專利名稱：：預防和治療糖尿病的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種提取自天然植物的組合物，尤其涉及一種提取自知母和黃柏的組合物，用于糖尿病的預防和治療。
背景技術：
：糖尿病(DiabetesMellitus，DM)是一種因體內(nèi)胰島素絕對或者相對不足所導致的一系列臨床綜合癥。該病在發(fā)展進程中還會引起一些并發(fā)癥，如低血糖癥(Hypoglycemia)、酮癥酸中毒(Ketoacidosis)、非酮高滲性昏迷(NonketoticHyperosmolarComa)、心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變等。糖尿病治療常用的藥物主要有三大類生物藥類，如胰島素(Insulin);化學藥，如磺酰脲類(Sulfonylurea)、雙胍類(Biguanide)、格列酮類(Glita度)和中成藥類。限于目前尚沒有較為成熟的胰島素非注射給藥技術，其使用仍以注射為主，且注射過程也存在安全性風險?；瘜W類藥物雖具有較強的降血糖作用，但對肝、腎等毒副作用大，還容易導致心血管并發(fā)癥加重。此外，還有一些藥物，如胰高血糖素類多肽(Glucagon-likep印tide1，GL1)、脂?；雀哐撬仡惗嚯?NN2211,NovoNordisk)、Exendin-4(Byetta，Amy1in)和聚乙二醇修飾的Exendin-4(中國發(fā)明專利申請00809516.7)等，長期給藥后雖能有效控制血糖、降低糖化血紅蛋白HbAlc數(shù)值和改善13胰島細胞功能，但由于這些分子還同樣作用于中樞神經(jīng)受體，所以給藥后嘔吐和眩暈的癥狀較難避免，且給藥方式仍以注射為主。另一類DPPIV酶抑制劑，雖能口服，但其將對生物體內(nèi)的一大類酶均產(chǎn)生抑制作用，從而會使體內(nèi)脂肪分布發(fā)生變化，且給藥的實際效果也相對較差。知母為百合禾斗(Liliaceae)植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBunge)的豐艮莖，具有滋陰降火、潤燥滑腸的功效，中醫(yī)臨床多用于消渴證。知母藥用以單位知母飲片或與其它中藥配伍后煎煮或熬煮為主。中藥材知母中含知母皂甙(苷)(timos即onin)A-I、A-II、A-I11、A-IV、B-I、B-II和B-I11，其中，知母皂武A-II、A_IV結構尚不明。以及知母皂甙(amemarsaponin)A2，即馬爾考皂甙元-3-O-P-D-吡喃葡萄糖基(1—2)_P-D-吡卩南半乳糖武B(marlogenin_3_0_P_D_glucopyranosy(1—2)_P_D_galactopyranosideB)、去半乳糖替告皂甙(desgalactotigonin)、F-芰脫皂甙(F-gitonin)和異菝葜皂甙(smilageninoside)等。此外，還含有知母多糖(anemaran)A/B/C/D、順-扁柏樹脂酚(cis_hinokiresinol)、單甲基_順_扁禾白樹月旨酷(monomethyl_cis_hinokiresinol)、氧化-順-扁柏樹脂酚(oxy-cis-himokiresinol)、2，6，4'-三羥基_4_甲氧基二苯甲酮(2，6，4'_trihydroxy_4_methoxybenzophenone)、對_羥苯基巴豆油酸(p-hydroxyphenylcrotonicacid)、二十五烷酸乙烯月旨(pentacosylvinylester)、P_谷甾醇-sitosterol)、芒果武(mangiferin)、煙酸(nicotinicacid)、煙酉先胺(nicotinamide)及泛酸(pantothenicacid)等。黃禾白來源于蕓香科(Rutaceae)植物黃皮樹(PhellodendronchinenseSchneid.)或黃檗(PhellodendronamurenseRupr.)的干燥樹皮，前者習稱"川黃柏"，后者習稱"關黃柏"。黃柏始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，原名"檗術"，列上品。為清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱的常用中藥材，化學成分主要為小檗堿生物堿。小檗堿對溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志賀氏痢疾桿菌均有抗菌作用，并有增強白血球吞噬作用。小檗堿的鹽酸鹽(俗稱鹽酸黃連素)已廣泛用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等，對肺結核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。關黃柏為黃檗樹(PhyllodendronamurenseRupr.)的樹皮，黃檗樹皮含小檗堿(berberine)約1.6%，并含少量黃禾白減(phellodendrine)、木蘭減(magnoflorine)、藥根堿(jatrorrhizine)、掌葉防己堿(palmatine)和白栝樓堿(candicine)等，其根皮可分離出的小檗堿約9%，尚有藥根堿、黃柏堿和白栝樓堿等。川黃柏為黃皮樹(PhyllodendronChinenseSchneid)禾口秀口十黃皮樹(P.ChinenseSchneid.var.GlabriusculumSchneid)的樹皮，含小檗堿3_8%是提取小檗堿的重要來源之一。黃皮樹樹皮含小檗堿達3%。禿葉黃皮樹樹皮含小檗堿達6.5%，并含少量掌葉防己堿、藥根堿、黃柏堿和木蘭堿。近年來，有關黃柏和知母單味藥材及其有效成分治療糖尿病的研究較多。已經(jīng)有研究表明知母黃酮類成分具有防治糖尿病的作用(國外醫(yī)學中醫(yī)中藥分冊，2002，24，353;中國發(fā)明專利ZL03115509.X)。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，知母總皂苷(中藥藥理與臨床，2005，21,22-23)、知母皂苷A-ni、B-II、B-III和芒果苷等(WakanIyak卿knZasshi，1995，5，404-405;中國生化藥物雜志，2005，26，332)具有降低血糖的功效。據(jù)報道，知母醇提物可剌激糖尿病大鼠分泌胰島素而起到降血糖作用(Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes,2004，112,520-525);知母中的多糖類成分可顯著降低四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠血糖及肝糖元(中草藥，1996，17,605-606)。研究表明，黃柏中的主要成分小檗堿具有能促進胰島素分泌，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抗糖尿病的功效(ActaPharmacologicaSinica，2004，25，496-502;中國發(fā)明專利ZL01118320.9)。進一步臨床研究證實，黃連素，即小檗堿，對II型糖尿病(Non-Insulin-D印endentDiabetesMellitus，NIDDM)患者的臨床有效率為63.3%，且不良反應小(新中醫(yī)，1997，29，33-34)。中國發(fā)明專利申請93100485.3公開了一種蕎麥保健食品，以苦蕎麥粉為基料，輔以大豆蛋白粉，再添加枸杞、人參、知母、活性鈣等中草藥天然成分，其配方重量百分組成為苦蕎麥面粉60-80%、大豆蛋白粉15-30%、枸杞多糖0.5-2.5%、知母皂甙0.2-0.5%、人參多糖O.5-1.5%、活性鈣1.2-4.3%。組成的食品對糖尿病具有治療作用。該保健食品以蕎麥為主，能對糖尿病患者的飲食起到一定作用，但在治療方面的效果有待進一步的實驗證實。中國發(fā)明專利ZL95116521.6公開了一種雙補降糖膠囊及其制作方法，使用熟地、黃芪、枸杞子、丹參、黃柏、知母和肉桂等20味原料藥，經(jīng)特殊炮制和加工而成。該降糖膠囊由中藥材粉碎后制成，由于含有的纖維素含量多，而能減緩糖的吸收，加入附子和肉桂二藥材后使得藥物降糖效果更為顯著，是該發(fā)明的重點所在。中國發(fā)明專利申請99126988.8公開了一種專冶糖尿病降糖膠囊，以生地、天花粉、玄參、知母、黃柏、黃連、鹿茸、邊桂、山藥、石膏和干藕粉等藥材為主要組分，治療由糖尿病引起的上消、中消、下消和多食多尿等病癥。中國發(fā)明專利申請02107203.5公開了一種治療2型糖尿病的復方中藥制劑，以葛根、天花粉、蒼術、玄參、生黃芪、山藥、生石膏、肉桂、熟附片、鬼箭羽、地鱉蟲、桑寄生、蠶繭、炮山甲、水蛭、血竭、菝葜、知母、絞股藍、生地、麥冬、赤芍、地骨皮、制大黃等天然中藥材為原料，通過粉碎、煎煮、烘干、滅菌等工序制成，用于II型糖尿病及其并發(fā)癥的治療。中國發(fā)明專利申請200310110332.7公開了一種治療糖尿病的藥物參芪山藥膏及其制備方法，由"君"藥山藥和人參；"臣"藥海龍、海馬、阿魏、乳香、沒藥、紅花、肉桂、珍珠、人工麝香、天花粉、黃柏、黃芪、芒果葉和番石榴葉；以及"使"藥冰片等藥材共同配伍而成。將山藥、人參、天花粉、黃柏、黃芪、芒果葉和番石榴葉等藥材的碎段混勻，浸泡于麻油中，三天后經(jīng)加熱，過濾，在濾油中加入紅丹，再攪勻，收膏；將藥膏加入冷水中，不斷攪拌，擠壓換水；取藥膏用文火熔化，加入珍珠層粉、冰片粉、人工麝香、海龍、海馬、阿魏、乳香、沒藥、紅花和肉桂等藥材的細粉，攪勻，分攤在無紡布上制成膏藥。所制得的藥膏益氣養(yǎng)陰、生津止渴，具有治療II型糖尿病的功效?，F(xiàn)有的各種中成藥對糖尿病雖有一定的治療作用，但目前臨床使用的單一組分制劑或醫(yī)生自擬的處方湯藥，缺乏藥效顯著、有效成分和作用機理明確，且質(zhì)量可控和劑型方便的現(xiàn)代中藥。中國發(fā)明專利ZL200510110763.2公開了一種治療糖尿病的組合物，由知母、黃柏和肉桂提取物組成，雖然克服了現(xiàn)有技術的諸多缺陷，但是需要用三種藥材，生產(chǎn)成本較高，工藝路線較復雜。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于提供一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，包括知母皂苷B-II、芒果苷和小檗堿，還包括知母皂苷A-111或/和B-111，能有效治療糖尿病，對糖尿病的發(fā)生和發(fā)展也有預防作用。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，包括知母皂苷B-II提取物、芒果苷提取物和小檗堿提取物，還包括知母皂苷A-111提取物或/和B-I11提取物，能有效治療糖尿病，對糖尿病的發(fā)生和發(fā)展也有預防作用。本發(fā)明的又一個目的在于提供一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，由知母提取物和黃柏提取物組成，能有效治療糖尿病，還對糖尿病的發(fā)生和發(fā)展有預防作用。本發(fā)明的再一個目的在于提供一種預防和治療糖尿病的藥物組合物的制劑，在知母提取物、黃柏提取物及其藥學上可接受的鹽或其混合物中加入各種藥物輔料制成的制劑。知母皂苷A-III，化學名稱薩爾薩皂苷元-3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-|3-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結構式如式I所示。式I知母皂苷A-III可以通過化學合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的方式。將知母置于索氏提取器中，加入乙醇，并回流濃縮，然后濃縮液萃取3次并脫脂，再經(jīng)萃取得到知母總皂苷，其中就含有知母皂苷A-III(鄭州大學學報，2008，43，167-168)。知母藥材經(jīng)乙醇回流、減壓回收、溶解再萃取和分離等步驟就能得到知母皂苷A-III純化合物(中國發(fā)明專利ZL02160151.8)。知母皂苷B-II，化學名稱25(S)-26-0-P-D-吡喃葡萄糖基_5P-呋甾-22-羥基-313，26-二醇-3-0-13-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-P-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結構式如式II所示。OH知母皂苷B-II可以通過化學合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的方式。根據(jù)中國發(fā)明專利申請200810032324.8公開的各種提取方法，得到的提取物中的知母皂苷B-II含量30%_70%，也可以得到純度高于90%的知母皂苷8-11。知母藥材采用溶劑提取法、樹脂吸附法、聚酰胺層析法、反相層析法、S印hadexLH-20層析法等分離方法，結合減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等方法制得的知母皂苷B-I1純度高于90%(中國發(fā)明專利申請200510059467.4)。知母皂苷B-III，化學名稱為25(S)-26-0-P_D_吡喃葡萄糖基_5P-呋甾-20(22)-烯-313，26-二醇-3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-P-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結構式如式III所示。式m<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>知母皂苷B-III可以通過化學合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的方式。根據(jù)中國發(fā)明專利申請200810032324.8公開的各種提取方法，得到含有知母皂苷B-III的提取物。知母藥材先經(jīng)C6-C30的脂肪烴滲漉，再使用低級醇回流并萃取后，經(jīng)層析分離和重結晶后制得純度大于90^的知母皂苷B-III(中國發(fā)明專利申請200710040730.4)。芒果苷，又稱知母寧，化學名稱為2-13-D-吡喃葡萄糖基-1，3，6，7-四羥基P山酮，是一種黃酮類化合物，其結構式如式IV所示。OH芒果苷略溶于甲醇、乙醇、水、可溶于熱稀甲醇、熱稀乙醇，不溶于非極性溶劑?？梢酝ㄟ^化學方法直接合成制得，一般從含有芒果苷的植物或中藥材(如知母)中提取。這類藥材經(jīng)溶媒，如水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇或純的水溶液，高溫提取、濃縮后在分離等步驟得到純度大于60%的芒果苷(中國發(fā)明專利申請200710066354.6)。這類藥材依次經(jīng)醇提、脫色、去溶劑、稀醇溶解和去溶劑等步驟得到的提取物中芒果苷純度大于90%(中國發(fā)明專利申請200610079234.5)。這些含有芒果苷的藥材如但不僅限于，芒果葉、扁桃葉、知母和石韋等。小檗堿，化學名稱為5，6-二氫-9，10-二甲氧基苯并-1，3-二苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5，6a-喹嗪，是一種異喹啉生物堿，也是一種季銨生物堿，存在于小檗科(Berberidaceae)等4科10屬的植物中，其結構式如式V所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>小檗堿的熔點i45t:，能溶于水和乙醇，在冷乙醇中的溶解度為i:ioo，易溶于熱水或熱乙醇；難溶于苯、乙醚和氯仿。其從乙醚中可析出黃色針狀晶體；從水或稀乙醇中析出的晶體帶有5.5分子結晶水；若從氯仿、丙酮或苯中結晶，也帶有相應的結晶溶劑分子。小檗堿主要以氫氧化季銨的形式存在，在季銨式小檗堿的水溶液中加入過量的堿則生成醇式(叔胺)和醛式(仲胺)小檗堿的沉淀，由此可得到季銨式、醛式和醇式等三種不同形式的小檗堿，其中以季銨式最穩(wěn)定。小檗堿的鹽類在水中的溶解度都比較小，如其鹽酸鹽溶解度為i:500，其硫酸鹽溶解度為i:30。小檗堿及其鹽可以通過化學合成的方式獲得。如以胡椒乙胺和3，4-二甲氧基苯乙酸為起始原料，通過縮合、還原和氧化等多個步驟得到小檗堿(Ber.，1912,44，2980-2985)。又如以兒茶酚為起始原料，經(jīng)成環(huán)反應得胡椒環(huán)，經(jīng)氯氰化反應得胡椒乙腈，再經(jīng)縮合、催化和氫化步驟得縮合物鹽酸鹽，又經(jīng)環(huán)合反應得小檗堿粗品，經(jīng)堿化和成鹽可制得小檗堿鹽酸鹽、小檗堿硫酸鹽或小檗堿鞣酸鹽(中國發(fā)明專利ZL01106089.1)。還有如以2，3-二甲氧基苯甲醇和胡椒乙胺為原料，經(jīng)過烷基化、氯甲基化、氰化、醇解、縮合和環(huán)合六步制得鹽酸小檗堿(中國發(fā)明專利申請200710020332.6)。本領域技術人員根據(jù)現(xiàn)有技術能夠從含有小檗堿的的天然植物或藥材中提取得到純度大于90%的小檗堿，經(jīng)過條件的優(yōu)化能進一步得到純度大于95%的小檗堿。小檗堿及其鹽還可以從天然植物/中藥材(如三顆針、黃連和黃柏)提取的提取物中獲得。酸水法是目前提取小檗堿常用的方法，從三顆針中提取小檗堿，常用多倍量的0.3%硫酸水溶液浸泡24h，過濾后濾液用石灰乳調(diào)pH值至12，經(jīng)過濾的濾液用鹽酸調(diào)pH值到2-3，再加入6%左右的精制食鹽，使食鹽完全溶解，放置過夜，抽濾得鹽酸小檗堿(中藥化學，山東科學技術出版社，1997)。或用0.5X的硫酸水溶液冷浸提取，提取液pH值調(diào)至7，濾液濃縮后pH值再調(diào)至2-3，再加入6%左右的食鹽并過濾，將沉淀溶于熱水，將pH調(diào)至8.5-9后過濾，濾液再調(diào)pH值到2-3，放冷過濾得鹽酸小檗堿(天然藥物化學，人民衛(wèi)生出版社，2003)。在小檗堿提取過程中，提取工藝的條件，如pH值、酸用量、水用量和溫度等，對提高產(chǎn)物的提取率有一定影響(天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1998，10，62;廣東藥學院學報，1996，12,261;懷化醫(yī)專學報，2004，3，26;海峽藥學，1999，11，100;時珍國醫(yī)國藥，2001，12,982)。廖自基等人采用硫酸液浸泡，加入氯化鈉、氯化鋅沉降濃集后，再用石灰、強堿除去堿性雜質(zhì)，用硫化銨除鋅及膠體雜質(zhì)的方法從"十大功勞"中提取黃連素，制得的成品小檗堿含量98.1%，提取率65-69%(中國發(fā)明專利申請91105606.8)。乙醇法是另一種小檗堿常用的提取方法，一般包括投料一提取一蒸發(fā)一溶解一洗滌一精制一成品等多個步驟。將中藥材(如黃連或黃柏)用熱乙醇浸泡后，將乙醇濃縮液經(jīng)過濾、加酸、沉淀、放置和過濾等步驟制得鹽酸小檗堿?；蛴谝掖贾谢亓?0min后靜置，反復多次后合并濾液，減壓除去乙醇，加酸液后過濾冷卻制得鹽酸小檗堿。黃連用9倍體積50X乙醇，6(TC提取兩次，能使小檗堿提取率為91%以上，平均回收率為97.38%(山東農(nóng)業(yè)生物學報，2004，6，502-505)。當提取工藝采用6倍量80%乙醇，乙醇中硫酸加入量為0.25%，提取時間為1.5h/次，提取次數(shù)為3次時，制備所得鹽酸小檗堿精制品含量在90%以上(中國藥房，2004，15，18)。小檗堿的堿提取法中，最常用的是石灰乳法，如黃柏粗粉中加入石灰乳攪拌均勻，常法裝滲漉桶，加入飽和石灰水浸泡6h后滲漉(pH值在10以上)，收集滲漉液，加入滲漉體積7%(質(zhì)量濃度)的固體食鹽，攪拌后放置過夜，過濾，沉淀，用熱水溶解再過濾。濾液加酸調(diào)PH值至2，放置過夜，過濾，沉淀用蒸餾水洗至中性，抽干后于8(TC下干燥，即得鹽酸小檗堿。在比較幾種提取方法如酸水法、石灰乳法和乙醇提取法等，并加以改進后，證明石灰乳法提取效率優(yōu)于其他方法(基層中藥雜志，2000，14，27-29)。當單獨使用超聲波(海峽藥學，1999，11，100-101;中醫(yī)藥學報，2004，32，29-30;中成藥，2004，26，186-189;時珍國醫(yī)國藥，2005，16，374-375)、微波(數(shù)理醫(yī)藥學雜志，2002,15,88-89;化工進展，2003，22，1338-1341;光譜實驗室，2006，23，526-529)和酶法(中草藥，1994，25，123;應用化工，2006，35，373-374)等方法提取小檗堿，或與酸水法、堿提法和醇提法等方法相結合提取小檗堿時，能大大縮短提取的時間并顯著提高小檗堿的提取率。本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，至少含有知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分，兩種組分總量占組合物的重量百分比為5%-95%。在組合物中增加芒果苷，知母皂苷A-III和知母皂苷B-III中一種或幾種組分，可以提高預防和治療效果。必要的，本發(fā)明組合物中還包括各種與所含化合物相適應的藥物輔料，以制成制劑，如但不僅限于，水溶液注射齊U、粉針齊U、丸齊U、散劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜齊U、凝膠齊U、顆粒齊U、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑和控釋劑等。這些藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)使用的，如但不僅限于，等滲齊U、緩沖液、矯味齊U、賦形齊U、填充齊IJ、粘合劑、崩解劑和潤滑劑等；也可以是為了與所述物質(zhì)相適應而選擇使用的，如乳化劑、增溶劑、抑菌劑、止痛劑和抗氧劑等，這類輔料能有效提高組合物所含化合物的穩(wěn)定性和溶解性或改變化合物的釋放速率和吸收速率等，如使用環(huán)糊精增加芒果苷的溶解性(中國發(fā)明專利申請200710088853.5)，從而改善各種化合物在生物體內(nèi)的代謝，進而增強組合物的給藥效果。此外，還可以為實現(xiàn)特定的給藥目的或方式，如緩釋給藥、控釋給藥和脈沖給藥等，而使用的輔料，如但不僅限于，明膠、白蛋白、殼聚糖、聚醚和聚酯類高分子材料，如但不僅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。在水溶液注射劑中，除知母皂苷A-111、B-II、B-111、芒果苷和小檗堿五種組分外，輔料一般包括等滲劑和緩沖液，以及必要的乳化劑(如Tweeen-80、Pluronic和Poloxamer等)、增溶劑和抑菌劑等。此外，還包括含有藥學上可接受的其它藥用輔料，如抗氧劑、PH調(diào)節(jié)劑和止痛劑等。口服液體制劑，除五種組分外，輔料一般包括溶劑，以及必要的矯味齊U、抑菌齊U、乳化劑和著色劑等。一種本發(fā)明所述預防和治療糖尿病的藥物組合物，含有知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿，還包括矯味劑(如蔗糖)和香精，以及必要的抑菌劑、乳化劑、著色劑和防腐劑等制成口服液。片劑，除五種組分外，輔料一般包括填充劑(如淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可壓性淀粉、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣和甘露醇等)、粘合劑(如乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、明膠溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解劑(如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)和潤滑劑(如硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇4，000、聚乙二醇6，000和月桂醇硫酸鎂等)等。一種本發(fā)明所述預防和治療糖尿病的藥物組合物，含有知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿，還包括填充劑(如微晶纖維素、乳糖)和潤滑劑(如硬脂酸鎂)。所得的片劑硬度好、崩解快、藥物溶出快、在水中的溶解度大和生物利用度高。乳劑，除五種組分外，輔料一般為水、油(如脂肪酸)、乳化劑，以及必要的防腐劑和矯味劑等。顆粒劑，除五種組分外，其它輔料與片劑類似，但造粒過程不同。根據(jù)需要，將制得的顆粒劑與助流劑混合后裝入膠囊即得膠囊劑?！N本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，主要包含知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分，兩種組分總量占組合物的重量百分比為5%-95%。根據(jù)需要可以增加兩種組分總量在組合物中的比例，如為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病方面更好的效果，所述組合物中，小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%;知母皂苷8-11占組合物的重量百分比為5%-80%。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，主要包含知母皂苷B-II、芒果苷和小檗堿三種組分，三種組分總量占組合物的重量百分比為5%-95%。根據(jù)需要可以增加三種組分總量在組合物中的比例，如為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病方面更好的效果，三種組分總量占組合物的重量百分比通常選擇20%-95%，優(yōu)先選擇50-95%。優(yōu)選的，所述組合物中，小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%;知母皂苷8-11占組合物的重量百分比為5%-80%;芒果苷占組合物的重量百分比為1%-30%。在預防和治療糖尿病方面，還可以在組合中同時或單獨添加重量百分比為小于10^的知母皂苷A-III和重量百分比小于10^的知母皂苷B-III兩種組分。所得的本發(fā)明組合物能使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，含有知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分，五種組分占組合物的重量百分比為5%-95%。根據(jù)需要可以增加五種組分在組合物中的比例，如為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病方面更好的效果，五種組分總量占組合物的重量百分比通常選擇20%_95%，優(yōu)先選擇50-95%。本發(fā)明組合物還可以使用含有上述五種組分的提取物，根據(jù)各個組分的重量百分比含量進行配伍后獲得。知母皂苷A-III提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷A-III含量大于30X(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷A-III的含量，如增強預防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷A-III提取物中知母皂苷A-III含量一般大于50%(w/V)，優(yōu)先選擇大于90%(w/w)。知母皂苷B-II提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷B-II含量大于30X(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷B-II的含量，如增強預防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷B-II提取物中知母皂苷B-II含量一般大于50%(w/V)，優(yōu)先選擇大于90%(w/w)。知母皂苷B-III提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷B-III含量大于30X(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷B-III的含量，如增強預防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷B-III提取物中知母皂苷B-III含量一般大于50X(w/V)，優(yōu)先選擇大于90X(w/w)。知母皂苷A-III、B-II和B-III既可以從植物或中藥材的總知母皂苷中分別提取，也可以從植物或中藥材的總知母皂苷中共同提取，還可以植物或中藥材的總知母皂苷中提取知母皂苷A-III、B-I1和B-III之一種或兩種，再與其它相應組分的提取物混合而成。本領域技術人員單獨或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術就能從含有知母皂苷的植物或中藥材的總皂苷部位中提取得到能實現(xiàn)預防和治療糖尿病的效果所需的各種知母皂苷含量的知母皂苷A-III提取物、知母皂苷B-I1提取物、知母皂苷B-I11提取物以及知母總皂苷提取物。知母皂苷A-III、B-II和B-III是從植物或中藥材的總知母皂苷中共同提取的，知母提取物中知母皂苷A-111、B-II和B-111三個組分的總含量大于50%(w/w)，三個組分的總含量優(yōu)先選擇大于90%(w/w)以增強預防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等。芒果苷存在于漆樹科植物芒果(MangiferaindicaL.)的果實、葉和樹皮，以及知母的根莖、地上部分，鳶尾科植物射干(Belamcandachinensis(L.)DC.)的花和葉等植物中。芒果苷提取物從植物或中藥材的總黃酮中提取獲得，提取物中芒果苷含量大于60%(w/V)，優(yōu)選大于90X(w/w)。本領域技術人員單獨或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術就能從含有芒果苷的植物或中藥材的總黃酮部位中提取得到能實現(xiàn)預防和治療糖尿病的效果所需的各種芒果苷含量的芒果苷提取物。小檗堿提取物從植物或中藥材的總生物堿中提取獲得，提取物中小檗堿含量大于5%(w/w)。根據(jù)需要可以增加小檗堿的含量，如增強預防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，小檗堿提取物中小檗堿含量一般大于50%(w/w)，優(yōu)先選擇大于90%(w/w)?？捎糜谔崛⌒￠迚A的中藥材可以為黃柏及其相應植物的部位。此外，還可以選擇黃連和三顆針。黃連為毛茛科植物黃連(CoptischinensisFranch.)、三角葉黃連(CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao)或云連(CoptisteetaWall.)的根莖。根莖中小檗堿含量5-8%，并含少量的黃連堿、甲基黃連堿、巴馬亭、藥根堿和木蘭花堿等；須根含小檗堿可達5%;黃連葉含小檗堿1.4%-2.9%。因此，黃連是另一種提取小檗堿的重要來源。本領域技術人員單獨或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術就能從含有小檗堿的植物或中藥材的總生物堿部位中提取得到能實現(xiàn)預防和治療糖尿病的效果所需的各種小檗堿含量的小檗堿提取物。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，主要包括小檗堿提取物和知母皂苷B-II提取物。兩種提取物中，小檗堿和知母皂苷B-II的總量占組合物的重量百分比為5%-95%。優(yōu)選的，小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%;知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5%-80%。必要的，組合物中還包括各種藥用輔料。為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病更好的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等目的，小檗堿和知母皂苷B-II兩種組分總量占組合物的重量百分比進一步選擇20%_95%，優(yōu)先選擇50-95%。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，主要包括小檗堿提取物、知母皂苷B-II提取物和芒果苷提取物組成，三種提取物中，小檗堿、知母皂苷B-II和芒果苷總量占組合物的重量百分比為5%-95%。優(yōu)選的，小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%;知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5%-80%;芒果苷占組合物的重量百分比為1%_30%。必要的，組合物中還包括各種藥用輔料。為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病更好的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等目的，小檗堿、知母皂苷B-II和芒果苷三種組分總量占組合物的重量百分比進一步選擇20%_95%，優(yōu)先選擇50-95%。在預防和治療糖尿病方面，還可以在組合中同時或單獨添加知母皂苷A-III提取物和知母皂苷B-III提取物，提取物中所含的知母皂苷A-III占組合物的重量百分比小于10X，所含的知母皂苷B-ni占組合物的重量百分比小于10%。所得的本發(fā)明組合物能使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，主要包括知母皂苷A-111提取物、B-II提取物、B-111提取物、芒果苷提取物和小檗堿提取物組成，五種提取物中，知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿占組合物的重量百分比為5%-95%。優(yōu)選的，知母皂苷A-III、B-II和B-III總量占組合物的重量百分比為5%-80%;芒果苷占組合物的重量百分比為1%-30%;小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。必要的，組合物中還包括各種藥用輔料。為了實現(xiàn)在預防和治療糖尿病更好的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等目的，知母皂苷A-III、B-n、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分占組合物的重量百分比進一步選擇20%_95%，優(yōu)先選擇50-95%。另一種本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，由知母提取物和黃柏提取物組成，知母提取物占組合物的重量百分比為1%_90%，黃柏提取物占組合物的重量百分比為1%-90%;組合物中含有知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分，還可以添加知母皂苷A-III、B-III和芒果苷之一種或幾種組分，所述各種組分總量占組合物的重量百分比為5%-95%。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物，知母皂苷A-III、B-I1和B-III總量占組合物的重量百分比為5%_80%，知母皂苷A-III和B-III含量可為零；芒果苷占組合物的重量百分比為1%-30%;小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。本領域技術人員可以預見，將含有各種純度的知母皂苷A-III、B-I1和B-III的總皂苷提取物、含有各種純度芒果苷的總黃酮提取物和含有各種純度小檗堿的總生物堿提取物互相混合可以得到各種比例關系的組分相組合以實現(xiàn)預防和治療糖尿病的目的。本發(fā)明所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物還可以是從一定重量份的相應植物/中藥材中直接提取后制得。另一種本發(fā)明預防和治療糖尿病的藥物組合物，由知母提取物和黃柏提取物組成。其中，知母提取物占組合物的重量百分比為1%_90%，黃柏提取物占組合物的重量百分比為1%_90%。組合物中，含有的知母皂苷B-II和小檗堿三種組分總量為5%-90%。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物，知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5%-80%;小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。另一種本發(fā)明預防和治療糖尿病的藥物組合物，由知母提取物和黃柏提取物組成。其中，知母提取物占組合物的重量百分比為1%_90%，黃柏提取物占組合物的重量百分比為1%_90%。組合物中，含有的知母皂苷B-II、芒果苷和小檗堿三種組分總量為5%-90%。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物，知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5%-80%;芒果苷占組合物的重量百分比為1%-30%;小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。在預防和治療糖尿病方面，在增加知母皂苷A-III和B-III兩種組分后，所得的本發(fā)明組合物能使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定。另一種本發(fā)明預防和治療糖尿病的藥物組合物，由知母提取物和黃柏提取物組成。其中，知母提取物占組合物的重量百分比為1%_90%，黃柏提取物占組合物的重量百分比為1%-90%。組合物中，含有的知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分總量為5%-90%。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物，知母皂苷A-111、B-II和B-111總量占組合物的重量百分比為5%-80%，知母皂苷八-111和B-III含量可為零；芒果苷占組合物的重量百分比為1%-30%;小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10%-95%(v/v)的乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20%-95%(v/v)乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復萃取后得知母總皂苷提取物，再將萃取后水溶液(母液)的PH值調(diào)至中性，再以水飽和正丁醇反復萃取后得知母總黃酮提取物。優(yōu)先選擇pH9-10以提取知母總皂苷，所得知母總皂苷提取物中，知母皂苷B-II的含量為10%-90%(w/w)，通常含有20X-50%(w/w)，通過后續(xù)分離可以大于90X(w/w)。知母總黃酮提取物中，芒果苷的含量為5%-90%(w/V)，通常含有5%-30%(w/w)，通過后續(xù)分離可以大于90X(w/w)。黃柏提取物由1重量份的黃柏先用30%-90%(v/v)的乙醇提取后，將提取液濃縮并去乙醇，于大孔樹脂上樣，再用65%_95%(v/v)的乙醇洗脫并收集，濃縮后即得總生物堿提取物，其中所含小檗堿^5%(w/w)。經(jīng)離子交換、硅膠、S印hadexLH-20和ODS反相色譜之一或幾種方法能得到小檗堿含量>50%(w/w)的總生物堿提取物。純化所用的大孔樹脂，優(yōu)先選擇離子交換與吸附樹脂為填料，用含有H+、Na+、K+和Ca+離子的Cl-C5醇(如乙醇)及其溶液洗脫，洗脫液除醇濃縮后即得。將知母和黃柏混合后共同提取得到本發(fā)明組合物，將1重量份的黃柏和0.5-9重量份的知母混合，用50%_95%(v/v)乙醇提取，提取液除醇后于大孔樹脂上樣，再用65%-80%(v/v)乙醇洗脫，所得洗脫液經(jīng)除醇、濃縮和干燥后即為本發(fā)明組合物，含有的知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分的總量為5%-90%(w/w)。經(jīng)離子交換樹脂、硅膠、S印hadexLH-20和ODS反相色譜之一或幾種方法可以將知母皂苷A-III和B-III除去。必要時，本發(fā)明各個組合物中還包括將所述組合物制成各種制劑所需的藥用輔料。根據(jù)制成各種制劑的實際需要，如各種組分與輔料的配伍關系、組分之間的配伍關系，以及改善藥代動力學和藥效學等，對組合物中各個組分的配伍關系進行個例適當調(diào)整。本發(fā)明技術方案實現(xiàn)的有益效果本發(fā)明提供的預防和治療糖尿病的藥物組合物，可顯著改善機體的葡萄糖耐受水平，提高機體對葡萄糖的處置能力，抑制a-葡萄糖苷酶，降低隨機血糖和空腹血糖。不同的組分組合都有明顯的降糖效果，可以適應不同的需要。如組分少的組合可直接由單體成分組合，這時每種組分(成分)含量相對較高；組分多的組合既可由單體成分組合，也可由相應的藥材提取物組合，用藥材提取物組合時，各組分(成分)含量相對較低，但藥材綜合利用度高。此外，在小檗堿和知母皂苷B-II兩種組分的基礎上，增加芒果苷、知母皂苷A-III和知母皂苷B-III之一種或幾種組分后，所得組合物的各個單體之間互相協(xié)同，從而在預防和治療糖尿病方面取得更好的綜合效果，如除降低血糖外，還可改善患者的綜合機能等。本發(fā)明不同的組分組合，可根據(jù)預防或治療的不同階段和不同目的需要，綜合考慮預防和治療效果、性價比、成本和藥材利用等因素取舍。與發(fā)明專利ZL200510110763.2的藥物組合物相比，本發(fā)明所述預防和治療糖尿病藥物組合物，藥味數(shù)雖少但藥效顯著，有效成分明確且含量高，質(zhì)量容易控制，制備工藝易于產(chǎn)業(yè)化，如制成藥物制劑，成本更低，可減輕病人經(jīng)濟負擔。本發(fā)明所涉及的術語與其一般概念相同。所述的"預防"是指在未被臨床標準認定的疾病前，各種用于防止疾病發(fā)生或發(fā)展的手段或措施，包括醫(yī)學、物理或化學的方法，以阻止和降低疾病各種癥狀的發(fā)生或發(fā)展。所述的"預防糖尿病"是指將本發(fā)明組合物用于還未符合"糖尿病"臨床指標的，隨著時間的延續(xù)將慢慢發(fā)展成為臨床上定義為"糖尿病"的潛在患者，從而改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性。這類潛在的患者通?；加?代謝綜合癥(MetabolicSyndrome)"(Annnu.Rev.Nutri.，2005,25，391-406;A匪u.Rev.Med.，2005，56，45_62;Nat.Rev.Drug.Disc.，2006，5，295-309;Nat.Rev.Endocri.，2006，2，335-348)，如肥胖、胰島素抵制、葡萄糖不耐受、高血壓、動脈硬化證(antherosclerosis)、血脂異常癥(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同時偏低)等。所述"治療"是指為了阻止和降低疾病的發(fā)生或發(fā)展，使疾病病程的發(fā)展或加重得以抑制、遏制、減輕、改善、減緩、停止、延遲或反轉，所描述的保持和/或用藥時的疾病的、紊亂的或病理學狀態(tài)的各種指標包括減輕或減少癥狀或并發(fā)癥，或治愈或消除疾病、紊亂或狀況。所述的"治療糖尿病"是指將本發(fā)明組合物用于臨床診斷為"糖尿病"的患者，改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性。進而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于對葡萄糖代謝的能力得以提高，從而減緩了因長期高血糖而產(chǎn)生的各種心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變的發(fā)生和發(fā)展。所述的"預防和治療糖尿病更好的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)，知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分占組合物的重量百分比進一步選擇20%_95%，優(yōu)先選擇50-95%"是指在有效治療劑量的前提下，將本發(fā)明組合物基于不同的患者的需要而使用不同的用藥量，如本領域技術人員所熟知的實驗用小鼠、實驗用大鼠和人之間的給藥倍數(shù)關系；實驗用兔和人之間的給藥倍數(shù)關系；以及實驗用狗和人之間的給藥倍數(shù)關系等。本發(fā)明組合物在五種組分含量較低的情況下，如5%_15%(w/w)，一天多次(3次以上)或長期給藥后，患者仍能表現(xiàn)出對隨機血糖和空腹血糖顯著下降，機體對葡萄糖的代謝能力顯著提高。根據(jù)患者重量換算關系而確定給藥量，當給藥對象從實驗動物轉換到人時，本組合物的實際用量將顯著增加，因此需要將組合物中的五種組分含量略微增加減少服藥的數(shù)量，如20-50%(w/w)亦或更高?；蛞驗榫忈尅⒖蒯尰蛎}沖給藥的需要，單劑量藥物組合物中，需要將本發(fā)明所含有的五種組合物含量提高，如20-50%(w/w)亦或更高。所述的"有效治療劑量"指能減緩各種病理學意義上的癥狀而使用本發(fā)明組合物的量。本發(fā)明組合物的特定劑量需要根據(jù)具體的情況加以確定，如給藥的方式、給藥途徑、給藥時患者的狀態(tài)以及在治療時的病理學狀況等。所述的"患者"指人、野生動物和家畜(Livestock)。野生動物為自然狀態(tài)下未經(jīng)人工馴化的動物。家畜是為了提供食物來源而人工飼養(yǎng)的動物，如狗、鼠、倉鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予治療的"患者"優(yōu)先選擇哺乳動物，尤其是人。所述的"C1-C5醇"指直連或支鏈的飽和一元醇，如甲醇、、乙醇、正丙醇、異丙醇或正丁醇等；或直連或支鏈的不飽和一元醇，如丙烯醇；或直連或支鏈的飽和多元醇，如乙二醇、l，3-丙二醇或丙三醇等。其中，字母C表示碳原子，其后數(shù)字為正整數(shù)，如1、2、3、4或5等，表示基團所含的碳原子個數(shù)。圖1表示知母黃柏不同組分組合物對a-葡萄糖苷酶的抑制活性。圖2表示知母黃柏對GK糖尿病大鼠隨機血糖的影B向，圖中，與正常組比##P<0.01;與模型組比:*P<0.05，**P<0.01;圖3表示知母黃柏對GK糖尿病大鼠空腹血糖的影B向，圖中，與正常組比##P<0.01;與模型組比:*P<0.05，**P<0.01;圖4表示知母黃柏對GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影B向，圖中，與正常組比##P<0.01;與模型組比:*P<0.05，**P<0.01。具體實施例方式以下結合附圖詳細描述本發(fā)明的技術方案。本發(fā)明實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的權利要求范圍中。本發(fā)明所用的試劑若未明確指明，則均購自于西格瑪_奧德里奇(Sigma-Aldrich)。實施例1知母皂苷A-111、B-II和B-111含量測定色譜柱:DiamonsilC18(200mmX4.6mm，5iim)。柱溫:25。C，流速1.0ml/min。ELSD檢測器，漂移管溫度ll(TC，霧化氣體流速2.6SPLM。進樣量20iU。流動相A:乙腈；流動相B:0.5%甲酸水溶液；以30%流動相B平衡，30分鐘線性梯度洗脫，90%流動相B終止。分別精密稱取知母皂苷A-III、B-I1和B-I11標準品各25.0mg置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再配置成l.Omg/ml知母皂苷B-II、B-I11對照品溶液和1.Omg/ml知母皂苷A-III對照品溶液，備用。精密稱取知母總皂苷提取物25mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當濃度，則為知母總皂苷樣品溶液，備用。精密稱取知母、黃柏提取物組合物50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，再稀釋至適當濃度，搖勻，則為樣品溶液，備用。分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標準曲線，按相應的計算方法計算樣品中三個皂苷的含量。為了確定知母總皂苷提取物的結構，可以收集相應洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結構。實施例2芒果苷含量測定色譜柱迪馬公司DiamonsilKC18柱(250mmX4.6mm，5iim);柱溫為20°C。流動相:乙月青-水(15:85，v/v)，(磷酸調(diào)pH=3.0);流速:lml/min;進樣量20iiL。檢測波長254nm。精密稱取芒果苷對照品6.3mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配置成0.252mg/ml芒果苷對照品溶液，備用。精密稱取知母總黃酮提取物10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當濃度，則為知母總黃酮樣品溶液，備用。精密稱取知母、黃柏提取物組合物10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當濃度，則為組合物樣品溶液，備用。分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標準曲線，按相應的計算方法計算樣品中芒果苷的含量。為了確定芒果苷提取物的結構，可以收集相應洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結構。實施例3小檗堿含量測定高效液相色譜儀Agilent1100系統(tǒng)；杭州英譜色譜工作站。色譜柱:DiamonsilTMC18(250mmX4.6mm，5iim);柱溫為20°C;進樣量20ii1。流動相水-乙腈-冰醋酸-三乙胺(67:33:0.3:0.8，v/v)，檢測波長345nm;流速lml/min。精密稱取鹽酸小檗堿10.0mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，配置成400iig/ml儲備液，精密吸取小檗堿儲備液O.5ml，加甲醇溶解并定容至10ml，制成lml含小檗堿20yg的對照品溶液。精密稱取黃柏提取物10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當濃度，則為黃柏提取物樣品溶液，備用。精密稱取知母、黃柏提取物組合物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，再稀釋至適當濃度，搖勻，則為組合物樣品溶液，備用。分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標準曲線，按相應的計算方法計算樣品中小檗堿的含量。為了確定小檗堿提取物的結構，可以收集相應洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結構。實施例4知母提取物的制備100公斤知母藥材，經(jīng)粉碎后，投入提取罐中，在80-9(TC條件下依次用70%(v/v)乙醇800升加熱提取3次，每次提取時間為90分鐘，合并三次提取液，濃縮至80升，過濾。將所得濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至160升，緩緩通過有150升D皿型大孔樹脂的吸附柱，然后用200升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)，再用400升30%(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮除醇后再濃縮至50升，以NaOH調(diào)節(jié)pH至5，以水飽和的正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物l;再用400升90%(v/v)乙醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液，濃縮除醇，加水至50升，以水飽和正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物2。合并提取物1與提取物2混合均勻，即為知母提取物。采用正、反相硅膠、S印hadex等手段分離并經(jīng)核磁鑒定為知母皂苷A-III、B-II和B-III，具體數(shù)據(jù)如下"C-NMR數(shù)據(jù)(lOOMHz，inC5D5N，ppm)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>143.8(C_7)，108.2(C_8)，111.6(C_8a)，101.4(C_8b);Glu:81.5(C_1)，73.2(C_2)，70.7(C-3)，70.4(C-4)，79.1(C_5)，61.6(C_6)。經(jīng)HPLC檢測，知母提取物中知母皂苷A-III含量為4%(w/w)，B_II含量為40%(w/w)，知母皂苷B-III含量為8X(w/w)，芒果苷含量為18%(w/w)。實施例5知母提取物的制備100公斤知母藥材，粉碎，投入提取罐中，在80-9(TC條件下依次用40^(v/v)乙醇1000升加熱提取2次，每次提取時間為120分鐘，合并兩次提取液，濃縮至120升，過濾。將所得濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至200升，緩緩通過有200升ZTC-1型大孔樹脂(天津正天成澄清技術有限公司生產(chǎn))的吸附柱，用400升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)；再用600升70%(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮除醇后再濃縮至50升，以NaOH調(diào)節(jié)pH至9_10，以水飽和正丁醇50升萃取2次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物1。母液用HCl調(diào)pH值至中性，以水飽和正丁醇50升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，為提取物2。合并提取物1與提取物2混合均勻，即為知母提取物。經(jīng)HPLC檢測，知母提取物中知母皂苷A-III含量為5X(w/w)，知母皂苷B-II含量為45X(w/w)，知母皂苷B-III含量為10%(w/V)，芒果苷含量為15%。實施例6黃柏提取物制備100公斤粉碎后的黃柏藥材，以80%(v/v)乙醇600升在80-9(TC下提取1.5小時，提取3次，合并提取液，離心，上清液即為上柱樣品液。將樣品液通入裝有50Kg732*型強酸型離子樹脂(上海國藥集團生產(chǎn))的色譜柱中，依次用蒸餾水和500升含0.2MNaOH的60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，用HC1調(diào)節(jié)pH值至3，減壓濃縮去乙醇，加水定容至200升，加入內(nèi)裝已處理的AB-8大孔吸附樹脂100升的吸附柱上，水洗除雜，400升70%(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干。將所得固體粉碎得黃色粉末，即為本發(fā)明的黃柏提取物。采用正、反相硅膠、S印hadex等手段分離并經(jīng)核磁鑒定為鹽酸小檗堿，具體數(shù)據(jù)如下13C-NMR{DMS0-d6，100MHz，ppm):150，5，149.9，147.8，145.6，143.8，137.6，133.2，130.8，126.9，123.7，121.5，120.6，120.4，108.6，105.6，102.2,62.1,57.2,55.3,26.5。經(jīng)HPLC檢測，黃柏提取物中小檗堿含量為60%(w/w)。實施例7黃柏提取物制備ioo公斤粉碎后的黃柏藥材，以用量5:i(溶劑體積藥材重量)60%(v/v)的乙醇浸潤24小時后滲濾提取，收集20倍量滲濾液，即為提取液。提取液減壓濃縮并去乙醇，濃縮液離心，用離心所得的上清液上柱。將樣品液通入裝有D^樹脂(西安電力樹脂廠生產(chǎn))的色譜柱中，依次用蒸餾水、15倍量柱體積的50%(v/v)酸性乙醇洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮至干燥，粉碎得黃色粉末，即為本發(fā)明的黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，黃柏提取物中鹽酸小檗堿含量為45%(w/w)。實施例8知母、黃柏提取物組合物制備取100Kg知母按實施例4所得的知母總皂苷和知母總黃酮，兩者混合，再加入100Kg黃柏藥材按實施例6所得的黃柏總生物堿，合并后的粉末打粉，過篩，即得知母、黃柏提取物組合物。經(jīng)HPLC檢測，其中知母皂苷A-III含量為2%(w/V)，知母皂苷B-I1含量為30%(w/w)，知母皂苷B-III含量為7X(w/V)，芒果苷含量為10%(w/w)，小檗堿含量為20%(w/w)。實施例9知母、黃柏提取物組合物制備50公斤知母、50公斤黃柏藥材，粉碎，投入提取罐中，在80-9(TC條件下用50^(v/v)乙醇1000升加熱提取3次，每次提取時間為120分鐘，合并三次提取液，濃縮至100升，過濾，將濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至150升。再緩緩通過裝有150升AB-8型大孔樹脂的吸附柱，用300升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)；再用300升90%(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮除醇后再濃縮至50升，以水飽和正丁醇50升萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮至干，粉碎后得淺黃色粉末9公斤，為知母黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，提取物中知母皂苷A-III含量為4%(w/w)，知母皂苷B-II含量為30X(w/w)，知母皂苷B-III含量為8X(w/V)，芒果苷含量為10%(w/w)，小檗堿含量為15%(w/w)。實施例10知母、黃柏提取物組合物制備60公斤粉碎后的知母、40公斤粉碎后的黃柏藥材，混合，以60%(v/v)乙醇500升浸潤24小時后滲濾提取，收集2000升滲濾液，即為提取液。提取液減壓濃縮到無醇味，加水定容至500升，過濾，濾液即為上柱樣品液。將樣品液通入裝有200升D152樹脂的色譜柱中，用200升蒸餾水洗滌樹脂，同前面的吸附后殘液合并，緩緩通過100升AB-8型大孔樹脂吸附。D152樹脂以50%的酸性乙醇洗脫，濃縮干燥，得提取物1.AB-8型大孔樹脂柱，水洗除雜，70%(v/v)乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，干燥粉碎得淡黃色粉末，得提取物2。合并提取物1、2，即得知母黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，提取物中知母皂苷A-III含量為3X(w/w)，知母皂苷B-II含量為32%(w/w)，知母皂苷B-in含量為6%(w/V)，芒果苷含量為8%(w/w)，小檗堿含量為18%(w/w)。實施例11:知母黃柏不同組分組合對ICR小鼠糖耐量的影響知母黃柏不同組分組合分別為兩種組分知母皂苷B-II(45%，鹽酸小檗堿(40%，w/w);三種組分知母皂苷B-II(40^，w/w)+芒果苷(15X，w/w)+鹽酸小檗堿(30%，w/w);四種組分知母皂苷A-III(5^，w/V)+知母皂苷B-II(30^，w/V)+芒果苷(15%，W/V)+鹽酸小檗堿(20%，W/V);五種組分知母皂苷A-III(4X，w/w)+知母皂苷B-II(30X，w/w)+知母皂苷B_III(8%，w/w)+芒果苷(10%，w/w)+鹽酸小檗堿(15%，w/w)。試驗中，ICR小鼠隨機分為空白對照組、兩種組分組、三種組分組、四種組分組、五種組分組和陽性藥物拜唐蘋《組。ICR小鼠禁食不禁水12小時后，分別灌胃給予上述樣品及蔗糖(2.5g/kg)，并測定給糖后0、30、60、120min的血糖值，同時計算給糖后各時間點血糖曲線下面積，試驗結果見表1。表1知母黃柏不同組分對對ICR小鼠糖耐量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>與空白對照組比*p<0.05。試驗表明知母黃柏不同組分組合均能有效降低ICR小鼠給糖后的血糖，各組分組合的血糖曲線下面積與空白對照組相比有顯著性差異。實施例12:知母黃柏不同組分組合對a-葡萄糖苷酶的抑制活性知母黃柏不同組分組合分別為兩種組分知母皂苷BII+鹽酸小檗堿；三種組分知母皂苷BII+芒果苷+鹽酸小檗堿；四種組分知母皂苷AIII+知母皂苷BII+芒果苷+鹽酸小檗堿；五種組分知母皂苷AIII+知母皂苷BII+知母皂苷BIII+芒果苷+鹽酸小檗堿，以上各種組合物中的各組分含量同實施例11。體外測定知母黃柏不同組分組合對a-葡萄糖苷酶的抑制活性。以拜唐蘋為陽性對照藥物。實驗反應體系為67mM磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)145yl，O.5mg/mla-葡萄糖苷酶5iil，不同濃度的樣品溶液20ia，0.029M4-硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷10iU。37t:孵育10min，加入100y1lMNa2C03終止反應，405nm檢測在酶的作用下釋放出對硝基苯酚量，計算不同樣品的ICs。值，試驗結果見表2和圖1。試驗表明知母黃柏不同組分組合對a-葡萄糖苷酶均具有顯著抑制活性。表2知母黃柏不同組分組合對a-葡萄糖苷酶的抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實施例13知母黃柏提取物對GK糖尿病大鼠隨機血糖的影響GK糖尿病大鼠隨機分為模型組、羅格列酮組、知母黃柏組(其中知母皂苷A-III含量為4X，知母皂苷B-I1含量為30%(w/w)，知母皂苷B-in含量為8%(w/w)，芒果苷含量為10%(w/w)，小檗堿含量為15%(w/w))以及知母黃柏肉桂組(根據(jù)中國發(fā)明專利ZL200510110763.2公開的方法制備)。正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏組，知母黃柏肉桂組分別給予知母黃柏、知母黃柏肉桂提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。每周測定隨機血糖，試驗結果見表3和圖2。表3知母黃柏對GK糖尿病大鼠隨機血糖的影響隨機血糖(mmol/L)(周)正常組模型組羅格列酮組(5mg/kgd)知母黃柏組(200mg/kgd)知母黃柏肉桂組(200mg/kgd)06.04±0.6417.62±2.54#并17.84±2.4718.17±2.6717.92±2.5116.1U0.7516.81±1.97##12.41土3，16.14±3.6515.85±3.2425.32±0.5618.12±2.18##12.18士2.22"14.40±3.28*14.81±3.01*36.42±0.6817.51±3.51##9.54士3.17"13.75±3.45*14.20±2.81*46.33±0.6118.10±2.33##8.43±1.85**13.07±2.83**12.88士2.95"與正常組比##P<0.01;與模型組比*P<0.05，**P<0.01。試驗表明知母黃柏能有效地降低GK大鼠的隨機血糖。連續(xù)給予2周后，知母黃柏和知母黃柏肉桂組GK大鼠的隨機血糖明顯下降，與模型組相比呈顯著性差異。知母黃柏組與知母黃柏肉桂組降血糖效果無顯著性差異。實施例14知母黃柏對GK糖尿病大鼠空腹血糖的影響GK糖尿病大鼠隨機分為模型組、羅格列酮組、知母黃柏組(其中知母皂苷A-III含量為4%(w/w)，知母皂苷B-II含量為30X(w/w)，知母皂苷B-III含量為8X(w/w)，芒果苷含量為10%(w/V)，小檗堿含量為15%(w/w))，以及知母黃柏肉桂組(根據(jù)中國發(fā)明專利ZL200510110763.2公開的方法制備)，正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏組，知母黃柏肉桂組分別給予知母黃柏、知母黃柏肉桂提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。每周測定空腹血糖，試驗結果見表4和圖3。表4知母黃柏對GK糖尿病大鼠空腹血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>與正常組比##P<0.01;與模型組比*P<0.05，**P<0.01試驗表明知母黃柏能有效地降低GK大鼠的空腹血糖，知母黃柏和知母黃柏肉桂組給藥第3、4周血糖明顯降低，與模型組相比有顯著差異(P<0.01)。知母黃柏組與知母黃柏肉桂組降血糖效果無顯著性差異。實施例15知母黃柏提取物對GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影響GK糖尿病大鼠隨機分為模型組、羅格列酮組、知母黃柏組(其中知母皂苷A-III含量為4X，知母皂苷B-I1含量為30%(w/w)，知母皂苷B-ni含量為8%(w/w)，芒果苷含量為10%(w/V)，小檗堿含量為15%(w/w))、知母黃柏肉桂組(根據(jù)中國發(fā)明專利ZL200510110763.2公開的方法制備)，正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏組、知母黃柏肉桂組分別給予知母黃柏、知母黃柏肉桂提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。給藥四周后進行口服葡萄糖耐量試驗，結果見圖4。試驗表明知母黃柏能有效改善GK糖尿病大鼠的葡萄糖不耐受，提高機體對葡萄糖的處置能力，知母黃柏和知母黃柏肉桂組在糖負荷60、90和120min后，顯著降低GK糖尿病大鼠血糖，與模型組相比，具有顯著性差異(P<0.05)。知母黃柏組與知母黃柏肉桂組對GK糖尿病大鼠的口服葡萄糖耐量無顯著性差異。權利要求一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于包括知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分，所述兩種組分總量占組合物的重量百分比為5％-95％。2.根據(jù)權利要求1所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物還包括芒果苷、知母皂苷A-III和知母皂苷B-III之一種或幾種組分。3.—種預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于主要包括知母皂苷B-II提取物和小檗堿提取物；所述兩種提取物中，知母皂苷B-II和小檗堿總量占組合物的重量百分比為5%-95%。4.根據(jù)權利要求3所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物還包括芒果苷提取物、知母皂苷A-III提取物和知母皂苷B-III提取物之一種或幾種組分。5.—種預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于由知母提取物和黃柏提取物組成，組合物中含有的知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分總量占組合物的重量百分比為5%-95%;其中，所述知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10%-95%，v/v的乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20%-95%，v/v乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復萃取后得知母皂苷B-II重量百分比為10%_90%知母總皂苷提取物；所述黃柏提取物由1重量份的黃柏先用10%-90%，v/v的乙醇提取后，將提取液濃縮并去乙醇，于大孔樹脂上樣，再用20%-95%，v/v的乙醇洗脫并收集，濃縮后制得，其中所含小檗堿的重量百分比為5%-90%。6.根據(jù)權利要求5所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物還包括芒果苷提取物；其中，所述知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10%-95%，v/v的乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20%-95%，v/v乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復萃取后得知母皂苷B-II重量百分比為10%_90%知母總皂苷提取物，再將萃取后水溶液的pH值調(diào)至中性，再以水飽和正丁醇反復萃取后得芒果苷重量百分比為5%_90%知母總黃酮提取物。7.根據(jù)權利要求6所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物含有的芒果苷占組合物的重量百分比為1%_30%。8.根據(jù)權利要求5或6所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述黃柏提取物中使用的大孔樹脂為離子交換與吸附樹脂。9.一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于由知母提取物和黃柏提取物組成，將1重量份的黃柏和0.5-9重量份的知母混合，用10%-95%，v/v乙醇提取，提取液除醇后于大孔樹脂上樣，再用20%-95%，v/v乙醇洗脫，所得洗脫液經(jīng)除醇、濃縮和干燥后的產(chǎn)物含有的知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分的總量為5%-95%。10.根據(jù)權利要求9所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物中還包括芒果苷。11.根據(jù)權利要求5、6、7、9或10所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述的知母提取物占組合物的重量百分比為1%_90%。12.根據(jù)權利要求5、6、7、9或10所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述的黃柏提取物占組合物的重量百分比為1%_90%。13.根據(jù)權利要求1-7和9-10之一所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物含有的知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5%-80%。14.根據(jù)權利要求1-7和9-10之一所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述組合物含有的小檗堿占組合物的重量百分比為2%-60%。15.根據(jù)權利要求1-7和9-10之一所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述小檗堿還包含小檗堿藥學上可接受的鹽。16.根據(jù)權利要求15所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于所述的鹽為鹽酸鹽或硫酸鹽。17.—種預防和治療糖尿病的制劑，包含權利要求l-16之一所述的預防和治療糖尿病的藥物組合物。全文摘要一種預防和治療糖尿病的藥物組合物，至少含有知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分。在組合物中增加芒果苷，知母皂苷A-III和知母皂苷B-III中一種或幾種組分，可以提高預防和治療效果。本發(fā)明組合物還可以由知母提取物和黃柏提取物組合而成，或從知母和黃柏中直接提取而獲得。本發(fā)明組合物具有顯著的降低血糖作用，有效成分含量高，質(zhì)量容易控制，制備工藝易于產(chǎn)業(yè)化，可應用于預防和治療糖尿病藥物。文檔編號A61K31/4353GK101744978SQ20101002282公開日2010年6月23日申請日期2010年1月14日優(yōu)先權日2010年1月14日發(fā)明者劉會會,吳斌,唐意紅,孫兆林,李志雄,范明松,馬春暉,黃成鋼申請人:中國科學院上海藥物研究所