專利名稱：腰果梨的原花色素、含有原花色素的組合物、及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供源于腰果梨的高分子原花色素和含有其的腰果梨處理物，以及其用途。
背景技術(shù)：
腰果樹(Anacardium occidentale)是原產(chǎn)于巴西的屬于漆樹科的常綠喬木，將花柄肥大而形成5 6cm的黃色西洋梨型的稱作腰果梨，其具有類似于蘋果的芳香，有時生食或以果汁等的形式食用。在該肥大的柄的前端結(jié)有2 3cm、彎曲勾玉狀的、包著殼的果實(shí)。 盛放在該殼中的仁的部分為腰果。腰果在世界范圍內(nèi)被廣泛用于食用。另一方面，花色素是指屬于類黃酮、將花色素苷水解而得到的著色的糖苷配基，其根據(jù)羥基的結(jié)合數(shù)可大致分為花翠素型、矢車菊素型、天竺葵色素型這三種。原花色素是指通過在酸性條件下加熱而生成花色素的成分，其是以縮合型丹寧、即黃烷-3-醇或黃烷-3， 4-二醇為構(gòu)成單元并通過縮合或聚合結(jié)合而成的化合物組。將通過酸性條件下的加熱而產(chǎn)生花翠素的原花色素稱作原花翠素、產(chǎn)生矢車菊素的原花色素稱作原矢車菊素、產(chǎn)生天竺葵色素的原花色素稱作原天竺葵色素。原花翠素已知是沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素沒食子酸酯、和表沒食子兒茶素沒食子酸酯的聚合物，原矢車菊素已知是兒茶素、表兒茶素、兒茶素沒食子酸酯、和表兒茶素沒食子酸酯的聚合物。已知腰果梨中含有腰果酸等成分，但沒有原花色素存在的報(bào)道。專利文獻(xiàn)1 (日本特開平9491039)中公開了來自羅望子種皮提取物的以聚合度為2 80聚體的原矢車菊素為有效成分的抗肥胖劑。另外，專利文獻(xiàn)2 (日本特開 2006-151944)中，報(bào)道了含有多酚的中性脂肪代謝控制劑，所述多酚源于含有原矢車菊素類的蘋果。對于該原矢車菊素的脂肪酶抑制活性，非專利文獻(xiàn)2 (J. Agric. Food Chem. 2007, 55，4604-4609)中，精密地純化了每種聚合度的源于蘋果的原矢車菊素，并對各自的脂肪酶抑制活性進(jìn)行了研究。非專利文獻(xiàn)2中指出9聚體以上的原矢車菊素的脂肪酶抑制IC50為0. 9 μ g/ml，同時測定的氯原酸(Chlorogenic acid)為59. 8μ g/ml。對于高分子原花翠素的α-淀粉酶抑制活性和脂肪酶抑制活性，尚且未知。關(guān)于高分子原花翠素有以下報(bào)道。對于專利文獻(xiàn)3 (日本特開2008-138129) “淀粉酶抑制劑”，報(bào)道了含有選自表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表沒食子兒茶素中的兒茶素類的聚合物的α淀粉酶抑制劑。其是利用酶反應(yīng)而人工合成的聚合物，在權(quán)利要求中限定了其數(shù)均分子量為10000以下、聚合度為2 20。實(shí)施例中記載了合成全部表沒食子兒茶素沒食子酸酯的聚合物和表沒食子兒茶素沒食子酸酯與醛的縮聚物的結(jié)果。由專利文獻(xiàn)3可以理解，將表沒食子兒茶素沒食子酸酯聚合化得到的原花翠素中具有α-淀粉酶抑制活性。但是，專利文獻(xiàn)3記載的聚合物是利用人工反應(yīng)得到的化合物，結(jié)構(gòu)上不清楚的地方較多，食用時的安全性也要注意。關(guān)于原花翠素的專利文獻(xiàn)列舉了以下文獻(xiàn)。專利文獻(xiàn)4 (日本特開2006-16367) 中報(bào)道了具有2聚體的多個分子結(jié)構(gòu)的原花翠素的脂肪酶抑制活性。另外，專利文獻(xiàn)5(日本特開2006-1909)中報(bào)道了具有脂肪酶抑制活性的新型化合物。這些專利文獻(xiàn)指出，表沒食子兒茶素沒食子酸酯((-)_印igallocatechin 3-0-gallate)的脂肪酶抑制IC5tl為 0. 284μΜ 和 0. 349μΜ (0. 16μ g/ml)。非專利文獻(xiàn) 1 (J. Agric. Food Chem, 2003，51， 7513-7521)中記載了對多種植物的原花色素的構(gòu)成成分進(jìn)行分析的結(jié)果。沒有記載平均聚合度(mDP)為50以上的物質(zhì)，另外也沒有報(bào)道以表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成成分的物質(zhì)。另外，非專利文獻(xiàn)1中記載了堅(jiān)果類中“腰果”的原花色素存在(表)兒茶素的2 聚體，但沒有腰果梨的記載。作為與源于葡萄的原花色素有關(guān)的專利文獻(xiàn)，列舉了以下文獻(xiàn)。專利文獻(xiàn)6(日本特開2000-44472)報(bào)道了作為“糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防或治療藥物”，從葡萄果實(shí)的種子、果皮等中得到的原花色素低聚物(2 30聚體，優(yōu)選2 10聚體)具有血糖值升高抑制作用，其作為糖尿病治療藥物是有效的。專利文獻(xiàn)6中沒有記載關(guān)于淀粉酶酶抑制活性的報(bào)告，但其報(bào)道了原矢車菊素B-3 (2聚體)和原花色素(葡萄種子提取物的原花色素低聚物)使糖尿病大鼠的血糖值降低的實(shí)施例。認(rèn)為葡萄種子中提取物中的原花青素是原矢車菊素((表) 兒茶素聚合物)(參考非專利文獻(xiàn)4 (香粧會誌Vol. 27，No. 4 (2003))和非專利文獻(xiàn)1 (J. Agric. Food Chem, 2003，51，7513-7521))。另一方面，作為脂肪酶抑制劑，已知有各種活性成分。專利文獻(xiàn)7(日本特開2008-19180)中，記載了將圣誕秋海棠提取物的脂肪酶抑制活性與作為陽性對照的布洛芬吡啶甲醇和四環(huán)素鹽酸鹽進(jìn)行比較的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。專利文獻(xiàn)8(日本特開2005-53891)公開了一種要解決的課題在于提供脂肪酶抑制劑的發(fā)明，該脂肪酶抑制劑具有優(yōu)異的胰脂肪酶或細(xì)菌性脂肪酶的抑制效果，且含有在多種植物中，安全性優(yōu)異，并可有效地應(yīng)對肥胖化傾向或粉刺、皮膚炎等。在專利文獻(xiàn)8的實(shí)施例中，記載了咖啡酸(咖啡因酸或3，4 一二羥基肉桂酸)、沒食子酸、迷迭香酸作為脂肪酶抑制劑是有效的，還記載了其測定值。專利文獻(xiàn)9(日本特開2004-115466)中公開了含有原花色素的粉刺預(yù)防和治療效果用皮膚外用劑。根據(jù)專利文獻(xiàn)9的權(quán)利要求，原花色素來源于松樹皮、葡萄、藍(lán)莓、草莓、 鱷梨、刺槐、越橘的果實(shí)或種子、大麥、小麥、大豆、黑大豆、可可、花生的薄皮、銀杏葉。另外， 實(shí)施例中沒有關(guān)于脂肪酶抑制活性的記載，而記載了采用松樹皮提取物進(jìn)行粉刺菌等的最小抑菌試驗(yàn)的結(jié)果。專利文獻(xiàn)10 (專利第3966689號)記載了含有屬于景天科的薔薇根景天和/或紅景天的提取物的粉刺用皮膚疾病改善劑。在專利文獻(xiàn)10中，實(shí)施例對于多種植物提取物研究了源于牛胰臟的脂肪酶抑制活性。其中，關(guān)于脂肪酶抑制活性IC5tl為40 μ g/ml的薔薇根景天和紅景天的提取物，授予有專利權(quán)。另一方面，粉刺主要是在青春期男女的臉面等上發(fā)生的一種皮膚疾病。作為其原因，認(rèn)為是皮脂分泌的增加、表皮或粉刺菌的脂肪酶所生成的脂肪酸引起炎癥、或粉刺菌的異常增殖等。粉刺的預(yù)防治療一直以來使用抗菌劑(專利文獻(xiàn)11、12等)。但是，存在抗菌劑所致的副作用、或針對抗菌劑的耐性菌的出現(xiàn)等問題、或抗菌劑所致的皮膚常在菌被過量殺菌等問題。需求安全性高、可抑制粉刺菌的過量增殖的制劑。專利文獻(xiàn)1 日本特開平9491039號公報(bào)專利文獻(xiàn)2 日本特開2006-151944號公報(bào)專利文獻(xiàn)3 日本特開2008-1381 號公報(bào)專利文獻(xiàn)4 日本特開2006-16367號公報(bào)專利文獻(xiàn)5 日本特開2006-1909號公報(bào)專利文獻(xiàn)6 日本特開2000-44472號公報(bào)專利文獻(xiàn)7 日本特開2008-19180號公報(bào)專利文獻(xiàn)8 日本特開2005-53891號公報(bào)專利文獻(xiàn)9 日本特開2004-115466號公報(bào)專利文獻(xiàn)10 日本專利第3966689號公報(bào)專利文獻(xiàn)11 日本特開2004-189656號公報(bào)專利文獻(xiàn)12 日本特開2006-213633號公報(bào)非專利文獻(xiàn) 1 :J. Agric. Food Chem.，2003，51，7513-7521 非專利文獻(xiàn) 2 J. Agric. Food Chem.，2007，55，4604-4609 非專利文獻(xiàn) 3 J. Agric. Food Chem.，2002，50，4852-4860 非專利文獻(xiàn)4:香粧會誌，Vol. 27, No. 4 (2003)。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的課題
腰果梨在腰果采摘時多被廢棄。期望對腰果梨進(jìn)行有效利用。因此，本發(fā)明的目的在于提供腰果梨的有用的用途。本發(fā)明的目的還在于提供源于天然物的、具有α -淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性、針對粉刺菌的抗菌活性等有益活性的活性成分。用于解決課題的手段
作為用于解決上述課題的手段，本發(fā)明提供以下發(fā)明。(1)含有源于腰果梨的原花色素的組合物，其利用含有下述工序的方法來制備 使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序、和利用截留分子量為10，000以上的超濾膜將該工序中得到的酶分解物進(jìn)行濃縮的工序。(2) (1)所述的組合物，其中，上述方法進(jìn)一步含有在使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序之后進(jìn)行的、將多酚濃縮或分離的工序。(3) (1)或(2)所述的組合物，其中，上述方法進(jìn)一步含有在使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序之后進(jìn)行的、將原花色素濃縮或分離的工序。(4) (1) (3)中任一項(xiàng)所述的組合物，其中，上述原花色素含有原花翠素。(5)飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其含有(1) (4)中任一項(xiàng)所述的組合物。(6)原花色素，其是至少含有(表)沒食子兒茶素和(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成單元的、平均聚合度為20以上的聚合物。(7) (6)所述的原花色素，其中，作為構(gòu)成單元，含有(表)沒食子兒茶素50 80 摩爾％、(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯20 50摩爾％。(8) (6)或(7)所述的原花色素，其中，進(jìn)一步含有表兒茶素和表兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成單元。
(9) (6) (8)中任一項(xiàng)所述的原花色素，其中，聚合物的至少一個末端為表沒食子兒茶素沒食子酸酯。(10) (6) (9)中任一項(xiàng)所述的原花色素，其是從濃縮物中分離出的原花色素， 所述濃縮物通過使植物纖維分解酶作用于腰果梨，并利用截留分子量為10，000以上的超濾膜將所得酶分解物進(jìn)行濃縮而得。(11)飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素。(12) α -淀粉酶抑制劑，其含有⑴ (4)中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(13)癥狀通過抑制α-淀粉酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(1) 中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(14)脂肪酶抑制劑，其含有(1) (4)中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(15)癥狀通過抑制脂肪酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(1) (4)中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(16)脂質(zhì)劣化抑制劑，其含有⑴ ⑷中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(17)針對粉刺菌(Propionibacterium acnes)的抗菌劑，其含有(1) (4)中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(18)癥狀通過抑制粉刺菌(Propionibacterium acnes)的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(1) (4)中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。(19) α -淀粉酶抑制劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(20)癥狀通過抑制α-淀粉酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(21)脂肪酶抑制劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(22)癥狀通過抑制脂肪酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(23)脂質(zhì)劣化抑制劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(24)針對粉刺菌(Propionibacterium acnes)的抗菌劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。(25)癥狀通過抑制粉刺菌(Propionibacterium acnes)的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有(6) (10)中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。本發(fā)明還可以是如以下記載的內(nèi)容。飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其含有相對于組合物總重量為0. 025 重量％以上、更優(yōu)選0. 05重量％以上的上述原花色素。飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其不含有通過了截留分子量為 10, 000以上的超濾膜的、源于腰果梨的原花色素，而含有沒有通過截留分子量為10，000以上的超濾膜的、源于腰果梨的原花色素。通過在體內(nèi)或體外給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素來抑制α-淀粉酶的方法。通過在生物體內(nèi)或生物體外的α -淀粉酶存在環(huán)境中給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素來抑制α-淀粉酶的方法。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作體內(nèi)或體外的α-淀粉酶抑制劑。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造體內(nèi)或體外的α -淀粉酶抑制劑中的用途。癥狀通過抑制α -淀粉酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或者疾病的預(yù)防或治療方法，其含有對于患者(人等)給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素以用于預(yù)防或治療該狀態(tài)或疾病的有效量來給予?；颊呤切枰A(yù)防或治療該狀態(tài)或疾病的患者。給藥途徑優(yōu)選口服給藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作癥狀通過抑制α -淀粉酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防藥或治療藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于癥狀通過抑制α -淀粉酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的藥物中的用途。足夠抑制α -淀粉酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在用于抑制α-淀粉酶的飲食品組合物中的非醫(yī)療性用途。上述飲食品組合物，典型地，對于攝取其的人來說，是用于降低癥狀通過抑制α-淀粉酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的飲食品組合物，或者是用于引起形成上述狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的基礎(chǔ)的生理效果的飲食品組合物。足夠抑制α -淀粉酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于抑制α-淀粉酶的醫(yī)療性飲食品組合物中的用途。上述醫(yī)療性飲食品組合物，典型地， 對于攝取其的人來說，是用于癥狀通過抑制α-淀粉酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的飲食品組合物。通過在體內(nèi)或體外給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素來抑制脂肪酶的方法。通過在生物體內(nèi)或生物體外的脂肪酶存在環(huán)境中給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素來抑制脂肪酶的方法。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作體內(nèi)或體外的脂肪酶抑制劑。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造體內(nèi)或體外的脂肪酶抑制劑中的用途。癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療方法，其含有對患者(人等)給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素以用于該狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的有效量來給予?；颊呤切枰摖顟B(tài)或疾病的預(yù)防或治療的患者。給藥途徑優(yōu)選口服給藥或透皮給藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防藥或治療藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的藥物中的用途。脂質(zhì)劣化抑制劑，其含有上述含有原花色素的組合物或上述原花色素。通過在生物體內(nèi)或生物體外的脂質(zhì)存在環(huán)境(皮膚或含脂質(zhì)組合物等)中，給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素來抑制脂質(zhì)的劣化的方法。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在抑制脂質(zhì)劣化中的用途。足夠抑制脂肪酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在用于抑制脂肪酶的飲食品組合物中的非醫(yī)療性用途。上述飲食品組合物，典型地，對于攝取其的人來說，是用于降低癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的飲食品組合物，或者是用于引起形成上述狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的基礎(chǔ)的生理效果的飲食品組合物。足夠抑制脂肪酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于抑制脂肪酶的醫(yī)療性飲食品組合物中的用途。上述醫(yī)療性飲食品組合物，典型地，對于攝取其的人來說，是用于癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或者疾病的預(yù)防或治療的飲食品組合物。足夠抑制脂肪酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在用于抑制脂肪酶的化妝品組合物中的非醫(yī)療性用途。上述化妝品組合物，典型地，對于使用其的人來說，是用于降低癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的化妝品組合物，或者是用于引起形成上述狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的基礎(chǔ)的生理效果的化妝品組合物。足夠抑制脂肪酶的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于抑制脂肪酶的醫(yī)療性化妝品組合物中的用途。上述醫(yī)療性化妝品組合物，典型地，對于使用其的人來說，是用于癥狀通過抑制脂肪酶而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的化妝品組合物。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作針對體內(nèi)或體外的粉刺菌的抗菌劑。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造針對體內(nèi)或體外的粉刺菌的抗菌劑中的用途。癥狀通過抑制粉刺菌的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療方法，其含有對于患者(人等)給予上述含有原花色素的組合物或上述原花色素。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素以用于該狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的有效量來給予?；颊呤切枰摖顟B(tài)或疾病的預(yù)防或治療的患者。給藥途徑優(yōu)選透皮給藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作癥狀通過抑制粉刺菌的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防藥或治療藥。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制造用于癥狀通過抑制粉刺菌的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的藥物中的用途。足夠抑制粉刺菌的增殖的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在用于抑制粉刺菌增殖的化妝品組合物中的非醫(yī)療性用途。上述化妝品組合物，典型地，對于使用其的人來說，是用于降低癥狀通過抑制粉刺菌的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的化妝品組合物，或者是用于引起形成上述狀態(tài)或疾病的預(yù)防或治療的基礎(chǔ)的生理效果的化妝品組合物。足夠抑制粉刺菌的增殖的量的上述含有原花色素的組合物或上述原花色素在制
造用于抑制粉刺菌的增殖的醫(yī)療性化妝品組合物中的用途。上述醫(yī)療性化妝品組合物，典
型地，對于使用其的人來說，是用于癥狀通過抑制粉刺菌的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或
疾病的預(yù)防或治療的化妝品組合物。上述含有原花色素的組合物或上述原花色素，其用作藥物。發(fā)明效果
根據(jù)本發(fā)明，可以有效利用以往多被廢棄的腰果梨。另外，根據(jù)本發(fā)明，可以提供源于天然物的、安全性高的、具有α-淀粉酶抑制活
性、脂肪酶抑制活性、針對粉刺菌的抗菌活性等有益活性的活性成分。


[圖1]表示源于腰果梨的原花色素在酸性條件下的加熱處理物的HPLC分析結(jié)果。[圖2]表示NBP-A(100Κ以上截留物)的硫醇分解后的HPLC分析結(jié)果。[圖3]NBP硫醇分解純化品Peak1的ESI⑴-MS譜圖 [圖4-1]NBP硫醇分解純化品Peak 1的1H NMR譜圖NBP硫醇分解純化品Peak 1的1H NMR譜圖(續(xù)圖4_1)ΝΒΡ硫醇分解純化品Peak 1的1H NMR譜圖(放大圖)NBP硫醇分解純化品Peak 1的1H NMR譜圖(放大圖)(續(xù)圖5_1)NBP硫醇分解純化品Peak 1的13C NMR譜圖ΝΒΡ硫醇分解純化品Peak 1的13C NMR譜圖(放大圖)NBP硫醇分解純化品Peak 1的13C NMR譜圖(放大圖)(續(xù)圖7_1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的ESI (+) -MS譜圖NBP硫醇分解純化品Peak 2的1H NMR譜圖NBP硫醇分解純化品Peak 2的1H NMR譜圖(續(xù)圖9_1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的1H NMR譜圖(放大圖)NBP硫醇分解純化品Peak 2的1H NMR譜圖(放大圖)(續(xù)圖10_1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖(續(xù)圖11_1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖(放大圖1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖(放大圖1)(續(xù)圖12_1)NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖(放大圖2)NBP硫醇分解純化品Peak 2的13C NMR譜圖(放大圖2)(續(xù)圖13_1)NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液的HPLC色譜圖NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液的HPLC色譜圖和TIC [ESI (+)]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(1)的LC-MS測定結(jié)果NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(1)的精密質(zhì)量譜圖NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(1) (m/ζ 459. 0922)的組成演算結(jié)果
10[圖16-4]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(1) (m/ζ 459. 0922)的組成演算結(jié)果
(續(xù))NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰O)的LC-MS測定結(jié)果 [圖17-2]ΝΒΡ-Α的IOK級分的硫醇分解溶液，峰O)的精密質(zhì)量譜圖 [圖17-3]ΝΒΡ-Α的IOK級分的硫醇分解溶液，峰⑵(m/z 413. 1041)的組成演算結(jié)果 [圖17-4]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰⑵(m/z 413. 1041)的組成演算結(jié)果
(續(xù))NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(3)的LC-MS測定結(jié)果 [圖18-2]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(3)的精密質(zhì)量譜圖 [圖18-3]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(3) (m/z 565. 1229)的組成演算結(jié)果 [圖18-4]NBP-A的IOK級分的硫醇分解溶液，峰(3) (m/z 565. 1229)的組成演算結(jié)果
(續(xù))表示使用三種果膠酶制劑進(jìn)行處理的果泥提取物的α-淀粉酶抑制活性。本說明書包含作為本申請優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的國際申請PCT/JP2008/073843的說明書和/或附圖中記載的內(nèi)容。
具體實(shí)施例方式1.腰果梨
本發(fā)明中，作為腰果梨，可以使用腰果樹的柄肥大而得的黃色西洋梨型部位。除去結(jié)在該部位的前端的腰果和其殼來使用。在本發(fā)明中，“腰果梨”并不僅限于腰果梨原本的形狀，還包含腰果梨的粉碎物、果泥、果汁、果汁榨汁殘?jiān)葘ρ孢M(jìn)行物理性處理而得的物質(zhì)。其中，腰果梨的果泥在本發(fā)明的用途中是優(yōu)選的。果泥是指將除去了殼的部分的成熟腰果梨用粉碎機(jī)或攪拌機(jī)等進(jìn)行粉碎處理并液狀化而得的物質(zhì)。成熟腰果梨的果肉非常柔軟，可以容易地液狀化。高分子量的原花色素可以通過使果膠酶等植物纖維分解酶作用于腰果梨，而從果膠等水不溶性成分中分離。因此，使植物纖維分解酶作用時，作為“腰果梨”，也可以使用果汁榨汁殘?jiān)妊娴乃蝗苄猿煞帧?.腰果梨的處理物
本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，腰果梨的利用植物纖維分解酶得到的分解物具有高的α -淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性、針對粉刺菌的抗菌活性。推定這些活性與具有新型結(jié)構(gòu)的高分子量原花色素有關(guān)。因此，以下對于腰果梨的植物纖維分解酶分解物等含有原花色素的組合物、和原花色素詳細(xì)地進(jìn)行說明。2. ι. m^m^^^^^Mm^m
在本發(fā)明中，“含有原花色素的組合物”或“原花色素含有組合物”是指，使植物纖維分解酶作用于腰果梨(也包含粉碎物、果泥、果汁、水不溶性成分(果汁榨汁殘?jiān)?等)，進(jìn)而對所得植物纖維分解酶分解物實(shí)施利用超濾膜的濃縮處理而得到的以可發(fā)揮作用的狀態(tài)含有原花色素的濃縮物、以及對該濃縮物實(shí)施純化等進(jìn)一步處理而制備的、含有源于腰果梨的原花色素的、作為腰果梨處理物的組合物。源于腰果梨的原花色素含有原花翠素作為主成分。典型地，源于腰果梨的原花色素的構(gòu)成單元中70 100摩爾％為原花翠素((表)沒食子兒茶素和(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯)?！爸参锢w維分解酶”優(yōu)選果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、β -淀粉酶、或具有2種以上的上述酶活性的酶、或這些酶的混合物，特別優(yōu)選果膠酶。果膠酶已知具有果汁澄清化作用。本發(fā)明中，植物纖維分解酶可以使用市售的酶制劑。在本發(fā)明中，果膠酶不僅可以使用市售為果膠酶的酶制劑，而且還可以使用市售為纖維素酶等具有其它活性的酶但可作為果膠酶使用的酶制劑。對于植物纖維分解酶的處理?xiàng)l件，可以根據(jù)使用的酶制劑和酶濃度適當(dāng)決定，沒有特別地限定。酶處理物優(yōu)選進(jìn)行酶處理直至成為可用離心分離處理等容易地使固體成分沉降的狀態(tài)或通過過濾可容易地進(jìn)行分離的狀態(tài)。例如，酶處理時的PH條件可以為3 5 的范圍，溫度條件可以為50 60°C，處理時間可以為1 M小時。植物纖維分解酶優(yōu)選作用于腰果梨果泥或水不溶性成分。腰果梨果泥也可以進(jìn)而用水等溶劑稀釋。從廢棄物的有效利用的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選使用果汁榨汁殘?jiān)人蝗苄猿煞值膶?shí)施方式。由植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物可以直接供于以后的進(jìn)一步處理中， 但由于原花色素溶出于液體部分中，因而可以通過離心分離、過濾等通常的分離手段僅分離液體部分，供于以后的進(jìn)一步處理中。進(jìn)一步地，優(yōu)選對于由植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物，實(shí)施利用超濾膜的濃縮處理(以下有時稱作“超濾工序”)、多酚的濃縮或分離處理(以下有時稱作“多酚分離工序”)、原花色素的濃縮或分離處理(以下有時稱作“原花色素分離工序”)等的處理。通過利用超濾膜的濃縮處理，可以除去腰果梨中所含的果糖、葡萄糖等單糖類和二糖類，能夠抑制腰果梨植物纖維分解酶分解物的熱量、甜味。另外，在通過利用超濾膜的濃縮處理進(jìn)行濃縮的高分子成分中，含有高分子量的原花色素，因此利用了該處理的濃縮物具有高的α -淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性和針對粉刺菌的抗菌活性。超濾膜一般是阻止0. 1 μ m 2nm (分子量為數(shù)百 數(shù)百萬)的范圍的粒子或高分子的膜。作為本發(fā)明中使用的超濾膜，優(yōu)選為具有可除去單糖類和二糖類的截留分子量的膜，優(yōu)選額定截留分子量為10，000以上的膜，更優(yōu)選30，000以上的膜，進(jìn)而優(yōu)選50，000以上的膜。例如可以使用額定截留分子量為10，000 200，000的膜、或10，000 100，000 的膜。超濾的條件沒有特別地限定。超濾膜的構(gòu)成材料也沒有特別地限定，可以優(yōu)選使用聚醚砜系材料的膜、或纖維素系材料的膜。由超濾膜得到的濃縮物可以直接用于本發(fā)明的用途，或者進(jìn)一步使其濃縮或干燥而用于本發(fā)明的用途。作為多酚的濃縮或分離處理，可以列舉使用吸附多酚的合成吸附劑，將利用植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物或上述超濾工序后的濃縮物中的多酚進(jìn)行濃縮或分離的處理。特別地，優(yōu)選對于上述超濾工序后的濃縮物實(shí)施多酚的濃縮或分離處理。作為可使用的合成吸附劑，可舉出具有微孔的不溶性三維交聯(lián)結(jié)構(gòu)聚合物的、比表面積高的樹脂， 樹脂的化學(xué)組成為芳香族(苯乙烯-二乙烯基苯)系的物質(zhì)。具體的市售品可以列舉Diaion Sepabeads HP-20 (注冊商標(biāo))(三菱化學(xué)株式會社制)等。進(jìn)一步地，還可以優(yōu)選使用對上述芳香族系的樹脂實(shí)施了化學(xué)修飾而得的物質(zhì)，或改變微孔的尺寸而得的物質(zhì)。進(jìn)一步地， 也可以使用在鍵合型硅膠中引入了十八烷基(C 18)或辛基(C 8)作為官能團(tuán)的樹脂來進(jìn)行多酚的濃縮或分離處理。使用了合成吸附劑的多酚的濃縮或分離處理的步驟沒有特別地限定，例如可以如下述那樣進(jìn)行，即，使由植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物、或上述超濾工序后的濃縮物通過填充了合成吸附劑的柱子中，利用水等清洗液進(jìn)行清洗，接著利用丙酮、醇水溶液等溶出液使多酚溶出。溶出物可以適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行濃縮或干燥。在這樣得到的多酚成分中含有下述的原花色素作為粗純化物。原花色素的濃縮或分離處理，可以列舉使用吸附原花色素的合成吸附劑，將由植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物、上述超濾工序后的濃縮物、或者在上述多酚分離工序中得到的多酚濃縮物或分離物中的原花色素進(jìn)行濃縮或分離的處理。特別地，優(yōu)選對于多酚濃縮物或分離物實(shí)施原花色素的濃縮或分離處理?？墒褂玫暮铣晌絼┛梢粤信e以羥丙基化的右旋糖酐作為基礎(chǔ)的樹脂，特別地，優(yōu)選干燥時的粒徑為18 Ι μπκ甲醇所致的膨脹時的粒徑為27 163 μ m、且對于水、鹽溶液、有機(jī)溶劑和變性劑具有穩(wěn)定性質(zhì)的吸附劑。具體的市售品可以列舉kphadex LH-20樹脂(GE Helthcare制)。使用了合成吸附劑的原花色素的濃縮或分離處理的步驟沒有特別地限定，例如可以如下述那樣進(jìn)行，即，使由植物纖維分解酶作用工序得到的酶分解物、上述超濾工序后的濃縮物或者上述多酚分離工序中得到的多酚濃縮物或分離物通過填充了合成吸附劑的柱子中，利用水等清洗液進(jìn)行清洗，接著利用丙酮、醇等溶出液使原花色素溶出。溶出物可以適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行濃縮或干燥。在這樣得到的原花色素成分中，下述的原花色素以實(shí)質(zhì)上經(jīng)純化的狀態(tài)存在。本發(fā)明的“含有原花色素的組合物”的范圍還包含以這種實(shí)質(zhì)上經(jīng)純化的狀態(tài)存在的原花色素。經(jīng)過上述步驟得到的多酚濃縮物或分離物、或者原花色素的濃縮物或分離物進(jìn)而還可以利用超濾膜根據(jù)分子量來截留。此時使用的超濾膜的種類和超濾的條件可以與上述同樣。利用上述步驟得到的源于腰果梨的含有原花色素的組合物是目前不存在的組合物，且具有α -淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性和針對粉刺菌的抗菌活性是高的有利特征。本發(fā)明的含有原花色素的組合物是通過下述方法制備的組合物，所述方法含有使植物纖維分解酶作用于腰果梨的植物纖維分解酶作用工序、和利用上述超濾膜將在植物纖維分解酶作用工序中得到的酶分解物進(jìn)行濃縮的超濾工序。植物纖維分解酶作用工序中使用的腰果梨優(yōu)選至少含有果膠等水不溶性成分。本發(fā)明的含有原花色素的組合物更優(yōu)選是通過下述方法制備的組合物，所述方法含有上述植物纖維分解酶作用工序、上述超濾工序、和從由超濾工序得到的濃縮物中濃縮或分離多酚的多酚分離工序。本發(fā)明的含有原花色素的組合物更優(yōu)選是通過下述方法制備的組合物，所述方法含有上述植物纖維分解酶作用工序、上述超濾工序、和從由超濾工序得到的濃縮物中濃縮或分離原花色素的原花色素分離工序。本發(fā)明的含有原花色素的組合物更優(yōu)選是通過下述方法制備的組合物，所述方法含有上述植物纖維分解酶作用工序、上述超濾工序、從由超濾工序得到的濃縮物中濃縮或分離多酚的多酚分離工序、和從由多酚分離工序得到的含有多酚的組合物中濃縮或分離原花色素的原花色素分離工序。在利用植物纖維分解酶作用工序得到的植物纖維分解酶分解中，以可發(fā)揮活性的狀態(tài)含有腰果梨中的原花色素。對于經(jīng)過超濾工序得到的組合物，原花色素中的沒有通過超濾膜的高分子量的成分的含有濃度得到提高。經(jīng)過多酚分離工序得到的組合物同時含有原花色素和其它的多酚組分。該組合物相當(dāng)于原花色素的粗純化物。經(jīng)過原花色素分離工序得到的組合物以更高的濃度含有原花色素。該組合物相當(dāng)于原花色素的純化物。2.2.原花餼素
從腰果梨植物纖維分解酶分解物中分離出的原花色素是新的化合物，所述腰果梨植物纖維分解酶分解物通過含有使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序的方法而制備。該原花色素如實(shí)施例所示，具有高α -淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性和針對粉刺菌的抗菌活性的有利特征。即，本發(fā)明還提供新型原花色素。本發(fā)明的原花色素是至少含有沒食子兒茶素或表沒食子兒茶素(本說明書中記載為“(表)沒食子兒茶素”)、和沒食子兒茶素沒食子酸酯或表沒食子兒茶素沒食子酸酯(本說明書中記載為“(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯”)作為構(gòu)成單元的、平均聚合度為20以上的聚合物。平均聚合度優(yōu)選為25以上，更優(yōu)選在25 100的范圍，特別優(yōu)選25 75的范圍。 本發(fā)明的原花色素優(yōu)選進(jìn)而含有表兒茶素和表兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成單元。本發(fā)明的原花色素優(yōu)選含有(表)沒食子兒茶素50 80摩爾％、(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯20 50摩爾％作為構(gòu)成單元，更優(yōu)選含有(表)沒食子兒茶素50 75摩爾％、(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯20 45摩爾％、表兒茶素3 10摩爾％、表兒茶素沒食子酸酯0. 5 5摩爾％。本發(fā)明的原花色素含有(表)沒食子兒茶素和(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯作為主成分，因此在本說明書中有時也稱作“原花翠素”。本發(fā)明的原花色素的構(gòu)成單元(重復(fù)單元)用下式表示， [化1]
權(quán)利要求
1.含有源于腰果梨的原花色素的組合物，其利用含有使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序、和利用截留分子量為10，000以上的超濾膜將該工序中得到的酶分解物進(jìn)行濃縮的工序的方法來制備。
2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中，上述方法進(jìn)一步含有在使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序之后進(jìn)行的、將多酚濃縮或分離的工序。
3.權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中，上述方法進(jìn)一步含有在使植物纖維分解酶作用于腰果梨的工序之后進(jìn)行的、將原花色素濃縮或分離的工序。
4.權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中，上述原花色素含有原花翠素。
5.飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物。
6.原花色素，其是至少含有(表)沒食子兒茶素和(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成單元的、平均聚合度為20以上的聚合物。
7.權(quán)利要求6所述的原花色素，其中，作為構(gòu)成單元，含有(表)沒食子兒茶素50 80 摩爾％、(表)沒食子兒茶素沒食子酸酯20 50摩爾％。
8.權(quán)利要求6或7所述的原花色素，其中，進(jìn)一步含有表兒茶素和表兒茶素沒食子酸酯作為構(gòu)成單元。
9.權(quán)利要求6 8中任一項(xiàng)所述的原花色素，其中，聚合物的至少一個末端為表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
10.權(quán)利要求6 9中任一項(xiàng)所述的原花色素，其是從濃縮物中分離出的原花色素，所述濃縮物通過使植物纖維分解酶作用于腰果梨，并利用截留分子量為10，000以上的超濾膜將所得酶分解物進(jìn)行濃縮而得。
11.飲食品組合物、化妝品組合物或藥物組合物，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素。
12.α -淀粉酶抑制劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
13.癥狀通過抑制α-淀粉酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑， 其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
14.脂肪酶抑制劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
15.癥狀通過抑制脂肪酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
16.脂質(zhì)劣化抑制劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
17.針對粉刺菌(Propionibacteriumacnes)的抗菌劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
18.癥狀通過抑制粉刺菌(Propionibacteriumacnes)的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的組合物作為有效成分。
19.α -淀粉酶抑制劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
20.癥狀通過抑制α-淀粉酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑， 其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
21.脂肪酶抑制劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
22.癥狀通過抑制脂肪酶活性而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
23.脂質(zhì)劣化抑制劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
24.針對粉刺菌(Propionibacteriumacnes)的抗菌劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
25.癥狀通過抑制粉刺菌(Propionibacteriumacnes)的增殖而被預(yù)防或改善的狀態(tài)或疾病的預(yù)防劑或治療劑，其含有權(quán)利要求6 10中任一項(xiàng)所述的原花色素作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供腰果梨的有用的用途。本發(fā)明的目的還在于提供源于天然物的、具有α-淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性、針對粉刺菌的抗菌活性等有益活性的活性成分。本發(fā)明提供含有源于腰果梨的原花色素的組合物，所述腰果梨的原花色素是使果膠酶等植物纖維分解酶作用于腰果梨，接著通過超濾膜進(jìn)行濃縮而制備的，且具有優(yōu)異的α-淀粉酶抑制活性、脂肪酶抑制活性、以及針對粉刺菌的抗菌活性。本發(fā)明還提供具有新型結(jié)構(gòu)的原花色素化合物。
文檔編號A61K36/18GK102317468SQ200980156869
公開日2012年1月11日 申請日期2009年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日
發(fā)明者永峰賢一 申請人:株式會社日冷生物科學(xué)