專利名稱：P-糖蛋白單克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)用制劑，涉及一種P-糖蛋白單克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制 劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
癲癇是最常見的神經(jīng)病癥之一，據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)現(xiàn)有癲癇患者約900萬(wàn)，每 年新增病例約45萬(wàn)，其中約30%的患者為難治性癲癇(refractory epilepsy, RE)，又 稱耐藥性癲癇[1_2]。其最為突出的特征就是對(duì)不同化學(xué)結(jié)構(gòu)，不同作用方式的抗癲癇藥 (anti-epilepsy drugs，AEDs)均有不同程度的耐藥。死亡率比一般的癲癇患者高4 7 倍，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，消耗了巨大的公共衛(wèi)生資源[μ]。苯妥英鈉(I^henitoin，PHT)為二苯乙內(nèi)酰脲的鈉鹽，作為最常用的抗癲癇藥已有 半個(gè)多世紀(jì)的歷史。由于其療效顯著，至今仍是一線治療藥物。實(shí)踐顯示，苯妥英鈉服藥后 常見眩暈、頭痛、惡心、嘔吐、厭食、皮疹等反應(yīng)，長(zhǎng)期用藥有牙齦增生，常見共濟(jì)失調(diào)、白細(xì) 胞減少、神經(jīng)性震顫，嚴(yán)重時(shí)有視力障礙及精神錯(cuò)亂、紫癜等。除對(duì)胃腸道的刺激外，苯妥英 鈉的不良反應(yīng)都與血藥濃度大致平行。而腦脊液中的原型藥物不到10%，提示苯妥英鈉透 過血腦屏障的能力較低，降低血藥濃度將難以保證治療效果，而其口服吸收慢而不規(guī)則，達(dá) 峰值濃度時(shí)間不穩(wěn)定，可相差8小時(shí)以上，不利于血藥濃度的控制。由于PHT是非線性代謝 藥物，其治療劑量(血藥濃度)不易控制，且易過量出現(xiàn)中毒癥狀。此外，在耐藥性癲癇病 灶區(qū)，由于P-gp外排泵作用，使已經(jīng)透過血腦屏障的苯妥英鈉被泵回到血液循環(huán)中，由肝 臟藥物代謝酶P450系統(tǒng)代謝后經(jīng)腎臟排出體外，導(dǎo)致腦內(nèi)病灶區(qū)的苯妥英鈉濃度進(jìn)一步 降低，無(wú)法抑制癲癇發(fā)作。載藥納米微粒是納米技術(shù)與現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)結(jié)合的產(chǎn)物，是一種藥物控釋和緩釋的新 劑型。它包括納米粒子(nanoparticales)和納米膠囊(nanocapsules)，是直徑在10 500nm之間的固狀膠態(tài)粒子，活性部分(藥物、生物活性材料等)通過溶解、包裹作用位于粒 子內(nèi)部，或者通過吸附、附著作用位于粒子表面。自1976年BirrerAach首次報(bào)道載藥納米 微粒以來，納米微粒作為藥物緩釋和靶向載體已被廣泛地運(yùn)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，但利用緩釋 納米微粒靶向治療耐藥性癲癇，國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新型載苯妥英納米制劑，具體涉及一種P-糖蛋白單 克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制劑及其制備方法。本發(fā)明以苯妥英為有效成分，以P糖蛋白單克隆抗體為靶向頭基，以高分子聚合 物為載體，制備治療耐藥性癲癇的納米制劑。具體而言，本發(fā)明的載苯妥英納米制劑，以P-糖蛋白的單克隆抗體為靶向頭基對(duì) 納米制劑進(jìn)行表面修飾，以聚乙二醇聚己內(nèi)酯為載體，通過改變聚乙二醇和聚己內(nèi)酯的比例，控制苯妥因英的載藥量和釋放速度。本發(fā)明以適宜的制備及提純方法，使載苯妥英納米 粒子具有適當(dāng)?shù)牧胶土Ｐ停d藥量> 20%，且毒副作用較小。本發(fā)明利用緩釋和主動(dòng)靶向技術(shù)解決目前苯妥英治療耐藥性癲癇中血腦屏障通 透性差，癲癇病灶區(qū)藥物濃度低，治療效果差，不良反應(yīng)大的問題，提高苯妥英的安全性。本發(fā)明的載苯妥英納米制劑通過下述方法和步驟制備(1)首先制備馬來酰亞胺基團(tuán)(Mal)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物一定量的馬來酰亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇中加入適量的辛酸亞錫溶液，密封后抽 真空，除去溶劑和氧氣，然后加入一定量的己內(nèi)酯，升溫至己內(nèi)酯單體開環(huán)聚合；反應(yīng)結(jié)束 后，加入一定量的二氯甲烷溶解，然后乙醚中沉淀，以除去未反應(yīng)的己內(nèi)酯以及形成的己內(nèi) 酯均聚物；沉淀物重新用二氯甲烷溶解，倒入大量的甲醇中沉淀，以除去未反應(yīng)的聚乙二 醇，得到馬來酰亞胺基團(tuán)(Mal)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物。(2)制備載苯妥英納米粒子上述馬來酰亞胺基團(tuán)(Mal)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物和藥物苯妥英以適 當(dāng)?shù)谋壤苡诙燃淄楹退臍溥秽幕旌先軇┲?，加入一定量含有十二烷基硫酸鈉(SDS) 的去離子水，超聲分散，得到的溶液攪拌過夜后，再透析過夜除去溶劑，得到載藥聚合物納 米粒子。(3)修飾P-糖蛋白單抗一定量的Traut，s試劑(2-iminothiolane)溶解在硼酸納/EDTA緩沖溶液中；將 Traut’ s溶液緩慢加入到一定量的P-糖蛋白單抗中；避光攪拌1小時(shí)后，用HEPES置換硼 酸納/EDTA緩沖溶液，巰基化的P-糖蛋白單抗與載藥聚合物納米粒子混合，攪拌過夜；反應(yīng) 混合物過柱分離，用PBS緩沖液淋洗，收集乳白色納米粒子，得修飾有P-糖蛋白單抗、負(fù)載 苯妥因的納米粒子(P-gpMAb Nano-structured material, PNM)。
構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.P-糖蛋白單克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制劑，其特征在于，該納米制劑以苯妥 英為有效成分，以P糖蛋白單克隆抗體為靶向頭基，以高分子聚合物為載體；所述制劑其載 藥量> 20%。
2.權(quán)利要求1所述的P-糖蛋白單克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制劑的制備方法，其 特征在于，包括如下步驟(1)制備馬來酰亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物一定量的馬來酰亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇中加入適量的辛酸亞錫溶液，密封后抽真 空，除去溶劑和氧氣，然后加入一定量的己內(nèi)酯，升溫至己內(nèi)酯單體開環(huán)聚合；反應(yīng)結(jié)束后， 加入一定量的二氯甲烷溶解，然后乙醚中沉淀，除去未反應(yīng)的己內(nèi)酯以及形成的己內(nèi)酯均 聚物；沉淀物用二氯甲烷溶解，倒入甲醇中沉淀，除去未反應(yīng)的聚乙二醇，得馬來酰亞胺基 團(tuán)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物；(2)制備載苯妥英納米粒子上述馬來酰亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯聚合物和藥物苯妥英以適當(dāng)?shù)谋壤?于二氯甲烷和四氫呋喃的混合溶劑中，加入一定量含有十二烷基硫酸鈉的去離子水，超聲 分散，得到的溶液攪拌過夜后，透析過夜除去溶劑，得載藥聚合物納米粒子；(3)修飾P-糖蛋白單抗一定量的Traut’ s試劑溶解于硼酸納/EDTA緩沖溶液；將其加入到一定量的P-糖蛋 白單抗中；攪拌1小時(shí)，用HEPES置換硼酸納/EDTA緩沖溶液，巰基化的P-糖蛋白單抗與載 藥聚合物納米粒子混合，攪拌過夜；反應(yīng)混合物過柱分離，用PBS緩沖液淋洗，收集乳白色 納米粒子，得修飾有P-糖蛋白單抗、負(fù)載苯妥英的納米粒子。
3.按權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所制得的苯妥英靶向納米制劑中，以馬來酰 亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇聚己內(nèi)酯共聚物為載體，其分子結(jié)構(gòu)式為
4.按權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的馬來酰亞胺基團(tuán)封端的聚乙二醇聚 己內(nèi)酯聚合物中η = 1000 50000。
5.權(quán)利要求1的P-糖蛋白單克隆抗體修飾的苯妥英靶向納米制劑在制備治療耐藥性 癲癇病藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)用制劑，涉及一種新的苯妥英靶向納米制劑及其制備方法。本發(fā)明以苯妥英為有效成分，以P-糖蛋白單克隆抗體為靶向頭基，以高分子聚合物為載體，制成靶向治療耐藥性癲癇的納米制劑。本發(fā)明通過改變高分子聚合物中聚乙二醇和聚己內(nèi)酯的比例，控制苯妥英的載藥量和釋放速度；利用緩釋和主動(dòng)靶向技術(shù)解決目前苯妥英治療耐藥性癲癇中血腦屏障通透性差，癲癇病灶區(qū)藥物濃度低，治療效果差，不良反應(yīng)大的問題，明顯提高苯妥英的安全性。本發(fā)明制劑可靶向給藥至耐藥性癲癇病灶區(qū)，從而大大提高病灶區(qū)的苯妥英含量，抑制癲癇的發(fā)作。
文檔編號(hào)A61K47/42GK102125522SQ20101002288
公開日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月15日
發(fā)明者劉曉英, 洪震 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院