瘤、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛、心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、雷諾病、溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、血管病變、充血性心力衰竭、心肌頓挫、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生、慢性阻塞性肺病、骨質(zhì)減少、變性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、 結(jié)腸炎、闌尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、耳炎、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、心代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、腎原性系統(tǒng)性纖維化、乳腺癌、前列腺癌和內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。根據(jù)另一實(shí)施方案，第一結(jié)構(gòu)域位于第二結(jié)構(gòu)域的5'。根據(jù)另一實(shí)施方案，第二結(jié)構(gòu)域位于第一結(jié)構(gòu)域的3'。根據(jù)另一實(shí)施方案，第一結(jié)構(gòu)域與第二結(jié)構(gòu)域可操作地連接。根據(jù)另一實(shí)施方案，第二結(jié)構(gòu)域與第一結(jié)構(gòu)域可操作地連接。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，激酶為MK2。根據(jù)一些這類實(shí)施方案，激酶為MK3。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶為 CaMK0根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 KALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列為 KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQAGVAA[SEQ ID NO 26]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄?KALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGVA[SEQ ID NO :29]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯KKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :30]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯AANRQLGVAA[SEQ ID NO 22]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄?KALNAQLGVAA[SEQ ID NO 24]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLGVAA[SEQ ID NO :13]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄?KALNRALGVAA[SEQ ID NO 25]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域?yàn)榫哂邪被嵝蛄蠯ALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)榕c氨基酸序列 WLRRIKAffLRRI [SEQ ID NO 34]具有基本同一性的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的PTD為具有氨基酸序列
55wlrrikawlrrika[seq id no :31]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的 ptd為具有氨基酸序列wjrrika[seq id no :32]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列yaraaarqara[seq id no 5]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列ygrkkrrqrrr[seq id no :33]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列mj rikawlrri [seq id no :34]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列faklaarlyr[seq id no :35]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的 ptd為具有氨基酸序列kafaklaarlyr[seq id no :36]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列yaraaarqara[seq id no :5]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列faklaarlyrka[seq id no 43]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療性激酶抑制劑肽的ptd為具有氨基酸序列 kafaklaarlyrka[seq id no 44]的結(jié)構(gòu)域。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :16] 的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO 18]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，治療抑制劑肽為具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO 20]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案， 治療抑制劑肽為具有氨基酸序列yaraaargqrakalnrqlgvaa[seq ID NO =21]的肽。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶抑制組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶抑制組合物經(jīng)胃腸外給予。根據(jù)另一實(shí)施方案，激酶抑制組合物經(jīng)由生物醫(yī)學(xué)裝置給予，所述生物醫(yī)學(xué)裝置包含至少一種分離的治療抑制劑肽，其中將所述一種或多種分離的治療抑制劑肽置于所述裝置上面或里面。在一些這類實(shí)施方案中，所述至少一種治療抑制劑肽為具有選自以下的氨基酸序列的至少一種肽 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]、FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]、 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15], YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11]、 YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO : 16]、YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO: 17]、 YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO : 18]、YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]、 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]和 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]?？捎糜诒景l(fā)明的分子遺傳學(xué)和遺傳工程的一般方法闡述于以下文獻(xiàn)中當(dāng)前版的 Molecular Cloning :A Labatory Manual(Sambrook 等，1989, Cold Spring Harbor Labatory Press)；基因表達(dá)技術(shù)(Methods in Enzymology，第 185 卷，由 D. Goeddel 編
1991. Academic Press, San Diego, CA) > Methods in Enzymology 巾白勺“胃白M^feftl 指南”(Μ· P. Deutshcer 編輯(1990) Academic Press, Inc.) ；PCR Protocols :A Guide toMethods and Applications(Innis等，1990.Academic Press,San Diego,CA) ；Culture of Animal Cells :A Manual of Basic Technique,第 2 版(R. I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY)；禾口 Gene Transfer and Expression Protocols,第 109-128 頁(yè)，EJ. Murray 編輯，The Humana Press Inc.，Clifton，N. J.)。用于遺傳操作的試劑、克隆載體和試劑盒可自商業(yè)供應(yīng)商獲得，例如 BioRad、Stratagene> Invitrogen、ClonTech 禾口 Sigma-Aldrich Co。除非上下文另外明確指出，否則當(dāng)提供數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)該理解的是，在該范圍的上限和下限之間的每一個(gè)介于其間的值(到下限單位的十分之一)、在該范圍的任何其它規(guī)定值或介于其間的值都包括在本發(fā)明內(nèi)?？瑟?dú)立包括在較小范圍內(nèi)的這些較小范圍的上限和下限亦包括在本發(fā)明內(nèi)，在規(guī)定范圍內(nèi)服從任何明確的排除限制。當(dāng)規(guī)定范圍包括一種或兩種限制時(shí)，排除那些所含限制的任一種的范圍亦包括在本發(fā)明中。除非另外定義，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。盡管與本文所述方法及材料相似或等同的任何方法及材料亦可用于本發(fā)明實(shí)施或試驗(yàn)中，但現(xiàn)在陳述優(yōu)選的方法及材料。本文提及的所有出版物在此引作參考，以揭示和闡述與該出版物關(guān)連引用的方法和/或材料。應(yīng)該注意，除非上下文明確另外指出，否則在本文及隨附權(quán)利要求中所用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“和”及“所述”包括復(fù)數(shù)提及物。本文所用的所有技術(shù)與科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有相同的含義。本文公開的出版物僅因其公開內(nèi)容先于本發(fā)明提交日期而提供。任何事物在此不能理解為承認(rèn)由于先前發(fā)明本發(fā)明無(wú)早于所述出版物的權(quán)利。另外，提供的出版物的日期可能不同于實(shí)際出版日期，所述實(shí)際出版日期可能需要獨(dú)立確認(rèn)。
實(shí)施例提出以下實(shí)施例以便為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何獲得和使用本發(fā)明的完整公開內(nèi)容和闡述，并非意欲對(duì)本發(fā)明人認(rèn)為的其發(fā)明范圍的限制，亦非意欲代表以下實(shí)驗(yàn)為全部實(shí)驗(yàn)或僅僅實(shí)施這些實(shí)驗(yàn)。一直努力確保有關(guān)所用數(shù)值(例如量、溫度等)的準(zhǔn)確性，但某些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差在所難免。除非另外指出，否則等份為重量等份，分子量為重量平均分子量，溫度為攝氏溫度，壓力為大氣壓或接近大氣壓。方法肽合成和純化在 Symphony 肽合成儀(Protein Technologies, Inc.)的 Rink-酰胺或Knorr-酰胺樹脂(Synbiosci Corp.)上用標(biāo)準(zhǔn)FMOC化學(xué)來合成肽。氨基酸的偶聯(lián)試劑(Synbiosci Corp.)為2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲.錨六氟磷酸鹽/N-甲基馬來酰亞胺(HBTU/NMM)。合成后，將肽用基于三氟乙酸的混合物從樹脂上裂解，在醚中沉淀，通過離心回收。讓回收的肽在真空中干燥，重懸于MilliQ純水中，并用配備有22/250 C18制備型柱(Grace Davidson)的快速蛋白液相色譜(FPLC) ( AKTA Explorer,GE Healthcare)純化。用含恒定濃度的0.1%三氟乙酸或0.1%乙酸的乙腈梯度實(shí)現(xiàn)純化。通過飛行時(shí)間基質(zhì)輔助激光解吸附電離(MALDI)質(zhì)譜法用4800 Plus MALDI T0F/T0FTM分析儀(Applied BioSystems)來確證所期需的分子量。
實(shí)施例1. MK2的治療抑制劑肽的必需氨基酸的測(cè)定用Ala和D-氨基酸取代鑒定MK2的治療抑制劑肽必需氨基酸。100 μ M的 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]抑制73%的ΜΚ2活性。首先，用Ala獨(dú)立置換治療結(jié)構(gòu)域 (KALNRQLGVAA) [SEQ ID NO 13]中的每一個(gè)氨基酸。然后，用其D-氨基酸獨(dú)立置換所述肽的治療結(jié)構(gòu)域的每一個(gè)氨基酸?；跓晒獾募っ富钚詼y(cè)定用針對(duì)MAPKAP-K2 試劑盒(Invitrogen，Carlsl3ad，CA)的 Omnia.激酶測(cè)定來測(cè)定
在表1中所列每一種肽存在和不存在下的MK2反應(yīng)速度。試劑盒含有專用的反應(yīng)緩沖液， 其中加入以下物質(zhì)(所給為最終濃度)lmM ATP、0. 2mM DTTUOyM MAPKAP-K2 Sox-修飾的肽底物、5ng MK2和目的抑制劑肽(終體積為50 μ L)。人ΜΚ2購(gòu)自hvitrogen。在試劑盒提供的低蛋白質(zhì)結(jié)合的96-孔板的孔中于30°C進(jìn)行反應(yīng)，用SpectraMax M5分光光度計(jì) (Molecular Devices)在20分鐘內(nèi)每30秒取樣進(jìn)行熒光讀數(shù)測(cè)定(激發(fā)光=360nm，發(fā)射光=485nm)。根據(jù)相對(duì)熒光單位與時(shí)間關(guān)系曲線圖的斜率確定每一個(gè)反應(yīng)孔的反應(yīng)速度。 每一抑制劑肽測(cè)定至少四個(gè)濃度12. 5,25,50和100微摩爾(一式三份)。在表1中，“a”代表所示結(jié)果為對(duì)所有肽100 μ M時(shí)的結(jié)果；“b”代表ΜΚ2反應(yīng)速度對(duì)未取代的肽(KALNRQLGVAA) [SEQ ID NO :13]在100 μ M濃度時(shí)的百分比變化；“C”代表 3個(gè)樣品間報(bào)告為標(biāo)準(zhǔn)偏差的誤差。表1.在基于熒光的激酶活性測(cè)定中檢測(cè)的肽
所檢測(cè)的抑制劑肽aKALNRQLGVAAe [SEQ ID NO: Wj反應(yīng)速度 (+VOSD>c 的》/。SEQ ID NO:丙氨酸取代KAANRQLGVAA+52(6)22KALARQLGVAA-61(2)23KALNAQLGVAA+258(14)24KALNRQLGVAA+258(26)13JCALNRQAGVAA+18(7)26KALNRQLAVAA-28(5)27KALNRQLGAAA+273(22)28p-M·酸取代KAdLNRQLGVAA46(7)KALdNRQLGVAA-5(10)中牢*KALNdRQLOVAA+206(7)* * *KALNRdQLGVAA+176(5)KALNRQdLGVAA+257(17)* * *KALNRQLGdVAA+160(23)其它修飾KALNRQLGVA0(5)29KKKALNRQLGVAA-9(8)30WLRHIKAWLRRIKALNRQLGV-132(10)36細(xì)胞滲透性肽結(jié)構(gòu)域WLRRIKA (非功能性)4306(21)32WLRRIKAWLKRIKA-83(4)31YGRKEiRRQRRR+44(17)33YARAAARQARA+149(13)5 D-氨基酸和Ala掃描顯示對(duì)于ΜΚ2抑制而言，Asn不是必不可少的(參見表1、圖 3和圖4)。
圖3顯示反應(yīng)速度(熒光單位/秒)(RFL/s))與MK2抑制劑肽濃度(μ Μ)的關(guān)系曲線圖，其中抑制劑肽摻入了丙氨酸取代。置換Asp和Ala增強(qiáng)了 ΜΚ2抑制。Ala取代Gly 稍微增加抑制。Ala掃描亦顯示Arg、Gln和Val對(duì)ΜΚ2抑制必不可少。盡管兩個(gè)Leu不是很必需的氨基酸，但將其除去減弱了治療抑制劑肽的功效。圖4顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖，其中抑制劑肽摻入D氨基酸取代。沒有D-氨基酸取代實(shí)質(zhì)地增強(qiáng)ΜΚ2抑制；大部分D-氨基酸取代實(shí)質(zhì)地降低ΜΚ2抑制劑肽的功效。圖5顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑肽濃度(μ M)的關(guān)系曲線圖，其中抑制劑肽經(jīng)過修飾。表1和圖5顯示C-末端Ala(IOOyM)不提高ΜΚ2抑制，抑制劑肽中的另外兩個(gè)Lys稍微增加抑制。然而，一旦除去C-末端Ala或添加兩個(gè)N-末端Lys，較低濃度的抑制劑肽降低MK2抑制。實(shí)施例2. MK2的PTD抑制用三種PTD 來證明 PTD 的 MK2 抑制:1)WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31] ；2) YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO 33]；和 3)YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]。圖6顯示反應(yīng)速度(RFU/s)與MK2抑制劑濃度(μ Μ)的關(guān)系曲線圖，其中抑制劑肽為蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。表1和圖4顯示，不管PTD肽濃度怎樣，ΜΚ2抑制極少受PTD肽 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]的影響。PTD 肽 YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO :33]在廣泛的 PTD 肽濃度范圍內(nèi)(從100 μ M PTD抑制61 %到25 μ M PTD抑制48% )抑制ΜΚ2活性。ΜΚ2受到PTD肽WfLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]的有效抑制；該P(yáng)TD肽比治療結(jié)構(gòu)域肽提供更高的ΜΚ2抑制。表1進(jìn)一步顯示PTD肽WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]和治療結(jié)構(gòu)域 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO: 13]組合，提供協(xié)同抑制作用。實(shí)施例3.對(duì)治療結(jié)構(gòu)域的修飾影響IC5tl對(duì)治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域進(jìn)行修飾以影響IC5tl值。然后用放射性測(cè)定分析經(jīng)修飾的治療抑制劑肽。放射性測(cè)量的IC5tl和激酶活性測(cè)定用商業(yè)放射性測(cè)定服務(wù)(Millipore，Billerica, ΜΑ)來檢測(cè)含有偶聯(lián)的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和治療結(jié)構(gòu)域的肽(下文稱為“完整肽”)的特異性和效價(jià)。在這些測(cè)定中，若激酶未受到抑制劑肽的抑制，則來自ATP的放射標(biāo)記的磷酸基團(tuán)使帶正電荷的底物磷酸化。所述帶正電荷的底物被吸引到帶負(fù)電荷的過濾膜，用閃爍計(jì)數(shù)器定量測(cè)定，與100%的活性對(duì)照相比。選擇ATP的表觀Km在15 μ M之內(nèi)的ATP濃度，因?yàn)榭拷揔m的ATP濃度可讓激酶具有相同的相對(duì)量的磷酸化活性。表2顯示包括在屏幕中的激酶的緩沖液組成；(h)=人，(m)=小鼠，(r)=大鼠， 和(y)=酵母
權(quán)利要求
1.一種用于治療炎性病癥的激酶抑制組合物，所述病癥的病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)，所述組合物包含(a)治療有效量的治療抑制劑肽，其中所述治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶，其中所述治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中所述第一結(jié)構(gòu)域包含蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域并位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)，其中所述第二結(jié)構(gòu)域包含治療結(jié)構(gòu)域并位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)；和(b)藥學(xué)上可接受的載體，其中所述組合物直接或間接降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列 YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11]具有基本同一性的肽。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述治療抑制劑肽的轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 15]具有基本同一性的肽。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一個(gè)具有至少 90% 同一性，并抑制TNF-α分泌。
11.權(quán)利要求1的組合物，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一個(gè)具有至少 90% 同一性，并抑制IL-I β分泌。
12.權(quán)利要求1的組合物，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO IUSEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一個(gè)有至少 90% 同一性，并抑制IL-6分泌。
13.權(quán)利要求1的組合物，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。
14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2。
15.權(quán)利要求13的組合物，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。
16.權(quán)利要求1的組合物，其中所述激酶為Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶。
17.權(quán)利要求1的組合物，其中所述其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥為選自以下的至少一種病癥哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴綜合征、狼瘡、銀屑病、硬皮病、斯耶格倫病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、高敏感性脈管炎、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、缺血、內(nèi)膜增生、狹窄、再狹窄、平滑肌瘤、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛、心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、雷諾病、 溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、血管病變、充血性心力衰竭、心肌頓挫、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生、慢性阻塞性肺病、骨質(zhì)減少、變性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、結(jié)腸炎、闌尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、耳炎、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、心代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、腎原性系統(tǒng)性纖維化、乳腺癌、前列腺癌和內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。
18.權(quán)利要求1的組合物，其中所述至少一種炎性細(xì)胞因子為IL-6、TNFa和IL_1β中的至少一種。
19.權(quán)利要求1的組合物，其中將所述組合物置于生物醫(yī)學(xué)裝置上面或里面。
20.一種用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供激酶抑制組合物，其中所述激酶抑制組合物包含(i)治療有效量的治療抑制劑肽，其中所述治療有效量的治療抑制劑肽抑制至少一種激酶，其中所述治療抑制劑肽包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域，其中所述第一結(jié)構(gòu)域包含位于第二結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其中所述第二結(jié)構(gòu)域包含位于第一結(jié)構(gòu)域的近側(cè)的治療結(jié)構(gòu)域；和( )藥學(xué)上可接受的載體；(b)將所述激酶抑制組合物給予有需要的受試者，從而抑制至少一種激酶；和(c)降低至少一種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，從而治療所述病癥。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列 YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11]具有基本同一性的肽。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的治療結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。
23.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。
24.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。
25.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。
26.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。
27.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。
28.權(quán)利要求20的方法，其中所述治療抑制劑肽為其氨基酸序列與氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA [SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。
29.權(quán)利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO=IU SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 15中的至少一個(gè)有至少90%同一性，并抑制 TNF-α分泌。
30.權(quán)利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO=IU SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 15中的至少一個(gè)有至少90%同一性，并抑制 IL-I β分泌。
31.權(quán)利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一種變體，所述變體與SEQID NO=IU SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13和SEQ ID NO :15中的至少一個(gè)有至少90%同一性，并抑制 IL-6分泌。
32.權(quán)利要求20的方法，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2。
34.權(quán)利要求32的方法，其中所述激酶為促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。
35.權(quán)利要求20的方法，其中所述激酶為Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶。
36.權(quán)利要求20的方法，其中所述其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥為選自以下的至少一種病癥哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、I型糖尿病、格_巴綜合征、狼瘡、銀屑病、 硬皮病、斯耶格倫病、慢性前列腺炎、腎小球腎炎、炎性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脈管炎、高敏感性脈管炎、內(nèi)毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、缺血、內(nèi)膜增生、狹窄、再狹窄、平滑肌瘤、平滑肌痙攣、心絞痛、普林茲邁托心絞痛、心動(dòng)過緩、高血壓、心臟肥大、腎衰竭、中風(fēng)、肺動(dòng)脈高壓、妊娠毒血癥、雷諾病、溶血性尿毒癥、肛裂、失弛緩癥、陽(yáng)痿、偏頭疼、血管病變、充血性心力衰竭、心肌頓挫、舒張期功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)增生、慢性阻塞性肺病、骨質(zhì)減少、變性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、肝硬化、間質(zhì)纖維化、結(jié)腸炎、闌尾炎、胃炎、喉炎、腦膜炎、耳炎、外傷性腦損傷、脊髓損傷、周維神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化、心代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纖維化、注射性纖維化、心內(nèi)膜心肌纖維化、肺的特發(fā)性肺纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、腎原性系統(tǒng)性纖維化、乳腺癌、前列腺癌和內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。
37.權(quán)利要求20的方法，其中所述至少一種炎性細(xì)胞因子為IL-6、TNFα和IL-I β中的至少一種。
38.權(quán)利要求20的方法，其中通過植入生物醫(yī)學(xué)裝置進(jìn)行給予步驟(a)，其中將所述組合物置于所述裝置上面或里面。
39.權(quán)利要求20的方法，其中給予步驟(a)為胃腸外給予。
全文摘要
本發(fā)明提供含有治療量的抑制至少一種激酶的治療抑制劑肽的激酶抑制組合物、用于治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法、和用所述激酶抑制組合物治療其病理生理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子表達(dá)的炎性病癥的方法。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102316731SQ200980156800
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2009年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月10日
發(fā)明者A·帕尼奇, B·西爾 申請(qǐng)人:普渡研究基金會(huì)