專利名稱：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽t3及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤是一種致死率非常高的疾病，現(xiàn)代研究表明，腫瘤組織的血管新生在腫瘤的 發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著相當(dāng)重要的作用，特別是腫瘤新生初期，在其體積超過(guò)2mm3時(shí)， 必須有血管生成而為其提供大量的營(yíng)養(yǎng)。同時(shí)，血管的新生也為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移以 及轉(zhuǎn)移部位的腫瘤生長(zhǎng)提供了一個(gè)渠道，使得惡性腫瘤不斷增生轉(zhuǎn)移危及人體的健康和生 命。腫瘤生長(zhǎng)與其血管新生有非常密切的關(guān)系，是腫瘤增生、擴(kuò)散和微轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的重要條 件之一，研究開(kāi)發(fā)新生血管生成抑制劑成為目前腫瘤治療的一種新策略。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Basic fibroblast growth factor，bFGF)是廣泛存在 于人體和動(dòng)物體內(nèi)的生長(zhǎng)因子，它作為目前成纖維細(xì)胞家族成員中發(fā)現(xiàn)最早研究最多的因 子之一，具有廣泛的生物學(xué)活性，在促進(jìn)血管形成、胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合以及腫瘤形成過(guò)程 中扮演著重要的角色。近年來(lái)有研究表明，惡性腫瘤組織中，bFGF有著強(qiáng)烈的、高水平的表 達(dá)，并且在血清檢測(cè)中顯示較高程度的水平，這說(shuō)明bFGF表達(dá)的增強(qiáng)與腫瘤的惡性程度以 及侵襲能力的增強(qiáng)密切相關(guān)，甚至可以作為腫瘤早期診斷和預(yù)后的指標(biāo)之一。近年來(lái)的研 究發(fā)現(xiàn)，在整個(gè)腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，bFGF在腫瘤組織血管新生方面發(fā)揮著重要的作用。噬菌體展示技術(shù)(Phage Display Technology)是一種將外源肽或者蛋白質(zhì)與特 定的噬菌體衣殼蛋白PIII或者PVIII相融合，展示于噬菌體表面來(lái)構(gòu)建蛋白質(zhì)或多肽文 庫(kù)，并從中篩選出目的蛋白、多肽或抗體的基因工程高新技術(shù)。它的優(yōu)勢(shì)在于可以將表現(xiàn)型 與基因型直接聯(lián)系在一起，確保能方便快捷的展示出目的蛋白以及該蛋白的基因序列?；?于此，近年來(lái)在多肽序列鑒定、多肽模擬物的結(jié)構(gòu)和功能的研究以及在人類病毒、細(xì)胞、腫 瘤等多種生物靶組織多肽的研究方面，噬菌體展示技術(shù)發(fā)揮著重要的不可替代的作用。自從Baird發(fā)現(xiàn)bFGF25_69以及24-121位上兩個(gè)短肽序列能夠與bFGF受體結(jié)合 以來(lái)，隨后的研究不斷的將bFGF相應(yīng)的具有受體結(jié)合活性或肝素結(jié)合活性的氨基酸殘基 進(jìn)行精確定位，例如Kurukawa等發(fā)現(xiàn)105-115位是bFGF的親受體位點(diǎn)、Ray等發(fā)現(xiàn)68-77 位是bFGF在神經(jīng)祖細(xì)胞上的受體結(jié)合位點(diǎn)等。這些結(jié)合短肽本身是否具有抗腫瘤和抗血 管新生的活性還未完全確定，而目前在細(xì)胞因子模擬肽的相關(guān)多肽研究中，多數(shù)側(cè)重于其 在促進(jìn)血管生成和胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合等方面的研究，而在抗腫瘤方面鮮有報(bào)道。而且bFGF 相關(guān)的多肽多通過(guò)化學(xué)合成等手段得到，純化時(shí)間長(zhǎng)、成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3。本發(fā)明的另一目的在于提供所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的應(yīng)用本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模 擬肽 T3，其氨基酸序列為 Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala SerLys Cys Val Thr Asp,即 AMKEDGRLLASKCVTD。 所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的核苷酸序列如下所示=GCTAT GAAAGAAGACGGTCGTCTGCTGGCTTCCAAATGCGTTACCGAC ；所述的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3用于制備多肽疫苗、腫瘤血 管生長(zhǎng)抑制劑或者腫瘤導(dǎo)向藥物；所述的腫瘤優(yōu)選為黑色素瘤。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果本發(fā)明所述的堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3在內(nèi)皮細(xì)胞增殖、成管，腫瘤細(xì)胞增殖和遷移過(guò)程中具有明顯的 抑制作用。對(duì)于以bFGF受體為目標(biāo)、診斷預(yù)測(cè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，探討小分子多肽對(duì)腫瘤血 管新生抑制劑的開(kāi)發(fā)以及腫瘤導(dǎo)向性藥物的開(kāi)發(fā)和研究具有十分重要的參考價(jià)值。本發(fā)明 通過(guò)簡(jiǎn)便、易篩選的噬菌體展示技術(shù)制成小分子多肽，既降低了人工合成的成本，又便于純 化、_集ο


圖1是重組載體T3-pCANTAB5-E酶切鑒定的電泳圖。圖2是用bEGF單克隆抗體對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3進(jìn)行 ELISA檢測(cè)結(jié)果圖。圖3是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3抑制內(nèi)皮細(xì)胞ECV304增殖的 結(jié)果圖。圖4是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3抑制腫瘤細(xì)胞B16增殖的結(jié) 果圖。圖5是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3抑制腫瘤細(xì)胞B16F10遷移的
結(jié)果圖。圖6是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3抑制腫瘤細(xì)胞B16F10遷移的 顯微鏡觀察圖。圖7是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3抑制內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC成管的 顯微鏡觀察圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。實(shí)施例1(1)通過(guò)生物信息學(xué)方法，模擬得到堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽 T3(bFGF抗原表位模擬肽T3)序列GCTATGAAAGAAGACGGTCGTCTGCTGGCTTCCAAATGCGTTACCGAC ；(2)為了將只有48個(gè)堿基的bFGF抗原表位模擬肽T3高效的構(gòu)建到噬菌體載體PCANTAB5-E上，先根據(jù)pCANTAB5_E上的堿基序列和酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物1和引物2進(jìn)行第 一輪PCR，兩者PCR產(chǎn)物作為第二輪PCR的模板。然后根據(jù)模模擬短肽T3的堿基序列以及 第一輪PCR得到的產(chǎn)物堿基序列，設(shè)計(jì)引物A和引物B，進(jìn)行第二輪PCR。擴(kuò)增得到堿基長(zhǎng) 度在100 200bp、包含有bFGF抗原表位模擬肽T3的產(chǎn)物進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。引物 1 :AAGCTTTGGAGCCTTTTTTTTGGAGATTTTCAACGTGAAAAAATTATTATTCGC引物 2 GGCCGGCTGGGCCGCATAGAAAGGAACAACTAAAGGAATTGCGAATAATAATTTTTTCA引物 A TATGCGGCCCAGCCGGCCGCTATGAAAGAAGACGGTCGTCTGCTGGCTTCCAAATG引物 B GCGGCCGCGTCGGTAACGCATTTGGAAGCCAGCAGA第一輪PCR 擴(kuò)增條件和體系94°C 5min,55°C 5min,72°C 5min，7 個(gè)循環(huán)。
第二輪PCR擴(kuò)增條件和體系94°C預(yù)變性5min，94°C變性40s，56°C退火35s，72°C 延伸40s，30個(gè)循環(huán)。 (3)將第二輪PCR產(chǎn)物切膠回收，連入T載體(Takara公司)，轉(zhuǎn)入DH5α大腸桿 菌(Takara公司)中挑取單菌落，提質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定，并送樣測(cè)序。測(cè)序由上海生物工程 技術(shù)服務(wù)有限公司完成。載體的構(gòu)建、連接及轉(zhuǎn)化通過(guò)HindIII和Not I進(jìn)行雙酶切反應(yīng)將多肽片段 切下，連入具有同樣酶切位點(diǎn)的PCANTAB5-E載體(Pharmacia公司)中，得到重組載體 T3-pCANTAB5-E。酶切條件和體系如下37°C水浴酶切16h。
連接條件和體系如下16°C水浴連接24h。 將構(gòu)建好的載體T3-pCANTAB5-E轉(zhuǎn)化入TGl大腸桿菌(Pharmacia公司)中，挑取單克隆，提質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定。酶切鑒定結(jié)果如圖1所示。(4)噬菌體展示和鑒定用輔助噬菌體VCSM13 (Stratagene公司)去感染構(gòu)建好 位于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的TGl菌，靜置30min后加入卡那霉素至70mg/L ；在4°C條件下SOOOrpm 離心獲得菌液上清，加入滅菌的飽和硫酸銨冰浴沉淀3h，4°C下8500rpm離心獲得噬菌體沉 淀，去除上清至無(wú)上清液流出狀態(tài)，DMEM溶解，4°C保存；取10μ1稀釋后測(cè)滴度。Τ3滴度為1.0X1012pfu/mLoELISA鑒定4°C過(guò)夜包被bFGF單克隆抗體(該單抗制備方法參見(jiàn)向軍儉等《人 bFGF單克隆抗體的制備及MabF7對(duì)黑色素瘤B16的體外抗瘤效應(yīng)》，中華腫瘤防治雜志， 2008(1) 19-22)，接著PBS-T洗板3次，每次3min，每孔加入200 μ 1 5%脫脂奶粉37°C封 閉lh，PBS-T洗板3次，每次3min，倍比稀釋bFGF噬菌體表位肽每孔100 μ 1 37°C反應(yīng)lh， PBS-T洗板3次，每次3min，加入HRP酶標(biāo)噬菌體二抗37°C反應(yīng)30min，PBS-T洗板5次，每 次3min，加入底物液反應(yīng)IOmin后2MH2S04終止液終止反應(yīng)，A450nm處進(jìn)行吸光度檢測(cè)。檢 測(cè)結(jié)果如圖2所示。(5)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用的檢測(cè)A、MTT法測(cè)噬菌體表位肽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的內(nèi)皮細(xì)胞 ECV304(購(gòu)自武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)，棄盡孔內(nèi)培養(yǎng)液，加入適量0. 25%胰 酶溶液消化，輕搖使消化液均勻作用于細(xì)胞，當(dāng)成片細(xì)胞圓縮、呈單個(gè)細(xì)胞狀態(tài)時(shí)去除消化液，迅速加入適量培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打使成單細(xì)胞懸液；取該單細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)后以每孔 4000個(gè)細(xì)胞的濃度分至96孔板中，用含10%小牛血清的DMEM的培養(yǎng)液于37°C、含5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h ；換用含0. 2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h至單層細(xì)胞 狀態(tài)；加入不同稀釋度的噬菌體表位肽、M13噬菌體，并設(shè)立空白對(duì)照，于37°C、5% CO2恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ；每孔加入5g/L MTT溶液20 μ 1，37°C，繼續(xù)孵育3h，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入150μ 1DMS0，振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解，選擇490nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上調(diào)定各孔收值，記錄結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該bFGF抗原 表位模擬肽T3具有明顯的抑制ECV304細(xì)胞增殖的效用，如圖3所示。B、MTT法測(cè)噬菌體表位肽對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的黑色素瘤 細(xì)胞B16(購(gòu)自武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)，棄盡孔內(nèi)培養(yǎng)液，加入適量0. 25%胰 酶溶液消化，輕搖使消化液均勻作用于細(xì)胞，當(dāng)成片細(xì)胞圓縮、呈單個(gè)細(xì)胞狀態(tài)時(shí)去除消化 液，迅速加入適量培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打使成單細(xì)胞懸液；取該單細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)后以每孔 5000個(gè)細(xì)胞的濃度分至96孔板中，用含10%小牛血清的DMEM的培養(yǎng)液于37°C、含5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h ；換用含0. 2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h至單層細(xì)胞 狀態(tài)；加入不同稀釋度的噬菌體表位肽、M13噬菌體，并設(shè)立空白對(duì)照，于37°C、5% CO2恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ；每孔加入5g/L MTT溶液20 μ 1，37°C，繼續(xù)孵育3h，終止培養(yǎng)，小心吸棄 孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入150μ 1DMS0，振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解，選擇490nm波長(zhǎng)， 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上調(diào)定各孔收值，記錄結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該bFGF抗原 表位模擬肽T3具有明顯的抑制B16細(xì)胞增殖的效用，如圖4所示。(6)對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移抑制作用的檢測(cè)A、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的黑色素瘤細(xì)胞B16F10 (南京凱基生物有限公司)，用0.25%胰 酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，用RPMI1640基本培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞數(shù)至5X 105/ml。
B、在放入Tranwell小室的24孔培養(yǎng)板中，于小室下層加入含10%小牛血清的1640完全培養(yǎng)基600 μ 1。C、在小室上層加入B16F10細(xì)胞懸液100 μ 1，并相應(yīng)加入bFGF抗原表位模擬肽 T3，濃度在101Qpfu/ml，同時(shí)設(shè)立VCSM13(濃度為101Qpfu/ml)對(duì)照和空白對(duì)照。D、將24孔板置于37°C含5% CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h。Ε、將小室取出，用RPMI1640基本培養(yǎng)基淋洗2次，室溫下放入70%乙醇中固定 15min。F、將固定完畢的小室用0. 015M pH7. 4的PBS淋洗3次，風(fēng)干，放回24孔板中，小室 上層加入100 μ 1吉姆薩染液，下層加入800 μ 1吉姆薩染液，染色15min后取出，用0. 015M PH7. 4的PBS淋洗3-4次，用棉簽輕輕將小室上層的細(xì)胞擦去、風(fēng)干。G、放入顯微鏡下計(jì)數(shù)(40 X)，結(jié)果表明，bFGF抗原表位模擬肽T3能有效抑制腫瘤 細(xì)胞遷移作用，如圖5和圖6所示。(7)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞成管抑制作用的檢測(cè)A、原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的分離和培養(yǎng)取新生兒臍帶一段(華僑醫(yī)院婦 產(chǎn)科提供)，用PBS將靜脈沖洗干凈，用止血鉗夾閉血管一端；用0. 25%胰酶消化液灌注， 室溫消化15min ；用含10%小牛血清的培養(yǎng)液沖洗并終止胰蛋白酶的消化作用，將沖洗液 收集到50mL無(wú)菌離心管中，1500rpm離心IOmin ；加入含有20%胎牛血清的完全SFM (購(gòu)自 Gibco公司)培養(yǎng)液，接種于培養(yǎng)瓶中，37°C、5% C02恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，換液，去除紅 細(xì)胞和其他未貼壁細(xì)胞；待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至90%融合狀態(tài)后消化傳代。B、取450μ1的ECM gel置于4°C活化過(guò)夜。將ECM gel與450 μ 1的DMEM混勻，每孔 取60 μ 1鋪于96孔板中，室溫靜置5min，待其鋪平后置于37°C CO2培養(yǎng)箱中備用。取原代人 臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC，用0. 025%的胰酶消化成單細(xì)胞懸液，吹勻，以1. 5Χ 104/50 μ 1 的量加入鋪好ECM gel的96孔板中。取bFGF抗原表位模擬肽T3以及VCSM13用1640基 本培養(yǎng)基稀釋至1/100，加入96孔板中，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照，將96孔板置于37°C CO2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)5hr后觀察拍照(40X)。結(jié)果表明，bFGF抗原表位模擬肽T3能有效抑制HUVEC的 成管作用，如圖7所示。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所述的源自人的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模 擬短肽，可在體外可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖、成管以及腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移作用。而目前在 細(xì)胞因子模擬肽的相關(guān)多肽研究中，多數(shù)側(cè)重于其在促進(jìn)血管生成和胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合 等方面的研究，在抗腫瘤方面鮮有報(bào)道。本發(fā)明所得到的T3多肽，在未來(lái)的疫苗開(kāi)發(fā)和研 究中，有望誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生專門(mén)針對(duì)bFGF的抗體。在臨床腫瘤治療中，該多肽本身的抗腫瘤 效用的發(fā)揮以及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗bFGF抗體可以在惡性腫瘤組織中發(fā)揮雙重的抗腫瘤抗血 管新生效果，將會(huì)對(duì)人體內(nèi)惡性腫瘤的治療發(fā)揮巨大作用。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。SEQUENCE LISTING<110>暨南大學(xué)<120>堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3及其應(yīng)用
<130>1<160>6<170>PatentIn version 3.2
<210>1<211>16<212>PRT<213>artificial sequence<220><223>堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的氨基酸序列<400>1Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr Asp151015<210>2<211>48<212>DNA<213>artificial sequence<220><223>堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的核苷酸序列<400>2gctatgaaag aagacggtcg tctgctggct tccaaatgcg ttaccgac 48<210>3<211>54<212>DNA<213>artificial sequence<220><223> 引物 1<400>3aagctttgga gccttttttt tggagatttt caacgtgaaa aaattattat tcgc 54<210>4<211>59<212>DNA<213>artificial sequence<220><223> 引物 2<400>4ggccggctgg gccgcataga aaggaacaac taaaggaatt gcgaataata attttttca 59<210>5<211>56<212>DNA
<213>artificial sequence<220><223> 引物 A<400>5tatgcggccc agccggccgc tatgaaagaa gacggtcgtc tgctggcttc caaatg 56<210>6 <211>36<212>DNA<213>artificial sequence<220><223> 引物 B<400>6gcggccgcgt cggtaacgca tttggaagcc agcaga 3權(quán)利要求
一種堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3，其特征在于所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的氨基酸序列如下所示Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr Asp。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3，其特征在于 所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的核苷酸序列如下所示GCTATGAAAGAAGACGGTCGTCTGCTGGCTTCCAAATGCGTTACCGAC。
3.權(quán)利要求1或2所堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的應(yīng)用，其特征在 于所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3用于制備多肽疫苗、腫瘤血管生長(zhǎng)抑 制劑或者腫瘤導(dǎo)向藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為黑色素瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3及其應(yīng)用。本發(fā)明所述堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3的氨基酸序列為AMKEDGRLLASKCVTD，核苷酸序列為GCTATGAAAGAAGACGGTCGTCTGCTGGCTTCCAAATGCGTTACCGAC。體外實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3在內(nèi)皮細(xì)胞增殖、成管、腫瘤細(xì)胞增殖和遷移過(guò)程中具有明顯的抑制作用。因此，本發(fā)明所述的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原表位模擬肽T3可用于制備多肽疫苗、腫瘤血管生長(zhǎng)抑制劑或者腫瘤導(dǎo)向藥物，而且其對(duì)于以bFGF受體為目標(biāo)、診斷預(yù)測(cè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，探討小分子多肽對(duì)腫瘤血管新生抑制劑的開(kāi)發(fā)以及腫瘤導(dǎo)向性藥物的開(kāi)發(fā)和研究具有十分重要的參考價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K38/10GK101838310SQ201010019509
公開(kāi)日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2010年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月20日
發(fā)明者宋其芳, 王宏, 趙鑫, 鄧寧 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)